日薬 理誌64,186～198(1968)

TectoridinとTectorigeninの 薬 理 作 用 に つ い て

江 暗 俊 治

岐 阜 大 学 医 学 部 薬 理学 教 室 〔主任 藤 村 一 教 授 〕 (昭 和43年1月19日 受 付 〔特〕)

緒 君

種 々のFlavonoidsの 薬 理学 的 作 用 につ い て は1927年 以 来 多 くの研 究 者 に よっ て 報 告 され て きた.特 に1944 年Griffith,Couch&Lindauerら に よ って,Flavonoidsの 一 つ で あ るRutinがVitaminPの 本 態 で あ る Hesperidinと 化 学 的 に 近似 してお り,Capillarystabilizerと して 同 様 の作 用 を 有す る ことが 報 告 され ,さ ら にShannoに よ う確認 され,そ の後 も広 く検討 が 加 え られ て きた1)2). 一 方1928年 以 来 ,Duranお よびMcCleanら は 組 織 の透 過 性 を 矯 め,細 菌 感 染 時 に 重 要 な 役割 を示 す 拡 散 麹 子 の存 在 を 発 表 し,さ らにChain&Drthieが 結合 組織 中 の ム コ多糖 体 であ る ピアル ロ ン酸 を 分 解す るHy aluronidaseが 拡 散 因子 と同 一 物 質 で あ る ことを 認 め た3)4)5).

ま た,1929年,Beiler&Martinはin vitroで,1951年 加 藤6)はin vivoで,FlavonoidsのCapillary stabilizerと し て の 作 絹 機 構 の 一 つ が そ の 抗Hyaluronidase作 用 で あ る こ と を 報告 し,そ の 後 も多 くの研 究 が

続 け ら れ て き た.

IsoflavoneはFlavoneと 類 似 の 構 造 を 有 す る3位 に 核 置 換Phenyl基 の 入 っ たChromoneで あ り,Iso

flavone配 糖 体 と し て はTectoridin,Daidzin,Genistin,Ononin,Iridinら が 知 ら れ て い る.そ し て そ の 作

用 につ い て は 教 室 の 榊 原7)8)が 射 干 よ り抽 出 し たTectoridi夏 に唾 液 分 泌亢 進 作 用 を,Cheng ef al9)は 種 々 の IsoHavone中Daid2einに 最 も強 いEstrogenicActivityを,ま たCurnowetal10)もGenisteinに 間 様 の

作 用 の あ る こ と を 述 べ て い る し,そ の 後 柴 田 等11)は 葛 根 中 のDaidzeinにPapaverineよ う の 鎮 痙 作 用 の あ る

こ と を 報 告 し た.し か し そ の 他 の 作 用 に 関 し て は ほ と ん ど 報 告 を み な い の で,主 と し て 位 置 異 性 体 で あ る 各 種

Flavoneな ら び にFlavone配 糖 体 と の 比 較 に お い てTectoridinお よ びTectorigeninの 薬 理 作 用 を 検 討 し た

の で 報 告 す る.

実 験 材 料

Tectorldm(以 下Tec)お よびTectorlgenin(以 下Tec-genin)は1928年 柴 田 等12)13)に よ り 鳶 尾(Iris tectorn Maxim)か ら 抽 出 さ れ,そ の 構 造 が 決 定 さ れ た.ま た そ の 後,窮 竿(Rhigonzβelamcmda)に も 含

ま れ て い る こ と が 知 られ て い る14).な お そ の 他 のIsoflavone(以 下Isoeav.)お よ び 比 較 の た め に 本 実 験 に 使 用

し たFlavone誘導 体(以 下Flav.)を 一 括 し て 記 載 す る15)16).

次 に 基 質 と し て は 人臍 帯 よ り抽 出 切 した ビ ア ル ロン 酸(以 下HA)な ら び に ピ ア ルロ ン 酸 カ リ(東 京化 成,

和 光 純 薬)の 製 品 を,ま た 酵 素 と し て 用 い たHyaluronidase(以 下Hdase)は ス プ ラ ー ゼ(持 田 製 薬)ま た は ハロ ダ ー ぜ(武 照 薬 品)を,そ れ ぞ れ醋 酸,醋 酸Na緩 衡 液(pH5.86)に 溶 解 し た.

その他実験に使用した薬物および本文 中略号を用いたものについて記述すると以下のごとくである.

