Meloidogyne Incognita

الجمهىرية العربية السىرية

جامعة دمشق

كلية الزراعة

قسم وقاية النبات

حقيين فعاليت بعض الفطىر الوضادة للنيواحىدا الوعزولت هن حزب البيىث الوحويت في هكافحت نيواحىدا حعقد الجذور Meloidogyne incognita

رسالة أعدت لنيل درجة الماجستير في اليندسة الزراعية – قسم وقاية النبات

إعداد: م. ريوا هنصىر

وزارة الزراعة واإلصالح الزراعي

إشزاف: د. خالد العسس

أستاذ بقسم وقاية النبات في كمية الزراعة – جامعة دمشق

2014

قدهج هذه الزسالت اسخكواالً لوخطلباث نيل درجت الواجسخيز في الهندست الزراعيت )اخخصاص وقايت نباث( هن كليت الزراعت في جاهعت دهشق

This thesis has been submitted as partial fulfillment of the requirements for the Master degree in Agricultural Engineering (Plant Protection Specialization), from the Faculty of Agricultural, Damascus University.

شهادة

نشهد بأن هذا البحث الموصوف في الرسالة تحت عنوان:

" تقييم فعالية بعض الفطور المضادة لمنيماتودا المعزولة من ترب البيوت المحمية في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita "

هو نتيجة عمل بحثي عممي قامت به اآلنسة ريما منصور، ولم يسبق أن قُدم لمحصول عمى أية درجة عممية أخرى، وأن كافة األعمال والصور والنتائج المذكورة فيه هي جهود شخصية وبتوجيه ومتابعة من المشرفين العمميين، وأن أية معمومات أو نتائج أو طرائق عمل ذكرت في الرسالة قد

ُنسبت إلى مصادرها ومؤلفيها في النص وقائمة الم ارجع.

اسم المرشحة المشرف العممي

ريما منصور الدكتور خالد العسس

......

شـــــــــكــز وحقـــــديــــــز

ال شك أن لألوطان حقاً كبي اًر عمى األبناء وميما عمل اإلنسان من جيد وقدم من عمل فإن ما يقدمو ال يوازي نسمة من عبير الوطن وال خطوة عمى أديمو الغالي... بعد جيد استمر أكثر من سنتين أتقدم بالشكر لألستاذ الدكتور خالد العسس والدكتورة مريم العبد القادر لتفضميما باإلشراف عمى

ىذه الرسالة حيث لم يبخال عمي بجيد أو عمم أو خبرة خالل كافة مراحل ىذا البحث ، والى األستاذ الدكتور فواز العظمة والدكتورة ريم قبرصمي لتفضميما مشكورين بتقييم ىذه الرسالة.

كما أود أن أشكر كافة أعضاء ىيئة التدريس في قسم وقاية النبات/ جامعة دمشق ، وأشكر بشكل خاص كافة الزمالء العاممين في مركز بحوث ودراسات المكافحة الحيوية في جامعة دمشق، والزمالء في مركز تربية األعداء الحيوية ومخبر صحة البذور في الالذقية وأخص بالذكر الميندسين رامي قسام وأمل حاج حسن وأليسار شعبو وجونار ابراىيم ومحمد بوزقمي وبشرى درويش، عمى ما قدموه من مساعدة وتعاون خالل دراستي.

وال أنسى أن أتوجو بخالص الشكر والتقدير إلى والدي ووالدتي وصديقتي اليام العقدة عمى صبرىم

ومساعدتيم ودعميم، والى كل من قدم مساعدة مادية أو معنوية ولم يسعني أن أذكر أسماءىم، فميم مني جزيل الشكر وعظيم االمتنان.

الالذقية 3/8/ 2014 ريما منصور

اإلىذاء

إىل انزي عهًين انصذق ًانٌفاء... ًحمثح اَخشٌٍ ًاحرتاو انناس... إىل انزي حني أَظش إنٍو أحش

تانفخاس... إىل يٍ أمتنى ٌٌياً أٌ أصم ملضرٌاه... أحثك ــــأبي

إىل انيت أراتد َفضيا كً أضًء... ًأفشدخ رساعٍيا كً أطري... إىل يٍ يضحد أديعً تكفيا

احلشٌش... ًقثهد جثٍين عنذ األَني... إىل انيت صأحثيا ياحٍٍد ـأوي

إىل انيت عشد يعيا أمجم األًقاخ... ًيٍ دًهنا الطعى نهحٍاج... إىل انيت نٍ ذفشقين إال يف املًاخ... ٌايٍ

أحثثريا ًأحثيا ًصأحثيا حرى انفناء أخـ ذً

إىل انيت دعًرين يف كم األًقاخ... إىل يٍ آيند تً ًشجعرين حرى يف انثعاد ... إىل إَضاَح تكم يا ذعنٍو

انكهًح... إىل قذًذً انذكرٌسج يشٌى انعثذ انقادس

إىل انيت تذأخ يعيا املشٌاس ًأيذذين تانذعى ًانرشجٍع تشغى كم يا يشسَا تو يٍ صعاب...

صذٌقيت اهلاو انعقذج

يارا َقٌل ملٍ يذ ننا ٌذ انعٌٌ ًصاعذَا دًٌ يقاتم... ىً أستع حشًف خترصش يايف انقهة يٍ

يشاعش... شكشاً سايً قضاو امساعٍم انصاحل أمسا حٍذس حمًذ صهًى

إىل كم يٍ صاعذًَ يف ىزا انعًم... ًكم يٍ يش يف حٍاذً ًأعطاًَ األيم... إىل يٍ أفشحين...

ًأحزَين... إىل أصذقائً... إىل كم إَضاٌ

ــسي ـوا

The Syrian Arab Republic

Damascus University

Faculty of Agriculture

Department of Plant Protection

Evaluation of efficiency of some nematode antagonistic fungi isolated from greenhouse-soils to control root-knot nematode Meloidogyne incognita

Master Thesis By: Rema Mansour

Ministry of Agriculture

Under the supervision of: Dr. Khaled Alassas

Professor, Department of Plant Protection Faculty of Agriculture, Damascus University

2014 المقدمة وأهمية البحث

1. المقدمة Introduction:

دخلت الزراعة المحمية إلى القطر العربي السوري في عام 1976 عندما بدأت وزارة الزراعة واإلصالح

الزراعي بالتعاون مع البرنامج اإلنمائي لمنظمة األغذية والزراعة الدولية بإقامة الكثير من المراكز

المتخصصة بإنتاج الخضروات المحمية في مناطق متعددة من القطر )مركز الهنادي في محافظة

الالذقية ومركز عمريت في محافظة طرطوس( وذلك بعد أن انتهج القطر سياسة تكثيف اإلنتاج البستاني

عن طريق حماية المزروعات للتغلب على العوامل المؤثرة في اإلنتاج بسبب زيادة الكثافة السكانية

وارتفاع مستوى المعيشة. وأخذت هذه الزراعة تنتشر بشكل سريع خاصة في الشريط الساحلي لوجود

الشتاء الدافئ نسبياً، مما يقلل من تكاليف االنتاج في البيوت المدفأة بسبب قلة استهالك الوقود، ويسمح

بإقامة البيوت غير المدفأة أيضاً، وفي بعض المناطق الدافئة األخرى من القطر )وادي اليرموك

ومحافظة درعا( ألن اعتدال الجو شتا ًء في هذه المنطقة يجعل استخدام البيوت المحمية ممكناً بتكاليف

قليلة وباستثمارات زهيدة )بوراس وآخرون، 1999(.

وقد بلغ عدد البيوت المحمية عام 2102 المزروعة بالبندورة Solanum lycopersicum Lineus

76966 بيتاً شغلت مساحة 9109 هكتا اًر وأعطت انتاجاً 216772 طنا ً، وفيما يلي جدول يبين مساحة

وانتاج وغلة البندورة المزروعة في البيوت المحمية لعام 2102 وتطورها على مستوى القطر خالل الفترة

2119-2102 )جدول 0( )المجموعة اإلحصائية السنوية، 2102(.

وتعد البندورة من الخضار الهامة في العالم و في القطر العربي السوري خاصةً و الذي يحتل المرتبة

الثالثة في الوطن العربي من حيث اإلنتاج )FAO, 2009(. وهي ذات أهمية كبيرة من حيث االستهالك

المحلي والعالمي، ومن حيث التصدير والتصنيع، وتستهلك طازجة أومطبوخة أومعلبة وتستخدم في

صناعة دبس البندورة والكاتشب )حميدان وزيدان، 2004(. وتمتاز بقيمة غذائية عالية حيث يحتوي كل

011 غ ارم من ثمار البندورة الطازجة وسطياً 7.0% مادة جافة تعطي 22 وحدة حرارية. ويدخل في

تركيبها وسطياً 2.6 غرام كربوهيدرات كلية و 0.2 غرام بروتين و 0% أحماض عضوية، السيما

حامض التفاح وحامض الليمون )لكنها التحتوي على حامض االوكساليك وأمالحه كما كان يعتقد

سابقا(، و1.6% ألياف ، و 1.2% دهون، وكذلك تحتوي على أمالح البوتاسيوم )261 مغ( والصوديوم

)21 مغ( والفوسفور )99 مغ( والمغنيزيوم )00 مغ( والكالسيوم )01 مغ( والحديد )0.2 مغ(، وان

استهالكها بكميات كبيرة يجعلها مصد اًر رئيسياُ لفيتاميني A )911 وحدة دولية( و C )00-20 مغ(.

وتحوي بذور البندورة زيتاً تت اروح نسبته بين 07-26% غني باألحماض الدهنية غير المشبعة )األولييك

20% واللينولييك 90%( )البسيط وآخرون، 2010(.

جدول 1. مساحة وانتاج وغلة البندورة المزروعة في البيوت المحمية لعام 2112 وتطورها على مستوى القطر خالل الفترة .)2112-2112( المساحة اإلنتاج اإلنتاجية عدد البيوت البيان )هكتار( )طن( )كغ/البيت( المزروعة 32281 3111 282883 2112 3002 31138 3111 813318 2101 3002 11822 3111 822028 2132 3002 12211 3111 822231 2282 3002 82028 3111 011218 2102 3002 81288 3111 022128 2228 3002 88388 3111 022128 2221 3002 20122 3111 011128 8281 3010 88181 3111 022122 2220 3011 31211 3111 811832 2102 3013

تصنيف البندورة:

مملكة: Plantae

شعبة: Magnoliophyta

صف: Magnoliopsida

رتبة: Solanales

عائلة: Solanaceae

الجنس: Solanum

النوع: Solanum lycopersicum Linnaeus

)http://en.wikipedia.org/wiki/Tomato(

وتصاب البندورة بالعديد من األمراض الفطرية والفيروسية والبكتيرية وتهاجمها آفات مختلفة جدول )2(،

وتصاب بأمراض فيزيولوجية بسبب نقص العناصر الغذائية كمرض عفن الطرف الزهري الذي ينتج عن

نقص الكالسيوم ومرض النضج المتبقع الذي ينتج عن نقص البوتاسيوم باإلضافة الى تشقق الثمار،

ومرض تجوف الثمار الذي ينتج عن االفراط في استخدام منظمات العقد، ومرض لفحة الشمس وينتج

عن تعرض الثمار المباشر ألشعة الشمس الحادة )حميدان وزيدان، 2004(.

جدول 2. أهم األمراض واآلفات التي تصيب البندورة S. lycopersicum. االسم العربي االسم االنكليزي االسم العلمي للمسبب نوع المسبب

اللفحة المبكرة Alternaria solani Early blight فطر

اللفحة المتأخرة Phytophthora infestans Late blight فطر

ذبول فيوزاريوم Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici Fusarium wilt فطر

ذبول فيرتيسليوم Verticillium albo-atrum Verticillium wilt فطر

اصفرار وتجعد األوراق Tomato yellow leaf curl virus TYLCV فيروس

موزاييك البندورة Tomato mosaic virus ToMV فيروس

موزاييك التبغ Tobacco mosaic virus TMV فيروس

ذبول البندورة البكتيري Corynebacterium michiganese Bacterial canker بكتريا

حافرة أوراق البندورة Tuta absoluta Leaf miner حشرة

الذبابة البيضاء Trialeurodes vapronicum White fly حشرة

الحلم العنكبوتي األحمر Tetranychus urticae Red spider mite حلم

Root-knot نيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne spp نيماتودا nematode .)http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_tomato_diseases(

وتعد نيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne spp أهم آفة نيماتودية في القطر العربي السوري خاصة

في البيوت المحمية في المنطقة الساحلية حيث تتوفر لها الظروف المالئمة للتكاثر و ذلك نتيجة استمرار

زراعة هذه البيوت بمحصول واحد أو عدد محدود من المحاصيل تنتمي لعائلة نباتية واحدة، ويعتبرها

الكثير من علماء أمراض النبات أحد أهم وأخطر خمسة مسببات مرضية اقتصادية في العالم، وتعتبر

األنواع األربعة التالية:

0. نيماتودا الجذور الجنوبية M. incognita.

2. نيماتودا تعقد الجذور الجاوية M. javanica.

9. نيماتودا تعقد جذور الفول السوداني M. arenaria.

2. نيماتودا تعقد الجذور الشمالية M. hapla.

األكثر شيوعاً في التربة الز ارعية وتشكل أكثر من 90% من أنواع نيماتودا تعقد الجذور في األراضي

الزراعية في العالم وتسبب خسائر كبيرة للمحاصيل الزراعية االقتصادية حيث تقدر الخسارة السنوية في

إنتاجية البندورة نتيجة اإلصابة بالنيماتودا بـ 21.7% على المستوى العالمي )العسس، 2003(.

وتُعد طريقة استخدام مدخنات التربة والمبيدات النيماتودية الجهازية من طرائق المكافحة األكثر شيوعاً

لهذه النيماتودا لكنها ليست آمنة على البيئة وصحة اإلنسان فهي تؤثر في الكائنات غير المستهدفة في

النظام الحيوي التربي من ناحية إبادتها أو إحداث تغي ارت جوهرية في تعدادها مما يسبب خلال ً في

التوازن الحيوي، كما تؤثر في اإلنسان وذوات الدم الحار تأثي اًر ساماً مباش اًر وغير مباشر باإلضافة إلى

دورها في زيادة أنواع اآلفات وانتشارها أو ما يسمى بظاهرة ظهور سالالت مقاومة وآفات جديدة، وفشلها

في حل بعض المشاكل المتعلقة ببعض حاالت االنتشار الوبائي لبعض اآلفات. لذلك كان البد من

طرائق حديثة فعالة للسيطرة على اآلفات والحد من ضررها وآمنة بيئياً كالمكافحة الحيوية التي تحظى

باهتمام عالمي متزايد وخاصة في مجال استخدام الكائنات الدقيقة وذلك بسبب اإلمكانيات الواسعة في

إنتاج المبيدات الميكروبية على شكل مستحضرات تجارية تماثل أشكال المستحضرات التجارية للمبيدات

الكيميائية المنتجة عالمياً منذ زمن بعيد مما يسهل إمكانيات تداولها واستخدامها على نطاق واسع من

قبل الم ازرعين، خاصة وأنه يستخدم في تطبيقها حقلياُ أدوات المكافحة نفسها المستخدمة في تطبيق

المبيدات الكيميائية ) لدال وزمالؤه، 2006(.

3. مبررات البحث وأهميته Reasons and importance:

1.2. ازدياد األض ارر التي تسببها النيماتودا في سورية نظ اًر للظروف البيئية المناسبة لتكاثرها و ذلك

لوجود سورية في المنطقة المتوسطية المعتدلة حيث يكون مناخها مالئماً لنشاط النيماتودا وتكاثرها طيلة

العام )Luc et al., 2005(.

2.2. البحث عن طرائق آمنة وبديلة للمكافحة الكيميائية ذات الكلفة المرتفعة والخطورة البيئية العالية.

2.2. ندرة الدراسات حول إمكانية استخدام المكافحة الحيوية باستخدام كائنات معزولة من نفس بيئة

اآلفة وعدم وجود دراسات عن الفطور المضادة للنيماتودا الموجودة في تربة البيوت المحمية في الساحل

السوري و في سورية بشكل عام.

2. أهداف البحث Objectives:

1.2. عزل الفطور المضادة لنيماتودا تعقد الجذور M. incognita من تربة البيوت المحمية في

الساحل السوري وتعريفها.

2.2. اختبار فعالية الفطور المضادة مخبرياً في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita .

2.2. اختبار فعالية الفطور المضادة في تجربة نصف حقلية في البيت المحمي في مكافحة نيماتودا

تعقد الجذورM. incognita .

1. الفصل األول

الدراسة المرجعية

1.1. نيماتودا تعقد الجذور (Meloidogyne incognita (Kofoid and White, 1919

:Chitwood, 1949

1.1.1. مقدمة:

تم اكتشاف نيماتودا تعقد الجذور كأول نيماتودا تصيب محاصيل الخضار عام 1855 بواسطة

Berkeley، وذلك على جذور نباتات الخيار المزروعة في البيوت الزجاجية )أبوغربية وآخرون،

2010(. تأتي نيماتودا تعقد الجذور الجنوبية M. incognita في المرتبة الثانية من حيث االنتشار

)بنسبة 30%( في الوطن العربي مقارنة بالجاوية M. javanica، وهي تسبب أض ار اًر جسيمة على مدى

واسع من المحاصيل الزراعية المهمة كالبندورة والباذنجان والبقوليات والتبغ والشوندر السكري وقصب

السكر والبطاطا وبعض أشجار الفاكهة ولقد شخص هذا النوع على المحاصيل الزراعية في معظم

األقطار العربية )اسطيفان و أبوغربية، 2010(.

وقد سجل Faust و Mamluk )1975( وجود نيماتودا تعقد الجذور M. arenaria و .M incognita و M. javanica مترافقة مع محاصيل القطن والشوندر السكري في مناطق مختلفة من

القطر العربي السوري. بعدها سجل Franco Lamberti )0972( ثالث أنواع من نيماتودا تعقد

الجذور تصيب الخضار وأزهار القطف: النوع M. javanica الذي وجد على جذور القرنفل في البيوت

البالستيكية في منطقة بوقا وغوطة دمشق وعلى الخيار والبندورة في البيوت المحمية في منطقتي

الهنادي وعمريت، والنوع M. incognita على جذور نباتات الخيار في البيوت المحمية في منطقة

عمريت وعلى البندورة خارج البيوت، والنوع M. arenaria مرة واحدة في منطقة الهنادي على البندورة

وبمشاركة النوع M. javanica.

2.1.1. تصنيف نيماتودا تعقد الجذور:

مملكة: Animalia

شعبة: Nematoda

صف: Secernentea

رتبة: Tylenchida

عائلة: Heteroderidae

جنس: Meloidogyne

نوع: Meloidogyne incognita

(http://en.wikipedia.org/wiki/Meloidogyne-incognita)

3.1.1. دورة حياة نيماتودا تعقد الجذور:

تضع األنثى البالغة البيض في كيس جيالتيني ويتطور الجنين داخل البيضة إلى أن يصل إلى الطور

اليرقي األول ثم يحدث له انسالخ أول ضمن البيضة ويتكون الطور اليرقي الثاني، بعدها يفقس البيض

عن الطور اليرقي الثاني المتحرك وهو الطور المعدي الوحيد فإذا وجد عائل حساس فإن اليرقة تخترق

الجذور لتصل بعد 5 أيام إلى الخاليا البرنشيمية للحزم الوعائية وتستقر فيها،عندها تحث اليرقة النبات

لتكوين الخاليا العمالقة للتغذية كما تتم في الوقت نفسه تغيرات أخرى في األنسجة المحيطة بجسم

النيماتودا. وتستمر اليرقات بالتغذية والنمو وتتعرض لثالث انسالخات خالل بضعة أيام ويحدث

االنسالخان الثالث والرابع ضمن كيوتيكل الطور اليرقي الثاني ويفتقد هذان الطوران إلى الرمح الذي يعود

إلى الظهور في مرحلة البلوغ. وبعد ذلك تتخذ األنثى الشكل الكمثري وفي حين تبقى اإلناث الناضجة

مستقرة داخل الجذور المصابة نجد أن الذكور التي تكون ملتفة عدة لفات ضمن غالف الطور اليرقي

الرابع تستعيد شكلها الدودي وتغادر إلى التربة حيث يمكن العثور عليها حرة أو على مقربة من اإلناث.

بعد التلقيح تضع األنثى البيض في كيس جيالتيني يحتوي على 200- 500 بيضة/ كيس، داخل أو

خارج األنسجة النباتية اعتماداً على موقع األنثى. و يبقى البيض حي لمدة 21 شهر تقريباً في الظروف

المالئمة. و يمكن أن تبقى األفراد البالغة عدة شهور بدون عائل، لذلك التربة الخالية من العوائل النباتية

يمكن أن تحتوي على يرقات معدية ألكثر من سنة. تكتمل دورة حياة نيماتودا تعقد الجذور في العوائل

النباتية المناسبة خالل 23- 30 يوم في درجة حرارة 27 ⁰م، وتؤثر درجة الحرارة على طول فترة الحياة

وعلى تعدد األجيال. ففي المناطق الحارة والبيوت المحمية يحدث التكاثر طوال العام عند توفر العوائل

النباتية المناسبة وعدد األجيال يصل إلى 7- 10 أجيال متداخلة أما في الظروف الحقلية في المناطق

المعتدلة فلهذه النيماتودا جيل أو جيالن على األكثر )العسس، 2003(.

4.1.1. أعراض اإلصابة بنيماتودا تعقد الجذور:

تتمثل أعراض اإلصابة بنيماتودا تعقد الجذور على المجموع الجذري بوجود عقد جذرية )Galls( أو

انتفاخات تتكون أساساً نتيجة انقسام الخاليا المحيطة بالخاليا العمالقة )Giant cells( التي تنشأ من

تأثير افرازات النيماتودا وتستخدمها اإلناث للتغذية مما يؤدي الى كبر حجمها وتعدد أنويتها. تتشكل هذه

الخاليا حول منطقة االسطوانة الوعائية للجذر، وقد تنمو بداخلها مسببة تعطيل حركة الماء والمواد

الغذائية مما يسبب تقزما ً شديدا ً في نمو النبات المصاب. باإلضافة إلى ذلك فقد تتضمن أعراض

اإلصابة صغر حجم المجموع الجذري، وندرة الجذور الثانوية والشعرية، وتبقع واسوداد، وبالتالي تعفن

المجموع الجذري.

