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Universidad Técnica Del Norte Facultad De UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE FACULTAD DE INGENIERÍA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA “ESTABLECIMIENTO DE UNA METODOLOGÍA PARA LA EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA DE LA ORQUÍDEA Dracula vampira” Trabajo de Titulación Previa a la Obtención del Título de Ingeniero en Biotecnología AUTOR: ADRIÁN DAVID TORRES YÁNEZ DIRECTORA: Silvia Montes Cruz PhD. Ibarra – Ecuador JULIO 2019 I II UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE BIBLIOTECA UNIVERSITARIA AUTORIZACIÓN DE USO Y PUBLICACIÓN A FAVOR DE LA UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE 1. IDENTIFICACIÓN DE LA OBRA En cumplimiento del Art. 144 de la Ley de Educación Superior, hago la entrega del presente trabajo a la Universidad Técnica del Norte para que sea publicado en el Repositorio Digital Institucional, para lo cual pongo a disposición la siguiente información: DATOS DE CONTACTO CÉDULA DE DENTIDAD: 1003604046 APELLIDOS Y NOMBRES: Torres Yánez Adrián David DIRECCIÓN: Ibarra, Galo Plaza 10-102 y Dolores Gómez EMAIL: [email protected] TELÉFONO FIJO: (06)2660270 MÓVIL: 0986367091 DATOS DE LA OBRA ESTABLECIMIENTO DE UNA METODOLOGÍA TÍTULO: PARA LA EMBRIOGENESIS SOMÁTICA DE LA ORQUÍDEA Dracula vampira. AUTOR: TORRES YÁNEZ ADRIÁN DAVID FECHA: 11 de Julio del 2019 PROGRAMA: PREGRADO TÍTULO POR EL QUE Ingeniero en Biotecnología OPTA: DIRECTOR: Silvia Montes PhD. III IV PRESENTACIÓN Yo, ADRIÁN DAVID TORRES YÁNEZ como autor de la Tesis Titulada “ESTABLECIMIENTO DE UNA METODOLOGÍA PARA LA EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA DE LA ORQUÍDEA Dracula vampira”, me hago responsable de los resultados, discusión, conclusiones y demás parte de la investigación; y pongo este documento como fuente de apoyo para consultas dirigidas a todos los estudiantes. V AGRADECIMIENTO A Dios, por nunca abandonarme y aún en mis días más oscuros iluminarme. A mi directora, Doctora Silvia Montes por su guía y motivación desde el inicio de mis actividades en el laboratorio de Biotecnología Vegetal. A mis asesores, doctora María Cristina Echeverría, magister Lucía Vásquez y magister Franklin Sánchez, por su ayuda y la aplicación de sus conocimientos durante el desarrollo de mi trabajo de titulación. A mis padres, Luis y Ana quienes por su amor confianza y apoyo no dejaron que me rinda ni en las más difíciles situaciones. A la Ingeniería Evelyn Gómez por su ayuda en el desarrollo y formulación de medios de cultivo. A la doctora Luz Marina Pereira y al doctor Juan Carlos García por su guía y colaboración en el desarrollo del diseño experimental y redacción del documento de trabajo de titulación respectivamente. A los señores David Blanco y Darwin Pasquel por su amistad y capacitación en el proceso de histología. A todos quienes forman parte del laboratorio de Biotecnología Vegetal de la Universidad Técnica del Norte por la ayuda prestada. Adrián VI DEDICATORIA A Alexandra, mi esposa por el cariño, comprensión e inspiración que me brindo durante todos estos años, quien ha sido y será el motor de esta y futuras investigaciones. Adrián VII ÍNDICE DE CONTENIDOS ÍNDICE DE FIGURAS ....................................................................................................... XI ÍNDICE DE TABLAS ...................................................................................................... XIII RESUMEN ....................................................................................................................... XIV ABSTRACT ..................................................................................................................... XVI CAPÍTULO I ......................................................................................................................... 1 INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1 1.1 Objetivos .................................................................................................................... 3 1.1.1 Objetivo General........................................................................................................... 3 1.1.2 Objetivos Específicos ................................................................................................... 3 CAPITULO II ........................................................................................................................ 4 REVISIÓN LITERARIA ...................................................................................................... 4 2.1 Género Dracula ............................................................................................................... 4 2.1.1 Dracula vampira .......................................................................................................... 4 2.1.1.1 Descripción botánica ................................................................................................. 5 2.2 Reproducción de orquídeas ............................................................................................. 6 2.2.1 Biología de la germinación de las orquídeas ................................................................ 7 2.2.1.1 Germinación asimbiótica de orquídeas...................................................................... 7 2.3 Cultivo in vitro ................................................................................................................ 8 2.3.1 Selección de plantas madre .......................................................................................... 