Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241

Flavonoides presentes en especies de () de Venezuela

Flavonoids extracted from Psidium species (MYRTACEAE) in Venezuela

G. Rivero-Maldonado1, D. Pacheco1, L. M. Martín2, A. Sánchez1, M. Quirós3, J. Ortega4, C. Colmenares4 y B. Bracho4

1Universidad del Zulia. Facultad de Agronomía. Departamento de Botánica. Apartado 15205. Maracaibo, Zulia, 4005, Venezuela. 2Departamento de Genética, Universidad de Córdoba-España. 3Departamento Fitosanitario, Facultad de Agronomía-LUZ. 4Departamento de Estadística, Facultad de Agronomía-LUZ.

Resumen

Los estudios basados en la identificación de flavonoides, representan una importante herramienta para la obtención de caracteres útiles en tratamientos taxonómicos. Considerando que el género Psidium en Venezuela no ha recibido la debida atención en este sentido, y que dentro de la familia Myrtaceae es uno de los grupos con un alto número de representantes en el país, en este trabajo se planteó como objetivo determinar los principales flavonoides presentes en espe- cies de Psidium reportadas para Venezuela, con la finalidad de obtener datos útiles que permitan esclarecer, junto a otras fuentes de información, las relacio- nes taxonómicas dentro del mismo. Se evaluaron las especies: Psidium acutangulum, P. guajava, P. guineense, P. maribense, P. salutare, P. sartorianum y Calycolpus moritzianus, recolectadas en diversas localidades del país, cuyas hojas se sometieron a una hidrólisis ácida y posterior determinación empleando HPLC. Se identificaron los flavonoides miricetina, luteonina, quercetina, apigenina y kaempferol. La información obtenida se analizó a través de las técnicas multivariadas: Cluster y Componentes Principales. Los resultados determina- ron la formación de 5 grupos donde las especies de Psidium y C. moritzianus se distribuyeron dependiendo de la presencia y concentración principalmente de kaempferol, miricetina y luteonina. Un factor de variación importante pudo deri-

Recibido el 3-5-2012 z Aceptado el 26-2-2013 Autor de correspondencia e-mail: [email protected]

217 Rivero-Maldonado et al. varse del origen de la muestras, lo cual debe ser considerado en futuras investi- gaciones. La información generada se complementará con otros caracteres taxonómicos a fin de contribuir a la determinación de los límites genéricos de Psidium. Palabras clave: Psidium, flavonoides, Venezuela, fitoquímica.

Abstract

Studies based on the identification of flavonoids represent important tools to get useful traits in taxonomic analyses. The genus Psidium in Venezuela has not received attention in this aspect, even though it is one of the best represented genus of the Myrtaceae family. Therefore, is considered necessary to extract and determine the flavonoids present in different Psidium species reported in Vene- zuela, it is also considered that this kind of phytochemical information along with the morphological characters will help to understand the systematic relationships of the species within this genus. Leaves of Psidium acutangulum, P. guajava, P. guineense, P. maribense, P. salutare, P. sartorianum and Calycolpus moritzianus were collected from different localities in Venezuela and they were processed via acid hydrolysis of flavonoids using HPLC method. The following flavonoids were extracted from the samples: Miricetin, Luteolin, Quercetin, Apigenin and Kaempferol. The resulting data for all the species was analyzed by multivariate statistical methods of Clustering Procedures and Prin- cipal Components analysis. The analysis showed 5 clusters, where the species of Psidium and C. moritzianus got distributed according to the presence and concentration of kaempferol, miricetina and luteonina. The different sampling locations of the samples could have been an important factor of variation and is recommended to consider this aspect in future researches. The information obtained from this research will be complemented with morphological traits in order to contribute with the generic limits of Psidium. Key words: Psidium, flavonoids, Venezuela, phytochemistry.

Introducción Introduction

Los metabolitos secundarios de The secondary metabolites of the las plantas resultan de la biosíntesis, result from the biosynthesis, transformación y degradación de com- transformation and degradation of puestos endógenos mediante proteínas endogenous compounds using especializadas (Cowan, 1999); entre specialized proteins (Cowan, 1999); estos destacan los flavonoides, fenoles, among these are the flavonoids, terpenos, aceites esenciales, alcaloides, phenols, terpenes, essential oils, lecitinas y polipéptidos. alkaloids, lecithin and polypeptides. Albornoz (1980) refiere que los Albornoz, (1980) refers that the alcaloides son frecuentes en las alkaloids are frequent in the

218 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 angiospermas y consideran que estas angiosperms and considers that these moléculas complejas están limitadas complex molecules are limited to a determinados géneros, especies, fa- determined genres, species, families or milias o comunidades, para los cuales communities; meanwhile, the son específicos; mientras que los flavonoids constitute one of the flavonoides, constituyen uno de los gru- secondary metabolites clusters of the pos de metabolitos secundarios de las superior plants numerous in woody plantas superiores que abundan en species. According to Marcano and especies leñosas. Según Marcano y Hasegawa, (2002), the flavonoids are Hasegawa (2002) los flavonoides se distributed in all the organs of the encuentran distribuidos en todos los plants, providing physiological and órganos de las plantas, proporcionán- ecological advantages, since are doles ventajas fisiológicas y ecológicas, components that give the the ya que son componentes de esencias aroma to attract insects or repeal que le confieren a la planta aromas para herbivores, thus, acting as nutritional atraer insectos o repeler herbívoros, deterrent of the latter. actuando como disuasorios nutritivos The phytochemical comprises de los últimos. the research of the secondary La fitoquímica comprende el es- metabolites of vegetal origin. The tudio de los metabolitos secundarios de research methods depend on the origen vegetal. Los métodos de estudio research objectives; in Botanic may dependen de los objetivos de la investi- contribute to the taxonomic gación; en Botánica pueden contribuir identification of the plants, through a la identificación taxonómica de las the determination and quantification plantas, a través de la determinación of the compounds present in the vege- y cuantificación de los compuestos que tal extracts (Marcano and Hasegawa, se encuentran presentes en los extrac- 2002). The secondary metabolites tos vegetales (Marcano y Hasegawa, evolved selectively in the vegetal 2002). Los metabolitos secundarios aspect, sometime only one specie or a evolucionaron selectivamente en el rei- cluster present it, for that reason their no vegetal, a veces sólo una especie o useful aspect in the Systematic un grupo de ellas los presentan, de allí Botanic. su utilidad en Botánica Sistemática. According to Lucas et al. (2005) Según Lucas et al. (2005) en la in the Myrtaceae family considerable familia Myrtaceae se han generado differences have been generated among considerables discordancias entre los the authors regarding the autores en cuanto a circunscripción circumscription in both the genres and tanto de géneros como de especies; en the species; the most known su mayoría los principales estudios researches have been carried out in han sido realizados en géneros del genres of the paleotropics, specially paleotrópico, sobre todo australianos, Australians, meanwhile, only some of mientras que sólo algunos de los gru- the Americans have been revised after pos americanos han sido revisados a deficient systematic analysis. Its través de deficientes análisis sistemá- diversity nucleus is in Australia,

