Aspectos Reproductivos, Citogenéticos Y Evolutivos Aplicados Al Mejoramiento En El Género Passiflora L

Tesis Doctoral

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Bugallo, Verónica Lucía 2017

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Cita tipo APA: Bugallo, Verónica Lucía. (2017). Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6250_Bugallo

Cita tipo Chicago: Bugallo, Verónica Lucía. "Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.". Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6250_Bugallo

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UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Departamento de Ecología, Genética y Evolución

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tesis para optar al título de Doctora de la Universidad de Buenos Aires en el área Ciencias Biológicas

Ing. Agr. Verónica Lucía Bugallo

Directoras de Tesis: Dra. Lidia Poggio & Dra. Gabriela Facciuto Consejera de Estudios: Dra. María Isabel Remis

 Laboratorio de Citogenética y Evolución - Departamento de Ecología, Genética y Evolución - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Universidad de Buenos Aires.  Instituto de Floricultura - INTA.  Cátedra de Genética - Facultad de Agronomía - Universidad de Buenos Aires.

Fecha de defensa: 2 de agosto de 2017 Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Agradecimientos

A las instituciones que me respaldaron: Facultad de Agronomía, U.B.A.;

Laboratorio de Citogenética y Evolución, Facultad de Ciencias Exactas y

Naturales, U.B.A. e Instituto de Floricultura del I.N.T.A.

A mis directoras.

Al jurado: Sara Maldonado, Gabriel Rua y Sandra Aliscioni.

A los amigos que colaboraron en esta tesis: Florencia Realini, Marisa

Bonasora, Hernán Burrieza, María Julia Pannunzio, Carolina Castagnet y

Ramiro Oviedo.

Índice

Introducción general………………………………………………………………….…..1

Capítulo 1: Las especies argentinas del género Passiflora……………………….9

Introducción………………………………………………………………………...9

Materiales y métodos…………………………………………………………...15

Resultados…………………………………………………………………………25

Discusión…………………………………………………………………………..69

Conclusiones………………………………………………………………………81

Capítulo 2: Hibridación interespecífica entre especies nativas del género

Passiflora subgénero Passiflora……………………………………...... 83

Introducción……………………………………………………………………….83

Materiales y métodos…………………………………………………………….87

Resultados…………………………………………………………………………90

Discusión…………………………………………………………………………100

Conclusiones…………………………………………………………………….109

Capítulo 3: Estudios citogenéticos en híbridos interespecíficos de

Passiflora…………………………………………………………………………………111

Introducción……………………………………………………………………..111

Materiales y métodos…………………………………………………………115

Resultados………………………………………………………………………118

Discusión………………………………………………………………………..162

Conclusiones……………………………………………………………………175

Capítulo 4: Estudio de caracteres fenotípicos de importancia ornamental en especies e híbridos de Passiflora…………………………...... 177

Introducción…………………………………………………………………….177

Materiales y métodos…………………………………………………………181

Resultados………………………………………………………………………185

Discusión………………………………………………………………………..228

Conclusiones……………………………………………………………………236

Capítulo 5: Inducción de poliploides en Passiflora…………………………….238

Introducción…………………………………………………………………….238

Materiales y métodos………………………………………………………….243

Resultados……………………………………………………………………….249

Discusión…………………………………………………………………………266

Conclusiones…………………………………………………………………….271

Conclusiones generales……………………………………………………………….273

Bibliografía……………………………………………………………………………….277

Anexo 1: Modelado del nicho ecológico en especies nativas de Passiflora…300

Anexo 2: Soluciones y buffers empleados para estudios citológicos………..368

Anexo 3: Análisis estadísticos sobre la cantidad de ADN en especies de

Passiflora…………………………………………………………………………………371

Anexo 4: Análisis estadísticos sobre hibridación interespecífica en

Passiflora…………………………………………………………………………………374

Anexo 5: Híbridos entre especies argentinas de Passiflora publicados hasta la fecha……………………………………………………………………………………….376

Anexo 6: Análisis estadísticos sobre citogenética de híbridos interespecíficos………………………………………………………………………….379

Anexo 7: Análisis estadísticos sobre cantidad de ADN en híbridos interespecíficos……………………………………………………………………….…381

Anexo 8: Análisis estadísticos sobre caracteres fenotípicos…………………..383

Anexo 9: Registros de la evaluación de tolerancia a temperaturas invernales de Buenos Aires………………………………………………………………………...404

Anexo 10: Formulario y cuestiorario técnico para el registro de la variedad

Passiflora “Amatista” INTA…………………………………………………………...406

Anexo 11: Análisis estadíticos sobre inducción de poliploides en

Passiflora…………………………………………………………………………………434

III

Resumen

El género Passiflora cuenta con más de 500 especies, de la cuales 19 son nativas de Argentina. Este género está incluido en un programa de mejoramiento que tiene como objetivo la obtención de variedades ornamentales con características fenotípicas novedosas y con tolerancia a bajas temperaturas.

En el análisis citogenético de catorce especies nativas, se reportó por primera vez el número somático 2n = 18 para P. tenuifila y para un citotipo de

P. mooreana. Además, se confirmaron los números básicos x = 9 para el subgénero Passiflora, x = 6 para Decaloba y x = 10 para Dysosmia. Los parámetros cariotípicos obtenidos mediante técnicas clásicas y moleculares

(FISH) permitieron elaborar los idiogramas de todas las especies y establecer diferencias entre los subgéneros. La hibridación in situ genómica (GISH) reveló que el subgénero Passiflora posee mayor afinidad genómica con el subgénero

Dysosmia que con Decaloba. La cantidad de ADN estimada mediante citometría de flujo segregó a los subgéneros con menores cantidades de ADN

(0,5 a 0,72 pg.), Dysosmia y Decaloba, respecto de Passiflora (0,9 a 2,5 pg.).

Se encontraron barreras de aislamiento reproductivo que actuarían en condiciones naturales (diferencias de nicho ecológico y en los períodos de floración) y otras que actuarían dificultando la formación de híbridos en el programa de mejoramiento (incompatibilidad unilateral, ausencia de formación de frutos, fallas en la germinación de las semillas e inviabilidad de plántulas). IV

La especie P. amethystina fue muy prolífica, produciendo frutos con seis de los ocho taxones con los que se la cruzó. Por otro lado, P. alata fue la especie con la que se registró la mayor cantidad de cruzamientos inviables.

En los estudios meióticos, los híbridos que presentaron los porcentajes máximo y mínimo de meiocitos con 9 bivalentes fueron P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa y P. amethystina x P. alata (95 y 40%, respectivamente).

Algunos híbridos estériles presentaron meiosis regulares y elevados índices meióticos, fenómeno que se explicaría por la hipótesis de la hibridez estructural críptica. Además, híbridos altamente estériles presentaron meiosis irregular, puente y fragmento en anafase I, husos tripolares y citomixis. La mayor viabilidad del polen en híbridos se registró en P. amethystina x P. caerulea (90,4%) y P. amethystina x P. edulis f. edulis (79,4%).

La técnica de hibridación in situ (GISH), permitió reconocer los genomas parentales en los híbridos P. alata x P. caerulea, P. alata x P. cincinnata, P. alata x P. amethystina y P. mooreana x P. cincinnata, por lo que se infiere que existen diferencias en ADN repetido entre las especies progenitoras de cada híbrido.

El contenido de ADN de los híbridos no siempre coincidió con el promedio del tamaño genómico de sus parentales. Esto podría deberse a cambios revolucionarios tales como eliminación/ganancia de secuencias repetidas codificantes y no codificantes.

Estudios fenotípicos mostraron que la superficie de las hojas y el tamaño de las flores en híbridos fueron intermedios a los de los parentales en

la mayoría de los cruzamientos estudiados, mostrando herencia cuantitativa, mientras que en otros se registró una herencia transgresiva de estos caracteres, sugiriendo heterosis.

Además, se logró la inducción de poliploides a partir del tratamiento con

Colchicina de estacas enraizadas y plántulas de especies e híbridos.

Las pruebas de tolerancia a las bajas temperaturas y la estimación del potencial de la cobertura de estructuras para cortinas y paredes verdes permitieron seleccionar especies e híbridos, uno de los cuales se encuentra en proceso de registro como la primera variedad del género en Argentina.

Palabras clave: Passiflora, plantas nativas de Argentina, hibridación interespecífica, citogenética, mejoramiento de plantas ornamentales, inducción de poliploides.

Reproductive, cytogenetic and evolutionary aspects applied to breeding in the genus Passiflora

Abstract

The genus Passiflora has more than 500 species, nineteen of them are native to Argentina. This genus is included in a breeding program that aims to obtain ornamental varieties with novel phenotype characteristics and tolerance to low temperatures.

In the cytogenetic analysis of fourteen native species, the somatic number 2n

= 18 was reported for the first time for P. tenuifila and for a P. mooreana cytotype. In addition, the basic numbers x = 9 were confirmed for the subgenus Passiflora, x = 6 for Decaloba and x = 10 for Dysosmia. The karyotype parameters obtained by classical and molecular techniques (FISH) allowed to elaborate the idiograms of all the species and to establish differences between the subgenera. Genomic in situ hybridization (GISH) revealed that the Passiflora subgenus possesses greater genomic affinity with the subgenus Dysosmia than with Decaloba. The amount of DNA estimated by flow cytometry showed that subgenera Dysosmia and Decaloba has smaller amounts of DNA (0.5 to 0.72 pg.), compared to Passiflora (0.9 to 2.5 pg.).

Barriers of reproductive isolation were found. They would act in natural conditions (differences of ecological niche and in the flowering periods) and

VII

others that would hinder the formation of hybrids in the breeding program

(unilateral incompatibility, absence of fruit formation, seed germination and seedling infeasibility).

The species P. amethystina was very prolific, producing fruits with six of the eight taxa with which it crossed. On the other hand, P. alata was the species with the highest number of non-viable crosses.

In the meiotic studies, the hybrids that presented the maximum and minimum percentages of 9 bivalents were P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa and P. amethystina x P. alata (95 and 40%, respectively). Some sterile hybrids presented regular meiosis and high meiotic indexes, a phenomenon that would be explained by the hypothesis of cryptic structural hybridity. In addition, highly sterile hybrids presented irregular meiosis, bridge and fragment in anaphase I, tripolar spindles and cytomixis. The highest viability of pollen in hybrids was recorded in P. amethystina x P. caerulea (90.4%) and P. amethystina x P. edulis f. edulis (79.4%).

The in situ hybridization technique (GISH) allowed to recognize the parental genomes in the hybrids P. alata x P. caerulea, P. alata x P. cincinnata, P. alata x P. amethystina and P. mooreana x P. cincinnata, so it is inferred that there are differences in repetitive DNA between the progenitor species of each hybrid.

VIII

The DNA content of the hybrids did not always coincide with the average genomic size of their parents. This could be due to revolutionary changes such as deletion / gain of repeated coding and non-coding sequences.

Phenotypic studies showed that the leaf surface and flower size in hybrids were intermediate to those of the parents in most of the studied crosses, showing quantitative inheritance, whereas in others a transgressive inheritance of these characters was registered, suggesting heterosis.

In addition, the induction of polyploids was obtained from the treatment with

Colchicine of rooted cuttings and seedlings of species and hybrids.

The tests of tolerance to low temperatures and the estimation of the potential of the covering of structures for curtains and green walls allowed to select species and hybrids, one of which is in the process of being registered as the first variety of the genus in Argentina.

Key words: Passiflora, native plants to Argentina, interspecific hybridization, cytogenetics, ornamental plant breeding, poliploidization.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Introducción general

El género Passiflora L., perteneciente a la familia Passifloraceae, consta de alrededor de 500 especies distribuidas, en su mayoría, en Europa y

América. Las especies americanas se encuentran en el centro y sur del continente y se reconocen 19 especies originarias de Argentina (Deginani,

2001). Las especies argentinas de Passiflora son: P. alata Curtis, P. amethystina J. C. Mikan, P. caerulea L., P. capsularis L., P. chrysophylla

Chodat, P. cincinnata Mast., P. edulis Sims, P. elegans Mast., P. foetida L., P. giberti N E Br., P. misera Kunth., P. mooreana Hook., P. morifolia Mast., P. palmatisecta Mast., P. suberosa L., P. tenuifila Killip, P. tucumanensis Hook.,

P. umbilicata (Griseb.) Harms, P. urnaefolia Rusby.

Las nativas del género Passiflora poseen gran variabilidad fenotípica.

Sus flores poseen pétalos de diversas formas y variados colores según la especie y han despertado gran interés en la industria de plantas ornamentales en Europa. La corona, característica de la familia, puede presentarse en uno o varios grupos concéntricos, puede ser lisa o con franjas transversales coloreadas, caracteres que le aportan un aspecto exótico y le otorgan gran valor ornamental (Figura I.1).

Las especies argentinas del género Passiflora, según Deginani (2001), pertenecen a cuatro de los 23 subgéneros descriptos por Killip (1938) y, según

MacDougal & Feuillet (2004), a dos. En esta tesis, se tomará como referencia

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. principal el trabajo de Deginani (2001) por tratarse, específicamente de las especies de Passiflora nativas de Argentina. En la Tabla I.1 se presentan los subgéneros y especies argentinas.

Figura I.1: Especies de Passiflora nativas de Argentina de la colección in vivo del Instituto de Floricultura. Pertenecientes al subgénero Passiflora: a: P. caerulea, b: P. edulis f. edulis, c: P. edulis f. flavicarpa, d: P. tucumanensis, e: P. alata, f: P. cincinnata, g: P. elegans, h: P. mooreana (diploide), i: P. mooreana (tetraploide), j: P. amethystina; del subgenero Dysosmia: k: P. foetida (corona rosa), l: P. foetida (corona blanca), del subgénero Decaloba: m: P. misera, n: P. suberosa, o: P. morifolia. Barra: 1cm.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla I.1: Especies argentinas de Passiflora y subgéneros según Deginani (2001) y MacDougal & Feuillet (2004).

En nuestro país los recursos genéticos nativos han sido poco explotados para el desarrollo de plantas ornamentales; sin embargo, han participado en el desarrollo de variedades por parte de empresas internacionales. No

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. obstante, a pesar de las inmensas ganancias que generan, nuestro país no recibe beneficio alguno (Bugallo et al., 2011).

En el Instituto de Floricultura se trabaja en proyectos de mejoramiento genético que contribuyen con la actividad florícola introduciendo nuevas variedades desarrolladas a partir de germoplasma nativo. El programa de mejoramiento en el género Passiflora con fines ornamentales está orientado a la obtención de variedades vistosas con flores coloridas, tolerantes a las temperaturas invernales.

El Instituto de Floricultura cuenta con una colección de trabajo in vivo, compuesta por 50 genotipos correspondientes a 15 especies nativas y cuatro no nativas de Passiflora. Las plantas se encuentran bajo invernáculo con temperatura mínima de 10ºC en macetas de 20 litros con un sustrato compuesto por compost de tierra, resaca de río, hoja de pino molida y corteza de pino (1:1:1:1). Los genotipos participantes en el programa de mejoramiento mencionado, sus códigos y procedencia se listan en la Tabla I.2.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla I.2: Listado de genotipos de Passiflora y su procedencia en la colección in vivo del Instituto de Floricultura del INTA.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

La hibridación interespecífica es una de las fuentes más importantes de variación genética en el mejoramiento de plantas ornamentales (van Tuyl &

De Jeu, 1997). Esta estrategia ha sido ampliamente utilizada en el mejoramiento de Passiflora (Ocampo et al., 2016; Bugallo et al., 2011; Ulmer

& MacDougal, 2004; Ramírez, 2006; Payán & Martín, 1975). Sin embargo, existen mecanismos que previenen la hibridación entre distintas especies. La formación de frutos puede ser obstaculizada por barreras pre-cigóticas y post- cigóticas (Baak et al., 2015; Singh, 2003; Grant, 1989; Stebbins, 1978).

Las barreras pre-cigóticas aíslan a los individuos espacial, temporal, mecánica o gaméticamente y pueden tener origen desde el primer contacto entre el polen y el estigma (Baack et al., 2015; Shivanna & Sawhney, 1997;

Levin, 1971). Las barreras post-cigóticas pueden deberse a defectos en la semilla híbrida que reprimen la germinación, a debilidad o letalidad vegetativa del híbrido interespecífico, a su esterilidad o a la de generaciones posteriores

(Baack et al., 2015).

Otro de los aspectos importantes a considerar al realizar cruzamientos interespecíficos es el relativo a las similitudes genómicas entre las especies.

La posibilidad de hibridación es una medida indirecta del grado de relación genómica entre las especies parentales. Los cruzamientos entre especies con genomas similares usualmente producen frutos normalmente, mientras que entre los de genomas diferentes es común el aborto de los embriones o la esterilidad de los híbridos, entre otras manifestaciones (Singh, 2003). En el

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. caso de la obtención del producto híbrido, un punto clave es el estudio de la meiosis, que será normal cuanto más semejantes entre sí sean las constituciones cromosómicas de sus padres (Poggio et al., 2016; Cubero,

2003; Singh, 2003). La inviabilidad del polen de los híbridos o la ausencia de fructificación puede ser atribuida a la escasa homología cromosómica entre los padres del híbrido que resulta en la formación de gametas desbalanceadas

(Singh, 2003). La reducción de la correspondencia cromosómica entre especies lejanamente relacionadas es atribuida a diferencias estructurales entre cromosomas perpetuadas durante la especiación (Poggio et al., 2016; Singh,

2003).

Las especies de Passiflora presentan una gran variabilidad fenotípica y se distribuyen entre los trópicos de cáncer y de capricornio, llegando a su límite de tolerancia a las bajas temperaturas a los 40º latitud sur donde se encuentra P. caerulea (Deginani, 2001).

Los accidentes geográficos, la distribución de los recursos hídricos, la disponibilidad de nutrientes y las características climáticas tienen influencia en las interacciones organismo-ambiente. En las poblaciones naturales, las características novedosas que aparecen se dan como consecuencia de estas interacciones y por selección natural (Baak et al., 2015; Grant, 1989;

Stebbins, 1978; Levin, 1971). La variabilidad presentada por una especie capacita a algunos ejemplares para arraigarse y adaptarse a ciertos hábitats mientras que otros de la misma población quedarían excluidos. Aquellos individuos que exploran nichos alternativos, podrían formar sub-poblaciones

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. diferentes a la ancestral y entre sí en varias características adaptativas evolucionando en una especie politípica de varias razas o subespecies por acumulación de cambios en diversos caracteres (Arnegard et al., 2014; Grant,

1989; Stebbins, 1978). La divergencia de las razas respecto de la especie ancestral puede disminuir el intercambio génico hasta producir el aislamiento reproductivo y generar una nueva especie. Esta divergencia puede ocurrir a partir del aislamiento espacio-temporal de poblaciones o bien disminuyendo la viabilidad y/o fertilidad de los híbridos. Cada una de las poblaciones aisladas puede constituir una nueva especie y cada una, a su vez, entrar en su propio ciclo de radiación adaptativa y especiación (Stebbins, 1978).

En esta tesis se estudian las especies argentinas del género Passiflora, sus similitudes y las diferencias que pudieron haber constituido barreras de aislamiento reproductivo, contribuyendo al proceso de especiación. También se analizan aspectos de la hibridación interespecífica entre ellas, así como las características citogenéticas y fenotípicas de los híbridos que pudieron obtenerse. A partir la evaluación de los caracteres, se aborda la selección de genotipos para el registro de la primera variedad ornamental de Passiflora en

Argentina. Además, se estudia la inducción de poliploides y las características asociadas a este fenómeno.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Capítulo 1: Las especies argentinas del género Passiflora

Introducción

El aislamiento reproductivo entre especies de plantas ocurre a través de diversas barreras que impiden el flujo génico. Entre los mecanismos de aislamiento reproductivo se distinguen barreras pre-cigóticas que impiden la fecundación (Baak et al., 2015). Dentro de esta clase de obstrucciones al flujo génico se encuentran factores espaciales (aislamiento geográfico), ambientales

(aislamiento ecológico) y reproductivos. Entre los reproductivos se pueden discriminar los externos (temporal, mecánico, etológico y por autogamia), y los internos (barreras de incompatibilidad, inviabilidad vegetativa de híbridos, esterilidad de híbridos o deterioro en generaciones posteriores) (Baak et al.,

2015; Grant, 1989).

Entre los factores de aislamiento ambientales, las diferencias ecológicas entre taxones suelen evolucionar tempranamente en la especiación ya que la selección natural favorece la adaptación a diferentes nichos ecológicos, derivando en aislamiento reproductivo (Arnegard et al., 2014).

Entre los factores de aislamiento reproductivo externos que se dan en la naturaleza, el aislamiento temporal se produce entre individuos con diferente período de floración ya que el desencuentro entre sus gametas impide el cruzamiento (Grant, 1989).

La capacidad de dos poblaciones para coexistir en una misma área

(simpatría) sin perder su identidad por hibridación o intercambio génico, es 9

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. considerada por los evolucionistas como un atributo de primera magnitud en el reconocimiento de dos especies como distintas. Sin embargo, cuando se ponen en contacto poblaciones alopátricas y producen individuos de características intermedias, son identificadas como razas o subespecies de la misma especie. Si el proceso de especiación se da de manera gradual, se podría esperar la ocurrencia de grados intermedios de diferenciación entre taxones con barreras reproductivas de rigidez variable (Stebbins, 1978, 1971).

La hibridación natural y el flujo génico pueden darse entre especies biológicas siempre que las barreras al cruzamiento tengan una eficacia menor al 100%

(Grant, 1989).

Las diferencias cromosómicas entre taxones constituyen uno de los factores de aislamiento reproductivo internos más importantes (Charron et al.,

2014). Cada especie tiene un complemento cromosómico propio. La comparación de los cromosomas de diferentes taxones podría mostrar patrones y mecanismos de la evolución cariotípica y su importancia en la diversificación y posterior especiación (Leitch et al., 2013). Las características del cariotipo son generalmente constantes en un grupo de especies y aún de géneros, pero a menudo ocurren variaciones estructurales y/o numéricas que pueden cambiar el número, tamaño y posición centromérica de los cromosomas y la simetría del cariotipo (Stebbins, 1971).

En el género Passiflora, la monofilia de cada subgénero está fuertemente respaldada por el número cromosómico básico, habiéndose encontrado en las

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. nativas complementos x = 6, x = 9 y x = 10 (Hansen et al., 2006; De Melo &

Guerra, 2003; Deginani, 2001).

Las técnicas de hibridación in situ FISH (fluorescent in situ hybridization) y GISH (genome in situ hybridization), permiten la caracterización citogenética a través de la morfología de los cromosomas, la identificación de secuencias y la similitud genómica (Younis et al., 2015). El

ADN ribosomal es el objetivo de estudio más frecuente mediante hibridación in situ, probablemente por tratarse de secuencias abundantes, repetitivas y altamente conservadas. Los eucariotas poseen dos tipos de ADNr, siendo el

35s el que codifica genes de ARNr 18s, 5.8s y 26s; y el 5s que codifica ARN 5s

(García et al., 2017). La hibridación in situ genómica GISH emplea ADN genómico total de una especie como sonda que hibrida sobre los cromosomas de otra, permitiendo detectar secuencias compartidas entre ambas especies

(Raina & Rani, 2001).

Además de las características cromosómicas, el tamaño del genoma puede presentar variabilidad intra e interespecífica. Los cambios en el tamaño del genoma involucran pérdida o ganancia de secuencias repetidas (elementos transponibles, retroelementos, microsatélites, macrosatélites, etc) (Bennetzen et al., 2005). Estas se localizan en regiones intergénicas y pueden estar dispersas en el genoma o en arreglos en tandem. Aunque los elementos transponibles son transcripcionalmente inactivos pueden activarse en condiciones de variación o estrés ambiental (McClintock, 1984). El estrés genómico producido por la hibridación interespecífica y la poliploidización,

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. tanto en la naturaleza o como consecuencia de prácticas de mejoramiento puede, en algunos casos, producir la amplificación de elementos transponibles. Algunos autores afirman que diferencias en el tamaño del genoma poseen significado adaptativo en la evolución, diversificación y adaptación a distintos ambientes (Greilhuber, 2005; Stebbins, 1978).

En este Capítulo se estudia la variabilidad presente en especies nativas del género Passiflora en cuanto a su constitución citogenética (características cariotípicas, detección de secuencias ribosomales repetitivas mediante técnicas moleculares FISH y comparación de diferentes subgéneros por GISH y cantidad de ADN), distribución geográfica y período de floración como barreras que pudieron haber contribuido al aislamiento reproductivo entre ellas durante la evolución.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Hipótesis

Las hipótesis nulas que se ponen a prueba en este Capítulo son:

Hipótesis 1: Las especies del género Passiflora estudiadas en esta tesis son

citogenética y cariotípicamente similares (no existen barreras de

aislamiento reproductivo de origen cromosómico).

Hipótesis 2: Las especies argentinas del género Passiflora tienen nichos

ecológicos y períodos de floración similares (no existen barreras de

aislamiento reproductivo espaciales y temporales).

Objetivos

- Modelar el nicho ecológico para cada especie nativa en Sudamérica

- Estudiar el período de floración de cada especie presente en la colección de trabajo del INTA

- Realizar recuentos cromosómicos para analizar los números somáticos en las diferentes especies nativas

- Confeccionar idiogramas para cada una de las especies

- Evaluar la cantidad de señales correspondientes a secuencias ribosomales

5s y 18s en cada taxón mediante hibridación in situ

- Estimar la cantidad de ADN en las especies nativas

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

- Efectuar la hibridación in situ utilizando ADN genómico total de especies de un subgénero sobre preparados cromosómicos de especies de otros subgéneros

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Materiales y métodos

1- Modelado de la distribución y nicho ecológico

Datos

Se utilizaron coordenadas geográficas de accesiones de las 19 especies argentinas de Passiflora coleccionadas en América. Los ejemplares tenidos en cuenta, su lugar de recolección y herbarios a los que pertenecen, se detallan en el Anexo 1.

Modelado del nicho ecológico

Los datos de herbario para cada una de las especies fueron ingresados al programa Maxent. Se evaluaron 19 variables bioclimáticas actuales estimadas con datos de 1950 a 2000 de WorldClim (Hijmans et al., 2005): temperatura media anual, media mensual, isotermalidad, estacionalidad, temperatura máxima del mes más cálido, temperatura mínima del mes más frío, rango anual de temperatura, temperatura media del cuartil más húmedo, temperatura media del cuartil más seco, temperatura media del cuartil más cálido, temperatura media del cuartil más frío, precipitación anual, precipitación del mes más húmedo, precipitación del mes más seco, precipitación estacional, precipitación del cuartil más húmedo, precipitación del cuartil más seco, del cuartil más cálido y del más frío. El programa fue corrido con las 19 variables extrayendo, secuencialmente las de menor

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. relevancia para el modelado del nicho de cada especie hasta quedar las seis más importantes (Anexo 1).

2- Evaluación del momento de floración de las especies bajo

invernáculo

Se registraron datos sobre el momento de floración, en las especies de la colección in vivo del Instituto de Floricultura del INTA (Tabla I.2). Las plantas fueron cultivadas bajo invernáculo con temperatura mínima de 10ºC en macetas de 20 litros con sustrato compuesto por compost de tierra, resaca, hoja de pino molida y corteza de pino (1:1:1:1).

3- Citogenética de los ejemplares de especies nativas de Passiflora

Fueron analizados citológicamente 32 genotipos correspondientes a 14 especies de la colección del Instituto de Floricultura (Tabla I.2). Para éstos estudios, se realizaron estacas con dos nudos a las que se aplicó hormona IBA

1000 ppm para facilitar el enraizamiento y se las colocó en macetas con sustrato compuesto por turba, perlita y vermiculita 3:1:1. Una vez enraizadas las estacas, se colectaron raíces en tubos eppendorf con una solución de 8- hidroxiquinolina 0,002% con ciclohexamida 3,125 ppm (Cuco et al., 2003), y se los dejó en heladera a 5°C durante 24 hs. Transcurrido el pretratamiento, se fijaron las raíces en solución Farmer 3:1 etanol absoluto: ácido acético por

24 horas, luego de lo cual se conservaron en etanol 70%.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Para realizar los preparados de cromosomas en mitosis, se lavaron los

ápices radiculares en buffer ácido cítrico - citrato de sodio (0,1 M, pH 4,8) y se trataron con una solución enzimática conteniendo 2% de celulasa (Onozuka

R10, Merck) y 20% de pectinasa líquida (Sigma P4716), se incubaron en estufa a 37ºC entre 30 minutos y 1 hora. Luego se lavaron en buffer ácido cítrico - citrato de Sodio (0,1 M; pH 4,8) por 5 minutos, realizando la disgregación de la zona meristemática en un portaobjetos con una gota de

ácido acético (45%). Los cubreobjetos fueron removidos por congelamiento en hielo seco y las preparaciones secadas al aire.

Bandeo fluorescente DAPI

Se colocaron los preparados de cromosomas mitóticos en metanol puro durante 2 horas. Se lavaron brevemente con buffer Mc. Ilvane (Anexo 2), se tiñeron luego con 75 µl de fluorocromo DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol; 2

µg/ml), se cubrieron con un cubreobjetos plástico y se incubaron en cámara húmeda, en oscuridad, durante 40 minutos. Los preparados se lavaron alternadamente con agua destilada y buffer McIlvane y se montaron en el mismo buffer para su posterior observación con un microscopio de epifluorescencia (Summer, 1990). En estas preparaciones se realizaron los recuentos cromosómicos y se realizaron las mediciones de los caracteres cariotípicos en, por lo menos, diez placas metafásicas de cada especie.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tinción con Feulgen

Para realizar recuentos cromosómicos se utilizó la técnica de Feulgen

(Darlington & La Cour, 1962). En esta técnica, las raíces pre-tratadas y fijadas se sumergieron durante una hora y media en la tinción, seguido de diez minutos de hidrólisis en HCl 1 N a 60º C. Una vez coloreadas, las raíces se trataron con solución enzimática en buffer citrato (Anexo 2) por una hora a

37ºC. El ápice radicular se disgregó sobre un portaobjeto en una gota de carmín acético 2%, se colocó un cubreobjeto, presionando en forma perpendicular al preparado. Las preparaciones fueron observadas bajo microscopio óptico Olympus BX 50 con campo claro y se fotografió con cámara digital Olympus C-5060.

Análisis de la meiosis

Para el estudio del desarrollo de los microgametofitos en las especies del subgénero Passiflora, se colectaron botones florales y se fijaron en solución

Farmer (3:1 etanol absoluto: ácido acético). Se realizaron preparados colocando el contenido de cada antera fijada en un portaobjetos con una gota de carmín-acético 2% y se observaron bajo microscopio óptico.

Viabilidad de polen

Para estimar la viabilidad del polen, se colocó el contenido de las anteras de cada especie en un portaobjetos, se tiñó por el método de Alexander (1969),

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. se contó la cantidad de granos viables en un total de 500 granos y se calculó el porcentaje.

Citogenética Molecular

Obtención y marcado de las sondas

La secuencia 5s de Passiflora se amplificó usando como molde el ADN genómico de P. edulis f. flavicarpa, por reacción en cadena de la polimerasa

(PCR) a partir de los cebadores publicados por Coelho et al. (2016):

-S: 3’ GTGCGATCATACCAGCAGCTTAATGCACCGG 5’

-A: 5’ GAGGTGCAACACGAGGACTTCCCAGGAGG 3’

La amplificación de la secuencia ADNr 18S se realizó a partir de ADN genómico de maíz (Zea mays), empleando los siguientes cebadores:

-S: 3’ GAACCTACACCATCGGCAAA 5’

-A: 5’ TCATTACTCCGATCCCGAAG 3’

Las condiciones de amplificación por PCR fueron las siguientes:

-ADN genómico 20-40 ng

-dNTPs 200 μM

-MgCl2 1,5 mM

-Buffer 10X (Invitrogen SRL) 1 X

-Cebador forward 100 ng

-Cebador reverse 100 ng

-Taq ADN polimerasa (Invitrogen SRL) 1 unidad

Volumen final: 25 μL (completados con H2O bidestilada estéril)

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Los productos de amplificación fueron verificados mediante electroforesis horizontal en gel de agarosa (1,5-2% p/v). Las bandas se visualizaron bajo luz UV por tinción del gel con bromuro de etidio. Para estimar los tamaños se usó el marcador de peso molecular Lambda

EcoRI/HindIII (Promega).

Las secuencias obtenidas se marcaron por PCR con digoxigenina y con biotina, para ello se emplearon nucleótidos conjugados con 16-biotin-dUTP

(Sigma) y 11-digoxigenin-dUTP (Roche), respectivamente.

3.2.1- Hibridación in situ fluorescente (FISH)

Sobre las preparaciones cromosómicas se colocaron 200 µl de RNAsa

(100 mg/ml), se cubrieron con un cubreobjetos plástico y se incubaron en cámara húmeda a 37 ºC durante 1 hora. Se lavaron tres veces con buffer

2XSSC (Anexo 2) a temperatura ambiente y con agitación. Luego, se incubaron las preparaciones en una solución de paraformaldehído al 40% (p/v) durante

10 minutos, a temperatura ambiente y con agitación. Para retirar completamente el paraformaldehído, se realizaron tres lavados con buffer

2XSSC de 5 minutos cada uno, a temperatura ambiente y con agitación.

Posteriormente, los preparados se deshidrataron en una serie de alcohol etílico

70%, 90% y 100% (v/v), por 3 minutos en cada solución. Los portaobjetos se secaron al aire durante 2 horas.

