日薬 理誌64,186～198(1968) TectoridinとTectorigeninの 薬 理 作 用 に つ い て 江 暗 俊 治 岐 阜 大 学 医 学 部 薬 理学 教 室 〔主任 藤 村 一 教 授 〕 (昭 和43年1月19日 受 付 〔特〕) 緒 君 種 々のFlavonoidsの 薬 理学 的 作 用 につ い て は1927年 以 来 多 くの研 究 者 に よっ て 報 告 され て きた.特 に1944 年Griffith,Couch&Lindauerら に よ って,Flavonoidsの 一 つ で あ るRutinがVitaminPの 本 態 で あ る Hesperidinと 化 学 的 に 近似 してお り,Capillarystabilizerと して 同 様 の作 用 を 有す る ことが 報 告 され ,さ ら にShannoに よ う確認 され,そ の後 も広 く検討 が 加 え られ て きた1)2). 一 方1928年 以 来 ,Duranお よびMcCleanら は 組 織 の透 過 性 を 矯 め,細 菌 感 染 時 に 重 要 な 役割 を示 す 拡 散 麹 子 の存 在 を 発 表 し,さ らにChain&Drthieが 結合 組織 中 の ム コ多糖 体 であ る ピアル ロ ン酸 を 分 解す るHy aluronidaseが 拡 散 因子 と同 一 物 質 で あ る ことを 認 め た3)4)5). ま た,1929年,Beiler&Martinはin vitroで,1951年 加 藤6)はin vivoで,FlavonoidsのCapillary stabilizerと し て の 作 絹 機 構 の 一 つ が そ の 抗Hyaluronidase作 用 で あ る こ と を 報告 し,そ の 後 も多 くの研 究 が 続 け ら れ て き た. IsoflavoneはFlavoneと 類 似 の 構 造 を 有 す る3位 に 核 置 換Phenyl基 の 入 っ たChromoneで あ り,Iso flavone配 糖 体 と し て はTectoridin,Daidzin,Genistin,Ononin,Iridinら が 知 ら れ て い る.そ し て そ の 作 用 につ い て は 教 室 の 榊 原7)8)が 射 干 よ り抽 出 し たTectoridi夏 に唾 液 分 泌亢 進 作 用 を,Cheng ef al9)は 種 々 の IsoHavone中Daid2einに 最 も強 いEstrogenicActivityを,ま たCurnowetal10)もGenisteinに 間 様 の 作 用 の あ る こ と を 述 べ て い る し,そ の 後 柴 田 等11)は 葛 根 中 のDaidzeinにPapaverineよ う の 鎮 痙 作 用 の あ る こ と を 報 告 し た.し か し そ の 他 の 作 用 に 関 し て は ほ と ん ど 報 告 を み な い の で,主 と し て 位 置 異 性 体 で あ る 各 種 Flavoneな ら び にFlavone配 糖 体 と の 比 較 に お い てTectoridinお よ びTectorigeninの 薬 理 作 用 を 検 討 し た の で 報 告 す る. 実 験 材 料 Tectorldm(以 下Tec)お よびTectorlgenin(以 下Tec-genin)は1928年 柴 田 等12)13)に よ り 鳶 尾(Iris tectorn Maxim)か ら 抽 出 さ れ,そ の 構 造 が 決 定 さ れ た.ま た そ の 後,窮 竿(Rhigonzβelamcmda)に も 含 ま れ て い る こ と が 知 られ て い る14).な お そ の 他 のIsoflavone(以 下Isoeav.)お よ び 比 較 の た め に 本 実 験 に 使 用 し たFlavone誘導 体(以 下Flav.)を 一 括 し て 記 載 す る15)16). 次 に 基 質 と し て は 人臍 帯 よ り抽 出 切 した ビ ア ル ロン 酸(以 下HA)な ら び に ピ ア ルロ ン 酸 カ リ(東 京化 成, 和 光 純 薬)の 製 品 を,ま た 酵 素 と し て 用 い たHyaluronidase(以 下Hdase)は ス プ ラ ー ゼ(持 田 製 薬)ま た は ハロ ダ ー ぜ(武 照 薬 品)を,そ れ ぞ れ醋 酸,醋 酸Na緩 衡 液(pH5.86)に 溶 解 し た. その他実験に使用した薬物および本文 中略号を用いたものについて記述すると以下のごとくである. Thiogiycolic acid(TGA),Cysteine(Cyst),Monoiodo acetic acid(MIAA),Paranitrophenoi(PNP) , Phenylbutazone-Na(PB-Na),5-n-Butyl-1-cyclohexyl-2,4,6-trioxoperhydropyrimidin-Na(BCP-Na) , Aspirin(As)・Aminopyrine(A),Carrageenin(Penick社 製),Methyl hexabital-Na(MHb-Na),Diethy1- stirbestrol(DESS). TectoridinとTectorigenin187 Tectoridin : 5, 4'-OH, 6-OCH3, 7-0-glucose Rutin(Rt) : 3-0-rutinose, 5,7,3',4'-OH Tectorigenin : 5,7,4'-OH, 6-OCH3 Ouercetin(Qc.) : 3,5,7,3',4'-OH Genistin : 5,4'-OH, 7-0-glucose Myricitrin(Mc.) : 3-0-rhamnose, 5,7,3',4',5'-OH Genistein : 5,7,4'-OH Myricetin(Mce.) : 3,5,7,3',4',5'-OH Daidzin : 7-0-glucose, 4'-OH Hesperidin(Hp.) : 5,3',4'-OH, 7-0-rutinose Daidzein : 7,4'-OH Methylhesperidin(MHp.) : {Hp.