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Dissertação Evanilson A. Feitosa.Pdf

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Dissertação Evanilson A. Feitosa.Pdf UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS MESTRADO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS CARACTERIZAÇÃO BOTÂNICA, PROSPECÇÃO FITOQUÍMICA E ATIVIDADES BIOLÓGICAS PRELIMINARES DE Hirtella racemosa Lam. (CHRYSOBALANACEAE) EVANILSON ALVES FEITOSA RECIFE 2012 UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS CARACTERIZAÇÃO BOTÂNICA, PROSPECÇÃO FITOQUÍMICA E ATIVIDADES BIOLÓGICAS PRELIMINARES DE Hirtella racemosa Lam. (CHRYSOBALANACEAE) EVANILSON ALVES FEITOSA RECIFE, 2012 EVANILSON ALVES FEITOSA CARACTERIZAÇÃO BOTÂNICA, PROSPECÇÃO FITOQUÍMICA E ATIVIDADES BIOLÓGICAS PRELIMINARES DE Hirtella racemosa Lam. (CHRYSOBALANACEAE) Dissertação apresentada ao Programa de Pós- graduação em Ciências Farmacêuticas da Universidade Federal de Pernambuco, como parte dos requisitos para obtenção do grau de mestre em Ciências Farmacêuticas. Área de concentração: Obtenção e Avaliação de Produtos Naturais e Bioativos ORIENTADORA: Profa. Dra. KARINA PERRELLI RANDAU CO-ORIENTADOR: Prof. Dr. HAROUDO SATIRO XAVIER RECIFE. 2012 UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS REITOR Prof. Dr. Anísio Brasileiro de Freitas Dourado VICE-REITOR Prof. Dr. Sílvio Romero de Barros Marques PRÓ-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E PÓS GRADUAÇÃO Prof. Dr. Francisco de Souza Ramos DIRETOR DO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE Prof. Dr. José Thadeu Pinheiro VICE-DIRETOR DO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE Prof. Dr. Márcio Antônio de Andrade Coelho Gueiros CHEFE DO DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARACÊUTICAS Prof. Dr. Dalci José Brondani VICE-CHEFE DO DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Prof. Dr. Antônio Rodolfo de Faria COORDENADORA DO PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Profa. Dra. Nereide Stela Santos Magalhães VICE-COORDENADORA DO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Profa. Dra. Ana Cristina Lima Leite Dedico aos meus pais Antônio Nilson Alves e Maria Evani Alves Feitosa. AGRADECIMENTOS A todos aqui apresentados, agradeço pela contribuição para a realização deste trabalho. INSTITUIÇÕES Programa de Pós Graduação em Ciências Farmacêuticas – UFPE. FACEPE – Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco. Departamento de Antibióticos – UFPE. AOS PROFESSORES Profa. Dra. Karina Perrelli Randau Prof. Dr. Haroudo Satiro Xavier Prof. Luiz Alberto de Lira Soares Profa. Dra. Rejane Pimentel Profa. Dra. Teresinha Gonçalves Alves de Lima Prof. Dr. Nicácio H. da Silva AOS AMIGOS DE CURSO E COLEGAS Alan Lucena de Vasconcelos Magda Ferreira Alex Lucena de Vasconcelos Anselmo Segundo Márcia Maria Barbosa da Silva Asaph Santos Cabral Luciana Gomes Arrais Risoleta Nogueira Luma Gomes dos Santos Rafaela Damasceno Januária Rodrigues de Lima Gustavo S. Dimech Ingrid Campos Karla Camila Bruno Nunes Tatiane Bezerra de Oliveira Anne Cecília Gibson Gomes José Antonio Pereira AGRADECIMENTOS ESPECIAIS Á profa. Dra. Karina Perrelli Randau, pela qual poderia discorrer esta página inteira em agradecimentos. Pela orientação, atenção, paciência, amizade, pela ajuda e exemplo. Este trabalho não seria possível sem a sua orientação. Ao prof. Dr. Haroudo Satiro Xavier pela atenção, pelos ensinamentos e principalmente pela paciência nestes anos de convívio. Pelo incentivo, amizade, simpatia e orientação. Enfim, por tudo, saiba que muito lhe admiro. Às professoras Dra. Rejane Pimentel e Dra. Teresinha Gonçalves Alves de Lima pela colaboração e uso das dependências dos seus laboratórios. Ao professor Luiz Alberto de Lira Soares pelo apoio e ajuda sempre que necessário. Aos colegas de laboratório Alan Lucena, Alex Lucena e Márcia Maria Barbosa, Rafaela Damasceno, José Antônio e Gibson Gomes pela inestimável amizade, cumplicidade e luta compartilhada. Aos amigos da vida: Jouldes Matos Duarte, Luma Gomes, Luciana Gomes Arrais, Carlos Émerson Borges, Lucian Mendes, Wilson Filho, Paulo Henrique, Luciano Pinheiro, Marília Novaes, Monalisa Ferreira e Milena Novaes pelo compartilhamento dos sofrimentos e alegrias. À Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE). Aos meus pais pelo amor e dedicação. RESUMO Hirtella racemosa Lam. (Chrysobalanaceae), popularmente conhecida como ajururana, ajirú-do-mato ou murtinha, é um arbusto que se desenvolve em biomas como caatinga, restinga e cerrado. Com o objetivo de avaliar o potencial fitoquímico e farmacológico da espécie, este trabalho compreende três tópicos referentes ao estudo farmacognóstico: farmacobotânica, fitoquímica e atividades biológicas. Para caracterização botânica da espécie foram realizados cortes histológicos que revelaram a presença, no caule, de periderme