PROYECTO MARCO

MONITOREO DE MICROALGAS DE AMBIENTES COSTEROS DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES Y MONITOREO DE TOXINAS EN MOLUSCOS BIVALVOS

Directora Científica: Eugenia A. Sar1 Coordinación Técnica: Andrea Lavigne2, Ramiro Duffard2 Grupo responsable: Inés Sunesen1, Andrea Lavigne2 Grupo responsable de muestreo: Inés Sunesen1, Andrea Lavigne2

1 Departamento Científico Ficología, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, UNLP 2 Ministerio de Asuntos Agrarios, Dirección Provincial de Pesca.

MORTANDAD MASIVA DE SARACAS (BREVOORTIA AUREA) EN LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES INTRODUCCIÓN A partir del 4 de marzo se produjo una varazón masiva de saracas, Brevoortia aurea, en el área costera de la Provincia de Buenos Aires entre Samborombón y Mar Azul, República Argentina y en el área costera de los Departamentos de Canelones y Montevideo, República Oriental del Uruguay. Tanto el Instituto Nacional de Investigaciones y Desarrollo Pesquero (INIDEP) asesora de la Subsecretaría de Pesca y Acuicultura de la Nación (SSPyA), del Consejo Federal Pesquero (CFP) y de la Cancillería Argentina, Argentina, como la Dirección Nacional de Recursos Acuáticos (DINARA) dependiente del Ministerio de Agricultura Ganadería y Pesca de Uruguay determinaron que la presunción de que el evento se hubiera producido por un descarte de la flota pesquera comercial podía ser desestimada. La estimación de biomasa de peces muertos depositados en la costa argentina fue de 3000 toneladas (informe del INIDEP del 19 de marzo), sin embargo varazones menores continúan aún y fueron observadas en Mar Azul durante la campaña del del 30-03-15 (cuyo análisis de muestras está en procesamiento). Para esas fechas algunos peces llegaban vivos a la costa con señales de asfixia, por lo que no puede presumirse que hubieran muerto en aguas próximas a las playas tiempo antes.

1

El objetivo de este informe preliminar es presentar resultados de las observaciones del tracto digestivo, branquias y eventuales lesiones del cuerpo de los peces varados recogidos en la última campaña y presentar un análisis de los fitopláncteres hallados en las muestras colectadas en enero, febrero y marzo, que hayan sido previamente considerados como nocivos no toxígenos o toxígenos, de los que se halle referencias que los asocien a mortandad masiva de peces.

MATERIAL Y MÉTODOS El material utilizado fue colectado los días 13-01-2015, 15-02-2015 y 16-04- 2015 (correspondiente a los Informes ya enviados 84, 85 y 86 respectivamente) en: - San Clemente del Tuyú, muestras cualitativa (2) y cuantitativa, colectadas desde el muelle - Santa Teresita, muestras cualitativa (2) y cuantitativa, colectadas desde el muelle - Villa Gesell, muestras cualitativa (2) y cuantitativa, colectadas desde el muelle - Mar Azul, muestras cualitativa (2) y cuantitativa, colectadas desde la orilla, en Calle 31 o 38 y playa

Las muestras cualitativas fueron tomadas con red de plancton de 30 µm de apertura de malla, dispuestas en frascos de 125 ml por duplicado, una de ellas fue inmediatamente fijada con formol al 4 % (concentración final) y la otra mantenida viva en frío para su observación in vivo en el laboratorio. Las muestras cuantitativas fueron tomadas con botella Van Door, dispuestas en frascos de 250 ml, inmediatamente fijadas con formol al 0.4 % (concentración final). Las muestras cualitativas fueron analizadas con microscopio óptico Nikon Microphot FX con contraste de fase y microscopio invertido Zeiss Axiovert 40CFL con contraste de fases. Las muestras cuantitativas fueron analizadas para estimar el número de células por litro con microscopio invertido Zeiss Axiovert 40CFL según técnica Utermöhl.