في حاالت االصابة الشديدة يظهر على أجزاء النباتات فوق سطح التربة اصفرار وذبول خالل النهار،

كما تزداد حساسيتها لمسببات أمراض النبات األخرى وخاصة أمراض الذبول. أما في حاالت اإلصابة

المتوسطة فقد تنمو النباتات دون ظهور األعراض السابقة بشكل واضح، ولكن قد تتسبب اإلصابة بفقد

كبير في معدل اإلنتاجية. بينما تؤدي اإلصابة الخفيفة إلى زيادة بسيطة في النمو واإلنتاجية، وذلك

بسبب إنتاج النبات أعداداً أكبر من الجذور كجزء من آلية الدفاع عن النفس )اسطيفان وأبو غربية،

.)2101

5.1.1. مكافحة نيماتودا تعقد الجذور:

 إن منع إدخال أجزاء النباتات التكاثرية )شتول، غراس، درنات، كورمات، ...الخ( المصابة

بنيماتودا .Meloidogyne spp يعمل على إنجاح العملية الزراعية بحيث تكون بداية نمو

المحصول خالية من اإلصابات المبكرة، مما يعطي الفرصة إلنتاج نبات قوي ومتحمل لإلصابة

فيما بعد.

 طريقة غمر التربة بالماء: تستخدم هذه الطريقة في المناطق الوفيرة المياه، حيث تتطلب فترة

غمر من 12 إلى 22 شه اًر في األ ارضي الجافة لمكافحة نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne

.spp بنجاح.

 طريقة التشميس للتربة الزراعية: تتضمن هذه الطريقة استغالل الطاقة الشمسية في أشهر

الصيف الحارة لمدة 6 إلى 8 أسابيع لرفع حرارة التربة الرطبة بعد تغطيتها بغطاء بالستيكي،

إلى مستويات قاتلة لآلفات الموجودة في التربة كالنيماتودا وغيرها وهذه الطريقة مستخدمة لتعقيم

البيوت المحمية في المناطق الساحلية وهي ذات فعالية كبيرة في القضاء على النيماتودا

)العسس، 2003(.

 استخدام المحاصيل الصائدة: وهي إما محاصيل ال تستطيع النيماتودا التطور فيها والوصول إلى

طور البلوغ وبالتالي ال تصل لمرحلة النضج والتكاثر، أو محاصيل حساسة لإلصابة ولكن يتم

إتالف نباتات المحصول قبل وصول النيماتودا مرحلة البلوغ ووضع البيض )أبو غربية

والحسني، 2010(. أشار بن زغيو )2004( في اليمن إلى فعالية زراعة الفجل Raphanus sativus كمصيدة نباتية لتخفيض أعداد نيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne spp في

التربة، وبينت دراسات Yassin و Ismail )1993( فعالية زراعة نبات الزينيا Zinnia elegans بالتحميل على البندورة لمكافحة M. incognita.

 استخدام األصناف المقاومة لإلصابة النيماتودية: وهي طريقة فعالة لكن استخدام المبيدات أدى

إلى ظهور سالالت شرسة من النيماتودا قادرة على إصابة األصناف المقاومة.

 المكافحة الكيميائية: حيث هناك الكثير من المركبات ذات السمية على النيماتودا وهي األكثر

استخداماً من قبل الم ازرعين إال أنها غير آمنة للبيئة واإلنسان، من أكثر المبيدات المستخدمة

في البيوت المحمية: Vydate( Oxamyl – )Nemacur( Phenamiphos(.

 المكافحة الحيوية والتي ستناقش في الفقرة االتية.

6.1.1. استخدام المكافحة الحيوية في السيطرة على النيماتودا:

تقضي نيماتودا النبات دورة حياتها، أو على األقل جزء منها، في التربة، ومن ثم تتعرض –كغيرها من

أحياء التربة- لتأثير كثير من عوامل التربة الحيوية وغير الحيوية. ومن أهم العوامل الحيوية في النظام

البيئي التربي التي لها تأثير سلبي على النيماتودا هو عامل األعداء الحيوية الطبيعية للنيماتودا، حيث

تعمل هذه األحياء على خفض كثافة النيماتودا في التربة سوا ًء بالتنافس على العائل النباتي أو بالتطفل

على النيماتودا أو التهامها. وتسمى هذه األحياء عموماً باألحياء المضادة للنيماتودا ) Nematode

anatagonists (، والتي تشمل مد ًى واسعاً من الكائنات الحية التي تعيش في التربة، ومن أهم هذه

الكائنات المضادة ما يلي )Chen and Dickson, 2004(:

1.الفطور المضادة للنيماتودا Nematophagus Fungi.

2.البكتريا Bacteria.

3.الفيروسات Viruses.

4.النباتات المضادة والمستقلبات الطبيعية Antagonistic plants and natural metabolites.

5.فطور الميكورايزا المتعايشة مع النبات Mycorrhyzae.

6.مفترسات النيماتودا المجهرية مثل دب الماء Tardigrades.

7.1.1. الفطور المضادة للنيماتودا Nematophagus fungi:

الفطور هي األكثر دراسة من بين الكائنات المضادة للنيماتودا، كما أنها األكثر أهمية في خفض كثافة

النيماتودا في التربة. وقد قسم Chen و Dickson )2004( الفطور المضادة للنيماتودا حسب طبيعة

تغذيتها إلى:

1. فطور مفترسة Predacious fungi:

وهي فطور تعيش في التربة وتفترس النيماتودا، حيث تصطاد وتقتل النيماتودا ومن ثم تتغذى

عليها، وذلك باستخدام أعضاء اصطياد )Trap organs( ذات أشكال مختلفة تطورها هذه الفطور.

ولذلك تسمى هذه المجموعة بالفطور الصائدة )القانصة( Nematode-trapping fungi

للنيماتودا. ومن أمثلة هذه الفطور المفترسة أنواع معينة من األجناس: Dactylaria،

Dactylella ،Arthrobotrys، و Monacrosporium وغيرها وهي أنواع تابعة للفطور

الناقصة Deuteromycetes( Imperfect fungi(.

2. فطور داخلية التطفل على النيماتودا الدودية الشكل Endoparasites of vermiform

:nematodes

ال تمتلك هذه الفطور أعضاء اصطياد، وتوجد في التربة على شكل أبواغ كونيدية تنبت وتخترق

جسم النيماتودا لتنمو بسرعة مكونة مشيجة فطرية تقوم بامتصاص محتويات جسم النيماتودا. وتقسم

هذه الفطور تبعاً لطبيعة التغذية فيها إلى:

1.2. فطور إجبارية التطفل: ال تمتلك مشيجة فطرية في التربة خارج جسم النيماتودا المصابة، وانما

أبواغها الموجودة في التربة تنبت وتخترق عوائلها مباشرة ، ومن أهم هذه الفطور أنواع معينة من كل

من األجناس: Harposporium ،Catenaria، وHirsutella.

2.2. فطور اختيارية التطفل: هي فطور قدرتها الرمية غير واضحة في معظم األنواع، لكن بعضها

يستطيع النمو رميا ً. ومن أهم هذه الفطور أنواع معينة من كل من األجناس: Esteye،

Catenaria، و Verticillium .

3. فطور متطفلة على اإلناث الساكنة والبيض Parasites of sedentary females and

:eggs

معظم هذه الفطور اختيارية التطفل والقليل منها إجباري التطفل. وتقسم من حيث طبيعة التطفل إلى:

1 3 . . طفيليات إجبارية: ال تك ون هذه الفطور مشيجة فطرية في التربة، إال أنها تمتلك أبواغا ً ساكنة

تبقى في التربة من موسم آلخر. أهم أنواعها: Catenaria auxilaria و Nematophthora gynophila التي تتطفل على نيماتودا الحويصالت.

2.3. طفيليات اختيارية: وتمثلها أنواع معينة من األجناس: Penicillium ،Verticillium،

Cylindocarpon ،Fusarium ،Paecilomyces، و Acremonium.

4. فطور تنتج مضادات حيوية Fungi producing antibiotic substances (fungal

:metabolites)

تم عزل الكثير من هذه الفطور من حوصالت وكتل بيض النيماتودا. وقد تكون رمية التغذية، وال

يعرف الكثير عن آلية تأثيرها على النيماتودا. ومعظمها ينتج مواداً سامة للنيماتودا أو لكتل البيض

والحوصالت، وقد تمنع أو تشجع هذه المواد فقس البيض. ومن أمثلة هذه المجموعة:

Paecilomyces lilacinus و Trichoderma virens، و أنواع معينة من األجناس

Penicillium ،Fusarium، و Aspergillus )الحازمي وآخرون، 2010(.

8.1.1. الفطور المفترسة للنيماتودا Nematode Predacious fungi:

تمتلك الفطور المفترسة، وهي كائنات حية تقبض على فريستها و تقتلها وبعد ذلك تلتهمها، وسائل

متخصصة للقبض على الحيوانات مثل النيماتودا. هذه الوسائل هي: هيفات الصقة، أفرع الصقة،

شبكات الصقة، عقد الصقة، حلقات غير منقبضة، حلقات منقبضة، وحوصالت الصقة. وربما يكون

قتل بعض الفطور المفترسة للنيماتودا عملية بطيئة حيث تستمر الفطور بالتغذية على النيماتودا لفترة

طويلة. اعتبرت هذه الفطور، اعتماداً على وجهة النظر هذه، طفيليات للنيماتودا أيضاً ) Chen and

.)Dickson, 2004

 فطور ذات هيفات الصقة Fungi with adhesive hyphae:

تنتج الهيفا الالصقة من قبل الفطور الدنيا أكثر من أنواع الفطور األخرى. ألنها ال تملك حواجز وال

تستطيع إنتاج وسائل معقدة للقبض على النيماتودا. لكن بعض الفطور المفترسة في الفطور

الناقصة، مثل Dactylaria psychrophila ،Arthrobotrys botryospora و

Arthrobotrys superba تستطيع أيضا" إمساك النيماتودا بالهيفا الالصقة تحت ظروف معينة.

تنتج هذه الفطور موادا ً الصقة تتوضع على بعض نقاط أسطح الهيفات، تقبض على النيماتودا

عندما تلمس هذه النقاط. تنتج الهيفا عضو التصاق ينفذ خالل جدار جسم النيماتودا، وينمو

الميسليوم في جميع أنحاء جسم النيماتودا. و بعد استهالك كل محتويات النيماتودا تنمو المشيجة

على السطح الخارجي لجسم النيماتودا من أجل تطور الكيس البوغي و األبواغ )Barron, 1977(.

 فطور ذات أفرع الصقة Fungi with adhesive branches:

تنتج األفرع الالصقة من قبل الفطور الناقصة والفطور األدنى مثل Stylopage. سلوك هذه الفطور

مشابه للفطور ذات الهيفات الالصقة. تتشكل عادة األفرع الالصقة من 1-2 خلية وتلتحم طبيعياً

لتشكل إطارات الصقة بسيطة، أو شباك ثنائية البعد. يخفى غشاء رقيق من المواد الالصقة فوق

كامل سطح الفرع، وعندما تالمس النيماتودا األفرع، ُيقبض عليها وتُخترق بسرعة وتُستهلك.

 فطور ذات شباك الصقة Fungi with adhesive nets:

الشباك الالصقة هي وسائل صيد شائعة عند الفطور المفترسة وتوجد في الفطور الناقصة خاصة

عند أنواع الجنس Arthrobotrys. تحمل الشباك الالصقة مادة الصقة تسهل القبض على

النيماتودا، تكون فعالة عندما يقبض على النيماتودا، حيث تمسك الفريسة بسرعة واذا قاومت

النيماتودا، ستقع في شرك شبكة أخرى وربما سترتبط بأفرع أو شباك عديدة. يمكن القبض على

النيماتودا الكبيرة فضال" عن النيماتودا الصغيرة بهذه الوسيلة. عندما يقبض على النيماتودا، تخترقها

مشيجة الفطر خالل ساعة، وبعد ذلك ينتفخ جزء من المشيجة ليشكل بصلة العدوى. تتطور هيفا

التمثيل الغذائي من هذا التركيب.

 فطور ذات عقد الصقة Fungi with adhesive knobs:

العقد الالصقة وسائل اصطياد عالية التخصص، وهي خاليا واضحة موفولوجيا ً. تغطى العقد بطبقة

رقيقة من المواد الالصقة وهي إما جالسة أو محمولة على قمة حامل قصير غير الصق. عندما

تلمس النيماتودا هذه العقد، تنتج كتلة مسطحة الصقة عند نقطة اإلرتباط مشكلة بطانة سميكة فتزداد

منطقة اإلرتباط عدة طيات لضمان إمساك النيماتودا بقوة. تحتوي العقد الالصقة على أجسام كروية

عديدة مليئة بااللكترونات تغلق على جزء من جدار الخلية حيث يكون االحتكاك بالنيماتودا محتمال ً.

توزع العقد الالصقة مباشرةً على طول الهيفا بشكل طبيعي، وعندما تالمسها النيماتودا ستلتصق

بشكل أكيد بعقد أخرى عديدة وهي تحاول تحرير نفسها، مما يجعل هروبها مستحيال ً ) ,Gray

1988(. أثناء محاولتها الهرب، تكسر النيماتودا المقبض عادة" و تحمله على سطح جسمها. بعد

ذلك يخترق الفطر العائل و تصبح النيماتودا متغذى عليها. توجد العقد الالصقة في الفطور الناقصة

والفطور البازيدية Basidomycetes. تنتج الفطور الناقصة بعد اإلختراق بصلة عدوى كروية

الشكل كما في Dactylaria candida. تنشأ من هذه البصلة مشيجة غذائية تستعمر وتهضم

محتويات العائل. ال تشكل الفطور البازيدية بعد اإلختراق مثل .Nematoctonus sp بصلة عدوى

.)Chen and Dickson, 2004(

 فطور ذات حلقات غير منقبضة Fungi with non-constricting rings:

تنتج الحلقات غير المنقبضة ذات الحامل أفرعا ً جانبية ناتجة من مشيجة حاجزة مفترشة للفطور

الناقصة مثل Dactylaria. أحياناً تنتج الفطور، التي تنتج حلقات غير منقبضة، عقد الصقة أيضاً

مثل Dactylaria candida و Dactylaria lysipaga . توجد العقد والحلقات بشكل عام

متناوبة على نفس الخيط الهيفي. أيضاً تالحظ طبقة الصقة، مشابهة لتلك المرتبطة مع مصائد العقد

الالصقة والشباك الالصقة، على السطح الداخلي للحلقة. تتكون الحلقة من 3 خاليا. عندما تدخل

النيماتودا الحلقة ستمسك الحلقة بها إذا كان قطرها أصغر قليالً فقط من القطر الداخلي للحلقة.

االتصال بين الحلقة والحامل دقيقة جداً وعادةً تكسر النيماتودا الحلقة في محاولتها للهرب. ربما

تحمل نيماتودا واحدة حلقات عديدة حول جسمها. وأخي اًر يخترق الفطر جدار جسم النيماتودا

ويستهلكها.

 فطور ذات حلقات منقبضة Fungi with constricting rings:

تعتبر الحلقة المنقبضة الوسيلة األكثر تطور للفطور المفترسة، تتشكل من قبل أنواع Dactylella

و Dactylaria و Arthrobotrys، وبضعة فطور ناقصة أخرى. تشبه الحلقات المنقبضة، التي

تتألف أيضاً من 3 خاليا، الحلقات غير المنقبضة في الشكل الظاهري. إال أن الحلقة غير المنقبضة

مختلفة حيث تنشأ على حامل قوي ال ُيكسر بسهولة. يختلف حجم الحلقة بين وضمن األنواع، لكن 20-40µm عموما" يقع ضمن مجال . عندما تُحف ز الحلقة المنقبضة، تنتبج الخاليا الثالثة بسرعة

للداخل. واذا تحركت النيماتودا داخل الحلقة، تنغلق الجدر الداخلية لخاليا الحلقة، وتخنق النيماتودا

ولن تملك فرصة للنجاة. إن آلية إغالق الحلقة ما تزال موضع جدل.

 فطور ذات عقد الصقة بشكل زجاجة الساعة Stephanocysts:

Stephanocysts هي نوع من الكونيديا أو األبواغ موجودة في الفطور البازيدية، خصوصاً الجنس

Hyphoderma. تتكون العقد النموذجية من خلية قاعدية كأسية الشكل وخلية طرفية كروية، يحيط

صف من األشواك بمحيط الدائرة عند نقطة اتصال الخليتين. الحظ Liou و Tzean )1992( أن

Stephanocysts تعمل أيضاً كوسائل اصطياد للنيماتودا. إن خليتي الـ Stephanocysts

الصقتان، وتستطيعان االرتباط بالنيماتودا العابرة. عندما تمسك الفطور بالنيماتودا فإنها تشكل مشبك

عدوى يخترق جسم النيماتودا وبعد ذلك تستهلكها )Chen and Dickson, 2004(.

2. الفصل الثاني

عزل الفطور المضادة لنيماتودا تعقد الجذور M. incognita من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري وتعريفها

1.2. المقدمة Introduction:

تعيش الفطور بأعداد كبيرة في بيئتها األصلية في التربة، وعلى المواد العضوية المتحللة مع غيرها من

الكائنات الحية الدقيقة األخرى مكونة معها عالقات مختلفة فإما ان تتعاون معها في تحليل المواد

العضوية الموجودة في التربة، أو تتنافس معها على مصدر الغذاء خاصة في حال ندرته، أو تقوم

بالتطفل عليها وافتراسها؛ كالنيماتودا التي تتحرك في التربة وبين المواد العضوية المتحللة بحثاً عن

الغذاء، فاذا بها تقع فريسة للفطر الذي يقبض عليها بسرعة ويخترق جسمها ويشل حركتها ثم يقوم

بالتغذي عليها وتحليلها بعد افرازه بعض المضادات الحيوية لتثبط نمو البكتريا داخل القناة الهضمية

للنيماتودا الميتة وبذلك يمنع الميكروبات األخرى من مشاركته الغذاء )محمد أحمد، 0997(.

قام الباحث األلماني Fresenius )0702( بفحص الفطور النامية على المخلفات العضوية، ولفت

انتباهه أحد األنواع الفطرية الذي يكون حوامل كونيدية طويلة ورشيقة تحمل العديد من الكونيدات الثنائية

الخاليا، وأطلق على هذا الفطر اسم Arthrobotrys oligospora. وبعد ذلك بعدة سنوات، وجد

Woronin )0761( أنه عند انبات كونيديا الفطر Arthrobotrys على الروث القديم المتحلل، فإن

بعض هيفات الفطر تنمو لألعلى وتنحني في نموها حتى تتحد مع منشأ الفرع مكونة حلقة، وتتكون

العديد من هذه الحلقات المتقاربة مكونة مايشبه الشبكة، إال أن Woronin لم يستطع في ذلك الوقت

التعرف على هذه التركيبات الفطرية وعالقتها باصطياد النيماتودا. ويعتبر Zopf )0777( أول من درس

العالقة بين الفطر المتطفل وفرائسه من النيماتودا المتحركة، حيث تعرف على دور التركيبات الفطرية

التي يكونها الفطر على هيفاته ويستخدمها كمصيدة خادعة الصطياد فريسته، وعلى مراحل اقتناص

الفطر للفريسة، وعلى طبيعة اختراق هيفات الفطر لكيوتيكل النيماتودا التي تم أسرها، ونمو هيفات الفطر

داخل أحشاء النيماتودا وتحليله ألنسجتها. ثم أوضح الباحث األلماني Drechsler )0999( أن هذه

التركيبات الفطرية ذات المظهر الشبكي لها قدرة عالية على االلتصاق بجسم الفريسة من النيماتودا التي

تحتك بها خالل تجولها في التربة أو المواد العضوية، حيث الحظ عن طريق الصدفة خالل عزله لبعض

الفطور الممرضة للجذور باستعمال وسط آغار الماء ذو المحتوى القليل من العناصر الغذائية أن

ميسليوم بعض الفطور النامية على هذا الوسط قد نصبت شباكها على الهيفات المبعثرة على سطح

اآلغار، تصطاد بها النيماتودا المتحركة حولها ثم تحللها وتتغذى عليها متغلبة على فقر الوسط الغذائي

النامية عليه.

أدت الدراسات واألبحاث العلمية التي قام بها Drechsler )من 0999 حتى 0960( و Duddington )من 0901 حتى 0962( و Barron )0979 حتى 0970( و Gray و Subramanian إلى

اكتشاف أكثر من 001 نوعاً من الفطور المتطفلة على النيماتودا والتي امكن عزلها من جميع أنواع األراضي والمواد العضوية المتحللة في كثير من دول العالم )جدول 9( )محمد أحمد، 0997(.

جدول 9. أهم أجناس الفطور المتطفلة على النيماتودا والصفوف التابعة لها )Gray, 1988(. الصف Class االجناس التابعة للصف Catenaria Chytridiomycetes Haptoglossa, Myzocytium, Nematophthora, Protascus Oomycetes Acaulopage, Macrobiotophthora, Meristacrum, Rhopalomyces, Zygomycetes Stylophage Ascomycetes الطور الكامل للفطر الناقص Harposporium anguillulae Hyphoderma, Pleurotus Basidiomycetes والطور الكامل للفطر الناقص Nematoctonus Arthrobotrys, Dactylaria, Dactylella, Drechmeria, Deuteromycetes Harposporium, Monacrosporium, Verticillium

قام عدد من الباحثين العرب بإجراء مسوحات حقلية لمعرفة وتحديد وجود أو انتشار الفطور المضادة

للنيماتودا سواء في التربة أو في أجسام النيماتودا المصابة وبالتالي عزلها وتعريفها، ثم تمت دراسات

الحقة عليها لتحديد كفاءتها وفعاليتها في مكافحة األنواع النيماتودية ذات االهمية االقتصادية في

المنطقة )الحازمي وآخرون، 2101(. فقد تم تسجيل عدة انواع من الفطور المضادة للنيماتودا في الترب

الزراعية على ضفاف النيل األزرق في السودان )El-Amin, 1999(. وفي السعودية تم عزل نوعين

من الفطور المضادة ليرقات الطور الثاني )J2( لنيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne javanica

)Al-Hazmi and Abdul-Razik, 1991(. وفي األردن تم عزل وتمييز سبعة أنواع من الفطور

المضادة للنيماتودا من كتل البيض واناث نيماتودا تعقد الجذور M. javanica و M. incognita

المنتشرة على محاصيل حولية ومعمرة مختلفة وفي مناطق بيئية مختلفة في األردن )حجاز، 2119(.

وفي ليبيا تم عزل وتعريف خمسة أجناس من الفطور المفترسة للنيماتودا من الترب الزراعية )جمعة،

0977(. وفي مصر تم عزل ثمانية عشر نوعاً من الفطور المضادة للنيماتودا من ترب مزروعة

بالباذنجان والخيار والملفوف بمنطقة المنصورة بالجيزة وقد شملت هذه االنواع فطو اًر مفترسة وأخرى

متطفلة على نيماتودا Abul-Eid et al., 1997( M. incognita(. وفي سورية قام قسام )2102(

بعزل الفطر Trichoderma من عينات تربة وعينات جذور مصابة مأخوذة من موقعين مختلفين في

الساحل السوري: القلوع )بانياس( والهنادي )الالذقية(.