Thiogiycolic acid(TGA),Cysteine(Cyst),Monoiodo acetic acid(MIAA),Paranitrophenoi(PNP) ,

Phenylbutazone-Na(PB-Na),5-n-Butyl-1-cyclohexyl-2,4,6-trioxoperhydropyrimidin-Na(BCP-Na) , Aspirin(As)・Aminopyrine(A),Carrageenin(Penick社 製),Methyl hexabital-Na(MHb-Na),Diethy1- stirbestrol(DESS). TectoridinとTectorigenin187

Tectoridin : 5, 4'-OH, 6-OCH3, 7-0-glucose Rutin(Rt) : 3-0-rutinose, 5,7,3',4'-OH Tectorigenin : 5,7,4'-OH, 6-OCH3 Ouercetin(Qc.) : 3,5,7,3',4'-OH Genistin : 5,4'-OH, 7-0-glucose Myricitrin(Mc.) : 3-0-rhamnose, 5,7,3',4',5'-OH Genistein : 5,7,4'-OH Myricetin(Mce.) : 3,5,7,3',4',5'-OH Daidzin : 7-0-glucose, 4'-OH Hesperidin(Hp.) : 5,3',4'-OH, 7-0-rutinose Daidzein : 7,4'-OH Methylhesperidin(MHp.) : {Hp.}OCH3 Ononin : 7-0-glucose, 4'-OCH3 Baicalin(Bc.) : 5,6-OH, 7-0-glucuronic acid Formononetin : 7-OH, 4'-OCH3 Baicalein(Bc-ein) : 5,7-OH

実 験 方 法

〔1〕 抗Hdase作 用 に つ い て a)inかitro実 験18,19)

基 質 と し て2mg/mlのKAlml,酵 素 液 と し てHdaseO.01mg/m1の1m1(40v.R.u.)を37℃ の 恒 温

槽 中 に 装 置 し たOstwalδ 粘 度 計 中 に 入 れ,15皿 間,各 時 間 に お け る 粘 度 の 変 化 を 指 標 と し て 酵 素 作 用 を 測 定 し

た.

被 襖 物 で あ るTecお よ び 各 種f7lav,は 前記 溶 媒 に 溶 か し,そ れ ぞ れ 酵 素 液 に10m間preincubationさ

せ た. .被 検 物 の 最 終 濃 度 は0.01%,0.001%,0.0001%と し た. b)in vivo実 験

辻(1958)20)の 行 な っ た 家 兎 皮 内 拡 散 試 験(Skin-test)に 準 じ た.す な わ ち 体 重 約2塊 の 家 兎 の 背 部,側

腹 部 を 勢 毛,硫 化 バ リ ウ ム を 塗 布 し て 脱 毛 し,皮 膚 乾 燥 後0.9%生 食 水0.2m1中 にEvans blue0.1mgお よび Hdase50v.R.u.を 含 む よ うに 調 整 し た 混 液 を,前 述 の 家 兎 皮 内 に 注射 し,そ れ ぞ れ の 時 間 に お け るEvans blueの 拡 散 面 積 を 測 定 す る 方 法 を 行 な っ た.

被 検 物 は そ れ ぞ れ0.9%生 食 水 に.NaOHを 加 え 弱 ア ル カ リ性 と し て 溶 解 し,50mg/kg,1COmg/kgを 昇 殻

静 脈 内 に 注 射 した.

〔II〕Isonav.お よ びFlav.の 抗Hdase作 用 に お よぼ す 他 の薬 物 の 影 響

溶 媒 は 前 述 の 緩 衝 液 を 用 い た.基 質 のHAは6mg/m1液 と し て(た だ しMIAA,PNP使 用 の 時 は10mg/ m1液),ま た 酵 素 液 と し て はHdase0.041ng/rn1液 を 作 製 し た.

Tec,Teひgenin,Rt,事 よ びQcは そ れ ぞ れ0,0004%液 と し て 調 整 し た ,こ の 場 合0.4%液 迄 は2%硼 砂 液

で 溶 か し,そ の 後 は 緩 衝 液 で 稀 釈 し た.

被 検 物 と し て はTGA,Ct,MIAA,お よ びPNP,の 各0.002%液(Flav.な ら び にIsOnav.溶 液 のlO倍 濃

度)を 用 い た.

方 法 は 前 記Ostwald粘 度 計 を 恒 温 槽(37℃)に 装 置 し て 前 述 の ご と く行 な っ た. 188 江 崎 俊 治

反 応 せ し め て,各 時 間 に お け る 粘 度 を 測 定 し 記 録 した.

〔III〕 抗 炎 症 剤 の 抗Hdase作 期 a)in vitro実 験

BCP-Na,PB-Naを 前 記 緩 衝 液 に て そ れ ぞ れ0.1%,0.01%液 を 作 製 し て 用 いOstwald粘 度 計 に よ り前 述

の 方 法 で 行 な っ た. HAは6mg/ml液 を,Hdaseは0。02mg/ml液 を 用 い 酵 素 液 と 被 検 物 の 混 液 を10m間Preincubation

し た 後HA液 に 加 え て 粘 度 測 定 を 行 な っ た.

b)in vivo実 験

前 述 の 家 兎 皮 内 拡 散 試 験 を 行 な っ た.家 兎 は 平 均 体 重2.5kgの も の を 使 用 した.