8 2.3.2 Desinfección de explantes ............................................................................................ 9 2.3.4 Siembra de explantes .................................................................................................... 9 2.3.5 Crecimiento .................................................................................................................. 9 2.3.6 Aclimatación ................................................................................................................. 9 2.3.7 Medios de cultivo ....................................................................................................... 10 2.3.7.1 Reguladores de crecimiento..................................................................................... 10 2.3.7.1.1 Auxinas ................................................................................................................. 10 2.3.7.1.2 Citoquininas .......................................................................................................... 11 2.3.7.1.3 Giberelinas ............................................................................................................ 11 2.4 Micropropagación de orquídeas .................................................................................... 11 2.4.1 Morfogénesis .............................................................................................................. 12 VIII 2.4.2 Organogénesis ............................................................................................................ 12 2.4.3 Embriogénesis somática ............................................................................................. 12 2.4.3.1 Embriogénesis somática directa .............................................................................. 13 2.4.3.2 Embriogénesis somática indirecta - Inducción y cultivo de callo ........................... 13 2.4.3.2.1 Fases de la embriogénesis somática indirecta ...................................................... 13 2.4.4.2.2 Factores que afectan el cultivo de tejidos vía embriogénesis somática ................ 14 2.5 Histología ...................................................................................................................... 14 2.5.1 Técnicas Histológicas ................................................................................................. 15 2.5.1.1 Fijación .................................................................................................................... 15 2.5.1.2 Deshidratación ......................................................................................................... 16 2.5.1.3 Infiltración ............................................................................................................... 16 2.5.1.4 Seccionamiento en micrótomo ................................................................................ 16 2.5.1.5 Desparafinado, rehidratación y tinción .................................................................... 16 2.5.1.6 Montaje .................................................................................................................... 17 CAPITULO III .................................................................................................................... 18 MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................ 18 3.1 Caracterización del área de estudio ............................................................................... 18 3.2 Obtención del material biológico .................................................................................. 18 3.2.1 Disección de la flor ..................................................................................................... 19 3.3 Selección y desinfección de hojas ................................................................................. 20 3.4 Preparación de medios de cultivo. ................................................................................. 23 3.6 Siembra de explantes foliares en medio de cultivo ......................................................
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    INDICE Página 3.1. Introducción 1 3.2 Filogenia 1 3.3. Características de los integrantes de las Monocotiledóneas 5 3.3.1. Orden Acorales 8 3.3.1.1. Familia Acoraceae 8 3.3.2. Orden Alismatales 10 3.3.2.1. Familia Araceae 10 3.3.2.2. Familia Hydrocharitaceae 20 3.3.2.3. Familia Butomaceae 26 3.3.2.4. Familia Alismataceae 29 3.3.2.5. Familia Limnocharitaceae 33 3.3.2.6. Familia Zosteraceae 37 3.3.2.7. Familia Potamogetonaceae 40 3.3.3. Orden Petrosaviales 45 3.3.3.1. Familia Petrosaviaceae 45 3.3.4. Orden Dioscoreales 47 3.3.4.1. Familia Dioscoreaceae 47 3.3.5. Orden Pandanales 52 3.3.5.1. Familia Triuridaceae 52 3.3.5.2. Familia Pandanaceae 56 3.3.6. Orden Liliales 59 3.3.6.1. Familia Smilacaceae 59 3.3.6.2. Familia Liliaceae 63 3.3.6.3. Familia Alstroemeriaceae 66 3.3.7. Orden Asparagales 70 3.3.7.1. Familia Orchidaceae 70 3.3.7.2. Familia Iridaceae 84 3.3.7.3. Familia Amaryllidaceae 89 3.3.7.4. Familia Agavaceae 94 Monocotiledóneas Commelinides 100 3.3.8. Orden Arecales 100 3.3.8.1. Familia Arecaceae 100 3.3.9. Orden Commelinales 123 3.3.9.1. Familia Commelinaceae 123 3.3.9.2. Familia Pontederiaceae 128 3.3.10. Orden Poales 133 3.3.10.1. Familia Typhaceae 133 3.3.10.2. Familia Bromeliaceae 139 3.3.10.3. Familia Juncaceae 148 3.3.10.4.
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