وفي دراسة في حقول الموز في أوغاندا، تم جمع 23 عزلة من .Paecilomyces spp من جذور

وريزوسفير الموز وكان النوع P. lilacinus األكثر تواجداً، و العزلة P. lilacinus 23N5-2 األكثر

تطفالً على النيماتودا الحفارة Kilama et al., 2007( Radopholus similis(. وفي دراسة في

ادينبرغ في اسكوتلندا، تم عزل 02 فطر مضاد للنيماتودا بالمجمل من عينات تربة جمعت من 2 مواقع

مختلفة، تتضمن 07 نوع من الفطور الصائدة للنيماتودا و00 نوع من الفطور داخلية التطفل ) ,Saxena

.)2008

2.2. المواد والطرائق Materials and Methodes:

تم تنفيذ البحث في مخبر النيماتودا في مركز بحوث و دراسات المكافحة الحيوية في كلية الزراعة

بجامعة دمشق، وفي بيوت محمية في الساحل السوري في الفترة الممتدة من شهر شباط وحتى شهر

تشرين الثاني من العام 2102.

1.2.2. المواد واالجهزة المستخدمة:

0. مسبر وأدوات زراعية ألخذ عينات التربة والجذور وأكياس بالستيكية وقلم وبطاقات وحافظة صغيرة

لوضع العينات فيه ريثما تنقل للمخبر.

2. أطباق بتري بالستيكية معقمة بقطرcm 9 وآغار ووسط آغار دكستروز البطاطا ) Potato

Dextrose Agar( ومضادات حيوية )Penicilline و Tetracycline و Streptomycine(.

9. ماصات بالستيكية معقمة سعة ml 3 وأنابيب بالستيكية معقمة سعة cm 5 مع سدادة مطاطية

وأنابيب بالستيكية معقمة ذات سدادة سعة ml 13.

2. حاضنات وأوتوكالف وغرفة عزل وجهاز تثفيل وخالط كهربائي.

0. دوارق وبياشر وأدوات زجاجية أخرى وماء مقطر وكحول وقطن وورق ألمنيوم ومناديل ورقية

وبارافيلم.

7. ماصة مدرجة دقيقة ومكبرة ومجهر ضوئي ومشارط وشرائح زجاجية وسواتر وصبغة أزرق القطن.

6. أقماع بيرمان ومناخل قياس فتحاتها 97 ميكرون و20 ميكرون و001 ميكرون.

2.2.2. جمع العينات:

تم جمع 21 عينة تربة مركبة من بيوت محمية مزروعة بالبندورة وغير معاملة بالمبيدات الكيميائية من

قرى الساحل السوري )عينة واحدة من كل بيت( )جدول 2(.

جدول 8. قرى الساحل السوري المأخوذة منها عينات التربة مع المحافظة التابعة لها. القرية المحافظة عدد العينات )البيوت المحمية( عين شقاق الالذقية )جبلة( 2 الحويز الالذقية )جبلة( 8 كرتو طرطوس )سهل عكار( 8 يحمور طرطوس )سهل عكار( 0 كفرسيتا طرطوس 1 البرج طرطوس 1 ضهرصفرا طرطوس 2

وذلك خالل أشهر شباط وآذار ونيسان من العام 2102. حيث تم أخذ العينات من البيوت المحمية

بطريقة متعرجة )Zig-Zag( من حول جذور النباتات وعلى عمق cm 20 باستخدام مسبر أخذ

العينات، حيث تم أخذ 20-30 تحت عينة من كل بيت محمي وتم خلطها جيداً بحيث تم الحصول على

عينة مركبة بوزن g 500،)العسس وأبو الشامات، 2003(.

وتم جمع أكثر من 01 عينات جذر بندورة مصاب بالنيماتودا حيث تم أخذ كامل المجموع الجذري للنبات

من قرى الحويز )الالذقية( والبرج والخراب )طرطوس( في الساحل السوري خالل عام 2102 لتحضير

المعلق النيماتودي.

3.2.2. تحضير أوساط آغار الماء )Water Agar( وPotato Dextrose Agar( PDA(:

تم إضافة g 15 آغار لكل ml 1000 ماء مقطر لتحضير وسط آغار الماء، بينما تم إضافة g 42

PDA لكل ml 1000 ماء مقطر لتحضير وسط PDA، ثم تم توزيعها في دوارق بعد التحريك جيداً،

واغالقها بإحكام بالقطن ثم بورق األلمنيوم وتعقيمها باالوتوكالف على حرارة ⁰C 121 لمدة نصف

ساعة، وبعد تمام التعقيم تم ضمن غرفة العزل إضافة ml 3 معلق مضاد حيوي ) Penicilline+

Streptomycine +Tetracycline( بواسطة ماصة بالستيكية معقمة لكل ml 500 وسط لمنع نمو

البكتريا، ثم تم صبها في أطباق بتري.

4.2.2. تحضير المعلق النيماتودي:

تم غسل جذر البندورة المصاب بالماء جيدا للتخلص من التربة العالقة به وبعد ذلك تم تقطيعه إلى قطع

صغيرة cm 2-1 ثم تم وضعها في الخالط مع إضافة الماء، ثم تم تشغيل الخالط على السرعة العالية

01111 دورة/الدقيقة لمدة 00 ثانية، بعد ذلك مرر المعلق الناتج من خالل ثالثة مناخل 001 ميكرون

ثم 20 ميكرون ثم 97 ميكرون، ثم تم نقل المحتويات من على المنخلين 20 ميكرون و97 ميكرون

بواسطة تيار خفيف من الماء إلى بيشر زجاجي لجمع المعلق النيماتودي )العسس وأبو الشامات،

2003( ثم وزع المعلق في أنابيب بالستيكية معقمة ومحكمة اإلغالق ووضع في جهاز التثفيل لتترسب

النيماتودا لألسفل، وبعد التخلص من الماء السطحي تم الحصول على معلق ذو كثافة كبيرة من اليرقات،

ثم تم إضافة ml 1 من معلق مضاد حيوي ) Streptomycine +Tetracycline +Penicilline(

لكل أنبوب معلق نيماتودي )ml 13(.

5.2.2. عزل الفطور:

تم استخدام تقنيتين لعزل الفطور المضادة للنيماتودا من التربة:

1. تقنية نثر )Sprinkling( التربة: بحيث تم نثر g 1 تربة على سطح أطباق بتري تحوي آغار ماء

)0.0%( ثم تم إضافة ml 1 من معلق نيماتودي تم استخالصه مسبقاً كطعم إلى األطباق ) Hertz et al, 2002( وذلك بمعدل 9 مكررات )أطباق( لكل عينة تربة، وتم تحضين األطباق على حرارة

⁰C 25 في الظالم ثم تم مراقبتها بعد أول أسبوع من التحضين ولفترة أكثر من شهرين وذلك

بفحصها تحت المجهر باستخدام التكبير المنخفض للتحري عن الفطور النامية وخاصة الصائدة،

وأعضاء اصطياد، والنيماتودا الميتة.

2. تقنية أقماع بيرمان: بحيث تم وضع g 50 تربة في منديل ورقي فوق مصفاة قمع بيرمان مملوء

بالماء )وهو قمع زجاجي موضوع على حامل من الخشب ومثبت في نهاية ساقه أنبوب مطاطي

متصل بنهايته مع أنبوب بالستيكي صغير cm 5(، ثم تم إضافة الماء حتى وصل مستواه حوالي 1 cm فوق المصفاة وذلك بمعدل 9 مكررات )أقماع( لكل عينة تربة، وتم ترك األقماع في مكان دافئ

على درجة حرارة ⁰C 24-21 وبعد 22 ساعة تم إ ازلة األنابيب الصغيرة واغالقها بسدادات معقمة

بالكحول )العسس و أبو الشامات، 2003( ثم تم أخذ ml 1 بالماصة المدرجة الدقيقة من كل أنبوب

ووضع في طبق آغار ماء بمعدل 9 مكررات )أطباق( لكل أنبوب أي 9 مكررات )أطباق( لكل عينة

تربة، وتم تحضين األطباق على حرارة ⁰C 25 في الظالم ثم تم مراقبتها بعد أول أسبوع من

التحضين ولفترة أكثر من شهرين وذلك بفحصها تحت المجهر باستخدام التكبير المنخفض للتحري

عن الفطور النامية وخاصة المتطفلة، والنيماتودا الميتة.

6.2.2. تنقية الفطور واكثارها على وسط PDA:

تم أخذ جزء من المستعم ارت الفطرية التي تم تعليمها مسبقاً من أطباق آغار الماء ووضعها في أطباق

PDA بقصد التنقية، ثم تم تحضين األطباق على درجة حرارة ⁰C 25 لمدة أسبوع حتى تنمو

المستعمرات. تم اتكرر عملية التنقية حتى تم الحصول على مستعمرات نقية، ثم تم إكثارها مجدداً على

وسط PDA. ويبين الشكل )1( مخطط عزل الفطور المضادة للنيماتودا من تربة البيوت المحمية في

الساحل السوري وتعريفها.

7.2.2. تصنيف الفطور:

تم تعريف الفطور المضادة للنيماتودا حتى مستوى الجنس باالعتماد على شكل ولون المستعمرة أو على

شكل األبواغ وحواملها البوغية، حيث تم أخذ شرائح من اآلغار الحامل لمشيجة الفطر وتم تحميلها على

شرائح زجاجية مع الصبغ بأزرق القطن والفحص مجهريا ً )Ellis, ( ،)Barnett and Hunter, 1998

1971(، وتم تحديد بعض األنواع الفطرية المضادة للنيماتودا من قبل الدكتورة مريم العبد القادر الباحثة

في معهد أمراض النبات في جامعة فرايبورغ في ألمانيا، وتم تحديد نوعين من الفطور المضادة للنيماتودا

تابعين للجنس Trichoderma من قبل المهندس رامي قسام الباحث في مخبر الممرضات الفطرية في

مركز األعداء الحيوية في الالذقية.

اخراج عينة التربة باستخدام المسبر جمع العينات عشوائيا من داخل الموقع على عمق 20cm ً اختيار الموقع

التخزين على حرارة ⁰C 4 لفترة وضع العينة في كيس بالستيكي معقم وختمه قصيرة تنعيم عينة التربة الكاملة بواسطة الهاون

تم اخذ تحت عينة من محيط جذر منطقة العينة تم أخذ تحت عينة من عينة متجانسة التركيب

قمع بيرمان نثر التربة على طبق آغار ماء )2 مكررات( %1.5 )9 مكررات(

2 مكررات ع د النيماتودا في ml 2 معلق عينات بسيطة استخالص النيماتودا إضافة النيماتودا كطعم نيماتودي

تقدير كثافة أعداد طبق آغار ماء 1.5% النيماتودا فح ص األطباق بالمكبرة أسبوعي اً على التكبير x 100 لمدة 10 أسابيع

فحص يومي بالمكبرة لمدة 10 أيام ثم فحص أسبوعي

لمدة شهرين على التكبير x 100 – 40

تعريف المفترسات والطفيليات الداخلية على التكبير x 400

تعريف الطفيليات الداخلية على التكبير x 400

إزالة نيماتودا معداة/ كونيدية مفردة

إعادة عند نيماتودا التنمية على طبق آغار ماء نقي الضرورة

نقل مزرعة الفطر النقية ووضعها في وسط آغار دكستروز البطاطا PDA

شكل 1: مخطط عزل الفطور المضادة للنيماتودا.

وتم تحليل مجتمع الفطور المضادة للنيماتودا باستخدام مقاييس التكرار المطلق Frequency of)

(occurrence, FO ومتوسط الكثافة العددية (Population density, PD) وقيم الظهور

(Prominence value, PV) لكل جنس فطري )Norton, 1978(:

التكرار )Frequency of occurrence(= عدد العينات الموجبة لجنس معين ÷ عدد العينات الكلية X

.111

متوسط الكثافة العددية )Mean population density( = متوسط عدد المستعمرات الفطرية في

العينات الموجبة لكل جنس.

قيمة الظهور )Prominence value(= الكثافة العددية لجنس ما X الجذر التربيعي لنسبة تكراره في

العينات.

3.2. النتائج والمناقشة Results and Discussion:

أظهرت نتائج فحص أطباق آغار الماء تحت المجهر مشاهدة أعضاء اصطياد لوحدها أو أعضاء

اصطياد مع النيماتودا المصطادة أو نيماتودا متطفل عليها )شكل 2( وكذلك تم مشاهدة بيض نيماتودا

متطفل عليها )شكل 9( ومشاهدة أجسام حجرية وتلون بمشيجة الفطر )ملحق رقم 0(، تم تعليم مكانها

على األطباق ثم تم زراعتها ضمن غرفة العزل في أطباق آغار ماء جديدة مع اضافة 0 مل معلق

نيماتودي ثم تم وضع األطباق بالحاضنة لمدة اسبوع، وتم تكرار هذه العملية 2-0 مرات، ثم تم إكثار

الفطر على أطباق PDA.

تم ع زل وتعريف 02 جنس فطري مضاد للنيماتودا من ترب بيوت محمية مزروعة بالبندورة وغير معاملة

بالمبيدات الكيميائية في الساحل السوري بشكل إجمالي ولم تخل عينة تربة من جنس واحد على األقل

)جدول 0( من هذه األجناس المضادة للنيماتودا والتي تسجل ألول مرة في سورية ماعدا الجنس

Trichoderma حيث سجل كفطر مضاد للنيماتودا ألول مرة من قبل قسام )2102(، والجنسان

Arthrobotrys و Verticillium حيث سجال ألول مرة كفطور مضادة للنيماتودا من قبل بغدادي

)2112(، وهذه األجناس هي: الجنس Paecilomyces الذي كان األكثر تك ار اًر )FO= 90%( وعدداً

)2.7 مستعمرة( وظهو اًر )PV=2.4( من بين جميع األجناس المعزولة )شكل 2(، يليه األجناس

Trichoderma و Arthrobotrys و Gliocladium و Aspergillus بنسب تكرار )FO(: %70

و 71% و 01% و 20% على التوالي، ثم األجناس Fusarium و Verticillium و

Harposporium بنسبة تكرار واحدة FO= 40%، ثم الجنس FO= 30%( Penicillium(، يليه

الجنس FO= 20%( Alternaria(، ثم الجنسين Stylophage و Nematoctonus اللذان كانا

األقل تك ار اًر بنسبة 01% لكل منهما، واالقل ظهو اًر بنسبة 1.2% و1.9% على التوالي )ملحق رقم 2(.

وتنتشر أنواع الجنس Paecilomyces بشكل خاص في المناطق الدافئة والمعتدلة من العالم

)Samson, 1974( وقد أمكن عزلها ألول مرة من كتل بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita

عام 0967، حيث وجد النوع P. lilacinus متطفال على بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita

في البيرو )Jatala et al., 1979(، وعزل النوع P. variotii في باكستان من كتل بيض وإناث نيماتودا تعقد الجذور Erma and Shahzad, 1998( M. javanica(، وفي األردن تم الحصول على

ثالث عزالت محلية تتبع النوع P. variotii من كتل بيض واناث نيماتودا تعقد الجذور .M incognita و M. javanica ، وخمس عزالت من الفطر Aspergillus terreus، وعزلتين من

الفطر Peniciillium glumarum، وعزلة من الفطر Fusarium oxysporum )حجاز، 2119(،

وقام القاسم )2119( بتعريف أربع عزالت من النوع P. variotii من مناطق جغرافية مختلفة وقد

أظهرت تنائج بحثه ان ثماني عينات من أصل 71 عينة جذور نباتية مصابة بنيماتودا تعقد الجذور .M javanica كان يرافقها الفطر P. variotii بنسبة تكرار بلغت 01% وهذه العينات التي تم عزل

الفطر منها كانت من م ازرع قليلة االستخدام للمبيدات حيث أن خمساً من العينات التي احتوت على

الفطر أخذت من مدارس حقلية لمزارعين يتبعون أسلوب المكافحة المتكاملة بينما لم يعزل الفطر من

بساتين الدراق في المناطق الجنوبية والشمالية الشرقية من األردن لعدم انتشار نيماتودا تعقد الجذور فيها.

وفي سورية قام بغدادي )2112( بتحديد ستة أنواع فطرية مضادة للنيماتودا تتبع خمسة أجناس

Arthrobotrys و Verticillium و Monacrosporium و Dactylaria و Dactyllela، وكان

النوعان A. oligospora و .Arthrobotrys sp األكثر انتشا اًر من بين جميع الفطريات المعزولة

بمعدل 62 مكر ا ًر قرب أشجار التوت والسرو بينما انتشر النوع .Verticillium sp بمعدل 2 مكررات

قرب أشجار التوت. وقام قسام )2102( بتسجيل سبع عزالت مختلفة من الفطر Trichoderma تابعة

لثالث أنواع وهي: أربع عزالت من النوع T. viride، وعزلتان من النوع T. longibrachiatum،

وعزلة من النوع T. harzianum حيث تم عزلها من عينات تربة من الساحل السوري ومن إناث وكتل

بيض نيماتودا M. incognita، وأظهرت نتائج بحثه أن عدد العينات االيجابية التي احتوت على الفطر

Trichoderma بلغت 02 عينة من أصل 01 عينة مدروسة أي بتكرار مطلق بلغ 27% من العينات

الكلية، ومن جهة اخرى بينت النتائج ان النسبة المئوية للعينات االيجابية التي تم الحصول عليها من

التربة كانت مرتفعة )02 من أصل 20( وبلغت 27% مقارنة بالعينات االيجابية التي تم الحصول عليها

من النيماتودا الموجودة داخل العينات الجذرية )2 من أصل 20( حيث لم تتجاوز 7%. وسجل

Saxena )2008( 00 نوع من الجنس Arhtrobotrys في اسكوتلندا منها: .A. oligospora Fres

Var. oligospora و A. conoides Drechsler و A.، superba Corda وثالثة أنواع من الجنس

H. anguillulae Lohde emend Zopf :Harposporium الذي كان األكثر تك ار اًر )%011(

ووجد في جميع المواطن و H. helicoides Drechsler و H. lilliputanum Dixon، وثالثة أنواع

من الجنس S. grandis Duddington :Stylophage و S. hadra Drechsler و S. leiohypa

Drechsler، ونوعين من الجنس N. leiposporus Drechsler :Nematoctonus و .N leptosporus Drechsler اللذان كانت نسبة تكرارهما 20%، وفي السودان سجل El-Amin

)0999( النوع Harposporium anguillulae وعدة أنواع من الفطور المضادة للنيماتودا التابعة

لالجناس التالية: .Arhtrobotrys spp، و .Dactylaria spp، و .Monacrosporium spp، و

.Verticillium spp. وقام جمعة )0977( بعزل وتعريف خمسة اجناس من الفطور المفترسة للنيماتودا

من التربة ومنها الجنس Arhtrobotrys و الجنس Nematoctonus. بينما عزل Abdul-Eid

وزمالؤه )0996( 07 نوعاً من الفطور المضادة للنيماتودا من الترب الز ارعية بمنطقة المنصورة منها

فطور مفترسة تتبع األجناس التالية: Aspergillus، و Trichoderma، و Arhtrobotrys، و

Dactylaria، و Dactylella، و Stylophage، ومنها فطور متطفلة تتبع االجناس:

Harposporium، و Catenaria، و Cephalosporium، و Haptoglossa، كما تم في هذه

الدراسة عزل الفطر Verticillium chlamydosporium من كتل بيض نيماتودا تعقد الجذور .M incognita. وفي السعودية عزل Al-Hazmi و Abdul-Razik )0990( الفطر Aspergillus

31 ochraceus من يرقات الطور الثاني )J2( لنيماتودا تعقد الجذور M. javanica. أما Viaene و

Abawi )0997( فقد قاما بعزل فطور مترافقة مع كتل بيض ويرقات M. hapla من عينات تربة

عضوية مأخوذة من خمسة حقول مزروعة بالخس والبصل في نيويورك، تضمنت هذه الفطور أنواعاً من

Penicillium و Alternaria و Fusarium و Chaetomium، باالضافة إلى األنواع التالية:

A. oligospora و A. dactyloides و V. psalliotae و H. anguillulae.

9 2 0

7 0 2

9 6 7 شكل 2: أعضاء اصطياد ونيماتودا مصطادة وأخرى متطفل عليها. 1. بقايا الكيوتيكل لنيماتودا مصابة بالفطر. 2. عقدة الصقة مع حامل. 2. عقدة الصقة بدون حامل. 8. نيماتودا متطفل عليها والفطر خارج منها. 0. هيفا الصقة. 3. عقدة الصقة وفرع الصق. 1. نيماتودا مصطادة ومشيجة الفطر خارجة منها ومكونة عقد الصقة. 8. نيماتودا مصطادة بشبكة الصقة. 2. نيماتودا مصطادة بعقدة الصقة.

C B A

F E D شكل 2: بيض نيماتودا متطفل عليه. A. بيضة لم ينتهي الفطر من التطفل عليها حيث مايزال قليل من محتوياتها بداخلها ولم تخرج مشيجة الفطر منها بعد. F .E .D .C .B. بيض متطفل عليه ومشيجة الفطر خارجة من البيضة.

جدول 0. تكرار االجناس الفطرية المضادة للنيماتودا في عينات التربة المختلفة.

األجناس الفطرية المضادة للنيماتودا المعزولة وتكرارها

رقم العينة مكان جمع العينة

Fusarium

Alternaria

Stylophage

Aspergillus

Penicillium

Verticillium

Gliocladium

Arthrobotrys

Trichoderma

Paecilomyces

Nematoctonus

Harposporium

0 كفرسيتا 1 غ م غ م 1 غ م 1 غ م 4 غ م غ م 2 1 2 عين شقاق غ م 2 غ م غ م غ م غ م غ م غ م غ م 1 غ م غ م 9 البرج غ م غ م غ م غ م 1 غ م غ م 1 1 2 غ م غ م 2 عين شقاق غ م 1 غ م 1 غ م غ م غ م 3 غ م غ م 1 1 0 كرتو غ م 4 غ م 2 1 1 غ م 4 غ م غ م 1 غ م 7 يحمور غ م 1 1 غ م 2 غ م غ م 1 غ م غ م غ م غ م 6 يحمور غ م 3 2 غ م 1 غ م غ م غ م غ م غ م غ م غ م 7 يحمور غ م غ م 1 غ م 1 غ م 1 1 غ م غ م 2 1 9 يحمور 2 1 2 غ م 4 غ م غ م 1 غ م غ م 2 غ م 01 يحمور 1 غ م 1 1 1 1 غ م 1 1 غ م 2 2 00 الحويز غ م 2 1 2 غ م غ م 1 6 غ م غ م 2 غ م 02 الحويز غ م غ م 2 غ م غ م غ م غ م 4 1 غ م 3 2 09 الحويز 1 غ م 2 غ م غ م 1 غ م 2 غ م غ م 2 غ م 02 الحويز غ م 1 1 1 غ م غ م غ م 1 غ م غ م غ م 1 00 كرتو غ م غ م غ م غ م 1 غ م غ م 3 غ م غ م غ م غ م 07 كرتو غ م غ م غ م غ م 1 2 غ م 2 غ م غ م غ م غ م 06 كرتو غ م 4 غ م 1 1 غ م غ م 3 2 غ م 1 غ م 07 ضهرصفرا غ م 2 غ م 1 غ م غ م غ م 6 غ م غ م 1 غ م 09 ضهرصفرا غ م 1 غ م غ م غ م 1 غ م 2 1 غ م 3 1 21 ضهرصفرا غ م 2 غ م غ م غ م 1 غ م 2 1 غ م 1 1 حيث غ م تعني عدم وجود الفطر في عينة التربة.