219 Rivero-Maldonado et al. ticos. Esta familia incluye aproxima- Asiatic southeast and the tropical and damente 133 géneros y más de 3800 subtropical regions of the American especies. Su centro de diversidad está continent, with a small representation en Australia, sureste asiático y las re- in Africa (Wilson et al., 2001). giones tropicales y subtropicales del In Venezuela, there are 19 genres continente Americano, teniendo una of Myrtaceae, 210 native or pequeña representación en África naturalized species, including 34 (Wilson et al., 2001). endemic species (Hokche et al., 2008), En Venezuela, existen 19 géne- out of which stands out Psidium, by ros de Myrtaceae, 210 especies nati- including species with fruit vas o naturalizadas, incluyendo 34 es- importance, being P. guajava (guava), pecies endémicas (Hokche et al., one of the plants more harvested in all 2008), dentro de los cuales destaca the dry regions, which has been Psidium por incluir especies con im- naturalized longer than its original portancia frutícola, siendo P. guajava distribution, presumably, Tropical (guayaba), una de las plantas más America. cultivadas en todas las regiones secas, Psidium is a genus formed by no que ha sido naturalizada mucho más less than 100 species, distributed from allá de su distribución original, Mexico and the Caribbean to Uruguay presumiblemente, América Tropical. and the north of Argentina in the Psidium es un género conforma- American continent, extending to some do por no menos de 100 especies, dis- islands of the pacific northeast (for tribuidas desde México y el Caribe a instance, the Galápagos). Among this Uruguay y norte de Argentina en el huge diversity, there are morphological continente americano, extendiéndose a types similar in between, thus, algunas islas de noreste pacífico (ej. generating confusions in the taxonomic Galápagos). Dentro de esta gran diver- level. The largest variations in the sidad existen tipos morfológicos muy estimate of the number of species of semejantes entre sí, generándose con Psidium genus is the product of the ello confusiones a nivel taxonómico. existence of complex entities, which Las grandes variaciones en el estima- might be, by themselves, considered do del número de especies dentro del simple or cluster species, among these género Psidium es producto de la exis- are the complexes Psidium guineense, tencia de complejos de entidades que P. salutare and P. cinereum (Bruce pueden por sí mismas ser considera- et al., 2003). das especies sencillas o grupos de es- Sánchez-Vindas (1990), mention pecies; entre estos se encuentran los the importance of some morphological complejos Psidium guineense, P. traits in myrthaceae (number of salutare y P. cinereum (Bruce et al., lobules of the calyx, inflorescences 2003). characteristics, inclination angle of the Sánchez-Vindas (1990), resalta la lateral nerves, and others) for the importancia de ciertos caracteres division of related species. However, morfológicos en mirtáceas (número de they refer that one of the main lóbulos de cáliz, características de las problems in the taxonomic

220 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 inflorescencias, ángulo de inclinación identifications is the impossibility of de los nervios laterales, entre otros), finding plants with flowers and fruits para la separación de especies muy at the same time, also, the floral and relacionadas. Sin embargo, refiere que vegetative characteristics are uniform uno de los principales problemas en las in all the family; on the other hand, identificaciones taxonómicas es la im- they consider that even though the posibilidad de encontrar las plantas con embryonic characteristics are the most flores y frutos al mismo tiempo, ade- important for the generic más que las características florales y determination, these are not easy to vegetativas son muy uniformes en toda observe in dry material. Likewise, la familia; por otro lado considera, que Gomes et al. (2009) attribute the a pesar que las características anatomic traits a great importance for embrionarias son las más importan- taxonomical and evolution researches tes para la determinación genérica, no of Myrtaceae and ; son fáciles de observar en material seco. nevertheless, they state that a small Así mismo, Gomes et al. (2009), atri- amount of samples of the tropical flo- buyen a los caracteres anatómicos una ra have been included on these gran importancia para estudios analyses, mainly those of the Myrteae taxonómicos y evolutivos de Myrtaceae tribe. y Myrtales; no obstante plantean que According to Motta et al. (2009), pocos representantes de la flora tropi- the evident development of the cal han sido incluidos en éstos análi- molecular phylogeny, particularly the sis, principalmente los de la tribu researchers conducted at the beginning Myrteae. of the nineties based on sequences of Según Motta et al. (2009), el evi- nucleic acids, have provoked a dente desarrollo de la filogenia decreased in the number and molecular, particularmente los estu- importance of the researches based on dios conducidos a principio de la déca- chemo-taxonomical evidences. da de los noventa basados en secuen- In some families, such as cias de ácidos nucleicos, ha provocado Malpighiaceae, researches have been un decrecimiento en número e impor- carried out considering the tancia de las investigaciones basadas phytochemical aspects to elucidate the en evidencias quimiotaxonómicas. phenetic relations among the members. En ciertas familias como las Thus, in Camarea, an endemic genre Malpighiaceae, se han conducido in- of South America, an analysis vestigaciones considerando aspectos determining the flavonoids in the fitoquímicos para dilucidar las relacio- leaves was done, with the aim of nes fenéticas entre sus miembros. Así knowing their potential as a en Camarea, un género endémico de taxonomical tool, analyzing the foliar Suramérica, se realizó un análisis flavonoids patterns among species, and mediante la determinación de comparing the results with other types flavonoides en hojas con la finalidad of evidences such as morphological and de indagar su potencial como herra- the distribution of n-alcanes. Among mienta taxonómica, analizando patro- the most important findings, the