Se realizó una mezcla de hibridación para cada preparación conteniendo

15ul de Formamida ultra pura (que protege la estructura cromosómica de las

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. altas temperaturas), 6ul de Sulfato de Dextrano (que concentra la sonda sin modificar la astringencia), 3ul de buffer 2XSSC (que ayuda a estabilizar la doble hélice de ADN), 1ul de Sodio Dodecil Sulfato-SDS 10% (surfactante que ayuda a la penetración de la sonda), 1 ul de ADN de esperma de salmón (que actúa como bloqueante de regiones conservadas y reduce la hibridación inespecífica) y 100-200ng del ADN marcado que va a ser utilizado como sonda, completando un volumen total de 30ul con agua bidestilada estéril. Las mezclas de hibridación se desnaturalizaron en un baño a 70ºC durante 15 minutos y se colocaron inmediatamente en hielo para mantener separadas las hebras de ADN de la sonda. Luego, sobre cada preparación se colocó la totalidad de la mezcla de hibridación y se cubrió con un cubreobjetos de plástico.

Las preparaciones se llevaron a un termociclador con adaptador para hibridación in situ y donde realizó un ciclado empleando el siguiente programa: un ciclo de 75ºC por 7 minutos, 55ºC por 30 segundos, 45ºC por 1 minuto, 42ºC por 2 minutos, 40ºC por 5 minutos, 38ºC por 5 minutos y 37ºC por 10 minutos. Transcurrido este proceso, las preparaciones se incubaron a

37°C en cámara húmeda hasta el día siguiente.

En el segundo día, se realizaron lavados en condiciones de alta astringencia para quitar los restos de sonda no hibridada o que hibridó de modo inespecífico. Los lavados fueron realizados en las siguientes soluciones:

2XSSC a 42ºC durante 10 minutos, formamida desionizada al 20% (v/v) en

0,1XSSC a 42ºC durante 10 minutos, 0,1XSSC a 42ºC durante 5 minutos,

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

2XSSC a 42ºC durante 5 minutos, 4XSSC/Tween (0,2%) a 42ºC durante 5 minutos y finalmente dos lavados en 4xSSC/Tween (0,2%) durante 5 minutos cada uno, a temperatura ambiente (Anexo 2). Sobre cada preparación se colocaron 100 µl de BSA (Bovine Serum Albumine 5 % p/v), se cubrieron con un cubreobjetos de plástico y se incubaron a temperatura ambiente durante

5 minutos.

Para la detección de los nucleótidos marcados, se preparó una dilución del fluorocromo correspondiente a la marca de la sonda en BSA (1:50). Para detectar las sondas marcadas con digoxigenina se utilizó antidigoxigenina-

FITC (Roche), y para detectar las sondas marcadas con biotina se empleó

Streptavidina-Cy3 (Sigma). Sobre cada preparación se colocaron 50 µl de la mezcla de detección y un cubreobjetos de plástico. Se colocaron en cámara húmeda y se llevaron a una estufa a 37°C durante 1 hora en oscuridad. Luego se realizaron tres lavados de 10 minutos cada uno, en oscuridad, en una solución de 4XSSC/Tween-20 (Anexo 2).

Para la tinción de contraste, se añadieron a las preparaciones 100 µl de una solución de DAPI (2 µg/ml), se las cubrió con un cubreobjetos de plástico y se incubaron en oscuridad durante 40 minutos a temperatura ambiente. Las preparaciones se lavaron en 4X SSC/Tween-20, se montaron con 50 µl de

Vecta-Shield (Vector-H1000) y se guardaron en oscuridad a 4ºC hasta su estudio.

Las preparaciones fueron observadas y fotografiadas en un microscopio de epifluorescencia Leica DMLB equipado con una cámara digital Leica DC 250

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. y un analizador de imágenes Leica IM 1000. Las imágenes digitales obtenidas fueron coloreadas e integradas usando el programa Adobe Photoshop CS3 versión 10.0 (Adobe Systems Incorporated, USA).

3.2.2- Hibridación in situ genómica (GISH)

Para realizar la hibridación con genomas completos, se utilizó el mismo procedimiento que para la hibridación in situ fluorescente, empleando ADN genómico bloqueante en la mezcla de hibridación para que se marcaran las secuencias exclusivas de la especie utilizada como sonda. Las sondas empleadas correspondieron a ADN genómico de especies de Passiflora que se extrajo por medio del Wizard Genomic DNA Purification kit (Promega) y se marcó con Biotina (BioNick DNA Labeling System, Thermo Fisher Scientific).

La mezcla de hibridación empleada estuvo compuesta por: 45 ng de ADN genómico marcado (sonda), 450 ng de ADN bloqueante (Melo et al., 2015), 15µl de formamida, 6ul de Sulfato de dextrano, 3ul de buffer 2XSSC, 1ul de Sodio

Dodecil Sulfato-SDS 10% y 1 ul de ADN de esperma de salmón.

4- Estimación de la cantidad de ADN por citometría de flujo

La técnica de citometría de flujo se empleó para la estimación de la cantidad de ADN de las especies de Passiflora. Para ello, se picó finamente 1 cm2 de hoja de cada genotipo en estudio y del testigo (Hordeum vulgare CV

New Golden, 10,4 pg. de ADN) en buffer de extracción Otto I. Se filtró con una malla de 50 µm para obtener una suspensión de núcleos a la que se agregaron

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2 ml de buffer Otto II conteniendo 50 µl/ml de ioduro de propidio e igual cantidad de RNAsa. Se analizaron las muestras en un citómetro de flujo

CyFlow Ploidy Analyser Partec (green laser 532 nm, 30mW). La estimación de la cantidad de ADN se realizó aplicando la fórmula en que se multiplica la cantidad de ADN del testigo por la intensidad de fluorescencia de la planta incógnita, y se divide el producto por la intensidad de fluorescencia del testigo.

Se realizaron 3 estimaciones por genotipo. Los datos fueron analizados estadísticamente por medio de un análisis de varianza con contraste por test

BSS, utilizando el software InfoStat (versión 2009, Universidad Nacional de

Córdoba).

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Resultados

Distribución y modelado del nicho ecológico para las especies nativas de

Passiflora.

A partir de los datos de colecciones registrados en los herbarios, fue posible modelar el nicho ecológico para los 20 taxones de las 19 especies nativas de Passiflora, discriminando las 2 formas de la especie P. edulis

(Tablas 1.1 y 1.2, Figuras 1.1 y 1.2).

Los resultados mostraron que las especies del subgénero Decaloba presentan distribución simpátrica y concentran su nicho ecológico en el este

(Brasil y noreste argentino) y sudeste de Sudamérica (Uruguay y este argentino). P. capsularis, P. misera y P. morifolia también encuentran su nicho en la región central de Sudamérica (Paraguay, Bolivia y norte argentino).

Dentro del subgénero Dysosmia, P. foetida se dispersó a lo ancho del continente mientras que P. chrysophylla, sólo en el sudeste y centro. La distribución en Sudamérica del subgénero Passiflora mostró cuatro nichos preponderantes. Las dos formas de P. edulis mostraron su preferencia por la región norte-noroeste (Brasil, Venezuela, Guyana, Guayana francesa y

Colombia, Ecuador, Perú), P. edulis f. edulis limitada a esa región y P. edulis f. flavicarpa extendiéndose al este. Varias especies presentaron su nicho con distribución al este: P. alata, P. amethystina, P. cincinnata y P. caerulea, esta

última también se ubicó en la zona sudeste. P. tenuifila y P. elegans se distribuyeron en la zona sudeste, compartiendo su nicho con P. tucumanensis,

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. giberti y P. mooreana, también presentes en la región central. En esta última región encontrarían su nicho P. palmatisecta y la única integrante del subgénero Tacsonioides, P. umbilicata.

Entre las especies del subgénero Passiflora, se encontraron cuatro grupos de simpatría: 1- P. edulis f. edulis-P. edulis f. flavicarpa; 2- P. edulis f. flavicarpa-P. alata-P. amethystina-P. cincinnata-P. caerulea; 3- P. caerulea-P. tenuifila-P. elegans-P. tucumanensis-P. giberti-P. mooreana; 4- P. tucumanensis-P. giberti-P. mooreana-P. palmatisecta (Tabla 1.2).

La especie con distribución más austral fue P. caerulea, que presentó un sitio de colección a los 37º latitud sur (Tabla 1.1).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 1.1: Distribución de sitios de colección de especies argentinas de Passiflora en Sudamérica. n: cantidad de ejemplares de herbario (Anexo 1).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 1.2: Distribución del nicho ecológico en Sudamérica para las especies argentinas del género Passiflora subgénero Passiflora.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.1: Modelado del nicho ecológico de las especies argentinas del género Passiflora subgénero Passiflora. a: P. alata; b: P. amethystina; c: P. caerulea; d: P. cincinnata; e: P. edulis f. edulis; f: P. edulis f. flavicarpa; g: P. elegans; h; P. giberti; i: P. mooreana; j: P. palmatisecta; k: P. tenuifila; l: P. tucumanensis. Izquierda: escala de probabilidad de conveniencia del hábitat para el taxón.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.2: Modelado del nicho ecológico de las especies argentinas del género Passiflora subgéneros Decaloba, Tacsonioides y Dysosmia. a-e: subgénero Decaloba. a: P. capsularis; b: P. misera; c: P. morifolia; d: P. suberosa; e: P. urnaefolia. f: P. umbilicata del subgénero Tacsonioides, g-h: subgénero Dysosmia. g: P. chrysophylla; h: P. foetida. Izquierda: escala de probabilidad de conveniencia del hábitat para el taxón.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Calendario de floración de ejemplares de especies nativas de Passiflora en Buenos Aires bajo invernáculo.

Las especies de Passiflora presentaron diferentes períodos de floración

(Tabla 1.3). Con floraciones primavero-estivo-otoñales (PEO) se destacan, dentro del subgénero Passiflora, P. alata, P. caerulea, P. cincinnata y P. mooreana y, en el subgénero Decaloba, P. misera.

Las especies que presentan períodos de floración estivo-otoñales (EO), en el subgénero Passiflora, fueron P. edulis f. flavicarpa y P. tucumanensis;

P. foetida perteneciente al subgénero Dysosmia y, P. capsularis y P. morifolia del subgénero Decaloba.

También se encontraron especies con floraciones otoño-invernales

(OI) como P. amethystina y otras que se extendieron hasta la primavera, como P. edulis f. edulis, P. elegans y P. tenuifila en el subgénero Passiflora.

P. suberosa floreció desde enero hasta agosto (EOI) (Tabla 1.2).

Estos resultados permiten rechazar la hipótesis que afirma la similitud en los períodos de floración entre las especies de Passiflora.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 1.3: Calendario de floración de especies de Passiflora nativas de Argentina bajo invernáculo en la provincia de Buenos Aires.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Caracterización citogenética de Passiflora

Se realizaron recuentos cromosómicos para 32 genotipos correspondientes a 14 especies nativas de Passiflora: P. alata (2 genotipos),

P. amethystina (1), P. caerulea (6), P. cincinnata (2), P. edulis (5), P. elegans

(3), P. mooreana (2), P. tenuifila (1), P. tucumanensis (2), P. capsularis (1), P. misera (2), P. morifolia (1), P. suberosa (2) y P. foetida (2) (Figuras 1.3 y 1.4).

A partir de las microfotografías tomadas de las células en metafase, se construyeron los idiogramas para éstas especies (Figuras 1.5 a 1.18).

Los tamaños cromosómicos estimados en las especies nativas del género fueron desde 8,51±1,48 µm, para el cromosoma 1 de P. alata, y

0,96±0,24 µm para el cromosoma 10 de P. foetida. Los tamaños totales de los complementos básicos de los genomas variaron entre un valor máximo de 57,01±8,13 µm en P. alata, a uno mínimo de13,14±3,01 µm en P. capsularis.

En las especies del subgénero Passiflora, se confirmó el número cromosómico básico x = 9, presentándose todas las especies en el nivel diploide 2n = 2x = 18 y, P. mooreana, tanto diploide como tetraploide 2n =

4x = 36. Las longitudes cromosómicas totales de los genomas haploides

(LCT) en este subgénero fueron entre 57,01±8,13 µm para P. alata y

25,21±2,75 µm para P. tucumanensis. Excepto el cromosoma 1 de P. mooreana y el 6 de P. amethystina que resultaron submetacéntricos, todos los cromosomas fueron metacéntricos. Los índices de asimetría

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. intracromosómica A1 (Romero Zarco, 1986) calculados para el subgénero fueron entre 0,30±0,04 para P. mooreana, a 0,19±0,03 para P. caerulea.

Asimismo, los valores extremos de los índices de asimetría centromérica

(MCA) (Peruzzi & Eroglu, 2013), también se presentaron en éstas especies, resultando entre 0,19±0,03 y 0,11±0,02, respectivamente.

Se confirmó el número básico x = 6 para el subgénero Decaloba, incluyendo especies diploides 2n = 2x = 12 (P. capsularis, P. misera y P. morifolia) y una tetraploide 2n = 4x = 24 (P. suberosa). Los tamaños totales de los genomas haploides variaron entre 28,56±8,11 µm para P. misera y

13,14±3,01 µm para P. capsularis. En este subgénero, los índices de asimetría intracromosómica A1 presentaron valores entre 0,39±0,05 para P. suberosa y 0,32±0,07 para P. morifolia. Los índices de asimetría centromérica MCA resultaron entre 0,27±0,04 para P. suberosa, y 0,20±0,04 para P. capsularis y P. morifolia.

La única especie estudiada del subgénero Dysosmia, P. foetida, mostró un número somático 2n = 2x = 20. El largo del complemento básico cromosómico fue de 14,79±3,60 µm. Todos los cromosomas fueron metacéntricos excepto el 4, submetacéntrico. El índice de asimetría intracromosómica A1 (Romero Zarco, 1986) fue de 0,29±0,04 y, el de asimetría centromérica MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013), de 0,18±0,03.

Los cariotipos de las especies del subgénero Passiflora son más simétricos que los reportados en Decaloba.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.3: Cromosómas mitóticos en especies nativas de Passiflora (tinción: Feulgen + carmín acético) a-j: especies 2n = 2x = 18; k: 2n = 4x = 36; l: 2n = 2x = 12. a-b: P. alata; c: P. amethystina; d-e: P. caerulea; f-g: P. edulis f. flavicarpa; h-i: P. elegans; j: P. mooreana (diploide); k: P. mooreana (tetraploide); l: P. misera. Barras: 5µm.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.4: Cromosomas mitóticos en especies nativas de Passiflora (tinción: dapi). a-f: 2n = 2x = 18; g: 2n = 4x = 36; h: 2n = 2x = 20; i: 2n = 4x = 24; j-l: 2n = 2x = 12. a: P. alata; b: P. caerulea; c: P. cincinnata; d: P. elegans; e: P. tenuifila; f: P. tucumanensis; g: P. mooreana (tetraploide); h: P. foetida; i: P. suberosa; j: P. capsularis; k: P. morifolia; l: P. misera. Barras a-h: 5 µm, j-l: 2µm.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.5: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora alata. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.6: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora amethystina. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.7: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora caerulea. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.8: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora cincinnata. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.9: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora edulis f. flavicarpa. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.10: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora elegans. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.11: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora mooreana. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.12: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora tenuifila. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.13: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora tucumanensis. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.14: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora capsularis. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.15: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora misera. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.16: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora morifolia. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.17: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora suberosa. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.18: Idiograma y parámetros cariotípicos estimados para Passiflora foetida. LCT: Longitud cromosómica total; BL: brazo largo; BC: brazo corto; DE: desvío estándar; IC: índice centromérico; 1: posición centromérica (Levan, 1964); 2: A1 (Romero Zarco, 1986); 3: MCA (Peruzzi & Eroglu, 2013).

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Hibridación in situ fluorescente de secuencias ribosomales en especies de Passiflora

Se hibridaron sobre preparados cromosómicos de especies nativas de

Passiflora las secuencias repetitivas 5s y 18s que codifican para las subunidades ribosomales mayor y menor, respectivamente. Los resultados mostraron dos señales 5s por célula somática en algunas especies (P. alata,

P. amethystina, P. caerulea, P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa, P. elegans,

P. tucumanensis, P. capsularis, P. misera y P. morifolia); mientras que en otras presentaron cuatro (el citotipo tetraploide de P. mooreana, P. suberosa y P. foetida) (Figuras 1.19 y 1.20). Se observaron entre dos y diez señales

18s. Passiflora capsularis y P. morifolia presentaron dos señales 18s, mientras que P. misera, P. alata, P. cincinnata y P. edulis f. flavicarpa exhibieron cuatro. Passiflora amethystina, P. caerulea, P. elegans y P. tucumanensis mostraron seis regiones 18s y P. suberosa ocho. El citotipo tetraploide de P. mooreana presentó diez señales 18s.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.19: Hibridación in situ fluorescente (FISH) de secuencias ARNr 5s (verde) y 18s (rojo) sobre cromosomas de especies de Passiflora. a-b: P. alata; c-e: P. amethystina; e: bandeo dapi-cma mostrando co-localización de señales con la hibridación in situ; f-g: P. caerulea; h-i: P. cincinnata. Las flechas en b indican señales 5s; en e regiones DAPI-/CMA+; en g regiones 18s.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.19 (cont.): Hibridación in situ fluorescente (FISH) de secuencias ARNr 5s (verde) y 18s (rojo) sobre cromosomas de especies de Passiflora subgénero Passiflora. j-k: P. edulis f. flavicarpa; l-n: P. elegans; o-p: P. mooreana (4x); q-r: P. tenuifila; s-u: P. tucumanensis. Las flechas en j, l y m indican señales 5s; en p y u marcan secuencias 18s.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.20: Hibridación in situ fluorescente (FISH) de secuencias ARNr 5s (verde) y 18s (rojo) sobre cromosomas de especies de Passiflora. a-g: Subgénero Decaloba; h-i: subgénero Dysosmia. a-c: P. capsularis; d-e: P. misera; f: P. morifolia; g-h: P. suberosa; i: P. foetida.

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Meiosis en las especies nativas del subgénero Passiflora

Se estudió la etapa meiótica de la microsporogénesis en nueve taxones nativos del subgénero Passiflora: P. alata, P. amethystina, P. caerulea, P. cincinnata, P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpra, P. elegans, y los citotipos diploide y tetraploide de P. mooreana.

Todas las especies 2n = 2x = 18 presentaron meiosis regulares, mostrando nueve bivalentes en cada meiocito (Figura 1.21) y la formación de tétradas de micrósporas de apariencia normal.

En el citotipo tetraploide de P. mooreana 2n = 2x = 36 se encontró formación de bivalentes y cuadrivalentes (Figura 1.22). Se registró con mayor frecuencia una cantidad de tres cuadrivalentes por célula y un máximo de seis (Figura 1.22.a).

La viabilidad del polen resultante de los procesos de microsporogénesis, analizada por el método de Alexander (1969), fue mayor a 80% para todas las especies.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.21: Microsporogénesis en especies argentinas de Passiflora 2n = 2x = 18. a-b: profase en P. edulis f. flavicarpa; c-d: profase en P. amethystina; e: anafase I temprana en P. edulis f. flavicarpa; f: anafase I tardía en P. elegans; g: telofase I en P. caerulea; h: telofase I en P. edulis f. flavicarpa; i-j: anafase II temprana y tardía en P. alata; k: telofase II en P. elegans; l: tétradas de micrósporas en P. edulis f. edulis.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.22: Etapa meiótica de la microsporogénesis en P. mooreana 2n = 4x = 36. Las flechas indican cuadrivalentes, los triángulos bivalentes homomórficos. Barras: 20µm.

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Estimación de la cantidad de ADN en especies argentinas del

género Passiflora.

Se estimó la cantidad de ADN por citometría de flujo en 30 genotipos correspondientes a 13 taxones de Passiflora: P. alata (2 genotipos), P. amethystina (1), P. caerulea (8), P. cincinnata (2), P. edulis f. edulis (1), P. edulis f. flavicarpa (2), P. elegans (3), P. mooreana (2), P. tucumanensis (3),

P. foetida (2), P. capsularis (1), P. morifolia (1) y P. suberosa (2) (Figuras 1.23 y 1.24, Tabla 1.4).

La cantidad mayor de ADN por célula somática se encontró en P. alata

(5,03 pg.) y este valor la diferenció estadísticamente del resto de las especies.

La menor cantidad de ADN la presentó P. capsularis, con 1,08 pg. por célula somática.

El análisis del tamaño del genoma haploide diferenció al subgénero

Passiflora, que presentó mayor cantidad de ADN en su genoma (0,91 a 2,52 pg.), de los subgéneros Dysosmia y Decaloba (0,54 a 0,72 pg.) (Tabla 1.3).

Este resultado permitió rechazar la hipótesis nula que afirma la igualdad del tamaño del genoma en las diferentes especies del género (F: 94,35; p<0,0001).

Además, se pudo corroborar en especies representadas por más de un genotipo, que existe variabilidad intra-específica en el tamaño del genoma en tres de ellas (P. caerulea, P. edulis f. flavicarpa y P. elegans) (F: 47,67;

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. p<0,0001). Este resultado refuta la hipótesis que afirma la similitud del tamaño del genoma en distintos genotipos de la misma especie (Figura 1.24).

Los resultados de las pruebas estadísticas se muestran en el Anexo 3.

Figura 1.23: Histogramas del análisis por citometría de flujo para la estimación de la cantidad de ADN en células somáticas de Passiflora. Los picos representan la intensidad de fluorescencia, proporcional a la cantidad de ADN. Pico 1: Testigo con cantidad de ADN conocida, Hordeum vulgare CV New Golden (10,4 pg.), pico 2: P. elegans (2,57 pg.), pico 3: P. amethystina (3,51 pg.), pico 4: P. alata (5,03 pg.).

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Tabla 1.4: Cantidad de ADN en células somáticas y valor Cx en especies nativas de Passiflora. n: Cantidad de genotipos analizados. Letras distintas indican diferencias significativas.

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Figura 1.24: Cantidad de ADN y variabilidad en el complemento cromosómico básico en especies de Passiflora. Medida de dispersión: desvío estándar.

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Análisis de la correlación entre la longitud total y la cantidad de ADN de los genomas

Se realizó una regresión lineal entre la longitud total del genoma, estimada por medio de la medición de los cromosomas en las microfotografías, y la cantidad de ADN por genoma haploide, por citometría de flujo. Los resultados mostraron que las dos variables se encuentran estrechamente correlacionadas, con un coeficiente de determinación R2 de

0,93.

Figura 1.25: Regresión lineal entre longitud total del genoma en función de la cantidad de ADN. Coeficiente de determinación R2: 0,93.

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Hibridación in situ genómica (GISH) en especies de Passiflora

Se realizaron hibridaciones in situ genómicas hibridando con sonda de ADN de P. suberosa (subgénero Decaloba) los cromosomas mitóticos de especies del subgénero Passiflora (P. amethystina, P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa) (Figura 1.26). Además, se hibridó la sonda genómica de P. foetida

(subgénero Dysosmia) sobre cromosomas mitóticos de especies del subgénero Passiflora (P. amethystina y P. caerulea) y sobre preparados de P. suberosa del subgénero Decaloba (Figura 1.26).

Los resultados mostraron mayor intensidad en las señales en centrómeros y telómeros. Entre las dos sondas empleadas sobre cromosomas de especies del subgénero Passiflora, la de P. foetida mostró una hibridación uniforme sobre cromosomas completos mientras que las señales fueron más dispersas con la de P. suberosa, concentrándose en centrómeros, telómeros y constricciones secundarias. Con ambas especies utilizadas como sonda se pudieron visualizar cromosomas presentando menor señal de hibridación (Figuras 1.26 y 1.27). La hibridación de la sonda de P. foetida sobre preparados mitóticos de P. suberosa mostró señales parciales en los centrómeros y constricciones secundarias de los cromosomas mayores del complemento (Figura 1.27). Los resultados se resumen en la Tabla 1.4.

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Figura 1.26: Hibridación in situ genómica de Passiflora suberosa (rojo) como sonda sobre cromosomas mitóticos de especies del subgénero Passiflora. a-c: P. amethystina; d-i: P. caerulea; j-l: P. edulis f. flavicarpa. Las regiones hibridadas en rojo muestran zonas de mayor homología entre la especie del subgénero Passiflora respecto de P. suberosa. Las flechas indican cromosomas con menor señal de hibridación.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.27: Hibridación in situ genómica de Passiflora foetida (rojo) como sonda sobre cromosomas mitóticos de especies del subgénero Passiflora y Decaloba. a-f: P. amethystina; g-i: P. caerulea; j-o: P. suberosa. Las regiones hibridadas en rojo muestran zonas de mayor homología entre la especie de los subgéneros Passiflora (a-i) y Decaloba (j-o) respecto de P. foetida. Flechas: cromosomas con menor señal de hibridación; asteriscos: cromosomas con señal de hibridación.

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Análisis de agrupamiento a partir de los resultados citogenéticos

Se realizaron análisis de agrupamiento utilizando los datos obtenidos a partir de estudios citogenéticos para las especies nativas de Passiflora: número cromosómico básico, cantidad de ADN por genoma, cantidad de señales 5s y 18s, largo total del genoma haploide e índices de asimetría intracromosómica A1 (Romero Zarco, 1986) y centromérica MCA (Peruzzi &

Eroglu, 2013). Se confeccionó un fenograma utilizando UPGMA.

El dendrograma construido segregó a las especies del subgénero

Decaloba (P. suberosa, P. morifolia y P. capsularis) de las de los subgéneros

Dysosmia (P. foetida) y Passiflora (P. alata, P. amethystina, P. edulis f. flavicarpa, P. caerulea, P. cincinnata, P. elegans y P. tucumanensis). En el agrupamiento que involucra especies del subgénero Decaloba, la distancia fue menor entre P. morifolia y P. capsularis. La especie P. foetida (Dysosmia), resultó más distante de las especies del subgénero Decaloba que de las del subgénero Passiflora. Entre el resto de las especies del subgénero Passiflora se registraron tres grupos cercanamente asociados: P. tucumanensis-P. elegans, P. cincinnata-P. edulis f. flavicarpa y P. amethystina-P. caerulea. La especie P. alata se ubicó dentro del cluster del subgénero Passiflora pero fuera de estos dos grupos (Figura 1.28).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 1.28: Fenograma (análisis de conglomerados) a partir de los resultados de estudios citogenéticos en especies argentinas de Passiflora. Entre paréntesis: subgéneros según Deginani (2001).

En la Tabla 1.5 se resumen los resultados obtenidos en el Capítulo 1 sobre distribución de los nichos ecológicos de las especies nativas, períodos de floración, números cromosómicos básico y somático, cantidad de señales

5s y 18s y cantidad de ADN por complemento cromosómico básico.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 1.5: Tabla resumen de los resultados sobre distribución de nichos ecológicos, períodos de floración, características citogenéticas y cantidad de ADN por genoma en especies argentinas de Passiflora. P: floración primaveral, E: estival, O: otoñal, I: invernal.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Discusión

Las especies del género Passiflora presentan una amplia diversidad fenotípica. La variabilidad se manifiesta tanto entre subgéneros, como así también dentro de ellos, en mayor o menor medida.

La distribución de los nichos ecológicos pone de manifiesto la preferencia de las especies del género por climas ecuatoriales. Este hecho hace que su frecuencia en el país sea esporádica. Si bien Argentina posee

19 especies nativas, el género presenta su máxima diversidad a menores latitudes.

Dentro del subgénero Passiflora, el modelado de los nichos ecológicos mostró cuatro regiones de simpatría. En el norte-noreste de Sudamérica conviven la dos formas de P. edulis (Grupo 1) presentando, la forma más cultivada como frutal (P. edulis f. flavicarpa), un nicho ecológico más amplio que el del autónimo, extendiéndose hasta el este del continente. La amplitud en el rango de dispersión que presenta este taxón podría atribuirse al historial de selección antrópica para la producción de frutos de maracuyá que habría contribuido a su distribución en gran parte de Sudamérica.

Además, P. edulis f. flavicarpa comparte nicho ecológico en la región este de Sudamérica con P. alata, P. amethystina, P. cincinnata y P. caerulea

(Grupo 2) por lo que, de no existir otras barreras de aislamiento, existiría entre estas especies la posibilidad de flujo génico. En otra región de

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. simpatría en el sudeste sudamericano, P. caerulea podría convivir también con otras cinco especies: P. tenuifila, P. elegans, P. tucumanensis, P. giberti y P. mooreana (Grupo 3). Estas tres últimas compartirían nicho en la región central con P. palmatisecta (Grupo 4) y, además, con P. umbilicata del subgénero Tacsonioides que también posee un número cromosómico básico de x = 9.

Las especies del subgénero Decaloba presentan su nicho ecológico en el este-sudeste y centro de Sudamérica, siendo todas ellas simpátricas.

La distribución más amplia del nicho ecológico fue presentada por P. foetida del subgénero Dysosmia, que encuentra un área de simpatría con P. chrysophylla en el centro y sudeste sudamericanos.

Las cuatro especies que poseen a nuestro país como epicentro de su nicho ecológico, P. giberti, P. mooreana, P. palmatisecta y P. tucumanensis, presentan una distribución limitada de sus nichos. A partir de estos datos, sumado al creciente desmonte de éstas zonas para uso agropecuario, en conjunto con el cambio climático, se infiere que éstas especies se encontrarían en amenaza de extinción, según los parámetros de la IUCN

(International Union for Conservation of Nature, 1994).

Las especies del subgénero Decaloba encuentran su nicho al este y sudeste de Sudamérica, pudiendo convivir con P. foetida con x = 10

(Subgénero Dysosmia) y con el Grupo 2 del subgénero Passiflora x = 9.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Muschner et al. (2012), afirman que la divergencia del subgénero

Passiflora habría ocurrido hace 16,8 millones de años (en el Mioceno), mucho más recientemente que la de Decaloba datada hace 29 millones de años (en el Oligoceno). Esta idea también respalda la hipótesis de de Melo &

Guerra (2003) en la que afirman que el número básico primario de la familia sería x = 6. Sin embargo, no descartan la posibilidad de que éste número fuera x = 12, al igual que el complemento de Astrophea, subgénero considerado de los más ancestrales para la familia Passifloraceae pero que sería un paleopoliploide (de Melo & Guerra, 2003).

Según Muschner et al. (2012), la familia Passifloraceae tendría origen en África, se habría expandido hacia Europa y Asia, arribando a América central por puentes de tierra que actuaban como conectores continentales.

Una vez en América, los ancestros de Passiflora debieron sobrevivir al enfriamiento ocurrido en el Eoceno debido a la corriente circumpolar generada por la separación de América y la Antártida (Hunt Jr., 2004). La divergencia del subgénero Passiflora se habría dado acompañando la colonización gradual del continente americano, de norte a sur (Muschner et al., 2012). Teniendo en cuenta esta hipótesis, podría considerarse que las especies de distribución más austral serían las más jóvenes, evolutivamente. En base al modelado del nicho ecológico, P. caerulea fue la especie que presentó distribución a mayores latitudes, sugiriendo que la especie tendría alelos que podrían contribuir a la tolerancia a bajas

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. temperaturas. Estos alelos podrían ser introgresados en una variedad por medio de cruzamientos (Ouellet, 2007; Holmberg & Bülow, 1998).

Las diferencias encontradas en la distribución de nichos ecológicos entre especies del subgénero Passiflora, habrían reforzado el aislamiento reproductivo entre ellas. La superposición parcial de los nichos ecológicos entre los diferentes grupos dentro de este subgénero sugiere una especiación parapátrica, en la cual existiría una separación geográfica entre poblaciones divergentes. Según “la regla de Jordan” la especies más emparentadas entre sí suelen encontrarse en las cercanías una de otra, separadas por una barrera de algún tipo (Anacker & Strauss, 2014). Estos autores afirman también que “especies hermanas” más estrechamente emparentadas poseerían una impronta en sus atributos geográficos y ecológicos. En base a este criterio y a partir de los resultados obtenidos, se podrían hipotetizar dos caminos evolutivos de flujo génico dentro del subgénero: uno del este al norte sudamericano (Grupo 2 a Grupo 1), y el otro del este al sudeste y, posteriormente, al centro de Sudamérica (Grupo

2 – Grupo 3 – Grupo 4). En el primero de los caminos P. edulis f. flavicarpa sería un nexo entre los Grupos 1 y 2, mientras que P. caerulea uniría los

Grupos 2 y 3.

El aislamiento reproductivo entre especies también se ve fortalecida por la ocurrencia de la inducción floral en distintos momentos. Los resultados con los que se confeccionó el calendario de floración de las especies fueron obtenidos bajo condiciones artificiales y la inducción floral 72

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. puede atribuirse sólo a diferencias fotoperiódicas. A pesar de ésto, la información resulta relevante para el desarrollo de un plan de mejoramiento con la participación de esas especies. Además, contribuye a establecer otras hipótesis sobre la especiación entre los taxones que conviven en un mismo lugar y presentan superposición en su período de floración, como el caso de

P. alata y P. amethystina.

Además de las diferencias encontradas en la distribución de los nichos ecológicos y momentos de floración, la especialización de los polinizadores puede representar otra de las fuerzas actuantes en el aislamiento reproductivo. La diversidad en especies que presenta el género habría sido favorecida por una amplia variedad de polinizadores, insectos, aves y hasta murciélagos que está fuertemente asociada a la recompensa ofrecida por la planta (Varassin et al., 2001). Inclusive, un mismo taxón vegetal puede poseer varias especies de polinizadores, tanto efectivos como ocasionales, como se comprobó para P. edulis f. flavicarpa (Yamamoto et al., 2012). El hecho de poseer polinizadores especializados, también pudo haber sido un factor de aislamiento reproductivo, reduciendo el movimiento de gametas entre dos especies (Baak et al., 2015).

