Campus de São José do Rio Preto Kaio Cesar Chaboli Alevi Citotaxonomia e evolução cromossômica na subfamília Triatominae São José do Rio Preto 2017 Kaio Cesar Chaboli Alevi Citotaxonomia e evolução cromossômica na subfamília Triatominae Tese apresentada como parte dos requisitos para obtenção do título de Doutor em Biociências, área de concentração Genética, junto ao Programa de Pós- Graduação em Biociências, do Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Câmpus de São José do Rio Preto. Financiadora: FAPESP – Proc. 2013/19764- 0 e CAPES Orientador: Profª. Drª. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira São José do Rio Preto 2017 Alevi, Kaio Cesar Chaboli. Citotaxonomia e evolução cromossômica na subfamília Triatominae / Kaio Cesar Chaboli Alevi -- São José do Rio Preto, 2017 386 f.: il., tabs. Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas 1. Biologia. 2. Biologia – Classificação. 3. Citogenética. 4. Barbeiro (Inseto). I. Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas. II. Título. CDU – 576.3:575 Ficha catalográfica elaborada pela Biblioteca do IBILCE UNESP - Câmpus de São José do Rio Preto Kaio Cesar Chaboli Alevi Citotaxonomia e evolução cromossômica na subfamília Triatominae Tese apresentada como parte dos requisitos para obtenção do título de Doutor em Biociências, área de concentração Genética, junto ao Programa de Pós- Graduação em Biociências, do Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Câmpus de São José do Rio Preto. Financiadora: FAPESP – Proc. 2013/19764- 0 e CAPES Comissão Examinadora Profa. Dra. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira UNESP – São José do Rio Preto Orientador Profa. Dra. Claudia Regina Bonini Domingos UNESP – São José do Rio Preto Prof. Dr. Carlos Eduardo Almeida UNICAMP – Campinas Profa. Dra. Aline Rimoldi Ribeiro UNICAMP – Campinas Prof. Dr. Luis Lênin Vicente Pereira UNILAGO – São José do Rio Preto São José do Rio Preto 23 de outubro de 2017 Este trabalho foi realizado no Laboratório de Biologia Celular, do Departamento de Biologia, do Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas de São José do Rio Preto – IBILCE/UNESP. Apoio financeiro na forma de bolsa de estudos financiada pela FAPESP (Processo nº 2013/19764-0) e CAPES. Dedicatória Dedico este trabalho aos meus pais, Maria de Lourdes Chaboli Alevi e Cid Nelson Alevi, exemplos de conduta, amor, fé e perseverança, que deixaram de realizar os seus sonhos para que eu pudesse realizar os meus. Agradecimentos Agradecimentos Em honra àqueles que melhoram minha essência, deixando um pouco de si, meu eterno agradecimento: Aos meus pais, Maria de Lourdes Chaboli Alevi e Cid Nelson Alevi, que, de forma singular, mostraram os verdadeiros valores do ser humano. Vocês são os meus bens mais preciosos. À minha orientadora, Profa. Dra. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira, pela amizade, confiança e companheirismo. Sou imensamente grato pela disponibilidade em me orientar no TCC da graduação, pois essa oportunidade foi fundamental para que eu conhecesse e me apaixonasse pelo estudo citogenético dos triatomíneos. Obrigado, ainda, pelos valiosos ensinamentos e pelo exemplo de conduta pessoal e profissional humanizado. À Profa. Dra. Claudia Regina Bonini Domingos e ao Prof. Dr. João Aristeu da Rosa, pela amizade e exemplo de profissionalismo. A confiança e a credibilidade que vocês depositam no meu trabalho são estimuladoras e revitalizadoras. Ao Prof. Dr. Luís Lênin Vicente Pereira, por quem tenho tremendo respeito, carinho e admiração, pelos diversos momentos prazerosos e produtivos. Obrigado pela disponibilidade de ter participado das minhas defesas de TCC e, agora, da minha defesa de tese. Obrigado, ainda, por toda a valorização profissional e pelo incentivo na carreira de docente e na pesquisa. Ao Prof. Dr. Carlos Eduardo Almeida e a Profa. Dra. Aline Rimoldi Ribeiro pela disponibilidade em participar da defesa da tese. Vocês são importantes referências no estudo dos triatomíneos que servem de inspiração para mim. À Elizabete Hiromi Habaro e Magda de Souza Alcantara Pires, pela grande amizade. Obrigado pelas horas de conversas e, principalmente, pelo grande incentivo a acreditar mais no meu potencial. A todos os meus ex-professores (pré-escola, ensino fundamental, ensino médio, ensino superior e pós-graduação) que atuam na mais bela das profissões e são os grandes responsáveis pela sólida formação que proporcionou o meu doutoramento. Ao Kauan Chaboli Alevi e ao Raul Eduardo Menezes Cardozo que me proporcionam dias mais felizes. À minha avó, Nair Bevilaqua Chaboli (in memorian), pessoa amável e sábia que, infelizmente, nos deixou há um mês, mas