221 Rivero-Maldonado et al. nes de flavonoides foliares entre espe- synonymy was determined among two cies y comparando los resultados con species of Camarea, and the otros tipos de evidencias tales como phenogram generated showed the morfológicas y la distribución de n- formation of three clusters of similar alcanos. Entre los hallazgos más im- species (Motta et al., 2009). portantes se determinó la sinonimia Likewise, in the genre entre dos especies de Camarea, y el Hypericum (Clusiaceae) the flavonoids fenograma generado arrojó la forma- are important chemical markers, and ción de tres grupos de especies afines represent an excellent chemo- (Motta et al., 2009). taxonomical tool (Nahrstedt and Asimismo, en el género Hypericum Butterweck, 1997). (Clusiaceae) los flavonoides son unos im- Regarding the myrtaceae, few portantes marcadores químicos y repre- researches have been done considering sentan una excelente herramienta the phyto-chemical characteristics for quimiotaxonómica (Nahrstedt y taxonomic purposes. On this matter, Butterweck, 1997). Gardeli et al. (2008) refer that species Con respecto a las mirtáceas son such as Myrtus communis, even pocas las investigaciones realizadas to- though are sources of antioxidants and mando en cuenta características flavor, have not yet received attention, fitoquímicas para fines taxonómicos. En on the opposite, in some herbs and este sentido Gardeli et al. (2008) refieren species with essential oils the que especies como Myrtus communis, a researches have increased by having pesar de ser fuente de antioxidantes y these properties. saborizantes, no ha recibido la merecida Cole et al. (2007), carried out a atención, mientras que en otras, como research using the genre Eugenia, with ciertas hierbas y especias con aceites esen- the aim of explaining the phylo-genetic ciales, se han ido incrementando por po- relations among the widely related seer dichas propiedades. species. Seven species were compared, Cole et al. (2007) en el género determining similarities and Eugenia condujeron un estudio con la differences regarding volatile chemical finalidad de contribuir a esclarecer las compounds, to which were obtained by relaciones filogenéticas entre especies hydro-distillation, and were analyzed estrechamente relacionadas. Se com- by gases chromatography and mass pararon siete especies determinando spectrophotometry. The results similaridades y diferencias en cuanto determined that all the species a compuestos químicos volátiles los presented an increment of one of the cuales se obtuvieron por compounds, and was detected that six hidrodestilación y se analizaron por compounds were presented in all the cromatografía de gases y species. It was concluded that the espectrofotometría de masa. Los resul- differences observed regarding the tados determinaron que todas las es- presence of these compounds among pecies presentaron predominancia de the Eugenia species, might provide uno de los compuestos, así como tam- useful traits for the understanding of bién se detectó que hubo seis compo- the phylo-genetic relations.

222 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 nentes que se presentaron en todas las In Psidium, especially in P. especies. Se concluyó que las diferen- guajava, the greater attention has cias observadas en cuanto a la presen- focused on determining the relation of cia de estos compuestos entre las espe- its chemical composition with curative cies de Eugenia pudieran aportar ca- properties. Pérez et al. (2008) fulfilled racteres útiles para el entendimiento a complete revision of this specie where de las relaciones filogenéticas. is resumed that it has a high En Psidium y sobre todo en P. production of secondary metabolites, guajava la mayor atención se ha cen- some with an useful biologic activity, trado en indagar la relación de su com- mainly attributed to phenolic, posición química con propiedades me- flavonoids, carotenoids, terpenoids and dicinales. Pérez et al. (2008), realiza- triterpenes. ron una completa revisión en esta es- Likewise, Lapcík et al. (2005), in pecie en donde se resume que posee alta P. guajava and P. littorale identified producción de metabolitos secundarios a variety of isoflavones due to their algunos con una actividad biológica importance for the human health. The útil atribuida principalmente a com- results determined the presence of puestos fenólicos, flavonoides, aglycones and glycosides, and carotenoides, terpenoides y triterpenos. concluded that the metabolic route of Así mismo, Lapcík et al. (2005), en these compounds is presented in the P. guajava y P. littorale identificaron una Myrtaceae family. gama de isoflavones debido a su impor- Considering the latter, and due tancia para la salud humana. Los resul- to the little phytochemical information tados determinaron la presencia de available for this genre, the objective agliconas y glicósidos y concluyeron que of this research is to determine the la ruta metabólica de estos compuestos main flavonoids present in six Psidium está presente en la familia Myrtaceae. species reported in Venezuela, with the Considerando lo planteado y dada purpose of obtaining useful data that la escasa información fitoquímica dis- allow stating, along to other sources ponible para este género, la presente of information, the taxonomic relation investigación tuvo como objetivo deter- on the specie. minar los principales flavonoides pre- sentes en seis especies de Psidium re- Materials and methods portadas para Venezuela, con la fina- lidad de obtener datos útiles que per- Obtaining of the samples mitan esclarecer, junto a otras fuen- Completely healthy and ripened tes de información, las relaciones leaves were selected of different taxonómicas dentro del mismo. Psidium species from recent samples and specimen material. In the field, Materiales y métodos the circuit was done revising herbarium samples and specialized Obtención de muestras literature; different locations of Se seleccionaron hojas comple- Mérida, Táchira, Trujillo and Zulia tamente sanas y maduras de las dife- states were visited, which are part of

223 Rivero-Maldonado et al. rentes especies de Psidium tanto de the Venezuelan occident, and have high recolectas recientes como de material species representation of the herborizado. En las salidas de cam- myrtaceae (Hokche et al., 2008). po, el recorrido se trazó revisando Leaves, from one or even four ejemplares de herbario y literatura es- individuals, were extracted per specie, pecializada; se visitaron diversas lo- depending on the availability in the calidades de los estados Mérida, collection place. Táchira, Trujillo y Zulia, las cuales Likewise, with the aim of son entidades del occidente venezola- comparing with other Psidium no que poseen una alta species coming from different states representatividad de especies de éste of the country, were incorporated género de las mirtáceas (Hokche et al., foliar samples extracted from the 2008). Se extrajeron hojas de uno o de specimens solicited as loan to the hasta cuatro individuos por especie, following institutions: National dependiendo de la disponibilidad en el Herbarium of Venezuela (VEN), sitio de recolección. Herbarium of the Agronomy Faculty Asimismo, a fin de establecer of the Universidad Central de Vene- comparaciones con otras especies de zuela “Victor M. Badillo” (MY), Psidium provenientes de diferentes Herbarium of the Forest and estados del país, se incorporaron mues- Environmental Sciences of Universi- tras foliares extraídas de especímenes dad de los Andes (MER), and the herborizados solicitados en calidad de Herbarium of the Universidad del préstamo a las siguientes institucio- Zulia “Omar Zambrano C.” (HERZU). nes: Herbario Nacional de Venezuela The replication number varied from (VEN), Herbario de la Facultad de 2 to 4 samples per specie, according Agronomía de la Universidad Central to the availability and considering de Venezuela “Víctor M. Badillo” (MY), complete and in good conditions Herbario de la Facultad de Ciencias samples. Forestales y Ambientales de la Uni- With the aim of comparing si- versidad de Los Andes (MER) y el Her- milar cluster of Psidium, the analysis bario de la Universidad del Zulia of the specie Calycolpus moritzianus “Omar Zambrano C.” (HERZU). El was also included, which samples número de repeticiones varió de 2 a 4 were collected in Mérida and Táchira ejemplares por especie, dependiendo de states, where share the habitat with la disponibilidad y considerando mues- some Psidium species. The following tras completas y en buen estado. table, is a list of the analyzed species Con la finalidad de comparar gru- along to their correspondent pos afines a Psidium, se incluyó tam- precedence. bién en el análisis a la especie Hydrolysis of flavonoids Calycolpus moritzianus, cuyas mues- The hydrolysis was done by tras se recolectaron en los estados duplicate, following the procedure Mérida y Táchira, donde comparte described by Vargas-Alvarez et al., hábitat con algunas especies de (2006). 25 mL of a solution of HCl 1.2 Psidium. A continuación se presenta in methanol at 50% v/v were added to

