Kalyptodoras Bahiensis: Siluriforme ), Coletada No Médio E Baixo Paraguaçu
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UFRB CCAAB UNIVERSIDADE FEDERAL DO RECÔNCAVO DE BAHIA CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS AMBIENTAIS E BIOLÓGICAS CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Patrícia Reis de Oliveira Silva Contribuição citogenética e molecular para a caracterização da peracuca ( Kalyptodoras bahiensis: Siluriforme ), coletada no médio e baixo Paraguaçu Cruz das Almas 2012 Patrícia Reis de Oliveira Silva Contribuição citogenética e molecular para a caracterização da peracuca ( Kalyptodoras bahiensis: Siluriforme ), coletada no médio e baixo Paraguaçu Monografia solicitada pela disciplina TCC II . Discente Patrícia Reis de Oliveira Silva, orientado por Soraia Aguiar Barreto Fonteles . Cruz das Almas- Bahia 2012 ii iii Dedico este Trabalho e meus sucessos a todos aqueles que me ensinaram: Caminhar, Amar, Sorrir e principalmente Lutar sempre com justiça e honestidade. iv AGRADECIMENTOS Agradeço a Deus por ter me concedido força e serenidade para trilhar este caminho mesmo diante de muitos obstáculos. A minha família pais e irmãos em especial a minha irmã e companheira Mara, por ter estado comigo em momentos muito difíceis. Aos Meus amigos Índira, Daiane, Flavio, Jamile, Kaliane, Juliana e Edinaldo, Felipe por todo carinho, amor, confiança de todos estes anos. A Alison Eduardo e Luiz Gustavo amigos e companheiros de Laboratório por ter me ajudado no desenvolvimento desta pesquisa e pela amizade a mim concedida. As minhas colegas de residência Thayane, Erika e Caroline pela amizade e paciência. A minha orientadora Profa. Dra. Soraia Aguiar Barreto Fonteles por todos os ensinamentos. Agradeço a Universidade Federal do Recôncavo da Bahia pela oportunidade. A todos os colegas do Laboratório de Ictiogenética situado no Núcleo de Estudos em Pesca e Aquicultura (NEPA). Agradeço a todos que participaram desse processo direta ou indiretamente. v Necessito da força dos ventos, da calma das águas e da coragem de uma borboleta ao sofrer sua primeira metamorfose e conseguir voar. Patrícia Reis vi RESUMO O rio Paraguaçu, é o único exclusivamente baiano, muito importante economicamente por abastecer a metrópole com pescado, e por dar subsídio às muitas famílias ribeirinhas, que dependem da pesca como meio de sobrevivência. Várias espécies possuem grande interesse comercial na região, dentre elas Kalyptodoras bahiensis, um bagre da família Doradídae pertencente à ordem Siluriforme conhecido popularmente como “peracuca”. Sua morfologia é peculiar podendo alcançar no máximo 80 cm de comprimento. A espécie é endêmica da bacia do Paraguaçu, d escrita principalmente no baixo curso do rio. Encontra-se atualmente, ameaçada de extinção , em decorrência das muitas construções de barramentos na região, além da pesca predatória. Fazendo-se necessários estudos no sentido de evitar o desaparecimento desta espécie e a redução da sua variabilidade genética. Este trabalho tem como propósito criar um banco de DNA preservado “in vitro” e caracterizar através de marcadores genético-moleculares e citogenéticos a espécie Kalyptodoras bahiensis. Com essas informações será possível proceder o monitoramento genético dos estoques naturais que se encontram sob pressão de exploração comercial. Os resultados desta pesquisa revelaram que a espécie ainda pode ser encontrada nas porções do médio e baixo Paraguaçu, que apresentou um número cariotípico igual a 58 cromossomos sendo 38 metacêntricos, 8 submetacêntrico, 8 subtelocêntricos e 4 acrocêntricos além do par sexual, mostrando também que a mesma apresentou pouca variação em seus padrões genéticos intra-específicos estudados. Palavra chave: ENDÊMICA, EXTINÇÃO, NEOTROPICAL vii ABSTRACT The Paraguaçu river is the only exclusively from Bahia. It’s economically very important for supplying with fish the metropolis and give subsidy for many families that depend on fishing as living. Several species have great commercial interest in the region, one of them is Kalyptodoras bahiensis , a catfish from Doradidae family and Siluriforme order, known as "peracuca." I’ts morphology is peculiar and it may reach up to 80 cm long. This species is endemic of the Paraguaçu watershed, mostly in the lower course of the Paraguaçú river. It’s currently listed as an endangered species due of overfishing and constructions of dams in the region. This work aims to create a DNA database maintained "in vitro" and to recognize cytogenetic and molecular patterns of Kalyptodoras bahiensis species, enabling genetic monitoring of wild stocks that are under pressure from environmental exploration. This research revealed that it’s still possible to find the peracuca in the middle and lower portions of Paraguaçú River, which presents a karyotypic number equal to 58 chromosomes, among which 38 metacentric, 8 submetacentric, 8 subtelocentric