Tres de las especies del subgénero Passiflora presentan superposición de nichos ecológicos, así como también de períodos de floración (P. alata, P. caerulea y P. cincinnata). Esta situación se repite en el subgénero Decaloba con las especies P. capsularis, P. misera, P. morifolia y P. suberosa. Esto implicaría que existen otras barreras de aislamiento reproductivo entre las 73

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. especies mencionadas ya que no hay registros de la existencia de híbridos naturales entre ellas. Dentro del subgénero Passiflora, los polinizadores de

P. caerulea serían, según Torres et al. (2012) Bombus opifex, B. morio y

Xylocopa splendidula, mientras que los registrados para P. alata por

Varassin et al. (2001) fueron Centris flavifrons, C. longimana, C. lutea,

Xylocopa brasilianorum, X. frontalis, X ordinaria, Eulaema cingulata y E. nigrita. Si bien estas diferencias en las especies polinizadoras estarían relacionados con el hecho de que los estudios fueron realizados en distintas localidades (Torres et al., 2012 en la provincia de Córdoba, Argentina y

Varassin et al., 2001 en la costa Atlántica del Estado de Espírito Santo,

Brasil), también podrían plantear especificidades por polinizadores diferentes que las mantendrían aisladas.

Los recuentos cromosómicos realizados en esta tesis confirman los de trabajos realizados con anterioridad (Coelho et al., 2016; Sühsner et al.,

2016; Melo, et al., 2015; Bugallo, et al., 2013; Chiapero et al, 2013; Bugallo,

2010; Souza et al., 2008; Hansen et al., 2006; Soares-Scott et al., 2005;

Muschner et al., 2003; De Melo & Guerra, 2003; Souza et al., 2004; Deginani

& Escobar, 2002; De Melo et al., 2001; Deginani, 2001; Storey, 1950).

Además, se registraron por primera vez recuentos mitóticos para la especie

P. tenuifila y para el citotipo diploide de P. mooreana, aparentemente menos frecuente que el tetraploide. Se verificaron números somáticos 2n = 18 (P. alata, P. amethystina, P. cincinnata, P. caerulea, P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpa, P. elegans, P. mooreana, P. tenuifila y P. tucumanensis) y 2n =

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

36 (P. mooreana), para el subgénero Passiflora. Para el subgénero Decaloba, los números somáticos fueron 2n = 12 (P. capsularis, P. misera y P. morifolia) y 2n = 24 (P. suberosa). Para la especie P. foetida, perteneciente al subgénero

Dysosmia, los recuentos fueron de 2n = 20.

Los cariotipos de las especies del género Passiflora muestran niveles altos de simetría siendo mayor en el subgénero Passiflora, con cromosomas casi exclusivamente metacéntricos; que en los subgéneros Dysosmia y

Decaloba con cromosomas metacéntricos y submetacéntricos

El número de sitios 5s coincidió con el nivel de ploidía, presentando 2 señales los genotipos reconocidos como diploides y cuatro los tetraploides, excepto P. foetida que mostró cuatro marcas.

El citotipo tetraploide de P. mooreana podría tratarse de un neo- poliploide ya que se conoce la forma diploide y, la gran similitud fenotípica entre los dos citotipos, sugiere que se trataría de un autopoliploide. La presencia de dos y cuatro señales 5s en el diploide y tetraploide, respectivamente, indicaría, tal vez por su origen reciente, que la forma tetraploide no perdió regiones 5s.

La cantidad de señales correspondientes a secuencias ribosomales

18s varió entre 2 y 4 en células somáticas en el subgénero Decaloba, entre

4 y 10 en el subgénero Passiflora y presentó 6 en P. foetida, perteneciente al subgénero Dysosmia. Los resultados hallados dentro del subgénero

Passiflora indican que el número de loci 18s coincidiría con la filogenia

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. basada en ITS (internal transcribed spacers) y espaciadores de plástidos trnL-trnF elaborada por Muschner et al. (2003). En su trabajo, Muschner et al. (2003) ubican en un mismo clado a las tres especies que mostraron cuatro señales 18s: P. alata, P. cincinnata y P. edulis. Por otro lado, P. caerulea, P. amethystina, P. elegans y P. tenuifila, que mostraron seis señales 18s, fueron segregados del clado mencionado en el trabajo de

Muschner et al. (2003).

La sonda genómica de P. foetida, con x = 10, sólo marcó parcialmente

6-8 cromosomas en los preparados mitóticos de P. suberosa (2n = 24; x = 6).

Teniendo en cuenta la hipótesis de de Melo & Guerra (2003) que indica que

P. foetida tiene un origen posterior a las especies de x = 6, las señales de hibridación en sólo 6-8 cromosomas de P. suberosa, sugieren una afinidad con un genoma ancestral compartido de x = 6. Suponiendo que P. suberosa fuera alopoliploide, se genera como interrogante si la sonda genómica de P. foetida marcaría diferencialmente ciertos cromosomas en todas las especies del subgénero Decaloba o si sólo hibridaría en P. suberosa, la única tetraploide. Uno de los inconvenientes que plantea el trabajo con estos subgéneros es el pequeño tamaño de sus cromosomas, entre 0,96 y 4 µm, que dificulta la visualización de las señales de hibridación.

En preparados mitóticos de especies del subgénero Passiflora, la sonda genómica de P. foetida mostró homología con cromosomas completos mientras que la de P. suberosa presentó señales más dispersas a lo largo de los cromosomas. Esto respaldaría los resultados de la filogenia de Muschner 76

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. et al. (2003) en los que afirman que existiría mayor cercanía filogenética entre el el subgénero Dysosmia (P. foetida) y el subgénero Passiflora que entre éste último respecto del subgénero Decaloba, al cual pertenece P. suberosa.

Las especies P. alata, P. cincinnata y P. edulis presentaron cuatro señales 18s y se ubicaron en un mismo clado en la filogenia de Muschner et al. (2003). Observando otras características en estas especies, P. alata y P. cincinnata coinciden también en su nicho ecológico y período de floración, mientras que P. edulis f. flavicarpa se superpone, para esos dos caracteres, tanto con las dos primeras especies mencionadas así como con P. edulis f. edulis. Se podría inferir que P. alata y P. cincinnata serían más cercanas entre sí, en menor medida con P. edulis f. flavicarpa y, con menor afinidad dentro del grupo, con P. edulis f. edulis. Esta escala de afinidad no estaría dada por la ubicación geográfica sino que la distribución de las especies sería consecuencia de cambios genéticos que permitieron como resultado el avance hacia otros nichos ecológicos sub-ocupados y con menor grado de competencia (Stebbins, 1971).

La cantidad de ADN estimada muestra una diferencia en los genomas de las especies con números básicos x = 6 y x = 10 (0,5 a 0,72 pg. de ADN), respecto del de las especies con x = 9 que poseen tamaños mayores (0,9 a

2,5 pg. de ADN). Dentro del subgénero Passiflora, P. alata se diferenció del resto de las especies por su mayor tamaño genómico. Se registró variabilidad intra-específica en cuanto a cantidad de ADN en P. caerulea, P. edulis f. 77

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. flavicarpa y P. elegans. Este tipo de variación ha sido reportado en un elevado número de especies vegetales (Greillhuber & Leitch, 2013). Estos autores encontraron, además, una relación entre el tamaño del genoma y características celulares tales como el volumen cromosómico, longitud cromosómica y volumen nuclear, entre otros. El contenido de ADN estimado por citometría de flujo en especies de Passiflora se correlacionó positivamente con la longitud cromosómica total obtenida en células mitóticas.

Si aceptamos la hipótesis de de Melo & Guerra (2003) que afirma que x = 6 sería el número básico ancestral, habría ocurrido un incremento en el tamaño genómico cuando el subgénero Passiflora divergió de Decaloba.

Existen tres mecanismos identificados que modifican la cantidad de

ADN nuclear entre especies cercanas filogenéticamente. Los fenómenos que afectan el tamaño genómico son la poliploidía y la amplificación de elementos transponibles, ambos generando un crecimiento en el contenido de ADN. Como contraposición a estos mecanismos, una disminución de la cantidad de ADN puede surgir por la recombinación desigual de homólogos y la recombinación ilegítima que generan pequeñas deleciones (Bennetzen et al., 2005). Estos autores indican que existirían tres teorías propuestas que podrían explicar las diferencias entre los tamaños genómicos de distintas especies emparentadas. La primera, es que las especies podrían tener mayor actividad de uno de estos mecanismos. Por ejemplo, que los retrotransposones LTR (long terminal repeat) podrían amplificarse más 78

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. fácilmente en una especie en particular, quizá por un mecanismo menos eficiente de silenciamiento. Alternativamente, otras especies podrían tener deleciones más frecuentes o más extensas a lo largo del genoma. Una segunda posibilidad es que el ambiente particular en el que evoluciona una especie pueda influir en su exposición a factores alteradores del genoma. La tercera razón es la posibilidad de que grandes diferencias en el tamaño genómico se debieran a la selección a favor o en contra los genomas grandes

(Bennetzen et al., 2005).

Se confeccionó un fenograma utilizando datos obtenidos a partir de estudios citogenéticos (número cromosómico básico, cantidad de ADN por genoma, cantidad de señales 5s y 18s, largo total del genoma haploide e

índices de asimetría intracromosómica A1 y centromérica MCA) para especies nativas de Passiflora pertenecientes a los subgéneros Dysosmia,

Decaloba y Passiflora. El dendrograma construido separó a las especies del subgénero Decaloba (P. suberosa, P. morifolia y P. capsularis) de las de los subgéneros Dysosmia (P. foetida) y Passiflora (P. alata, P. amethystina, P. edulis f. flavicarpa, P. caerulea, P. cincinnata, P. elegans y P. tucumanensis).

En el agrupamiento que involucra especies del subgénero Decaloba, la distancia fue menor entre P. morifolia y P. capsularis. Passiflora foetida se asoció más al subgénero Passiflora que al subgénero Decaloba. En el resto de las especies del subgénero Passiflora se registraron tres grupos cercanamente asociados: P. tucumanensis-P. elegans, P. cincinnata-P. edulis f. flavicarpa y P. amethystina-P. caerulea. La especie P. alata se ubicó dentro

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. del cluster del subgénero Passiflora pero fuera de estos grupos (Figura 1.28).

Si bien en la filogenia de Muschner et al. (2003) P. alata se ubica en el mismo clado que P. cincinnata y P. edulis, la separación de P. alata del resto de las especies obtenida en el fenograma es congruente con otros resultados de esta tesis (Capítulos 2 y 3).

El contexto evolutivo de las diferencias entre las especies de

Passiflora, sobre todo las involucradas en un plan de mejoramiento, genera el interrogante sobre la posibilidad de cruzamiento entre ellas según su distancia filogenética. El siguiente Capítulo aborda la hibridación entre especies nativas del subgénero Passiflora con potencial ornamental y los mecanismos de aislamiento reproductivo que actuarían para impedirla.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Conclusiones

• El modelado del nicho ecológico muestra la amplitud geográfica de las especies nativas de Passiflora, indicando cuáles convivirían en simpatría, alopatría y parapatría. A partir de éstos resultados, fue posible rechazar la hipótesis nula que afirma la similitud de los nichos ecológicos de las especies nativas (Hipótesis 2). La delimitación del nicho ecológico, además, aporta información importante al mejoramiento ya que podría inferirse la existencia de especies con tolerancia a factores climáticos adversos, por ejemplo, P. caerulea que toleraría bajas temperaturas.

• Las diferencias en el período de floración halladas entre algunas especies del subgénero Passiflora constituirían un mecanismo de aislamiento reproductivo pre-cigótico entre ellas. Se rechaza la hipótesis nula que afirma la similitud de las especies nativas en cuanto a su período de floración (Hipótesis 2).

• La variabilidad en la distribución de los nichos ecológicos y períodos de floración encontrada entre las especies nativas de Passiflora es reflejo de la variación genética generada en la evolución.

• Se realizaron recuentos en 14 especies nativas de Passiflora, reportándose por primera vez el número somático 2n =18 para P. tenuifila y para el citotipo diploide de P. mooreana. Se confirmaron los números básicos x = 9 para el subgénero Passiflora, x = 6 para Decaloba y x =10 para

Dysosmia.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

• Se analizaron los parámetros cariotípicos de todas las especies estudiadas mediante técnicas clásicas y moleculares (FISH). Se elaboraron los idiogramas encontrando mayor simetría en el subgénero Passiflora respecto de Decaloba y mayor variabilidad en el número de señales 18s en relación al 5s. A partir de las diferencias encontradas, fue posible rechazar la hipótesis nula que afirma la similitud cariotípica y citogenética (Hipótesis

1).

• Los estudios por GISH confirmaron que el subgénero Passiflora posee una mayor afinidad genómica con el subgénero Dysosmia que con Decaloba.

• La estimación de la cantidad de ADN mediante citometría de flujo segregó a los subgéneros Dysosmia y Decaloba, con menores cantidades de

ADN (0,5 a 0,72 pg.), respecto de Passiflora (0,9 a 2,5 pg.). Además, se encontró variabilidad intra-específica en la cantidad de ADN en P. caerulea,

P. edulis f. flavicarpa y P. elegans.

 El fenograma construido a partir de estudios citogenéticos separó a las especies del subgénero Decaloba de las de los subgéneros Dysosmia y

Passiflora. En el agrupamiento de especies del subgénero Passiflora se registraron tres grupos: P. tucumanensis-P. elegans, P. cincinnata-P. edulis f. flavucarpa y, por otro lado, P. caerulea-P. amethystina. La especie P. alata se ubicó por fuera de estos tres.

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Capítulo 2: Hibridación interespecífica entre especies nativas del género Passiflora subgénero Passiflora

Introducción

La hibridación interespecífica es una de las fuentes más importantes de variación genética en el mejoramiento de plantas ornamentales (van Tuyl

& De Jeu, 1997). Esta estrategia es utilizada ampliamente en el mejoramiento de Passiflora (Ocampo et al., 2016; Giovannini et al., 2012;

Bugallo et al., 2011; Ramírez, 2006; Ulmer & MacDougal, 2004;

Vanderplank, 1991; Payán & Martín, 1975).

Cuando se intenta producir un híbrido interespecífico ocurren barreras que constituyen el mayor obstáculo a superar para llevar a cabo este tipo de estrategias de mejoramiento (van Tuyl & Lim, 2003; Payán &

Martín, 1975).

Algunos cruzamientos no producen semilla, son posibles en una sola dirección (incompatibilidad unilateral) y, a menudo, son genotipo- dependientes (Reberning et al., 2015; Singh, 2003).

Entre los mecanismos que previenen la formación de frutos en un cruzamiento se distinguen las barreras pre-cigóticas y post-cigóticas. Las barreras pre-cigóticas aíslan a los individuos espacial, temporal, mecánica o gaméticamente (Grant, 1989). Los procesos relativos a la muerte celular programada juegan un importante papel en el rechazo del polen luego de la interacción polen-pistilo (Serrano et al., 2015).

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Una vez reunidas las gametas, la cigota debe poder enfrentar la división mitótica para formar un embrión normal. En el embrión se forman los meristemas primarios y se desarrollan los primeros órganos de la futura planta. La semilla pierde agua hasta que se deseca y el embrión permanece en estado latente hasta que se den las condiciones de humedad para que se produzca la germinación (Shivanna & Sawhney, 1997).

Otro de los aspectos importantes a considerar al realizar cruzamientos interespecíficos es el relativo a las similitudes genómicas entre las especies.

La posibilidad de cruzamiento es una medida indirecta del grado de relación genómica entre las especies parentales. Los cruzamientos entre especies con genomas similares suelen fructificar normalmente, mientras que en los de genomas diferentes es común el aborto de los embriones o la esterilidad de los híbridos, entre otras manifestaciones (Singh, 2003; Stebbins, 1958). La inviabilidad de las semillas de los híbridos y la letalidad vegetativa ocurren comúnmente en cruzamientos intergenómicos distantes. La reducción de la correspondencia cromosómica entre especies lejanamente relacionadas es atribuida a diferencias estructurales entre cromosomas perpetuadas durante la especiación (Singh, 2003; Stebbins, 1971, 1958).

A pesar de existir gran número de híbridos interespecíficos para el género Passiflora existe poca información sobre la capacidad combinatoria de las especies argentinas. El cálculo de la eficiencia reproductiva refleja este fenómeno teniendo en cuenta la cantidad de semillas formadas a partir

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. de los óvulos disponibles y el número de frutos obtenidos según las flores polinizadas (Dafni, 1991).

En este Capítulo se estudia la hibridación entre especies nativas del género Passiflora subgénero Passiflora, su fructificación, reciprocidad y la capacidad combinatoria entre ellas. Además, se calcula la eficiencia reproductiva en cada cruzamiento, se analiza la viabilidad vegetativa y la llegada a la etapa reproductiva de los híbridos obtenidos.

Hipótesis

Las hipótesis nulas que se prueban en este Capítulo son:

Hipótesis 3: las diferentes especies del género Passiflora subgénero

Passiflora poseen similares cantidades de óvulos por ovario.

Hipótesis 4: los distintos cruzamientos interespecíficos en Passiflora poseen probabilidades equivalentes de producir fruto y similares cantidades de semillas por fruto. Por lo tanto, presentan eficiencias reproductivas y posibilidad de producir una planta viable estadísticamente semejantes.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Objetivos

- realizar un recuento de la cantidad de óvulos por ovario en cada

especie del subgénero.

- efectuar cruzamientos entre diferentes taxones dentro del género

Passiflora subgénero Passiflora y estudiar la probabilidad de producir fruto en cada uno.

- evaluar la cantidad de semillas en cada fruto, su germinación y la obtención de plantas adultas.

- calcular la eficiencia reproductiva en cada cruzamiento y compararla entre ellos.

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Materiales y métodos

Material vegetal: Todo el material vegetal analizado pertenece a la colección in vivo de Passiflora del Instituto de Floricultura del INTA (Tabla

I.2).

Hibridación interespecífica

Colecta de polen: se cubrieron pimpollos con una bolsa de papel un día antes de la antesis para evitar contaminaciones. En el momento de la dehiscencia, se colectaron las anteras y se colocaron dentro de una gragea que se rotuló con el código de la planta y la fecha. La gragea con polen se conservó a 5º C en un envase con silica-gel para reducir la humedad hasta el momento de la polinización.

Cruzamientos: Se realizaron cruzamientos entre nueve taxones de especies nativas del género Passiflora subgénero Passiflora: P. alata, P. amethystina, P. caerulea, P. cincinnata, P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpa, P. elegans y dos citotipos de P. mooreana, diploide y tetraploide.

Para la realización de los cruzamientos se procedió, previo a la antesis, a la castración de la flor de la planta que actuó como parental materno. La castración se realizó eliminando en primer lugar los órganos externos del botón floral (sépalos, pétalos y corona) para acceder a los órganos sexuales.

Se extirparon las anteras aún cerradas y se cubrió con una bolsa de papel hasta la altura del pedúnculo floral para evitar la visita de polinizadores que pudieran contaminar el material con polen indeseado. Se colocaron

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. etiquetas colgantes para identificar cada cruzamiento. En caso de lograrse la fructificación, los frutos se cosecharon al producirse el viraje del color.

Se realizaron, al menos, 25 cruzamientos por cada sentido en cada combinación de parentales.

Obtención de híbridos: las semillas obtenidas de los cruzamientos fueron removidas de los frutos y se les retiró el arilo. Como tratamientos pre-germinativos, las semillas fueron escarificadas con papel de lija a lo largo de la sutura y enjuagadas en agua corriente durante 12 horas

(Ferreira, 2005). La siembra se realizó en bolsas con vermiculita que se colocaron en cámara con temperatura mínima de 15º C. Al germinar las semillas se las fue trasplantando a bandejas alveoladas con un sustrato compuesto por turba, perlita y vermiculita (2:1:1) y, al ir aumentando el tamaño de las plantas, a macetas según su tamaño. Las plantas híbridas en estado adulto se mantuvieron en macetas de 10-20 litros, en invernáculo con temperatura mínima de 10ºC.

Se compararon estadísticamente los resultados de los diferentes cruzamientos por pruebas de diferencia de proporciones basadas en el test exacto de Fisher por medio del programa InfoStat (versión 2009, Universidad

Nacional de Córdoba) (Di Renzo et al., 2010).

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Cálculo de la eficiencia reproductiva

La eficiencia reproductiva se calculó por la fórmula de Dafni (1992):

Eficiencia reproductiva = nº de frutos * nº promedio de semillas por fruto * 100 nº de flores nº promedio de óvulos por ovario polinizadas

El número promedio de óvulos por ovario se calculó realizando un

recuento de todos los óvulos en cada uno de 10 ovarios de cada taxón

observados bajo lupa.

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Resultados

Cruzamientos interespecíficos

Se obtuvieron frutos con semillas en 40 de los 72 cruzamientos realizados (Tabla 2.1).

Entre las 36 parejas de taxones estudiadas, 12 produjeron frutos en los cruzamientos recíprocos: P. alata con P. caerulea, P. amethystina con P. caerulea, P. amethystina con P. edulis f. edulis, P. amethystina con P. edulis f. flavicarpa, P. amethystina con P. elegans, P. amethystina con ambos citotipos de P. mooreana, P. caerulea con P. edulis f. flavicarpa, P. cincinnata con P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis con ambos citotipos de P. mooreana y P. mooreana diploide con P. mooreana tetraploide. Las relaciones recíprocamente fructíferas entre los taxones estudiados se muestran en la

Figura 2.1.

Los cruzamientos que dieron fruto en un solo sentido fueron 17: P. alata x P. cincinnata, P. amethystina x P. alata, P. caerulea x P. cincinnata,

P. caerulea x P. edulis f. edulis, P. cincinnata x P. edulis f. edulis, P. cincinnata x P. mooreana 2x, P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. edulis f. flavicarpa x P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpa x P. mooreana 2x, P. elegans x P. caerulea, P. elegans x P. cincinnata, P. elegans x P. edulis f. edulis, P. mooreana 2x x P. caerulea, P. mooreana 2x x P. elegans, P. mooreana 4x x P. alata, P. mooreana 4x x P. cincinnata y P. mooreana 4x x P. elegans. Las relaciones unilateralmente fructíferas entre los taxones se muestran en la

Figura 2.2.

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Se registraron 14 cruzamientos que fueron recíprocamente infértilesen siete parejas de taxones: P. alata y P. edulis f. edulis, P. alata y

P. elegans, P. alata y P. mooreana diploide, P. amethystina y P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa y P. elegans, P. edulis f. flavicarpa y P. mooreana 4x, P. caerulea y P. mooreana 4x. La relación entre taxones que fallaron recíprocamente en la formación de frutos con semilla, se muestra en la

Figura 2.1.

Por otra parte, hubo 3 cruzamientos que dieron sólo frutos vacíos (P. mooreana 2x x P. alata, P. mooreana 4x x P. caerulea y P. mooreana 4x x P. edulis f. flavicarpa) (Figura 2.2).

También hubo formación de frutos vacíos en 7 cruzamientos que, sí produjeron otros frutos con semilla, cinco de éstos se dieron en las cruzas de P. mooreana 4x con P. alata, P. amethystina, P. cincinnata, P. edulis f. edulis y P. elegans; los otros 2 en P. elegans x P. amethystina y P. caerulea x P. cincinnata.

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Tabla 2.1: Cruzamientos entre especies nativas de Passiflora. Los números en cada celda indican cantidad de cruzamientos realizados/cantidad de frutos con semillas obtenidos. * frutos vacíos

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Diferencias de fructificación entre los cruzamientos fértiles

Para comprobar la existencia de diferencias estadísticamente significativas en la capacidad de producir frutos con semillas entre los cruzamientos viables, se realizaron pruebas de diferencia de proporciones entre los mismos (Tabla 2.2). Los resultados mostraron que, con un 58,82% de fructificación, el cruzamiento de P. amethystina x P. elegans, se diferenció estadísticamente, superando la capacidad del resto de los cruzamientos.

Además, estas dos especies dieron frutos en las cruzas recíprocas. El porcentaje de fructificación menor fue de 2,7% y se dio en P. cincinnata x P. edulis f. edulis, que no se dio en forma recíproca.

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Tabla 2.2: Producción de frutos con semilla en cruzamientos interespecíficos de Passiflora. Prueba estadística de diferencia de proporciones p 0,05. Letras distintas indican diferencias significativas. En rojo: cruzamientos que fructifican recíprocamente, en violeta: unidireccionales.

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Figura 2.1: Relaciones recíprocas en los cruzamientos entre taxones nativos del género Passiflora. Líneas verdes indican cruzamientos recíprocos exitosos, líneas rojas indican cruzamientos recíprocamente fallidos.

Figura 2.2: Relaciones unilaterales y formación de frutos vacíos en los cruzamientos entre taxones nativos de Passiflora. Líneas amarillas indican cruzamientos unilaterales, líneas violetas indican formación de frutos vacíos solamente.

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Eficiencia reproductiva interespecífica

Para el cálculo de la eficiencia reproductiva se contaron las semillas contenidas en cada uno de 126 frutos cosechados. Fue posible calcular la cantidad promedio de semillas por fruto en 40 cruzamientos (Tabla 2.3).

Esta cantidad varió entre 240 semillas, en el cruzamiento P. edulis f. flavicarpa x P. amethystina, y 1 en P. edulis f. edulis x P. mooreana 2x (Anexo

4). En el cruzamiento P. mooreana 2x x P. edulis f. edulis no fue posible contar la cantidad de semillas ya que estas se perdieron parcialmente antes de la cosecha.

Se realizó el recuento de óvulos por ovario en los 9 taxones y se calculó el promedio para cada uno. Este valor osciló entre 515,5 óvulos/ovario para

P. edulis f. flavicarpa y 123,1 para P. elegans (Tabla 2.3) (Anexo 4).

Se calculó la eficiencia reproductiva según la ecuación de Dafni (1992) en los 40 cruzamientos que dieron fruto de las 72 combinaciones entre taxones (Tabla 2.3). Los valores de eficiencia reproductiva variaron entre

21,6% en el cruzamiento P. alata x P. cincinnata, y 0,02% en el de P. edulis f. edulis x P. mooreana 2x.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 2.3: Eficiencia reproductiva en los cruzamientos interespecíficos fructíferos de Passiflora. En rosa: plantas que llegaron a etapa reproductiva, en lila: plantas que permanecen en estado vegetativo al 2016, en gris: semillas que no germinaron o murieron en estado de plántula.

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En la Tabla 2.3 se listan los cruzamientos discriminados según el estado fisiológico alcanzado por cada uno al día de la redacción de esta tesis, en el año 2016. De los 40 cruzamientos que dieron frutos con semilla, se registró la germinación en 31 de ellos, produciendo plantas híbridas, mientras que los otros nueve no germinaron o la plántula murió tempranamente. De los híbridos obtenidos sólo los de 20 cruzamientos florecieron y los 11 restantes permanecen en estado vegetativo.

Los tres cruzamientos con mayor eficiencia reproductiva, P. alata x P. cincinnata, P. amethystina x P. elegans y P. alata x P. caerulea, llegaron a la etapa reproductiva y continuaron produciendo flores regularmente. De los

10 cruzamientos con eficiencias reproductivas menores a 1%, 6 no germinaron o murieron tempranamente y 4 germinaron. De los 4 cruzamientos que germinaron y llegaron a plantas adultas, 3 florecieron y 1 permaneció en etapa vegetativa.

Teniendo en cuenta la capacidad de cruzarse recíprocamente, la eficiencia reproductiva y la supervivencia de los híbridos se confeccionó un resumen. La mayor aptitud interespecífica se dio entre P. amethystina y P. caerulea, mientras que los cuatro cruzamientos siguientes también se dieron con P. amethystina (con las dos formas de P. edulis y con los dos citotipos de P. mooreana.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 2.4: Resumen de los caracteres relacionados con la viabilidad interespecífica en cruzamientos entre nativas de Passiflora. En violeta: cruzamientos inviables; en fucsia: cruzamientos exitosos que no producen híbridos viables; en rosa: cruzamientos exitosos; * plantas vivas que aún no florecieron.

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Discusión

A partir de las 72 combinaciones de taxones ensayadas se obtuvieron frutos con semillas en 40 de ellos. Los nueve taxones combinados formaron

36 parejas, 12 de las cuales produjeron frutos en los cruzamientos recíprocos. La especie que se cruzó con mayor número de taxones, seis de los otros ocho evaluados, fue P. amethystina (con P. caerulea, P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpa, P. elegans, P. mooreana 2x y P. mooreana 4x).

Esto podría sugerir una mayor afinidad de esta especie con el resto, posiblemente por mantener una cercanía filogenética con todas ellas y/o por no haber deasrrollado barreras reproductivas pre-cigóticas que la aíslen

(Grant, 1989). Passiflora caerulea logró cruzarse recíprocamente con tres de los taxones estudiados (además de con P. amethystina, con P. alata y con P. edulis f. flavicarpa). La especie P. edulis f. flavicarpa también se cruzó en ambos sentidos con tres especies, P. amethystina, P. caerulea y P. cincinnata.

La forma P. edulis f. edulis dió frutos con tres taxones de dos especies, P. amethystina y los dos citotipos de P. mooreana. Los dos niveles de ploidía de

P. mooreana se cruzaron entre sí, con P. amethystina y P. edulis f. edulis

(Figura 2.1).

Entre los híbridos publicados (Anexo 5), existen variedades del cruzamiento P. cincinnata x P. caerulea (P. “Blue Carnival”, P. “Catherina

Howard”, P. “Jeeny”, P. “Lada”, P. “Linda”, P. “Rinconata” y P. “Vladena”), de

P. edulis f. edulis x P. caerulea (P. “Excel”) y de P. edulis f. edulis x P. edulis

100

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. f. flavicarpa (P. “Rattana”) (Passiflora Society International, Ulmer &

MacDougal, 2004; Vanderplank, 1991). Si bien son varios los híbridos obtenidos, sobre todo en la primera combinación, en este trabajo se lograron los cruzamientos entre estas especies solamente en el sentido opuesto al publicado, P. caerulea x P. cincinnata, P. caerulea x P. edulis f. edulis y P. edulis f. edulis x P. edulis f. flavicarpa.

También se destaca entre los híbridos publicados mencionados la variedad P. “Coronata” que fue obtenida del cruzamiento entre P. alata y P. edulis f. edulis. Esta pareja de especies no produjo frutos en este trabajo, en ninguno de los dos sentidos, en 72 intentos realizados. Estas dos situaciones (híbridos publicados que se obtienen en sentido opuesto o que no se logran), sugieren la existencia de barreras que no provienen de las diferencias genómicas entre especies sino de incompatibilidades entre genotipos o núcleo-citoplasmática (Rebening et al., 2015; Tiffin et al., 2001).

Es notable que en la bibliografía P. amethystina y P. caerulea, sean la pareja de especies nativas más prolífica entre los híbridos publicados, hecho que confirma los resultados de aptitud interespecífica obtenidos en este trabajo (Anexo 5).

Teniendo en cuenta sólo la reciprocidad del cruzamiento entre las parejas de taxones que dieron frutos en ambos sentidos, no existirían barreras pre-cigóticas entre ellas y esto implicaría una mayor afinidad genómica que con otros taxones. Sin embargo, de los 24 cruzamientos simétricamente exitosos, cinco no lograron producir híbridos por fallas en

101

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. la germinación de las semillas (P. caerulea x P. alata, P. amethystina x P. mooreana 4x, P. edulis f. flavicarpa x P. cincinnata, P. edulis f. edulis x P. mooreana 2x y P. mooreana 2x x P. mooreana 4x). Este defecto en la germinación denota una barrera post-cigótica que puede provenir de diversos orígenes. Uno de ellos es la impronta genómica “genomic imprinting” que produce el “apagado” de una de las copias de varios genes y es fundamental en la función del endosperma para nutrir al embrión (Wolff et al., 2015). Otro, deriva de una falla en la etapa de celularización durante el desarrollo del endosperma que deja sin alimento al embrión. Un tercero, se da en híbridos interespecíficos donde se observan endospermas defectuosos pero este fenómeno ocurre independientemente del modo de desarrollo del endosperma (celular o nuclear) (Wolff et al., 2015).

Existen registros de algunos géneros en los que la variación en la capacidad de cruzarse entre las diferentes especies está positivamente correlacionada con la cercanía filogenética, por ejemplo, Silene (Moyle et al.,

2004). En otros, como Iochroma, Glycine y Streptanthus la relación no es significativa (DeWitt & Baum, 2007; Moyle et al., 2004).

En Passiflora, los árboles filogenéticos obtenidos a partir de marcadores ITS y espaciadores de plástidos trnL-trnF dan como resultado un consenso estricto que separa el subgénero Passiflora (Muschner et al.,

2003). En un clado de este se agrupan P. alata, P. edulis y P. cincinnata, separándolos de P. caerulea, P. elegans y P. amethystina. En los resultados obtenidos en esta tesis, se destaca la aptitud interespecífica relativa de P.