224 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 un listado de las especies analizadas y a 0.25 g sample of guava leaves, this su respectiva procedencia (cuadro 1). solution was taken to a reflux for 2 h Hidrólisis de flavonoides at 95ºC. Subsequently, the extracts La hidrólisis se realizó por dupli- were filtered by gravity (Whatman cado siguiendo el procedimiento descri- Nº 1). Later, an aliquot of the extract to por Vargas-Alvarez, et al. (2006). A (150 µL) was taken, and diluted in H2O 0,25 g de muestra de hojas de guayaba acidulated at pH 2.5 (600 µL). For se le agregaron 25 mL de una solución carrying out the analysis by HPLC, de HCl 1,2M en metanol al 50% v/v, 20 µL of each extract were injected by esta solución se llevó a reflujo por 2 h a duplicate. In the case of the material 95ºC. Posteriormente, los extractos se of recent collections, the leaves were filtraron por gravedad (Whatman Nº 1). previously dried at environment Seguidamente, se tomó una alícuota del temperature. extracto (150 µL) y se diluyó en H2O Determination of flavonoids acidulada a pH 2,5 (600 µL). Para el by HPLC análisis por HPLC, se inyectaron por The chromatographic separation duplicado 20 µL de cada extracto. En el of flavonoids miricetin, luteolin, caso del material de colectas recientes, quercetin, apigenin and kaemferol was las hojas fueron previamente secadas a done using high resolution liquid temperatura ambiente. chromatography in reverse phase, Determinación de flavonoides employing a C18 column (Zorbax) of por HPLC 4.6mm x 250mm x 5µm, as a mobile

La separación cromatográfica de phase KH2PO4/ACN (66.7:33.3% v/v) los flavonoides miricetina, luteonina, at 1.0 mL.min-1. The detection was quercetina, apigenina y kaempferol, se done in the UV-visible area at 280 nm. realizó mediante cromatografía líquida Retention times were obtained de alta resolución en fase reversa, em- lower than 30 min: miricetin (9 min), pleando una columna de C18 (Zorbax) luteolin (16 min), quercetin (18 min), de 4,6mm x 250mm x 5µm y como fase apigenin (24 min) and Kaemferol (29 móvil KH2PO 4/ACN (66,7:33,3% v/v) a min). 1,0 mL.min-1. La detección se realizó The quantification of flavonoids en la región UV-visible a 280 nm. was done by external standard, Se obtuvieron tiempos de reten- considering the peak area as ción menores a los 30 min: miricetina analytical parameter. For this, a (9 min), luteonina (16 min), quercetina calibration curve (2.5 - 10 mg.L-1) was (18 min), apigenina (24 min) y prepared after standard solutions of kaempferol (29 min). each flavonoid: miricetin (Sigma, 85% La cuantificación de los of pureness) 172 mg.L-1, luteolin flavonoides se realizó por estándar ex- (Sigma, 98% of pureness) 1043.8 terno, considerando el área de pico mg.L-1, quercetin (Sigma, 98% of como parámetro analítico. Para ello se pureness) 1190 mg.L-1, apigenin preparó una curva de calibración (2,5 (Sigma, 95% of pureness) 969 mg.L-1, - 10 mg.L-1) a partir de las soluciones and kaempferol (Sigma, 90% of estándares de cada flavonoide: pureness) 709.2 mg.L-1.

225 Rivero-Maldonado et al. 8º 35’ 50" LN, 71º 13’ 20" LO. HERZU: 3000 - 74. Mucuy”, Municipio Santos Marquina, Mérida. 1800 etera Maracay-Choroní, vertiente sur, Aragua. 700-750 msnm. MY- 3735. 08º 35’ 27" LN, 71º 13’ 40" LO. HERZU: 3000 - 74. msnm. HERZU: 3000 - 74. Municipio Pedro Camejo, Apure. MY-200. 967 Puerto Sipapo, Amazonas. 4º 54´- 5º 3´LN, 67º 34´- 46´LO. MY- 3749. 08´25" LO. HERZU: 3000 - 74. Churuguarita, Sector San José, Zulia. 190 msnm, 10º 26’ 02" LN, 070º 57’ 59" LO. HERZU: 3000 - 74. LN, 070º 53’ 37" LO. HERZU: 3000 - 74. Parque nacional Quebrada de la Cueva, El Toro, Falcón. 600 msnm, 10º 50´ LN, 69º 07´ LO. VEN-7772. (O.Berg) Carretera Mesa de Aura-Cordero, Táchira. 1785 msnm; 07º 56´06" LN, DC. L. Muestra frescaMuestra L. Carretera La Fría-Seboruco, Táchira. 560 msnm, 08º09´27" LN, 072º . Muestra fresca Mérida. 1880 msnm, . Muestra fresca Sector “El Salado Alto”, Municipio Campo Elías, Mérida. 1610 msnm, . Muestra fresca . Muestra fresca Carretera vía a La Ceiba, Municipio Sucre, Km 23, Trujillo. 09º 28’ 22" (Especímen herborizado) Nor-oeste de San Carlos, Cojedes. MY-666 . (Especímen herborizado) . (Especímen herborizado) Carr

. (Especímen herborizado) Municipio Sucre, Bolívar. 45 msnm, 07º 11´50" LN, 65º 12´30" LO. MY- . (Especímen herborizado) . (Especímen herborizado) Parque “La

. moritzianus . Psidium guajava Burret. Muestra frescaMuestra Burret. C Psidium acutangulum P. acutangulum P. acutangulum P. acutangulum 72º 07´05" LO. HERZU: 3000 - 74. Psidium guajava Psidium guajava Psidium guajava Psidium guajava Psidium guajava Cuadro 1. Ejemplares examinados en el análisis de los flavonoides y su procedencia. Table 1. Samples examined in the analysis of flavonoids and their origin. Ejemplar examinadoCalycolpus moritzianus Origen (Especímen herborizado)