}OCH3 Ononin : 7-0-glucose, 4'-OCH3 Baicalin(Bc.) : 5,6-OH, 7-0-glucuronic acid Formononetin : 7-OH, 4'-OCH3 Baicalein(Bc-ein) : 5,7-OH 実 験 方 法 〔1〕 抗Hdase作 用 に つ い て a)inかitro実 験18,19) 基 質 と し て2mg/mlのKAlml,酵 素 液 と し てHdaseO.01mg/m1の1m1(40v.R.u.)を37℃ の 恒 温 槽 中 に 装 置 し たOstwalδ 粘 度 計 中 に 入 れ,15皿 間,各 時 間 に お け る 粘 度 の 変 化 を 指 標 と し て 酵 素 作 用 を 測 定 し た. 被 襖 物 で あ るTecお よ び 各 種f7lav,は 前記 溶 媒 に 溶 か し,そ れ ぞ れ 酵 素 液 に10m間preincubationさ せ た. .被 検 物 の 最 終 濃 度 は0.01%,0.001%,0.0001%と し た. b)in vivo実 験 辻(1958)20)の 行 な っ た 家 兎 皮 内 拡 散 試 験(Skin-test)に 準 じ た.す な わ ち 体 重 約2塊 の 家 兎 の 背 部,側 腹 部 を 勢 毛,硫 化 バ リ ウ ム を 塗 布 し て 脱 毛 し,皮 膚 乾 燥 後0.9%生 食 水0.2m1中 にEvans blue0.1mgお よび Hdase50v.R.u.を 含 む よ うに 調 整 し た 混 液 を,前 述 の 家 兎 皮 内 に 注射 し,そ れ ぞ れ の 時 間 に お け るEvans blueの 拡 散 面 積 を 測 定 す る 方 法 を 行 な っ た. 被 検 物 は そ れ ぞ れ0.9%生 食 水 に.NaOHを 加 え 弱 ア ル カ リ性 と し て 溶 解 し,50mg/kg,1COmg/kgを 昇 殻 静 脈 内 に 注 射 した. 〔II〕Isonav.お よ びFlav.の 抗Hdase作 用 に お よぼ す 他 の薬 物 の 影 響 溶 媒 は 前 述 の 緩 衝 液 を 用 い た.基 質 のHAは6mg/m1液 と し て(た だ しMIAA,PNP使 用 の 時 は10mg/ m1液),ま た 酵 素 液 と し て はHdase0.041ng/rn1液 を 作 製 し た. Tec,Teひgenin,Rt,事 よ びQcは そ れ ぞ れ0,0004%液 と し て 調 整 し た ,こ の 場 合0.4%液 迄 は2%硼 砂 液 で 溶 か し,そ の 後 は 緩 衝 液 で 稀 釈 し た. 被 検 物 と し て はTGA,Ct,MIAA,お よ びPNP,の 各0.002%液(Flav.な ら び にIsOnav.溶 液 のlO倍 濃 度)を 用 い た. 方 法 は 前 記Ostwald粘 度 計 を 恒 温 槽(37℃)に 装 置 し て 前 述 の ご と く行 な っ た. 188 江 崎 俊 治 反 応 せ し め て,各 時 間 に お け る 粘 度 を 測 定 し 記 録 した. 〔III〕 抗 炎 症 剤 の 抗Hdase作 期 a)in vitro実 験 BCP-Na,PB-Naを 前 記 緩 衝 液 に て そ れ ぞ れ0.1%,0.01%液 を 作 製 し て 用 いOstwald粘 度 計 に よ り前 述 の 方 法 で 行 な っ た. HAは6mg/ml液 を,Hdaseは0。02mg/ml液 を 用 い 酵 素 液 と 被 検 物 の 混 液 を10m間Preincubation し た 後HA液 に 加 え て 粘 度 測 定 を 行 な っ た. b)in vivo実 験 前 述 の 家 兎 皮 内 拡 散 試 験 を 行 な っ た.家 兎 は 平 均 体 重2.5kgの も の を 使 用 した. 被 検 物 で あ るBCP-Na,PB-Naは0.9%生 食 水 に よ り そ れ ぞ れ10%液 と し各50mg/kg,100mg/kgを 耳 殻 静 脈 内 に 注 射 し た.ま た0.9%生 食 水0.2m1中 にHdase5ov.R.u.お よびEvansbluelmgを 含 む よ う 調整した混液を家兎皮内に注射 し,そ れぞれの時間における色素の拡散面積を測定し拡散率を求めた。 〔IV〕 抗 炎 症 作 用 に つ い て a)足蹠 浮 腫 抑 制 試 験 起 炎 剤 はHdaseを用 い0.9%生 食 水0.3ml中7.5v.R.u.に な る よ う調 整 し,こ れ を120～1609の 雌 ラ ッ ト(一 群16～34匹)の 後 肢 足蹠 に 注 射 し,水 の 入 っ た 円 筒 中 に 足 を 浸 し,益 れ た 水 量 を 測 定 し て 浮 腫 値 と し た. ま たCarrageenin浮 腫 の 場 合 は0.9%生 食 水 を 以 て1%Carrageenin液 を 作 製,そ の0.1m1を120～140 g雌 ラッ ト(一 群11～17匹)の 後 肢 足蹠 に 皮 下 注 射 し た. 被 検 物 はTec,Tec-genin,Rt,Qc,8c,Bc-ein,HP,お よびAsを0.9%生 食 水 に 溶 解 し て 用 い た.経 口 投 与 の 場 合 は 起 炎 剤 注 射Ih前 に 各2001ng/kgを 投 与 し,腹 腔 内 投 与 の 場 合 は 起 炎 剤 注 射30皿 前 に 各100mg/ kgを 使 用 し,以 後 各 時 間 に お け る 値 を 測 定 し た.