التكرار Frequency of occurrence الكثافة العددية Mean population density قيم الظهور Prominence value

Verticillium

Trichoderma

Stylophage

Penicillium

Paecilomyces

Nematoctonus

Harposporium

Gliocladium

Fusarium

Aspergillus للنيماتودا الفطرية المضادة األجناس الفطرية المضادة للنيماتودا

Arthrobotrys

Alternaria

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

شكل 2: التكرار )FO%( ومتوسط الكثافة العددية )PD( وقيم الظهور )PV( ألجناس الفطور المضادة للنيماتودا المعزولة من تربة البيوت المحمية المزروعة بالبندورة في الساحل السوري.

تصنيف األجناس الفطرية المضادة للنيماتودا المعزولة:

تصنيف الجنس Alternaria :

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Dothideomycetes.

رتبة: Pleosporales.

عائلة: Pleosporaceae.

جنس: .Alternaria Nees.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=31788&F ields=All

ظهرت األبواغ الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا داكنة مع حواجز طولية وعرضية معاً بيضاوية الشكل

محمولة على زائدة قمية متفرعة أو بسيطة )شكل 0( وهذا يتوافق مع ) ,Barnett and Hunter

.)1998

شكل 0: األبواغ الكونيدية للجنس Alternaria، والحواجز العرضية والطولية للبوغة واضحة )الصورة على اليمين(.

تصنيف الجنس Arthrobotrys:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Ascomycetes.

عائلة: Orbiliaceae.

جنس: .Arthrobotrys Corda.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=31960&F ields=All

ظهرت الحوامل الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا شفافة وبسيطة ورفيعة ومتعامدة مع هيفات الفطر

وتحمل في نهايتها بوغة كونيدية واحدة كبيرة أو مجموعة من األبواغ الكونيدية على شكل عنقود )شكل

7(، واألبواغ شفافة، مكونة من خليتين غير متساويتين، بيضوية الشكل إلى مستطيلة )شكل 6(

ومحمولة على نتوءات صغيرة تشبه الوتد )شكل 9( وهذا يتوافق مع )Barnett and Hunter, 1998(

و أحمد )1998(، وتم تحديد ثالثة أنواع من هذا الجنس تسجل ألول مرة في سورية كفطور مضادة

للنيماتودا ماعدا النوع A. oligospora المسجل من قبل بغدادي )2112(، وهي: A. dactyloides

RD( RD: يرمز الحرف األول R إلى أول حرف من اسم المهندسة ريما ويرمز الحرف الثاني D إلى

أول حرف من اسم مكان جمع عينة التربة: ضهرصفرا( )شكل 6( و A. oligospora RY )شكل 7(

و A. superba RY )شكل 9(.

شكل 3: الحوامل البوغية وأبواغ الجنس Arthrobotrys.

شكل 1: أبواغ الفطر Arthrobotrys dactyloides.

شكل 8: أبواغ الفطر Arthrobotrys oligospora وتوجد بقايا نيماتودا وتوجد بيضة )الصورة على اليمين(.

شكل 2: أبواغ الفطر Arthrobotrys superba.

تصنيف الجنس Aspergillus:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Eurotiomycetes.

رتبة: Eurotiales.

عائلة: Trichocomaceae.

جنس: .Aspergillus Link.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=32325&F ields=All

كان الحامل الكونيدي لهذا الجنس في دراستنا مستقيما ً وبسيطا ً، ينتهي بانتفاخ كروي الشكل )رأس

كونيدي( يحمل فياليدات على كامل سطحه )شكل 01( واألبواغ وحيدة الخلية كروية على شكل سالسل،

وهذا يتوافق مع )Barnett and Hunter, 1998(.

شكل 11: الحامل والرأس الكونيدي للجنس Aspergillus.

تصنيف الجنس Fusarium :

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Sordariomycetes.

رتبة: Hypocreales.

عائلة: Nectriaceae.

جنس: .Fusarium Link.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=41506&F ields=All

كانت الحوامل الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا رفيعة وبسيطة ومتفرعة بشكل غير منتظم )عشوائي(،

واألبواغ شفافة، قاربية الشكل محمولة في مجموعات ومعلقة على رؤوس صغيرة )شكل 00( وهذا يتوافق

مع )Barnett and Hunter, 1998(.

شكل 11: األبواغ القاربية الشكل الجنس Fusarium.

تصنيف الجنس Gliocladium:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Sordariomycetes.

رتبة: Hypocreales.

عائلة: Hypocreaceae.

جنس: .Gliocladium Corda.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=39109&F ields=All

كانت الحوامل الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا شفافة، ثنائية التفرع في جزئها العلوي، واألبواغ الكونيدية

ملونة المعة وحيدة الخلية متجمعة على بعضها ضمن كتلة صغيرة لزجة )شكل 02( وهذا يتوافق مع

.)Barnett and Hunter, 1998(

شكل 12: األبواغ الكونيدية والرؤوس الكونيدية )تبدو ككتلة داكنة( للجنس Gliocladium.

تصنيف Harposporium anguillulae :

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Sordariomycetes.

رتبة: Hypocreales.

عائلة: Clavicipiaceae.

جنس: Harposporium.

النوع: Harposporium anguillulae Lohde emend. Zopf 1888.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/Biolomics.aspx?Table=Mycobank

كانت أبواغ هذا النوع الفطري في دراستنا )Harposporium anguillulae RK( هاللية الشكل

ومنحنية وذات طرف واحد حاد )مستدق(، والحوامل الكونيدية قصيرة تخرج من داخل جسم النيماتودا

المصابة )شكل 09(، وتحمل فياليدات كروية الشكل، تتجمع على قمتها عناقيد األبواغ، وهذا يتوافق مع

صفات النوع Harposporium anguillulae المرجعية )أحمد، 0997(.

شكل 12: الفطر Harposporium anguillulae متطفل على النيماتودا واألبواغ واضحة )الصورة على اليمين( والحامل الكونيدي خارج من جسم النيماتودا )الصورة على اليسار(.

تصنيف الجنس Nematoctonus :

مملكة: Fungi.

شعبة: Agaricomycotina.

صف: Agaricomycetes.

رتبة: Agaricales.

عائلة: Pleurotaceae.

جنس: Nematoctonus Drechsler.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=57008&F ields=All

وهذا الجنس من الفطور اجبارية التطفل على النيماتودا، يكون بعد تغذيته على محتويات جسم النيماتودا

هيفات محدودة النمو تظهر من جسم النيماتودا المصابة وتكون أبواغ كونيدية محمولة على نتوءات

قصيرة وتتميز هذه األبواغ بشكلها الذي يشبه السيجار وهي ذات طرف مستدق )شكل 02( وهذا يتوافق

مع الدراسات المرجعية )أحمد، 0997(.

شكل 18: نيماتودا مصابة خارجة منها هيفات وأبواغ الجنس Nematoctonus.

تصنيف الجنس Paecilomyces:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Eurotiomycetes.

رتبة: Eurotiales.

عائلة: Trichocomaceae.

جنس: .Paecilomyces Bainer.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=38965&Fie lds=All

كانت الحوامل الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا كثيرة التشعب واألبواغ وحيدة الخلية كروية الى بيضاوية

الشكل ومتوضعة في سالسل طويلة )شكل 00( وهذا يتوافق مع )Barnett and Hunter, 1998(،

وتم تحديد نوعين من هذا الجنس يسجالن ألول مرة في سورية كفطور مضادة للنيماتودا وهما: .P lilacinus RA، )شكل 07( و P. variotii RD )شكل 06(. وهما: P. lilacinus RA، )شكل

07( و P. variotii RD )شكل 06(.

شكل 10: الحوامل الكونيدية وسالسل األبواغ الكونيدية للجنس Paecilomyces.

شكل 13: حامل بوغي يحمل في قمته سالسل طويلة من أبواغ الفطر Paecilomyces lilacinus.

شكل 11: سلسلة من االبواغ بيضاوية الشكل للفطر Paecilomyces variotii.

تصنيف الجنس Penicillium:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Eurotiomycetes.

رتبة: Eurotiales.

عائلة: Trichocomaceae.

جنس: .Penicillium Link.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=39268&F ields=All

تم تحديد هذا الجنس في دراستنا من نمو مستعمرته على وسط الـ PDA: مستعمرة منتظمة تشكل

حلقات متتالية من النمو الفطري ذو اللون األخضر الغامق واللون البني )شكل 07(، و يشكل هذا

الجنس حوامل كونيدية مفردة، متفرعة قرب القمة ومنتهية بمجموعة من الفياليدات التي تحمل سالسل

من االبواغ الكروية وحيدة الخلية )Barnett and Hunter, 1998(.

شكل 18: مستعمرة الجنس الفطري Penicillium.

تصنيف الجنس Stylophage :

مملكة: Fungi.

شعبة: Zygomycota.

صف: Zygomycetes.

رتبة: Zoopagales.

عائلة: Zoopagaceae.

جنس: Stylophage.

)http://sv.wikipedia.org/wiki/Stylopage(

كانت أبواغ هذا الجنس الفطري في دراستنا ثنائية الخلية وينتهي كل حامل كونيدي ببوغة كونيدية واحدة

كبيرة )شكل 12( وهذا يتوافق مع الدراسات المرجعية لـ أحمد )1998(.

شكل 12: أبواغ الجنس الفطري Stylophage متدرجة والمشيجة خارجة من البوغ )الصورة على اليمين(، الحامل البوغي ينتهي ببوغة واحدة ثنائية الخلية )الصورة على اليسار(.

تصنيف الجنس Trichoderma:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Sordariomycetes.

رتبة: Hypocreales.

عائلة: Hypocreaceae.

جنس: .Trichoderma Pers.

(www.mycobank.org)

51 http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=39566&F ields=All

ظهرت الحوامل الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا شفافة وذات تفرع كثيف ينتهي بفياليدات مفردة أو في

مجموعات، واألبواغ وحيدة الخلية وشفافة وبيضوية الشكل محمولة في عناقيد طرفية صغيرة )شكل 21(

وهذا يتوافق مع )Barnett and Hunter, 1998(، وتم تحيد نوعين من هذا الجنس هما: .T harzianum RK )شكل 21( و T.viride RA )شكل Rifai, 1964( ،)Persoon, 1794( )20(.

شكل 21: حوامل وفياليدات وأبواغ الفطر T. harzianum.

شكل 20: حوامل وفياليدات وأبواغ الفطر T. viride.

تصنيف الجنس Verticillium:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Sordariomycetes.

عائلة: Plectosphaerellaceae.

جنس: .Verticillium Nees.

(www.mycobank.org) http://www.mycobank.org/BioloMICS.aspx?Table=Mycobank&Rec=39170&F ields=All

ظهرت الحوامل الكونيدية لهذا الجنس في دراستنا رفيعة )دقيقة( ومتفرعة، بعض تفرعاتها كانت عمودية،

واالبواغ شفافة وحيدة الخلية و بيضاوية الشكل محمولة طرفياً بشكل مفرد أو ضمن ازئدة قمية صغيرة

)شكل 22( وهذا يتوافق مع )Barnett and Hunter, 1998(.

شكل 22: أبواغ الجنس Verticillium في قمة الحوامل الكونيدية.

3. الفصل الثالث

اختبار فعالية بعض الفطور المعزولة مخبرياً في مكافحة يرقات نيماتودا تعقد الجذور .M incognita

1.2. المقدمة Introduction:

تركزت معظم الدراسات في مجال المكافحة الحيوية للنيماتودا على استخدام الفطور المضادة للنيماتودا

سواء كانت من الفطور المفترسة أو الصائدة أو المتطفلة على النيماتودا، بأجناسها وأنواعها المختلفة،

وقد يعود هذا التركيز على الفطور إلى عدة اسباب لعل من أهمها: أن كثي اًر من هذه الفطور قد ثبتت

كفاءتها أو ذات كفاءة واعدة لمكافحة النيماتودا ذات االهمية االقتصادية مثل نيماتودا تعقد الجذور

.Meloidogyne spp وغيرها، وكذلك لسهولة التعامل مع هذه الفطور وتطبيقها في الحقل، وانتاج

بعضها –خاصة المهم منها- على شكل منتجات حيوية تجارية قابلة للتخزين، ومتوفرة في معظم

االسواق )الحازمي وآخرون، 2101(. وأجريت الكثير من الدراسات العربية لمقارنة كفاءة أنواع فطرية

مختلفة في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور، ففي دراسة في العراق تم مقارنة كفاءة األنواع الفطرية .T harzianum و T. hamatum و T. koningii و T. viride و T. virens في مكافحة نيماتودا

تعقد الجذور .Meloidogyne sp على الباذنجان والخيار )اسطيفان وآخرون، 2112(، وفي مصر

درس Amin )2111( كفاءة األنواع الفطرية A. oligospora و P. lilacinus و Hirsutella rhossilliensis في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita على البندورة، ودرس أيضاً كفاءة

األنواع الفطرية A. oligospora و T. viride و T. harzianum في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور

M. incognita على دوار الشمس )Amin and Mostafa, 2000(، أما Radwan و Ahmed

فقد أجريا عام 0992 دراسة لمقارنة كفاءة األنواع الفطرية Aspergillus niger و Pythium niger

و Pythium debarianum و Fusarium oxysporum في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور .M incognita على البندورة في مصر.

ويعتبر الفطر Arthrobotrys الذي يتبع لصف الفطور الناقصة Deuteromycetes من أكثر الفطور

المتطفلة على النيماتودا شيوعاً في التربة والمواد العضوية المتحللة و يك ون شباك الصقة على شكل

حلقات تتصل بواسطة فروع جانبية مع ميسليوم الفطر وقد تكون شباك لزجة ثنائية البعد أو شباك الصقة

ثالثية البعد، وتنشأ هذه الشباك نتيجة تكوين أفرع جانبية قصيرة من الهيفات سرعان ما تلتف وتنحني

حتى تالمس قمة مكان التفرع عند قاعدة الفرع ثم تلتحم مع الهيفات األصلية أو باألفرع المجاورة مكونة

الشبكة وتعتبر هذه الطريقة من االصطياد هي األكثر شيوعاً ويساعد السطح اللزج لهذه الشبكة في

اقتناص النيماتودا ، لكن النيماتودا ال تلتصق بهذه الشباك عند مالمستها مباشرة وانما تحتاج عدة

تالمسات أو التالمس لفترة وجيزة )قصيرة( حتى يتنبه الفطر لوجود النيماتودا وتبدأ الشباك القبض على

النيماتودا ، وعندما تشعر النيماتودا بما يعيق حركتها تبدأ بالتحرك العشوائي وبقوة محاولة للتحرر، مما

يؤدي لزيادة االلتصاق بالشباك و يزيد من إحكام الفطر قبضته على النيماتودا ) ,Alabed Alkader

2008(، ولقد أثبت Shepherd )0900( أن الفطر المتطفل يفرز مادة سامة )توكسين( داخل جسم

النيماتودا تعمل على التعجيل بموتها حيث تفقد حيويتها في أقل من ساعة بعد وقوعها باألسر، وذكرت

بعض األبحاث أن الفطر Arthrobotrys oligospora يحتوي على مادة مثبطة لنشاط النيماتودا

)Olthof and Estey, 1963( بينما ذكرت دراسات أخرى أن الفطر ينتج أمونيا تعمل على سرعة

موت النيماتودا التي تخترقها هيفاته )Balan and Gerber, 1972(.

2.3. المواد والطرائق Materials and Methodes:

تم تنفيذ البحث في مخبر الممرضات الفطرية في مركز تربية األعداء الحيوية ومخبر صحة البذور

بالالذقية، وفي بيوت محمية في الساحل السوري في الفترة الممتدة من شهر كانون األول من العام

2102 وحتى شهر شباط من العام 2109.

1.2.3. المواد واالجهزة المستخدمة:

0. جذور بندورة مصابة بالنيماتودا تم جمعها في شهري تشرين الثاني وكانون األول من العام 2102

لتحضير المعلق النيماتودي من بيوت محمية في بانياس البيضا وزمرين )طرطوس( في الساحل

السوري.

2. أطباق بتري بالستيكية معقمة بقطر cm 9 وآغار ووسط آغار دكستروز البطاطا ) Potato

Dextrose Agar( ومضادات حيوية.

9. ماصات بالستيكية معقمة سعة ml 3 وأنابيب بالستيكية معقمة سعة cm 5 مع سدادة مطاطية

وأنابيب بالستيكية معقمة ذات سدادة سعة ml 13.

2. دوارق وبياشر وأدوات زجاجية أخرى وماء مقطر وكحول وقطن وورق ألمنيوم ومناديل ورقية

وبارافيلم.

0. أقماع بيرمان ومناخل قياس فتحاتها 21 ميكرون و001 ميكرون.

7. حاضنات وأوتوكالف وغرفة عزل ومجهر ضوئي وشريحة عد النيماتودا.

6. فطور مضادة للنيماتودا )معزولة من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري- الفصل الثالث(

منماة في أطباق بتري تحوي على وسط PDA )شكل 29(، وهي:

.Arthrobotrys oligospora RY .0

.Arthrobotrys superba RY .2

.Aspergillus sp. RY .9

.Gliocladium sp. RY .2

.Paecilomyces lilacinus RA .0

.P. variotii RD .7

.Trichoderma harzianum RK .6

.T. viride RA .8

C B A

F E D

H G شكل 22: مستعمرات الفطور المضادة للنيماتودا المعزولة من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري: A. Arthrobotrys oligospora RY. B. A. superba RY. C. Aspergillus sp. RY. D. Gliocladium sp. RY. E. Paecilomyces lilacinus RA. F. P. variotii RD. G. Trichoderma harzianum RK. H. T. viride RA.

2.2.5. تحضير معلق يرقات نيماتودا تعقد الجذور:

تم غسل جذور البندورة المصابة بالماء جيدا للتخلص من التربة العالقة بها وبعد ذلك وتحت المكبرة تم

إزالة عدة إناث من الجذور وحدد نوع النيماتودا M. incognita بعمل مقطع عرضي في النهاية

الخلفية لجسم االنثى )شكل 22( باتباع النمط العجاني Hrtman and ( Patterns Perennial

Sasser, 1985(. ثم تم تقطيع الجذور لقطع صغيرة cm 1 ووضعها في بيشر يحوي ml 200 من

محلول هيبوكلوريت الصوديوم Naocl 0.5% وبعد رجه بقوة لمدة 2- 4 دقائق، مرر المعلق بسرعة

خالل منخل 001 ميكرون، ثم 21 ميكرون لجمع البيض المحرر، ثم تم وضع المنخل 21 ميكرون

بسرعة تحت تيار ماء بارد لعدة دقائق لغسل Naocl المتبقي، ثم تم غسل الجذور المتبقية بالماء إلزالة

البيض ال ازئد ثم تم جمعها مجددا ً )Hussey and Barker, 1973( ثم تم تحضين البيض لمدة 01 أيام

على درجة حرارة ⁰C 25 للحصول على يرقات نيماتودا تعقد الجذور حيث جمعت وقدرت كثافتها في 1 ml معلق.

شكل 28: مقطع عرضي في النهاية الخلفية ألنثى نيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

3.2.5. اختبار فعالية الفطور على يرقات نيماتودا تعقد الجذور M. incognita مخبريا ً:

تم زراعة الفطور في أطباق بتري تحوي على وسط آغار الماء بمعدل 2 مكررات )أطباق( لكل فطر ثم

وضعت بالحاضنة على حرارة ⁰C 25 لتنمو، وبعد أسبوع تم إضافة ml 0.5 معلق نيماتودي يحوي 01

يرقة حية في مركز الطبق البتري، ثم تم إعادة تحضين األطباق و بعد يومين تم فحصها تحت المجهر

9 10X 4X على التكبير ) ثم ( حيث تم ع د اليرقات الميتة والتي تمت إصابتها، وبعد أيام تم فحصها

مرة ثانية لع د اليرقات الميتة والمصابة ثم تم قلب محتويات الطبق في أقماع بيرمان الستخالص اليرقات

الحية فقط وع دها ومقارنتها بنسبة الموت مع الشاهد.