226 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 vía El Cenizo, Trujillo. 68 msnm, 09º 26’ 55" LN, Bolívar, Bolívar. 300 a 350 msnm.VEN-36006 071º 00’ 39" LO. HERZU: 3000 - 74. 14’ 40" LO. HERZU: 3000 - 74. Portuguesa. MY-3934. Mérida. 1750 msnm, 08º 38’ 34" LN, 71º 02’ 33" LO. HERZU: 3000 - 74. Municipio Jiménez, Paso de Angostura, Represa Yacambú, Lara. 500 msnm, 9º 41´LN, 69º 3´LO. VEN-107683. Facultad de Ciencias Forestales, Municipio Milla. Mérida. HERZU:3000- 74. 70º 47’ 37"LO. HERZU: 3000 - 74. Carretera Agua Santa-La Tabla, Zulia. 110 msnm, 10º24´32" LN, 71º07´49" LO. HERZU: 3000 - 74. 04" LN, 71º 00’ 31" LO. HERZU: 3000-74. LO. HERZU: 3000 - 74. Sw. Muestra fresca Finca “Los Santos”, vía hacia Churuguarita, Zulia. 180 msnm, 10º 26’ . Muestra fresca. Muestra fresca. Muestra fresca Mcpio. Santos Marquina, carretera Los Aleros-San Rafael de Tabay, . Muestra fresca Mérida. 310 msnm, 09º 22´ 31" LN, 070º 35´44" LO. HERZU: 3000 - 74. . Muestra fresca Sabana de Mendoza, . (Especímen herborizado) . Muestra fresca Carretera Michelena-Colón, Táchira. 1090 msnm, 07º 59’ 29" LN, 72º . Muestra fresca Carretera Churuguarita-El pensado, Zulia. 170 msnm, 10º 26’ 10" LN, . Muestra fresca Los Chorros de Milla, Mérida. 1600 msnm, 08º 37’ 10" LN, 071º 08’ 21" . (Especímen herborizado) . (Especímen herborizado) San Antonio de los Altos, Miranda. MER-1 . (Especímen herborizado) Puerto Ordaz, Cerro P. guineense P. guineense P. guineense P. guineense Psidium guajava Psidium guajava Psidium guajava Psidium guajava Psidium guajava Psidium guineense P. guineense P .guineense Cuadro 1. Ejemplares examinados en el análisis de los flavonoides y su procedencia (Continuación). Table 1. Samples examined in the analysis of flavonoids and their origin (Continuation). Ejemplar examinadoPsidium guajava Origen

227 Rivero-Maldonado et al. de Jusepin. Monagas. 250 msnm. VEN-8615 Departamento Atures, Amazonas. MY-3500 de Mochima, a 20 km al suroeste Cumaná, Sucre. 250 msnm. VEN-108734. Carretera Agua Viva-Agua Santa, Trujillo. 09º31´05"LN, 70º40´16" LO. HERZU: 3000 - 74. Carretera El Pensado- Churuguarita, Zulia. 140 msnm, 10º 28’ 21" LN, 071º 02’ 36" LO. HERZU: 3000 - 74. Distrito Pedro Camejo, Apure. 67º 39´LO, 7º 2´LN. VEN-12862. Departamento Atures, al noreste de Puerto Ayacucho, Amazonas. VEN- 13756. Naturales, 12 km al sureste de Calabozo, Guárico. 75 msnm, 8º 56´LN, 67º 25´LO. MY-2183. Jardín Botánico UCV-Agronomía, municipio Girardot, Aragua. 500 msnm. MER-2. (O. Berg) Nied. DC. Río Orituco, Guárico. VEN-709 (Kunth) O. Berg. . (Especímen herborizado) Sur . (Especímen herborizado) . Muestra fresca . Muestra fresca . (Especímen herborizado) Cerro Pintao, . (Especímen herborizado)(Especímen . 11 km al norte (Especímen herborizado) Estación Biológica de los llanos la Sociedad Venezolana Ciencias (Kunth). (Especímen herborizado) Cerro La Antena, Cojedes. 50-100 msnm.VEN-14552. Psidium maribense P. maribense P. salutare. P. guineense P. guineense Psidium salutare P. salutare Psidium sartorianum (Especímen herborizado) P. sartorianum P. guineense Cuadro 1. Ejemplares examinados en el análisis de los flavonoides y su procedencia (Continuación). Table 1. Samples examined in the analysis of flavonoids and their origin (Continuation). Ejemplar examinadoP. guineense Origen

228 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 miricetina (Sigma, 85% de pureza) 172 Statistical analysis mg.L-1, luteonina (Sigma, 98% de pu- The information obtained was reza) 1043.8 mg.L-1, quercetina gathered in a data matrix elaborated (Sigma, 98% de pureza) 1190 mg.L-1, with Microsoft Windows Excel 2007, apigenina (Sigma, 95% de pureza) 969 subsequently, it was analyzed using mg.L-1, y kaempferol (Sigma, 90% de multivariate techniques, using the pureza) 709.2 mg.L-1. software SAS 9.1.3., applying the Clus- Análisis estadístico ter procedures (Conglomerate analysis La información obtenida se re- of the minimum variance of Ward) unió en una matriz de datos elaborada with the aim of determining the clus- con el programa Microsoft Windows ter of different samples of Psidium and Excel 2007, y posteriormente se anali- C. moritzianus, according to the zó a través de técnicas multivariadas, similarities and differences derived by usando el programa SAS 9.1.3., apli- the presence of flavonoids. To explain cando el procedimiento Cluster (Aná- the cluster pattern generated, an lisis del conglomerado de la varianza analysis of the main components (ACP) mínima de Ward) con la finalidad de was applied. determinar el agrupamiento de los di- ferentes ejemplares de Psidium y C. Results and discussion moritzianus según las similitudes y diferencias derivadas de la presencia In figure 1 are presented the de flavonoides. Complementariamente, results of the cluster analysis where para explicar el patrón de agrupamien- is observed the formation of different to generado se aplicó un análisis de clusters according to the presence and componentes principales (ACP). concentration of flavonoids in the analyzed taxa; meanwhile, the most Resultados y discusión determining variables of this cluster were analyzed with the main En la figura 1 se presentan los components (ACP). resultados del análisis cluster donde Cluster analysis se observa la formación de los diferen- In the dendogram (figure 1) were tes grupos de acuerdo a la presencia y distinguished the formation of 5 concentración de los flavonoides en los clusters: taxa analizados, mientras que con el Cluster 1. Formed by 24 de componentes principales (ACP) se individuals, where at the same time analizaron las variables más determi- was observed the formation of two nantes de este agrupamiento. clusters: sub-group 1A, constituted by Análisis cluster 15 samples belonging to the species En el dendograma (figura 1) se pudo Calycolpus moritzianus, Psidium distinguir la formación de 5 grupos: acutangulum, P. guajava and P. Grupo 1. Conformado por 24 in- guineense, collected on different areas dividuos, donde se observó a su vez, la of Bolívar, Falcón, Mérida, Miranda, formación de dos agrupamientos: Táchira, Trujillo and Zulia states; subgrupo 1A, constituido por 15 ejem- subgroup 1B, where 9 samples

229 Rivero-Maldonado et al.

Figura 1. Dendograma resultante del análisis de conglomerado de la varianza mínima de Ward aplicado a especies de Psidium.