被 検 物 で あ るBCP-Na,PB-Naは0.9%生 食 水 に よ り そ れ ぞ れ10%液 と し各50mg/kg,100mg/kgを 耳

殻 静 脈 内 に 注 射 し た.ま た0.9%生 食 水0.2m1中 にHdase5ov.R.u.お よびEvansbluelmgを 含 む よ う

調整した混液を家兎皮内に注射 し,そ れぞれの時間における色素の拡散面積を測定し拡散率を求めた。

〔IV〕 抗 炎 症 作 用 に つ い て a)足蹠 浮 腫 抑 制 試 験

起 炎 剤 はHdaseを用 い0.9%生 食 水0.3ml中7.5v.R.u.に な る よ う調 整 し,こ れ を120～1609の 雌 ラ ッ ト(一 群16～34匹)の 後 肢 足蹠 に 注 射 し,水 の 入 っ た 円 筒 中 に 足 を 浸 し,益 れ た 水 量 を 測 定 し て 浮 腫 値 と し

た.

ま たCarrageenin浮 腫 の 場 合 は0.9%生 食 水 を 以 て1%Carrageenin液 を 作 製,そ の0.1m1を120～140 g雌 ラッ ト(一 群11～17匹)の 後 肢 足蹠 に 皮 下 注 射 し た.

被 検 物 はTec,Tec-genin,Rt,Qc,8c,Bc-ein,HP,お よびAsを0.9%生 食 水 に 溶 解 し て 用 い た.経 口

投 与 の 場 合 は 起 炎 剤 注 射Ih前 に 各2001ng/kgを 投 与 し,腹 腔 内 投 与 の 場 合 は 起 炎 剤 注 射30皿 前 に 各100mg/ kgを 使 用 し,以 後 各 時 間 に お け る 値 を 測 定 し た.

b)カ ラ シ に よ る 滲 出 腹 水 に お よ ぼ す 影 響

実 験 に は ラ ッ ト(一 群12～23匹)を 用 い た.ま た カ ラ シ を0.9%生 食 水 に 溶 解 し10%液 とし,10ml/kgを

腹 腔 内 に 投 与 し腹 水 を 生 ぜ し め た,一 方 こ れ よ り30～60m前 に 各Flav.な ら び にAsの200mg/kgを 経 口的 に 投 与 し た.腹 腔 内 注 射 の5h後 に ラ ッ トを 殺 し 腹 水 の 量 を 測 定 し,動 物1009当 り の 腹 水 量 を 比 較 検 討 し た. c)醋 酸 の 腹 腔 内 注 射 に よ る マ ウ スStretc短ngと 色 素 漏 出 に お よ ぼ す 影 響

実 験 はWhittleの 方 法21)に 従 っ た.す な わ ち 動 物 は15～209のdd系 マ ウ ス を 一 群5匹 と し て 扱 っ た.被 検

薬 物 はIsonav.,各Flav.な ら び に 比 較 と し て 消 炎 鎮 痛 剤 で あ るAお よびPB-Naを 使 用 した.各 薬 物 は100 mg/kg,200mg/kg,300mg/k9,500mg/k9を そ れ ぞ れ 経 口 投 与 し,20～25皿 後PontarnineSkyblue6Bを

.9%生 食 水 に て4%液 と し て そ のO.1m1を 静 注 し た.さ ら に10～5皿 後0.6%醋0 酸 液0.1m1(0,6mg)/109を

腹 腔 内 に 注 射 し,以 後20皿 問 に わ た りマ ウ スStretchingを 観 察 し た. そ の 後 マ ウ ス を 殺 し 開 腹,腹 腔 内 に 漏 出 し た 色 素 量 を 光 電 比 色 計(590mμ)で 測 定 記 録 し た.

対 照 と し て は 被 検 薬 を 投 与 し な い も の に つ い て 検 べ,そ の 値 と 比 較 し抑制 率 を 百 分 率 で 示 し た.

〔V〕X線 照 射 障 害 に お よ ぼ す 影 響22》 Gazave et al.(1965)23》 の 行 な っ た 方 法 を 採 用,若 干 条 件 を 変 え て 試 験 し た.

