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CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y ASISTENCIA EN TECNOLOGÍA Y DISEÑO DEL ESTADO DE JALISCO A.C. Caracterización del saco embrionario y estudio de Ca2+ citosólico en el proceso de doble fertilización de Agave TESIS PARA OBTENER EL GRADO ACADÉMICO DE MAESTRO EN CIENCIAS EN INNOVACIÓN BIOTECNOLÓGICA PRESENTA IBT. Ángel Martín Barranco Guzmán COMITÉ TUTORAL Director de Tesis: Dr. Benjamín Rodríguez Garay Dr. Nutan Prasad Rout Dr. Jorge Alberto Verdín Ramos Co- director Asesor Asesor Zapopán, Jalisco, México. Diciembre de 2018 LIBERACIÓN DEL SÍNODO Zapopan, Jalisco, 20 de noviembre de 2018 Mtra. Fátima Ordoñez de la Cruz Coordinador Académico de la Maestría en Ciencias en Innovación tecnológica Guadalajara, Jalisco Los que suscriben integrantes del jurado de exámen de grado del estudiante ÁNGEL MARTÍN BARRANCO GUZMÁN, una vez leída y revisada la tesis titulada “Caracterización del saco embrionario y estudio de Ca2+ citosólico en el proceso de doble fertilización de Agave” aceptamos que la referida tesis revisada y corregida sea presentada por el alumno para aspirar al grado de Maestro en Ciencias en Innovación Biotecnológica durante el exámen correspondiente. Y para que así conste firmamos la presente a los 20 días del mes de noviembre del año 2018. Dr. Benjamín Rodríguez Garay Dr. Nutan Prasad Rout Dr. Jorge Alberto Verdín Ramos Zapopan, Jalisco, 20 de noviembre de 2018 CONSEJO INSTITUCIONAL DE POSGRADO DEL CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y ASISTENCIA EN TECNOLOGÍA Y DISEÑO DEL ESTADO DE JALISCO, A.C. PRESENTE Los que suscriben miembros del comité tutorial del estudiante ÁNGEL MARTÍN BARRANCO GUZMÁN, una vez leída y revisada la tesis titulada “Caracterización del saco embrionario y estudio de Ca2+ citosólico en el proceso de doble fertilización de Agave” aceptamos que la referida tesis revisada y corregida sea presentada por el alumno para aspirar al grado de Maestro en Ciencias en Innovación Biotecnológica durante el examen correspondiente. Y para que así conste firmamos la presente a los veinte días del mes de noviembre del año dos mil dieciocho. Dr. Benjamín Rodríguez Garay Dr. Nutan Prasad Rout Director Co-director Dr. Jorge Alberto Verdín Ramos Asesor Zapopan, Jalisco, 20 de noviembre de 2018 CONSEJO INSTITUCIONAL DE POSGRADO DEL CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y ASISTENCIA EN TECNOLOGÍA Y DISEÑO DEL ESTADO DE JALISCO, A.C. PRESENTE Los que suscriben miembros del jurado del Exámen de Grado del estudiante ÁNGEL MARTíN BARRANCO GUZMÁN “Caracterización del saco embrionario y estudio de Ca2+ citosólico en el proceso de doble fertilización de Agave” aceptamos que la referida tesis revisada y corregida sea presentada por el alumno para aspirar al grado de Maestro en Ciencias en Innovación Biotecnológica durante el examen correspondiente. Y para que así conste firmamos la presente a los veintiséis del mes de noviembre del año dos mil dieciocho. Dra. Antonia Gutierrez Mora. Dr. Jorge Alberto Verdín Ramos Presidente Secretario Dr. Nutan Prasad Rout Vocal La presente tesis de maestría se llevó a cabo gracias a la beca otorgada por el CONACYT al IBT. Ángel Martín Barranco Guzmán. Esta investigación se llevó a cabo con el apoyo del Programa Fronteras de la Ciencia del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT-México), Proyecto 544. AGRADECIMIENTOS A Dios Primeramente, agradezco a Dios, por ayudarme a alcanzar una meta más, por la vida y tiempo que me dio, además de brindarme la capacidad, voluntad e inteligencia para lograr este objetivo. A mi Familia Por el apoyo y los ánimos durante el día a día, y ser la fuente de inspiración para mi superación. Al Dr. Benjamín Rodríguez Garay Mi director de tesis por aceptarme como su alumno, por ser una guía, y sobre todo por apoyar y fomentar el espíritu científico, y de superación en el ámbito de la investigación en mí. Al Dr. Nutan Prasad Rout y al Dr. Jorge Verdín Por las aportaciones de conocimientos y sus valiosas sugerencias que contribuyeron directamente a la realización de este trabajo y porque siempre tuvieron tiempo y paciencia para ayudarme a resolver mis dudas. Al CIATEJ Por abrirme las puertas para realizar un posgrado y brindarme sus instalaciones para desarrollar mis estudios. ÍNDICE INTRODUCCIÓN GENERAL ........................................................................................................ 1 CAPÍTULO I ...................................................................................................................................... 3 CARACTERIZACIÓN DEL GAMETOFITO FEMENINO DE AGAVE COLIMANA SUBGÉNERO LITTAEA .................................................................................................................. 