Figure 1. Dendogram resulting from the conglomerate analysis of the minimum Ward variance applied in Psidium species. plares pertenecientes a las especies gathered of P. guajava, P. guineense, Calycolpus moritzianus, Psidium P. maribense, P. salutare and P. acutangulum, P. guajava y P. sartorianum, coming from Amazonas, guineense, recolectados en diversas Aragua, Cojedes, Guárico, Portugue- localidades de los estados Bolívar, Fal- sa, Sucre and Táchira. cón, Mérida, Miranda, Táchira, Cluster 2. Constituted by 5 Trujillo y Zulia; subgrupo 1B, donde samples of P. guajava and P. se agruparon 9 ejemplares de P. guineense coming from Lara, Mérida, guajava, P. guineense, P. maribense, Monagas and Trujillo states. P. salutare y P. sartorianum, prove- Cluster 3. Constituted by 4 nientes de Amazonas, Aragua, Cojedes, samples of P. guajava and P. Guárico, Portuguesa, Sucre y Táchira. acutangulum from Amazonas, Apu- Grupo 2. Integrado por 5 ejem- re, Cojedes and Mérida states. plares de P. guajava y P. guineense, Group 4. Formed by 8 samples provenientes de los estados Lara, of the species P. guajava, P. Mérida, Monagas y Trujillo. guineense and P. salutare, coming Grupo 3. Constituido por 4 ejem- from Guárico, Mérida, Táchira, plares de P. guajava y P. acutangulum Trujillo and Zulia states. de los estados Amazonas, Apure, Group 5. Formed by 4 samples Cojedes y Mérida. of the species Calycolpus moritzianus,

230 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241

Grupo 4. Formado por 8 ejempla- P. guajava and P. guineense from res de las especies P. guajava, P. Zulia and Táchira states. guineense y P. salutare, provenientes Analysis of the main de Guárico, Mérida, Táchira, Trujillo components y Zulia. As observed on table 2, the sum Grupo 5. Conformado por 4 ejem- of the first two components explained plares de las especies Calycolpus the 56% of the variation observed in moritzianus, P. guajava y P. relation to the flavonoids present in the guineense, de los estados Zulia y different analyzed species, and in Táchira. addition to CP3 it totalizes more than Análisis de componentes 75%. The first main component (CP1) principales explained the 32.3% of the variability, Como se observa en el cuadro 2, the second (CP2) 23.7% and the third la sumatoria de los dos primeros com- (CP3) 19.3%. ponentes, explicaron el 56% de la va- On the correlation of each origi- riación observada con relación a los nal variable with the main flavonoides presentes en las distintas components, was observed that the especies analizadas, y en conjunto a flavonoids which had the highest CP3 totaliza más del 75% de la mis- provision to the variability on the first ma. El primer componente principal three components were: luteolin and (CP1) explicó el 32,3% de la variabili- kaemferol in CP1; quercetin and dad, el segundo (CP2) un 23,7% y el miricetin for CP2; apigenin and tercero (CP3) un 19,3%. miricetin in CP3 (table 3). De la correlación de cada varia- Considering the formal clusters ble original con los componentes prin- in the cluster analysis, in figure 1 is cipales, se observó que los flavonoides evidenced that the CP1 clearly divides que ejercieron un mayor aporte a la cluster 5 from the rest; this cluster 5 variabilidad dentro de los tres prime- was formed by the species Calycolpus ros componentes fueron: luteonina y moritzianus, P. guajava and P. kaempferol en el CP1; quercetina y guineense. miricetina para el CP2; apigenina y CP2 divides cluster 4, constituted miricetina en el CP3 (cuadro 3). by the species P. guajava, P. Tomando en consideración los guineense and P. salutare. Considering agrupamientos formados en el análi- this component, in figure 2 are sis cluster, en la figura 2 se evidencia observed clusters 1 and 2 very close to que el CP1 separa claramente al gru- cluster 3, which was formed by taxa po 5 de los restantes; este grupo 5 lo P. guajava and P. acutangulum. conformaron las especies Calycolpus It is important to mention, that moritzianus, P. guajava y P. the division of the cluster 5 in relation guineense. to the rest, was determined by the El CP2 separa al grupo 4, consti- presence of the flavonoid kaempferol, tuido por las especies P. guajava, P. and by presenting a higher guineense y P. salutare. Consideran- concentration of luteolin. Luteolin was do este mismo componente, en la figu- not found in clusters 3 and 4;

231 Rivero-Maldonado et al.

Cuadro 2. Valores propios y proporción de la varianza para los primeros cinco componentes principales con relación a flavonoides presentes en Psidium.

Table 2. Own values and variance proportion for the first five main components in relation to the flavonoids present in Psidium.

Componente Proporción de la varianza principal Valores propios Propia Acumulada

CP1 1,6148 0,3230 0,3230 CP2 1,1853 0,2371 0,5600 CP3 0,9664 0,1933 0,7533 CP4 0,8181 0,1636 0,9169 CP5 0,4155 0,0831 1,0000 ra 2 se observa a los grupos 1 y 2 muy meanwhile, in clusters 1 and 2 the próximos al grupo 3, el cual lo confor- average concentrations were inferior maron los taxa P. guajava y P. to group 5 (table 4). It is important to acutangulum. mention the elevate variation for the Es importante mencionar, que la concentration of this flavonoid in group separación del grupo 5 con respecto al 5, which might be the cause of the high resto, estuvo determinada por la pre- heterogeneity of this group, as sencia del flavonoide kaempferol, y por mentioned in figures 1 and 2. presentar una mayor concentración de In relation that the fact that the luteonina. La luteonina no se encon- luteolin was not detected in the tró en los grupos 3 y 4, mientras que mentioned clusters, Izco (1997)

Cuadro 3. Vectores propios para los cinco primeros componentes principales (CP) con relación a flavonoides presentes en Psidium.

Table 3. Own vectors for the first five main components (CP) in relation to the flavonoids present in Psidium.

Variable CP1 CP2 CP3 CP4 CP5 (Flavonoide)

Miricetina -0,1452 0,5805 -0,5290 0,6015 0,0168 Luteonina 0,6940 0,0802 -0,0001 0,0701 0,7121 Quercetina -0,0444 -0,7024 0,0470 0,7069 0,0529 Apigenina -0,1738 0,3925 0,8408 0,3160 0,0942 Kaempferol 0,6820 0,0962 0,1049 0,1834 -0,6935

232 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241

Figura 2. Ordenación de los componentes principales generada por la presencia y concentración de flavonoides en especies de Psidium.

