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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS ANÁLISE FITOQUÍMICA, AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANA DE Solanum guaraniticum A. ST.-HIL. DISSERTAÇÃO DE MESTRADO Marina Zadra Santa Maria, RS, Brasil 2013 ANÁLISE FITOQUÍMICA, AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANA DE Solanum guaraniticum A. ST.-HIL. Marina Zadra Dissertação apresentada ao curso de Mestrado do Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, Área de Concentração em Controle e Avaliação de Insumos e Produtos Farmacêuticos, da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para a obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas. Orientadora: Profª. Drª. Margareth Linde Athayde Santa Maria, RS, Brasil 2013 Ficha catalográfica elaborada através do Programa de Geração Automática da Biblioteca Central da UFSM, com os dados fornecidos pelo(a) autor(a). Zadra, Marina Análise fitoquímica, avaliação da atividade antioxidante e antimicrobiana de Solanum guaraniticum A. St.-Hil. / Marina Zadra.-2013. 78 f.; 30cm Orientadora: Margareth Linde Athayde Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Maria, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós- Graduação em Ciências Farmacêuticas, RS, 2013 1. Solanum guaraniticum 2. Jurubeba 3. Polifenóis 4. Antioxidantes 5. Atividade antimicrobiana I. Linde Athayde, Margareth II. Título. Universidade Federal de Santa Maria Centro de Ciências da Saúde Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas A Comissão Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertação de Mestrado ANÁLISE FITOQUÍMICA, AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANA DE Solanum guaraniticum A. ST.-HIL. elaborada por Marina Zadra como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas Comissão Examinadora: Margareth Linde Athayde, Drª. (Presidente/Orientador) Roberto Christ Vianna Santos, Dr. (UNIFRA) Liliane de Freitas Bauermann, Drª. (UFSM) Santa Maria, 14 de junho de 2013 Dedico este trabalho a meus pais, Agelio e Maria Luiza, meus exemplos de coragem e determinação, pela educação, incentivo, amor por estarem sempre ao meu lado e serem tão importantes em minha vida. AGRADECIMENTOS A Deus, pela força para seguir adiante sempre. A Universidade Federal de Santa Maria, por proporcionar a realização de um curso de mestrado com qualidade, contribuindo para a minha formação. Ao Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, pela estrutura e subsídios oferecidos para o desenvolvimento deste trabalho. A CAPES, pela bolsa concedida. A minha família, em especial aos meus pais Agelio e Maria Luiza, e ao meu querido irmão Marcelo, por estarem sempre comigo mesmo distantes fisicamente, por todo o incentivo, conforto nos momentos difíceis, por serem fundamentais na minha vida e pelo amor incondicional. A minha orientadora, Prof. Drª. Margareth Linde Athayde, pela oportunidade oferecida desde a iniciação científica, por tornar possível a realização de um sonho, pela confiança e amizade. Aos meus colegas e queridos amigos do Laboratório de Fitoquímica (LabFito), pela incansável ajuda de todas as horas, pelos ensinamentos, amizade e companheirismo, tornando o dia a dia muito mais agradável. A Prof. Drª. Thaís Scotti do Canto-Dorow, pela identificação do material vegetal em estudo. Ao Prof. Dr. Félix Alexandre Antunes Soares e Sílvio Terra Stefanello, do Programa de Pós-graduação em Bioquímica Toxicológica desta instituição, e ao Prof. Dr. Michel Mansur Machado, do Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas da UNIPAMPA, por contribuírem para o engrandecimento deste estudo. Ao Prof. Dr. Sydney Hartz Alves e a amiga Luana Rossato, do Laboratório de Pesquisas Micológicas (LAPEMI), pela colaboração na realização da atividade antimicrobiana dos extratos. Também, à Prof. Drª. Marli Matiko Anraku de Campos e a Tanise Dalmolin, pelo auxílio na avaliação da atividade antimicobacteriana da planta. Por fim, a todos aqueles que de alguma forma contribuíram para a realização deste trabalho, aos amigos próximos e também aos que, mesmo distantes, sempre estiveram prontos para oferecer apoio e palavras de incentivo. Se não houver frutos, valeu a beleza das flores Se não houver flores, valeu a sombra das folhas Se não houver folhas, valeu a intenção da semente. Henfil RESUMO Dissertação de Mestrado Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas Universidade Federal de Santa Maria ANÁLISE FITOQUÍMICA, AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANA DE Solanum guaraniticum A. ST.