com 2-4 camadas de súber, lenticelas, idioblastos contendo drusas no córtex e floema. Na folha, foi observada a presença de pelos tectores simples, estômatos do tipo paracítico, idioblastos contendo drusas no parênquima. O estudo fitoquímico realizado em CCD (cromatografia em camada delgada) identificou constituintes terpênicos, flavonoídicos, saponinas e proantocianidinas nas folhas. Foi realizada a extração dos metabólitos em aparelho de Soxhlet, utilizando solventes de polaridades distintas para posterior avaliação das atividades biológicas de H. racemosa. Procedeu-se ao ensaio de toxicidade aguda não revelando-se tóxica na dose de 2000 mg/Kg. No ensaio de peritonite induzida por carragenina, para avaliação de atividade anti-inflamatória, foi observada atividade na dose de 200 mg/Kg para os extratos utilizados. Experimentos in vitro utilizando culturas de células cancerígenas demonstraram potencial citotóxico contra a linhagem de câncer de pulmão humano (NCI-H-292) e potencial moderado contra linhagens de carcinoma de cólon (HT29) e laringe (HEp-2). A partir de todos os resultados obtidos com esta pesquisa, torna-se possivel expressar que os estudos botânicos, fitoquímico e avaliação preliminar das atividades anti-inflamatória e citotóxica de H. racemosa, contribuem para o conhecimento de uma espécie com potenciais químico e farmacológico inexplorados, podendo vir a colaborar futuramente no arsenal terapêutico. Palavras chaves: Histologia, Terpenos, Flavonóides, Citotoxicidade, Inflamação. ABSTRACT Hirtella racemosa Lam (Chrysobalanaceae), popularly known as ajururana, ajirú-do- mato or murtinha, is a shrub that grows in biomes such as savanna, cerrado and restinga. In order to evaluate the potential of the phytochemical and pharmacological species, this work covers three topics concerning the study pharmacognosy: Pharmacobotany, phytochemical and biological activities. For characterization of the botanical species were prepared histologic sections that revealed the presence, on the stem, of a periderm of 2-4 layers of cork, lenticels, idioblasts containing druses in the cortex and phloem. In leaves, was observed the presence of glandular simple paracitic stomata, idioblasts containing druses in parenchyma. The phytochemical study performed on TLC (thin layer chromatography) identified terpene constituents, flavonoids, saponins and proanthocyanidins in leaves. We performed the extraction of metabolites in the Soxhlet apparatus using solvents of different polarities for further evaluation of the biological activities of H. racemosa. The acute toxicity test revealed no toxic dose at 2000 mg / kg. For tests on carrageenan-induced peritonitis, to evaluate anti-inflammatory activity, activity was observed at a dose of 200 mg / kg of the extracts used. In vitro experiments using cultured cancer cells showed cytotoxic potential against the strain of human lung cancer (NCI-H-292) and moderate potential against colon carcinoma cell lines (HT29) and larynx (HEp-2). From all results obtained with this research, it becomes possible to express the botanical studies, preliminary phytochemical and anti-inflammatory activity and cytotoxicity of H. racemosa, contribute to the knowledge of a species with potential chemical and pharmacological unexplored may come to contribute in future therapeutic arsenal. Keywords: Histology, Terpenes, Flavonoids, Citotoxicity, Inflamation LISTA DE ABREVIAÇÕES E SIGLAS . AcOEt – Acetato de etila. AcOH – Ácido acético. ACVr-HSV1 – Vírus Herpes Símplex tipo I aciclovir-resistente . AF – Ácido fórmico. Caco-2 – Linhagem de células de câncer de cólon . DMSO - Dimetilsulfóxido . EAcOEt – Extrato acetato de etila. Edicloro – Extrato diclorometano. EDTA – Ácido etilenodiamino tetra acético . En-hex – Extrato n-hexano. ESP – Extrato metanólico rico em saponinas, proantocianidinas e leucoantocianidinas. FAA 50 - Formol, ácido acético e álcool etílico a 50% (90:5:5) . HEp-2 – Linhagem de células de câncer de laringe humano. Hep G2 – Linhagem de células de hepatoma humano. H. racemosa – Hirtella racemosa. HT29 – Linhagem de células de câncer de colo humano. IC % - Percentual de inibição celular . L. apetala – Licania apetala. L. carii – Licania carii. L. heteromorpha – Licania heteromorpha. L. licaniaeflora – Licania licaniaeflora. L. pittieri – Licania pittieri. L. pyrifolia – Licania pyrifolia. MTT - 3-(4,5-dimetil-2-tiazol)-2,5-difenil-2-H-brometo de tetrazolium. NCI-H-292 – Linhagem de células de câncer de pulmão humano. NEU - difenilboriloxietilamina . PBS – Tampão fosfato salino. K562 – Linhagem de células de eritroleucemia SUMÁRIO OBJETIVOS............................................................................................................ 14 CAPÍTULO I - FARMACOBOTÂNICA DE Hirtella racemosa Lam.....................
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