Figure 2. Ordering of the main components generated by the presence and concentration of flavonoids in Psidium species. en los agrupamientos 1 y 2, las con- established that the presence of a centraciones promedios fueron muy chemical trait has more value that the inferiores a las del grupo 5 (cuadro 4). absence, for this reason, it must be Es de destacar la elevada variación considered the possibility that the para la concentración de este analyzed flavonoids locate in organs flavonoide dentro del grupo 5, lo que different to the ones revised, for debe ser la causa de la elevada hetero- instance, in reproductive organs, that geneidad de este grupo, tal como se take place in phases different to the evidencia en las figuras 1 y 2. vital cycle, with a stationary or daily Con respecto al hecho de que no variation in the production, as well se detectara luteonina en los grupos as the destruction possibility of the mencionados, Izco (1997) establece que compound during previous phases of la presencia de un carácter químico their identification or during the tiene más valor que la ausencia, ra- extraction. Supporting this zón por la cual se debe considerar la information, Vargas et al. (2006) posibilidad de que los flavonoides ana- determined luteolin and kaempferol in lizados se localicen en órganos distin- fruits of P. guajava when evaluating tos a los revisados, en órganos different organs for the detection of reproductivos por ejemplo, que tenga flavonols and flavones.

233 Rivero-Maldonado et al. . 0,08±0,047 apigenina ) presentes en -1 Psidium ) present in the groups -1 0,32±0,106 0,011±0,007 quercetina species. Psidium 0,042±0,030,276±0,050,045±0,042 0,032±0,04 0,09±0,127 0,102±0,115 0,014±0,015 0,021±0,016 miricetina kaempferol 0,012±0,0280,004±0,0090,096±0,122 0 0 0,028±0,011 0,043±0,009 0,015±0,013 0,092±0,030 0,022±0,009 los grupos generados por el análisis Cluster correspondientes a especies de generated by the Cluster analysis corresponding to Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3Grupo 4Grupo 5 0 0 0 0 Cuadro 4. Promedio y desviación estándar de las concentraciones flavonoides (mg.L Cluster/flavonoide luteonina Table 4. Average and standard deviation of the flavonoids concentrations (mg.L

234 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 lugar en fases distintas al ciclo vital, Miricetin was one of the que haya variación estacional o diaria flavonoids which provided higher en su producción, así como la posibili- variability for the cluster observed in dad de destrucción del compuesto du- CP2; in table 3 can be distinguished rante las fases previas a su identifica- that clusters 1, 4 and 5 presented si- ción o durante su extracción. Apoyan- milar average concentrations (0.042- do esta aseveración, Vargas et al. 0.045 mg.L-1), while clusters 2 and 3 (2006), determinaron luteonina y had the lowest and highest levels, kaempferol en frutos de P. guajava respectively (0.015 and 0. 276 mg.L-1); cuando evaluaron diferentes órganos this can be evidenced in figure 2, where para la detección de flavonoles y is observed the spacing of the last two flavonas. clusters mentioned. La miricetina fue uno de los Vargas et al. (2006), analyzing flavonoides que aportó mayor variabili- the miricetin contents in the different dad para el agrupamiento observado en organs of P. guajava, determined that el CP2; en el cuadro 3 se puede distin- the highest concentration was in the guir que los grupos 1, 4 y 5 presenta- cortex, and secondly in the leaves. On ron concentraciones promedio similares this sense, Dinelli et al. (2006) (0,042-0,045 mg.L-1), mientras que los established that the concentration of grupos 2 y 3 obtuvieron los valores más flavonoids varies from plant to plant, bajo y más alto, respectivamente (0,015 and even in different organs of a plant. y 0, 276 mg.L-1); esto se puede eviden- In relation to the latter, it is ciar en la figura 2, donde se observa el important to remember that on this distanciamiento de los dos últimos gru- research ripened leaves of the analyzed pos a los que se hace mención. species were used, considering as Vargas et al. (2006), cuando ana- reference results of some researches lizaron los contenidos de miricetina en such as those of Sultana and Anward los diferentes órganos de P. guajava (2008), who compared the flavonoid determinaron que la mayor concentra- content in the cortex, leaves and fruits ción se localizaba en la corteza, y en of curative plants, among these is segundo lugar en las hojas. En este sen- Eugenia jambolana (Myrtaceae), tido Dinelli et al. (2006) establecieron determining that the leaves and fruits que la concentración de flavonoides va- presented higher content of these ría de planta a planta, incluso en dife- compounds, which agree to the rentes órganos de una misma planta. previous reports. Silva et al. (2006) Con relación a lo anterior, es de established that the leaves have high interés recordar que en esta investi- concentration of phytochemicals (such gación se emplearon hojas maduras de as flavonoids and phenolic acids), since las especies analizadas, tomando como the reaction of the photosynthesis is referencia resultados de ciertas inves- mainly carried out in these organs. tigaciones como las de Sultana y When comparing the flavonoids Anward (2008), quienes compararon el in the analyzed species on table 4, is contenido de flavonoides en corteza, evident that miricetin was the hojas y frutos de plantas medicinales, flavonoid that was present in all the

235 Rivero-Maldonado et al. entre estas Eugenia jambolana samples; luteolin was not detected in (Myrtaceae), determinando que las P. acutangulum and P. maribense, hojas y los frutos presentaron mayor meanwhile, kaempferol was not either contenido de estos compuestos, lo cual present in these two species nor in P. coincide con reportes previos. Silva et salutare or P. sartorianum. al. (2006) establecieron que las hojas In the research of Sultana and poseen alta concentración de Anward (2008), miricetin was not fitoquímicos (tales como flavonoides y detected in the cortex of E. jambolana, ácidos fenólicos) ya que la reacción de comparing it even when it is about la fotosíntesis se lleva a cabo princi- other genre of Myrtaceae and after palmente en estos órganos. analyzed a different organ; in this Al comparar en el cuadro 4 los research, the flavonoid content of fruit flavonoides en las especies analizadas, species was also analyzed (Malus es evidente que miricetina fue el pumila, Prunus salicin, Prunus flavonoide que estuvo presente en to- armeniaca, Fragaria ananassa and dos los ejemplares; luteonina no se de- Morus alba). Among the most relevant tectó en P. acutangulum y P. results, was determined that maribense, mientras que kaempferol kaempferol was present in all the no se determinó en estas dos especies, analyzed species, the highest así como tampoco en P. salutare, ni concentration was in M. alba (284.3 en P. sartorianum. mg.kg-1), and the lowest in P. salicin En la investigación de Sultana y (0.7 mg.kg-1). Regarding miricetin, this Anward (2008), no se detectó was only detected in F. ananassa and miricetina en la corteza de E. P. salicin, being significantly higher jambolana, permitiéndose la compara- the concentration (P<0.05) in the first ción aún cuando se trata de otro géne- specie regarding the second (3382.9 ro de Myrtaceae y de haberse analiza- mg.kg-1 and 564.1 mg.kg-1, do un órgano diferente; en este trabajo respectively). The absence of this también se evaluó el contenido de flavonoid in Malus pumila and Prunus flavonoides de especies frutales (Malus armeniaca, agreed to the previous pumila, Prunus salicin, Prunus researches carried out in the same armeniaca, Fragaria ananassa y species. Morus alba). Entre los resultados más In the genre Camarea relevantes se determinó que el (Malpighiaceae) when different species kaempferol estuvo presente en todas were compared, the most frequently las especies analizadas, encontrándo- found glycoside was kaempferol 3-O- se la mayor concentración en M. alba galactoside, but without detecting in (284,3 mg.kg-1), y la menor en P. Camarea elongata and Camarea salicin (0,7 mg.kg-1). Con respecto a la ericoides (Motta et al., 2009). miricetina, ésta sólo se detectó en F. In table 5 can be evidenced that ananassa y P. salicin, siendo the samples correspondent to the significativamente mayor la concentra- species P. guajava and P. guineense ción (P<0,05) en la primera especie con were not uniform in relation to the respecto a la segunda (3382,9 mg.kg-1 presence of the analyzed flavonoids; for