102

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. amethystina con cuatro de las mencionadas (excepto con P. cincinnata). En el grupo P. amethystina - P. caerulea - P. elegans, la aptitud interespecífica fue mayor entre las dos primeras e intermedia entre P. amethystina y P. elegans, mientras que los cruzamientos entre P. caerulea y P. elegans no dieron híbridos viables.

Dado que un clado de la filogenia de Muschner et al. (2003) contiene a P. alata, P. cincinnata y P. edulis, era esperable que los cruzamientos de estas especies con las dos formas de P. edulis tuvieran el mismo rendimiento. Sin embargo, la eficiencia reproductiva y viabilidad de híbridos con P. edulis f. flavicarpa fue mayor que con P. edulis f. edulis.

Entre las 36 parejas de taxones cruzadas, 17 dieron fruto en un solo sentido, lo que demostraría el desarrollo de algún tipo de barrera que generaría esta asimetría. Entre las dos formas de P. edulis se encontró incompatibilidad unilateral, obteniéndose descendencia sólo cuando P. edulis f. flavicarpa actuó como parental femenino. Este mecanismo se observa generalmente en plantas con sistemas genéticos de autoincompatibilidad (Pandey, 1981; Lewis & Crowe, 1958). Estos autores sugieren que la incompatibilidad unilateral surge como un efecto pleiotrópico del gen S, que es el que produce la autoincompatibilidad. La incompatibilidad ocurriría si los productos del gen S en el pistilo y el polen poseen la misma especificidad causando un principio inhibidor interrumpiendo el crecimiento del tubo polínico. Estos mecanismos de autoincompatibilidad han sido demostrados en la mayoría de las especies del

103

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. subgénero Passiflora incluidas en este trabajo, excepto en P. edulis f. edulis

(Ocampo et al., 2016; Ulmer & MacDougal, 2004).

Otra hipótesis que podría explicar la incompatibilidad unilateral se basa en el modelo Dobzhansky-Muller que asume que una especie diploide ancestral pudo haberse dividido en dos poblaciones hijas por una barrera externa (pre-polinización). En cada una de estas poblaciones se fijarían mutaciones en dos alelos diferentes manteniendo cada uno compatibilidad con el genotipo ancestral, pero generando incompatibilidades entre los nuevos alelos de las dos poblaciones hijas (Tiffin et al., 2001). Si en este modelo, las mutaciones fijadas fueran de herencia uniparental se podrían generar diferentes tipos de incompatibilidad entre el citoplasma y el núcleo.

La hipótesis basada en la herencia uniparental del contenido citoplasmático estaría fuertemente respaldada por el trabajo de Hansen et al. (2007) en el que se comprobó que en el género Passiflora la procedencia del genoma del cloroplasto puede ser materna, paterna o, en menor medida, biparental.

Además de la incompatibilidad unilateral entre las dos formas de P. edulis, la descendencia entre ambas formas, presentó una baja eficiencia reproductiva (1,39%) y escasa fructificación (3,57%).

Los conflictos reproductivos entre las dos formas de P. edulis, justificarían los cuestionamientos taxonómicos que plantean la separación de estas dos formas en especies diferentes (Ulmer & MacDougal, 2004).

104

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

La forma P. edulis f. edulis resultó en una escasa formación de frutos, como parental femenino y como dador de polen (7/77 = 9,09% frutos como parental femenino contra 11/180 = 6,11% como parental masculino). Este resultado contrasta con los obtenidos por Ocampo et al. (2016), para quienes P. edulis f. edulis fue un parental muy prolífico. Es necesario contemplar otros factores bióticos y abióticos que podrían afectar la formación del embrión y el endosperma en semillas, así como los efectos provenientes del genotipo (Lafon-Placette & Köler, 2016; Wolff et al., 2015;

Reberning et al., 2015; Singh, 2003).

La falta de éxito del citotipo tetraploide de P. mooreana en los cruzamientos podría deberse a la diferencia en el nivel de ploidía y no a la distancia filogenética entre los taxones. La divergencia en el nivel de ploidía podría manifestarse como una barrera en el momento de la interacción entre las proteínas del polen y el estigma (Shivanna & Sawhney, 1997). Por otra parte,

P. mooreana 4x fue el taxón que produjo más frutos vacíos. De los diez cruzamientos en los que se registraron frutos vanos, siete involucraban al citotipo tetraploide de P. mooreana como parental femenino. Además, de esos siete cruzamientos, cinco dieron simiente en otras oportunidades, mientras que los otros dos solamente generaron frutos sin semillas.

De los nueve cruzamientos con P. mooreana 4x que produjeron semilla, sólo dos germinaron. Esto se explicaría ya que, en caso de ocurrir la fecundación en cruzamientos entre distintos niveles de ploidía, una de las manifestaciones es el desarrollo anormal de la germinación de las

105

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. semillas debido a la ruptura de la relación embrión-endosperma (Greiner

& Oberprieler, 2012; Johnston et al., 1980).

Sólo dos híbridos de la progenie de este taxón lograron florecer, P. amethystina x P. mooreana 4x y P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis.

Siete de las parejas entre los taxones evaluados resultaron estériles recíprocamente. La especie con la que se registró mayor cantidad de cruzamientos inviables fue P. alata, con tres de los taxones ensayados (P. elegans, P. edulis f. edulis y P. mooreana 2x). Además, tres taxones expresaron incompatibilidad con otros dos: P. edulis f. flavicarpa (con P. elegans y P. mooreana 4x), P. elegans (con P. alata y P. edulis f. flavicarpa) y

P. mooreana 4x (con P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa). Este hecho reflejaría una reducción en el reconocimiento entre las especies involucradas. Cuando ocurre la polinización, el polen se hidrata y las proteínas de la pared del polen entran en contacto con el exudado estigmático. Esta es la primera interacción química entre el polen y el pistilo que es la base del fenómeno de reconocimiento (Shivanna & Sawhney, 1997). La hipótesis del área sostiene que la compatibilidad en un cruzamiento falla si una sustancia en el polen no reconoce una sustancia en el pistilo (Serrano et al., 2015;

Nettancourt, 2010). Stebbins (1958) afirma que cuando los híbridos entre dos parentales son recíprocamente inviables o débiles, es prueba de la existencia de incompatibilidad entre cromosomas y/o genes. Uno de los puntos débiles más frecuentes en caso de interacciones no armónicas entre cromosomas es la primera división de la cigota híbrida. En algunos casos,

106

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. una eliminación de cromosomas ocurre durante la falla de la mitosis y el desarrollo se detiene. En híbridos entre parentales más relacionados, pueden no observarse anormalidades evidentes en las primeras mitosis sino que ocurren en estadios posteriores del desarrollo (Stebbins, 1958).

Para el cálculo de la eficiencia reproductiva en los cruzamientos fértiles se contaron las semillas contenidas en cada uno de 126 frutos cosechados. Fue posible calcular la cantidad promedio de semillas por fruto para 40 cruzamientos (Tabla 2.3). La mayor cantidad registrada fue de 240 semillas por fruto en el cruzamiento P. edulis f. flavicarpa x P. amethystina y, a pesar de esto, su eficiencia reproductiva fue menor a un 2%. Este hecho indica que la cantidad de semillas por sí misma no es una medida confiable de éxito reproductivo.

La cantidad media de óvulos por ovario en las especies arrojó un valor máximo 515,5 óvulos/ovario para P. edulis f. flavicarpa y mínimo de 123,1 para P. elegans (Tabla 2.3). Debido a que P. edulis f. flavicarpa es una planta comercialmente explotada como frutal por el arilo de sus semillas, es posible que su evolución se haya visto influenciada por una selección antrópica orientada al aumento de la cantidad de óvulos.

Entre los 40 cruzamientos que dieron fruto, la eficiencia reproductiva más alta fue de 21,6% en el cruzamiento P. alata x P. cincinnata. Si bien este valor resultó bajo, la ecuación de eficiencia reproductiva fue planteada para el estudio de la biología reproductiva y la capacidad de los polinizadores y no como una herramienta para el mejoramiento genético (Dafni,1992). 107

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Los tres cruzamientos con mayor eficiencia reproductiva, P. alata x P. cincinnata, P. amethystina x P. elegans y P. alata x P. caerulea, se indujeron a floración y continuaron produciendo flores regularmente, en cambio, de los 10 cruzamientos con eficiencias reproductivas menores a 1%, 6 no germinaron o murieron tempranamente. La relación existente entre la eficiencia reproductiva y la producción de híbridos confirma la utilidad del uso de la fórmula para el mejoramiento, para estudiar la hibridación interespecífica y las barreras que surgen de ella, teniendo en cuenta aspectos como la cantidad de óvulos por ovario como limitante para el número final de semillas por fruto.

Otra de las manifestaciones de barreras post-cigóticas, es la falla en la germinación de las semillas o la inviabilidad de la plántula. En este trabajo, este tipo de obstáculo apareció en 9 de los 40 cruzamientos que dieron semilla.

De los 40 híbridos obtenidos, sólo 20 florecieron. En Capítulos posteriores se aborda el estudio de las características fenotípicas y, con ellas, las posibilidades de selección de cada uno de ellos como planta ornamental. Otros 11 híbridos aún permanecen en estado vegetativo.

108

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Conclusiones

 En los cruzamientos entre especies argentinas de Passiflora se

encontraron parejas de especies que dieron híbridos recíprocamente,

otras que lo hicieron en un solo sentido (incompatibilidad unilateral),

mientras que en un tercer grupo no hubo formación de frutos.

 Las especies del género Passiflora subgénero Passiflora mostraron

cantidades significativamente diferentes de óvulos por ovario,

permitiendo rechazar la Hipótesis 3.

 La especie P. amethystina se destacó por su alta aptitud

interespecífica (con seis de los ocho taxones con que se la cruzó),

mientras que con P. alata se registró la mayor cantidad de

cruzamientos inviables. Las diferencias entre cruzamientos en la

capacidad de fructificación, la eficiencia reproductiva y la viabilidad

vegetativa de los híbridos, permitieron rechazar la Hipótesis 4.

 Entre las dos formas de P. edulis se encontró incompatibilidad

unilateral. La descendencia que se obtuvo entre ambas formas

presentó una baja eficiencia reproductiva (1,39%) y escaso porcentaje

de fructificación (3,57%). Los conflictos reproductivos entre estas dos

formas, justificarían los cuestionamientos taxonómicos que plantean

la separación de estas dos en especies diferentes.

 Se encontraron manifestaciones de barreras post-cigóticas, como

fallas en la germinación de las semillas e inviabilidad de plántulas. En

109

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

este trabajo, este tipo de obstáculo apareció en 9 de los 40

cruzamientos que dieron semilla.

 Una de las parejas más prolíficas de las ensayadas en este trabajo fue

P. amethystina y P. caerulea. La bibliografía confirmó esta afinidad

con una gran cantidad de híbridos publicados entre las dos especies.

 Entre los híbridos artificiales publicados por otros autores, se

encontró éxito en algunos cruzamientos o sentidos de cruzamiento

que en este trabajo no se lograron, lo que indicaría la existencia de

efectos del genotipo o interacciones núcleo-citoplasmáticas.

110

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Capítulo 3: Estudios citogenéticos en híbridos interespecíficos de Passiflora

Introducción

El aislamiento reproductivo que impide el intercambio genético entre dos especies puede producirse por una variedad de fenómenos. Algunos de estos mecanismos ocurren con posterioridad a la fecundación de las gametas: durante el desarrollo, crecimiento y reproducción de los híbridos

(Stebbins, 1958). Las barreras post- cigóticas pueden deberse a problemas en la formación de las semillas, viabilidad de los híbridos, su fertilidad, viabilidad y/o fertilidad de generaciones posteriores al híbrido (Baak et al.,

2015; Stebbins, 1971).

La producción de polen fértil depende de procesos fisiológicos y bioquímicos controlados genéticamente. Disrupciones en la diferenciación del tejido esporógeno, en la meiosis, en el desarrollo de las micrósporas y del polen pueden resultar en la esterilidad masculina de la planta (Mendes-

Bonato et al., 2007). Entre las etapas mencionadas, la meiosis suele ser el paso más sensible del desarrollo (Kaul, 1988).

La estabilidad cariotípica y probablemente la heterosis en los híbridos interespecíficos son logrados a expensas de la flexibilidad evolutiva que provee la recombinación de diferentes genomas (Comai et al., 2003). En la hibridación interespecífica donde en un mismo núcleo existen genomas de

111

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. dos epecies distntas, se produciría un “shock genómico” que iniciaría la actividad de los elementos móviles del genoma (McClintock, 1984). Algunas de las manifestaciones de este shock involucran pérdida y/o ganancia de secuencias de ADN respecto de los genomios parentales (Ma & Gustafson,

2008; Ozkan et al., 2001; Song, et al., 1995). Algunos cruzamientos interespecíficos en Brassica y entre Aegilops y Triticum sugieren que la magnitud del impacto genómico estaría relacionada con la distancia filogenética entre las especies involucradas (Ozkan et al., 2001; Song et al.,

1995). Este tipo de cambios, por ocurrir de una generación a otra, son llamados “revolucionarios” en contraposición a los cambios evolutivos que son eventos acumulativos que se dan a lo largo de muchas generaciones (Ma

& Gustafson, 2008).

Una manera de analizar la afinidad genómica es la inferencia de relaciones entre complementos cromosómicos básicos en base al grado de su sinapsis (apareamiento cromosómico) y es generalmente estudiado en la metafase I meiótica, en células madre del polen de híbridos. En estos estudios, se considera que los cromosomas que aparean entre sí se encuentran relacionados mientras que los que no se reconocen serían más distantes (Jauhar, 1996). Sobre esta base, los cromosomas pueden considerarse homólogos, parcialmente homólogos (homeólogos) o no homólogos.

Este Capítulo tiene como objetivo el estudio citogenético de híbridos interespecíficos de Passiflora para evaluar el aporte cromosómico de cada 112

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. parental y sus posibles modificaciones. Además, se analiza la afinidad genómica entre las especies parentales, evaluando el grado de apareamiento cromosómico en la etapa meiótica de la microsporogénesis y, como conclusión de este proceso, la viabilidad del polen.

Hipótesis

Las hipótesis nulas que se ponen a prueba en este Capítulo son:

Hipótesis 5: Los híbridos interespecíficos estudiados poseen un número cromosómico 2n = 18, genomas homólogos y similares probabilidades de formar nueve bivalentes en la profase I de la meiosis y tétradas de micrósporas normales y, por lo tanto, todos poseen una viabilidad del polen similar.

Hipótesis 6: los complementos cromosómicos aportados por las diferentes especies parentales no pueden ser distinguidos por técnicas de citogenética molecular (hibridación in situ).

Hipótesis 7: la cantidad de ADN en híbridos interespecíficos es igual a la suma de la cantidad de ADN de las gametas parentales

113

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Objetivos

- estudiar la fase meiótica de la microsporogénesis para evaluar el apareamiento entre cromosomas homeólogos en los híbridos interespecíficos.

- estimar la regularidad de los productos meióticos de los híbridos mediante el índice meiótico.

- analizar la afinidad genómica entre las especies parentales mediante hibridación in situ, utilizando como sonda ADN genómico de las especies parentales sobre preparados cromosómicos de los híbridos interespecíficos.

- estimar la cantidad de ADN en híbridos interespecíficos y compararla con la cantidad de ADN promedio entre los genotipos parentales.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Materiales y métodos

Los híbridos interespecíficos estudiados corresponden a la colección in vivo de Instituto de Floricultura del INTA, detallados en la Tabla I.2

1- Recuento cromosómico en células somáticas de híbridos

Para los recuentos cromosómicos en híbridos interespecíficos se emplearon la técnicas descriptas en el Capítulo 1.

2- Cantidad de ADN en células somáticas de híbridos

interespecíficos estimada por citometría de flujo

Se estimó la cantidad de ADN en 23 híbridos interespecíficos y en 10 genotipos parentales. La técnica de estimación de cantidad de ADN se describe en el Capítulo 1. Con el tamaño genómico estimado por citometría de flujo para las especies, se calculó la cantidad de ADN en las gametas parentales y, con este dato, la cantidad teórica que tendrían los híbridos resultantes de los cruzamientos. Se comparó este valor teórico con el estimado por citometría para cada híbrido, analizando los datos por ANOVA por medio del programa InfoStat, versión 2009 (Di Renzo et al., 2010).

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

3- Desarrollo del microgametofito en híbridos interespecíficos

Para el estudio del desarrollo de los microgametofitos en los híbridos interespecíficos, se colectaron botones florales y se fijaron en solución

3.1- Microsporogénesis

Para el estudio de la etapa meiótica de la microsporogénesis se analizó el apareamiento cromosómico en profase I en meiocitos de 19 híbridos correspondientes a 10 cruzamientos interespecíficos de Passiflora. Se registró la cantidad de células con cada configuración. Se comparó entre los cruzamientos la frecuencia de células con apareamiento normal de nueve bivalentes en los cruzamientos, contrastando por medio de un ANOVA con un nivel de significación p=0,05 con InfoStat, versión 2009 (Di Renzo et al.,

2010).

Se registró la cantidad de micrósporas formadas por cada célula madre del polen en 29 híbridos interespecíficos correspondientes a 14 cruzamientos. La capacidad de cada cruzamiento para producir tétradas de micrósporas (índice meiótico) se comparó por medio de ANOVA con nivel de significación p=0,05 por medio de InfoStat, versión 2009 (Di Renzo et al.,

2010). 116

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

3.2- Viabilidad del polen en híbridos interespecíficos

Para estimar la viabilidad del polen, se empleó el método de Alexander

(1969), descripto en el Capítulo 1. Diferencias de viabilidad de polen entre los híbridos interespecíficos fueron comparadas por ANOVA con contraste por test BSS por medio de InfoStat, versión 2009 (Di Renzo et al., 2010).

117

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Resultados

A partir de los preparados citológicos realizados se logró efectuar el recuento cromosómico en 25 híbridos de Passiflora correspondientes a 15 cruzamientos interespecíficos. Todos los genotipos híbridos estudiados que fueron analizados resultaron con un número cromosómico 2n = 18. Los resultados se muestran en las Figuras 3.1 a 3.9.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.1: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora amethystina x P. alata. a – d: genotipo 11-257; e-f: genotipo 11-258#1. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.2: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora amethystina x P. caerulea. a – d: genotipo 09-375#5; e-f: genotipo 09- 375#6. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.3: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18). Passiflora amethystina x P. edulis f. flavicarpa, genotipo 11-256. Tinción: DAPI.

121

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.4: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18). P. amethystina x P. elegans, a: genotipo11-246#1; b-f: genotipo 11-254#1. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.5: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora alata x P. cincinnata. a: genotipo 07-124#1; b-f: genotipo 07-153. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.6: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora alata x P. caerulea. a- c: genotipo 06-26#1, d-f: genotipo 06-24#5. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.7: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora caerulea x P. amethystina. genotipo 15-1. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.8: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora cincinnata x P. mooreana 2x. a-b: genotipo 10-178#1; c-d: genotipo 10-178#2. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.9: Cromosomas mitóticos de híbridos interespecíficos (2n = 2x = 18): Passiflora amethystina x P. mooreana 4x. genotipo 15-183. Tinción: DAPI.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

3.1- Microsporogénesis

Se estudió la etapa meiótica de la microsporogénesis en 19 híbridos correspondientes a 11 cruzamientos entre diferentes taxones de Passiflora:

P. amethystina x P. elegans (Figura 3.10), P. amethystina x P. caerulea

(Figura 3.11), P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa (Figura 3.12), P. amethystina x P. alata (Figura 3.13), P. amethystina x P. edulis f. edulis

(Figura 3.14), P. alata x P. caerulea (Figura 3.15), P. cincinnata x P. mooreana

2x (Figura 3.16), P. edulis f. flavicarpa x P. alata (Figura 3.17), P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea (Figura 3.18), P. mooreana 4x x P. elegans (Figura

3.19) y P. mooreana 2x x P. caerulea (Figura 3.20). Los resultados obtenidos se resumen en la Tabla 3.1. Todos los híbridos analizados presentaron microsporocitos con 18 cromosomas. Se identificaron diversas figuras entre las configuraciones observadas, desde univalentes (I) hasta hexavalentes

(VI). En los híbridos de los cruzamientos de P. amethystina con P. alata, P. caerulea, P. elegans y P. edulis f. edulis, así como en P. mooreana 2x x P. elegans y en P. alata x P. caerulea se observaron bivalentes heteromórficos.

La frecuencia de células con formación de nueve bivalentes fue variable tanto entre híbridos de diferentes cruzamientos, entre 30 y 100%, como entre los del mismo cruzamiento, 30 a 70% en los de P. amethystina x P. elegans, 50 a 100% en los de P. amethystina x P. caerulea, 50 a 82% en los de P. alata x P. caerulea y 33,3 a 90% en los de P. cincinnata x P. mooreana

2x.

128

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

La frecuencia de células con apareamiento regular de nueve bivalentes no mostró diferencias estadísticamente significativas entre los diferentes cruzamientos (Kruskal Wallis 0,05: H 6,61; p 0,759) (Anexo 6).

Entre las aberraciones meióticas se observó que los híbridos P. alata x

P. caerulea presentaron una alta frecuencia de univalentes y trivalentes por meiocito. En P. alata x P. caerulea también se hallaron meiocitos comunicados por canales citomícticos. La progenie de P. cincinnata x P. mooreana, P. edulis f. flavicarpa x P. alata y P. alata x P. caerulea presentó puente y fragmento en anafase I. En los híbridos de P. amethystina x P. caerulea y en los de P. amethystina x P. elegans se observó la formación de cuadrivalentes, mientras que en el de P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa fue frecuente la de trivalentes y univalentes.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.1: Configuraciones cromosómicas en la profase I y cantidad promedio de bivalentes, univalentes, trivalentes, cuadrivalentes y hexavalentes por microsporocito en híbridos interespecíficos de Passiflora (2n = 2x = 18)

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.1 (cont.): Configuraciones cromosómicas en la profase I y cantidad promedio de bivalentes, univalentes, trivalentes, cuadrivalentes y hexavalentes por microsporocito en híbridos interespecíficos de Passiflora (2n = 2x = 18)

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.10: Meiosis en microsporocitos de híbridos Passiflora amethystina x P. elegans. a: 9II, b: 8II+2I, c: 7II+4I, d: 5II+2IV, e: 6II+1IV+2I, f: 6II+2III, g: anafase I, h: anafase I tardía con cromosomas rezagados, i-k: metafase II con cromosomas fuera de placa, l: metafase II con cromosoma rezagado. *: bivalente heteromórfico; flechas negras señalan univalentes, blancas cuadrivalentes y grises trivalentes. Barras: 10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.11: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora amethystina x P. caerulea. a-c: 9II; b-c: cuatro bivalentes asociados al nucleolo; d: 8II+2I; e-f: 7II+1IV; g: 7II+1III+1I; h-i: 6II+1VI; j-k: metafase I; l: anafase I temprana con trivalente frying pan. *: bivalente heteromórfico, flechas negras señalan univalentes y hexavalentes, blancas cuadrivalentes y grises trivalentes. Barras: 10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.12: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora amethystina x P. edulis f. flavicarpa. a-b: 9II, tres bivalentes asociados al nucléolo; c: 1III asociado al nucleolo; d: 8II+2I, 2 bivalentes y 1 univalente asociados al nucléolo; e-f: 7II+1III+1I; g: 3II+3III+3I; h: metafase I con 9II; i: metafase I. *: bivalente heteromórfico; flechas negras señalan univalentes y grises trivalentes. Barras: 5 µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.13: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora amethystina x P. alata. a: 8II+2I; b-c: 7II+1III+1I; d: metafase I con cromosoma fuera de placa; e: metafase I - anafase I con univalentes; f: metafase I, ca. 8II+2I; g-h-i: telofase I, metafase II y telofase II con cromosomas rezagado (flechas). *: bivalente heteromórfico flechas negras señalan univalentes y grises trivalentes. Barras ena, b, c, e y f: 5 µm; en d,g, h, i: 10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.14: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora amethystina x P. edulis f. edulis. a-f: 9II; f: 2 pares asociados al nucléolo; g: 8II + 2I; h: anafase I; i: telofase I; j: metafase II; k: anafase II; l: telofase II.*: bivalente heteromórfico flechas negras señalan univalentes. Barras: 10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.15: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora alata x P. caerulea. a-d: 9II; e: 7II+ 1IV; b-e: 2 pares de cromosomas asociados al nucléolo; f: 7II+1III+1I; g: 6II+ 2 III; h: 5II+2III+1I; i: meiocitos unidos por canales citomícticos; j: anafase I con segregación desigual, puente y fragmento; k: telofase I con segregación desigual (10 cromosomas en la placa superior y 8 en la inferior); j-k: separación de cromátidas en anafase I; l: telofase II con cromosomas rezagados. *: bivalente heteromórfico flechas negras señalan univalentes, blancas cuadrivalentes y grises trivalentes. Barras a-h, j-k: 10µm; i: 20µm; l:10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.16: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora cincinnata x P. mooreana. a: 7II + 1IV; b: 5II + 2IV; c-d: anafase I con cromosomas rezagados, puente y fragmento (flecha); e: anafase I normal; f: telofase I con cromosoma rezagado; g: metafase II; h: anafase II con huso tripolar; i: telofase II con cromosoma rezagado (flecha). Flechas blancas indican cuadrivalentes. Barras en a, b y d: 5µm; c, e-i:10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.17: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora edulis f. flavicarpa x P. alata. a: 7II+1IV; b-c: 4II+1IV+1VI; d: anafase I temprana; e: anafase I con puente y fragmento (flecha); f: anafase I tardía; g: anafase I tardía con cromosomas rezagados; h: anafase II tardía; i: telofase II con cromosomas rezagados (flecha). Flechas negras señalan univalentes y hexavalentes, blancas cuadrivalentes. Barras 5µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.18: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora edulis f. flavicarpa x P. caerulea. a-c: 9II; d-e: 8II + 2I; f: 6II + 1IV+2I; g-i: anafase I; i: cromosomas rezagados (flecha). Flechas negras señalan univalentes y blancas cuadrivalentes. Barras 5µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.19: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora mooreana 2x x P. elegans. a-d: 9II con tres pares de cromosomas asociados al nucleolo; e: 8II + 2I; f: 7II + 4I; g: 6II + 6I; h: anafase I temprana; i: metafase I con 4 univalentes fuera de placa; j: metafase I con cromosomas fuera de placa; k: telofase I; l: anafase II. *: bivalente heteromórfico flechas negras señalan univalentes, blancas cuadrivalentes y grises trivalentes. Barras: 10µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.20: Meiosis en microsporocitos del híbrido Passiflora mooreana 2x x P. caerulea. a-e: 9II, 3 pares de cromosomas asociados al nucléolo; f: 8II + 2I (flechas); g-h: metafase II; i: anafase II. Barras: µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Se realizó un recuento de la cantidad de micrósporas formadas en cada una de 7816 células madres del polen de 29 híbridos correspondientes a 14 cruzamientos entre taxones.

La cantidad de micrósporas formadas en cada célula varió entre dos y nueve, siendo cuatro la cantidad más frecuente en todos los genotipos estudiados (Tabla 3.2, Figura 3.21).

El índice meiótico, que estima el porcentaje de ocurrencia de tétradas de micrósporas de apariencia normal, osciló entre 25,5% en uno de los híbridos del cruzamiento de P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea y 100% en uno correspondiente a P. mooreana 2x x P. caerulea (Tabla 3.2). El análisis de la varianza mostró diferencias significativas en los índices meióticos entre los distintos cruzamientos (Kruskal Wallis 0,05, H=23,58; p=0,0351) (Anexo

6). Se destacaron dos grupos entre los cruzamientos, uno con índices meióticos menores, representado por tres cruzamientos, P. amethystina x P. alata, P. alata x P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea); y otro con valores mayores al 70%, conformado por el resto.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.2: Porcentaje de células madre del polen según la cantidad de micrósporas formadas al final de la meiosis II y estimación del índice meiótico (IM) para híbridos interespecíficos de Passiflora.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.21: Cantidad de micrósporas por cada célula madre del polen (CMP) en híbridos interespecíficos de Passiflora. a-b: tétradas de micrósporas de apariencia normal en P. cincinnata x P. mooreana 2x y P. alata x P. cincinnata; c- p: cantidades anormales de micrósporas por célula; c-d: CMP con dos micrósporas en P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa y P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis; e-f: CMP con tres micrósporas en P. amethytsina x P. caerulea y P. alata x P. caerulea; g-h: CMP con cinco micrósporas en P. amethystina x P. elegans y P. mooreana 2x x P. amethystina; i-j: CMP con seis micrósporas en P. edulis f. flavicarpa x P. alata y P. amethytsina x P. alata; k-l: CMP con siete micrósporas en P. amethystina x P. alata y P. alata x P. caerulea; m-n: CMP con ocho micrósporas en P. alata x P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa; o-p: CMP con nueve micrósporas en P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.3: Diferencias estadísticamente significativas en los índices meióticos de los cruzamientos interespecíficos de Passiflora. n: cantidad de genotipos híbridos analizados.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

3.3- Viabilidad del polen en híbridos interespecíficos

Se estimó la viabilidad del polen en 47 híbridos interespecíficos de

Passiflora, correspondientes a los 20 cruzamientos que florecieron. Los porcentajes variaron entre un valor máximo de 79,4% para P. amethystina x P. edulis f. edulis, y un mínimo de 0% para P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa y P. edulis f. edulis x P. mooreana 4x. Las pruebas estadísticas comparando la viabilidad del polen media para cada cruzamiento segregan a los cuatro cruzamientos más fértiles (P. amethystina x P. edulis f. edulis,

P. amethystina x P. mooreana 4x, P. amethystina x P. caerulea y P. caerulea x P. amethystina), diferenciándolos del resto (Tabla 3.4) (Anexo 6).

Se observó variabilidad en la viabilidad del polen entre híbridos del mismo cruzamiento, sobre todo en el de P. amethystina x P. caerulea, con un valor máximo de 90,4% y un mínimo de 4,4%,

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.4: Viabilidad del polen de híbridos interespecíficos de Passiflora estimada por el método de Alexander (1969).

En la Tabla 3.5 se resumen los resultados más relevantes de la formación de gametas en híbridos interespecíficos, desde la etapa meiótica de la microsporogénesis hasta la viabilidad del polen.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.5: Resumen de los resultados de estudios de la microsporogénesis y viabilidad del polen en híbridos interespecíficos de Passiflora.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Hibridación genómica in situ (GISH)

Para corroborar la hipótesis que afirma que los genomas de las especies que dieron híbridos interespecíficos son afines, se realizaron hibridaciones in situ genómicas. Con este propósito, se hibridaron preparados de células somáticas de híbridos interespecíficos con la sonda genómica marcada de uno de los padres, bloqueando con ADN genómico de la otra especie parental.

Se logró aplicar la técnica de GISH sobre preparados de siete híbridos interespecíficos. El resultado mostró que, en algunos de los casos ensayados, se pudieron diferenciar claramente los genomas de cada taxón parental. Se pudo comprobar que el genoma de P. alata posee secuencias propias respecto de los de P. amethystina, P. cincinnata y P. caerulea.

Además, P. mooreana presenta secuencias no compartidas con P. cincinnata.

En todos los híbridos analizados se puede observar que los sitios marcados por la sonda (secuencias de ADN que son exclusivas del parental usado como sonda), no incluye los telómeros de los cromosomas hibridados

(Figura 3.23 y 3.25).

La señal de hibridación fue uniforme en nueve cromosomas de los híbridos de P. amethystina x P. alata y de P. alata x P. cincinnata, expresando que P. alata posee secuencias exclusivas que no se encuentran en P. amethystina ni en P. cincinnata (Figuras 3.22 y 3.23).

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

En el híbrido P. cincinnata x P. mooreana la señal de hibridación de la sonda presentó una apariencia bandeada en nueve cromosomas del híbrido

(Figura 3.24), indicando que poseen secuencias intercaladas compartidas.

En el híbrido P. alata x P. caerulea se observó que la sonda marcó los nueve cromosomas correspondientes a P. alata, encontrándose brazos cromosómicos bloqueados por el ADN de P. caerulea (compartidos entre las dos especies) (Figura 3.25).

La sonda de ADN genómico de P. amethystina no diferenció claramente éste genoma del correspondiente al otro parental en los híbridos

P. amethystina x P. caerulea (Figura 3.26), P. amethystina x P. elegans

(Figura 3.27) y P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa (Figura 3.28). Según estos resultados, estas especies presentarían alta afinidad a nivel de ADN repetititvo.