and 4 acrocentric In addition the pair of sex chromosome, showing that this species presented little variation in their intra-specific genetic patterns. Keyword: ENDÊMICA, EXTINÇÃO, NEOTROPICAL. viii LISTA DE FIGURAS Figura 1. Mapa do rio Paraguaçu localizado no estado da Bahia................................3 Figura 2. Espécie Kalyptodoras bahiensis...................................................................7 Figura 3.Posição Taxonomica da Kalyptodoras bahiensis ..........................................8 Figura 4. Mapa indicando os principais pontos de coleta..........................................14 Figura 5.Imagens dos pontos de coleta.....................................................................15 Figura 6. Cromossomos metafásicos da espécie Kalyptodoras bahiensis ...............20 Figura 7: Cariótipo de Kalyptodoras bahiensis submetidos a coloração convencional com Giemsa............................................................................................................... 21 Fig 8. Produtos de amplificação gerados pelo primer (AAGC), na espécie Kalyptodoras bahiensis ..............................................................................................23 Fig 9. Produtos de amplificação gerados pelo primer (TAGG), na espécie Kalyptodoras bahiensis . ............................................................................................23 APENDICE APENDICE 1. Número de animais e respectivos pontos de coleta...........................32 ix SUMÁRIO RESUMO .................................................................................................................... vi ABSTRACT ............................................................................................................... vii LISTA DE FIGURAS .................................................................................................viii 1. INTRODUÇÃO ........................................................................................................1 2.REVISÃO DA LITERATURA ...................................................................................3 2.1. Área De Estudo. ...............................................................................................3 2.2. Ordem Siluriforme ..........................................................................................5 2.3 Família Doradídae e Espécie Kalyptodoras bahiensis.......................................6 2.4 Estudos Genéticos ..........................................................................................8 2.5. Análise Citogenética e Genética Molecular ......................................................9 2.5.1. Análise Citogenética...................................................................................9 2.5.2. Análise Genética Molecular......................................................................11 3. JUSTIFICATIVA ....................................................................................................12 4. OBJETIVOS ..........................................................................................................13 4.1 Objetivo Geral..................................................................................................13 4.2 Objetivos Específicos.......................................................................................13 5. MATERIAIS E MÉTODOS ....................................................................................14 5.1 Materiais.......................................................................................................14 5.1.1 Espécie Analisada.....................................................................................14 5.1.2 Locais de Coleta........................................................................................14 5.2 Métodos...........................................................................................................15 5.2.1 Citogenética..............................................................................................15 5.2.1.1 Obtenção dos cromossomos mitóticos ............................................15 5.2.1.2 Análise Cariotípica ..........................................................................17 5.2.1.3 Montagem Do Cariótipo ...................................................................18 5.3 Molecular .........................................................................................................18 6.RESULTADO E DISCUSSÃO ........................................................................................ 19 6.1 Resultados Citogenéticos ..............................................................................................19 6.2 Genética Molecular..........................................................................................21 7.CONSIDERAÇÕES FINAIS ...................................................................................24