動 物 は15～209のdd系 マ ウ ス ー 群8匹 と し て 使 用 した.被 検 薬 はTec,Tec-genin,Rt, Qcを 使 用,腹

腔 内 投 与 の 場 合 は ア ラ ビ ア ゴ ム を 加 え2.5%懸 濁 液 を 作 製,1回 量500m9/kgを3日 間 連 続 投 与 し た.ま た 経 TectoridinとTectorigenin 189

皮 投 与 の 場 合 は 水,sesame oil,プロ ピ レン グリ コ ー ル に よ り溶 解 し3%液 と し1回 量750mg/kgを マ ウス 背

に3日 間 連 続 塗布 し た.対 照 と し て は そ れ ぞ れ の 溶 媒 を 用 い た .こ れ ら の マ ウ ス は 実 験 第4日目 に 一 群 つ つ部 プ ラ ス チ ッ ク 製 容 器 に 入 れ て,X線720γ(165kV,15mA,1m/mA1,FED57cm,16min)を 全 身 照 射 し,以

後 毎日 の 生 存 数 を 観 察 記 録 し た 、

〔VI〕 睡 眠 時 間 に お よ ぼ す 影 響

実 験 に は15～20gのdd系 の マ ウ ス を10匹 一 群 と し て 使 用 し た .睡 眠 薬 に はMHb-Naを 用 い,100mg/kg を 腹 腔 内 に注 射 し,そ の 後 の 睡眠 時 間 を 測 定 し た.被 検 薬 と し て はTec,Tec-genin,Rt,Qcを 使 用,各500mg/kg

を 経 口投 与 の 場 合 は 睡 眠 薬 投 与60皿 前 に,腹 腔 内 の 場 合 は 同 じ く30m前 に 投 与 し た.

〔VII〕エス トロ ジ エ ン 様 作 用 a)性 周 期 に お よ ぼ す 影 響

Isoaavに はDESSよ う の 作 用 が 僅 か な が ら 認 め られ る24)25,と 言 は れ て い る の で ,こ の 関 係 に つ い て検 討

した.実 験 は.Allen-Doisy'svaginalsmeartest26)に 準 じ て2通 りの 方 法 を 行 な っ た . 1)150～2009の 雌 ラ ッ トを6匹 一 群 と し て 用 い た.被 検 薬 は 総 て 蒸 溜 水 に 溶 解 し,1日1回 腹 腔 内 に 注 射

し10日 間 連 続 投 与 し た.1回 の 投 与 量 はDHSSが0.11ng/kg,0.5mg/kg,1.0mg/kg,Rt,Qc,Tec,Tec-genin は 各50mg/kgで あ っ た.膣 垢 採 取 は 被 検 薬 投 与 前7賞 間,投 与 中10日間,投 与 後7日 間,合 計24日 間 に わ た り

1日3図 つ つ 行 な い,各 採 取 分 泌 物 を 顕 微 鏡 下 で 確 認 した . 2)被 検 動 物,被 検 薬 物 は 上 記 の 方 法 と 同 様 に 行 な っ た.最 初 の14日間 は 毎 田1回 膣 垢 を 採 取 し そ の 後 卵 巣

摘 除 手 衝 を 行 な い,そ の 翌 日 よ り10日 間 に わ た り被 検 薬 物 を 腹 腔 内 投 与 しつ つ膣 垢 検 査 を 行 な っ た.

b)子 宮 発 育 に お よ ぼ す 影 響

実 験 は σmoetal2?}の 方 法 に 準 じ た 、 動 物 は 生 後20～25日 の 幼 若 雌Wistar系 ラ ッ トを 一 群5匹 と し て

用 い た.被 検 薬 物 はTec,Tec-geninを 使 用 し,1%硼 砂 水 に て 溶 解,1,10,50,100μ9を 腹 腔 内 に 注 射,6h

後 お よ び40h後 に 開 腹 し 子 宮 を 摘出,直 ち に そ の 湿 潤 重量 を 測 定 しDESS投 与 の 場 合 の 値 と 比 較 し た. 〔VIII〕急性 毒 性 試 験

被 検 薬 物 で あ るTecな らび にTec-geninは ア ラ ビア ゴ ム でsuspensionと し 腹 腔 内 に 投 与 し,比 較 の た めRtお よ びQcを も 用 い た.動 物 はdd系 マ ウ ス(18～209)を 一 群6匹 と して 使 用 し,投 与 後 の 中 毒 症 状 な

ら び に48h後 の 致 死 数 を 観 察 し た 。 な おLD5oお よ び信 頼 限 界 はLitch field-Wilcoxon法 に よ っ て 算 出 し た.

実 験 成 績

〔I〕 抗Hdase作 用 に つ い て a)in vitro実 験

Tecお よびTec-geninは そ れ ぞ れ い ず れ の 濃 度 に お い て も 明 らか に 抗Hdase作 用 を 示 し た.そ の 強 さ を

Flavの 場 合 に 比 較 す る とBc>Tec>Mc>Rt>MHpの 順 で あ る,

ま たaglyconの 場 合 はMec>Tec-genin≒Qc≒Bc-einの 順 で あ っ た(Fig.1,2参 照). b)in viｖo実 験

Isoflav.の 作 用 はFlav,の 作 用 に ほ ぼ 等 し く,ま た 両 配 糖 体 共,そ れ ぞ れ のAglyconに 比 し て そ の 作 用 は

弱 か っ た(Tablel,2,Fi霧.3参 照).