2

Paralelamente fueron tomadas muestras de moluscos bivalvos filtradores que suelen ser vectores comunes de ficotoxinas con el objeto de remitirlas a SENASA para análisis de PSP y DSP. Las colectas fueron realizadas en: - Santa Teresita: Mesodesma mactroides (almeja amarilla) del intermareal. - Mar Azul.: Donax hanleyanus (berberecho) del intermareal.

Adicionalmente fueron colectados 4 peces (Breevortia aurea) dos de ellos fueron recogidos por guardavidas que contactan con la Dirección Provincial de Pesca en caso de mortandad masiva de fauna o de discoloraciones evidente a ojo desnudo, y los otros dos fueron hallados en la playa recientemente varados. Las muestras de moluscos y peces colectadas fueron mantenidas en freezer hasta su envío al laboratorio de ficotoxinas de SENASA y procesamiento en la División Ficología. En el laboratorio los peces, de 38 y 35 cm de largo, fueron disecados retirándoles los opérculos y luego las branquias, éstas fueron analizadas bajo lupa. A su vez se retiró una pared muscular lateral y el tracto digestivo, esófago, estómago e intestino como una sola pieza. Luego se separó el estómago pilórico y se abrió mediante una incisión longitudinal, el contenido estomacal fue analizado bajo microscopio. Finalmente se analizó el tejido alrededor de lesiones halladas en la superficie del cuerpo de uno de los peces colectado por los guardavidas.

Este muestreo, que realizamos en salvaguarda de la salud pública cerca de la línea de costa en que se encuentran los bancos de moluscos a los que

3 los lugareños y locales tienen acceso (a fin de prevenir intoxicaciones eventuales por consumo de éstos), podría ser limitado para reflejar la composición y estructura del fitoplancton del área en que se mueven los cardúmenes de saracas.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Análisis de los peces colectados durante el episodio La observación de las branquias con lupa y microscopio no permitió hallar señales de lesiones o sangrados. El análisis microscópico del escaso contenido pilórico hallado en el espécimen disecado permitió establecer la presencia de especies de Bacillariophyta, Clase (diatomeas centrales) pertenecientes a los géneros Coscinodiscus, Thalassiosira, Melosira, Actinocyclus como las más abundates y de la Clase (diatomeas pennales arafidales) perteneciente al género Thalassionema, menos abundantes. Adicionalmente se encontraron especies del género Oocystis, Chlorophyta cenobiales (Orden Chlorococcales) características de agua dulce y no fueron hallados dinoflagelados o copépodos. Si bien el espectro trófico hallado en este análisis preliminar es más acotado que el descripto por Giamgiobbee & Sánchez (1993) los organismos dominantes son concordantes con los hallados en dicho estudio. Alguno de los peces colectados por los guardavidas, mostraron lesiones en la superficie del cuerpo, aparentemente debidas al mecanismo de recolección con un elemento con pinches. El tejido alrededor de estas lesiones fue analizado en busca de organismos patógenos como Aphanomyces, Saprolegnia (Orden , Clase , Phylum Oomycota) frecuentemente encontrados en las lesiones ulcerativas que se producen en saracas del Atlántico Norte, Brevoortia tyrannus (Dykstra & Kane 2000), muchas veces vinculada con mortandad masiva provocada por Pfiesteria piscicida. Tango et al. (2006) mostraron una fuerte asociación entre la incidencia de lesiones en saracas y la presencia de especies de Pfiesteria, sobre la base del análisis de datos de muchos años de monitoreo en la Bahía de Chesapeake y afluentes. Los autores observaron que la asociación estadísticamente detectada no debe inferirse como una relación causa-efecto, pero sugirieron que la asociación podría ser una herramienta de gestión útil para guiar el muestreo de las

4 especies del género Pfiesteria, Orden Peridiniales, Familia Pfiesteriaceae (Marshall et al. 2006). El análisis mediante microscopio óptico de los tejidos alrededor de las lesiones halladas en los peces colectados por los pescadores fue negativo para hifas de Oomycota.

Análisis de los moluscos por bioensayo en ratón durante el período enero-marzo Todas las muestras enviadas a SENASA para determinar toxinas PSP dieron bioensayos negativos y las muestras enviadas para determinar DSP dieron bioensayos positivos con concentraciones del orden de 102 cel l-1 a 103 cel l-1 de Dinophysis acuminata Claparède et Lachmann y/o D. caudata Saville-Kent como en anteriores episodios de toxicidad por DSP descriptos por Sar et al. (2010, 2012) y Sunesen et al. (2014).