Como consecuencia de estos resultados, se rechaza la hipótesis nula que afirma que los genomas aportados por las especies parentales no pueden ser distinguidos por técnicas de hibridación in situ ya que sí se logró en los híbridos P. alata x P .amethystina, P. alata x P. cincinnata, P. alata x

P. caerulea y P. cincinnata x P. mooreana.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.22: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. alata (rojo) con bloqueo de P. amethystina sobre el híbrido interespecífico de P. amethystina x P. alata.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.23: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. alata (rojo) con bloqueo de P. cincinnata sobre el híbrido interespecífico de P. alata x P. cincinnata.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.24: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. mooreana (rojo) con bloqueo de P. cincinnata sobre el híbrido interespecífico de P. cincinnata x P. mooreana.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.25: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. alata (rojo) con bloqueo de P. caerulea sobre el híbrido interespecífico de P. alata x P. caerulea. Flechas indican segmentos cromosómicos no hibridados.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.26: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. amethystina (rojo) con bloqueo de P. caerulea sobre el híbrido interespecífico de P. amethystina x P. caerulea. Las flechas indican cromosomas con mayor señal de hibridación.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.27: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. amethystina (rojo) con bloqueo de P. elegans sobre el híbrido interespecífico de P. amethystina x P. elegans. Las flechas indican cromosomas con mayor señal de hibridación.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 3.28: Hibridación in situ utilizando como sonda ADN genómico de P. amethystina (rojo) con bloqueo de P. edulis f. flavicarpa sobre el híbrido interespecífico de P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa. Las flechas indican cromosomas con mayor señal de hibridación.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Cantidad de ADN en híbridos interespecíficos

Se estimó por la técnica de citometría de flujo la cantidad de ADN en

23 híbridos interespecíficos correspondientes a siete cruzamientos (P. amethystina x P. alata, P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. alata x P. cincinnata, P. amethystina x P. caerulea, P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa, P. cincinnata x P. mooreana y P. amethystina x P. elegans) y se la comparó con la cantidad teórica calculada como el promedio de las de los genotipos parentales.

Los resultados mostraron que cuatro de los 23 híbridos estudiados poseen una cantidad de ADN igual al promedio entre sus padres, 15 presentan una cantidad estadísticamente mayor y cuatro una menor (Tabla

3.6) (Anexo 7).

Los híbridos del los cruzamientos con P. cincinnata: P. alata x P. cincinnata (1 genotipo) y P. cincinnata x P. mooreana (3), mostraron una cantidad de ADN mayor a la esperada. Los descendientes de las cruzas con

P. edulis f. flavicarpa: P. edulis f. flavicarpa x P. alata (3) y P. amethystina x

P. edulis f. flavicarpa (1), mostraron un valor menor al esperado. Entre los híbridos P. amethystina x P. caerulea, uno presentó un valor menor y dos uno mayor. Los híbridos P. amethystina x P. alata y P. amethystina x P. elegans mostraron variabilidad, siendo sus valores iguales o mayores a los esperados.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 3.6: Cantidad de ADN en híbridos interespecíficos y valores esperados según el promedio del tamaño genómico parental. En gris oscuro: valores esperados según promedio de los genotipos parentales, en gris claro: valores observados de cantidad de ADN en híbridos. Los números indican diferentes genotipos, tanto de parentales como de híbridos.

Cuando se comparó la cantidad de ADN con la viabilidad de polen en los 19 híbridos con ambos datos, se observó que dos de los tres con

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. viabilidad de polen mayor a 40% no mostraban variación en su cantidad de

ADN respecto del promedio de sus parentales. Entre los híbridos con viabilidades de polen menores al 20%, 14 presentaron un tamaño de genoma mayor al esperado, uno menor y uno igual (Tabla 3.7).

Tabla 3.7: Comparación entre la variación en la cantidad de ADN en híbridos interespecíficos según lo esperado y la viabilidad del polen. Los signos muestran relaciones donde el valor de ADN es el esperado (=), el observado es mayor (+) o menor (-) que el esperado según el promedio entre sus parentales.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Discusión

Los estudios citogenéticos en híbridos interespecíficos permitirían vislumbrar relaciones evolutivas entre las especies que los originaron.

Los recuentos cromosómico realizados en este trabajo sobre 25 híbridos de Passiflora mostraron un número cromosómico 2n = 18.

Sorprendentemente, el número somático también resultó 2n = 18 para el híbrido P. amethystina (2x) x P. mooreana (4x), para quien se esperaba, según las cantidades de cromosomas en los parentales (2n = 18 y 2n = 36, respectivamente) (Figuras 1.3 y 1.4), un número 2n = 27. En el Capítulo 1, la meiosis del citotipo tetraploide de P. mooreana mostró la homología entre sus cuatro complementos cromosómicos, formando cuadrivalentes. La alta frecuencia de cuadrivalentes en P. mooreana 2n = 36, así como su caracteres morfológicos sugieren que se trata de un autopoliploide. Una hipótesis podría ser que, dada la homología entre los genomas de P. mooreana (2n =

36), podría haber ocurrido en el híbrido eliminación del genoma de P. amethystina. Sin embargo, el fenotipo del híbrido interespecífico (que se estudia en el Capítulo 4) mostró, tanto en sus hojas (Figura 4.2.n) como en sus flores (Figura 4.3.i), características intermedias respecto de P. amethystina y P. mooreana. Otra alternativa que podría explicar este fenómeno sería la eliminación selectiva de cromosomas de P. mooreana en el híbrido. Según Subrahmanyam & Kasha (1973), en los cruzamientos entre Hordeum vulgare y H. bulbosum, se produce una eliminación secuencial de los cromosomas de H. bulbosum durante estadíos tempranos

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. del desarrollo del embrión híbrido que deriva en la formación de una planta haploide. El balance de los genomas parentales en los tejidos del embrión sería un factor importante en la inestabilidad cromosómica (Kasha et al.,

1970). Para confirmar esta hipótesis, el procedimiento seguido por estos autores, consistió en la recolección, fijación de los óvulos fecundados a diferentes tiempos post-polinización (de 3 a 11 días en Hordeum), tinción y observación bajo microscopio (Subrahmanyam & Kasha, 1973). Este procedimiento será utilizado en el futuro para analizar si ocurre perdida diferencial de cromosomas en este cruzamiento.

La meiosis de híbridos interespecíficos permite inferir la interacción entre genomas con diferente grado de homeología, permitiendo analizar las rearreglos entre ellos. Todos los híbridos estudiados presentaron microsporocitos con 18 cromosomas.

El porcentaje medio de meiocitos con nueve bivalentes, situación que representaría la máxima afinidad entre los genomas parentales a nivel del apareamiento, varió entre un mínimo de 40% para el cruzamiento P. amethystina x P. alata y un máximo de 95% para P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa.

En las microsporogénesis de los híbridos, no se observó una correspondencia entre la regularidad de la meiosis, el índice meiótico y la viabilidad del polen. Es decir que híbridos con meiosis muy regular y elevado

índice meiótico, presentaron baja viabilidad de polen.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Una de las preguntas que surgen de los resultados obtenidos es el motivo por el cual híbridos del mismo cruzamiento presentaron porcentajes de viabilidad de polen tan dispares (por ejemplo, en P. amethystina x P. caerulea, de 4,4 a 80,6% de viabilidad en híbridos del cruzamiento de los mismos genotipos parentales) (Tabla 3.4). Muchas especies de Passiflora, sobre todo las del subgénero Passiflora, poseen mecanismos de autoincompatibilidad que garantizan la fecundación cruzada (Ulmer &

MacDougal, 2004), por lo cual los genotipos existentes poseen un alto grado de genes en heterocigosis. La variación en la fertilidad entre híbridos de los mismos parentales podría deberse a combinaciones alélicas menos favorables entre dos genotipos muy heterocigotas. Otro hecho que respalda esta hipótesis es que la cantidad de genes que han sido identificados que se expresan en el polen variaría entre 992 y 1587, lo que brinda altas probabilidades de conflictos en la interacción entre alelos de los diferentes genomas (da Costa-Nunes & Grossniklaus, 2003).

Tanto por la regularidad de la meiosis, con alta formación de bivalentes (95%), así como por haber expresado una viabilidad del polen de

79,4%, se podría inferir que los parentales del híbrido P. amethystina x P. edulis f. edulis, son muy afines. Sin embargo, el híbrido del cruzamiento recíproco, exhibió una viabilidad del polen de 2%. Esta disparidad en los cruzamientos recíprocos hace suponer que el conflicto se genera por una interacción núcleo-citoplasmática que, a pesar de la cercanía filogenética, afecta la fertilidad del híbrido en una sola dirección de cruzamiento (Lafon-

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Placette & Köler, 2016; Wolff et al., 2015; Reberning et al., 2015; Abreu et al., 2013; Singh, 2003).

Cuando P. amethystina se cruzó con la otra forma de la especie, P. edulis f. flavicarpa, la viabilidad del polen en el híbrido obtenido resultó de

19,60%. Este híbrido presentó cuadrivalentes en la meiosis indicando tranlocaciones recíprocas entre los progenitores. Sería interesante comparar estos resultados con la viabilidad del polen del híbrido P. edulis f. flavicarpa x P. edulis f. edulis pero, lamentablemente, aún no llegó a la etapa reproductiva (Tabla 2.4).

La relación entre P. mooreana y P. caerulea es una de las menos conflictivas, citogenéticamente. El híbrido entre ellas presentó una elevada frecuencia de células con 9 bivalentes (80%) y una baja frecuencia de univalentes y cuadrivalentes en relación al resto de los cruzamientos estudiados y un índice meiótico del 100%. Sin embargo, la viabilidad del polen de este híbrido es menor a un 5%. Este fenómeno en que la meiosis aparenta regularidad pero no se logran obtener gametas viables se conoce como hibridez estructural críptica (Stebbins, 1971). Esta hipótesis sugiere que los genomas parentales se encontrarían diferenciados por pequeños rearreglos cromosómicos intersticiales. El apareamiento entre cromosomas comenzaría por un extremo de los mismos que mantiene la homología y continuaría a lo largo del cromosoma, a pesar de la falta de homología intersticial. Una vez ocurrido esto, la segregación de las regiones no

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. homólogas a las gametas está destinada a ser anormal. La frecuencia de polen viable es el resultado de elevar ½ a la n, siendo n la cantidad de segmentos translocados (Stebbins, 1971). Según esta fórmula, entre P. mooreana y P. caerulea existirían, alrededor de 4-5 rearreglos cromosómicos que generarían una viabilidad de polen promedio de 4,1% (Tabla 3.5).

Los dos híbridos entre P. mooreana y P. elegans presentaron viabilidades de polen 1,6% y 6,4%. La meiosis de uno de estos híbridos presenta células con tres cuadrivalentes y un hexavalente, indicando diferencias en al menos tres translocaciones recíprocas entre las especies parentales.

Dado que que no fue posible obtener híbridos entre P. elegans y P. caerulea, no se puede hipotetizar sobre si los rearreglos entre P. mooreana y

P. caerulea poseen el mismo origen.

Entre P. amethystina y P. mooreana se obtuvieron híbridos en los cruzamientos recíprocos (Tabla 2.1). Si bien sólo se dispone del dato de viabilidad del polen, el mayor valor fue el obtenido con P. mooreana como parental femenino, de 16,80%. Según este valor, se puede inferir por la fórmula de Stebbins (1971), que ambas especies difererían en alrededor de

2-3 rearreglos cromosómicos.

El cruzamiento P. amethystina x P. elegans fue el más exitoso en cantidad de híbridos obtenidos (Tabla 2.1). Se analizó la meiosis de cuatro de ellos y se observaron entre 30 y 75% de meiocitos con nueve bivalentes y

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. un alto índice meiótico. A pesar de ello, la viabilidad del polen máxima fue de 7,6%. Todos los híbridos presentaron 8 bivalentes más dos univalentes como configuración más frecuente y rezagados en anafase I. La presencia de al menos un cuadrivalentes señaló, además, diferencias en, por lo menos, una translocación recíproca entre las especies progenitoras. La baja viabilidad de polen observada respondería a arreglos estructurales crípticos y/o conflictos génicos que reducen la fertilidad del híbrido.

En los híbridos P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa y P. alata x P. cincinnata no fue posible analizar la meiosis y los valores de viabilidad obtenidos 0% y 7,4%, respectivamente, sugieren que P. cincinnata difiere en, aproximadamente 4-5 rearreglos de P. alata y en más de 8 de P. edulis f. flavicarpa (Tabla 3.5), según la hipótesis de hibridez estructural críptica.

En los híbridos P. cincinnata x P. mooreana, P. alata x P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa x P. alata una de las configuraciones meióticas irregulares que se pudieron detectar fue la de puente y fragmento en anafase

I. Esta figura indicaría que entre los parentales involucrados existiría una inversión estructural paracéntrica (que no incluye el centrómero). En este tipo de configuración, los cromosomas homeólogos se aparean formando un bucle de inversión que da lugar a un puente dicéntrico (con dos centrómeros), que se romperá al azar en la anafase, y un fragmento acéntrico (sin centrómero) que se perderá (Singh, 2003). De los cuatro productos del crossig-over en la meiosis uno de ellos es normal, uno

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. presentaría una inversión y los otros dos una deleción (cuando el entrecruzamiento ocurre dentro del bucle de inversión). Sin embargo, si el entrecruzamiento ocurre fuera del bucle de inversión, los productos pueden ser funcionales (2 normales y dos invertidas) (Singh, 2003; Stebbins, 1971,

1945). A pesar de esto, las tres parejas de especies (P. cincinnata-P. mooreana, P. alata-P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa-P. alata), presentan una viabilidad máxima del polen de 9, 0,6 y 1%, respectivamente. Los dos híbridos de P. cincinnata x P. mooreana presentan una meiosis irregular, evidenciando que existen, además de diferencias en inversiones paracéntricas, al menos dos translocaciones recíprocas entre las especies progenitoras. Por otro lado, la existencia de husos tripolares indica que ambas especies progenitoras poseerían incompatibilidades genéticas a nivel del desarrollo de la meiosis.

En el híbrido P. alata x P. caerulea, además de la presencia de puente y fragmento en anafase I, se observaron canales citomícticos uniendo sus meiocitos con posibilidad de citomixis (intercambio de material genético entre células). Este fenómeno ha sido observado en muchas plantas, sobre todo en células madre de las micrósporas, y podría tener efecto en la composición de los productos meióticos. En caso de ocurrir citomixis, los meiocitos tienen la capacidad de deshacerse del excedente de ADN para estabilizar el genoma y formar polen haploide (Kravets et al., 2016). También se ha sugerido que podría ser un tipo de selección que llevaría a la muerte celular programada (Sidorchuk et al., 2016). Se han citado varias causas

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. posibles de citomixis: efectos químicos y mutagénicos, cambios en procesos bioquímicos, control fisiológico, daño mecánico, respuesta a patógenos, deficiencia nutricional, estrés ambiental, efectos térmicos y, la más probable en el caso del híbrido P. alata x P. caerulea, un desbalance genómico

(Sidorchuk et al., 2016; Kravets et al., 2016; Mandal et al, 2013).

El híbrido P. edulis f. flavicarpa x P. alata también mostró puente y fragmento en anafase I y cuadrivalentes en metafase I indicando que las especies progenitoras difieren en inversiones paracéntricas y translocaciones recíprocas.

Dos de los cruzamientos que presentaron la figura puente y fragmento en la meiosis, P. alata x P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa x P. alata, tienen a P. alata como parental. Esta especie podría diferir en una inversión paracéntrica respecto de P. caerulea y de P. edulis f. flavicarpa. El desarrollo de la meiosis del híbrido P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea, si bien mostró meiocitos con univalentes, trivalentes y cuadrivalentes, no presentó puentes y fragmentos, dejando abierta la incógnita de si difieren en la misma translocación respecto de P. alata.

La presencia de cuadrivalentes y puente y fragmento en el híbrido P. cincinnata x P. mooreana indican que las especies parentales difieren en al menos una translocación recíproca y una inversión paracéntrica. Por otra parte, la presencia de husos tripolares observada indicaría interacciones génicas entre las especies (De Storme & Mason, 2014).

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

En el híbrido P. amethystina x P. alata, con una viabilidad del polen de 3,6%, el 40% de las células mostraron 9 bivalentes, el resto de las células presentaron bivalentes, trivalentes, univalentes y hasta dos cuadrivalentes.

Estas configuraciones estarían indicando que las especies parentales difieren en al menos dos translocaciones recíprocas.

Entre P. caerulea y P. amethystina, según lo indica la viabilidad del polen máxima entre los híbridos de estas especies (90,4%), no existirían diferencias estructurales.

La hibridación in situ genómica (GISH) logró distinguir las especies parentales en los híbridos P. amethystina x P. alata, P. alata x P. cincinnata,

P. cincinnata x P. mooreana y P. alata x P. caerulea. Por otro lado, los resultados del GISH con sonda de P. amethystina no pudieron diferenciar claramente este genoma del correspondiente al otro parental en los híbridos con P. caerulea, P. elegans y P. edulis f. flavicarpa.

Las especies que presentan mayores diferencias moleculares evidenciadas con GISH también presentan baja viabilidad de polen. Esto estaría indicando que la divergencia entre las especies aquí estudiadas se evidencia tanto en las afinidades moleculares obtenidas mediante GISH como así también en la viabilidad de polen. Los híbridos con P. alata como progenitor, que presentaron una notoria diferenciación entre los genomas parentales con GISH, mostraron una baja viabilidad de polen que resulta de la esterilidad génica o cromosómica en los híbridos. Por otro lado, los

170

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. híbridos surgidos de los cruzamientos de P. amethystina con P. caerulea, P. elegans y P. edulis f. flavicarpa, que mostraron elevada afinidad molecular, presentaron una meiosis relativamente regular. Sin embargo, la viabilidad del polen en los híbridos de los tres cruzamientos fue elevada con P. caerulea como parental (hasta 90,4%), intermedia con P. edulis f. flavicarpa (19,6%) y baja con P. elegans (7,6% en el híbrido con mayor viabilidad del polen).

La cantidad de ADN estimada por citometría de flujo para 23 híbridos interespecíficos provenientes de siete cruzamientos mostró diferencias respecto de la cantidad teórica esperada calculada como el promedio del contenido de ADN de los genotipos parentales. En cuatro de los 23 híbridos estudiados se encontró una cantidad de ADN igual al promedio de sus padres, 15 presentan una cantidad estadísticamente mayor y cuatro una menor. Este resultado permitió rechazar la hipótesis que afirma que siempre la cantidad de ADN en un híbrido es igual a la cantidad promedio entre sus padres.

En los híbridos ocurren interacciones entre genomas y con el citoplasma (“shock genómico”) que redundan en cambios revolucionarios que incluyen, entre otros, eliminación/ganancia de secuencias repetidas codificantes y no codificantes (Ma & Gustafson, 2008; Ozkan et al., 2001).

La hibridación en plantas puede reactivar elementos tranponibles latentes, contribuyendo a la expansión y reestructuración del genoma (McClintock,

1984). La conjunción de dos genomas diferentes en un núcleo,

171

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. compartiendo un mismo citoplasma, puede revelar distintos tipos de incompatibilidad (cromosómica, génica y epigenética), acumulada en el proceso de divergencia y que reducen el fitness en el híbrido (Tayalé &

Parisod, 2013).

La frecuencia de cambio genómico en una progenie estaría asociada a la divergencia de los genomas parentales (Ma & Gustafson, 2008; Song et al.,1995). Shaked et al. (2001) encontraron, en la progenie del cruzamiento entre Aegilops y Triticum, ausencia de bandas en los marcadores AFLP

(dominantes) de híbridos cuando uno de los padres las presentaba, así como la aparición de bandas nuevas que no se encontraban en los parentales. Sin embargo, la desaparición de bandas no fue al azar sino que, en la mayoría de los cruzamientos, se elimina una banda específica de una especie.

Los híbridos de los cruzamientos con P. cincinnata (P. alata x P. cincinnata y P. cincinnata x P. mooreana), mostraron una cantidad de ADN mayor al promedio entre sus parentales. Los descendientes de las cruzas con P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. flavicarpa x P. alata y P. amethystina x

P. edulis f. flavicarpa, mostraron un valor menor al esperado. Uno de los híbridos P. amethystina x P. caerulea, cuyos parentales serían muy afines, presentó una cantidad de ADN menor y otros dos una mayor a la esperada.

Los híbridos P. amethystina x P. alata y P. amethystina x P. elegans mostraron valores iguales o mayores a los esperados. Es importante destacar que, de los tres descendientes estudiados de P. amethystina x P.

172

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. alata, los dos que presentaron más ADN del esperado se produjeron con un genotipo de P. alata mientras que, con otro genotipo de P. alata, el híbrido presentó una cantidad similar al promedio de sus parentales.

Cuando se comparó la viabilidad del polen con la variación en la cantidad de ADN respecto del promedio parental en 19 híbridos se observó que, de los tres que presentaban una fertilidad mayor a 40%, dos poseían el tamaño genómico esperado. Por otro lado, entre los 16 híbridos con viabilidad menor al 20%, sólo uno presentó la cantidad de ADN promedio entre sus padres. Este resultado respaldaría la hipótesis de Ma & Gustafson

(2008), Song et al. (1995) y Shaked et al. (2001), en la que afirman que la variación en el tamaño genómico de los híbridos respecto de sus padres tiene relación con el grado de divergencia genómica.

Si bien es necesario aumentar la cantidad de híbridos para hacer una afirmación certera, pareciera existir una relación entre la variación en la cantidad de ADN en híbridos respecto de sus padres, su fertilidad y la relación filogenética de las especies progenitoras. Por otro lado, es importante destacar que los diferentes genotipos parentales influirían sobre la intensidad del shock genómico.

Shaked, et al. (2001) encontraron, en híbridos de Aegilops y Triticum, que un genoma tiene la capacidad de eliminar el 14% de sus loci en una sola generación. Además, afirman que los genomas no poseen un mecanismo de una sola vía hacia el aumento de la cantidad de ADN sino que existirían

173

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. formas de eliminación que dependen de la combinación parental (Shaked et al., 2001). Los rearreglos genómicos a gran escala ocurrirían rápidamente y en etapas tempranas de la formación de la cigota. Otra de las manifestaciones encontradas en híbridos por Shaked et al., (2001) fue la desmetilación de los retrotransposones que supone la activación de estos elementos, respaldando el trabajo de McClintock (1984) y justificando un aumento en el tamaño del genoma.

174

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Conclusiones  Los híbridos interespecíficos estudiados presentaron un número

cromosómico 2n = 18 y, si bien todos presentaron meiocitos con 9

bivalentes en la profase I de la meiosis, la variación en la frecuencia

de tétradas de micrósporas normales y en la viabilidad del polen,

permitieron rechazar la Hipótesis 5.

 La afinidad entre los genomas parentales a nivel de apareamiento

cromosómico fue máxima en P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa y

mínima en P. amethystina x P. alata (95 y 40% de meiocitos con nueve

bivalentes, respectivamente).

 La regularidad de la meiosis y un elevado índice meiótico no

garantizan la fertilidad del híbrido.

 La esterilidad de los híbridos puede tener un origen cromosómico

produciendo multivalentes, puente y fragmento e hibridez estructural

críptica cuando las especies difieren en translocaciones y/o

inversiones paracéntricas; pero también se encontraron indicios de

esterilidad génica, evidenciada en la presencia de husos tripolares y

citomixis.

 Las interacciones núcleo-citoplasmáticas serían responsables de la

variabilidad observada en el comportamiento meiótico en híbridos de

cruzamientos recíprocos entre las mismas especies parentales.

 A partir de los resultados obtenidos utilizando la técnica de

hibridación in situ (GISH), se rechaza la hipótesis que afirma la

175

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

similitud en ADN repetido entre los genomas parentales (Hipótesis 6).

En los híbridos P. alata x P. caerulea, P. alata x P. cincinnata, P. alata

x P. amethystina y P. mooreana x P. cincinnata pudieron diferenciarse

los genomas parentales por hibridación genómica.

 Se rechaza la Hipótesis 7 ya que la cantidad de ADN en híbridos

interespecíficos no siempre se correspondió con la cantidad promedio

entre los parentales, pudiendo ser igual, menor o mayor que el

esperado. Esto podría deberse al shock genómico que se produce

cuando dos genomas interactúan en el mismo núcleo, produciendo

cambios revolucionarios tales como eliminación/ganancia de

secuencias repetidas codificantes y no codificante.

176

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Capítulo 4: Estudio de caracteres fenotípicos de importancia ornamental en especies e híbridos de Passiflora

Introducción

Las características visuales y adaptativas han sido el objeto principal de estudio en los planes de mejoramiento en plantas ornamentales trepadoras. Algunas de las más importantes son: el color y la cantidad de flores, el período de floración, el color y la forma de las hojas, la arquitectura de las plantas, la cobertura de paredes y estructuras verticales, la tolerancia a enfermedades y a factores climáticos (Singh et al., 2016; Giovannini et al.,

2012; Braglia et al., 2010; Lindgren, 2006; Callaway & Callaway, 2000;

Mortensen et al., 1994; Henny & Chen, 2003).

En el género Passiflora, el mejoramiento con fines ornamentales se ha focalizado en el aumento de la variabilidad de características visuales de la flor y, sólo en Argentina, en la tolerancia a bajas temperaturas (Giovaninni et al., 2012; Bugallo et al., 2011; Ulmer & MacDougal, 2004; Vanderplank,

1991).

El potencial del género Passiflora para su uso en cortinas y paredes verdes, requiere una estimación del potencial de cobertura para realizar una caracterización (Sadeghian, 2016; Timur & Karaca, 2013; Pérez et al., 2011 a, b; Eumorfopoulou & Kontoleon, 2009). La superficie foliar, así como la separación de las hojas en el tallo son características que influencian la

177

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. capacidad que cada genotipo posee para cubrir una estructura (Ip et al.,

2010). Si bien existe gran cantidad de bibliografía orientada a analizar los diferentes sistemas (paredes verticales, cortinas verdes trepadoras y colgantes) e incontables especies y variedades de Passiflora disponibles, hasta el momento sólo se ha utilizado a P. caerulea en escasos ensayos

(Timur & Karaca, 2013).

El color y tamaño de las flores tiene una importancia fundamental en el mejoramiento de plantas ornamentales (Santos et al., 2012; Abreu et al.,

2009; Callaway & Callaway, 2000). Los colores de las flores son el resultado de la interacción entre varios factores: la luz transmitida y reflejada por la superficie de las células, el tipo de pigmentos, su concentración y localización (van der Kooi et al., 2016).

Los pigmentos que dan color a las flores son el resultado de la incidencia de flavonoides (flavonas, flavonoles y antocianinas) y compuestos relacionados (chalconas, auronas), así como carotenoides. Usualmente, las flores contienen una mezcla de flavonoides o de flavonoides y carotenoides

(Tornielli et al., 2009; Horn, 2002). La herencia de los flavonoides ha sido descripta como la interacción epistática de seis genes, los cuales influencian el color de las flores y controlan cada uno de los pasos de la ruta metabólica de los flavonoides (hidroxilación, metoxilación o glicosilación). También, existen genes que poseen una influencia en el color por co-pigmentación y se relacionan con el ph de las vacuolas, la interacción de los flavonoides con

178

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. iones metálicos y caracteres morfológicos como pelos o papilas (Tornielli et al., 2009; Horn, 2002).

Debido a que la mayoría de las especies del género Passiflora crecen en climas cálidos, uno de los objetivos principales a mejorar para obtener plantas a cultivar en zonas templadas es la tolerancia a las bajas temperaturas (Abreu et al., 2009). Para la obtención de una variedad, es importante realizar evaluaciones en la zona geográfica donde ésta será comercializada a fin de garantizar su supervivencia y exponer sus características fenotípicas.

En este Capítulo se aborda el estudio de diferentes aspectos del fenotipo de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales que son de fundamental importancia, no sólo para la selección de variedades ornamentales, sino también para intentar comprender el tipo de herencia de cada uno de ellos.

Hipótesis

En este Capítulo se ponen a prueba las siguientes hipótesis nulas:

Hipótesis 8: Las hojas de especies e híbridos interespecíficos son similares en sus componentes colorimétricos, superficie foliar y largo de entrenudos.

Hipótesis 9: existe una relación lineal entre la superficie foliar y el largo de los entrenudos, así como también entre el diámetro total de la flor y el de la corona.

179

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Hipótesis 10: Las flores de especies e híbridos son similares en los componentes colorimétricos de sus pétalos, en los elementos sub-celulares que determinan el color en los mismos, en los diámetros de flor y de corona.

Hipótesis 11: las especies e híbridos de Passiflora poseen similar tolerancia a las bajas temperaturas.

Objetivos

- Evaluar y comparar características de las hojas de especies e híbridos

como ser: los componentes colorimétricos que definen el tono de

verde, la superficie de la lámina foliar y el largo de los entrenudos.

- Estudiar la relación entre variables: superficie foliar respecto del largo

de los entrenudos y entre el diámetro de la flor respecto del diámetro

de la corona, en especies e híbridos.

- Analizar y comparar características en las flores de especies e híbridos

interespecíficos como ser: los componentes colorimétricos que definen

el color de los pétalos y los elementos sub-celulares que los

determinan, así como también los diámetros de flor y de corona.

- Evaluar el efecto de las temperaturas invernales de la provincia de

Buenos Aires en el aspecto fenotípico de especies e híbridos de

Passiflora.

180

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Materiales y Métodos

Material vegetal

Se estudiaron especies nativas de Passiflora e híbridos interespecificos artificiales pertenecientes a la colección in vivo del Instituto de Floricultura del INTA (Tabla I.2).

Análisis del fenotipo del follaje

Colorimetría

Se analizaron los componentes colorimétricos en hojas con un colorímetro Minolta CR-321 que registra datos en la escala CIELab (L = luminosisdad, -a/+a = escala de verde a rojo, -b/+b escala de azul a amarillo). El color de las hojas se midió en tres sectores diferentes de cada hoja, en ocho hojas por cada genotipo.

Morfometría del follaje

Largo de entrenudos

Para la evaluación de este carácter, se midieron con calibre cinco entrenudos en cada genotipo de especies e híbridos interespecíficos.

Superficie foliar

Se midió la superficie de ocho hojas de cada genotipo, en especies e híbridos, con Green Leaf Area Meter modelo GA-5 (Tokio Photoelectrics). Los valores fueron promediados en caso de haber más de un híbrido por cruzamiento o más de un genotipo por especie.

181

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Estimación indirecta de la cobertura

Para estimar la cobertura de especies y cruzamientos para su uso en cortinas verdes sobre un soporte, se confeccionó una ecuación que relaciona la superficie foliar con el largo de entrenudos. Éste coeficiente fue calculado como:

Cobertura estimada = superficie foliar media

largo medio de entrenudos

Se consideraron más aptas o con mayor cobertura las especies o cruzamientos en las que el coeficiente fuera de 1 o mayor.

Análisis del fenotipo de las flores

2.1- Colorimetría

Se analizaron los componentes colorimétricos en pétalos de flores con un colorímetro Minolta CR-321. El color se evaluó en tres pétalos de cada flor y en tres flores de cada genotipo.

2.2- Tamaño de flores y corona

Se utilizó un calibre para tomar las medidas del diámetro de las flores y de la corona.

Estudios anatómicos del color en las células de pétalos de flores

Para estudiar el sitio y tipo de acumulación celular del pigmento, se realizó una disección de la epidermis adaxial de los pétalos, se montó en un portaobjeto y se observó bajo microscopio óptico de campo claro.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tolerancia a las temperaturas invernales de Buenos Aires

Para evaluar la tolerancia a las temperaturas invernales de Buenos

Aires, se expusieron a la intemperie plantas en maceta de 10 litros en sustrato compuesto por tierra, resaca de río, corteza de pino y acículas de pino 1:1:1:1, en el predio del Instituto de Floricultura del INTA en Castelar,

Provincia de Buenos Aires. Se estudiaron cinco especies parentales, P. alata,

P. amethystina, P. caerulea, P. cincinnata y los dos citotipos de P. mooreana; así como los híbridos de cuatro cruzamientos, P. alata x P. caerulea, P. amethystina x P. caerulea, P. cincinnata x P. alata, P. cincinnata x P. mooreana 2x y el híbrido doble (P. amethystina x P. caerulea) x (P. amethystina x P. caerulea).

Se registró el estado de cada planta mes a mes, desde abril hasta septiembre, evaluando cualitativamente cuatro estados del impacto de las bajas temperaturas sobre el fenotipo: 3- no afectada; 2- poco afectada; 1- muy afectada; 0-muerta. Para cada genotipo, se computó una situación inicial de 100% en el que todas las plantas ensayadas presentaban estado

3. Se confeccionó una ecuación para reflejar el estado del lote al final de cada mes como un porcentaje del estado inicial.

Estado mensual de la especie o cruzamiento =

= [(∑cantidad de plantas * estado mensual de la planta)* 100

(cantidad inicial de plantas * 3)]

183

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Análisis estadísticos

Los datos se analizaron estadísticamente por medio de ANOVA con contraste por test BSS. Para establecer posibles relaciones entre variables se aplicaron regresiones lineales simples. Para todas las pruebas se utilizó el programa estadístico InfoStat (versión 2009, Universidad Nacional de

Córdoba).

184

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Resultados

Se estudió el fenotipo del follaje de híbridos interespecíficos y sus parentales en los componentes colorimétricos, la superficie de la hoja y el largo de los entrenudos.

Estudios colorimétricos en hojas

El componente L del análisis colorimétrico mide la luminosidad del color, mostrando valores más altos en los más claros. El estudio en hojas de especies e híbridos de Passiflora mostró que cuatro especies poseen los valores que, estadísticamente, serían los menos luminosos para el color del follaje (P. caerulea, P. edulis f. flavicarpa, P. elegans y P. cincinnata) (Tabla

4.1, Figura 4.2.x) (Anexo 8). Entre las especies, los valores mayores de L se encuentran en los dos citotipos de P. mooreana (Figura 4.2.x). Entre los híbridos interespecíficos, el cruzamiento que mostró un matiz mayor en el color de las hojas fue P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis, sin diferencias significativas con especies como P. alata, P. amethystina y, su parental masculino, P. edulis f. edulis (Figuras 4.2.m y x). Por otra parte, los de follaje más luminoso resultaron P. amethystina x P. mooreana 4x, el híbrido entre los dos citotipos de P. mooreana y P. edulis f. edulis x P. amethystina (Figuras

4.2.n, 4.2.p y 4.2.k).