〔H〕150nav.お よ びFlav.の 抗Hdase作 用 に お よぼ す 他 の 薬 物 の 影 響

1)CystはRtな ら び にQcの 抗Hdase作 用 を 明 らか に 阻害 し た が(Fig.4,5参 照),TGAの 場 合 は

影 響 を 認 め な か っ た 、 ま た,Tecお よ びTec-geninに 対 し て はCyst,TGAと もに有意な影響 を示 さなかっ

た(Fig.6,7参 照).

2)PNPお よ びMIAAはIsofla.,Flav.の 抗Hdase作 用 に 対 し て な ん ら 影 響 を 示 さ な か っ た.

〔IE〕 抗 炎 症 剤 の 抗Hdase作 用 a)in vitro実 験 190 江 崎 俊 治

Fig. 1. Influence of various glycosides on the Fig. 2. Influence of various aglycones on the response curve of Hyaluronidase (0.01%). response curve of Hyaluronidase (0.01%).

Table 1. Effect of Flavones on activity of Hyaluronidase (By skin-test). Tectoridin‚ÆTectorigenin 191

Table 2. Effect of Isoflavones on activity of Hyaluronidase (By skin-test).

Fig.3.Table1お よび2に 示 した 投 与 前1hの 各 測 定 時に お け る面 積 を夫 々100と した 時の 投 与 後 各 間 の 同 様測 定 時 に お け る面 積比 を表 わ す. 時 192 江崎 俊 治

Fig. 4. Influence of SH-compounds on anti Fig. 5. Influence of SH-compounds on anti- Hyaluronidase activity of Rutin. Hyaluronidase activity of Quercetin.

Fig. 6. Influence of SH-compounds on anti- Fig. 7. Influence of SH-compounds on anti- Hyaluronidase activity of Tectoridin. Hyaluronidase activity of Tectorigenin . TectoridinとTectorigenin l93

Table 3. Effect of antiinflammatory drugs on activity of Hyaluronidase (By skin-test).

BCP-Na,PB-Naは と も に 全 く抗Hdase作 用 を 示 さ な か っ た28》. b)in vivo実 験

BCP-Na,PB-Naと もに50mg/kg,100mg/kgい ず れ の 場 合 も 抗Hdase作 用 を 示 し た(Table3参 照).

〔IV〕 抗 炎 症 作 用 に つ い て a)足蹠 浮 腫抑 制 試 験

経 口 投 与 時 に お け1) るHdase浮 腫 抑 制 作 用 Tecは2h目 迄 は 最 も強 い 浮 腫抑 制 作 用 を 示 し た が,3h目 以 後 は 対 照 に 比 し 有 意 な 差 は 認 め な か っ た.

他 のFlav.は2h鋤 こ僅 か の 掬 制 作 期 を 示 し た が,3h目 以 後 は ほ と ん ど差 を 認 め な か っ た.比 較 に 用 い たAs

は 全 経 過 を 通 じ て 強 い 浮 腫 抑制 作 用 を 認 め た(Fig.8参 照).ま たglycosideとaglyconと の 間 に 有 意 な 差 は

認 め な か っ た.

2)腹 腔 内 投 与 時 に お け るHdase浮 腫 抑 制 作 用 TecはHpに 次 ぐ強 い 作 用 を 示 しAsの 作 用 を 凌 い で い た(Fig.9参 照).glVcosideとaglyconと の 間

に 一 定 の 傾 向 は 認 め られ な か っ た.

3)経 口投 与 時 に お け るCarrageenin浮 腫 抑 制 作 用

こ の 場 合 はBcを 除 い て は い ず れ のFlav.に も抑 制 作用 は 認 め ず 返 っ て 健 進 的 な 結 果 を 得 た.ま たglyco sideとaglyconと の 間 に 有 意 な 差 は 認 め な か っ た.

b)カ ラ シ に よ る 滲 出 腹 水 に お よ ぼ す 影 響 Rtお よ びBcの 場 合 に は 返 っ て 腹 水 量 を 増 加 せ し め る 結果 を 現 した が,他 の 薬 物 の 場 合 は 僅 か な が ら 抑 制

作 用 を 認 め た.ま たglycosideとaglyconで は 僅 か で は あ る が 後 者 の 作 用 が 優 れ て い た(Fig.10参 照). c)醋 酸 の 腹 腔 内 注 射 に よ る マ ウ スStretchingと 色 素 漏 出 に お よ ぼ す 影 響