236 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 y 564.1 mg.kg-1, respectivamente). La instance, in P. guajava, 31% of the ausencia de este flavonoide en Malus samples had luteolin and only 13% pumila y en Prunus armeniaca, coin- kaempferol. On this matter, it is cidió con investigaciones previas rea- important to mention, that samples lizadas en las mismas especies. were collected in different areas in the En el género Camarea country, representing the geographic (Malpighiaceae) cuando se compararon location of a variation factor. On this diferentes especies, el glicósido más sense, Vargas et al. (2006), mentioned frecuente fue kaempferol 3-O- that the results might present galactósido, no detectándose sólo en variations depending on the genetic Camarea elongata y Camarea material and the conditions where the ericoides (Motta et al., 2009). plants grow. En el cuadro 5 se puede eviden- Likewise, Gardeli et al. (2008), ciar, que los ejemplares correspondien- in a phytochemical research, proved tes a las especies P. guajava y P. that the profile of the essential oils guineense no presentaron uniformidad found in Myrtus communis en cuanto a la presencia de los (Myrtaceae) differed according to the flavonoides analizados; así por ejemplo, origin, as well as they found en P. guajava, el 31% de los ejempla- quantitative differences of the indivi- res presentaron luteonina y sólo el 13% dual components present, relating kaempferol. A este respecto, es impor- these differences with the geographic tante recordar que los mismos se reco- localization and the existence of chemo- lectaron en diversas localidades del te- types, refer that the stationary rritorio nacional, pudiendo representar variation and the environmental la ubicación geográfica un factor de factors, such as temperature, longitude variación. En este sentido Vargas et al. of the day, nutrients, among others, (2006), acotaron que los resultados pue- have important roles on their chemical den presentar variaciones dependiendo composition. These factors influence on del material genético y de las condicio- the bio-synthetic pattern of the plants, nes donde crecen las plantas. consequently, on the relative Así mismo, Gardeli et al. (2008), proportion of the main characteristics en un estudio fitoquímico demostraron compounds. que el perfil de los aceites esenciales On the other hand, it has obtenidos en Myrtus communis mentioned that flavonoids are (Myrtaceae) difirieron de acuerdo al frequently used in chemo-taxonomy, origen, así como se encontraron dife- since they constitute excellent rencias cuantitativas de los componen- chemical markers among the tes individuales presentes, relacionan- metabolic compounds of the plants. Its do estas diferencias con la localización used is widely recommended geográfica y por la existencia de considering that its pattern tend to be quimiotipos; refieren que la variación specific, are relatively steady and the estacional y los factores ambientales bio-synthesis/accumulation is tales como temperatura, longitud del independent from the environmental día, nutrientes, entre otros, juegan un influence (Markham, 1989). Likewise,

237 Rivero-Maldonado et al. 100% 100% 100% estos flavonoides Porcentaje de ejemplares examinados que presentaron MIMI 100% 100% LU, MI LU, MI KA, LU, MI KA, LU, MIKA, LU, MI KA (13%), LU (31%), MI (100%) KA (8%), LU MI (100%) Kaempferol=KA; Flavonoides presentes: Luteonina=LU; Miricetina=MI examinados. Especie Calycolpus moritzianus Psidium acutangulum Psidium guajava Psidium guineense Psidium maribense Psidium salutare Cuadro 5. Presencia de flavonoides en las especies analizadas considerando el número ejemplares Table 5. Presence of flavonoids in the analyzed species considering number examined samples. Psidium sartorianum

238 Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2013, 30: 217-241 rol importante en su composición quí- it has established that the composition mica. Estos factores influyen sobre el of flavonoids agrees in the sense that patrón biosintético de las plantas y the non-genetic factors (environmental consecuentemente sobre la proporción conditions, cultural practices, among relativa de los principales compuestos others) have an effect on the característicos. concentration, rather than on the En contraposición, se ha referido relative composition (Arozarena et al. que los flavonoides son frecuentemen- 2002). te utilizados en quimiotaxonomía, ya que constituyen excelentes marcado- Conclusions res químicos entre los compuestos metabólicos de las plantas. Se reco- The flavonoids that allowed mienda ampliamente su uso conside- grouping the different species of rando que sus patrones tienden a ser Psidium and Calycolpus moritzianus específicos, son relativamente estables were mainly: kaempferol, luteolin and y su biosíntesis/acumulación es inde- miricetin, such arrangement varied pendiente de la influencia ambiental considering the presence and (Markham, 1989). Así mismo, se ha concentration of these. In P. guajava establecido que la composición de los and P. guineense none consistent flavonoides es principalmente determi- results were obtained in relation to the nada por factores genéticos y muchas presence of these flavonoids, which de las referencias coinciden en que los could have been due to the high factores no genéticos (condiciones am- diversity of the samples’ origin. These bientales, prácticas culturales, etc.) results should be complemented to tienen un gran efecto sobre su concen- other sources of information, to tración, más que con su composición establish the taxonomic limits of the relativa (Arozarena et al., 2002). genre. In future researches it is recommendable the incorporation of Conclusiones Psidium species coming from similar geographic conditions, with the aim of Los flavonoides que permitieron reducing the possible variation derived agrupar a las distintas especies de from the influence of this factor. Psidium y a Calycolpus moritzianus fueron principalmente: kaempferol, End of english version luteonina y miricetina, dicho arreglo varió considerando la presencia y con- centración de los mismos. En P. con otras fuentes de información para guajava y P. guineense no se obtuvie- contribuir a establecer los límites ron resultados consistentes con rela- taxonómicos del género. En próximas ción a la presencia de estos flavonoides, investigaciones se recomienda la incor- lo cual pudo deberse a la alta diversi- poración de especies de Psidium pro- dad de orígenes de las muestras. Es- cedentes de condiciones geográficas si- tos resultados se deben complementar milares a fin de disminuir la posible

239 Rivero-Maldonado et al.

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