Citogenética E Quantificação De DNA De Cinco Espécies E Um Híbrido Do Gênero Catasetum (Orchidaceae)
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UNIVERSIDADE DO ESTADO DE MATO GROSSO PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E MELHORAMENTO DE PLANTAS ALESON VIEIRA Citogenética e quantificação de DNA de cinco espécies e um híbrido do gênero Catasetum (Orchidaceae) ALTA FLORESTA MATO GROSSO – BRASIL DEZEMBRO – 2013 ALESON VIEIRA Citogenética e quantificação de DNA de cinco espécies e um híbrido do gênero Catasetum (Orchidaceae) Dissertação apresentada à UNIVERSIDADE DO ESTADO DE MATO GROSSO, como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, para obtenção do título de Mestre. Orientador: Profª. Drª. Isane Vera Karsburg ALTA FLORESTA MATO GROSSO – BRASIL DEZEMBRO - 2013 WALTER CLAYTON DE OLIVEIRA CRB 1/2049 Vieira, Aleson. V658c Citogenética e quantificação de DNA de cinco espécies e um híbrido do gênero Catasetum (Orchidaceae) / Aleson Vieira. – Alta Floresta , 2013 73 f. ; 30 cm. Dissertação (Mestrado em Genética e Melhoramento de Plantas) Universidade do Estado de Mato Grosso. Bibliografia: f. 39-56 Orientador: Isane Vera Karsburg 1. Citogenética. 2. Orchidaceae. 3. Amazônia. I. Autor. II. Título. CDU 575+582.594 i A minha mãe Irma da Conceição Palhano Vieira. “Um belo dia abandonarei este corpo que outrora prestimosamente abrigou a minha alma; e neste dia vislumbrarei em breves instantes toda trajetória percorrida. Poderei até concluir que tudo o que fiz foi em vão, tudo em que acreditei não passaram de tolices, e ainda assim serei feliz. Pois só pelo fato de ter conhecido tão nobre pessoa esta existência já terá valido a pena”. (Dedico) ii AGRADECIMENTOS À Universidade do Estado de Mato Grosso (UNEMAT) e ao Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, pelo incentivo, oportunidade, e reconhecimento. À Capes pelo apoio financeiro. À Professora Isane Vera Karsburg, pela orientação, amizade, confiança, apoio, dedicação, por seus ensinamentos, e por sua força. À Doutora Nair Dahmer por sua colaboração, dedicação, amizade e ensinamentos. Ao Doutor Wellington Ronildo Clarindo que em 2009 me recebeu de braços abertos em Viçosa, e que agora participa de um momento tão importante em minha carreira; obrigado por sua colaboração em todos os momentos. À Professora Celice Alexandre Silva pelo apoio e incentivo A Professora Leonarda Grillo Neves, que além de ensinar me ajudou imensamente no período de sua disciplina. Às Professoras Rosana Rodrigues e Telma Nair Santana Pereira, pelo apoio, pelos ensinamentos, e por sua dedicação. À equipe do Laboratório de Citogenética e Cultura de Tecidos Vegetais (UNEMAT - AF). Ao aluno Daniel Pereira Miranda (Graduando em Agronomia), e às alunas Vanessa dos Santos de Mello (Graduação em Biologia) e Alumara Dins Teixeira (Graduação em Agronomia) por sua ajuda sempre que necessária, pelos momentos de risos e brincadeiras. Ao Mestrando Ricardo Gallo por toda a ajuda. À Mestranda Angelitta da Silva Benevenutti pela ajuda. À minha amiga “irmã” Wandreilla Moreira (MP) que me acompanhou desde o início desta jornada, que esteve comigo rindo, estudando, reclamando, se queixando, por sua amizade e por transformar cada dia em um momento especial. À Tia Ivone Damacena Moreira por seu carinho, e por ter me recebido em sua casa como uma mãe. Aos meus amigos “irmãos” Jonas Dourado Júnior, Simão Justen, Thiago Maldonado, Márcio Trettel e Rodrigo Battisti por todos os momentos, não importa qual a circunstância. iii À Aguida Morales Pereira, Viviane Guzzo De Carlli Poelking e Gustavo Carvalho pela amizade e por tudo o que vocês representam em minha vida. Ao Doutor André Narvaes de Rocha Campos por todos os seus ensinamentos, apoio e compreensão. À minha irmã Marciane M. Vieira Astolpho, meu cunhado Marcelus Nahime Astolpho, e a minha sobrinha Ana Helena Vieira Astolpho, pelo apoio e carinho. Ao meu irmão Alex Vieira, minha cunhada Manoela Ramos Lemos Vieira, e ao meu sobrinho João Pedro Lemos Vieira, pelo incentivo. Ao meu irmão Alan Vieira, e minha irmã Débora Ribeiro pelo apoio e carinho. Ao meu pai Mauro Rodrigues Vieira por seu apoio. À minha mãe Irma da Conceição Palhano Vieira que soube entender todos estes momentos ao longo de dois anos de dedicação, que sempre me apoiou, incentivou, e acreditou na minha capacidade, por seu infinito amor, paciência, conselhos, por seu carinho e respeito. A todos os que de forma direta ou indireta estiveram envolvidos com a minha formação, que se dedicaram, e que acreditaram que era possível. E principalmente a Deus por me capacitar todos os dias, por me fortalecer, por me dar entendimento, conhecimento, discernimento e sabedoria em todos os momentos. iv “Aprendi que se eu jamais voltar a buscar os anseios do meu coração, não irei procura-los além do meu próprio quintal, e se não estiverem