い ず れ のFlav.もStretchingな ら び に 腹 腔 内 へ の 色素 の 漏 出 を 抑制 し た.色 素 漏 出 の 抑 制 はQcの 場 合 と

くに 著 し か っ た.glycosideとaglyconと の 間 に 一 定 の 傾 向 は み ら れ な か っ た(Table4参 照). 194 江 崎 俊 治

Fig. 8. Influence of various glycosides on the Fig. 9. Influence of various glycosides on th rat paw edema induced by hyaluronidase. rat paw edema induced by hyaluronidase. The case of oral administration. The case of intraperitoneal injection. Rats : 120--160g 9 . Rats : 120.160g 9 . Hyaluronidse : Harodase 7.5 u...Saline 0.3 ml/ Hyaluronidse : Harodase 7.5 u. Saline 0.3 ml/ rat. rat. Flavonoids : Dose of 200 mg/kg p. o. 60m Flavonoids : Dose of 100 mg/kg i. p. 30m before phlogist. before phlogist. Swelling mean ±S.E. of 16-x34 animals. Swelling mean ±S.E. of 12-20 animals.

Fig. 10. Influence of various glycosides and their aglycones on the ascites contents induced by intraperitoneal mustard in rats. Tectoridin L Tectorigenin 195

Table 4. Effect of various glycosides and their aglycones on squirm and leakage of dye into peritoneal cavity induced by acetic acid in mice (By means of B.A Whittle's method).

* p =Permiability, ** S =Squirm (or stretching)

Table 5. Effect of Isoflavones on uterine Table 6. Effect of Isoflavones on uterine weight in immature female rats. weight in immature female rats. (6 hours after the injection) (40 hours after the injection) 196 江 崎 俊 治

〔V〕X線 照 射 障 害に お よぼ す 影 響 腹 腔 内投 与 の場 合,マ ウス 生 存 率に 有 意 な 差 は 認 め なか った.ま た 経 皮 投 与 の場合 も溶 媒 を 種 々変 え て み て も,い ず れ も生 存率 に 有 意 差 を 認 め なか った. 〔W〕 睡眠 時間 にお よぼ す影 響 経 口投与,腹 腔 内投与 いず れ の 場 合 に お いて も,臓 を除 いて は 対 照 に 比 し有意 な 差 を認 め なか っ た, 〔VII〕エ ス トロジエ ン 様 作 用 a)性 周 期 に お よぼす 影 響 1)DESSを 除 きFlav.IsoHav共 有意 な 効 果 を 認 め なか った. 2)前 実 験 と同 様 影 響 を 認め なか った. b)子 宮 発 育に お よぼ す影 響 6h後 の灘 定 ではDESS,Tec-geninの 各50μ9投 与 の場 合 に 子 宮 重量 の 有意 な増 加 を 認め た が,そ の 勉 の 場 舎 に は 影響 は み られ な か っ た(Table5参 照). 40h後 の測 定 で はDESS100,10μgお よびTec-genin50μ9の 場 合 に効 果 を認 め た が,そ の他 の場 合 は 無 効 で あ っ た(Table6参 照). 投 与量 お よび経 過 時 間 との間 に 一定 の 関 係 は み られ なか った 。 〔VIII〕急姓 毒 性 Tecの 急 性灘 性 は非 常 に 弱 く,そ の 致 死 量 の 腹 腔 内 投与 に よって も 投 与直 後 軽 度 のStretchingを み るが 15皿 後 に は鎮 静 状 態 とな り,腹 を床 上 に 付 け て 次 第 に呼 吸困 難 を 呈 し,ほと ん ど24h以 内 に死 亡 したが,一 部

48h迄 の 間に 死 亡 す る もの もあ った .上 記 症 状は 同時 に 比 Table 7. Acute toxicity in mice. 較 したRtの 症 状 とほ とん ど異な らな か っ た. Tec-geninの 急 性 毒 性 も非 常 に 弱 い が,量 的 に はTec に 比 してや や 強 い よ うで あ り,そ の 中 毒症 状 はQcの そ れ に近 似 し,お の お の のglycosideと 特 に異 な る と ころ は 認 め られな か った.48h後 のLD50な らびに95%信 頼 限 界 を に示 したがTec-geninは 試 料 の 欠 乏 の た めLD50は表 算 出 し得 な か った(Table7参 照).