Análisis de pláncteres citados como productores de mortandad masiva de peces presentes en los muestreos de enero (informe 84), febrero (informe 85) y marzo (informe 86). Diatomeas: Asterionellopsis glacialis (Castracane) Round es una especie que ha sido asociada a un evento de mortandad de peces ocurrido en Itanhaém, Brasil por Zavala-Camin & Yamanaka (1980). Sin embargo, en la costa de la Provincia de Buenos Aires a pesar de ser la especie más frecuente en todas las estaciones de muestreo y de llegar a producir discoloraciones visibles a ojo desnudo con concentraciones del orden de 108 cel l-1, nunca se la encontró relacionada a eventos de mortandad de fauna, sólo a la formación de manchas marrones en la superficie del agua y sobre la arena de la costa provocando alarma social en los meses de mayor afluencia turística (Sunesen & Sar 2007), algo similar fue descripto para la costa uruguaya (Méndez & Ferrari 2002). A. glacialis, que es un componente altamente frecuente del fitoplancton del área desde 2008 a la fecha, fue encontrada en todos los muestreos analizados para la realización de este informe en concentraciones del orden de 103 cél l-1 / 106 cél l-1 muy por debajo de las concentraciones que producen discoloraciones visibles a ojo desnudo bajo las cuales pueden producir efectos nocivos. Sobre

5 esta base consideramos que la especie no estuvo asociada al evento de mortandad de peces que analizamos.

Leptocylindrus minimus Gran, que es un componente frecuente y eventualmente abundante del fitoplancton del área desde 2008 a la fecha, es una especie que ha sido asociada a la muerte de salmones y de truchas en cautiverio en el centro y sur del Archipiélago de Chiloé (Clément 1994, Rivera et al. 2002) bajo concentraciones mayores a 1·107 cél l-1. Durante el período en que hemos realizado el monitoreo (2008 a la actualidad) es un componente bastante frecuente y eventualmente abundante del fitoplancton costero, que no ha sido asociado a floraciones visibles a ojo desnudo ni a mortandad de peces en el área monitoreada.

L. minimus fue encontrada en todos los muestreos analizados para la realización de este informe en concentraciones del orden de 102 cél l-1 / 106 cél l-1, por debajo de las concentraciones que producen discoloraciones visibles a ojo desnudo bajo las cuales pueden producir efectos nocivos. Sobre esta base consideramos que la especie no estuvo asociada al evento de mortandad de peces que analizamos.

Dinoflagelados: Prorocentrum minimum (Pavillard) Schiller, es una especie productora de una hepatotoxina, llamada venerupina, la cual puede causar intoxicación por consumo de moluscos provocando desórdenes gastrointestinales a humanos y de DSP según Faust & Gulledge (2002). Sin embargo, Heil et al. (2005) señalan basándose en investigaciones llevadas a cabo por distintos autores que no hay evidencia definitiva de que P. minimun fuera la especie implicada en el brote de VSP (Venerupine Shellfish Poissoning) y descartan que haya sido responsable de la producción de DSP descripta para Holanda por Kat (1979) porque un análisis de la composición del fitoplancton permitió revelar la presencia de Dinophysis acuminata, especie reconocida como productora de DSP sobre la base de análisis de moluscos y fitoplancton (Lee et al. 1989). Según Heil et al. (2005) aunque la mayoría de los clones de P. minimum en cultivo son no tóxicos, la toxicidad asociada a los clones de Francia (Grzebyk et