lá! É porque realmente nunca foram meus!” (L. Frank Baum). v BIOGRAFIA ALESON VIEIRA, filho de Mauro Rodrigues Vieira e Irma da Conceição Palhano Vieira nasceu em Alta Floresta – MT, no dia 08 de março. Em 2004 ingressou na Universidade do Estado de Mato Grosso, e em Fevereiro de 2009 graduou-se em Licenciatura Plena em Ciências Biologia, no município de Alta Floresta. Em março de 2009 mudou-se para Viçosa-MG, onde permaneceu como bolsista de DTI – III, pelo Projeto Genosoja, durante dois anos, no Laboratório de Fisiologia Vegetal, na Universidade Federal de Viçosa (UFV). Em novembro de 2011 foi aprovado em primeiro lugar, para a primeira turma do Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento de Plantas, em nível de mestrado pela Universidade do Estado de Mato Grosso (UNEMAT). Em fevereiro de 2012 matriculou-se e em março do mesmo ano iniciou as disciplinas nos câmpus de Alta Floresta, Tangará e Cáceres – Mato Grosso. Em dezembro de 2013 submeteu-se à defesa de dissertação no campus Universitário de Alta Floresta, sob orientação da Profª Drª Isane Vera Karsburg. vi SUMÁRIO RESUMO..................................................................................................................... x ABSTRACT ............................................................................................................... xii 1. INTRODUÇÃO ...................................................................................................... xii 2. REVISÃO DE LITERATURA ................................................................................... 2 2.1 FAMÍLIA Orchidaceae ........................................................................................ 2 2.2 GÊNERO Catasetum ......................................................................................... 5 2.3 CITOGENÉTICA ................................................................................................ 9 2.4 CITOMETRIA DE FLUXO ................................................................................ 12 3. MATERIAL E MÉTODOS ...................................................................................... 15 3.1 CULTIVO E OBTENÇÃO DAS PLÂNTULAS ................................................... 15 3.2 CITOGENÉTICA .............................................................................................. 15 3.2.1 ANÁLISES DOS DADOS CROMOSSÔMICOS ......................................... 16 3.3 CITOMETRIA DE FLUXO ................................................................................ 17 3.3.1 QUANTIFICAÇÃO DO CONTEÚDO DE DNA NUCLEAR ......................... 17 4. RESULTADOS E DISCUSSÃO ............................................................................. 19 4.1 CITOMETRIA DE FLUXO ................................................................................ 19 4.2 CITOGENÉTICA .............................................................................................. 23 5. CONCLUSÕES ..................................................................................................... 38 6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................................... 39 vii LISTA DE FIGURAS Figura 01 - Histograma representando os núcleos corados com iodeto de propídeo das espécies (A) Catasetum x altaflorestense Benelli & Grade. (2010), (B) Catasetum boyi Mansf. (1930), (C) Catasetum blackii Pabst. (1964), (D) Catasetum fimbriatum Lindl. (1850), (E) Catasetum juruenense Hoehne. (1915), (F) Catasetum schimidtianum Miranda & Lacerda. (1992). ............................................................... 22 Figura 2 – Metáfase mitótica de Catasetum x altaflorestense 2n=4x=80 cromossomos pré-tratados com 3µm de trifluralim por 18 horas, corados com Giemsa 5% por 3 minutos. Barra 10 µm. .................................................................. 25 Figura 3 – Metáfase mitótica de Catasetum boyi 2n=3x=54 cromossomos pré- tratados com 3µm de trifluralim por 18 horas, corados com Giemsa 5% por 3 minutos. Barra 10 µm. ............................................................................................... 27 Figura 5 – Metáfase mitótica de Catasetum fimbriatum 2n=6x=108 cromossomos pré-tratados com 3µm de trifluralim por 18 horas, corados com Giemsa 5% por 3 minutos. Barra 10 µm. ............................................................................................... 30 Figura 6 - Metáfase mitótica de Catasetum jururenense 2n=3x=66 cromossomos pré- tratados com 3µm de trifluralim por 18 horas, corados com Giemsa 5% por 3 minutos. Barra 10 µm. ............................................................................................... 32 Figura 8 - Dendrograma representado pela distância entre vizinho mais próximo, relação das espécies de Catasetum e do híbrido (1 – C. x altaflorestense, 2 – C. blackii, 3 – C. boyi,