考 察 な ら び に 総 括

Flavに 関 す る 研 究 は 従 来 多 くの 人 々 に よ っ て 行 な わ れ て き た が,こ れ と類 似 の構 造 を 有 す るIsoaav.も ま

た 同 様 の 薬 理 作 用 を 有 す る の で は な い か と 考 え,Tecお よ びTec-geninにつ い て他 のFlav.と 比 較 検 討 を 試

み た. HAにHdaseが 作 用 し加水 分 解 が 起 る と,HAはN-Acetyl glucosalnineとglucuronic acidと に 変 化 し

HAの 粘 着 性 が 減 少 し 血 管 壁 が脆 弱 に な り透 過 性 が亢 進 す る .1950年 小 沢,松 本29)は 天 然 お よ び 合 成 のFlav.

が 抗Hdase作 用 を 有 しcapillary stabilizerと し て 用 い る こ と が で き る こ と を 説明 し て い る .Isoflav.に も ま た,Flav.に み られ る 抗Hdase作 用 が 考 え ら れ る の で あ る.抗Hdase作 用 の 測 定 は,in vitro,in vivoで 行

な っ た が,in vitroの 場 合TecはBcに 次 ぐ強 い 作 用 を 有 し て お り,ま たglycosideの 方 がaglyconよ り も

強 い よ う に 思 わ れ る.invivo実 験 は す で に 加 藤6)がFlav.を 用 い,家 兎 に お い て 皮 内 墨 汁 拡 散 試 験 を 行 な い

恥 お よ びQcに 著 明 な 効 果 を 認 め て い る 。 本 実 験 に お い て も ま た 略 々 周 様 の 結 果 を 得 た.し か し てIsoflav .で

あ るTecお よ びTec-geninもFlav.に 等 し い 抗Hdase作 周 を 認 め た の で あ る 。Wilsonら はFlav.の 抗

Hdase作 用 はaglyconの 方 が91ycosideに 優 る と 述べ て い る が,こ の 関 係 はiπv蜘 実 験 の 場 合 に 認 め ら れ , in vivro実 験 に お い て は 親 らか で な か っ た.こ の こ と は 一 般 的 に91ycosideの 方 が そ のaglyconよ り水 溶 姓 に

富 む こ と,お よ び 小 沢 等 の 述 べ た ご と く そ の 構 造(OH蓋 の 位 置,OH基 お よび>CO基),あ る い は 吸 収,代 謝

に 関 連 す る も の で あ ろ う. TectoridinとTectorigenin 197

次 に 現 在 多 数 のSH化 合 物 が 知 られ て い る が,こ こ で はIsoflav.お よ びFlav、 の 抗Hdase作 用 に お よ ぼ

すCys£ な ら び にTGAの 影 響 を 検 討 し た.し か し な が らTecお よ びTec-geninに 対 し て は 何 ら影 響 は み ら

れ な か っ た.た だCystの 場 舎 はFlav.で あ るRtお よ びQcの 抗Hdase作 用 に 対 し て 抑 制 効 果 が 認 め られ

た.こ の ようにCystの 効 果 がTecとRUこ よ っ て 異 な っ て 現 れ る こ と は お の お の の 抗Hdase作 用 機 序 に 何

等 か の 相 違 が あ る こ と を 疑 わ し め る.

さ て 近 年 多 くの 非 ス テ ロ イ ド性 鎮 痛 消 炎 剤 が と り あ げ ら れ る よ うに な り 種 々 の 薬 理 作 用 が 解 明 さ れ,Ma thiesら30,もPBの 抗Hdase効 果 につ い て 述 べ て い る,こ こ で はBCP-Na,PB-Naの 抗Hdase作 用 を 検 し

た,結 果 はin vivroで は 全 く効 果 を 認 め な か っ た に も拘 わ ら ずin viりoで は 抗Hdase作 用 を 認 め た,こ の 方

法による成績はばらつきが大きく幾分信頼姓に欠けるように思われるが上記の事実は消炎剤がそのままの構造で

は 作用せ ず,生 体 内 に 吸 収 さ れ て 初 め て 効 果 の 発 現 を み る の で は な い か と 推 察 さ れ,Isoflav.,FlaV.の 場合 と多

分 に 異 な る と こ ろ で あ る. ま たTecお よ びTec-geninの 消 炎 効 果 を 足跡 浮 腫 抑制 試 験,腹 腔 内 滲 出 液 に お よ ぼ す 影 響 等 に よ り 検 べ

て み た が,一 般 的 に 腹 腔 内 投 与 の 場 合 が 経 目投 与 の 場合 の 効 果 に 優 っ て い た.こ の 事 実 も薬 物 の 全 身 的 効 果 と 局

的効 と い う点 に 関 連性 を 有 す る よ うに 思 わ れ る が,い ず れ に し て もFiav.が 臨 床 的 に は 消 炎 効 果 を 発 揮 しな所 い と い わ れ る こ と と考 え 耕 せ て,Isoaav.誘 導 体 で あ るTecお よ びTec-geninの 真 の 消 炎 作 用 の 有 無 に つ い て