6 al. (1997) por ejemplo, obligan a señalarla como un potencial riesgo para la salud humana. Esta especie fue también reportada como productora de mortandad de peces por Steindinger & Tangen (1996), posiblemente debida a falta de oxígeno en la columna de agua durante el declinio de la floración (Heil et al. 2005). Carreto et al. (2008) la han citado asociada a mortandad de peces en el Norte de la Provincia de Buenos Aires sin detalles acerca del episodio. Sin embargo, la especie alcanzó una concentración de 1.5 107 cél l-1 en Mar de Ajó en agosto de 1998 según Akselman (1999) y parece haber producido mortandad de peces según Carreto et al. (datos no publicados). P. minimum, que es un componente común y eventualmente abundante del fitoplancton del área desde el 2008 a la fecha, es una especie que ha sido encontrada en todos los muestreos analizados para la realización de este informe sólo en una de las cuatro estaciones de muestreo, en concentraciones del orden de 102 cél l-1 / 103 cél l-1, muy por debajo de las concentraciones a las que producen discoloraciones visibles a ojo desnudo bajo las cuales pueden producir efectos nocivos. Sobre esta base consideramos que la especie no estuvo asociada al evento de mortandad de peces que analizamos.

Pfiesteria Steidinger & Burkholder es un género de dinoflagelados pequeños, con una teca muy poco visible, heterótrofo, que pasa parte de su ciclo de vida en los sedimentos del fondo y otra parte en la columna de agua de ambientes estuarinos o costeros.

Dos especies de Pfiesteria, Pfiesteria piscicida Steidinger & Burkholder y Pfiesteria shumwayae Glasgow & Burkholder, han sido asociadas a mortandad masiva de peces, en muchos casos de cardúmenes de Brevoortia tyrannus, una saraca del Atlántico Norte, con densidades de 4·102 cél l-1 a 103 cél l-1, raramente 104 cél l-1 en aguas costeras de Carolina del Norte y Maryland entre 1991 y 1998 (Burkholder & Marshall 2012) y estuarios de Florida (Noga 2000). Burkholder & Marshall (2012) demostraron experimentalmente que las células flageladas de ambas especies tienen una fuerte atracción quimiosensorial hacia las excretas y mucus de peces. El ataque a los peces puede producirse por producción de toxinas lábiles Pfiesteriatoxinas (PfTxs) y por ataque físico mientras se alimentan de la epidermis y otros tejidos del pez.

7

Rublee et al. (2004) detectaron especies de Pfiesteria mediante métodos basados en PCR en 19 de 22 países (no incluyendo los EE.UU.) distribuidos en seis continentes, presentando un mapa de distribución en que ambas especies son discriminadas (ver debajo), en el que figura Pfiesteria shumwayae para el área costera norte de la provincia de Buenos Aires, probablemente la muestra con la que trabajaron procede de Mar del Plata (considerando a quien agradecen de Argentina).

La figura fue obtenida de Rublee et al. (2004)

Pfiesteria spp., no han sido halladas en el fitoplancton del área desde 2008 hasta 2015, sin embargo en el muestreo del 16-03-15 fueron encontrados dos quistes secundarios dentro de la pared del quiste primario, lo que muestra un gran parecido con la Fig. 1 D de Parrow & Bulkholder (2003).

Fotos obtenidas de la campaña del 18-03-2015.

8

Foto obtenida de Parrow & Burkholder (2003)

Visto que Pfiesteria piscicida y P. shumwayae han sido vinculadas a mortandad masiva de peces libres en varias partes del mundo, en muchos casos de saracas, y considerando que es una especie pequeña de la que no tenemos registro desde 2008 hasta la fecha excepto por el quiste cuya figura se incluye, con tecas poco visibles, que son reportadas por la literatura en baja concentración en la columna de agua, no debería descartarse la posibilidad de que haya estado asociada al evento de mortandad de los peces motivo de este informe. Deberían buscarse quistes en sedimentos y hacerse experimentos de cultivo y bioensayos con peces (Burkholder et al. 2001), lo que va más allá de las posibilidades de muestreo de nuestro proyecto de monitoreo y de las condiciones de bioseguridad que tiene nuestro laboratorio.

Raphidophyceae Chatonella marina (Subrahmanyan) Y. Hara & Chihara (≡ Hornelia marina Subrahmanyan) ha sido citada por Subrahmanyan (1954) como causante de mortandad masiva de peces y otros organismos marinos en aguas frente a la costa de Malabar, India y Hallegraeff et al. (2008) la vincularon con mortandad de atunes rojos (Thunnus maccoyii) de cultivo en el Sur de Australia. Según Kahn et al. (1998) esta especie es uno de los flagelados más nocivos productores de mareas rojas, es la especie responsable de la mortandad masiva de jureles de cultivo en aguas costeras japonesas y es productora de neurotoxinas lipofílicas semejantes a las brevetoxinas.

