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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA Facultad de Ciencias Naturales y Museo Diversidad y patogenicidad de especies de hongos entomopatógenos en insectos plaga de la yerba mate Ilex paraguariensis en la provincia de Misiones Tesis presentada para optar al título de Doctor en Ciencias Naturales Lic. María Elena Schapovaloff Directora: Dra. Claudia López Lastra Co-director: Dr. Luis Francisco Alves La Plata, 2012 Universidad Nacional de La Plata Facultad de Ciencias Naturales y Museo Titulo: “Diversidad y patogenicidad de especies de hongos entomopatógenos en insectos plaga de la yerba mate Ilex paraguariensis en la provincia de Misiones” Grado a obtener: Doctor en Ciencias Naturales Tesista: Lic. Maria Elena Schapovaloff Directora: Dra. Claudia Cristina López Lastra Co-Director: Dr. Luis Francisco Alves A mi madre Josefa por su gran amor, apoyo incondicional y comprensión. AGRADECIMIENTOS ♦ A la Dra. Claudia López Lastra por ser una gran orientadora, por su apoyo en la realización de este trabajo de investigación, al igual que por su amistad, dedicación y respaldo en todo momento. ♦ A la Dra. Martha Medvedeff que en su momento fue mi co-directora de tesis, por su colaboración y conocimiento profesional. ♦ Al Dr. Luis Alves por ayudarme, orientarme y acompañarme en mi proyecto de investigación y en mi estadía en la ciudad de Cascavel, Brasil. ♦ Al Dr. Juan García por su orientación en los aspectos de la investigación científica. ♦ A mis compañeros del laboratorio de Micología de la FCEQyN-UNaM: Celina Vedoya, Beda Mereles, Miriam Chade, Any Señuk, Gustavo Bich, Ana Thea, Belén Jaquet, Vanesa Sosa, Ernesto Velazquez, Cecilia Villalba, Andrea Sánchez y Liliana Benítez por tantos momentos compartidos. ♦ A mis compañeros del laboratorio del CEPAVE: Celeste D’ Alessandro, Alejandra Gutiérrez, Belén Cabrera, Silvana Tongiani, Romina Manfrino, Evangelina Muttis, Manuel Páramo Rueda, Julieta Tornesello y Patricia Albornoz Medina, por estar siempre disponibles cuando necesite y principalmente por la amistad. ♦ A mis compañeros del laboratorio de la UNIOESTE, Cascavel, Brasil: Jéssica Cavalcanti, Marina Formentini, André Fanti, Roger Da Silva, Emanuele Kessler, Ana Mamprin, Patricia, Daian Pinto de Oliveira, Elisangela Rodrigues, Aline, Andreia Bonini, Rafaela Barbosa, Thiago, Nicole Holz y Victor, por ayudarme con los ensayos en laboratorio y compartir momentos inolvidables durante mi estadía en Cascavel, Brasil. ♦ A los productores y profesionales que me permitieron efectuar el relevamiento y muestreo en sus cultivos de yerba mate. ♦ A los Ing. Agrónomos Oscar Pérez y Valentín Llera, por colaborar con los muestreos. ♦ A las Cooperativas yerbateras de Jardín América y Ruiz de Montoya (Misiones) y a la Cooperativa yerbatera de Colonia Liebig (Corrientes), por su ayuda con los muestreos en los yerbales. ♦ A la fazenda Vila Nova (Ivaí, Paraná, Brasil) por la disponibilidad y la ayuda en la recolección de los taladros de la yerba mate. ♦ Al Dr. Richard Humber por su colaboraración con la identificación de los aislamientos fúngicos. ♦ A la Ing. Agr. María Inés Urrutia y al Dr. Raúl Alzogaray por la realización y colaboración con los análisis estadísticos. ♦ Al técnico de biología molecular del CEPAVE Dr. Javier Panei por su ayuda y colaboración. ♦ A la Dra. Noelia Guzmán por su colaboración con el análisis de las secuencias y filogenia molecular. ♦ A los profesionales y directivos de las Colecciones Micológicas del CEPAVE por permitir el ingreso de mis aislamientos fúngicos y llevar a cabo la preservación de los mismos. ♦ A la directora del CEPAVE, Dra. Alda González, y a la co-directora, Dra. Graciela Navone, por haberme permitido realizar mis tareas de investigación en dicho centro. ♦ A todos los integrantes del CEPAVE que de una u otra manera me ayudaron y compartieron conmigo el desarrollo de las tareas de investigación. ♦ A los miembros de la UNLP y CONICET por financiar mi tesis doctoral y permitir mi formación científica. ♦ A mi familia, en especial a mis padres, hermano, sobrina, tíos y primos, por el cariño y confianza que me brindan en todo momento, respaldándome para alcanzar mis objetivos. ♦ A todos mis amigos que siempre me apoyaron con su amistad sincera. ♦ A Dios por darme fortaleza, permitirme alcanzar una meta más en la vida y por guiarme por el camino de la felicidad. ♦ A todas aquellas personas que de alguna manera contribuyeron para hacer posible la realización de este trabajo. ÍNDICE RESUMEN .......................................................................................................................1 ABSTRACT .....................................................................................................................4 INTRODUCCIÓN ...........................................................................................................6 ANTECEDENTES ........................................................................................................11 1.1. Yerba Mate ( Ilex paraguariensis St. Hil.)