は 臨 床 試 験 の 結 果 を 待 っ べ き で あ ろ う. Gaweetalは 合 成 の5,7-Dihydroxyiso飴voneを 用 い て マ ウス のX線 致 死 障 害 防 禦 試 験 を 行 な い,経 皮

投 与 の 場 合100%の 有 効性 を 認 め て い る.し か し な が ら 本 実 験 で は 溶 媒 を 種 々 変 え て 行 っ た に も 拘 ら ずTecお

よ びTec-geninに 有 意 な 効 果 を 認 め る こ と が で きな か っ た こ とは,Gagave等 の 報 告 が 真 実 で あ る とす れ ば Tec-geninは6-OCH3と4LOHの み が 多 い こ とか ら,こ の よ うな 構 造 上 の 僅 か の 相 違 がX線 に よ る 致 死 障害

の防禦効果に著 しい差を生ず ることははなはだ興味深 い.

MHb-Naの 催 眠 作 用 に 対 す る 協 力 効 果 はTecな ら びTec-geninに 認 め る こ と は で き な か っ た が5001ng/ k霧 と い う多 量 の 投 与 で あ る こ と か ら 考 え て,一 毅 的 な 中 枢抑 制 効 果 は 無 い も の と 思 わ れ る.

ま たIsoHav、 に は 一 般 に エ ス ト ロ ジ ェ ソ 様 作 用 が 認 め ら れ,Daidzeinな ど につ い て は これ 迄Chmget alg)に よ っ て 述 べ られ て き た の で,Tecお よ びTec-geninにつ い て 実 験 を 試 み 子宮 発 育 試 験 に お い て 若 干 の 効

果 を 認 め た が,量 的 平 行性 を 有 せ ず か っ 他 の 試 験 方 法 で は 認 め られ な か っ た の で,こ れ ら のestrogenic activity の 有 無 につ い て は 再 検 討 を 要 す る と思 わ れ る.

な おTecお よ びTec-geninの 急 性毒 性 は非 常 に 弱 く,Rtお よ びQcの そ れ ら と 略 々 等 し いLD5。 を 示

し た.

結 論

1)Tectoridinお よ びTectorigeninは 比 較 に 用 い たFlavonoidsと 同 様 にiｎ vitroな ら び にin vivoに

お い て 抗Hyaluronidase作 用 を 示 し た.

2)し か し そ のinvitroに お け る抗Hyaluronidase作 用 はRutinやQuercetinの 場 合 と 異 な りCysteine

に よ っ て 阻 害 され な か っ た.

3)非 ス テロ イ ド性 抗 炎 症 剤 で あ るBCP-Naお よ びPB-Naはinvivoで は 抗Hyaluronidase作 用 を 認

め た が,invitroで は 作 用 を 示 さ な か っ た.

4)Tecもoridinお よ びTectorigeninは ラ ッ トのHyaluronidase浮 腫 を 抑 制 した がCarrageenin浮 腫 は

制 し な か っ た. 抑 5)Tectoridinお よ びTectorigeninは カ ラ シ に よ る ラッ トの 腹 水 滲 出 を 僅 か な が ら抑 制 し た.

6)Tectoridinお よ びTectorigeninは い ず れ も醋 酸 を 投 与 し た マ ウ ス のStretchingな らび に 腹 腔 内 へ の

素 漏 出 を 抑 制 し た がQuercetinの そ れ に は お よ ば な か っ た. 色 7)Tectoridinお よ びTectorigeninは マ ウ ス のX線 致 死 障 害 に 対 し て,経 皮 投 与,腹 腔 内 投 与 の い ず れ 198 江 崎 俊 治

の 場 合 に お い て も防 禦 効 果 を 示 さ な か っ た,

8)Tectoridinな ら び にTectorigeninは い ず れ もMethylhexabita1-Naに よるマ ウスの催眠 作用に対

し 影 響 を お よ ぼ さ な か っ た.

9)Tectoridinな ら び にTectorigeninは僅 か に エ ス トロ ジ ェン 様 作 用 を 有 す る よ う に 思 わ れ る.

10)Tectoridinな ら び にTectorigeninの 急 性 毒 性 は 非 常 に 弱 く,Rutinお よ びQuercetinの そ れ ら に 略 々 等 しいLD50を 示 し た.

な お 本 稿 の 一 部 は 第36回(昭 和38年4月)お よ び 第39回(昭 和41和4月)日 本 薬 理 学 会 総 会 と 第24回(昭 和 38年11月)日 本 薬 理 学 会 近 畿 部 会 で 発 表 し た.

参 考 文 献

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2)高 瀬 豊 吉:化 学 構 造 と薬 理 作 用;p.206,(1955)共 立 出 版.

3)加 来 道 隆:拡 散因 子(1951)医 学 書 院 雷

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