Merilane Da Silva Calixto Mapeamento Cromossômico De DNA
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Universidade Federal de Pernambuco Centro de Ciências Biológicas Programa de Pós-Graduacão em Genética Merilane da Silva Calixto Mapeamento cromossômico de DNA repetitivos em espécies de morcegos da família Phyllostomidae. Recife 2013 Merilane da Silva Calixto Mapeamento cromossômico de DNA repetitivos em espécies de morcegos da família Phyllostomidae. Tese apresentada ao Programa de Pós- Graduação em Genética da Universidade Federal de Pernambuco como parte dos requisitos exigidos para obtenção do título de Doutor em Genética. Orientadora: Dra. Maria José de Souza Lopes Coorientadora: Dra. Neide Santos Recife 2013 ii Catalogação na Fonte: Bibliotecário Bruno Márcio Gouveia, CRB-4/1788 Calixto, Merilane da Silva Mapeamento cromossômico de DNA repetitivos em espécies de morcegos da família Phyllostomidae / Merilane da Silva Calixto. – Recife: O Autor, 2013. 138 f.: il., fig., tab. Orientadora: Maria José de Souza Lopes Coorientadora: Neide Santos Tese (doutorado) – Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Biológicas. Pós-graduação em Genética, 2013. Inclui bibliografia e anexos 1. Genética 2. DNA 3. Mapeamento cromossômico 4. Morcego I. Lopes, Maria José de Souza (orient.) II. Santos, Neide (coorient.) III. Título. 572.86 CDD (22.ed.) UFPE/CCB-2014-035 Merilane da Silva Calixto Mapeamento cromossômico de DNA repetitivos em espécies de morcegos da família Phyllostomidae Aprovado em 16/08/2013 Banca Examinadora: ____________________________________________ Dra. Maria José de Souza Lopes Universidade Federal de Pernambuco ____________________________________________ Dr. Martin Alejandro Montes Universidade Federal Rural de Pernambuco ____________________________________________ Dra. Katharine Raquel Pereira dos Santos Universidade Federal de Pernambuco ____________________________________________ Dra. Rita de Cássia de Moura Universidade de Pernambuco ____________________________________________ Dra. Tania Tassinari Rieger Universidade Federal de Pernambuco Recife 2013 iii Aos meus pais, às minhas irmãs e ao meu esposo Wellington, com amor dedico. iv Agradecimentos Esta Tese representa a etapa mais importante da minha vida profissional e pessoal, até hoje. Foi um período de grandes desafios e descobertas, em que empenhei grandes esforços e descobri o quão forte sou. Mas nada disso seria possível sozinha, sem a ajuda e estímulo preciosos e por isso devo merecidamente expressar os meus mais sinceros agradecimentos: Em primeiro lugar a Deus que esteve comigo em todos os momentos, me dando força principalmente nos momentos mais difíceis onde o desânimo era notório, e por ter proporcionado mais esse momento de progresso na minha vida profissional e pessoal. Ao meu pai Everaldo, às minhas irmãs Meriene e Merilene, e ao meu cunhado Ricardo que sempre me apoiaram, com carinho, paciência, incentivo e estímulo constantes, e por sempre acreditarem nos meus sonhos, em especial à minha mãe Marinalva que é meu porto seguro que sempre me ajudou a levantar nos momentos de fraqueza e sempre acreditou que eu conseguiria. Ao meus lindos e amados sobrinhos Rafael, Daniel e Ítalo que sem saber me ajudaram muito nos períodos de estresse e desestímulo, renovando minhas forças com um simples sorriso ou apenas com a sua presença perto de mim. À minha orientadora Profa. Maria José pela oportunidade em realizar esse trabalho, pela confiança depositada em mim, pela sua orientação, dedicação, disponibilidade e estímulo que foram fundamentais para a concretização desse trabalho. Saiba que tenho um profundo respeito pela pesquisadora que é. À minha coorientadora Profa. Neide Santos que além de contribuir cientificamente para este trabalho, sempre acreditou em mim me apoiando constantemente. Agradeço pelo seu entusiasmo e motivação contagiantes que v foram fundamentais para a realização desse trabalho. Muito obrigada pelas oportunidades de crescimento profissional oferecidas a mim. Sou muito grata por tudo! À Profa. Vilma Loreto por ter sido uma ótima colaboradora, sempre disposta a ajudar e a solucionar problemas surgidos no meio do caminho. Obrigada pelo conhecimento fornecido, pela disponibilidade, incentivo e pela amizade demonstrada. Ao Prof. Diogo C. Cabral-de-Mello por ter sido um grande colaborador desse trabalho, pela sua enorme capacidade de transmissão de conhecimentos, estimulando o sentido crítico, o rigor e qualidade científicos. Ao Prof. César Martins pela oportunidade de estágio no Laboratório Genômica Integrativa e pela sua colaboração que foram fundamentais para a concretização desse trabalho. A Fundação de Amparo a Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE) pelo auxílio financeiro. A técnica Cirlene Silva pela ajuda, amizade, conselhos e incentivo