............................................................... 11 1.2. Plagas de la Yerba Mate .......................................................................................... 12 1.3. Hedypathes betulinus (Klug, 1825).......................................................................... 13 1.3.1. Biología de H. betulinus ............................................................................... 13 1.3.2. Fluctuación poblacional de H. betulinus ...................................................... 15 1.4. Gyropsylla spegazziniana (Liezer, 1919)................................................................ 16 1.4.1. Biología de G. spegazziniana ....................................................................... 16 1.4.2. Fluctuación poblacional de G. spegazziniana .............................................. 18 1.5. Manejo Integrado de Plagas en Yerba Mate............................................................ 19 1.5.1. Control cultural............................................................................................. 20 1.5.2. Control químico............................................................................................ 21 1.5.3. Control físico ................................................................................................ 22 1.5.4. Control biológico.......................................................................................... 22 1.6. Hongos entomopatógenos como agentes de control microbiano de plagas de la yerba mate....................................................................................................................... 23 1.7. Mecanismo de acción de los hongos entomopatógenos ......................................... 24 1.7.1. Adhesión de los propágulos infectivos a la cutícula del insecto .................. 25 1.7.2. Germinación de los propágulos infectivos ................................................... 25 1.7.3. Penetración del tegumento............................................................................ 26 1.7.4. Multiplicación del hongo en el hemocele y muerte del insecto ................... 26 1.7.5. Emersión del hongo y dispersión de los propágulos infectivos.................... 27 1.8. Mecanismo de defensa de los insectos .................................................................... 27 1.8.1. Barreras físico-químicas............................................................................... 28 1.8.2. Sistema inmune innato.................................................................................. 28 1.8.3. Otras estrategias de defensa.......................................................................... 29 1.9. Caracterización e identificación de hongos entomopatógenos................................ 30 1.10. Característica de la especie Beauveria bassiana ................................................... 33 1.11. Característica de la especie Metarhizium anisopliae ............................................. 33 1.12. Características de la especie Purpureocillium lilacinum ....................................... 34 1.13. Factores que influyen en el establecimiento y acción de hongos entomopatógenos............................................................................................................ 34 1.13.1. Humedad Relativa (HR) ............................................................................. 35 1.13.2. Temperatura (T).......................................................................................... 35 1.13.3. Radiación solar (RS)................................................................................... 36 1.13.4. Suelo ........................................................................................................... 36 1.13.5. Los agroquímicos y su efecto sobre los entomopatógenos......................... 36 1.14. Los hongos entomopatógenos como agentes potenciales de control biológico .... 37 1.15. Inóculos de hongos entomopatógenos en el suelo................................................. 39 HIPÓTESIS: ..................................................................................................................42 OBJETIVO GENERAL: ..............................................................................................42 OBJETIVOS ESPECÍFICOS: .....................................................................................42 MATERIALES Y MÉTODOS .....................................................................................44 2.1. Área de Estudio ......................................................................................................