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Triagemantifúngicaextratos Ferr

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Triagemantifúngicaextratos Ferr UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS MAGDA RHAYANNY ASSUNÇÃO FERREIRA TRIAGEM ANTIFÚNGICA DE EXTRATOS OBTIDOS DE ESPÉCIES VEGETAIS DO NORDESTE BRASILEIRO NATAL 2012 MAGDA RHAYANNY ASSUNÇÃO FERREIRA TRIAGEM ANTIFÚNGICA DE EXTRATOS OBTIDOS DE ESPÉCIES VEGETAIS DO NORDESTE BRASILEIRO Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas da Universidade Federal do Rio Grande do Norte, como parte dos requisitos para a obtenção do título de Mestre em Ciências Farmacêuticas, Área de Concentração Tecnologia Farmacêutica. Orientador: Prof. Dr. Luiz Alberto Lira Soares Co-orientadora: Prof. Dra. Silvana Maria Zucolotto Langassner NATAL 2012 CATALOGAÇÃO NA FONTE F383 Ferreira, Magda Rhayanny Assunção . Triagem antifúngica de extratos obtidos de espécies vegetais do Nordeste Brasileiro / Magda Rhayanny Assunção Ferreira.– Natal, 2012. 190f. Orientador: Prof. Dr. Luiz Alberto Lira Soares. Coorientadora: Profª. Drª. Silvana M. Zucolotto Langassner Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Centro de Ciências da Saúde. Universidade Federal do Rio Grande do Norte. 1. Antifúngicos – Dissertação . 2. Produtos naturais – Dissertação. 3. Extratos vegetais – Dissertação. 4. Biofilme bacteriano – dissertação I. Soares, Luiz Alberto Lira. II. Langassner, Silvana Maria Zucolotto. III. Título. RN-UF/BS-CCS CDU: 582.288(813/812)(043.3) MAGDA RHAYANNY ASSUNÇÃO FERREIRA TRIAGEM ANTIFÚNGICA DE EXTRATOS OBTIDOS DE ESPÉCIES VEGETAIS DO NORDESTE BRASILEIRO Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas da Universidade Federal do Rio Grande do Norte, como parte dos requisitos para a obtenção do título de Mestre em Ciências Farmacêuticas, Área de Tecnologia Farmacêutica. BANCA EXAMINADORA __________________________________________ Prof. Dr. Luiz Alberto Lira Soares Presidente __________________________________________ Prof. Dr. Guilherme Maranhão Chaves (UFRN) Membro Interno __________________________________________ Profa. Dra. Tânia Fraga Barros (UFBA) Membro Externo Aprovada em __ de Fevereiro de 2012. NATAL 2012 Dedico este trabalho aqueles que fizeram parte de sua construção e realização, e aqueles que sempre acreditaram no meu potencial. Vocês fizeram de mim uma pessoa melhor pessoal e profissionalmente. Magda Rhayanny Assunção Ferreira Agradecimentos Magda Rhayanny Assunção Ferreira Agradeço... A Deus por sempre estar presente em minha vida, principalmente nos momentos difíceis, mostrando que sempre existe algo bom em meio aos caminhos tortuosos pelos quais passamos. A minha família: aos meus pais, Raine Ferreira da Costa, em especial minha mãe, Maria Rosinete Assunção Ferreira, por sempre me apoiar de maneira incondicional. A minha irmã, Marjoa Rhayza Assunção Ferreira, por torcer pela minha vitória. A meu primo e afilhado, Lucas Emanuel Assunção de Souza, que mesmo sem entender também me incentivou. Sem o apoio de vocês eu não teria alcançado tanto. Ao meu orientador, Luiz Alberto Lira Soares, pela confiança durante todos esses anos de trabalho, por ter acreditado em mim quando muitos me julgaram; pelos ensinamentos e por me proporcionar crescimento pessoal e profissional. Você me ensinou que é possível fazer pesquisa em um espaço limitado e com materiais escassos. Você é um exemplo de pessoa que mostra o gosto pelo que faz. Minha admiração e meu Muito Obrigada. Aos meus verdadeiros amigos, aqueles que acompanharam o trajeto realizado até aqui e que estiveram sempre comigo, principalmente nos momentos de dificuldades. Em especial a Rosilene Rodrigues Santiago, que me ajudou a realizar parte desse trabalho. Ao meu namorado, que sempre me apóia em todas as decisões, mesmo que para isso a gente precise ficar longe por muito tempo. Sem você tudo seria mais difícil. A Professora Terezinha Inez Estivalet Svidzinsk, por me ensinar a entender um pouco a Micologia; por ter me acolhido, durante minha estadia em Maringá, obrigada pelo carinho e apoio. E também ao Sr. Antônio Svidzinsk, por fazer eu me sentir em casa. Não esqueço a dança dos famosos. As meninas da Micologia – UEM: Mariazinha, Janine, Patrícia, Kátia, Lu, Cris, Dri. Por me acolherem. Sintam-se agradecidos também todos os demais que convivi durante os meses em que passei lá. Sinto falta de vocês. Magda Rhayanny Assunção Ferreira Ao Professor João Carlos Palazzo de Melo, por me receber e disponibilizar a estrutura do seu laboratório na UEM e me ensinar fitoquímica. Ao pessoal do Laboratório de Farmacognosia – UEM: Fernanda, Traudi, Renata, Vanessa, Maísa. Obrigada pelos momentos de alegria no laboratório. Ao técnico Admir, por sempre estar dispostos ajudar. A minha co-orientadora Silvana Maria Zucolotto Langassner, a