El componente colorimétrico a mide el color en una escala del verde al rojo siendo los valores negativos los del extremo verde y los positivos,

185

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. rojos. La planta con follaje de color más verde fue el híbrido P. amethystina x P. mooreana 2x, diferenciándose estadísticamente del resto (Figura 4.2.v).

En el otro extremo, se ubicaron las especies P. caerulea y P. cincinnata y, entre los híbridos, P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis (Tabla 4.2, Figuras

4.2.m y 4.2.x).

La escala b mide el color en una escala del azul al amarillo, donde los valores negativos corresponden a mayores contenidos de azul y los más positivos a amarillo. Las plantas con hojas más azuladas fueron P. caerulea y P. cincinnata, destacándose del resto estadísticamente y, entre los híbridos, P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis (Figuras 4.2.m y 4.2.x) (Anexo

8). En el otro extremo de la escala, el híbrido P. amethystina x P. mooreana

4x resultó el de hojas con más contenido de amarillo (Tabla 4.3, Figura

4.2.n).

186

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 4.1: Análisis colorimétrico de hojas de especies e híbridos interespecíficos de Passiflora: Luminosidad.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 4.2: Análisis colorimétrico de hojas de especies e híbridos interespecíficos de Passiflora: escala a, rojo-verde

188

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 4.3: Análisis colorimétrico de hojas de especies e híbridos interespecíficos de Passiflora: escala b, azul-amarillo.

189

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

1.2- Superficie foliar y largo de entrenudos

Se midió la superficie de la lámina foliar en catorce genotipos de nueve taxones del género Passiflora subgénero Passiflora y de 32 genotipos híbridos correspondientes a 23 cruzamientos obtenidos entre ellos.

La mayor superficie foliar media entre las especies fue la de P. edulis f. flavicarpa (166,33 cm2), seguida por P. alata (112,14 cm2) y, entre los híbridos, el producido por el cruzamiento de éstos taxones (115, 68cm2)

(Tabla 4.2) (Figuras 4.2.a y 4.2.x).

Entre las especies y cruzamientos con menor superficie de las hojas se encuentra el citotipo diploide de P. mooreana (11,9 cm2) y los híbridos de

éste con P. caerulea (10,13 cm2) y con P. amethystina (13,21 cm2) (Figura

4.2.v, 4.2.w y 4.2.x).

De los 23 cruzamientos analizados, 17 mostraron valores de superficie foliar intermedios a los de sus parentales. Otros cinco cruzamientos presentaron una superficie menor a la del progenitor de menor superficie (P. amethystina x P. caerulea, P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa, P. mooreana

4x x P. elegans, P. amethystina x P. elegans y P. amethystina x P. edulis f. edulis) (Figuras 4.2.l, 4.2.o, 4.2.t, 4.2.u) y uno mayor al padre de mayor superficie (P. mooreana 4x x P. mooreana 2x) (Figura 4.2.p).

Para el carácter largo de entrenudos, los valores mayores se hallaron en la especie P. edulis f. flavicarpa (122,97mm) y en el híbrido P. edulis f. flavicarpa x P. edulis f. edulis (134,92mm). Los valores menores, se

190

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. encontraron en la especie P. elegans (42,29mm) y en los híbridos P. mooreana 4x x P. elegans (41,53mm), P. amethystina x P. mooreana 2x

(44,44mm) y P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa (44,82mm) (Tabla 4.2)

(Anexo 8).

El análisis de regresión lineal entre la superficie foliar y el largo de entrenudos presentó un coeficiente de determinación R2 = 0,507, por lo que se considera significativo (Figura 4.1).

La morfología y tamaño de las hojas de los híbridos, en comparación con las de sus parentales, se muestra en la Figura 4.2.

Figura 4.1: Superficie media de la lámina foliar en función del largo de entrenudos promedio en genotipos de especies e híbridos de Passiflora. R2=0,51

191

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 4.4: Superficie media de la lámina foliar y largo de entrenudos en especies e híbridos interespecíficos de Passiflora. n: cantidad de genotipos analizados.

192

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2: Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. Barra 5cm. a: P. edulis f. flavicarpa x P. alata; b: P. edulis f. flavicarpa x P. edulis f. edulis; c: P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa.

193

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. d: P. amethystina x P. alata; e: P. edulis f. flavicarpa x P. amethystina; f: P. alata x P. caerulea. Barra 5cm.

194

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. g: P. alata x P. cincinnata; h: P. edulis f. flavicarpa x P. mooreana 2x; i: P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea. Barra 5cm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. j: P. edulis f. edulis x P. mooreana 4x; k: P. edulis f. edulis x P. amethytsina; l: P. amethystina x P. caerulea.

196

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. m: P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis; n: P. amethystina x P. mooreana 4x; o: P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa. Barra 5cm.

197

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. p: P. mooreana 4x x P. mooreana 2x; q: P. cincinnata x P. mooreana; r: P. mooreana 2x x P. amethystina. Barra 5cm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. s: P. mooreana 2x x P. elegans; t: P. amethystina x P. elegans; u: P. amethystina x P. edulis f. edulis. Barra 5cm.

199

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.2 (cont.): Hojas de híbridos de Passiflora y sus parentales. Izquierda: parental femenino; centro: híbrido; derecha: parental masculino. v: P. amethystina x P. mooreana 2x; w: P. mooreana 2x x P. caerulea; x: especies parentales de Passiflora: P. alata, P. amethystina, P. caerulea, P. cincinnata, P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpa, P. elegans, P. mooreana 2x, P. mooreana 4x. Barra 5cm.

200

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Estimación indirecta de la cobertura foliar

Se realizó una estimación indirecta de la cobertura de los taxones nativos y los híbridos derivados de ellos, mediante la fórmula: superficie de hojas/largo de entrenudos. Los resultados muestran que entre las especies con mayores coeficientes se encuentran P. alata, P. edulis f. flavicarpa y P. cincinnata y, entre los híbridos, P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa y P. amethystina x P. alata (Tabla 3).

201

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 4.5: Estimación indirecta de la cobertura de estructuras con plantas de Passiflora.

2- Estudios del fenotipo de las flores

Se registraron fotográficamente los fenotipos de las flores de 19 híbridos y sus parentales (Figura 4.3). Los cruzamientos entre especies con distinto color de flor dieron como resultado híbridos con flores de colores diferentes a las de ambos padres. Los híbridos del cruzamiento entre los mismos parentales muestran fenotipos florales diferentes (Figura 3).

202

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3: Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. a: P. amethystina y P. caerulea (fila superior); híbridos interespecíficos P. amethystina x P. caerulea (fila central); híbridos dobles (P. amethystina x P. caerulea)x(P. amethystina x P. caerulea) (fila inferior).

203

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3 (cont.): Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. b: P. alata x P. caerulea; c: P. alata x P. cincinnata.

204

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3 (cont.): Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. d: P. amethystina x P. alata; e: P. amethystina x P. edulis f. edulis.

205

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3 (cont.): Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. f: P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa; g: P. amethystina x P. elegans.

206

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3 (cont.): Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. h: P. amethystina x P. mooreana 2x; i: P. amethystina x P. mooreana 4x.

207

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3 (cont.): Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. j: P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa; k: P. cincinnata x P. mooreana 2x.

208

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3: Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. l: P. edulis f. edulis x P. amethystina; m: P. edulis f. edulis x P. mooreana 4x.

209

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3: Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. n: P. edulis f. flavicarpa x P. alata; o: P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea.

210

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3: Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. p: P. edulis f. flavicarpa x P. mooreana 2x; q: P. mooreana 2x x P. caerulea.

211

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.3: Fenotipos de las flores de híbridos interespecíficos de Passiflora y sus parentales. r: P. mooreana 2x x P. elegans; s: P. mooreana 4x x P. edulis f. edulis.

212

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Estudios colorimétricos en flores

Se analizaron los componentes colorimétricos en pétalos de flores de

32 híbridos interespecíficos, correspondientes a 12 cruzamientos y de las especies parentales (Figura 4.3).

 P. amethystina e híbridos

El componente colorimétrico L mostró su mayor valor en los pétalos de P. elegans (90,79), seguido por las otras especies de flores blancas, P. mooreana, P. edulis f. edulis, P. edulis f. flavicarpa y P. caerulea. En este grupo, la menor luminosidad del color se expresó en las flores P. amethystina (40,23) y P. amethystina x P. elegans (39,7), diferenciándolos estadísticamente del resto (Tabla 4.4, Figura 4.3.g) (Anexo 8).

El componente colorimétrico a fue mayor en los pétalos de flores de P. amethystina (33,21) y P. amethystina x P. elegans (34,1), mientras que resultó menor en los de P. caerulea (-10,69), P. edulis f. edulis (-9,78) y P. mooreana (-8,98).

En la escala azul-amarillo, representada por el componente b, el mayor valor fue el de las flores de P. caerulea (24,69) y, en el mismo grupo estadístico, P. edulis f. edulis (22,05) y P. mooreana (23,14). En el otro extremo, P. amethystina con un valor de -33,33 (Tabla 4.4).

 P. alata e híbridos

En este grupo, el valor mayor de luminosidad se encontró en los pétalos de flores de P. edulis f. flavicarpa x P. alata (87,85) (Figura 4.3.n),

213

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. seguido por los de las especies P. mooreana, P. edulis f. flavicarpa y P. mooreana. El menor fue en P. amethystina (40,23), en el mismo grupo que

P. alata y que el híbrido entre ambas (Tabla 4.5, Figura 4.3.d) (Anexo 8).

En el primer extremo de la escala rojo-verde (a), el mayor valor lo obtuvieron los pétalos de las flores del híbrido P. amethystina x P. alata

(42,53) (Figura 3.d) y el menor los de P. caerulea (-10,69).

Los extremos para el componente colorimétrico b fueron de -33,33 para P. amethystina y de 24,69 y 23,14 para P. caerulea y P. mooreana, respectivamente (Tabla 4.5).

 P. cincinnata e híbridos

Para los pétalos de flores en este grupo, los valores de L fueron desde

84,29 a 41,18 para P. mooreana y P. alata, respectivamente (Tabla 4.6)

(Anexo 8).

El mayor valor del componente a fue de 38,16 en P. alata y, en el otro extremo de la escala, de -8,98 para P. mooreana.

El componente b fue máximo en P. mooreana (23,14), seguido por P. alata (20,59) y resultó mínimo en P. cincinnata (-3,43) y P. alata x P. cincinnata (-6,66) (Tabla 4.6, Figura 4.3.c).

214

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

y sus híbridos interespecíficos. susyhíbridos

Passiflora amethystina Passiflora

: Análisis colorimétrico en flores de de flores en Análisiscolorimétrico :

Tabla 4 Tabla

215

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

y sus híbridos interespecíficos. susyhíbridos

sus híbridos interespecíficos. híbridos sus

Passiflora cincinnata Passiflora

Passiflora alata Passiflora

: Análisis colorimétrico en flores de de flores en colorimétrico Análisis :

: Análisis colorimétrico en flores de de flores en Análisiscolorimétrico :

4.8

4.7

Tabla Tabla Tabla

216

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tamaño de flores y corona

Se analizaron datos del diámetro de flores y coronas en 19

genotipos de 8 taxones nativos de Passiflora y en 18 híbridos

correspondientes a 10 cruzamientos.

El diámetro de las flores fue estadísticamente mayor en la especie

P. alata (98,5 mm) y en el híbrido de ésta con P. caerulea (102,3 mm)

(Anexo 8). En el otro extremo, las flores más pequeñas fueron las de las

especies P. elegans (48,3 mm) y P. mooreana (49,8 mm). Estas últimas

dos también estuvieron entre los taxones con diámetros de corona

menores, 40,6 mm y 40,1 mm, respectivamente, en el mismo grupo

estadístico que P. caerulea (44,2 mm) y P. alata (42,3 mm). El diámetro

de corona mayor estuvo representado por P. cincinnata con 89,9 mm

(Tabla 4.7).

El análisis de regresión lineal entre el diámetro de flor y el diámetro

de corona mostró que no existe una relación estadísticamente

significativa entre ambas variables, presentando un coeficiente de

determinación R2=0,07 (Figura 4.4).

217

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 4.9: Diámetros medios de flores y coronas en especie e híbridos interespecíficos de Passiflora. n: cantidad de genotipos analizados.

Figura 4.4: Regresión lineal simple entre el diámetro de corona y el diámetro de flor en especies e híbridos de Passiflora. R2=0,07

218

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Estudios anatómicos de pétalos de flores: componentes que

aportan al color de flor

Para estudiar la ubicación anatómica de los componentes que contribuyen al color de flor en las células de los pétalos de Passiflora, se realizaron peelings extrayendo la epidermis y montándola en agua. Se estudiaron cinco especies (P. alata, P. amethystina, P. caerulea, P. cincinnata y la nativa de Centroamérica, P. coccinea) y cuatro híbridos entre ellas (P. alata x P. cincinnata, P. alata x P. caerulea, P. amethystina x P. alata y P. coccinea x P. caerulea) (Figura 4.5).

La observación de estos preparados bajo microscopio de campo claro mostró tres tipos de estructuras que podrían influenciar los colores de las flores: vacuolas, densidades intra-vacuolares y cromoplastos.

Las vacuolas de las células epidérmicas de los pétalos de flores de especies con pétalos coloreados (P. alata, P. cincinnata, P. amethystina y P. coccinea), reservan sustancias de color (Figura 4.5). Se observó que las células que poseen pigmento de color en su vacuola, en algunos casos están intercaladas con otras que poseen menor intensidad de pigmentación o que reservan sustancias no coloreadas. Las vacuolas de las células epidérmicas de los pétalos blancos de P. caerulea reservan sustancias sin pigmentación.

También se observaron vacuolas secundarias con menor intensidad de pigmentación que la vacuola principal que abarca la mayor parte de la célula. Entre las dos especies estudiadas que poseen flores rojas, P. alata,

219

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. que a simple vista posee un tono más oscuro, presenta cromoplastos negro- violáceos mientras que en P. coccinea no se observaron este tipo de plátidos.

Todas las especies estudiadas mostraron densidades de forma fibrilar con zonas más espesas, aparentemente dentro de las vacuolas.

Se encontraron cromoplastos en el citoplasma de las células epidérmicas de los pétalos de flores de P. alata y P. cincinnata, siendo más pequeños los de ésta última.

Los híbridos interespecíficos muestran un contenido vacuolar de color diferente al de sus parentales. La intensidad en la coloración de las vacuolas es variable, encontrándose intercaladas células con vacuolas muy pigmentadas, menos pigmentadas y otras que reservan sustancias incoloras

(Figuras 4.5.a, 4.5.b, 4.5.c y 4.5.d).

Así como en las especies, todos los híbridos poseen densidades de forma fibrilar no asociadas al núcleo que, aparentemente, se encontrarían dentro de las vacuolas.

El híbrido P. alata x P. cincinnata presenta cromoplastos en su citoplasma

(Figura 4.5.a), al igual que sus dos padres mientras que no se observaron en ninguno de los otros híbridos.

220

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.5: Ubicación anatómica de componentes que aportan color en células de la epidermis adaxial de pétalos de flores de Passiflora. a: P. alata (arriba izquierda); P. cincinnata (arriba derecha); híbrido P. alata x P. cincinnata (abajo). Flechas negras: cromoplastos; Flechas blancas: densidades vacuolares; flechas vacías: vacuolas secundarias; n: núcleos; e: estomas.

221

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

b Figura 4.5 (cont.): Ubicación anatómica de componentes que aportan color en células de la epidermis adaxial de pétalos de flores de Passiflora. b: P. amethystina (arriba izquierda); P. alata (arriba derecha); híbrido P. amethstina x P. alata (abajo). Flechas negras: cromoplastos; Flechas blancas: densidades vacuolares; flechas vacías: vacuolas secundarias; n: núcleos; e: estomas.

222

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

c Figura 4.5 (cont.): Ubicación anatómica de componentes que aportan color en células de la epidermis adaxial de pétalos de flores de Passiflora. c: P. coccinea (arriba izquierda); P. caerulea (arriba derecha); híbrido P. coccinea x P. caerulea (abajo). Flechas negras: cromoplastos; Flechas blancas: densidades vacuolares; flechas vacías: vacuolas secundarias; n: núcleos; e: estomas.

223

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

d Figura 4.5 (cont.): Ubicación anatómica de componentes que aportan color en células de la epidermis adaxial de pétalos de flores de Passiflora. d: P. alata (arriba izquierda); P. caerulea (arriba derecha); híbrido P. alata x P. caerulea (abajo). Flechas negras: cromoplastos; Flechas blancas: densidades vacuolares; flechas vacías: vacuolas secundarias; n: núcleos; e: estomas.

224

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tolerancia a las temperaturas invernales de Buenos Aires

Para la evaluación de la tolerancia a las temperaturas invernales de

Buenos Aires, se estudió el estado de cinco especies parentales, cuatro híbridos interespecíficos y un híbrido doble, expuestos a la intemperie desde abril a septiembre (Figura 4.6). Para ello, se registró como 100% una situación inicial donde todas las plantas se encontraban en perfecto estado en el mes de abril hasta un escenario final, una vez transcurrido el invierno, en septiembre. El registro de estado de las plantas en el tiempo se presenta en el Anexo 9.

Esta prueba de exposición mostró que la especie P. caerulea y el citotipo tetraploide de P. mooreana no resultaron afectados por las bajas temperaturas. Por otro lado, todos los ejemplares examinados de P. amethystina, P. cincinnata y P. alata habían muerto al final del invierno

(Figura 4.7).

Los dos genotipos analizados de P. amethystina x P. caerulea mostraron una tolerancia al frío intermedia a la de sus padres, expresándose como un deterioro de las plantas en un 50%, respecto del estado inicial

(Anexo 9). Los siete genotipos probados del híbrido doble (P. amethystina x

P. caerulea) x (P. amethystina x P. caerulea) manifestaron mayor tolerancia que el híbrido interespecífico simple (Figura 4.7.a).

El híbrido P. cincinnata x P. mooreana 2x resultó muy sensible a las bajas temperaturas, aunque resistió más tiempo que su parental más

225

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. susceptible, P. cincinnata. A pesar de haber muerto la parte aérea de todos los ejemplares para el mes de julio, dos de las ocho plantas ensayadas experimentaron un rebrote desde sus raíces (Figura 7.b). El citotipo tetraploide de P. mooreana no manifestó los síntomas de deterioro encontrados en el diploide.

De los cinco genotipos probados de P. alata x P. caerulea y de los tres de P. cincinnata x P. alata, no se encontraron ejemplares sobrevivientes para el mes de agosto.

Figura 4.6: Ensayo de evaluación de la tolerancia de especies e híbridos interespecíficos de Passiflora a las temperaturas invernales de Buenos Aires. a: estado inicial de las plantas en abril; b: estado de las plantas al final del experimento, en el mes de septiembre.

226

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 4.7: Tolerancia de especies e híbridos de Passiflora a las temperaturas invernales de Buenos Aires. Los valores expresan el estado cualitativo del lote de cada especie o cruzamiento, respecto de una situación inicial registrada como 100%. a: P. amethystina x P. caerulea; b: P. cincinnata x P. mooreana; c: P. alata x P. caerulea; d: P. cincinnata x P. alata.

227

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Discusión

El estudio de los caracteres fenotípicos analizados en este Capítulo mostraron que la hibridación interespecífica es una fuente muy importante de variabilidad. Los híbridos examinados demostraron que la combinación entre las diferentes especies genera fenotipos distintos a ambos padres en morfología, color y tamaño de hojas (Figura 2), largo de entrenudos, tamaño y color de flores y coronas (Figura 3), y tolerancia a bajas temperaturas

(Figura 7).

En cuanto al color del follaje, los estudios colorimétricos mostraron que las especies presentaban hojas con menor luminosisdad y tonalidad azulada (en la escala azul-amarillo) respecto de los híbridos interespecíficos, con excepción de P. mooreana que posee hojas de color verde-grisáceo. Este resultado podría estar reflejando un conflicto en la fotosíntesis en híbridos interespecíficos. Esta situación de las hojas de híbridos respecto de las especies es similar a la descripta por Manley & Ledig (1979) para híbridos de Picea. Estos autores afirmaron que el fenómeno a nivel del proceso fotosintético reflejaría un mecanismo de aislamiento reproductivo, reduciendo la aptitud de los híbridos.

La superficie de las hojas en los híbridos fue intermedia a la de los parentales en 17 de los 23 cruzamientos estudiados. Al ser la superficie foliar una característica cuantitativa, era esperable hallar un valor intermedio de superficie foliar en los híbridos respecto de sus parentales.

228

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Sin embargo, en cinco cruzamientos se registró una herencia transgresiva negativa (superficie foliar menor a la del progenitor de menor superficie) (P. amethystina x P. caerulea, P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa, P. mooreana

4x x P. elegans, P. amethystina x P. elegans y P. amethystina x P. edulis f. edulis) y positiva en uno (superficie foliar mayor al padre de mayor superficie) (P. mooreana 4x x P. mooreana 2x).

La combinación de dos sistemas génicos, en algunas circunstancias, genera segregación transgresiva (Grant, 1989). En este fenómeno, el fenotipo en los híbridos excede los límites de la expresión cuantitativa del carácter respecto de cualquiera de los tipos progenitores.

Existen cuatro modelos aplicados a la explicación de la herencia no aditiva. Todos los modelos involucran interacciones génicas, en el mismo locus o en distintos loci: dominancia, sobre-dominancia y sub-dominancia son efectos fenotípicos no aditivos intra-locus, mientras que la epistasis es inter-locus (Friedman, 2015).

Los híbridos que mostraron herencia transgresiva negativa en el carácter superficie foliar, podrían estar expresando conflictos entre los genomas de sus parentales en sus células. El único cruzamiento en el que la herencia transgresiva fue positiva fue uno constituido por un mismo genoma (citotipos diferentes de P. mooreana).

Además del “shock genómico” que produce la hibridación interespecífica donde ocurren re-arreglos cromosómicos (McClintock, 1984),

229

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Wu et al. (2015), describen una alteración de la expresión génica producida por el “shock transcripcional” generando una respuesta no aditiva, especialmente en rutas metabólicas relacionadas a la fotosíntesis. Esta afirmación, conecta los resultados encontrados para superficie foliar reducida con los valores colorimétricos registrados, fortaleciendo la hipótesis de una fotosíntesis defectuosa en algunos híbridos.

El híbrido entre los dos citotipos de P. mooreana estaría reflejando, en la herencia transgresiva positiva del carácter superficie foliar, el fenómeno de vigor híbrido (heterosis) encontrado para esta característica en híbridos intra-específicos como Arabidopsis, Zea y Oriza (Greaves et al., 2015).

Según los resultados de cobertura foliar estimada, las especies con mayor potencial para uso en paredes y cortinas verdes serían P. alata, P. edulis f. flavicarpa y P. cincinnata y, entre los híbridos, P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa y P. amethystina x P. alata.

Si bien los coeficientes calculados relacionan variables promedio reales (superficie foliar y largo de entrenudos), la arquitectura y el comportamiento de las plantas no fueron tenidos en cuenta para la selección. Sería interesante contrastar los coeficientes obtenidos por la fórmula confeccionada en esta tesis, con valores reales de cobertura medidos en un ensayo con estas plantas.

Con respecto al potencial de especies e híbridos de Passiflora como material para paredes y cortinas verdes, una de las cuestiones que se

230

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. plantea es el estrés que produce el calor por la exposición directa al sol que podría afectar negativamente la fotosíntesis (Shimada et al., 2016). Teniendo en consideración que los híbridos presentaron indicios de una menor capacidad fotosintética (por los componentes colorimétricos L y b de sus hojas), sería necesario realizar ensayos de la tolerancia a la exposición solar de los diferentes híbridos.

El diámetro de las flores en siete cruzamientos interespecíficos fue intermedio a los de sus parentales, mientras que en los otros tres estudiados

(P. cincinnata x P. mooreana 2x, P. amethystina x P. caerulea y P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa) fue mayor que el parental de mayor diámetro.

El diámetro de la corona no se correlacionó con el diámetro total de la flor.

Las flores de los híbridos interespecíficos resultaron de una coloración diferente a ambos padres. Esto se confirma en los distintos componentes colorimétricos obtenidos para los pétalos de las flores. Sin embargo, en algunos casos, como en los híbridos P. amethystina x P. elegans y P. cincinnata x P. edulis f. flavicarpa, no se encontraron diferencias estadísticas con el parental P. amethystina en los componentes L y a para el primer híbrido, y con P. edulis f. flavicarpa en los tres componentes colorimétricos.

La situación descripta podría estar indicando algún tipo de interacción génica entre las parejas involucradas P. amethystina-P. elegans y P. cincinnata-P. edulis f. flavicarpa. En sistemas génicos seriales, los distintos

231

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. genes determinan pasos diferentes en una secuencia del desarrollo, siendo componentes importantes del color de la flor (Grant, 1989). En los híbridos de Passiflora entre especies con diferente color de flor, se encontró que éste carácter fue diferente a ambos parentales. Este resultado se confirmó en el color de las vacuolas en los preparados de epidermis de pétalos. El contenido de las vacuolas en los híbridos podría resultar de la dilución del compuesto heredado del padre con vacuolas coloreadas o ser un compuesto diferente al de ambos padres.

El color de flores se debería a la combinación de las vacuolas de las células que reservan pigmento, a las densidades que se observan dentro de ellas, a la cantidad de células no pigmentadas que están intercaladas con las coloreadas y, en algunos casos, a la presencia de cromoplastos.

Varios géneros que presentan pétalos blancos con sectores pigmentados han sido estudiados, entre ellas Saintpaulia, Ipomoea, Petunia,

Eustoma y Antirrhinum. Estos casos fueron explicados por la inserción de transposones que causaban la disrupción de genes pertenecientes a la ruta metabólica de las antocianinas o bien por factores de transcripción (Sato et al., 2011; Schwinn et al., 2006; Zhang et al., 2006; Clegg & Durbin, 2000;

Quattrocchio et al., 1999). Teniendo en cuenta que uno de los factores que causa la activación de elementos genómicos móviles es la hibridación interespecífica (McClintock, 1984), se podría pensar que la coloración en los híbridos también pudo haber sido afectada por este fenómeno.

232

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Diferentes formas en la acumulación de antocianinas han sido descriptas: solución coloreada uniforme, cuerpos en forma de vesículas y cuerpos compactos de formas regulares o irregulares. A estas diferentes formas se las agrupa con el nombre de Inclusiones Vacuolares Antociánicas

(AVIs) (Zhang et al., 2006).

Se observaron vacuolas secundarias en las células epidérmicas de los pétalos de las flores, algunas conteniendo densidades vacuolares. Lysenko et al. (2015), afirman que en células epidérmicas de pétalos de Petunia hay fragmentación vacuolar y crecimiento de vacuolas secundarias. La fragmentación vacuolar acompañaría a un tipo de autofagia en la que diferentes organelas (peroxisomas y cromoplastos) son incorporados a la vacuola. Este proceso ocurriría en tejidos del pétalo de la flor que no están bajo estrés y que no se encuentran en proceso de muerte celular programada. Para resolver si este tipo de mecanismo ocurre en el género

Passiflora sería necesario realizar estudios que ayuden a distinguir, tanto el origen de las vacuolas secundarias y su contenido, como el de las densidades observadas, aparentemente dentro de las vacuolas.

Entre las dos especies estudiadas con flores rojas, una nativa de

Argentina (P. alata) y otra centroamericana (P. coccinea), se encontró que la tonalidad más oscura de la primera se debería a la presencia de cromoplastos. Las dos especies nativas en las que se hallaron éste tipo de

233

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. plástidos fueron P. alata y P. cincinnata, aunque en la segunda fueron de menor tamaño.

A partir de las pruebas realizadas en especies e híbridos, fue posible la selección por tolerancia a bajas temperaturas. Las especies nativas P. caerulea y P. mooreana, los híbridos del cruzamiento P. amethystina x P. caerulea y los híbridos dobles del mismo, toleraron el invierno bonaerense.

El citotipo tetraploide de P. mooreana llegó a la primavera en perfecto estado mientras que el diploide mostró una reducción de un 40% en el aspecto cualitativo de las plantas. Esto sugeriría un efecto del dosaje génico que la poliploidía tendría en este carácter, como lo reportaran del Pozo &

Ramirez-Parra (2015) y Song & Chen (2015) para Arabidopsis.

El híbrido doble del cruzamiento P. amethystina x P. caerulea mostró mayor tolerancia a las temperaturas invernales que el híbrido simple. Este resultado podría deberse a que la amplitud del fondo genético podría producir un efecto buffer en el fenotipo, como lo describiera Zhang et al.

(2014) para arroz.

Si bien las evaluaciones de tolerancia a bajas temperaturas permitieron la selección de especies, híbridos interespecíficos e híbridos dobles; resulta una prueba que insume muchos materiales y espacio por lo que no fue posible estudiar el comportamiento de todos los híbridos obtenidos. Resultaría interesante realizar la prueba de tolerancia al frío en sitios de igual latitud, pero donde variaran características como la humedad

234

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. relativa. Existe la posibilidad de que los híbridos no seleccionados para

Buenos Aires sean aptos para la comercialización en otras localidades.

Luego de todos los estudios fenotípicos realizados, fue posible realizar una selección de especies e híbridos para diferentes usos.

Para uso en cortinas o paredes verdes, por su gran capacidad de cobertura se seleccionaron las especies P. alata, P. edulis f. flavicarpa y P. cincinnata y, entre los híbridos, P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa y P. amethystina x P. alata. Éste último, además de su cobertura presentó un color de flor intenso, expresando un fenotipo novedoso y llamativo por lo se encuentra en proceso de registro como variedad. El descriptor para la inscripción de este genotipo se presenta en el Anexo 10.

Por su tolerancia a las bajas temperaturas, se seleccionaron la especie

P. caerulea y el citotipo tetraploide de P. mooreana así como también el híbrido P. amethystina x P. caerulea.

235

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Conclusiones

 El estudio de los caracteres fenotípicos analizados muestra que la

hibridación interespecífica es una fuente muy importante de

variabilidad. La combinación entre diferentes especies genera

fenotipos distintos a ambos padres en morfología, color y tamaño de

hojas, largo de entrenudos, tamaño y color de flores y coronas y

tolerancia a bajas temperaturas. Por estas diferencias, se rechazan

las Hipótesis nulas 8 y 10.

 La superficie de las hojas y el tamaño de las flores en los híbridos fue

intermedia a la de los parentales en la mayoría de los cruzamientos

estudiados, mostrando su herencia cuantitativa, mientras que en

otros se registró una herencia transgresiva de este carácter,

sugiriendo heterosis.

 Existe una correlación entre superficie foliar y largo de entrenudos,

pero no entre los diámetros de la flor y de la corona, por lo cual se

rechaza la Hipótesis 9.

 Por los resultados de los estudios colorimétricos en hojas se deduce

una reducción en la fotosíntesis en híbridos que podría deberse a una

alteración de la expresión génica producida por “shock genómico” y/o

por “shock transcripcional” en rutas metabólicas relacionadas a este

proceso.

 En los híbridos de Passiflora entre especies con diferente color de flor,

se encontró que este carácter fue diferente e intermedio a ambos

236

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

parentales, en la mayoría de los casos. El color de las flores se debería

a la combinación de las vacuolas que reservan pigmento, a las

densidades que se observan dentro de ellas, a la cantidad de células

no pigmentadas intercaladas con las coloreadas y, en algunos casos,

a la presencia de cromoplastos.

 Diferencias en la tolerancia a las bajas temperaturas permiten

rechazar la Hipótesis 11.

 Por su tolerancia a las bajas temperaturas, se seleccionaron la especie

P. caerulea y el citotipo tetraploide de P. mooreana así como también

el híbrido P. amethystina x P. caerulea. Por su potencial de cobertura

de estructuras para cortinas y paredes verdes se seleccionaron las

especies P. alata, P. edulis f. flavicarpa y P. cincinnata y los híbridos,

P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa

y P. amethystina x P. alata. Éste último, presentó un intenso color de

flor, expresando un fenotipo novedoso y llamativo por lo se encuentra

en proceso de registro como la primera variedad de Passiflora

argentina.

237

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Capítulo 5: Inducción de poliploides en Passiflora

Introducción

La poliploidía ha jugado un importante rol en la evolución y especiación de las plantas (Sattler et al., 2016; Adams & Wendel, 2005). En este contexto, se la asocia frecuentemente con aumentos en el vigor, brindando al poliploide una ventaja adaptativa respecto de los diploides que le dieron origen y la posibilidad de ocupar nuevos o más amplios nichos ecológicos (Sattler et al., 2016; Soltis & Soltis, 2016; Dodsworth et al., 2016).

Si bien la poliploidía es muy frecuente en algunos grupos de plantas, no es frecuente dentro del género Passiflora. De alrededor de 500 especies, se registran una docena de poliploides naturales, en su mayoría, del subgénero Decaloba (King & Irving, 2010). En el subgénero Passiflora sólo se conocen dos poliploides naturales, P. incarnata con 2n= 4x = 36, y P. mooreana con dos niveles de ploidía conocidos, 2n = 2x = 18 y 2n = 4x = 36

(Bugallo, 2011; Bruner, 1998).

Para determiner el nivel de ploidía, la citometría de flujo es una técnica atractiva ya que permite el análisis de la cantidad de ADN de numerosas muestras en poco tiempo. (Galbraith et al., 1983; Arumuganathan & Earle,

1991).