constantes durante esses quatro anos e principalmente pela maravilhosa companhia nas saídas de campo. Ao Sr. Mário pela ajuda com as coletas e por ter proporcionado tantos momentos de descontração em campo. A minha prima e amiga Vanessa Calixto que, apesar da nossa distância física, sempre me incentivou nas minhas escolhas e me deu força de forma significativa para que eu continuasse a acreditar nos meus sonhos. Muito obrigada! Ao meu grande amigo Izaquiel Andrade, por toda ajuda fornecida, não apenas no árduo trabalho em laboratório como em campo, mas também, e principalmente, nos momentos mais difíceis que passei durante esse trabalho, vi onde o desânimo estava presente. Esteve sempre disposto a ajudar, sempre me estimulando e me fazendo acreditar que tudo daria certo e que Deus estava sempre comigo. Aos meus grandes amigos Apolônio Florêncio, Jefferson Geovane, Marcela Pinto e Paulo Alcântara, que mesmo ausentes fisicamente no meu dia-a- dia sempre acreditaram em mim e me apoiaram nas minhas escolhas, me dando força e me estimulando a seguir em frente mesmo quando o desânimo estava presente nos momentos difíceis. Muito obrigada pelas longas conversas pelo MSN, celular, enfim por sempre terem dado um jeitinho de estar perto pra ajudar. Vocês são pessoas muito especiais! A todos do Laboratório de Genética e Citogenética Animal: Adriana, Allison, Andrezza, Ayda, Camila, Carol, Helen, Izabela, Juliana Maria, Juliana Vieira, Kalyne, Kleison, Luana, Lucas, Luiz, Marcos, Rafael, Rafaella, Ronaldo, Suellen, Priscilla, Walter e aos colegas agregados: Santelmo e Tyago, pela boa relação pessoal que criamos, pela amizade, pelos diversos momentos de descontração e pela união que sempre fez inveja a muita gente. Muitos não permaneceram lá até o final deste trabalho, mas fizeram parte em algum momento contribuindo da mesma forma. Sempre lembrarei com muito carinho de vocês! As minhas amigas, Jéssica Miranda, Carol Machado, Danielle Brandão pela amizade, incentivo, força, carinho, paciência e pelos momentos de descontração e humor que me proporcionaram sempre que estávamos juntas. Apesar da distância e das visitas menos frequentes, nossa amizade continua intacta por ser verdadeira. Aos colegas do Laboratório Genômica Integrativa da UNESP: Bruno, Danilo, Érika, Guilherme, Juliana, Marcos, Pedro, Rafael e em especial a Sárah, vii pela minha permanência em sua casa durante o período que permaneci em Botucatu. Pessoas muito legais que me proporcionaram bons momentos. Ao meus amigos dos “Sindicato dos casais”: Luciana, Helena, Leka, Jean, Anderson e Ricardo, pela amizade, admiração demonstrada e força dada a mim nestes quatro anos. Por sempre acreditarem e torcerem em mim e pelos inúmeros momentos de lazer e descontração que forma fundamentais para eu renovar minhas forças Por fim, agradeço a pessoa mais importante pra mim: meu esposo Wellington Serra que apesar de ser leigo na minha área sempre me incentivou, me motivando e apoiando nessa minha caminhada. Agradeço pelo amor incondicional e pela compreensão nos diversos momentos de ausência, seja por estar em coletas, congressos ou no período que estive por um “longo” tempo em São Paulo. Sem o seu apoio eu não teria conseguido finalizar esse trabalho e por isso sou muito grata e tenho uma admiração enorme pela pessoa maravilhosa que você é, e por você me fazer tão feliz e por eu me sentir tão amada. Muito obrigada meu amor. Eu te amo muito! E não posso deixar de agradecer ao meu cãozinho Marley que esteve ao meu lado durante toda a escrita desta Tese e leitura de artigos, principalmente por me proporcionar muito carinho e alegrias nos momentos de desânimo e dificuldades. viii A ciência humana de maneira alguma nega a existência de Deus. Quando considero quantas e quão maravilhosas coisas o homem compreende, pesquisa e consegue realizar, então reconheço claramente que o espírito humano é obra de Deus, e a mais notável”. (Galileu Galilei). ix Resumo Para compreender a organização cromossômica de elementos repetitivos na família Phyllostomidae o mapeamento físico de genes ribossomais/sequências teloméricas e do retrotransposon MAZE/L1-like foi realizado em 12 e 13 espécies, respectivamente. O número de clusters para o gene 45S variou de um a três, com exclusiva localização autossômica exceto em Carollia perspicillata (cromossomo X). Para o gene 5S um único par de sítios autossômicos foi observado em todas as espécies. A FISH com sequência telomérica hibridizou os telômeros de todas as espécies, exceto em C. perspicillata e foram observados sítios teloméricos intersticiais (ITS) na região pericentromérica da maioria das espécies. Adicionalmente, o elemento MAZE/L1-like mostrou-se presente na região centromérica (regiões heterocromáticas) dos cromossomos de todas as espécies, exceto em Chrotopterus auritus, e algumas espécies apresentaram