quem retribuo respeito; pela orientação e paciência, apesar do nosso pouco convívio. Ao Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas (UFRN), que através do PROCAD – NF/2008 me proporcionou a oportunidade de vivenciar um mestrado sanduíche. Ao Laboratório de Sistemas Dispersos (UFRN), por disponibilizar equipamentos necessários durante esse trabalho. Magda Rhayanny Assunção Ferreira "Não existe triunfo sem perda, não há vitória sem sofrimento, não há liberdade sem sacrifício." (O Senhor dos Anéis) Magda Rhayanny Assunção Ferreira RESUMO O aumento na incidência de infecções por fungos, devido à resistência às drogas ou ao número de pacientes com alterações imunológicas, tais como SIDA, quimioterapia ou transplante de órgãos; tem feito a investigação de novas drogas antifúngicas necessária. As espécies vegetais da região Nordeste do Brasil podem se tornar uma importante fonte de moléculas naturais inovadoras. Para avaliar a atividade antifúngica de 10 plantas medicinais da região Nordeste do Brasil, tradicionalmente usadas como antimicrobianas, 30 extratos brutos (EB) foram submetidos à teste in vitro contra quatro cepas padrão ATCC de Candida spp. Extratos das folhas de E. uniflora, cascas do caule de L. ferrea, e folhas de P. guajava mostraram atividade significativa contra as leveduras avaliadas, com valores MIC entre 15,62 e 62,5 µg/mL. E. uniflora também mostrou propriedade fungicida contra todas as leveduras, principalmente contra C. dubliniensis. O EB de E. uniflora apresentou intervalo de valores CIM entre 1,95-1000 µg/mL, e menores valores de MIC50 e MIC90 foram observados contra C. não albicans. Devido ao melhor desempenho, o EB de E. uniflora foi eleito para realização do fracionamento biomonitorado. Assim, foi possível obter frações enriquecidas, as quais apresentaram boa capacidade inibitória, na faixa entre 0,48 a 500 µg/mL, frente às cepas ATCC de Candida spp. Também foi possível realizar experimentos para verificar a produção de biofilme de duas cepas de C. dubliniensis e ação dos extratos e frações sobre o mesmo. Com isso, observou-se um comportamento diferente entre a levedura ATCC e o isolado clínico. Além disso, extrato bruto, frações e subfrações de E. uniflora inibiram as células planctônicas impedindo de se agragarem ao biofilme. A caracterização química preliminar das frações obtidas revelou a presença de polifenóis (principalmente, flavonóides e taninos). Por fim, os resultados permitiram afirmar que entre as espécies vegetais estudadas, E. uniflora apresentou comportamento bastante promissor no que diz respeito a ação antifúngica, sendo necessário a continuação do estudo de purificação e elucidação estrutural dos compostos presentes, a fim de verificar se a ação antifúngica encontrada poderá ser atribuída a um composto específico ou depende de algum mecanismo sinérgico da mistura de polifenóis. Palavras chave: Antifúngicos. Produtos naturais. Extratos egetais. Biofilme bacteriano. Magda Rhayanny Assunção Ferreira ABSTRACT The increase in the incidence of fungal infections due to the drug-resistance or to the number of patients with immune alterations such as AIDS, chemotherapy or organ transplantation, has done the research necesseray for new antifungal drugs. The species from Northeastern Brazil may become an important source of innovative natural molecules. To evaluate the antifungal activity of 10 medicinal plants from Northeastern Brazil, traditionally used as antimicrobial agents, 30 crude extracts (CE) were tested in vitro against four standard species of Candida spp. The CE most promising of these plants were evaluated against yeasts of the oral cavity of kidney transplant patients and through a bioassay-guided fractionation. The extracts form leaves of E. uniflora, the stem bark of L. ferrea and leaves of P. guajava showed significant activity against all yeasts evaluated, with MIC values between 15.62 and 62.5 µg/mL. E. uniflora also showed fungicidal properties against all yeasts, especially against Candida dubliniensis. In patients with immune systems compromised, such as transplanted, oral candidiasis manifests mainly due to immunosuppressive therapy, and resistance to conventional antifungals. The CE of E. uniflora presented range of MIC values between 1.95 to 1000 µg/mL, and lower MIC50 and MIC90 values were observed against C. non-albicans. Due the better results, the CE of E. uniflora was elected to performe the bioassay-guided fractionation. Thus it was possible to obtain enriched fractions, which showed good inhibitory ability against ATCC strains of Candida spp. It was also possible to perform experiments to verify the production of biofilm in two strains of C. dubliniensis and action of extracts and fractions on the same. With this,
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