9

Los mecanismos por los que producen mortandad de peces aún no están claros, pero la asfixia es la causa última de la muerte de éstos. Hay muchas evidencias que apuntan hacia la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS, por ejemplo superóxidos), que son responsables de la lesión de los tejidos y la producción de moco en las branquias que conduce a la muerte de los peces (Imai & Yamaguchi 2012). Onoue & Nozawa (1989) determinaron por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) que las toxinas producidas por las especies de Chattonella son brevetoxinas (Pbtxs), sin embargo, Hallegraeff & Hara (1995) consideraron que la naturaleza de las toxinas producidas por estas especies deberían ser confirmadas mediante espectrometría de masa. Cortés-Altamirano et al. (2006) reportaron una mortandad masiva de peces, la mayoría de ellos pelágicos (Trachinotus paitensis), asociada a un bloom de Chattonella marina y Ch. aff. ovata en Sinaloa, México. En este trabajo los autores analizaron la tercera floración ocurrida entre el 26 de abril y 12 de mayo determinando que ésta se produjo con una concentración máxima de 7.5 105 cél l-1, concentración que representaba el 46% de la concentración del fitoplancton total. Chattonella marina, que no había sido hallada en el fitoplancton del área desde 2008 hasta comienzos de 2015, fue encontrada en todos los muestreos analizados para la realización de este informe en concentraciones del orden de 103 cél l-1 / 104 cél l-1, muy por debajo de las concentraciones en que producen mortandad de peces según la literatura consultada. Visto que Chattonella marina ha sido vinculada a mortandad masiva de peces libres y en cautiverio en varias partes del mundo, y considerando que es la única especie de la que no tenemos registro desde 2008 hasta que ocurrió el episodio de mortandad masiva de saracas en el área norte de la costa de la Provincia de Buenos Aires y que ha persistido en el fitoplancton desde enero hasta marzo (en que todavía se varaban peces moribundos en las playas), consideramos que ella podría estar asociada al evento de mortandad de los peces motivo de este informe. Con los elementos con que contamos hasta el momento no podemos pasar del nivel de la presunción, ya que haría falta obtener cultivos de Chattonella

10 marina, y constatar si se hallan brevetoxinas en dichos cultivos y en los peces recogidos durante el evento.

Fotos obtenidas de las muestras de la campaña de fecha 16-03-15.

Esta especie es productora de quistes, por lo que sería importante analizar sedimentos de fondo a fin de detectarlos, cuantificarlos y procurar ponerlos en cultivo. La muestra de peces remanente de este análisis ha sido enviada a SENASA para el análisis de brevetoxinas por bioensayo ratón. Los resultados de este análisis aún no están disponibles.

CONSIDERACIONES FINALES Chaetonella marina es la especie más probablemente asociada a la mortandad masiva de saracas sea por producción de especies reactivas de oxígenos o de toxinas, aún cuando no alcanzó la concentración descripta en episodios ocurridos en otras partes de mundo. Para establecer una asociación más firme estamos esperando los resultados del bioensayo ratón para brevetoxinas y necesitaríamos aislarla y ponerla en cultivo a fin de hacer análisis de toxinas en los cultivos. Asimismo deberíamos hacer un estudio histopatológico de las branquias de los peces procedentes del episodio a fin de establecer eventuales daños en las branquias.