La colchicina ha sido utilizada exitosamente para obtener plantas poliploides en muchos cultivos agrícolas y ornamentales (Lu & Bridgen,

1997; Thao et al., 2003; Escandón et al., 2006; Spooner et al., 1991). Entre

238

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. los efectos fenotípicos resultantes de la inducción de poliploides se registran el incremento en el tamaño de las células, flores, hojas y frutos; cambios en la arquitectura de la planta, alteración del sistema reproductivo; aumento en la fertilidad de los híbridos interespecíficos y modificaciones en el color de las flores (Sattler et al., 2016; Mc Carthy et al., 2015; Wu et al., 2011;

Vamosi et al., 2007; Barringer, 2007; Lu & Bridgen, 1997). Los cambios en estos atributos generan variabilidad que puede ser seleccionada en el mejoramiento de ornamentales. La esterilidad de los materiales obtenidos no representa un obstáculo para la producción ya que el producto puede propagarse vegetativamente (Sattler et al., 2016; Botelho et al., 2015; Kazi et al, 2015; van Tuyl & Lim, 2003).

Sin embargo, la poliploidía artificial no siempre produce efectos positivos para el mejoramiento. Pueden surgir consecuencias adversas como resultado del shock genómico proveniente de la combinación de dos genomas diferentes en el mismo núcleo que resulta en una elevada frecuencia de activación de transposones, ocurrencia de re-arreglos cromosómicos, pérdidas de secuencias, silenciamiento génico, cambios en la metilación del ADN y remodelación de la cromatina reduciendo la viabilidad de la planta (Leitch & Leitch, 2008; McClintock, 1984).

En híbridos interespecíficos, la poliploidía puede describir tres situaciones: la primera en la que los cromosomas de las especies parentales del híbrido son muy similares y el poliploide se comporta como un

239

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. autotetraploide; la segunda en la que existe un grado intermedio de diferenciación cromosómica entre los parentales del híbrido por numerosos rearreglos cromosómicos (inversiones y translocaciones) pero son muy similares en la disposición de los genes en la mayor parte del genoma

(alopoliploide segmentario); y la tercera, en la que los cromosomas divergieron tanto que existiría poco o ningún apareamiento entre los dos genomas parentales, comportándose como alopoliploides típicos (Grant,

1989; Stebbins, 1971).

Los resultados de ensayos de duplicación cromosómica artificial para mejorar o restaurar la fertilidad de híbridos interespecíficos o intergenéricos, no siempre fueron consistentes. Si bien se han observado algunos casos en los que la poliploidía mejora el apareamiento cromosómico en la meiosis, reduciendo la infertilidad, otros resultaron en un aumento en la formación de configuraciones multivalentes frustrando la formación de polen viable

(Yant, et al., 2013; Lu & Bridgen, 1997). En ciertos casos, se ha detectado que cuanto mayor es la divergencia entre dos especies parentales de un híbrido interespecífico, mayor es la frecuencia de cambio en el genoma nuclear del poliploide artificial del híbrido (Soltis & Soltis, 1995; Song et al.,

1995).

En cuanto a la expresión de algunos genes, la duplicación del número de copias puede producir la neo-funcionalización. En este fenómeno, las mutaciones en la segunda copia del gen no son perjudiciales para el

240

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. organismo portador y se las considera “libres de presiones selectivas”, por lo que un poliploide tiene la capacidad de acumular mutaciones con la posibilidad de desarrollar una nueva función. Otro fenómeno que puede producirse es la sub-funcionalización, donde las mutaciones producen la degeneración génica repartiendo la función entre las dos copias (Dodsworth et al., 2016).

Este Capítulo se ocupa de la inducción artificial ex-vitro de poliploides a partir de especies e híbridos interespecíficos de Passiflora y la comparación entre niveles de ploidía en características como el tamaño de las células estomáticas, la viabilidad del polen y el comportamiento meiótico. Además, se estudian los fenotipos en caracteres que son de interés en el mejoramiento de ornamentales como el tamaño de flor, de corona, de hojas, largo de entrenudos y color de los pétalos.

Hipótesis

En este Capítulo se ponen a prueba las siguientes hipótesis nulas:

Hipótesis 12: La inducción de poliploides es igualmente probable en diferentes genotipos, ya sea tratando plántulas o estacas con diferentes concentraciones de un inhibidor de la formación del huso acromático.

Hipótesis 13: Las plantas poliploides inducidas y sus testigos diploides no difieren en características como el diámetro de las flores, de la

241

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. corona, la longitud de los entrenudos, el área foliar, el tamaño de las células estomáticas y los componentes colorimétricos que definen el color de los pétalos.

Objetivos

- Ensayar la inducción de poliploides con colchicina en diferentes

genotipos de especies e híbridos de Passiflora, a partir de plántulas y

estacas.

- Evaluar las características fenotípicas de los poliploides y

compararlas con las de los testigos diploides.

242

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Materiales y métodos

Material vegetal: Todo el material vegetal analizado pertenece a la colección in vivo de Passiflora del Instituto de Floricultura del INTA. La misma se encuentra en invernáculos con una temperatura mínima de 10ºC en macetas de 20 litros con sustrato compuesto por resaca de río, corteza de pino y compost.

Inducción de poliploides

Se ensayaron dos métodos para la poliploidización:

 Inmersión de plántulas (IP): Se hicieron germinar semillas de cruzamientos interespecíficos P. amethystina x P. elegans, híbridos dobles

(P. amethystina x P. caerulea) x (P. amethystina x P. caerulea) e híbridos de tres vías (P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina. Cuando las plántulas tuvieron entre 4 y 7 cm de longitud, se les colocó papel absorbente embebido en agua cubriendo las raíces reuniéndolas en paquetes que fueron colocados en frascos con una solución de colchicina de forma que los ápices quedaran sumergidos pero las raíces no. Se realizaron dos tratamientos con inmersiones de 24 horas en soluciones de colchicina 0,25 y 0,5% en agua.

Luego del tratamiento, se enjuagaron las plántulas en agua de la canilla y se trasplantaron a bandejas alveoladas.

 Inmersión de estacas enraizadas (IE): Se trataron estacas de dos nudos con hormona enraizante IBA (ácido indol-butírico) 1000 ppm de 243

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. especies (P. edulis f. flavicarpa, P. elegans y P. mooreana 4x) e híbridos selectos (P. amethystina x P. elegans y P. amethystina x P. alata) y se las plantó en macetas conteniendo turba, perlita y vermiculita (2:1:1). Una vez enraizadas, se les colocó papel absorbente embebido en agua cubriendo las raíces reuniéndolas en paquetes. Las estacas enraizadas se colocaron de manera invertida (con las raíces hacia arriba) en frascos conteniendo soluciones de colchicina en concentraciones de 0,25 y 0,5%, sumergiendo el nudo superior pero no las raíces. Se trataron durante 24 horas, luego de lo cual se las enjuagó en agua de la canilla y se las trasplantó a bandejas alveoladas.

1.2) Citometría de flujo

Una vez concluido el proceso de inmersión en colchicina, se dejaron crecer los meristemas tratados, comprobando el resultado por citometría de flujo de hojas producidas por el mismo. Para esto, se picó finamente 1 cm2 de hoja en buffer de extracción Otto I y se filtró con una malla de 50 µm para obtener una suspensión de núcleos que fue teñida con buffer Otto II conteniendo DAPI. Se analizaron las muestras en un citómetro de flujo

CyFlow Ploidy Analyser Partec UV LED (365 nm). Se identificó como planta poliploidizada a la que contuviera un núcleo con el doble de la intensidad de fluorescencia que la planta testigo y como quimérica a la que presentara dos intensidades de fluorescencia diferentes en el mismo tejido.

244

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

1.2) Recuentos cromosómicos

Se observaron las células en metafase de las plantas poliploides ya confirmadas y sus testigos, realizando un recuento de las mismas. Para ello, se colocaron segmentos de tallo de cada planta a enraizar con hormona IBA

(ácido indol-butírico) 1000 ppm en un sustrato compuesto por turba, perlita y vermiculita (2:1:1). Las raíces se recolectaron y se colocaron en una solución de 8-hidroxiquinolina 0,002% con cicloheximida 3,125 ppm (Cuco et al, 2003), durante 24 horas. Transcurrido el pre-tratamiento para acumular células en metafase, se realizó la fijación del material en la solución de Farmer (3:1 etanol-ácido acético glacial) por 24 horas. Las raíces fueron tratadas con una solución enzimática de celulasas 2% (p/v) y pectinasas 20% (v/v) a 37ºC durante 1 hora para digerir la pared celular.

Con los ápices radiculares, se realizó un preparado en ácido acético 45%, se observó bajo microscopio Olympus BX50 con contraste de fases y se fotografió con una cámara Olympus DP72. Los preparados fueron teñidos por bandeo DAPI.

Efecto de la poliploidía

La evaluación del efecto de la poliploidía se realizó sobre la viabilidad del polen, el tamaño de las células oclusivas de los estomas y el comportamiento meiótico y en caracteres macroscópicos de importancia ornamental. Los híbridos poliploides obtenidos a partir de plántulas fueron comparados con las plantas testigo del mismo cruzamiento (hermanos y medio-hermanos) o con los valores promedio de los mismos. Los poliploides

245

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. obtenidos a partir de estacas se compararon con la planta testigo sin tratar del mismo genotipo.

2.1) Efecto de la duplicación cromosómica sobre el tamaño de las células estomáticas, la viabilidad del polen y el comportamiento meiótico

Tamaño de células oclusivas de los estomas: Se midieron 10 células oclusivas de los estomas en microfotografías de un peeling de epidermis abaxial de cada genotipo, con el programa MicroMeasure.

Viabilidad del polen: Para estimar la viabilidad del polen, se colocó el contenido de las anteras de cada genotipo en un portaobjetos, se tiñó por el método de Alexander (1969), se contó la cantidad de granos viables en un total de 500 granos y se calculó el porcentaje.

Estudios meióticos: Se fijaron anteras en alcocohol-ácido acético glacial 3:1 por 24 horas, luego de lo cual se conservaron en una solución acuosa de etanol al 70%. Se realizaron preparados cortando cada antera sobre un portaobjetos y presionando para extraer su contenido en una gota de carmín acético 2%. Se observó bajo microscopio óptico.

2.2 Efecto sobre caracteres fenotípicos de importancia ornamental

Diámetro de flor, de corona y largo de entrenudos: se tomaron medidas con un calibre de los diámetros de la flor, de la corona en 5 flores y del largo de 5 entrenudos por genotipo.

246

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Superficie foliar: Se midió la superficie de 10 hojas de cada poliploide y de cada testigo con Green Leaf Area Meter modelo GA-5 (Tokio

Photoelectrics).

Análisis colorimétrico de las flores: Se analizaron colorimétricamente las flores de 16 plantas poliplodes correspondientes a 3 híbridos (P. amethystina x P. elegans, [P. ”Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina] y

[(P. amethystina x P. caerulea) x (P. amethystina x P. caerulea)] y 7 testigos relacionados. Se tomaron valores de color en los pétalos de flores con un colorímetro Minolta CR-321 que registra datos en la escala CIELab (L = luminosisdad, -a/+a = escala de verde a rojo, -b/+b escala de azul a amarillo). Cada genotipo se evaluó en tres pétalos de cada flor y en tres flores diferentes.

Análisis de los datos

Los diferentes tratamientos de inducción a la poliploidía y la viabilidad de polen en testigos y poliploides fueron contrastados por pruebas estadísticas de diferencia de proporciones basadas en el test exacto de

Fisher.

Los datos obtenidos del análisis colorimétrico de las flores, tamaño de las células oclusivas, diámetro de flor y corona, largo de entrenudos y superficie foliar fueron evaluados estadísticamente por medio de ANOVA y contrastados por test BSS.

247

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Todos los análisis estadísticos fueron realizados utilizando el programa InfoStat (versión 2009, Universidad Nacional de Córdoba).

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Resultados

Inducción de poliploides

La especie P. edulis f. flavicarpa fue tratada con los dos métodos de inducción de poliploides ensayados, inmersión de estacas enraizadas y de plántulas. Con el primer método se obtuvieron 2 poliploides de 14 estacas tratadas. Con el segundo, se obtuvieron 4 poliploides y 20 quimeras de 61 plántulas tratadas con 0,25% de concentración de Colchicina y 10 poliploides y 28 quimeras de 65 plántulas con tratamiento de 0,5% (Tabla

5.1).

De las 20 estacas enraizadas tratadas con 0,5% de colchicina del citotipo tetraploide de P. mooreana, 2 resultaron poliploides.

Híbridos del cruzamiento P. amethystina x P. elegans fueron tratados en estadío de plántula y de estaca. Por el primer método se obtuvieron 2 polipoides y 1 quimera de 3 plántulas con colchicina 0,25% y 6 poliploides y 12 quimeras de 44 plántulas con colchicina 0,5%, mientras que por el otro método se obtuvieron 3 poliploides y 2 quimeras de 50 estacas tratadas

(Tabla 5.1).

Se obtuvo una planta poliploide de 9 estacas tratadas del híbrido P. amethystina x P. alata.

Se trataron plántulas del cruzamiento de P. edulis f flavicarpa x P. alata de lo cual se obtuvieron, con 0,25% de concentración de colchicina, 3

249

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. polipoides y 1 quimera de 18 y, tratadas con 0,5%, 5 poliploides y 1 quimera de 12 plántulas.

Los híbridos dobles [(P. amethystina x P. caerulea) x (P. amethystina x

P. caerulea)], se trataron con 0,5% de colchicina y resultaron en 2 poliploides y 1 quimera de 10 plántulas (Tabla 5.1).

No se observaron diferencias estadísticamente significativas en la inducción de poliploides entre los tratamientos de estacas y plántulas en P. edulis (valor p=1,000000) ni en híbridos de P. amethystina x P. elegans (valor p=0,113980) (Anexo 11). Tampoco hubo diferencia entre usar 0,25% y 0,5% de concentración de colchicina en los tratamientos de inmersión de plántulas en P. edulis (valor p=0,157794), en los híbridos de P. amethystina x P. elegans (valor p=0,070799) y en los de P. edulis x P. alata (valor p=0,209817). No se encontraron diferencias entre genotipos para la inducción de poliploides por estacas enraizadas. A partir de estos resultados, no es posible rechazar las hipótesis nulas que postulan la igualdad del tratamiento de estacas y plántulas, de las distintas concentraciones de colchicina utilizadas, así como tampoco el efecto del genotipo.

250

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 5.1: Resultados de tratamientos para la inducción de poliploides aplicados a especies e híbridos interespecíficos de Passiflora. Los números en el cuadro indican cantidad de poliploides obtenidos y cantidad de plantas quiméricas (q) sobre el total de plantas tratadas.

2.1) Efectos de la poliploidía en el tamaño de células estomáticas,

viabilidad del polen y comportamiento meiótico

La Figura 5.2 muestra algunas imágenes de las células estomáticas y de granos de polen teñidos por el método de Alexander (1969) para estimar viabilidad, en poliploiploides y testigos.

El tamaño de las células oclusivas de los estomas de la epidermis abaxial de las hojas de los poliploides resultó estadísticamente mayor que

251

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. en los testigos (Anexo 11). Este resultado permite rechazar la hipótesis nula que afirma la similitud en el tamaño de los estomas en testigos y poliploides.

La viabilidad del polen aumentó estadísticamente con la poliploidía en

9 casos (P. amethystina x P. elegans genotipos 3, 4, 5, 6, 7, 9 y 10, el poliploide 1 del híbrido doble de P. amethystina x P. caerulea y P. “Amethyst x P. caerulea 1), disminuyó en uno (P. amethystina x P. elegans 1) y no mostró diferencias en 4 (P. amethystina x P. elegans 2 y 8 y los poliploides

2 y 4 del híbrido doble de P amethystina x P. caerulea) (Tabla 5.2). Dada la variabilidad de resultados, no es posible rechazar la hipótesis nula que postula la igualdad en la viabilidad del polen de poliploides respecto de sus testigos.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 5.2: Caracteres microscópicos en testigos y poliploides de Passiflora. a-c: estomas en epidermis abaxial de hojas en híbridos de P. amethystina x P. elegans (aumento 100x); a: testigo 11-250#2; b: poliploide 11-254#1P6; c: poliploide 11-254#1P4; d-f: granos de polen de híbridos de P. amethystina x P. elegans teñidos por la técnica de Alexander (aumento 20x); d: testigo 11-250#4; e: poliploide 11-254#1P4; f: poliploide 11-301#2. Granos de polen azul-violeta con contorno verde: viables; granos de polen azul-verde: inviables. Flechas negras: granos de polen inviables.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 5.2: Efecto de la poliploidía en la viabilidad del polen y en el tamaño de las células estomáticas en híbridos de Passiflora. IP: inmersión de plántulas; IE: inmersión de estacas. Viabilidad de polen estimada por el método de Alexander (1969). Valores p menores a 0,05 representan diferencias significativas. Los números en la sección de tamaño de células representan la media para cada genotipo y letras distintas indican diferencias significativas (test BSS).

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Meiosis en híbridos poliploides

Se estudió la profase de la meiosis en el híbrido poliploide P. amethystina x P. elegans 3P*. Se observaron 10 meiocitos con 18 II (62,5%),

5 con 16 II + 1 IV (31,25%) y 1 con 14 II + 2 IV (6,25%).

Se analizó la cantidad de quiasmas en 8 meiocitos del poliploide P. amethystina x P. elegans 3P*, el cual presentó un promedio de 1,3 quiasmas por bivalente. En la planta testigo del mismo cruzamiento se analizaron 7 meiocitos promediando 1,2 quiasmas por cromosoma. Éstas diferencias son estadísticamente significativas (valor p=0,042133), expresando la existencia de mayor cantidad de quiasmas en el poliploide que en el testigo.

El genotipo poliploide P. amethystina x P. elegans 4P* exhibió asincronía meiótica mostrando, en una misma antera 59 meiocitos con micrósporas formadas, 47 en meiosis II y 32 en meiosis I, de un total de 138 células.

255

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 5.3: Estudio de la meiosis del poliploide 3 (11-301#2) del cruzamiento P. amethystina x P. elegans y su testigo (11-249#2).

La proporción de tétradas de micrósporas de apariencia normal en poliploides tuvo un valor mínimo de 83% y un máximo de 98,3%, ambos correspondientes a híbridos de P. amethystina x P. elegans (Tabla 5.4).

256

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 5.4: Recuento de la cantidad de micrósporas formadas en cada meiocito en híbridos poliploides de Passiflora. n: cantidad de meiocitos analizados

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 5.3: Profase I de la meiosis del híbrido poliploide de Passiflora amethystina x P. elegans 2n = 4x = 36 (genotipo 11-301#2). a-b: 18 II; c-e: 16 II + 1 IV; f: 14 II + 2 IV. Las flechas en c, d, e y f indican las configuraciones cuadrivalentes. Barras: 10 µm.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

2.2) Efectos de la poliploidía en caracteres fenotípicos de

importancia ornamental

En la figura 5.4 se muestran los fenotipos de los poliploides obtenidos a partir de la inducción con colchicina.

El efecto de la poliploidía sobre los caracteres fenotípicos de importancia ornamental no fue consistente. Si bien en nueve de los casos estudiados se observó que el diámetro de las flores fue significativamente mayor en poliploides que en testigos (P. amethystina x P. elegans 2P*, 3P*,

5P*, 6P*, 7P*, 9P* y 10P*; el híbrido doble de P. amethystina x P. caerulea

1P* y (P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina 1P*), en los otros seis casos, esta medida los ubica en el mismo grupo estadístico (P. amethystina x P. elegans 1P*, 4P* y 8P*, el híbrido doble de P. amethystina x P. caerulea

2P*, 3P* y 4P*). Por este motivo, no fue posible rechazar la hipótesis nula sobre la igualdad en el diámetro de las flores entre poliploides y testigos

(Tabla 5.5) (Anexo 11).

La hipótesis nula que postula que el diámetro de la corona es similar en poliploides y testigos no pudo ser rechazado. En diez de los quince casos estudiados se observan diferencias estadísticas entre poliploides y testigos

(P. amethystina x P. elegans 1P*, 3P*, 6P*, 7P*, 8P*, 9P* y 10P*; el híbrido doble de P. amethystina x P. caerulea 3P* y (P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina 1P*), los cinco restantes caen en el mismo grupo (P.

259

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. amethystina x P. elegans 2P*, 4P*, 5P*, el híbrido doble de P. amethystina x

P. caerulea 2P* y 4P*). Los poliploides originados a partir de estacas (P. amethystina x P. elegans 6P* a 10P*), se diferenciaron estadísticamente.

El largo de los entrenudos es diferente entre ocho de los quince poliploides y sus testigos (P. amethystina x P. elegans 1P*, 5P*, 6P*, 7P*, 8P* y 10P*; el híbrido doble de P. amethystina x P. caerulea 4P* y (P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina 1P*) y estadísticamente similar en los siete restantes (P. amethystina x P. elegans 2P*, 4P* y 9P*; los híbridos dobles de

P. amethystina x P. caerulea 1P*, 2P* y 3P*). Por esto, no es posible rechazar la hipótesis nula que afirma que el largo de entrenudos es igual en poliploides y testigos (Tabla 5.5).

La superficie de las hojas no mostró diferencias significativas entre poliploides y testigos en nueve de los 15 casos (P. amethystina x P. elegans

1P*, 4P*, 7P*, 8P* y 10P* y en los híbridos doble de P. amethystina x P. caerulea 1P*, 2P*, 3P* y 4P*) y, en los otros 6, los poliploides tuvieron mayor superficie foliar que las plantas no poliploidizadas (Tabla 5.5) (Anexo 11).

260

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura 5.4: Fenotipos de testigos y poliploides inducidos de Passiflora. A: flores y hojas de P. mooreana 2x, 4x y 8x; b: flores y hojas del híbrido (P. “Amethystist” x P. caerulea) x P. amethystina , diploide y tetraploide; c-f: híbrido doble P. amethystina x P. caerulea, c: testigo diploide; d-e-f: poliploides 2P*, 3P*y 5P*; g-m: híbridos P. amethystina x P. elegans; g: diploide; h-i: poliploides 5P* y 10P*; j: diploide; k: poliploide 3P*; l: flores del diploide y el poliploide 11P*; m: flores de poliploides (fila superior), de izq. a der.: 1P*, 8P*,10P*, 3P*, 4P*, 2P*; y testigos (fila inferior).

261

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 5.5: Efecto de la poliploidía en caracteres fenotípicos de importancia ornamental en Passiflora. Letras distintas indican diferencias significativas (BSS, significación 0,05). Los números en el cuadro muestran la media para cada caso.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Análisis colorimétrico de los poliploides

Los resultados del análisis colorimétrico se dividen en tres partes: una escala que mide luminosidad (L), otra que mide la posición sobre una escala del rojo al verde (a) y la tercera, sobre una escala del azul al amarillo (b).

En la escala de luminosidad (L), los poliploides del híbrido doble de P. amethystina x P. caerulea se encuentran en grupos estadísticos (E, F y G) diferentes al de los testigos sin tratar 11-226 (D). La misma situación se repitió con el poliploide [(P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina] (E) y su testigo 11-224 (D); los poliploides de P. amethystina x P. elegans 1P* a

5P* (C) y su testigo 11-249 (B); los poliploides del mismo cruzamiento 7P*

7P* (A), 6P* y 8P* (B) y su testigo 11-254#1 (C), así como también con 12-

349#1 (B) y su poliploide 10P* (D) (Tabla 5.6).

Sin embargo, la hipótesis nula que postula la igualdad en la luminosidad (L) del color de las flores de poliploides y testigos no puede ser rechazada ya que el poliploide P. amethystina x P. elegans 1P* y su testigo,

11-250, se ubicaron en el mismo grupo estadístico (C). Otro caso que respalda este hecho es el del poliploide 5P* del mismo cruzamiento y su testigo 12-349#1, dentro del grupo B. Cabe destacar que, en ambos casos, los poliploides están siendo comparados con un grupo de hermanos enteros o con uno de ellos, respectivamente, y no con testigos del mismo genotipo.

La hipótesis nula sobre la igualdad en la escala rojo-verde (a) tampoco puede ser rechazada ya que P. amethystina x P. elegans 1P* y su testigo 11-

263

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

250 se encuentran en el grupo E y, tanto [(P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina] como su testigo, 11-224, están en el grupo F. Asimismo, la tercera escala que mide el color del azul al amarillo (b) repite esta situación: el grupo testigo 11-224 y su hermano entero poliploidizado [(P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina], ambos en el grupo D y los poliploides P. amethystina x P. elegans 7P* y 8P* en el grupo B, al igual que su testigo.

264

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla 5.6: Evaluación del color de flores en híbridos y poliploides de Passiflora. Escala colorimétrica CIELab: L = Luminosidad; -a/+a = de verde a rojo; -b/+b = de azul a amarillo. Los poliploides P. amethystina x P. elegans 1P* a 2P* tienen como testigo 11-250, 4P* y 5P* a 11-249, 10P* a 12-349; (P. “Amethyst” x P. caerulea) x P. amethystina tiene como testigo a 11-224.

265

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Discusión

La inducción de poliploides fue posible en todos los genotipos ensayados hasta el momento, sin diferencias significativas entre tratamientos. Esto indicaría que la concentración más baja utilizada, 0,25%, fue suficiente para producir el efecto buscado y que, posiblemente, se pudiera lograr el mismo resultado con concentraciones menores.

El tamaño de las células oclusivas de los estomas de las hojas, reflejó el nivel de ploidía mostrando mayor tamaño en poliploides inducidos que en los testigos. Esto confirma la efectividad de uno de los marcadores morfológicos más utilizados para detectar poliploides (Sattler et al., 2016).

La viabilidad del polen aumentó en algunos de los poliploides inducidos respecto de su testigo, mientras que en otros no se vió modificada.

El hecho de que algunos de los poliploides fueron obtenidos a partir de semillas del mismo fruto (hermanos enteros) podría poner en duda si las diferencias en la viabilidad de polen provendrían de tener cada uno una composición genética distinta, ya que las plantas de Passiflora poseen genotipos altamente heterocigotas por ser plantas alógamas. Sin embargo, los poliploides obtenidos por tratamiento de estacas provienen de un mismo genotipo selecto y muestran esta misma variación en la fertilidad. Esto podría estar indicando una variación intra-planta que sería consecuencia de la activación de elementos transponibles (Poggio et al., 1997). La rápida reorganización del genoma se da no solo en híbridos sino también en

266

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. poliploides y es un reflejo del estrés sufrido en esos procesos (Soltis & Soltis,

1995).

Reportes de fertilidad no recuperada luego de la duplicación cromosómica fueron ya registrados en Oryza sativa (Cua, 1951), en híbridos interespecíficos de Solanum (Hermsen et al., 1981) y de Alstroemeria (Lu &

Bridgen, 1997). En algunos casos, se ha atribuido este fenómeno a genes específicos de esterilidad que han sido reportados en trigo (Loegering &

Sears, 1963), en tomate (Rick, 1966) y en arroz (Sano, 1983, 1990). Uno de los factores a los que se puede atribuir este hecho es, como se observó en el genotipo 11-302#3, a la falta de sincronía en la meiosis donde se registraron, en una misma antera, diferentes fases, simultáneamente. Los meiocitos en fases más rezagadas, posiblemente no darán granos de polen maduros al momento de la antesis, por lo que esta asincronía es una de las posibles causas de esterilidad (Mendes-Bonato et al., 2007; Magnard et al., 2001).

La meiosis del poliploide P. amethystina x P. elegans 3 (11-301#2) mostró un 62,5% de meiocitos en los que todos los cromosomas aparearon formando bivalentes y un 37,5% en que aparecían uno o dos cuadrivalentes.

No se encontraron univalentes en los poliploides. En los híbridos de P. amethystina x P. elegans, la configuraciones formando bivalentes variaron entre 30% y 75%, mientras que las células que mostraron univalentes fueron entre un 25 y un 50% (Tabla 3.1). Esto indicaría que el apareamiento formando bivalentes aumentó con el nivel de ploidía. La configuración

267

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. meiótica resultante de la duplicación cromosómica en híbridos diploides que forman bivalentes en alta frecuencia, sería una elevada proporción de cuadrivalentes. Sin embargo, entre 30 y 75% de las células analizadas mostraron alta frecuencia de bivalentes. La alta frecuencia de bivalentes observada en los poliploides sugiere la ocurrencia del apareamiento homólogo con reducción del reconocimiento homeólogo en el híbrido interespecífico. En Glandularia, Poggio et al. (2016) reportaron que la actividad de los genes reguladores del apareamiento homeólogo estaría influenciada por la variación existente en el fondo genético y epigenético de los parentales y por los cambios revolucionarios producto de la hibridación interespecífica y la poliploidización (Poggio et al., 2016; Lafon-Placette &

Köhler, 2015; Feldman & Levy, 2012).

Aparentemente, la esterilidad de los híbridos no está dada solamente por diferencias genómicas entre los padres sino que existirían otros mecanismos reguladores, a pesar de un apareamiento cromosómico normal como sería el caso de la hibridez estructural críptica (Stebbins, 1971). Este autor, indica que una de las evidencias de la hibridez estructural críptica sería un dramático incremento en la fertilidad luego de la duplicación cromosómica ya que cada cromosoma aparearía con su homólogo. En el caso del híbrido de P. amethystina x P. elegans, ocurrió un aumento estadísticamente significativo en la fertilidad en algunos de los poliploides pero no en otros. Este hecho indica que existen otros factores involucrados en la fertilidad del híbrido estudiado.

268

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Song et al. (1995), detectó importantes cambios en el genoma nuclear de los poliploides y demostró que la frecuencia de cambio difería según la similitud genómica entre las especies parentales, a mayor divergencia entre los parentales diploides mayor la frecuencia de cambio en el genoma nuclear en los poliploides resultantes. Estos cambios no serían al azar sino direccionales, posiblemente influenciados por interacciones núcleo- citoplasma (Soltis & Soltis, 1995). El citoplasma puede generar fuertes presiones de selección en sectores del genoma nuclear extraño, estableciendo la relación entre ellos (Soltis & Soltis, 1995).

El efecto de la poliploidía sobre los caracteres fenotípicos de importancia ornamental no fue consistente. Si bien se pudo corroborar en algunos casos el aumento en el tamaño promedio de flores, de coronas y de hojas, el acortamiento de entrenudos y la variación en el color de los pétalos, ninguno de los caracteres varió en el mismo sentido en todos los poliploides.

Según Vamosi et al. (2007), diferentes especies presentaron respuestas distintas a la poliploidización. En la mayoría de las especies o híbridos poliploides, el tamaño de la flor aumentó respecto del diploide, por ejemplo,

Lilium formasium, Zea mays, Allium cepa x A. fistulosum y Stellaria longipes.

Ciertas especies muestran el efecto opuesto y el mayor tamaño floral se observa en diploides, como en Claytonia parviflora, Vaccinium uligunosum y

Asphodeus fistulosus, mientras que en otras no hay diferencias entre niveles de ploidía.

269

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

La poliploidía representó una fuente de variabilidad que, a través de la selección, puede ser aprovechada para la obtención de variedades ornamentales.

270

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Conclusiones

 La inducción de poliploides fue posible sin presentar diferencias

significativas entre genotipos ni tratamientos. A partir de este

resultado, no es posible rechazar la Hipótesis 12. La concentración

más baja utilizada (0,25%), fue suficiente para producir la duplicación

por lo que, posiblemente, se pudiera lograr con concentraciones

menores.

 La variación encontrada entre algunos poliploides inducidos y sus

testigos diploides en el diámetro de las flores, de la corona, la longitud

de los entrenudos, el área foliar, el tamaño de las células estomáticas

y los componentes colorimétricos que definen el color de los pétalos,

permiten rechazar la Hipótesis nula 13.

 El tamaño de las células oclusivas de los estomas de las hojas, fue

mayor en poliploides que en diploides, constituyendo uno de los

marcadores morfológicos más útiles para detectar poliploides.

 La viabilidad del polen aumentó en algunos poliploides luego de la

duplicación, mientras que en otros no se vió modificada. Uno de ellos

presentó alta frecuencia de cuadrivalentes, otro mostró falta de

sincronía en la meiosis que produciría granos de polen inmaduros. En

otro poliploide inducido se observó alta frecuencia de bivalentes.

 La alta frecuencia de bivalentes observada tanto en los híbridos

diploides como en poliploides indicidos y naturales (P. mooreana 4x)

sugeriría la existencia de genes reguladores del apareamiento, que

271

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

serían responsables del comportamiento meiótico diploidizado del

poliploide.

 El efecto de la poliploidía sobre los caracteres fenotípicos de

importancia ornamental no fue consistente. Si bien en algunos casos

se observó aumento en el tamaño promedio de flores, de coronas y de

hojas, acortamiento de entrenudos y variación en el color de los

pétalos, ninguno de los caracteres varió en el mismo sentido en todos

los poliploides.

 La poliploidía representó una fuente de variabilidad que, a través de

la selección, puede ser aprovechada para la obtención de variedades

ornamentales.

272

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Conclusiones generales

• Los estudios citogenéticos en mitosis en catorce especies nativas de

Passiflora, permitieron verificar los números cromosómicos para doce de ellas y reportar por primera vez el número somático 2n =18 para P. tenuifila y para el citotipo diploide de P. mooreana. Además, se pudieron confirmar los números básicos x = 9 para el subgénero Passiflora, x = 6 para Decaloba y x =10 para Dysosmia.