3 RESUMEN ......................................................................................................................................... 3 ABSTRACT ........................................................................................................................................ 4 1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................... 5 2. ANTECEDENTES ......................................................................................................................... 8 2. 1. TAXONOMÍA DEL GÉNERO AGAVE ........................................................................................... 8 2.2. TAXONOMÍA DE AGAVE COLIMANA ............................................................................................ 9 2.3. REPRODUCCIÓN SEXUAL ......................................................................................................... 10 2.4. FORMACIÓN DEL GAMETOFITO FEMENINO EN ANGIOSPERMAS .............................................. 11 2.4.1. Megasporogénesis ........................................................................................................... 12 2.4.2. Megagametogénesis ........................................................................................................ 13 2.5. LA FORMACIÓN DEL GAMETOFITO FEMENINO EN ASPARAGACEAE (ANTERIORMENTE AGAVACEAE) ................................................................................................................................. 15 2.5.1. Desarrollo del gametofito femenino en Agave tequilana weber ..................................... 15 3. JUSTIFICACIÓN ........................................................................................................................ 16 4. HIPÓTESIS .................................................................................................................................. 17 5. OBJETIVOS ................................................................................................................................. 17 5.1. OBJETIVO GENERAL ................................................................................................................ 17 5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS ......................................................................................................... 17 6. METODOLOGÍA ........................................................................................................................ 18 6.1. MATERIAL VEGETAL ............................................................................................................... 18 6.2. CARACTERIZACIÓN DEL GAMETOFITO FEMENINO .................................................................. 18 6.2.1. Fijación de los óvulos ..................................................................................................... 18 6.2.2. Tinción de los óvulos ....................................................................................................... 19 6.2.3. Deshidratación de los óvulos .......................................................................................... 19 6.2.4. Clarificación de los óvulos y estudio microscopia ......................................................... 19 7. RESULTADOS ............................................................................................................................ 20 7.2. MEGASPOROGÉNESIS .............................................................................................................. 21 7.3. MEGAGAMETOGÉNESIS ........................................................................................................... 23 8. DISCUSIÓN ................................................................................................................................. 26 9. CONCLUSIÓN ............................................................................................................................ 28 10. PERSPECTIVAS ....................................................................................................................... 28 11. REFERENCIAS ......................................................................................................................... 29 CAPITULO II .................................................................................................................................. 35 DISTRIBUCIÓN Y LOCALIZACIÓN DE CALCIO CITOSÓLICO DURANTE LA DOBLE FERTILIZACIÓN DEL GÉNERO AGAVE ................................................................................ 35 RESUMEN ....................................................................................................................................... 35 ABSTRACT ...................................................................................................................................... 36 1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................