REFERENCIAS Akselman R. 1999. Dinofíceas toxigénicas o potencialmente nocivas en la plataforma argentina: un reporte actualizado sobre su estudio. Conferencias sobre aspectos metodológicos en algas dictadas en las XXVI Jornadas Argentinas de

11

Botánica, Rio Cuarto, Córdoba. Notas Botánicas, Sociedad Argentina de Botánica: 13-20. Burkholder J. M. & Marshall H. G. 2012. Toxigenic Pfiesteria species - Update on biology, ecology, toxins and impacts. Harmful Algae 14: 196-230. Burkholder J. M., Marshall H. G., Glasgow H. B., Seaborn D. W. & Deamer-Melia N. J. 2001.The standardized fish bioassay procedure for detecting and culturing actively toxic Pfiesteria, used by two reference laboratories for Atlantic and Gulf Coast states. Environmental Health Perspectives 109: 715-730. Carreto J. I., Carignan M. O., Montoya N. G. 2008. Florecimientos de algas nocivas. In: Boltovskoy D. (ed.), Atlas de Sensibilidad Ambiental del Mar y la Costa. Clément A. 1994. Harmful blooms of Leptocylindrus minimus in Southern Chile. IOC of UNESCO, Harmful Algae News 8: 1. Cortés Altamirano R., Alonso Rodríguez R. & Sierra Beltrán A. 2006. Fish mortality associated with Chattonella marina and C. cf. ovata (Raphidophyceae) blooms in Sinaloa (Mexico). Harmful Algae News 31: 6-7. Dykstra M. J. & Kane A. S. 2000. Pfiesteria piscicida and ulcerative micosis of Attlantic menhaden - current status of understanding. Journal of Aquatic Animal Health 12 (1): 18-25. Faust M. A. & Gulledge R. A. 2002. Identifying Harmful Marine Dinoflagellates. Smithsonian Institute Contributions from the United States National Herbarium 42: 1-144. Giamgiobbe A. & Sánchez F. 1993. Alimentación de la saraca (Brevoortia aurea). Frente Marítimo 14, A: 71-80. Grzebyk D., Denardou A., Berland B. & Pouchus Y.F. 1997. Evidence of a new toxin in the red-tide dinoflagellate Prorocentrum minimum. Journal of Plankton Research 19 (8): 1111-1124. Hallegraeff G.M. & Hara Y. 2003. of harmful marine . In: Hallegraeff G. M., Anderson D. M. & Cembella A. D. (eds.), Manual on Harmful Marine Microalgae. UNESCO, Paris, pp. 511-522. Hallegraeff G. M., Munday B., Baden D., Whitney P. L. 1998. Chattonella marina () bloom associated with mortality of cultured bluefin tuna (Thunnus maccoyii) in south Australia. In: Reguera B., Blanco J., Fernandez M. L., Wyatt T. (eds.), Harmful Algae. Xunta de Galicia and IOC-UNESCO, Vigo, Paris, pp. 93–96. Heil C. A., Glibert P. M. & Fan Ch. 2005. Prorocentrum minimum (Pavillard) Schiller: A review of a harmful species of growing worldwide importance. Harmful Algae 4 (3): 449-470. Imai I. & Yamaguchi M. 2012. Life cycle, physiology, ecology and red tide occurrences of the fish-killing raphidophyte Chattonella. Harmful Algae 14: 46-70. Kahn S., Arakawa O. & Onoue Y.1998. Physiological investigations of a neurotoxin producing phytoflagellate, Chattonella marina (Raphidophyceae). Aquaculture Research 29: 9–17 Kat M. 1979. The occurrence of Prorocentrum species and coincidental gastointestinal illness of mussel consumers. In: Taylor, D. L., Seliger, H. H. (eds.), Toxic Dinoflagellate Blooms, Developments in Marine Biology, Vol. 1. Elsevier, North- Holland, New York, pp. 215-220. Lee J. S., Igarashi T., Fraga S., Dahl E., Hovgaard P. & Yasumoto T. 1989. Determination of diarrhetic shellfish toxins in various dinoflagellate species. Journal of Applied Phycology 1(2): 147-152. Marshall H. G., Hargraves P. E., Elbrächter M., Burkholder J: M., Parrow M. W., Allen E. H., Knowlton V. M., Rublee P. A., Hynes W. L., Egerton T. A., Remington D. L., Wyatt K. B., Cone K. J., Lewitus A. J. & Henrich V. C. 2006. Taxonomy of Pfiesteria (Dinophyceae). Harmful Algae 5: 481-496. Méndez S. & Ferrari G. 2002. Floraciones algales nocivas en Uruguay: antecedentes, proyectos en curso y revisión de los resultados. In: Sar, E. A., Ferrario M. E. &