تمو اجراءالتحليل االحصائي باستخدام البرنامج االحصائي (SPSS (V. 19 ومقارنة البيانات باستخدام

اختبار دونكان Dunkan وحساب قيمة أقل فرق معنوي LSD وذلك عند مستوى ثقة P≤ ( %90

.)0.05

3.5. النتائج والمناقشة Results and Discussion:

أظهرت النتائج أن الفطران Arthrobotrys oligospora و A. superba هما االكثر كفاءة في

إصابة يرقات الطور الثاني من نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita بعد يومين من

إضافة المعلق النيماتودي )99% و29% على التوالي(، تالهما الفطران Paecilomyces lilacinus

و P. variotii )09% و00% على التوالي( وقيمة أقل فرق معنوي )LSD( هي 9، بينما لم تتجاوز

كفاءة باقي المعامالت الـ 01% )جدول 7(، وهذا يتوافق مع Alabed Alkader )2117( فقد كانت

النسبة المئوية ليرقات نيماتودا تعقد الجذور M. incognita المصطادة من قبل الفطر .A oligospora 92.01% بعد يومين و 00.20% بعد أربعة ايام من اضافة اليرقات. وكذلك بعد تسعة

أيام من إضافة المعلق النيماتودي كانت الكفاءة االكبر في إصابة اليرقات للفطران A. oligospora و

A. superba دون وجود فروق بينهما )72% و70% على التوالي(، وقيمة أقل فرق معنوي )LSD(

هي 02، تالهما الفطور P. lilacinus و P. variotii )76%( و T. viride )77%( مقارنة مع

الشاهد ودون وجود فروق معنوية فيما بينهما، بينما لم تتجاوز باقي المعامالت الـ 00%. اذا ً تفوق

الفطران A. oligospora و A. superba في اصابة يرقات J2( M. incognita( حيث لم يتم

استخالص أية نيماتودا حية من هاتين المعاملتين في نهاية التجربة المخبرية )ملحق رقم 9(، وتصنع

أنواع الفطر Arthrobotrys هيفات مبعثرة النمو على سطح وسط آغار الماء بشكل خطوط طولية

تقطع على النيماتودا الطريق أئناء تجولها على سطح الوسط بحثاً عن الغذاء وتتكون هلى هذه الهيفات

أعضاء اصطياد الصقة تتميز بحركتها هي والهيفات باتجاه االفرازات التي تنتجها النيماتودا وتلعب هذه

الحركة البطيئة دو ا ًر في اصطياد النيماتودا ومنعها من الهرب، وبعد ساعات قليلة من اصطيادها تغزو

هيفات الفطر االحشاء الداخلية لجسم النيماتودا وتمزقها بينما يظل الكيوتيكل دون تحلل ظاهري )أحمد،

0997( )شكل 20(. بينما انواع الفطر Trichoderma تفرز أنزيمات الـ Chitinase و Proteinase

و Glucanase التي تقوم بتحليل كيوتيكل )جدار( جسم يرقة النيماتودا وتسهل بذلك دخول هيفات

الفطر الى داخل جسم اليرقة فيتغذى على محتوياتها ويتكاثر داخلها مما يسبب موتها ) Sharma and

Pandey, 2009( وقد أظهرت نتائج قسام )2102( تطفل جميع العزالت المحلية للفطر

Trichoderma ومنها أربعة عزالت محلية من النوع T. viride، على يرقات )J2( نيماتودا تعقد

الجذور M. incognita الفاقسة عن البيض الموجود في الكتلة المصابة بالفطر.

B A شكل 20: هيفات الفطر A. superba )الصورة A( والفطر A. oligospora )الصورة B( تغزو يرقات نيماتودا تعقد الجذورM. incognita.

جدول 7. متوسط النسبة المئوية لليرقات المصابة بعد يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق يرقات نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita للمعامالت الفطرية والنسبة المئوية لليرقات المستخلصة )المتوسط ± الخطأ المعياري(. اليرقات المصابة بعد اليرقات المصابة بعد النسبة المئوية لليرقات المعامالت يومين تسعة أيام المستخلصة 91.00±1.91a 0.00±0.00e 0.00±0.00d Control 0.00±0.00e 84.00±2.83a 33.00±2.52a A. oligospora 0.00±0.00e 81.00±3.00a 29.00±3.00a A. superba 52.00±2.83b 16.00±1.63d 0.00±0.00d Aspergillus sp. 39.00±3.79c 38.00±3.46c 3.00±1.91d Gliocladium sp. 6.00±3.46de 67.00±3.00b 19.00±1.91b P. lilacinus 9.00±2.52de 67.00±3.00b 15.00±3.42bc P. variotii 16.00±2.83d 51.00±3.42c 4.00±1.63d T. harzianum 7.00±2.52de 66.00±6.22b 9.00±1.91cd T. viride 13 14 9 LSD المتوسطات المتبوعة بأحرف متشابهة عمودياً غير مختلفة احصائياً عند مستوى معنوية P=0.01

4. الفصل الرابع اختبار فعالية بعض الفطور المعزولة مخبرياً في مكافحة بيض نيماتودا تعقد الجذور .M incognita

1.2. المقدمة Introduction:

تعتبر الفطور عامالً هاماً في المكافحة الحيوية للنيماتودا الحرة والنيماتودا المتطفلة على النبات وتعمل

على مهاجمة مجتمعات النيماتودا مما يؤدي إلى خفض أعدادها بدرجة كبيرة، حيث وجد Goody

وزمالؤه )0999( أنه يمكن مكافحة بعض النيماتودا الممرضة للنبات من األجناس Heterodera و

Meloidogyne حيوياً ضمن ظروف البيت المحمي والحقل وذلك باستعمال بعض الفطور مثل .A oligospora و Gliocladium roseum و P. lilacinus و V. chlamydosporium.

ويعتبر الفطر Paecilomyces من أهم الفطور التي تناولتها بحوث المكافحة الحيوية بعد اكتشافه

كعامل مكافحة حيوية عام 0969 وكان Lysek )0977( أول من أشار إلى تالزم الفطر .P

lilacinus مع بيض نيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne spp. وهو فطر موجود في التربة في كل

أنحاء العالم إال أنه يكثر في المناطق الدافئة، ويستطيع النمو على مدى واسع من الحرارة و حموضة

التربة وعلى مواد حيوانية ونباتية متنوعة، ويتطفل على الحشرات وعلى بيض نيماتودا تعقد الجذور .M incognita والنيماتودا الحويصلية Globodera pallid بشكل رئيسي، حيث ينتج هذا الفطر مادة

ببتيدية )P-168( تعتبر مضاد حيوي للفطور والخميرة والبكتريا موجبة الغرام مما يمكنه من المنافسة مع

الكائنات العضوية الدقيقة في التربة. وقد أظهرت التجارب المخبرية قدرة النوع P. lilacinus على تقليل

كثافة M. incognita وM. arenaria ولكنها لم تستطع مع النيماتودا Chen and ( M. javanica

.)Dickson, 2004

أما الفطر .Trichoderma spp فيعد العالم Weindling أول من اكتشف أهميته في المكافحة

الحيوية في ثالثينيات وأربعينيات القرن الماضي )Wells, 1988( وهو يتواجد في كل مكان وقد استخدم

على نطاق واسع في المكافحة الحيوية وأثبت قدرته في مكافحة بعض األمراض وكذلك سهولة الحصول

عليه من التربة وسرعة عزله )Harman, 2000(، حيث يعيش على المواد الميتة والمتعفنة في التربة أو

على الخشب وتم تسجيل بعض انواعه كمتطفالت على فطور أخرى ) ,Barnett and Hunter

1998(. وقد اظهرت االختبارات التي أجريت على هذا الفطر أنه يمتلك أنزيمات فطرية مثل الكيتناز

قادرة على تخريب قشرة البيض مما يساعد في تطفل الفطر على النيماتودا ) ,Sharma and Pandey

2009(، وأظهرت التجارب المخبرية لـ Naserinasab وزمالؤه )2100( أن زراعة الرشاحات الفطرية

للنوع T. harzianum ثبطت فقس بيض نيماتودا تعقد الجذور M. javanica حيث بلغت نسبة

التطفل على بيض النيماتودا 72% عند المعاملة بهذا الفطر مقارنة مع الشاهد 20%. وهناك أنواعاً

أخرى من هذا الجنس ذات نشاط مضاد لنيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne spp منها: .T viride، و T. atroviride و Sharon et al., 2007( T. asperellum(.

وأكد Khan وآخرون )2110( أن استخدام رشاحة الفطور T. harzianum و P. lilacinus كل على

حدة، أدت إلى انخفاض نسبة فقس بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita. وأجرت حجاز

)2119( تجربة مخبرية في األردن وضعت فيها أكياس بيض نيماتودا M. incognita و .M javanica على مستعمرات فطرية محلية مختلفة األجناس نامية على أطباق بتري تحوي آغار الماء،

ودرست قدرة هذه الفطور على التطفل على بيض النيماتودا. ودرس قسام )2102( قدرة عزالت محلية

من الساحل السوري من الفطر Trichoderma على التطفل على بيض نيماتودا تعقد الجذور .M incognita مخبريا ً.

2.4. المواد والطرائق Materials and Methodes:

تم تنفيذ البحث في مخبر الممرضات الفطرية في مركز تربية األعداء الحيوية ومخبر صحة البذور

بالالذقية، وفي بيوت محمية في الساحل السوري في الفترة الممتدة من شهر آذار وحتى شهر أيار من

العام 2109.

1.2.4. المواد واالجهزة المستخدمة:

0. جذور بندورة مصابة بالنيماتودا تم جمعها في شهر آذار من العام 2109 لتحضير المعلق النيماتودي

من بيوت محمية في زمرين )طرطوس( في الساحل السوري.

2. أطباق بتري بالستيكية معقمة بقطر cm 9 وآغار ووسط آغار دكستروز البطاطا ) Potato

Dextrose Agar( ومضادات حيوية.

9. ماصات بالستيكية معقمة سعة ml 3 وأنابيب بالستيكية معقمة سعة cm 5 مع سدادة مطاطية وأنابيب

بالستيكية معقمة ذات سدادة سعة ml 13.

2. دوارق وبياشر وأدوات زجاجية أخرى وماء مقطر وكحول وقطن وورق ألمنيوم ومناديل ورقية وبارافيلم.

0. أقماع بيرمان ومناخل قياس فتحاتها 21 ميكرون و001 ميكرون.

7. حاضنات وأوتوكالف وغرفة عزل ومجهر ضوئي وشريحة عد النيماتودا.

6. فطور مضادة للنيماتودا )معزولة من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري- الفصل الثالث( منماة

في أطباق بتري تحوي على وسط PDA )شكل 29(، وهي:

.Arthrobotrys oligospora RY .0

.Arthrobotrys superba RY .2

.Aspergillus sp. RY .9

.Gliocladium sp. RY .2

.Paecilomyces lilacinus RA .0

.P. variotii RD .7

.Trichoderma harzianum RK .6

.T. viride RA .8

2.2.4. تحضير معلق بيض نيماتودا تعقد الجذور:

تم غسل جذور البندورة المصابة بالماء جيدا للتخلص من التربة العالقة بها وبعد ذلك وتحت المكبرة تم

إزالة عدة إناث من الجذور وحدد نوع النيماتودا M. incognita بعمل مقطع عرضي في النهاية

الخلفية لجسم االنثى باتباع النمط العجاني Hrtman and Sasser, 1985( Patterns Perennial(.

ثم تم تقطيع الجذور لقطع صغيرة cm 1 ووضعها في بيشر يحوي ml 200 من محلول هيبوكلوريت

الصوديوم Naocl 0.5% وبعد رجه بقوة لمدة 2- 4 دقائق، مرر المعلق بسرعة خالل منخل 001

ميكرون، ثم 21 ميكرون لجمع البيض المحرر، ثم تم وضع المنخل 21 ميكرون بسرعة تحت تيار ماء

بارد لعدة دقائق لغسل Naocl المتبقي، ثم تم غسل الجذور المتبقية بالماء إلزالة البيض الزائد ثم تم

جمعها مجدداً )Hussey and Barker, 1973( وقدرت كثافتها في ml 1 معلق.

3.2.4. اختبار فعالية الفطور على بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita مخبريا ً:

تم زراعة الفطور في أطباق بتري تحوي على وسط آغار الماء بمعدل 2 مكررات )أطباق( لكل فطر ثم

وضعت بالحاضنة على حرارة ⁰C 25 لتنمو، وبعد أسبوع تم إضافة ml 0.5 معلق نيماتودي يحوي 01

بيضة في مركز الطبق البتري، ثم تم إعادة تحضين األطباق و بعد يومين تم فحصها تحت المجهر

9 10X 4X على التكبير ) ثم ( حيث تم ع د البيض المصاب، وبعد أيام تم فحصها مرة ثانية لع د البيض

المصاب ثم تم قلب محتويات الطبق في أقماع بيرمان الستخالص اليرقات الحية الناتجة عن فقس

البيض وع دها ومقارنتها مع الشاهد.

تمو اجراءالتحليل االحصائي باستخدام البرنامج االحصائي (SPSS (V. 19 ومقارنة البيانات باستخدام

اختبار دونكان Dunkan وحساب قيمة أقل فرق معنوي LSD وذلك عند مستوى ثقة P≤ ( %90

.)0.05

3.4. النتائج والمناقشة Results and Discussion:

أظهرت النتائج أن ألغلب الفط ور القدرة على إصابة بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita بعد

يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق البيض وتحضين األطباق )ملحق رقم 2(. وكانت كفاءة الفطور

P. variotii و P. lilacinus و A. oligospora و A. superba و T. viride غير مختلفة

معنويا ً بعد يومين )21% و99% و99% و99% و99% على التوالي( وبعد تسعة أيام من إضافة

المعلق )79% و77% و69% و67% و66% على التوالي(، ولم تتجاوز نسبة اليرقات الحية

المستخلصة في نهاية التجربة من هذه المعامالت الـ 7% )جدول 6(. وهذا يتوافق مع القاسم )2119(

فقد دلت النتائج المخبرية على وجود قدرة تطفل عالية تجاوزت الـ 60% لعزلة البيرو من الفطر .P

67 lilacinus والعزالت المحلية للفطر P. variotii على بيض نيماتودا تعقد الجذور M. javanica،

ويتوافق مع النتائج المخبرية لـ Alabed Alkader )2117( حيث بلغت نسبة بيض M. incognita

المتطفل عليها من قبل الفطر P. lilacinus 02.66% بعد يومين و 67.60% بعد أربعة أيام من

اضافة معلق البيض، ويتوافق مع نتائج حجاز )2119( فقد استطاعت األنواع P. variotii )العزلة 3(

و P. glabrum )العزلة 2( و P. variotii )العزلة 2( التطفل على بيض نيماتودا تعقد الجذور .M incognita بنسبة 70.6% و 69.0% و 66.6% على التوالي وأدت إلى أقل نسبة فقس لهذه

البيوض، اذا ً استطاع الفطران P. varioti و P. lilacinus اختراق قشرة بيض نيماتودا تعقد الجذور

M. incognita ثم النمو واالنتشار داخل البيض )شكل 27( واستهالك كامل محتوياته الغذائية وذلك

عن طريق افراز انزيم سيرين بروتيز وهو مادة سامة تعمل على حل قشرة البيض ومنع فقسه ) Sharma and Pandey, 2009(. وتتوافق النتائج مع قسام )2102( فقد أظهرت نتائجه المخبرية قدرة عالية

لتطفل جميع العزالت المحلية المدروسة للفطر Trichoderma على بيض نيماتودا تعقد الجذور .M incognita وكان النوع T. harzianum )العزلة 6( والنوع T. longibrachiatum )العزلتين 9 و2(

االقوى تأثي اًر بنسبة تجاوزت الـ 60%، تالهما النوع T. viride )العزلتين 0 و7( بنسبة %71.29

و07.07% على التوالي، حيث اخترقت هيفات الفطر T. viride بيض النيماتودا وذلك عن طريق افراز

أنزيمات الكيتيناز والبروتياز المحللة لمادتي الكيتين والبروتين في قشرة البيضة، ثم استهلك الفطر كامل

محتويات البيضة مانعاً فقسها )Sharma and Pandey, 2009(.

A B شكل 23: تطفل الفطر P. lilacinus )الصورة A( والفطر P. variotii )الصورة B( على بيض نيماتودا تعقد الجذور .M .incognita

جدول 6. متوسط البيض المصاب % بعد يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق بيض نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita للمعامالت الفطرية ومتوسط النسبة المئوية لليرقات الحية الناتجة عن فقس البيض السليم % )المتوسط ± الخطأ المعياري(. البيض المصاب بعد البيض المصاب بعد متوسط النسبة المئوية المعامالت يومين تسعة أيام لليرقات الحية 92.00±1.63a 0.00±0.00d 0.00±0.00 c Control 5.00±1.00c 79.00±2.52ab 39.00±4.73 ab A. oligospora 6.00±1.15c 78.00±3.46ab 33.00±2.52 ab A. superba 11.00±1.91b 47.00±7.72c 10.00±4.76c Aspergillus sp. 6.00±1.15c 72.00±1.63b 23.00±2.52b Gliocladium sp. 0.00±0.00d 88.00±1.63a 39.00±1.91a P. lilacinus 0.00±0.00d 89.00±1.91a 40.00±4.90a P. variotii 5.00±1.00c 72.00±1.63b 38.00±2.58ab T. harzianum 6.00±1.15c 77.00±1.91ab 33.00±1.00ab T. viride 5 16 13 LSD المتوسطات المتبوعة بأحرف متشابهة عمودياً غير مختلفة احصائياً عند مستوى معنوية P=0.01

5. الفصل الخامس

اختبار فعالية بعض الفطور المعزولة في تجربة نصف حقلية في البيت المحمي في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita

1.5. المقدمة Introduction:

أظهرت الكثير من الدراسات التي تناولت الفطور ككائنات مضادة للنيماتودا كفاءة وفعالية هذه الفطور

في مكافحة النيماتودا المتطفلة على محاصيل هامة اقتصاديا ً ومنها نيماتودا تعقد الجذور

.Meloidogyne spp، فقد أظهر الفطر P. lilacinus كفاءة في مكافحة M. incognita على

البندورة والذرة والبامياء في مصر )Ibrahim et al., 1987( وعلى البرسيم المصري في مصر

)Ibrahim et al., 1994( وعلى الفاصولياء الخضراء في األصص في البيت المحمي في المملكة

العربية السعودية )الحازمي وآخرون، 2008( وكذلك أظهر كفاءة في مكافحة M. javanica على

البندورة والباذنجان في السعودية في دراسة ضمن البيت المحمي )Ibrahim, 1994( وعلى الباذنجان

في العراق حيث انخفض عدد العقد الجذرية على الجذور بنسبة كبيرة )جبر وآخرون، 2111(. وتم في

دراسة مخبرية تحديد درجة الحرارة المثلى للفطر P. lilacinus، ووجد ان مدى الحرارة 21-20 ⁰م كان

هو االمثل لنمو الفطر وانتاج الجراثيم. كما وجد أن المستنبتات المالئمة لنمو الفطر هي حبوب األرز

المقشور أو غير المقشور، وحبوب القمح والشعير )Stepphan and Shams Al-Din, 1987(،

وأفضل موعد إلضافة الفطر P. lilacinus المحمل على حبوب القمح لمكافحة نيماتودا تعقد الجذور

هو قبل زراعة البندورة بـ 01 أيام )Enrique and Barker, 1989(.

وفي دراسة في البيت الزجاجي في كاليفورنيا، أظهر الفطرين P. lilacinus و Verticillium chlamydosporium كفاءة أكبر في تقليل أعداد الطور اليرقي الثاني للنيماتودا M. incognita على

شتول البندورة في التربة غير المعقمة بعد شهر واحد من إعداء الشتول بالنيماتودا مقارنة بشتول مماثلة

في التربة المعقمة )Gaspard et al., 1990(. وفي تجربة أصص في األردن، أظهر الفطرين .P variotii )العزلة 2( و Aspergillus terreus )العزلة 2( كفاءة في تقليل العقد الجذرية الناتجة عن

نيماتودا تعقد الجذور M. incognita على جذور نباتات البندورة بمعدل 70.2% و69.2% على

التوالي وأدى الفطران إلى غياب كامل للعقد الجذرية الناتجة عن نيماتودا تعقد جذور البندورة .M javanica بمعدل 011%، وأدت المعاملة بالفطر Aspergillus terreus )العزلة 2( إلى زيادة الوزن

الرطب لنباتات البندورة حوالي 021.7% )حجاز، 2119(.

وأظهرت دراسة في العراق أن ثالث عزالت من الفطر Trichoderma viride كان لها تأثي اًر واضحاً

في خفض كثافة ونشاط نيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne sp على البندورة بسبب إفراز الفطر

النزيم البكتينيز Aboud et al., 1992., Aboud and Fattah, 1989( Pectinase(، ولتحقيق

مكافحة أفضل للنيماتودا يجب تطبيق Trichoderma قبل الزراعة )Dababat et al., 2007(.

وأظهر Sankaranarayanan وآخرون )0999( في تجربة نصف حقلية قدرة الفط ور T. viride و

T. harzianum و Gliocladium virens على التخلص من نيماتودا تعقد الجذور .M incognita التي تصيب نبات عباد الشمس.

وقد أجريت دراسة في المملكة العربية السعودية، أظهر خاللها الفطر A. conoides كفاءة في مكافحة

M. incognita على الذرة ضمن ظروف المخبر والبيت المحمي والحقل، وقد كان الفطر .A

71 conoides أكثر كفاءة في تقليل أعداد M. incognita عند حرارة ⁰25م منه عند حرارة ⁰C 18 أو

⁰C 32، وكذلك كانت كفاءته أكبر عند تطبيق الفطر في التربة قبل أسبوعين من اإلعداء وزراعة الذرة

)Al-Hazmi et al., 1982a,b(. وقد أنقص الفطر عدد العقد على جذور البندورة و كثافة اليرقات

لنيماتودا M. incognita في التربة مما خفض من العدوى للموسم التالي ) ,Alabed Alkader

.)2008

وأشارت د ارسة في كاليفورنيا أن أنواع نيماتودا تعقد الجذور عموماً، و خاصة M. ،M. javanica incognita، و M. chitwoodi أكثر قابلية لإلصابة بـ Monacrosporium ellipsosporum و

M. cionopagum من النيماتودا المتحوصلة على الشوندر السكري Heterodera schachtii

.)Jaffee and Muldoon, 1995(

تصنيف عزالت الفطور المضادة للنيماتودا المستوردة )الغير محلية(:

تصنيف الفطر (Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson (1974:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Eurotiomycetes.

رتبة: Eurotiales.

عائلة: Trichocomaceae.

جنس: Paecilomyces .

(www.mycobank.org)

تصنيف الفطر Arthrobotrys conoides (Drechsler) 1937:

مملكة: Fungi.

شعبة: Ascomycota.

صف: Ascomycetes.

عائلة: Orbiliaceae.

جنس: Arthrobotrys.

(www.mycobank.org)

تصنيف الفطر Monacrosporium eudermatum (Drechsler) 1964:

مملكة: Fungi

شعبة: Ascomycota

صف: Ascomycetes

عائلة: Orbiliaceae.

جنس: Monacrosporium.

(www.mycobank.org)

يعد الـ oxamyl مبيد حشرات ونيماتودا وعناكب جهازي التأثير؛ حيث يتحرك من أعلى إلى أسفل

النبات وبالعكس، ويؤثر بالمالمسة أيضا ً. صنع هذا المبيد الكربماتي في أمريكا عام 0962، وهو يؤثر

على الجهاز العصبي للحشرات بتثبيط نشاط أنزيم كولين استيريز واألنزيمات المشابهة له، وهو سام جداً

لذوي الدم الحار )LD50= 5.4 mg/kg(، ويستخدم رشاً على المجموع الخضري وفي التربة لمكافحة

كثير من الحشرات والعناكب والنيماتودا على المحاصيل الحقلية واألشجار المثمرة ونباتات الزينة )حورية

وطويل، 2119(.

2.5. المواد والطرائق Materials and Methodes:

تم تنفيذ البحث في مخبر الممرضات الفطرية وبيت محمي في مركز تربية األعداء الحيوية بالالذقية في

الفترة الممتدة من شهر آذار وحتى شهر آب من العام 2109.