se mantém presente em nossos corações. Obrigado pelos ensinamentos sobre a importância e o poder do amor. As minhas tias Antônia, Lucimara, Uzimar e Dulcilei, que me proporcionam felicidades rotineiras e tornam a vida mais leve e fácil de ser vivida. Aos meus primos Elisângela, Junior, Carol, Beatriz, Elaine, Gislaine, Gianluka, Ana Carolina, Lisnaldo, Diego, Nayana, Juliana e Gabriela que, só de existirem, já contribuem para a minha felicidade. A todos os amigos que fiz durante a infância, o ensino fundamental, o ensino médio, a graduação e a pós-graduação. Felizmente são muitos nomes, mas cada um sabe do amor que tenho por vocês. A todos os alunos que passaram pelo Laboratório de Biologia Celular e que tive o prazer de coorientar. Cada um de vocês contribuiu imensamente para a minha formação pessoal e profissional. À Fundação de Amparo á Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) (Processo nº 2013/19764-0) e a CAPES pelas bolsas de doutorado. “Descobrir consiste em olhar para o que todo mundo está vendo e pensar uma coisa diferente” Roger Von Oech Resumo RESUMO A taxonomia e a sistemática dos triatomíneos baseiam-se, principalmente, em caracteres morfológicos. No entanto, existem espécies muito semelhantes ou até mesmo idênticas (espécies crípticas) do ponto de vista morfológico. Dessa forma, novas abordagens são necessárias para caracterizar um táxon e análises citogenéticas têm se mostrado como importantes ferramentas para a caracterização taxonômica e o conhecimento evolução desses vetores. Assim, o presente trabalho teve como objetivos principais: caracterizar os subcomplexos Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata e Rubrofasciata; auxiliar na revalidação de Triatoma bahiensis; avaliar o status específico de Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp. (afim de R. neglectus), T. pintodiasi, T. lenti e T. sherlocki; analisar a relação evolutiva da tribo Rhodniini; caracterizar o fenômeno de persistência nucleolar na subfamília Triatominae e analisar a variabilidade genética intraespecífica de T. sordida proveniente do Brasil. Os resultados obtidos permitiram caracterizar citogeneticamente as espécies do subcomplexo Brasiliensis; revalidar T. bahiensis e corroborar que essa espécie, bem como T. lenti e T. petrocchiae são membros do subcomplexo Brasiliensis; corroborar o status específico de T. lenti, T. sherlocki e T. bahiensis pela presença de barreira de isolamento reprodutivo pós- zigótica (desmoronamento do híbrido); sugerir que durante a muda imaginal, os triatomíneos cessam a meiose e estimulam a espermiogênese para diminuir os gastos energéticos e garantir a chance de paternidade; caracterizar citogeneticamente os subcomplexos Matogrossensis e Rubrovaria e distingui-los dos outros subcomplexos da América do Sul; reagrupar as espécies dos subcomplexos Matogrossensis, Sordida, Maculata e Rubrovaria, com base na disposição do DNAr 45S; propor a criação de um novo subcomplexo (subcomplexo T. vitticeps), com base em dados fenotípicos e genotípicos; caracterizar citogeneticamente o subcomplexo Maculata e diferenciar T. wygodzinskyi e T. arthurneivai; diferenciar T. rubrofasciata de todas as outras espécies de triatomíneos pela citotaxonomia e cariossistemática; corroborar, por meio da análise cariotípica e das espermátides, que a tribo Rhodniini é um grupo monofilético; caracterizar a evolução cromossômica no grupo pallescens e relacionar a perda de heterocromatina com a ocupação de diferentes ambientes; corroborar o status específico de R. montenegrensis (com base na posição do DNAr 45S) e de T. pintodiasi (com base no comportamento meiótico e na distância genética para o gene mitocondrial 16S); demonstrar que R. neglectus não apresenta variação cromossômica intraespecífica e descrever uma nova espécies do gênero Rhodnius, a saber, R. taquarussuensis sp. n.; discorrer sobre a evolução cariotípica nas tribos Rhodniini, Triatomini e Cavernicolini; confirmar o fenômeno de persistência nucleolar como uma sinapomorfia de Triatominae e, por fim, demonstrar que T. sordida do Brasil não apresenta variação cromossômica intraespecífica e corroborar o status desses vetores como T. sordida sensu strito. Esses resultados mostraram-se de extrema importância para elucidar várias questões sobre a biologia, taxonomia e evolução dos triatomíneos. Palavras-chave: Citogenética. Taxonomia. Evolução, Triatomíneos. Doença de Chagas. Abstract ABSTRACT The taxonomy and systematics of triatomines are mainly based on morphological characters. However, there are very similar or even identical species (cryptic species) from the morphological point of view. Thus, new approaches are necessary