12

Reguera B. (eds.), Floraciones algales nocivas en el cono sur americano. Instituto Español de Oceanografía, Vigo, España, pp. 269-288. Noga E. J. 2000. Skin ulcers in fish: Pfiesteria and other etiologies. Toxicologic Pathology 28 (6): 807-823. Onoue Y. & Nozawa K. 1989. Separation of toxin from harmful red tides occurring along the coast of Kagoshima Prefecture. In: Okaichi T., Anderson D.M. & Nemoto T. (eds.), Red Tides: Biology, Environmental Science and Technology. Elsevier, New York, pp. 371–374. Parrow M. W. & Burkholder J. M. 2003. Reproduction and sexuality in Pfiesteria shumwayae (Dinophyceae). Journal of Phycology 39: 697-711. Rivera P., Cruces F. & Clement A. 2002. Leptocylindrus minimus Gran (Bacillariophyceae): morfología y distribución en Chile. Gayana Botánica 59: 7- 11. Rublee P. A., Allen C., Schaefer E., Rhodes L., Adamson J., Lapworth C., Burkholdes J. & Glasgow H. B. 2004. Global distribution of toxic Pfiesteria complex species detected by PCR assay. In: Steidinger, K. A., Landsberg J. H., Tomas C. R., Vargo G. A. (eds.), Harmful Algae 2002. Fl. Fish and Wildlife Cons. Commun., Fl. Inst.Oceanogr., Inter-governmental Oceanographic Commission of Unesco, St. Petersburg, Florida, pp. 320-322. Steindinger K.A. & Tangen.K. 1996. Dinoflagellates. In: Tomas,C.R. (ed.), Identifying Marine and Dinoflagellates. Academic Press, London, pp. 387-570. Sar E. A., Sunesen I., Goya A. B., Lavigne A. S., García C. & Lagos N. 2012. First report of Diarrhetic Shellfish Toxins in mollusks from Buenos Aires Province (Argentina) associated to Dinophysis spp.: Evidence of Okadaic acid, Dinophysistoxin-1 and Acyl-derivatives. Boletín de la Sociedad Argentina de Botánica 47 (1-2): 5-14. Sar E. A., Sunesen I., Lavigne A. S. & Goya A. B. 2010. Dinophysis spp. asociadas a detección de toxinas diarreicas en moluscos (DSTs) y a intoxicación diarreica en humanos (Provincia de Buenos Aires, Argentina). Revista de Biología Marina y Oceanografía 45 (3): 451-460. Subrahmanyan R. 1954. On the life-history and ecology of Hornellia marina gen. et sp. nov., (Chloromonadineae), causing green discoloration of the sea and mortality among marine organisms off the Malabar coast. Indian Journal of Fisheries 1: 182-203. Sunesen I., Lavigne A. S., Goya A. & Sar E. A. 2014. Episodios de toxicidad en moluscos de aguas marinas costeras de la Provincia de Buenos Aires (Argentina) asociados a algas toxígenas (Marzo de 2008-Marzo de 2013). Boletín de la Sociedad Argentina de Botánica 49 (3): 327-339. Sunesen I. & Sar E. A. 2007. Diatomeas marinas de aguas costeras de la provincia de Buenos Aires (Argentina). III Géneros potencialmente nocivos Asterionellopsis, Cerataulina, Ceratoneis y Leptocylindrus. Revista Chilena de Historia Natural 80: 493-507. Tango P., Magnien R. Goshorn D., Bowers H., Michael B., Karrh R. & Oldach D. 2006. Associations between fish health and Pfiesteria spp. in Chesapeake Bay and mid-Atlantic estuaries. Harmful Algae 5: 352-362. Zavala-Camin L. A. & Yamanaka N. 1980. Notas sobre um caso de mortandade de peixes, ocorrida em Itanhaém, São Paulo, Brasil. Boletim do Instituto Oceanografico 29: 377.

La Plata, 04-04-2015 Eugenia Sar Inés Sunesen 13

Andrea Lavigne Jonás Tardivo

14