1.2.5. المواد واالجهزة المستخدمة:

0. جذور بندورة مصابة بالنيماتودا تم جمعها في شهر أيار من العام 2109 لتحضير المعلق النيماتودي من

بيوت محمية في الخراب وزمرين في محافظة طرطوس في الساحل السوري.

2. أطباق بتري بالستيكية معقمة بقطر cm 9 وآغار ووسط آغار دكستروز البطاطا ) Potato

Dextrose Agar( ومضادات حيوية.

9. ماصات بالستيكية معقمة سعة ml 3 وأنابيب بالستيكية معقمة سعة cm 5 مع سدادة مطاطية وأنابيب

بالستيكية معقمة ذات سدادة سعة ml 13.

2. حبوب شعير وأكياس حرارية ودوارق وبياشر وأدوات زجاجية أخرى وماء مقطر وكحول وقطن وورق

ألمنيوم ومناديل ورقية وبارافيلم.

0. حاضنات وأوتوكالف وغرفة عزل ومكبرة ومجهر ضوئي وشريحة عد النيماتودا.

7. أقماع بيرمان ومناخل قياس فتحاتها 21 ميكرون و001 ميكرون.

6. أكياس بالستيكية )أصص سعة kg 3( وبطاقات وقلم ومبيد نيماتودي (Vydate (oxamyl 100 GR

وشتول بندورة صنف جلنار، وتورب معقم من شركة دبانة الزراعية klasmann Potgrond H 45

.and 70 L

7. عزالت فطور مضادة للنيماتودا غير محلية )مستوردة من ألمانيا عن طريق الدكتورة مريم العبد القادر(

منماة في أطباق بتري تحوي على وسط PDA )شكل 26(، وهي:

.Arthrobotrys conoides 2022 )0

.Monacrosporium eudermatum 2024 )2

.Paecilomyces lilacinus 14052 )9

9. فطور مضادة للنيماتودا )معزولة من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري _ الفصل الثالث( منماة

في أطباق بتري تحوي على وسط PDA )شكل 29(، وهي:

.Arthrobotrys oligospora RY .0

.Arthrobotrys superba RY .2

.Aspergillus sp. RY .9

.Gliocladium sp. RY .2

.Paecilomyces lilacinus RA .0

.P. variotii RD .7

.Trichoderma harzianum RK .6

.T. viride RA .8

c b a شكل 21: مستعمرات الفطور المضادة للنيماتودا المستوردة: a. Arthrobotrys conoides 2022. b. Monacrosporium eudermatum 2024. c. Paecilomyces lilacinus 14052

2.2.5. إكثار الفطور المضادة للنيماتودا:

تم إكثار الفطور المضادة للنيماتودا )المعزولة والمستوردة( على حبوب الشعير من أجل إضافتها للتربة،

وذلك ضمن غرفة العزل عن طريق إضافة 01 قطع صغيرة )cm³ 1( من مستعمرات الفطور المنماة

على وسط PDA إلى بياشر )كل بيشر أضيف له نوع واحد من الفطور( تحتوي g 100 من الشعير

المعقم مسبقاً )حيث نقعت حبوب الشعير في الماء المقطر ثم تم وضع الشعير المرطب في بياشر

زجاجية سعة ml 500 ثم تم تغطية البياشر ق بوراأللمنيوم وتم تعقيمها باألوتوكالف على حرارة 121

⁰C لمدة نصف ساعة(، ثم أغلقت البياشر بإحكام بالبارافيلم وورق األلمنيوم ورجت عدة مرات لتختلط

قطع الفطر مع الشعير وبعد ذلك وضعت في الحاضنة )شكل 27( على درجة حرارة ⁰C 25 ولمدة

شهر مع تحريك البياشر من وقت آلخر )مرتين باألسبوع( بهدف تسريع نمو الفطر وانتشاره ليغطي كامل

الحبوب بشكل متجانس، ولوحظ النمو الفطري بألوانه المختلفة على حبوب الشعير.

شكل 28: حبوب شعير محملة بالفطور المضادة للنيماتودا ضمن بياشر زجاجية في الحاضنة.

3.2.5. تحضير اللقاح النيماتودي:

تم غسل جذور البندورة المصابة بالماء جيدا للتخلص من التربة العالقة بها وبعد ذلك وتحت المكبرة تم

إزالة عدة إناث من الجذور وحدد نوع النيماتودا M. incognita بعمل مقطع عرضي في النهاية

الخلفية لجسم االنثى باتباع النمط العجاني Hrtman and Sasser, 1985( Patterns Perennial(.

ثم تم تقطيع الجذور لقطع صغيرة cm 1 ووضعها في بيشر يحوي ml 200 من محلول هيبوكلوريت

الصوديوم Naocl 0.5% وبعد رجه بقوة لمدة 2- 4 دقائق، مرر المعلق بسرعة خالل منخل 001

ميكرون، ثم 21 ميكرون لجمع البيض المحرر، ثم تم وضع المنخل 21 ميكرون بسرعة تحت تيار ماء

بارد لعدة دقائق لغسل Naocl المتبقي، ثم تم غسل الجذور المتبقية بالماء إلزالة البيض الزائد ثم تم

جمعها مجدداً )Hussey and Barker, 1973( ثم تم تحضين البيض لمدة 01 أيام على درجة حرارة

⁰C 25 للحصول على يرقات نيماتودا تعقد الجذور حيث جمعت وقدرت كثافتها في ml 1 معلق.

4.2.5. إضافة الفطور إلى التربة و زراعة الشتول واج ارء العدوى:

تم ملء األصص بالتورب ) الذي وضع في أكياس حرارية ورطب بالماء المقطر ثم عق م باألوتوكالف

على حرارة ⁰C 121 لمدة نصف ساعة( بمعدل kg 2 تورب لكل أصيص، وتم خلط حبوب الشعير

المحمل بالفطر مع التورب بمعدل g/kg 6 تورب ماعدا أصص الشاهد والمبيد الكيميائي، وتم وضع

بطاقة على كل أصيص كتب عليها اسم المعاملة ورقم المكرر، ثم تم توزيع االصص في البيت المحمي

بتصميم القطاعات العشوائية البسيطة وبمعدل 2 مكررات )أصص( لكل معاملة:

0( شاهد معدى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

2( معاملة بالفطر Arthrobotrys conoides 2022 مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور .M

.incognita

9( معاملة بالفطر A. oligospora RY مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

2( معاملة بالفطر A. superba RY مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

0( معاملة بالفطر Aspergillus sp. RY مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

7( معاملة بالفطر Gliocladium sp. RY مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

6( معاملة بالفطر Monacrosporium eudermatum 2024 مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور

.M. incognita

7( معاملة بالفطر Paecilomyces lilacinus 14052 مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور .M

.incognita

9( معاملة بالفطر P. lilacinus RA مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

01( معاملة بالفطر P. variotii RD مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

00( معاملة بالفطر Trichoderma harzianum RK مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور .M

.incognita

02( معاملة بالفطر T. viride RA مع عدوى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

09( معاملة بالمبيد الكيميائي فايديت oxamyl 100 GR) Vydate) مع عدوى بنيماتودا تعقد

الجذور M. incognita.

وبعد 01 أيام من إضافة الفطور للتورب تمت ز ارعة شتول بندورة صنف جلنار بعمر شهر تقريباً في

األصص وتم اإلعداء بالمعلق النيماتودي )2111 يرقة( بحقنه بالقرب من جذور الشتول، وتم وضع

المبيد الكيميائي بمعدل g 10 لألصيص )kg 2 تورب(. ثم تمت مراقبة الشتول وسقايتها بانتظام )كل

يومين رية(. وبعد 7 أسابيع من الزراعة تم قلع النباتات بحذر وأخذ قراءات المجموع الخضري والمجموع

الجذري )بعد غسله بالماء جيدا ً للتخلص من التورب العالق فيه( التالية:

0( طول النبات.

2( الوزن الرطب للمجموع الخضري.

9( الوزن الجاف للمجموع الخضري بعد تجفيفه هوائيا ً.

2( الوزن الرطب للمجموع الجذري.

0( عدد العقد الجذرية على الجذور.

10 g 7 ( عدد أكياس البيض على الجذور وذلك بأخذ من كل جذر عشوائياً وع د أكياس البيض

ونسبها إلى الوزن الكامل للجذر.

6( عدد البيض في الكيس الواحد وذلك بأخذ أكياس بيض واضافة ml 3 هيبوكلوريت 1.5% لح ل

المادة الجيالتينية لتحرير البيض ومن ثم عدها.

7( عدد اليرقات في التربة باستخالصها بطريقة أقماع بيرمان )Southey, 1978(.

9( تحديد النسبة المئوية للفقس و ذلك باستخالص البيض وتحضينه لمدة 01 أيام على درجة حرارة

.25 ⁰C

وحسبت الكفاءة النسبية للمعامالت المختلفة في مكافحة النيماتودا باستخدام معادلة أبوت Abbott’s

:formula

عدد النيماتودا في المعاملة % كفاءة المعاملة عدد النيماتودا في الشاهد

تمو اجراءالتحليل االحصائي باستخدام البرنامج االحصائي (SPSS (V. 19 ومقارنة البيانات باستخدام

اختبار دونكان Dunkan وحساب قيمة أقل فرق معنوي LSD وذلك عند مستوى ثقة P≤ ( %90

.)0.05

3.5. النتائج والمناقشة Results and Discussion:

أظهرت النتائج أن ألغلب الفطور المختبرة سوا ًء المعزولة أو العزالت المستوردة القدرة على تقليل كثافة

واصابة العامل الممرض وهو نيماتودا تعقد الجذور M. incognita على جذور نباتات البندورة وفي

الوسط المزروع فيه )ملحق رقم 0(.

وبحساب كفاءة هذه المعامالت في تقليل قيم العامل الممرض مقارنة ً بقيمه في الشاهد غير المعامل

بالفطر والمعامل بالنيماتودا تبين زيادة كفاءة كل من الفطور P. variotii و .Gliocladiu sp و .A superba و A. oligospora و T. viride و A. conoides و M. eudermatum و .P lilacinus 14052 عن 21% )الجدول 7( في التقليل من عدد العقد الجذرية )شكل 29( دون وجود

فروق معنوية فيما بينها مقارنة بالمبيد الذي امتلك أعلى كفاءة )99.9%(. إن للفطور التابعة للجنس

Arthrobotrys القدرة على افتراس اليرقات الموجودة في التربة وبالتالي تؤدي إلى تخفيض عدد

اليرقات التي ستصيب الجذر فيكون عدد العقد المتشكلة أقل )Alabed Alkader, 2008(. من جهة

أخرى كان للفطور السابقة الذكر مضافاً إليها الفطر T. harzianum القدرة على تقليل عدد أكياس

البيض المتشكلة على العقد الجذرية )ملحق رقم 7( وبكفاءة زادت عن 01% وقد استطاع الفطر .P variotii أن يساوي احصائياً كفاءة المبيد في ذلك حيث لم يالحظ فروق معنوية بينهما )93.5 و

99.9% على التوالي( وقيمة أقل فرق معنوي ) LSD) هي 06.2 ومن المعروف أن عدد أكياس البيض

على الجذر يتبع غالباً عدد العقد الجذرية المتشكلة لكن الفطور المختبرة ثبطت تشكل أكياس البيض

بصورة أكبر من تثبيطها تشكل العقد الجذرية وربما يعود ذلك الى تأثيرها المباشر على قدرة اإلناث على

تشكيل أكياس البيض نتيجة تطفلها على اإلناث كما هو الحال عند P. variotii أو افراز مواد كيميائية

مثبطة كما هو الحال عند انواع Trichoderma التي تفرز أنزيمات )كيتيناز Chitinase

وجلوكاناز Glucanase وبروتيناز Protinase( التي تساعدها في اختراق بيض النيماتودا وكيوتيكل

اليرقات )Sharma and Pandey, 2009(. إن النتائج السابقة تتوافق مع نتائج العبد القادر )2109(

حيث كان للفطور M. eudermatum و A. conoides والساللة (P. variotii (Safi-2 القدرة

األكبر على تقليل عدد العقد الجذرية وأكياس البيض على جذور الكوسا مقارنةً بالفطور المختبرة

األخرى، حيث قللت هذه الفطور من عدد العقد الجذرية بنسبة )60، 91، 91 % على التوالي( وعدد

أكياس البيض بنسبة ) 77، 96، 90 % على التوالي( مقارنةً بالشاهد، وتتوافق مع Eapen وزمالؤه

)2110( الذي أثبت قدرة الفطر Trichoderma في التطفل على اناث نيماتودا تعقد الجذور وتخفيض

خصوبتها، ومع Sharon وزمالؤه )2116( الذي أشار إلى تطفل الفطر Trichoderma على إناث

النيماتودا والتفاف خيوط الفطر حولها واخت ارقها مسبباً موتها، وتتوافق مع نتائج قسام )2102( حيث

أظهرت العزلة 6 من النوع T. harzianum في تجربة مخبرية أعلى نسبة تطفل على إناث نيماتودا

تعقد الجذور )91.07%(، و أظهرت في تجربة نصف حقلية قدرة كبيرة في تقليل عدد أكياس البيض

على جذور البندورة )7.99 كيس( مقارنة مع المستحضر التجاري Bioncont وشاهد النيماتودا

)09.70 و 00.22 كيس على التوالي(.

كان الفطر M. eudermatum هو االكثر كفاءة معنوياً في تقليل عدد البيض المتشكل في كيس

البيض حيث بلغت كفاءته 72.7% في تقليل عددها تاله في ذلك النوع P. variotii و P. lilacinus

14052 )91.9 و 97.2% على التوالي( مع عدم وجود فروق معنوية لهذين الفطرين مع الفطور

االخرى والتي لم تتجاوز كفاءتها 91%. من جهة أخرى فقد كان للفطور المختبرة كفاءة زادت عن %70

في تقليل نسبة فقس البيض )الجدول 7( وتجاوزت كفاءة كل من الفطور .Gliocladium sp وأنواع

Trichoderma 71% في قدرتها على تثبيط الفقس دون وجود فروق معنوية بينها. وقد تفوقت ساللة

الفطر P. variotii على P. lilacinus RA و P. lilacinus 14052 في تقليل تثبيط الفقس

70.7% مقارنة بـ )60.0 و 77.19% على التوالي( ومن المعروف أن فطر Paecilomyces هو

فطر متطفل على بيض واناث نيماتودا تعقد الجذور والحوصالت وعدد كبير من أجناس النيماتودا

األخرى )Cabanillas et al, 1988( حيث يقوم بإفراز أنزيم سيرين بروتيز Serine protease وهو

مادة سامة تعمل على حل قشرة البيض وتمنع الفقس )Sharma and Pandey, 2009( وهذا يتوافق

مع ما أثبته Abd-el-Moity وزمالئه )0999( في تجارب البيت الزجاجي وهو أن الفطور .P lilacinus و T. harzianum و .Epicoccum sp خفضت من نسبة فقس البيض ونشاط يرقات

نيماتودا تعقد الجذور M. incognita بالمقارنة مع الشاهد. وقد استطاع الفطر المعروف انه من

الفطور المفترسة للنيماتودا M. eudermatum من تقليل نسبة فقس البيض وبكفاءة 69.9% وقد

أظهرت دراسة مجهرية لـ Alabed Alkader )2117( قدرة هذا الفطر على اختراق البيض والتغذي

على محتوياته. كان المبيد الكيميائي األكثر كفاءة في قتل اليرقات في تربة نبات البندورة حيث أدى الى

استخالص أعداد قليلة جداً من اليرقات تاله في ذلك وبفروق غير معنوية P ≤ 0.05 الفطور المفترسة

A. superba و A. oligospora و A. conoides و M. eudermatum باإلضافة للفطر المتطفل

P. lilacinus 14052. إن إضافة الفطور المفترسة الى التربة محملة على الشعير أدى الى نمو الفطر

وانتشاره وبالتالي تشكيل أعضاء الصيد المختلفة القادرة على صيد أي يرقة حديثة يمكن ان تكون قد

فقست من بيضة سليمة. تشابه نتائج هذه الدراسة ما توصلت اليه دراسات سابقة لـ : العبد القادر

)2109( تعقد جذور على الكوسا، و Alabed Alkader )2117( تعقد جذور على البندورة، والمصري

)2102( تعقد جذور على القطن والعربي )2102( تعقد جذور على الفول السوداني من قدرة الفطور

التابعة للجنس Arthrobotrys و Monacrosporium من تقليل كثافة العدوى بالطور الثاني في

التربة وبالتالي تقليل العدوى المحتملة بالنيماتودا للموسم الزراعي الثاني أو إلصابة جذور جديدة.

يظهر )الجدول 9( تأثير المعامالت المختلفة على القراءات المتعلقة بالنمو لنبات البندورة من حيث طول

المجموع الخضري والوزن الرطب والجاف له وكذلك الوزن الرطب للمجموع الجذري. وما يمكن مالحظته

هو انخفاض قيمة مختلف القراءات عند المعاملة بالمبيد حيث انخفض طول المجموع الخضري ووزنيه

وبصورة معنوية مقارنة بالشاهد وربما يعود هذا الى التأثير السمي للمبيد على النبات )Phytotoxin(

وهذا مشابه لما حصل مع المصري )2102( حيث كانت معاملة المبيد Mocab األكثر فعالية بين

المعامالت في خفض عدد العقد الجذرية وأكياس البيض وعدد اليرقات في التربة ولكنه خفض أيضاً

مؤش ارت نمو نباتات القطن مظه اًر فروقاً معنوية مع نباتات الشاهد غير المعامل. ومن المالحظ انه لم

تكن هناك فروق معنوية للقراءات المتعلقة بالنمو مع الشاهد غير المعامل وأغلب المعامالت بالفطور

وفيما بينها، فقد أعطت المعاملة بالفطر M. eudermatum زيادة معنوية في طول المجموع

الخضري (cm 172.5( وأكبر زيادة معنوية في وزنه الرطب )g 86.1( والجاف )g09.0 ( )ملحق رقم

6( بالمقارنة مع الشاهد والمبيد الكيميائي )شكل 91( وباقي الفطور المختبرة وهذا يتوافق مع نتائج

المصري )2102( حيث أعطت المعاملة بفطر M. eudermatum زيادة معنوية في طول نبات القطن

ووزن المجموع الخضري الجاف والرطب )cm 47.5 و g 66.5 و g 48( مقارنة بالشاهد )cm 38.5

و g 35.5 و g 20.5(، ويتوافق مع نتائج العبد القادر )2109( حيث زاد نمو المجموع الخضري لنبات

الكوسا في معاملة الفطر M. eudermatum بنسبة 22% مقارنةً بمعاملة الشاهد المعدى بالنيماتودا

فقط. بينما أظهر الفطر تشابهاً معنوياً في الوزن الرطب للمجموع الجذري )g 22.5( بالمقارنة مع

الشاهد )الجدول 9(.

A. superba A. oligospora A. conoides

M. eudermatum Gliocladium sp Aspergillus sp

الشاهد

P. variotii P. lilacinus 14052 P. lilacinus RA

Oxamyle T. viride T. harzianum شكل 29: العقد الجذرية للنباتات المعاملة وللنبات الشاهد.

جدول 8. كفاءة المعامالت في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita في جذور نباتات البندورة % )المتوسط ± الخطأ المعياري(.

الكفاءة في تقليل العقد الكفاءة في تقليل الكفاءة في تقليل عدد الكفاءة في تقليل عدد الكفاءة في تقليل نسبة المعامالت الجذرية عدد أكياس البيض اليرقات في التربة البيض/كيس البيض فقس البيض

69.09±4.76 cd 29.39±7.74 b 82.23±4.56 abc 56.08±2.53 bcd 64.04±5.64 bc A. conoides

76.81±4.61 abcd 19.64±7.61 b 70.00±8.10 bcde 54.56±5.80 bcd 68.83±7.29 b A. oligospora

65.85±4.13 d 26.17±10.73 b 91.37±2.21 ab 58.03±3.17 bcd 41.82±4.23 cde A. superba

69.68±6.33 bcd 18.81±12.75 b 54.01±1.90 def 48.86±3.98 d 3.51±2.17 f Aspergillus sp.

84.78±1.23 a 16.50±9.19 b 40.79±14.45 f 51.94±12.36 cd 45.45±3.85 bcde Gliocladium sp.

79.38±1.52 abc 64.80±8.98 a 77.85±5.23 abcd 71.81±3.33 b 47.45±5.17 bcde M. eudermatum

68.09±6.10 cd 38.21±2.69 b 77.60±3.86 abcd 56.85±6.24 bcd 55.31±9.31 bcd P. lilacinus 14052

71.58±2.32 bcd 15.48±1.63 b 71.40±4.05 bcde 48.52±2.91 d 37.58±5.25 de P. lilacinus RA

81.83±2.28 ab 30.95±10.40 b 50.62±3.34 ef 93.51±1.22 a 64.11±7.77 bc P. variotii

80.27±2.66 abc 13.38±4.23 b 47.20±18.11 ef 69.01±7.48 bc 23.05±6.40 ef T. harzianum

85.19±1.70 a 16.98±6.62 b 65.39±1.77 cde 69.30±9.74 bc 60.11±12.68 bcd T. viride

- - 99.32±.20 a 99.97±.03 a 99.99±.01 a Oxamyl

11.17 26.6 22.8 17.26 23.38 LSD

المتوسطات المتبوعة بأحرف متشابهة عمودياً غير مختلفة احصائياً عند مستوى داللة P≤0.05

جدول 9. تأثير المعامالت في قراءات النمو لنبات البندورة المعدى بنيماتودا تعقد الجذورM. incognita.

الوزن الرطب للمجموع الوزن الجاف الوزن الرطب المعامالت طول المجموع الخضري الخضري للمجموع الخضري للمجموع الجذري 23.06±4.71 abc 11.01±3.50 a 73.47±24.03 ab 153.13±11.17 abc Control 35.71±9.28 ab 11.11±2.86 a 77.99±19.12 ab 149.23±28.12 abc A. conoides 17.63±8.39 bcd 8.29±2.50 a 53.08±14.63 ab 135.38±9.45 abc A. oligospora 27.79±3.50 abc 11.54±1.84 a 78.14±9.75 ab 159.38±4.38 abc A. superba 36.60±7.33 a 11.96±1.57 a 68.23±10.60 ab 141.75±9.59 abc Aspergillus sp. 22.49±2.55 abc 11.89±2.71 a 78.61±16.61 ab 167.38±10.56 ab Gliocladium sp. 22.52±2.17 abc 13.12±2.19 a 86.18±12.60 a 172.25±7.64 ab M. eudermatum 21.52±4.51 abc 9.23±1.41 a 61.39±8.62 ab 175.25±1.70 a P. lilacinus 14052 28.26±6.45 abc 8.81±2.34 a 61.89±13.90 ab 127.13±6.38 bc P. lilacinus RA 12.29±2.64 cd 6.39±1.52 ab 40.07±8.31 abc 139.38±15.16 abc P. variotii 31.12±6.61 cd 12.38±3.20 a 84.35±20.58 a 152.88±21.40 abc T. harzianum 11.57±4.42 ab 5.96±2.15 ab 33.31±11.35 bc 117.75±21.66 c T. viride 1.02±.43 d .70±.25 b 5.88±3.11 c 30.38±9.16 d Oxamyl 15.79 6.72 44.28 40.25 LSD المتوسطات المتبوعة بأحرف متشابهة عمودياً غير مختلفة احصائياً عند مستوى داللة P≤0.0

شكل 21: طول المجموع الخضري للنبات المعامل مقارنة مع طول المجموع الخضري للنبات الشاهد الصورة على اليمين: المعاملة بالفطر M. eudermatum. الصورة على اليسار:المعاملة بالمبيد الكيميائي oxamyl.