-HIL. AUTORA: MARINA ZADRA ORIENTADORA: MARGARETH LINDE ATHAYDE Local e Data da Defesa: Santa Maria, 14 de junho de 2013. A família Solanaceae é uma das maiores e mais complexas, destacando-se o gênero Solanum, com cerca de 1500 espécies. Solanum guaraniticum é um arbusto encontrado no Paraguai, Argentina e Brasil, conhecido popularmente como jurubeba ou falsa jurubeba. Este estudo teve como objetivo quantificar as principais classes de metabólitos secundários e determinar as atividades antioxidantes e antimicrobianas das folhas de S. guaraniticum. O material vegetal foi coletado no município de Guaporé, RS, Brasil, e está registrado no herbário do Departamento de Biologia da Universidade Federal de Santa Maria sob o número SMDB 13158. As folhas da planta foram secas, trituradas, e maceradas com etanol (70%) por sete dias. Após este período, o material foi filtrado e o extrato concentrado em evaporador rotatório a fim de obter o extrato aquoso. Parte deste foi levado à secura total originando o extrato bruto (EB), outra parte foi fracionado sucessivamente com clorofórmio (CHCl3), acetato de etila (AcOEt) e butanol (BuOH), originando as respectivas frações. Na análise fitoquímica e antioxidante, a fração AcOEt apresentou a maior quantidade de polifenóis (546.57 ± 2,35 mg de equivalentes de ácido gálico/g) e a melhor capacidade antioxidante através do método do DPPH (IC50 = 9.11 ± 0,75 µg/mL). Já a fração CHCl3 apresentou os maiores teores de taninos (56,03 ± 0,68 mg de equivalentes de catequina/g), flavonoides (75,73 ± 0,34 mg de equivalentes de rutina/g) e alcaloides (10,79 ± 0,06 mg/g), sendo a fração mais eficaz na remoção de espécies reativas, por inibição da oxidação da diclorofluoresceína (DCFH-DA), apresentando também a melhor atividade de inibição da peroxidação lipídica, avaliada através do método do TBARS, bem como de inibição da oxidação de proteínas, pelo método da proteína carbonil. A análise do EB e frações por CLAE revelou a presença dos ácidos cafeico, clorogênico e rosmarínico, ácidos fenólicos bastante ativos e que podem estar envolvidos nas atividades descritas. No que diz respeito à atividade antimicrobiana, avaliada através de microdiluição em caldo, boas atividades foram verificadas frente a bactérias Gram-positivas, principalmente para o EB (CIM de 32 µg/mL para M. luteus) e para a fração AcOEt (CIM de 64 µg/mL para S. intermedius e L. monocytogenes). Os extratos foram praticamente inativos contra bactérias Gram-negativas e inativos contra fungos. Verificou-se também atividade antimicobacteriana promissora, principalmente para a fração CHCl3 contra M. smegmatis (CIM = 156 µg/mL). Os resultados ajudam a elucidar algumas características fitoquímicas da espécie e mostram que S. guaraniticum possui potenciais antioxidante e antimicrobiano consideráveis. Palavras-chave: Solanum guaraniticum, jurubeba, compostos fenólicos, CLAE, antimicrobianos naturais. ABSTRACT Master‟s Degree Dissertation Postgraduate Program in Pharmaceutical Sciences Federal University of Santa Maria PHYTOCHEMICAL ANALYSIS, EVALUATION OF THE ANTIOXIDANT AND ANTIMICROBIAL ACTIVITIES OF Solanum guaraniticum A. ST.-HIL. AUTHOR: MARINA ZADRA ADVISER: MARGARETH LINDE ATHAYDE Place and Date of the Defense: Santa Maria, June 14, 2013. The Solanaceae family is one of the largest and most complex, especially the Solanum genus, with about 1500 species. Solanum guaraniticum is a shrub found in Paraguay, Argentina and Brazil, popularly known as jurubeba or false jurubeba. This study aimed to quantify the main classes of secondary metabolites and determine the antimicrobial and antioxidant activities of the leaves of S. guaraniticum. The plant material was collected in the city of Guaporé, RS, Brazil, and is registered in the herbarium of the Biology Department at the Federal University of Santa Maria under number SMDB13158. The leaves of the plant were dried, triturated and macerated with ethanol (70%) for seven days. After this period, the material was filtered and the extract concentrated in rotary evaporator to obtain the aqueous extract. Part of this was taken to complete dryness yielding the crude extract (CE), another part was successively fractionated with chloroform (CHCl3), ethyl acetate (AcOEt) and butanol (BuOH), yielding the respective fractions. In the antioxidant and phytochemical analysis, the AcOEt fraction showed the highest amount of polyphenols (546.57 ± 2.35 mg of gallic acid equivalents/g) and the best antioxidant capacity by DPPH method (IC50 = 9.11 ± 0.75 µg/ mL). The CHCl3 fraction showed the highest contents of tannins (56.03 ± 0.68 mg of catechin equivalents/g), flavonoids (75.73 ± 0.34 mg rutin equivalents/g) and alkaloids (10.79 ± 0.06 mg/g), being more effective in scavenging reactive species, by inhibition of dichlorofluorescein oxidation (DCFH-DA), also showing the best activity of inhibition of lipid peroxidation by the TBARS method, as well as inhibition of protein oxidation, by the protein carbonyl method. HPLC