االستنتاجات Conclusions

0. تم تسجيل وتعريف 02 جنس فطري مضاد لنيماتودا تعقد الجذور من ترب بيوت محمية في

محافظتي الالذقية وطرطوس مزروعة بالبندورة وغير معاملة بالمبيدات الكيميائية منها 9 أجناس

تسجل ألول مرة في سورية: Alternaria و Aspergillus و Fusarium و

Gliocladium و Harposporium و Nematoctonus و Paecilomyces و

Penicillium و Stylophage، والجنس Arthrobotrys و Trichoderma و

.Verticillium

2. تم تحديد األنوع الفط رية المضادة للنيماتودا التالية: A. superba RY و A. dactyloides

RD وAspergillus sp. RY وGliocladium sp. RY و Harposporium anguillula RK وP. lilacinus RA و P. variotii RD وهي تسجل ألول مرة في

سورية كفطور مضادة للنيماتودا، وكذلك تم تحديد األنواع: A. oligospora RY و .T harzianum RK و T.virid RA .

9. أظهرت الفطور المضادة للنيماتودا Arthrobotrys oligospora و A. superba الكفاءة

األكبر في إصابة يرقات نيماتودا تعقد الجذور M. incognita مخبرياً بنسبة تجاوزت %70

بعد تسعة أيام من إضافة المعلق النيماتودي، ولم يتم استخالص أي يرقة حية من هاتين

المعاملتين في نهاية التجربة.

2. أظهرت الفطور المضادة للنيماتودا Paecilomyces variotii و P. lilacinus RA و

Arthrobotrys oligospora و A. superba و T. viride فعالية متساوية في مكافحة

بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita مخبرياً بنسبة تجاوزت الـ 77% بعد تسعة أيام من

إضافة معلق البيض وتحضين األطباق.

0. أظهرت الفطور المضادة للنيماتودا Paecilomyces variotii و Arthrobotrys oligospora و T. viride والعزالت المستوردة A. conoides و M. eudermatum فعالية

كبيرة في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita على البندورة في تجربة نصف حقلية.

التوصيات Recommendations

0. متابعة الدراسات المسحية الحقلية لعزل وتعريف فطور مضادة للنيماتودا من ترب الساحل

السوري ومحافظات القطر األخرى ومن أنواع مختلفة من الترب )بيوت محمية- بساتين وغابات

وغيرها(.

2. متابعة تصنيف األجناس الفطرية المضادة للنيماتودا التي تم تسجيلها في هذه الدراسة باستخدام

تقنيات البيولوجيا الجزيئية حتى الوصول الى مستوى النوع والساللة.

9. إجراء اختبارات لتقييم فعالية الفطور المضادة للنيماتودا المعزولة في دراستنا ألنواع أخرى من

نيماتودا تعقد الجذور .Meloidogyne spp وعلى أنواع مختلفة من المحاصيل الزراعية

واألشجار الهامة اقتصادياً في سورية بشكل عام والساحل السوري بشكل خاص.

2. إجراء المزيد من االختبارات لتقييم فعالية الفطور المضادة للنيماتودا المعزولة في دراستنا وخاصة

Arthrobotrys oligospora وPaecilomyces variotii وT. viride ، والعزالت

المستوردة A. conoides و M. eudermatum في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور .M incognita في تجارب نصف حقلية وحقلية لفعاليتها الكبيرة وكذلك لقدرتها على البقاء

واالنتشار بالتربة مقارنة بالمبيد الكيميائي الذي له عمر معين في التربة ينتهي معه تأثيره.

0. تشجيع ودعم الدراسات حول امكانية إنتاج مستحضرات جاهزة من الفطور المضادة للنيماتودا

المعزولة من الترب السورية وخاصة الفطور التي ثبتت كفائتها في مكافحة النيماتودا، وتوزيعها

على الم ازرعين أوطرحها في األسواق التجارية كمبيدات حيوية آمنة بيئياً بدالً من المبيدات

الحيوية المستوردة والمكلفة.

7. إجراء اختبارات لتقييم مدى فعالية أنواع الجنس Paecilomyces في مكافحة األكاروسات؛

حيث لوحظ عن طريق الصدفة أثناء تنفيذ تجربة عزل الفطور المضادة للنيماتودا بأن أنواع هذا

الجنس أصابت األكاروس بالطور البالغ )شكل 90( وتطفلت على بيض األكاروس أيضاً، بينما

قام األكاروس بتخريب المشائج الفطرية بشكل كامل ألنواع أجناس الفطور األخرى.

شكل 21: تطفل الفطر Paecilomyces على الطور البالغ لألكاروس.

المراجع References

المراجع العربية:

0. أبو غربية، وليد؛ ونوري الحسني. 2010. مكافحة النيماتودا باستخدام التدابير والطرق المزرعية.

صفحة 1059-1086. في: "نيماتودا النبات في البلدان العربية" )الطبعة األولى(. دار وائل للنشر،

األردن.

2. أبو غريبة، وليد؛ وندى ألوف؛ ومحمود يوسف. 2010. نيماتودا محاصيل الخضر. صفحة -715

771. في: "نيماتودا النبات في البلدان العربية" )الطبعة األولى(. دار وائل للنشر، األردن.

9. أحمد، محمد. 0997. الفطريات المتطفلة على النيماتودا. صفحة 299-702. في: "عالم الفطريات"

)الطبعة االولى(. الدار العربية للنشر والتوزيع، القاهرة.

2. اسطيفان، زهير؛ ووليد أبوغربية. 2010. نيماتودا تعقد الجذور: األضرار والخسائر والمكافحة.

صفحة 285-327. في: "نيماتودا النبات في البلدان العربية" )الطبعة األولى(. دار وائل للنشر،

األردن.

0. اسطيفان، زهير؛ وكامل جابر؛ وباسمة أنطون؛ وهديل داوود. 2112. المكافحة االحيائية لنيماتودا

تعقد الجذور .Meloidogyne spp والفطر رايزوكتونيا في نباتات الباذنجان والخيار. المجلة

الزراعية العراقية )عدد خاص(. 6: 7-0.

7. البسيط، ابراهيم؛ وبسام أبو ترابي؛ ومتيادي بوراس. 2010. إنتاج محاصيل الخضر، الجزء النظري،

منشورات جامعة دمشق، كلية الزراعة. 277 صفحة.

6. الحازمي، أحمد؛ وزهير اسطفان؛ ولما البنا؛ وأمين أمين. 2010. المكافحة األحيائية لنيماتودا

النبات. صفحة 973-1015. في: "نيماتودا النبات في البلدان العربية" )الطبعة األولى(. دار وائل

للنشر، األردن.

7. الحازمي، أحمد؛ وصالح النظاري؛ وأحمد دوابة؛ وفهد اليحيى. 2117. مقارنة كفاءة بعض التوجهات

المختلفة في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita على الفاصولياء الخضراء.

المؤتمر الدولي الرابع للتنمية والبيئة. الرياض. المملكة العربية السعودية. )الملخص(.

9. العبد القادر، مريم. 2109. تقييم فعالية بعض الفطريات المضادة للنيماتودا في مكافحة نيماتودا تعقد

الجذور Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood على نبات الكوسا

.Cucurbita pepo L. المجلة العربية للبيئات الجافة، مقبول للنشر.

01. العربي، صبحية. 2102. تقصي انتشار النيماتودا المتطفلة في ريزوسفير نبات الفول السوداني

ودراسة تغيراتها العددية خالل موسم النمو وتقييم بعض طرائق مكافحتها. رسالة ماجستير. جامعة

دمشق: 007 صفحة.

00. العسس، خالد. 2003. المدخل إلى علم النيماتودا النباتية، الجزء النظري، منشورات جامعة دمشق،

كلية الزراعة. 359 صفحة.

02. العسس، خالد؛ ومحمد أبو الشامات. 2003. المدخل إلى علم النيماتودا النباتية، الجزء العملي،

منشورات جامعة دمشق، كلية الزراعة. 147 صفحة.

09. القاسم، محمد. 2119. النيماتودا المرافقة ألشجار الدراق وفاعلية عزالت من فطر

.Paecilomyces spp في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne javanica. أطروحة

دكتوراه. جامعة دمشق: 079 صفحة.

02. المجموعة اإلحصائية السنوية. 2102. وزارة الزراعة واإلصالح الزراعي. سورية.

00. المصري، ميمونة. 2102. تغيرات مجتمعات النيماتودا المرافقة لمحصول القطن، ودور المكافحة

الحيوية في الحد من انتشارها، وتأثير التفاعل مع الفطر المسبب للذبول الوعائي. أطروحة دكتوراه.

جامعة دمشق: 060 صفحة.

07. بغدادي، وفاء. 2112. دراسة بيئية وتصنيفية النتشار أنواع من الفطريات المفترسة والمتطفلة على

الديدان )المؤذية والحرة( في منطقة دمشق. مجلة جامعة دمشق للعلوم األساسية. 07)2(: -090

.027

06. بن زغيو، عبد اهلل. 2004. تأثير زراعة الفجل Raphanus sativus كمصيدة نباتية على أعداد

نيماتودا تعقد الجذور ).Meloidogyne spp( في التربة. كتاب وقائع مؤتمر العلوم. 2004،

صنعاء، اليمن. 5 صفحات.

07. بوراس، متيادي؛ ونبيل البطل؛ وسهيل حداد. 1999. الزراعة المحمية، الجزء النظري )الطبعة

الثالثة(، منشورات جامعة دمشق. 384 صفحة.

09. جمعة، علي يوسف. 0977. الفطور القانصة للنيماتودا في الترب الليبية. مجلة وقاية النبات

العربية. 2: 29. )ملخص(.

21. حجاز، ريم. 2119. الفطريات المترافقة مع نيماتودا تعقد الجذور في األردن. رسالة ماجستير. كلية

الزراعة، الجامعة األردنية: 66 صفحة. )الملخص(.

20. حميدان، مروان؛ ورياض زيدان. 2004. ز ارعة وانتاج محاصيل الخضار، الجزء النظري.

منشورات جامعة تشرين، كلية الزراعة. 276 صفحة.

22. حورية، عادل؛ ومحمد طويل. 2119. مبيدات اآلفات. جامعة تشرين، كلية الزراعة. 229 صفحة.

29. دالل، نذير؛ وعبد النبي بشير؛ ولؤي أصالن. 2006. المكافحة الحيوية، الجزء النظري، منشورات

جامعة دمشق، كلية الزراعة.

22. قسام، رامي. 2102. المكافحة البيولوجية لنيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne التي تصيب

نباتات البندورة في ظروف الزراعة المحمية في الساحل السوري باستخدام عزالت محلية من الفطر

Trichoderma. رسالة ماجستير. جامعة تشرين: 001 صفحة.

المراجع االجنبية:

1. Abdul-Eid, H. Z., N. A. Abdul-Bari, A. M. Korayem, and E. A. Noweer.

1997. Concomitant occurance of nematode- antagonistic fungi and bacteria

associated with prevalent nematodes in Mansouria region soils. Egyptian

Journal of Agronematology. 1: 37-58.

2. Abd-el-Moity, H., F. W. Riad and S. El-Eraki. 1993. Effect of single and

mixture of antagonistic fungi on the control of root-knot nematode,

Meloidogyne incognita. Egyptian Journal of Agricultural Research. 71: 91-

100.

3. Aboud, H.M., H.M. Saleh, F.A. Fattah and H.A. Radwan. 1992.

Trichoderma viride as biocontrol agent of root-knot nematode. Iraqian

Journal of Agricultural Science. 23: 7-12.

4. Aboud, H.M. and F.A. Fattah. 1989. The effect of Trichoderma isolates on

some plsnt growth parameters and parasitism of nematode eggs.

International Symposium Biology Conferences. Antalia, Turkey.

5. Alabed Alkader, M.. 2008. Invitro studies on nematodes interactions with

their antagonistic fungi in the rhizosphere of various plants. Ph.D. thesis.

Faculty of Forestand Environment Sciences. Albert- Ludwigs- Universitat.

Freiburg. Germany. 214p.

6. Al-Hazmi, A. S. and A. T. Abdul-Razik. 1991. Evaluation of some fungal

species as biocontrol agents of Meloidogyne javanica. Pakistan of Journal

Nematology. 9: 39-47.

7. Al-Hazmi, A. S., D. P. Schmitt, and J. N. Sasser. 1982a. Population

dynamics of Meloidogyne incognita on corn grown in soil infested with

Arthrobotrys conoides conoides. Journal of Nematology 14(1):44-50.

8. Al-Hazmi, A. S., D. P. Schmitt, and J. N. Sasser. 1982b. The effect of

Arthrobotrys conoides on Meloidogyne incognita population densities in

corn as influenced by temperature, fungus inoculum density, and time of

fungus introduction in the soil. Journal of Nematology 14(2):168-174.

9. Amin, A.W.. 2000. Efficacy of Arthrobotrys oligospora, Hirsutella

rhossiliensis, Paecilomyces lilacinus and Pasteuria penetrans as biocontrol

agents against Meloidogyne incognita on tomato. Pakistan of Journal

Nematology. 18: 29-34.

10. Amin, A.W. and F.A.M. Mostafa. 2000. Management of Meloidogyne

incognita infecting sunflower by integration of Glomus mossae with

Trichoderma viride, T. harzianum and Arthrobotrys oligospora. Egyptian

Joural of Agronematology. 4: 21-30.

11. Balan, J. and N. Gerber. 1972. Attraction and Killing of the nematode

Panagrellus redivivus by the predaceous fungus Arthrobotrys dactyloides.

Nematological. 15: 163-173.

12. Barnett, H. L. and B. B. Hunter. 1998. Illustrated genera of imperfect fungi

(fourth edition).The American Phytopathological Society. 215 Pp.

13. Barron, G. L.. 1977. The nematode-destroying fungi. 140 Pp. In: " Topics

in Mycobiology", No. 1. Canadian Biological Publication. Guelph-Ontario,

Canada.

14. Cabanillas, E., K. R. Barker and M. E. Daylein. 1988. Histology of the

interactions of Paecilomyces lilacinus with Meloidogyne incognita on

tomato. Journal of Nematology. 20: 362-365.

15. Chen, S. Y. and D. W. Dickson. 2004. Biological control of nematodes by

fungal antagonists. Pp 979-1039. In: "Nematology – Advances and

Perspectives", Volume II, Nematode Management and Utilization. Tsinghua

University Press. CABI Publishing.

16. Dababat, A. and Sikora, R. 2007. Use of Trichoderma harzianum and

Trichoderma viride for the biological control of Meloidogyne incognita on

tomato. Jordan Journal of Agriculture Sciences. 3(3): 297-309.

17. Drechsler, C.. 0999. Morphological diversity among fungi capturing and

destroying nematodes. Journal of the Washington Academy of Sciences. 23:

138-141.

18. Eapen, S.J., B. Beena and K. V. Ramana. 2005. Tropical soil microflora of

spice-based cropping systems as potential antagonists of root-knot

nematode. Journal of Invertebrate Pathology. 88: 218-225.

19. El-Amin, Elnour. 1999. Nematode-destriying fungi from Sudanese soils.

Pp. 434. In: J. J. Stapeton, J. E. DeVay and C. L. Elmore, (eds). Soil

Solarization and Integrated Management of Soilborne Pests. FAO Plant

Production and Portection Division. Paper (147).

20. Ellis, M. B.. 1971. Dematiaceous hyphomycetes. Commonwealth

Mycological Insitute, Kew, Surrey, England. 608 Pp.

21. Enrique, C. and K. Barker. 1989. Impact of Paecilomyces lilacinus

inoculums level and application time on control of Meloidogyne incognita

on tomato. Journal of Nematology. 21(1): 115-120.

22. Erma, M. H. and S. Shahzad. 1998. Isolation of hyperparasites from eggs

and females of Meloidogyne javanica. Pakistan of Journal Nematology. 16

(1): 77-82.

23. FAO statistic. Food and Agricultural Organization of the United Nations.

2009 (www.faostat.fao.org/site/339/default.aspx).

111

24. Fresenius. 0702. Beitrage zur Mycology. Heft 1-2 Pp. 1-80.

25. Gaspard, J. T., B. A. Jaffee, and H. Ferris. 1990. Meloidogyne incognita

survival in soil infested with Paecilomyces lilacinus and Verticillium

chlamydosporium. Jornal of Nematology 22(2):176-181.

26. Goody, G., R. Rodriguez-Kabana and G. Morgan-Jones. 1993. Fungal

parasites of Meloidogyne arenaria eggs in an Alabama soil. A mycological

survey and greenhouse studies. Nematropica. 13: 201-207.

27. Gray, N. F.. 1988. Fungi attaeking vermiform nematodes. Pp 3-38. In:

"Diseases of Nematodes", Volume 2, eds G. O. Poinar and H. B. Jansson

CRC Press. USA.

28. Harman, G. E.. 2000. Mythes and dogmas of biocontrol changes in

perception derived from research on Trichoderma harzianum strain T-22.

Plant Disease Report. 84(4): 377-393.

29. Hertz, B. N., H. B. Jansson, and A. Tunlid. 2002. Nematophagous Fungi.

Encyclopedia of life sciences/ 2002 Macmillan Publishers Ltd, Nature

Publishing Group/www.els.net.

30. Hrtman, K. M. and J. N. Sasser. 1985. Identification of Meloidogyne

species on the basis of different host test and perinneal pattern morphology.

Pp 69-77. In: An advanced treatise on Meloidogyne. Volume 2,

111

Methodology. North Carolina State University Graphics. Raleigh, North

Carolina. USA. 223 pp.

31. Hussey R. S. and K. R. Barker. 1973. A comparison of methods of

collecting inocula for Meloidogyne spp. Including a new technique. Plant

Dis. Rep. 57: 1025-1028. In Rustico A. Zorilla.Nematode extraction from

roots and soil.

32. Ibrahim, A. A. M.. 1994. Effect of cadusafos, Paecilomyces lilacinus and

Nemout on reproduction and damade potential of Meloidogyne javanica.

Pakistan of Journal Nematology . 12: 141-147.

33. Ibrahim, I. K. M., A. A. M. Ibrahim and M. A. Rezk. 1994. Biological and

chemical control of root-knot nematodes on clover, corn and wheat.

Alexandria Jornal of Agriculture Research. 39: 453-462.

34. Ibrahim, I.K.A; M.A. Rezk; M.A. El-saedy and A.A.M. Ibrahim. 1987.

Control of Meloidogyne incognita on corn, tomato and okra with

Paecilomyces lilacinus and the nematicide aldicarb. Nematology

Mediterranean. 15: 265-268.

35. Jaffee B. A. and A. E. Muldoon. 1995. susceptibility of root-knot and cyst

nematodes to the nematode-trapping fungi Monacrosporium ellipsosporum

and M. cionopagum. Soil Biol. Biochem. Vol. 27. No. 8. Pp. 1083-1090.

112

36. Jatala, P., R. Kaltenbach and M. Bocangel. 1979. Biological control of

Meloidogyne incognita acertia and Globodera pallid on potatoes. Circular

No. 3. Internationa; Potato Center. Laima, Peru. Pp. 3.

37. Kilama, P., T. Dubois, D. Coyne, B. Niere, C. S. Gold and E. Adipala.

2007. Antagonism of Paecilomyces spp. isolated from banana (Musa spp.)

root and rhizosphere against Radopholus similis. Nematropica 37:215-225.

38. Khan, H.U., W. Ahmad, R. Ahmad and M.A. Khan. 2001. Evaluation of

culture filtrates of different fungi on the larval mortality of Meloidogyne

incognita. Pakistan Journal of Phytopathology. 12: 46-49.

39. Lamberti, F.. 1984. Nematode problems of the mediterranean coastal stripe

in the Syrian arab republic. Istituto di Nematologia Agraria, C.N.R. 70126

Bari, Italy. Nematologia Mediterranea 12: 53-64.

40. Liou, J. Y. and S. S. Tzean. 1992. Stephanocysts as nematode-trapping and

infecting propagules. Mycologia 84(5): 786-790.

41. Luc, M., R. A. Sikora and J. Bridge. 2005. Plant parasitic nematodes in

subtropical and tropical agriculture (second edition). CABI Publishing.

42. Lysek, H.. 1966. Study of biology of geohelminths-II. The importance of

some soil micro organisms for the viability of geohelminth eggs in the soil.

Acta University. Palacki. Olonic. 40: 83-90.

113

43. Mamluk, O. F. and E. W. Faust. 1975. Distribution and identity of root-knot

nematodes (Meloidogyne spp.) on coton and sugar beet in the syrian arab

republic and the republic of lebanon. Pf1anzkrankheiten., 11: 717-721.

44. MycoBank (www.mycibank.org).

45. Naserinasab, F., N. Sahebani, H. R. Etebarian. 2011. Biological control of

Meloidogyne javanica by Trichoderma harzianum BI and salicylic acid on

tomato. African Jornal of Food Science. 5(3): 276-280.

46. Norton, D.C. 1978. Ecology of plant-parasitic nematodes. John Wiley and

Sons, New York. 268 Pp.

47. Olthof, T. H. A. and R. H. Estey. 1963. A nematoxin produced by the

nematophagous fungus Arthrobotrys oligospora Fresenius. Natwre. 197:

514-515.

48. Persoon, C.H.. 1794. Fungial database nomenclature and species bank

online taxonomic novelties submission, Administred by International

Mycological Association, Neues magazine Fur die Botanic, Romer. 1-92.

49. Radwan, M.A. and H.A. Ahmed. 1992. Evaluation of culture filtrates of

certain soil-borne fungi for nematicidal activity against Meloidogyne

incognita. Alexandria Journal of Agricultural Research. 37: 545-558.

114

50. Rifai, M. A.. 1964. A rrvision of the genus Trichoderma. Adapted from a

thesis submitted for the degree of master of science at the Faculty of Pure

science. University of Sheffield, England. Pp. 55.

51. Sankaranarayanan, C., S.S. Hussaini, P.S. Kumar, R. Rangeshwaran, S.C.

Dhawan and K.K. Khushal. 1999. Antagonistic effect of Trichoderma and

Gliocladium sp. Against the root-knot nematode (Meloidogyne incognita) on

sunflower. Proceedings of National Symposium on Rational Approaches in

nematode management for sustainable agriculture, India. 23-25.

52. Saxena, G.. 2008. Observations on the occurrence of nematophagous fungi

in Scotland. Applied Soil Ecology. 39: 352-357.

53. Samson, R. A.. 1974. Paecilomyces and some allied Hyphomycetes.

Studies in Mycology. Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baarn 4. Pp.

119.

54. Sharma, P. and R. Pandey. 2009. Biological control of root-knot nematode;

Meloidogyne incognita in the medicinal plant; Withanin somnifera and the

effect of biocontrol agents on plant growth. African Journal of Agricultural

Research. 4: 564-567.

55. Sharon, E., I. Chet, A. Viterbo, M. Bar-Eyal, H. Nagan, G. J. amuels and Y.

Spiegel. 2007. Parasitism of Trichoderma on Meloidogyne javanica and

115

role of the gelatinous matrix. European Journal of Plant Pathology. 118:

247-258.

56. Shepherd, A. M.. 1955. Formation of the infection bulb in Arthrobotrys

oligospora. Freschius. Nature. 175: 475.

57. Southey, J.F.. 1978. Plant Nematology. Ministry of Agriculture, Fisheries

and Food. Her Majesty's office, London.

58. Vianen, N. and G. Abawi. 1998. Fungi parasitic on juveniles and egg

masses of Meloidogyne hapla in organic soils from New York. Supplement

to the Journal of Nematology. 30(4S): 632-638.

59. Wells, H. D.. 1988. Trichoderma as a Biocontrol Agent. P: 72-82.

60. Wikipedia (http://en.wikipedia.org/wiki/Tomato).

61. Wikipedia (http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_tomato_diseases).

62. Wikipedia (http://en.wikipedia.org/wiki/Meloidogyne_incognita).

63. Woronin, M.. 0761. Sphaeria lemneae, Sordaria coprophile, Arthrrobotrys

oligospora. In Bettr. Morph. Abhandle. Senckenbeglsche naturf, Ges. 7:

325-360.

64. Yassin, M. Y. and A. E. Ismail. 1993. Effect of Zinnia elegans as a mix

crop along with tomato against Meloidogyne incognita and Rotylenchulus

reniformis. Pakistan Journal of Nematology .11(1):31-35.

116

65. Zopf, W.. 1788. Zur Kenntnis der Infektions-Krankheit neiderer Thiere und

Pflanzen. Nova Acta. Lep. Carol. 52: 314-376.

117

الملحقات Appendices

C A B

ملحق رقم 1: أجسام حجرية )A( وتلون بمشيجة الفطر B( coloured mycelium و C(.

ملحق رقم2: جدول التكرار )FO%( ومتوسط الكثافة العددية )PD( وقيم الظهور )PV( ألجناس الفطور المضادة للنيماتودا المعزولة من تربة البيوت المحمية المزروعة بالبندورة في الساحل السوري. التكرار الكثافة العددية قيمه الظهور الجنس الفطري Prominence value Mean population density Frequency of occurrence 0.5 1.2 20 Alternaria 0.0 2 71 Arthrobotrys 1.9 0.2 20 Aspergillus 1.6 0.2 21 Fusarium 1.9 0.2 01 Gliocladium 1.7 0 21 Harposporium 1.9 0 01 Nematoctonus 2.2 2.7 91 Paecilomyces 0.6 1.1 30 Penicillium 1.2 0.0 01 Stylophage 0.9 0.6 70 Trichoderma 1.6 0.2 21 Verticillium

118

ملحق رقم 2: متوسط النسبة المئوية لليرقات المصابة بعد يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق يرقات نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita للمعامالت الفطرية والنسبة المئوية لليرقات المستخلصة.

119

ملحق رقم 8: متوسط البيض المصاب % بعد يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق بيض نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita للمعامالت الفطرية ومتوسط النسبة المئوية لليرقات الحية الناتجة عن فقس البيض السليم .%

111

الكفاءة في تقليل عدد اليرقات في التربة الكفاءة في تقليل عدد البيض/كيس البيض الكفاءة في تقليل نسبة فقس البيض

الكفاءة في تقليل العقد الجذرية الكفاءة في تقليل عدد أكياس البيض

Oxamyl

T. viride

T. harzianum

P. variotii

P. lilacinus RA

P. lilacinus 14052

M. eudermatum

المعامالت

Gliocladium sp.

Aspergillus sp.

A. superba

A. oligospora

A. conoides

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 المتوسط

ملحق رقم 0: كفاءة المعامالت في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne incognita.

ملحق رقم 3: أكياس بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita متشكلة على العقد الجذرية.

111

طول المجموع الخضري cm الوزن الرطب للمجموع الخضري g الوزن الجاف للمجموع الخضري g الوزن الرطب للمجموع الجذري g

Oxamyl

T. viride

T. harzianum

P. variotii

P. lilacinus RA

P. lilacinus 14052

M. eudermatum

Gliocladium sp.

االمعامالت

Aspergillus sp.

A. superba

A. oligospora

A. conoides

Control

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180

المتوسط ملحق رقم 1: تأثير الفطور المضادة في نمو نبات البندورة المعدى بنيماتودا تعقد الجذور M. incognita.

112

Evaluation of efficiency of some nematode antagonistic fungi

isolated from greenhouse-soils to control root-knot nematode

Meloidogyne incognita

Abstract

20 composite soil samples were collected during February, March and April,

2012 from 20 non- pesticide treated greenhouses in the Syrian coast planted with tomatoes at a depth of 20 cm, and 10 samples of tomato roots infected with root-knot nematodes were collected. At the Center for Research and

Studies of biological control in the college of agriculture at Damascus

University, the nematode- antagonistic fungi were isolated from soil samples by using soil sprinkling technique, where 1 g of soil is sprinkled on the surface of a water agar (1.5%) petri dishes together with a suspension of nematodes added as bait. Bearmann funnel technique was used to obtain the suspension of nematodes from each soil sample. In total 12 genera of nematode- antagonistic fungi have been identified and each soil sample contained at least one genus.

These genera are:

Alternaria, Arthrobotrys, Aspergillus, Fusarium, Gliocladium,

Harposporium, Nematoctonus, Paeilomyces, Penicillium, Stylophage,

113

Trichoderma and Verticillium, some of them have been identified to the species level: Arthrobotrys oligospora, A. superba, A. dactyloides,

Harposporium anguillula , Paeilomyces lilacinus, P. variotii, T. harzianum and

T.viride. Nematode antagonistic fungi communities were then analyzed using frequencies of occurrence (FO), mean population densities (PD), and prominence value (PV). The genus Paecilomyces was the most frequent, numerous and prominent (FO = 90%, 2.6 colony, PV = 2.4) of all the isolated genera, while Stylophage and Nematoctonus were the least frequent (FO=10%).

A laboratory experiment was conducted to test and evaluate the efficiency of eight nematode antagonistic fungi (A. oligospora, A. superba, Aspergillus sp., Gliocladium sp., P. lilacinus, P. variotii, T. harzianum, and T. viride) to control larvae of root-knot nematode M. incognita in the Center of Natural

Enemies and Seed Health Laboratory in Latakia, by cultivation it in water agar petri dishes (3 dishes per fungus), then a week after incubation 0.5 ml suspension of nematodes including 50 alive larvae were added to each dish.

Results, statistically analyzed using SPSS (V. 19) at a confidence level of 95%

(P ≤ 0.05), showed that A. oligospora and A. superba were the most efficient after two days (33 and 29% respectively) and after 9 days (84 and 81% respectively) of incubation. No one alive larvae were extracted from these treatments at the end of the experiment.

114

The efficiency of these eight nematode-antagonistic fungi was tested and evaluated to control eggs of root-knot nematode M. incognita in another laboratory experiment by adding 0.5 ml suspension of 50 nematode eggs to each dish after a week of incubation. The results showed that the fungi P. variotii and P. lilacinus were the most efficient after two days (40 and 39%, respectively) and after 9 days (89 and 88%, respectively) of incubation. No one alive larvae from hatching eggs was extracted from these treatments at the end of the experiment.

A pot experiment was conducted to evaluate the efficiency of 11 nematode- antagonistic fungi (Arthrobotrys conoides, A. oligospora, A. superba,

Aspergillus sp., Gliocladium sp., Monacrosporium eudermatum, Paecilomyces lilacins 14052, P. lilacinus 17, P. variotii, Trichoderma harzianum, and T. viride ) and pesticide oxamyl to control root-knot nematode M. incognita on tomato. The Fungi were applied to soil using inoculated barley before ten days from planting and nematode inoculation. Readings were taken two months later. Results showed that all tested fungi have the ability to reduce numbers of root galls, egg masses, eggs, egg hatching percentage and density of larvae in the soil. Oxamyl and P. variotii had the highest efficiency in reducing the number of root galls (99.9 and 64.1% respectively), and the number of egg masses (99.9 and 93.5% respectively), whereas M. eudermatum was the best in

115 reducing the number of eggs (64.8%). Gliocladium sp. and T. viride were the best in reducing the egg hatching percent (84.7 and 85.1% respectively).

Oxamyl and A. superba were the best in reducing the density of larvae in the soil (99.3 and 91.3% respectively). Also, M. eudermatum increased the length and fresh and dry weight of tomato plant (172.2cm, 86.1g and 13.1g) respectively comparing with control. Therefore, the tested fungi could be good candidates for future field studies to control root-knot nematode on tomato or others crops.

116

الملخص

تم جمع 02 عينة تربة مركبة خالل أشهر 0 و3 و4 من العام 0200 من 02 بيت محمي في الساحل

السوري مزروعة بالبندورة وغير معاملة بالمبيدات الكيميائية بمعدل عينة مركبة من كل بيت أخذت

بطريقة متعرجة )Zig-Zag( من حول جذور النباتات وعلى عمق 02 سم وتم جمع أكثر من 02

عينات جذر بندورة مصاب بالنيماتودا لتحضير المعلق النيماتودي. وفي مركز بحوث ودراسات المكافحة

الحيوية في كلية الزراعة بجامعة دمشق تم عزل الفطور المضادة للنيماتودا من عينات التربة باستخدام

طريقة الترذيذ )Sprinkling( بنثر 0 غ تربة على سطح أطباق بتري تحوي آغار ماء )0.1%( مضافاً

لها معلق نيماتودي كطعم، وتقنية أقماع بيرمان للحصول على معلق نيماتودي من كل عينة تربة ثم

إضافة 0 مل من هذا المعلق الى أطباق آغار ماء، وبعد تحضين االطباق ومراقبتها وفحصها بالمجهر

تم تحديد 00 جنس فطري مضاد للنيماتودا بشكل اجمالي ولم تخل عينة تربة من جنس واحد على

األقل، وهذه األجناس هي: Alternaria و Arthrobotrys و Aspergillus و Fusarium و

Gliocladium وHarposporium و Nematoctonus و Paecilomyces و Penicillium و

Stylophage و Trichoderma و Verticillium، وتم تحديد بعض العزالت حتى مستوى النوع:

Arthrobotrys oligospora RY و A. superba RY وA. dactyloides RD و

Harposporium anguillula RK وPaecilomyces lilacinus RA وP. variotii RD و

T. harzianum RK وT.virid RA . وتم تحليل مجتمع الفطور المضادة للنيماتودا باستخدام

مقاييس التكرار المطلق )Frequency of occurrence, FO( ومتوسط الكثافة العددية

)Population density, PD( وقيم الظهور )Prominence value, PV( فكان الجنس

Paecilomyces االكثر تك ار اًر وعدداً وظهو اًر )FO=90% ، 0.2 مستعمرة، PV=2.4( من بين جميع

األجناس المعزولة أما الجنسين Stylophage و Nematoctonus فكانا األقل تك ار اًر بنسبة %02.

تم في تجربة مخبرية اختبار فعالية ثمانية فطور مضادة للنيماتودا: Arthrobotrys oligospora

RY و A. superba RY و .Aspergillus sp و .Gliocladium sp و Paecilomyces lilacinus RA و P. variotii RD و T. harzianum RK و T.virid RA في مكافحة يرقات

نيماتودا تعقد الجذورMeloidogyne incognita في مركز األعداء الحيوية ومخبر صحة البذور

بالالذقية بزراعتها في أطباق بتري )3 أطباق لكل فطر( تحوي آغار الماء مضافاً له بعد أسبوع من

التحضين 2.1 مل معلق نيماتودي يحوي 12 يرقة حية لكل طبق، وأظهرت النتائج التي تم تحليلها

احصائياً باستخدام برنامج (SPSS (V. 19 عند مستوى ثقة P≤ 0.05( %51( تفوق الفطرين .A oligospora و A. superba في إصابة اليرقات بعد يومين )33% و05% على التوالي( وبعد 5 أيام

من اضافة المعلق )44% و40% على التوالي(، ولم يتم استخالص أي يرقة حية من هاتين المعاملتين

بعد قلب كامل األطباق على أقماع بيرمان في نهاية التجربة. وكذلك تم في تجربة مخبرية ثانية اختبار

فعالية هذه الثمانية فطور المضادة للنيماتودا ً في مكافحة بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita

بنفس الطريقة السابقة لكن مع اضافة 2.1 مل معلق نيماتودي يحوي 12 بيضة لكل طبق، وأظهرت

النتائج تفوق الفطرين P. variotii و P. lilacinus في إصابة البيض بعد يومين )42% و%35

على التوالي( وبعد 5 أيام من اضافة المعلق )45% و44% على التوالي( ولم يتم استخالص أية يرقة

حية ناتجة عن فقس البيض السليم في نهاية التجربة المخبرية بعد قلب كامل االطباق على أقماع

بيرمان.

تم في تجربة أصص تقييم كفاءة 11 فط اًر مضاداً للنيماتودا )Arthrobotrys conoides و .A oligospora و A. superba و.Aspergillus sp و.Gliocladium sp و Monacrosporium eudermatum و Paecilomyces lilacinus 14052 و P. lilacinus RA و P. variotii

وT. harzianum و T. viride( والمبيد الكيميائي أوكساميل في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور .M incognita على نبات البندورة. حيث أضيفت الفطور المحملة على الشعير المعقم إلى التربة قبل 02

أيام من زراعة شتول البندورة وتلويثها بالنيماتود. أخذت القراءات بعد شهرين من الزراعة، وأظهرت

النتائج أن الفطور المختبرة تفاوتت في كفاءتها في تقليل عدد العقد الجذرية وعدد أكياس البيض وعدد

البيض/ كيس البيض والنسبة المئوية للفقس وعدد اليرقات في التربة مقارنة مع الشاهد. فقد كان المبيد

الكيميائي والفطر P. variotii األعلى كفاءة في تقليل عدد العقد الجذرية )55.5 و64.1% على

التوالي( وفي تقليل عدد اكياس البيض )55.5 و53.1% على التوالي( بينما أظهر الفطر .M eudermatum أعلى كفاءة في تقليل عدد البيض/ كيس البيض )24.4%( أما الفطران

.Gliocladium sp و T. viride فأظهرا أعلى كفاءة في تقليل النسبة المئوية للفقس )84.7 و%85.1

على التوالي(، وكان المبيد الكيميائي والفطر A. superba األعلى كفاءة في تقليل عدد اليرقات في

التربة )99.3 و91.3% على التوالي(. وأظهرت النتائج أيضاً أن أعلى زيادة معنوية في طول المجموع

الخضري ووزنه الرطب والجاف كانت في المعاملة M. eudermatum )172.2سم و86.1غ

و13.1غ على التوالي(. لذلك يمكن أن يوصى بدراسة كفاءة الفطور المختبرة حقلياً في مكافحة نيماتودا

تعقد الجذور على البندورة ونباتات أخرى.

III

فهرس المحتويات

المحتوى رقم الصفحة

المقدمة وأهمية البحث

المقدمة 0

مبررات البحث وأهميته 2

أهداف البحث 2

الفصل األول الدراسة المرجعية نيماتودا تعقد الجذورMeloidogyne incognita (Kofoid and White, 1919) Chitwood, 1949 7

أعراض اإلصابة بنيماتودا تعقد الجذور 5

مكافحة نيماتودا تعقد الجذور 02

استخدام المكافحة الحيوية في السيطرة على النيماتودا 00

الفصل الثاني عزل الفطور المضادة لنيماتودا تعقد الجذور M. incognita من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري وتعريفها المقدمة 05

المواد والطرائق 00

جمع العينات 03

عزل الفطور 01

النتائج والمناقشة 04

الفصل الثالث اختبار فعالية بعض الفطور المعزولة مخبرياً في مكافحة يرقات نيماتودا تعقد الجذور M. incognita المقدمة 14

المواد والطرائق 12

النتائج والمناقشة 22

الفصل الرابع اختبار فعالية بعض الفطور المعزولة مخبرياً في مكافحة بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita المقدمة 23

المواد والطرائق 21

النتائج والمناقشة 27

الفصل الخامس اختبار فعالية بعض الفطور المعزولة في تجربة نصف حقلية في البيت المحمي في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita المقدمة 72

المواد والطرائق 74

إكثار الفطور المضادة للنيماتودا 72

إضافة الفطور إلى التربة وزراعة الشتول واج ارء العدوى 77

النتائج والمناقشة 42

االستنتاجات 45

التوصيات 50

المراجع

المراجع العربية 53

المراجع االجنبية 57

الملحقات 024

الملخص باللغة االنكليزية 003

فهرس الجداول

رقم عنوان الجدول رقم الجدول الصفحة

1 مساحة وانتاج وغلة البندورة المزروعة في البي وت المحمية لعام 2112 وتطورها على مستوى القطر خالل 2 الفترة )2112-2112( 2 أهم األمراض واآلفات التي تصيب البندورة S. lycopersicum 4

2 أهم أجناس الفطور المتطفلة على النيماتودا والصفوف التابعة لها 20

4 قرى الساحل السوري المأخوذة منها عينات التربة مع المحافظة التابعة لها 23

5 تكرار االجناس الفطرية المضادة للنيماتودا في عينات التربة المختلفة 24

6 متوسط النسبة المئوية لليرقات المصابة بعد يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق يرقات نيماتودا تعقد 62 الجذور Meloidogyne incognita للمعامالت الفطرية والنسبة المئوية لليرقات المستخلصة )المتوسط ± الخطأ المعياري(

7 متوسط البيض المصاب % بعد يومين وبعد تسعة أيام من إضافة معلق بيض نيماتودا تعقد الجذور 66 Meloidogyne incognita للمعامالت الفطرية ومتوسط النسبة المئوية لليرقات الحية الناتجة عن فقس البيض السليم % )المتوسط ± الخطأ المعياري(

8 متوسط كفاءة المعامالت في مكافحة نيماتودا تعقد الجذور M. incognita في جذور نباتات البندورة 86 %)المتوسط ± الخطأ المعياري( 6 تأثير المعامالت في قراءات النمو لنبات البندورة المعدى بنيماتودا تعقد الجذورM. incognita 87

VII

فهرس األشكال

رقم عنوان الشكل رقم الشكل الصفحة

1 مخطط عزل الفطور المضادة للنيماتودا 27

2 أعضاء اصطياد ونيماتودا مصطادة وأخرى متطفل عليها 22

2 بيض نيماتودا متطفل عليه 22

4 التكرار )FO%( ومتوسط الكثافة العددية )PD( وقيم الظهور )PV( ألجناس الفطور المضادة للنيماتودا 25 المعزولة من تربة البيوت المحمية المزروعة بالبندورة في الساحل السوري

5 األبواغ الكونيدية للجنس Alternaria، والحواجز العرضية والطولية للبوغة واضحة 27

6 الحوامل البوغية وأبواغ الجنس Arthrobotrys 28

7 أبواغ الفطر Arthrobotrys dactyloides 28

8 أبواغ الفطر Arthrobotrys oligospora وتوجد بقايا نيماتودا وتوجد بيضة 26

6 أبواغ الفطر Arthrobotrys superba وتبدو النتوءات الصغيرة واضحة 26

11 الحامل والرأس الكونيدي للجنس Aspergillus 41

11 األبواغ القاربية الشكل الجنس Fusarium 41

12 األبواغ الكونيدية والرؤوس الكونيدية )تبدو ككتلة داكنة( للجنس Gliocladium 42

12 الفطر Harposporium anguillulae متطفل على النيماتودا واألبواغ واضحة والحامل الكونيدي خارج 44 من جسم النيماتودا

14 نيماتودا مصابة خارجة منها هيفات وأبواغ الجنس Nematoctonus 45

VIII

15 الحوامل الكونيدية وسالسل األبواغ الكونيدية للجنس Paecilomyces 47

16 حامل بوغي يحمل في قمته سالسل طويلة من أبواغ الفطر Paecilomyces lilacinus 47

17 سلسلة من االبواغ بيضاوية الشكل للفطر Paecilomyces variotii 48

18 مستعمرة الجنس الفطري Penicillium 46

16 أبواغ الجنس الفطري Stylophage متدرجة والمشيجة خارجة من البوغ، الحامل البوغي ينتهي ببوغة 51 واحدة ثنائية الخلية 21 حوامل وفياليدات وأبواغ الفطر T. harzianum 51

21 حوامل وفياليدات وأبواغ الفطر T. viride 51

22 أبواغ الجنس Verticillium في قمة الحوامل الكونيدية 52

22 مستعمرات الفطور المضادة للنيماتودا المعزولة من تربة البيوت المحمية في الساحل السوري 57

24 مقطع عرضي في النهاية الخلفية ألنثى نيماتودا تعقد الجذور M. incognita 56

25 هيفات الفطر A. superba والفطر A. oligospora تغزو يرقات نيماتودا تعقد الجذورM. incognita 61

26 تطفل الفطر P. lilacinus والفطر P. variotii على بيض نيماتودا تعقد الجذور M. incognita 66

27 مستعمرات الفطور المضادة للنيماتودا المستوردة 76

28 حبوب شعير محملة بالفطور المضادة للنيماتودا ضمن بياشر زجاجية في الحاضنة 77

26 العقد الجذرية للنباتات المعاملة وللنبات الشاهد 85

21 طول المجموع الخضري للنبات المعامل مقارنة مع طول المجموع الخضري للنبات الشاهد )المعاملة 88 بالفطر M. eudermatum والمعاملة بالمبيد الكيميائي oxamyl( 21 تطفل الفطر Paecilomyces على الطور البالغ لألكاروس 62