• Los parámetros cariotípicos obtenidos mediante técnicas clásicas y moleculares (FISH) permitieron elaborar los idiogramas de todas las especies y establecer diferencias entre los subgéneros.

• La hibridación in situ genómica (GISH) confirmó que el subgénero

Passiflora posee una mayor afinidad genómica con el subgénero Dysosmia que con Decaloba.

• La cantidad de ADN estimada mediante citometría de flujo segregó a los subgéneros Dysosmia y Decaloba, con menores cantidades de ADN (0,5 a 0,72 pg.), respecto de Passiflora (0,9 a 2,5 pg.). Además, se encontró variabilidad intra-específica en la cantidad de ADN en P. caerulea, P. edulis f. flavicarpa y P. elegans.

• Se detectaron barreras de aislamiento reproductivo pre-cigóticas entre algunas especies nativas de Passiflora por medio del modelado del nicho ecológico y el calendario de floración confeccionado.

273

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

• En la hibridación entre las especies del subgénero Passiflora se encontraron otras barreras: especies que se cruzan en un solo sentido

(incompatibilidad unilateral) y ausencia de formación de frutos. La especie

P. amethystina fue muy prolífica, produciendo frutos con seis de los ocho taxones con que se la cruzó. Por otro lado, P. alata fue la especie con la que se registró la mayor cantidad de cruzamientos inviables. Entre las dos formas de P. edulis se encontró incompatibilidad unilateral, una baja eficiencia reproductiva (1,39%) y escaso porcentaje de fructificación (3,57%).

Los conflictos reproductivos entre estas dos formas, justificarían los cuestionamientos taxonómicos que plantean la separación de éstas en dos especies diferentes.

• En la hibridación interespecífica se evidenciaron también barreras post-cigóticas, como fallas en la germinación de las semillas e inviabilidad de plántulas.

• Con la finalidad de analizar afinidades genómicas a nivel de apareamiento cromosómico, se estudió el comportamiento meiótico y la viabilidad del polen en especies e híbridos.

• La afinidad máxima entre los genomas parentales a nivel de apareamiento cromosómico en la meiosis se observó en P. amethystina x P. edulis f. flavicarpa, siendo mínima en P. amethystina x P. alata (95 y 40% de meiocitos con nueve bivalentes, respectivamente). La mayor viabilidad del polen en híbridos se registró en P. amethystina x P. caerulea (90,4%) y P.

274

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L. amethystina x P. edulis f. edulis (79,4%). La regularidad de la meiosis y un elevado índice meiótico no siempre resultaron en la fertilidad de los híbridos.

Los factores de esterilidad pueden tener un origen cromosómico produciendo multivalentes, puente y fragmento e hibridez estructural críptica; pero también puede existir esterilidad génica, evidenciada como husos tripolares y citomixis.

• La técnica de hibridación in situ (GISH), permitió reconocer los genomas parentales en los híbridos P. alata x P. caerulea, P. alata x P. cincinnata, P. alata x P. amethystina y P. mooreana x P. cincinnata, por lo que se infiere que existen diferencias en ADN repetido entre las especies progenitoras de cada híbrido.

• Los híbridos mostraron cantidades de ADN iguales, menores y mayores respecto del esperado, calculado como el promedio entre sus parentales. Esto podría deberse al shock genómico que se produce cuando dos genomas interactúan en el mismo núcleo, produciendo cambios revolucionarios tales como eliminación/ganancia de secuencias repetidas codificantes y no codificante.

• Estudios fenotípicos mostraron que la superficie de las hojas y el tamaño de las flores en híbridos fue intermedia a la de los parentales en la mayoría de los cruzamientos estudiados, mostrando herencia cuantitativa, mientras que en otros se registró una herencia transgresiva de este carácter, sugiriendo heterosis.

275

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

• Los estudios colorimétricos en hojas sugirieron una reducción en la fotosíntesis en híbridos que podría deberse a una alteración de la expresión génica producida por “shock genómico” y/o por “shock transcripcional” en rutas metabólicas relacionadas a este proceso.

• El color de las flores en Passiflora se debería a la combinación de

vacuolas que reservan pigmento en las células epidérmicas de los pétalos, a

las densidades que se observan dentro de ellas, a la cantidad de células no

pigmentadas intercaladas con las coloreadas y, en algunos casos, a la

presencia de cromoplastos.

• Se logró inducir poliploidía a partir del tratamiento con Colchicina de

estacas enraizadas y plántulas. La viabilidad del polen aumentó en algunos

poliploides luego de la duplicación, mientras que en otros no se vió

modificada. Uno de ellos presentó alta frecuencia de cuadrivalentes y falta

de sincronía en la meiosis que produciría granos de polen inmaduros. En

otro poliploide inducido se observó alta frecuencia de bivalentes.

• Las pruebas de tolerancia a las bajas temperaturas y la estimación del

potencial de la cobertura de estructuras para cortinas y paredes verdes

permitió seleccionar especies (P. alata, P. edulis f. flavicarpa y P. cincinnata)

e híbridos (P. edulis f. flavicarpa x P. alata, P. amethystina x P. edulis f.

flavicarpa y P. amethystina x P. alata). Éste último, se encuentra en proceso

para ser registrado como la primera variedad del género en Argentina.

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 1: Modelado del nicho ecológico en especies nativas de Passiflora

Las variables bioclimáticas que se tuvieron en cuenta para el modelado del nicho ecológico con el programa Maxent se enumeran en la Tabla A.1. Los ejemplares de especies de Passiflora que se emplearon como dato, sus coordenadas, número de colección y el herbario en el que se conservan se listan en la Tabla A.2.

Tabla A.1: Variables bioclimáticas para el modelado del nicho ecológico con

Maxent Software

BIO1 = Annual Mean Temperature;

BIO2 = Mean Diurnal Range (Mean of monthly (max temp - min temp));

BIO3 = Isothermality (BIO2/BIO7) (* 100);

BIO4 = Temperature Seasonality (standard deviation *100);

BIO5 = Max Temperature of Warmest Month;

BIO6 = Min Temperature of Coldest Month;

BIO7 = Temperature Annual Range (BIO5-BIO6);

BIO8 = Mean Temperature of Wettest Quarter;

BIO9 = Mean Temperature of Driest Quarter;

BIO10 = Mean Temperature of Warmest Quarter; 300

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

BIO11 = Mean Temperature of Coldest Quarter;

BIO12 = Annual Precipitation;

BIO13 = Precipitation of Wettest Month;

BIO14 = Precipitation of Driest Month;

BIO15 = Precipitation Seasonality (Coefficient of Variation);

BIO16 = Precipitation of Wettest Quarter;

BIO17 = Precipitation of Driest Quarter;

BIO18 = Precipitation of Warmest Quarter and

BIO19 = Precipitation of Coldest Quarter.

Tabla A.2: Ejemplares de herbario empleados para el modelado del nicho ecológico en Passiflora.

Especie País Latitud Longitud Nº colección Herbario P. alata Argentina 27°23'00"S 054°45'00"W 172 BAB P. alata Argentina 26°40'42"S 054°26'56"W 3169 CORD, CTES, SI P. alata Argentina 26°25'00"S 054°37'00"W 245 BAA P. alata Argentina 27°23'00"S 055°54'00"W 5416 AAH, LIL, NA P. alata Argentina 26°15'18"S 053°38'44"W 6729 SI P. alata Argentina 25°40'00"S 054°25'00"W 5221 MO, SI P. alata Argentina 25°40'00"S 054°26'00"W 5642 SI P. alata Argentina 25°42'00"S 054°26'00"W 2032 SI P. alata Argentina 27°36'00"S 055°19'00"W 69 CTES, G P. alata Argentina 27°16'00"S 055°32'00"W 5548 CTES P. alata Argentina 27°17'00"S 055°35'00"W 5741 SI P. alata Argentina 27°16'00"S 055°32'00"W 580 MO P. alata Argentina 27°16'00"S 055°32'00"W 54 MO P. alata Argentina 24°54'00"S 065°29'00"W 3285 MO P. alata Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W 3108 W P. alata Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. BR P. alata Brasil 16°43'00"S 039°40'00"W 49935 HUA, MO P. alata Brasil 20°52'00"S 040°56'00"W B-1514 A, MO P. alata Brasil 20°26'34"S 054°38'47"W 3960 US

301

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. alata Brasil 21°53'00"S 046°21'00"W III642 S P. alata Brasil 19°38'00"S 043°53'00"W 1154 C P. alata Brasil 20°45'00"S 042°53'00"W 4789 G, MO, US P. alata Brasil 21°56'00"S 046°23'00"W 642 MO P. alata Brasil 02°57'00"S 051°52'00"W 564 MO P. alata Brasil 25°27'00"S 048°53'00"W 612a MO, S P. alata Brasil 24°42'00"S 048°57'00"W 742 BH, CU P. alata Brasil 25°15'00"S 049°05'00"W 14154 MO, S P. alata Brasil 25°25'00"S 049°15'00"W 4728 MO P. alata Brasil 08°09'00"S 035°27'00"W s.n. MICH P. alata Brasil 22°54'00"S 043°12'00"W s.n. OXF P. alata Brasil 22°37'00"S 043°53'00"W s.n. W P. alata Brasil 21°52'00"S 042°05'00"W 920 W P. alata Brasil 22°54'00"S 043°12'00"W 1033 P P. alata Brasil 22°09'43"S 043°17'34"W s.n. P P. alata Brasil 22°55'00"S 042°01'00"W 6377 K, MO P. alata Brasil 32°02'30"S 052°05'00"W 1387 US P. alata Brasil 30°02'00"S 051°14'00"W A605 S P. alata Brasil 29°34'00"S 050°47'00"W 3629 MICH, US P. alata Brasil 22°02'00"S 046°38'00"W 1326 S P. alata Brasil 22°52'55"S 047°05'26"W 10 S P. alata Brasil 23°46'41"S 046°18'16"W 14217 MO P. alata Brasil 23°18'19"S 045°57'57"W 1014a G, NY, US P. alata Brasil 23°51'00"S 046°27'00"W 25525 HUA P. alata Ecuador 00°14'00"N 078°15'00"W s.n. BP P. alata Ecuador 00°40'44"S 076°23'49"W 7334 MO P. alata Ecuador 00°38'00"S 076°30'00"W 224 MO P. alata Ecuador 01°26'52"S 078°07'47"W 3788 GB, S, UPS P. alata Ecuador 01°27'22"S 078°07'11"W 19330 S P. alata Ecuador 01°24'41"S 078°14'48"W 6275 US P. alata Paraguay 25°04'08"S 054°42'54"W 1107 FCQ P. alata Paraguay 25°17'00"S 054°35'00"W 27339 CTES, MO P. alata Paraguay 25°03'40"S 054°39'50"W 472 MO P. alata Paraguay 25°27'00"S 056°01'00"W 3896 MO P. alata Paraguay 23°59'40"S 055°28'45"W 48629 AS, MO P. alata Paraguay 23°59'40"S 055°28'45"W 48630 AS, MO P. alata Paraguay 24°08'01"S 055°31'41"W 49390 AS, MO P. alata Paraguay 23°59'39"S 055°28'44"W 50785 AS, MO P. alata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 8180 FCQ, MO P. alata Peru 09°15'00"S 074°57'30"W 738 BM, G, P P. alata Peru 05°19'16"S 078°41'05"W 152 MO P. alata Peru 05°45'00"S 078°56'00"W 6181 MO P. alata Peru 03°45'00"S 073°15'00"W 27468 NY, US P. alata Peru 03°41'25"S 073°15'15"W 12237 IBE, MISS, MO, UNA, USMS P. alata Peru 03°44'53"S 073°14'50"W 269 MO P. alata Peru 10°08'25"S 075°13'34"W 36294 HOXA, MO, USM P. alata Peru 10°13'31"S 075°13'27"W 36814 HOXA, MO, USM P. alata Peru 10°32'58"S 075°21'58"W 5054 HOXA, HUT, MO, USM P. alata Peru 10°08'04"S 075°22'06"W 6078 HOXA, MO, USM P. alata Peru 10°26'05"S 075°27'19"W 28 HOXA, MO, USM

302

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. alata Peru 10°32'21"S 075°21'09"W 48 HOXA, MO, USM P. alata Peru 10°07'45"S 075°12'54"W 59 HOXA, HUT, MO, USM P. alata Peru 10°37'01"S 075°27'10"W 6 HOXA, HUT, MO, USM P. alata Peru 10°08'23"S 075°13'05"W 63 HOXA, MO, USM P. alata Peru 10°32'00"S 075°21'00"W 4438 HUT, MO, USM P. alata Peru 10°32'00"S 075°21'00"W 27807 HUT, MO, USM P. alata Peru 10°11'32"S 075°09'00"W 198 HUT, MO, USM P. alata Peru 10°32'49"S 075°22'23"W 32327 HUT, MO, USM P. alata Peru 06°24'00"S 076°18'00"W 8200 MO P. alata EEUU States 38°22'07"N 093°46'42"W s.n. MO P. alata EEUU States 38°38'24"N 090°27'00"W s.n. MO P. amethystina Argentina 25°42'00"S 054°26'00"W 2033 SI P. amethystina Argentina 25°40'00"S 054°27'00"W 207 LP P. amethystina Argentina 25°41'00"S 054°10'00"W 5619 SI P. amethystina Argentina 27°02'00"S 055°02'00"W 969 CTES, SI P. amethystina Argentina 27°29'00"S 055°08'00"W 1975 SI P. amethystina Argentina 27°08'55"S 053°53'26"W 740 SI, US P. amethystina Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 2224 B, BM, CM, G, GH, MIN P. amethystina Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 1151 LPB P. amethystina Bolivia 17°44'00"S 064°44'00"W 4801 NY, USZ P. amethystina Bolivia 17°49'55"S 064°42'54"W 5800 K P. amethystina Bolivia 17°45'00"S 064°40'00"W 11031 USZ P. amethystina Bolivia 17°45'00"S 064°44'00"W 1902 P. amethystina Bolivia 18°18'00"S 064°53'00"W 1840 CAS, GH, MO P. amethystina Bolivia 17°10'00"S 065°48'00"W 1903 P. amethystina Bolivia 17°12'00"S 065°49'00"W 5011 LPB P. amethystina Bolivia 16°13'30"S 067°48'42"W 1301 HUA, MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 345 LPB P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 13648 LPB, MO, SI, USZ P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°05'00"W 9747 HUA, LPB, MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 17491 MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 17820 LPB, MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°07'00"W 11864 HUA, MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 5269 LPB, MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 6108 HUA, LPB P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 1226 HUA, LPB, MO P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 13829 LPB, US P. amethystina Bolivia 16°07'00"S 068°04'00"W 19714 LPB, TEX, US P. amethystina Bolivia 16°04'00"S 068°04'00"W 3586 LPB, MO P. amethystina Bolivia 16°07'21"S 068°05'12"W 4814 MO P. amethystina Bolivia 16°14'00"S 067°42'00"W 19 MO P. amethystina Bolivia 16°14'00"S 067°42'00"W 21 MO P. amethystina Bolivia 16°24'00"S 067°39'00"W 20768 LPB, MO P. amethystina Bolivia 16°13'00"S 067°45'00"W 7513 HUA, LPB P. amethystina Bolivia 16°15'00"S 067°46'00"W 5185 K P. amethystina Bolivia 16°21'00"S 067°31'00"W 19794 LPB P. amethystina Bolivia 16°24'00"S 067°44'00"W 229 US P. amethystina Bolivia 16°25'00"S 067°44'00"W 855 LPB, SI, TEX P. amethystina Bolivia 16°15'00"S 067°47'00"W 15033 LPB P. amethystina Bolivia 16°21'00"S 067°31'00"W 13085 LPB, MO, USZ

303

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. amethystina Bolivia 16°17'00"S 067°50'00"W 374 MO P. amethystina Bolivia 16°17'00"S 067°50'00"W 380 MO P. amethystina Bolivia 16°17'00"S 067°48'00"W 385 MO P. amethystina Bolivia 16°17'00"S 067°48'00"W 388 MO P. amethystina Bolivia 16°17'00"S 067°48'00"W 399 MO P. amethystina Bolivia 16°23'00"S 067°45'00"W 421 MO P. amethystina Bolivia 16°23'00"S 067°45'00"W 423 MO P. amethystina Bolivia 18°02'59"S 065°49'00"W 9823 BM, GH, K, S, US P. amethystina Bolivia 17°51'06"S 064°32'01"W 52437 MO, NY P. amethystina Bolivia 17°52'00"S 064°42'00"W 13630 USZ P. amethystina Bolivia 17°47'12"S 064°43'00"W 181 MO P. amethystina Bolivia 18°04'00"S 063°55'00"W 40682 LPB, MO, USZ P. amethystina Bolivia 18°04'00"S 063°54'00"W 45353 USZ P. amethystina Bolivia 18°12'00"S 063°50'00"W 284.PI4 LPB P. amethystina Bolivia 17°49'05"S 064°32'05"W 17141 LPB, USZ P. amethystina Bolivia 17°46'00"S 064°45'00"W 2312 USZ P. amethystina Bolivia 17°50'00"S 064°33'00"W 3090 MO, USZ P. amethystina Bolivia 17°51'00"S 064°38'00"W 2033 LPB P. amethystina Bolivia 17°45'00"S 064°15'00"W 13351 LPB, MO, USZ P. amethystina Bolivia 17°48'00"S 064°15'00"W 4113 MO, USZ P. amethystina Bolivia 17°48'00"S 064°15'00"W 4065 LPB, MO, USZ P. amethystina Bolivia 17°50'00"S 064°43'00"W 1272 F, MO, NY, USZ P. amethystina Bolivia 17°51'05"S 064°41'04"W 244 MO P. amethystina Bolivia 17°51'05"S 064°41'04"W 244 MO P. amethystina Bolivia 17°47'12"S 064°44'00"W 181 MO, USZ P. amethystina Bolivia 16°05'00"S 062°02'00"W 656 LPB, USZ P. amethystina Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 709 B P. amethystina Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 2131 B P. amethystina Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 920 BM P. amethystina Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. BR P. amethystina Brazil 20°12'15"S 040°43'29"W 1738 MO P. amethystina Brazil 25°18'00"S 052°48'00"W 261 MO P. amethystina Brazil 25°13'00"S 049°20'00"W s.n. S P. amethystina Brazil 25°01'00"S 050°35'00"W 8301 S P. amethystina Brazil 24°51'00"S 049°14'00"W 51237 MO P. amethystina Brazil 23°35'00"S 049°55'00"W 39259 MO P. amethystina Brazil 24°49'00"S 049°15'00"W 43631 MA, MO P. amethystina Brazil 25°28'00"S 049°00'00"W 8252 S P. amethystina Brazil 25°50'38"S 049°03'45"W 855 MO P. amethystina Brazil 22°57'00"S 043°12'00"W 910 S P. amethystina Brazil 22°57'00"S 043°12'00"W s.n. K P. amethystina Brazil 22°16'55"S 042°31'52"W 33 P P. amethystina Brazil 22°30'00"S 043°10'00"W 12163 US P. amethystina Brazil 22°59'00"S 043°14'00"W 6550 C, P P. amethystina Brazil 22°16'00"S 042°31'00"W s.n. MA P. amethystina Brazil 27°14'00"S 048°38'00"W 7649 C, K, P, US P. amethystina Brazil 22°02'00"S 046°38'00"W 1327 S P. amethystina Brazil 22°54'00"S 047°03'00"W 116 S P. amethystina Brazil 22°24'41"S 047°33'41"W 628 C P. amethystina Paraguay 20°19'22"S 059°45'32"W 58215 MO

304

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. amethystina Paraguay 24°47'00"S 054°52'00"W 286 MO P. amethystina Paraguay 24°51'00"S 054°33'00"W 1871 MO, PY P. amethystina Paraguay 25°41'35"S 055°32'35"W 49109 AS, MO P. amethystina Paraguay 24°05'00"S 055°25'00"W 9133 BM, PY P. amethystina Paraguay 24°05'00"S 055°30'00"W 4739 BM, G, K, W P. amethystina Peru 12°52'01"S 072°32'46"W 2218 CUZ, MO P.caerulea Argentina 35°35'15"S 058°40'21"W 13808 MO P.caerulea Argentina 34°21'00"S 058°36'00"W 2657 MO P.caerulea Argentina 34°58'00"S 058°22'00"W 573 MO P.caerulea Argentina 35°34'00"S 060°21'00"W 45 MO P.caerulea Argentina 34°40'00"S 058°40'00"W s.n. MO P.caerulea Argentina 37°50'00"S 058°15'00"W 17080 MA P.caerulea Argentina 33°17'56"S 060°14'05"W 472 MO P.caerulea Argentina 34°14'03"S 058°53'10"W 2077 MO P.caerulea Argentina 34°49'03"S 058°04'21"W 2261 MO P.caerulea Argentina 36°57'13"S 056°58'34"W 1850 MO P.caerulea Argentina 34°51'32"S 058°03'15"W 35 MO P.caerulea Argentina 34°55'53"S 057°56'56"W 32 MO P.caerulea Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 159 US P.caerulea Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 151 G P.caerulea Argentina 31°40'00"S 065°14'00"W 4965 G P.caerulea Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 174 B, BR, G, GOET, W P.caerulea Argentina 33°10'00"S 065°00'00"W 1121 MO P.caerulea Argentina 31°55'00"S 064°15'00"W 4166 MO P.caerulea Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 4791 G P.caerulea Argentina 31°18'00"S 064°20'00"W 540 CORD P.caerulea Argentina 31°18'00"S 064°18'00"W 794 CORD P.caerulea Argentina 31°24'00"S 064°31'00"W 956 MO P.caerulea Argentina 31°19'48"S 063°37'12"W 9122 G P.caerulea Argentina 31°19'48"S 063°37'12"W 9754 G P.caerulea Argentina 31°19'48"S 063°37'12"W 14003 G P.caerulea Argentina 31°19'48"S 063°37'12"W 14689 G P.caerulea Argentina 31°50'00"S 064°51'00"W 222 P P.caerulea Argentina 29°12'00"S 058°05'00"W s.n. G P.caerulea Argentina 27°19'00"S 058°35'00"W 240 PH P.caerulea Argentina 28°31'00"S 057°10'00"W 3598 ASU P.caerulea Argentina 27°28'00"S 058°50'00"W 41905 ASU, MO P.caerulea Argentina 27°58'00"S 058°02'00"W 2803 MO P.caerulea Argentina 28°42'00"S 058°06'00"W 8287 SI P.caerulea Argentina 28°42'00"S 058°06'00"W 8287 CTES P.caerulea Argentina 28°18'39"S 057°09'48"W 1267 CTES P.caerulea Argentina 34°34'34"S 058°24'31"W 30 US P.caerulea Argentina 30°27'00"S 058°44'00"W 278 MO P.caerulea Argentina 26°00'00"S 058°38'00"W 2515 GH, US P.caerulea Argentina 25°17'00"S 057°43'00"W 1025 WIS P.caerulea Argentina 24°48'00"S 059°40'00"W 2324 MO P.caerulea Argentina 25°17'00"S 057°43'00"W 1556 MO P.caerulea Argentina 25°07'00"S 058°25'00"W 30327 CTES P.caerulea Argentina 25°10'00"S 058°10'00"W 2557 BAB P.caerulea Argentina 25°10'00"S 058°10'00"W 2641 BAB

305

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P.caerulea Argentina 24°07'00"S 065°17'00"W 22348 MO P.caerulea Argentina 23°12'00"S 065°21'00"W 3510 MO P.caerulea Argentina 24°22'30"S 065°18'00"W 34797 MO P.caerulea Argentina 29°55'00"S 067°19'00"W 90 G P.caerulea Argentina 27°23'00"S 055°02'00"W 704 ASU P.caerulea Argentina 27°28'00"S 055°21'00"W s.n. H P.caerulea Argentina 27°23'00"S 055°53'00"W 4614 US P.caerulea Argentina 27°55'00"S 055°46'00"W 2317 CTES P.caerulea Argentina 28°05'00"S 055°42'00"W 1133 MO, SI P.caerulea Argentina 28°05'00"S 055°42'00"W 1137 SI P.caerulea Argentina 27°06'00"S 054°59'00"W 330 SI P.caerulea Argentina 27°28'00"S 055°40'00"W 1745 SI P.caerulea Argentina 27°32'00"S 055°35'00"W 2235 LIL P.caerulea Argentina 27°28'00"S 055°40'00"W 2868 MO, SI P.caerulea Argentina 27°29'00"S 055°44'00"W 6910 MO, SI P.caerulea Argentina 27°29'00"S 055°50'00"W 1334 BAB P.caerulea Argentina 26°23'00"S 054°40'00"W 917 LIL P.caerulea Argentina 26°45'00"S 054°18'00"W 3951 LL P.caerulea Argentina 25°34'00"S 054°34'00"W 10196 LP P.caerulea Argentina 27°38'00"S 055°30'00"W 15937 CTES P.caerulea Argentina 26°58'00"S 055°07'00"W 10679 LIL, P, W P.caerulea Argentina 27°09'32"S 055°33'20"W 4897 CTES, GH, LIL P.caerulea Argentina 27°52'27"S 055°08'06"W 61 BAB P.caerulea Argentina 26°41'00"S 053°55'00"W 1562 SI P.caerulea Argentina 24°43'00"S 065°29'00"W 5092 MA P.caerulea Argentina 24°30'00"S 065°20'00"W 2155 MO P.caerulea Argentina 22°08'00"S 063°57'00"W 7630 US P.caerulea Argentina 30°00'50"S 068°45'07"W 1725 HUA P.caerulea Argentina 30°38'00"S 067°28'00"W 5981 BAB P.caerulea Argentina 29°30'42"S 059°45'50"W 882 MO P.caerulea Argentina 29°09'00"S 059°39'00"W 855 US P.caerulea Argentina 26°56'00"S 065°21'00"W 4348 MO P.caerulea Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W s.n. MO, P P.caerulea Bolivia 17°23'00"S 066°09'00"W s.n. LPB P.caerulea Bolivia 16°31'00"S 068°10'00"W 1326 LPB, MO, SI P.caerulea Bolivia 16°33'00"S 068°04'00"W 11756 MO P.caerulea Bolivia 21°54'00"S 063°39'00"W 407 LIL P.caerulea Brasil 29°37'00"S 053°26'00"W 4664 MO P.caerulea Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. MO P.caerulea Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. W P.caerulea Brasil 04°12'00"S 039°08'00"W 2137 MG P.caerulea Brasil 21°53'00"S 046°21'00"W III 636 K, S, US P.caerulea Brasil 21°56'00"S 046°23'00"W 4492 MO, S P.caerulea Brasil 21°41'00"S 043°13'00"W 636(III) S P.caerulea Brasil 25°29'30"S 049°53'35"W 43558 MO P.caerulea Brasil 23°54'00"S 051°18'00"W 17569 MO P.caerulea Brasil 25°52'40"S 050°49'16"W 3037 S, US P.caerulea Brasil 25°23'00"S 051°27'00"W 11066 S P.caerulea Brasil 28°16'48"S 053°30'19"W 600 GH, U, W P.caerulea Brasil 30°02'00"S 051°13'00"W 245 S, US

306

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P.caerulea Brasil 30°02'00"S 051°13'00"W s.n. W P.caerulea Brasil 28°55'00"S 055°41'00"W 251 MO P.caerulea Brasil 30°05'00"S 051°08'00"W 274 MO P.caerulea Brasil 30°02'00"S 051°12'00"W A.945 MO P.caerulea Brasil 31°44'00"S 053°35'00"W 11444 MO P.caerulea Brasil 28°55'00"S 055°41'00"W 251 MO P.caerulea Brasil 30°07'00"S 051°58'00"W 4548 MA P.caerulea Brasil 29°30'00"S 054°38'00"W 2169 MA P.caerulea Brasil 27°14'00"S 051°58'00"W 12948 MO P.caerulea Brasil 26°38'00"S 051°01'00"W 9371 S P.caerulea Chile 36°43'30"S 073°35'00"W 382 MA P.caerulea Chile 36°43'00"S 073°07'00"W 443 G, W P.caerulea Honduras 15°13'30"N 086°15'30"W 2603 EAP P.caerulea Honduras 15°13'30"N 086°15'30"W 4105 EAP P.caerulea Mexico 23°37'00"N 102°34'30"W 949 MO P.caerulea Mexico 23°37'00"N 102°34'30"W s.n. P P.caerulea Mexico 19°40'00"N 099°00'00"W 136 P P.caerulea Mexico 20°28'48"N 098°31'12"W 782 CR, MO P.caerulea Paraguay 25°39'00"S 057°01'00"W 335 MA P.caerulea Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W s.n. NY P.caerulea Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 2841 MO P.caerulea Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W s.n. S P.caerulea Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W s.n. US P.caerulea Paraguay 24°56'00"S 057°42'00"W 44-A MO P.caerulea Paraguay 25°15'00"S 054°47'00"W 4942 US P.caerulea Paraguay 22°21'00"S 060°02'00"W 18175 MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 055°50'00"W 9424 G, P, W P.caerulea Paraguay 25°02'00"S 056°18'00"W 8849 CTES P.caerulea Paraguay 25°15'00"S 055°55'00"W 23747 AS, MO P.caerulea Paraguay 24°07'49"S 055°20'00"W 55084 MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°28'00"W 23173 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°38'00"S 057°28'00"W 33506 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°35'00"S 057°33'00"W 33613 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°33'00"S 057°34'00"W 33751 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°34'00"S 057°33'00"W 33785 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°34'00"S 057°33'00"W 33824 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°36'00"S 057°34'00"W 33933 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°32'00"S 057°32'00"W 34101 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°36'00"S 057°34'00"W 34173 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°36'00"S 057°34'00"W 34208 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°36'00"S 057°35'00"W 34270 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°36'00"S 057°35'00"W 34279 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°38'00"S 057°37'00"W 34707 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°33'00"S 057°34'00"W 35448 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 23623 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°12'00"S 057°32'00"W 31958 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 31535 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 23333 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°30'00"W 25407 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°35'00"W 29545 AS, MO

307

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P.caerulea Paraguay 25°38'00"S 057°28'00"W 32793 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°40'00"S 057°26'00"W 33150 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°38'00"S 057°28'00"W 33339 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°40'00"S 057°27'00"W 33380 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°40'00"S 057°26'00"W 28165 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°40'00"S 057°30'00"W 32715 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 30845 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°28'00"W 18516 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°28'00"W 24938 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 29231 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°28'00"W 23059 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 29273 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°23'00"S 057°16'00"W 12319 C, G, MO P.caerulea Paraguay 25°16'00"S 057°34'00"W 582 FCQ P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°32'00"W 20 MA P.caerulea Paraguay 25°23'00"S 057°16'00"W 12309b G, GH, US P.caerulea Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W 141 NY P.caerulea Paraguay 25°10'00"S 057°25'00"W 1630 MO P.caerulea Paraguay 25°16'00"S 057°19'00"W 8924 S P.caerulea Paraguay 25°19'00"S 056°49'00"W 1240 G, P P.caerulea Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 16599 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 16607 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°08'00"S 057°15'00"W 20212 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°08'00"S 057°16'00"W 20252 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°08'00"S 057°12'00"W 19118 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°08'00"S 057°15'00"W 17173 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 19866 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 17331 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°45'00"S 056°25'00"W 14890 FCQ, MO P.caerulea Paraguay 25°45'00"S 056°25'00"W 14190 FCQ, MO P.caerulea Paraguay 25°45'00"S 056°25'00"W 14201 FCQ, MO P.caerulea Paraguay 25°45'00"S 056°25'00"W 14222 FCQ, MO P.caerulea Paraguay 27°23'04"S 057°09'46"W 55761 MO P.caerulea Paraguay 26°34'12"S 058°05'39"W 729 MO P.caerulea Paraguay 25°29'00"S 057°14'00"W 2203 G P.caerulea Paraguay 25°38'00"S 057°09'00"W A 3581 S P.caerulea Paraguay 20°21'00"S 061°35'00"W 2204 in part G P.caerulea Paraguay 25°53'00"S 057°23'00"W 36778 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 31217 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°36'00"S 057°25'00"W 25149 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°37'00"S 057°25'00"W 16949 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 28657 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 17808 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°20'00"S 057°28'00"W 21416 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°01'00"S 057°30'00"W 51980 MO P.caerulea Paraguay 24°10'00"S 058°20'00"W 51998 MO P.caerulea Paraguay 25°01'56"S 057°55'16"W 41641 AS, MO P.caerulea Paraguay 25°05'00"S 057°50'00"W 43181 MO, PY P.caerulea Paraguay 24°55'41"S 058°10'42"W 40521 AS, MO P.caerulea Paraguay 23°30'38"S 058°46'56"W 57101 MO

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P.caerulea Paraguay 23°30'38"S 058°46'56"W 57102 MO P.caerulea Paraguay 23°30'38"S 058°46'56"W 57167 MO P.caerulea Paraguay 23°30'38"S 058°46'56"W 57207 MO P.caerulea Paraguay 24°58'00"S 057°34'00"W B35 MA P.caerulea Paraguay 23°32'33"S 057°54'07"W 96 MO P.caerulea Paraguay 24°39'00"S 056°26'00"W 4268 G, P P.caerulea EEUU States 45°10'01"N 119°17'31"W s.n. MO P.caerulea EEUU States 45°10'01"N 119°17'31"W s.n MO P.caerulea EEUU States 45°10'01"N 119°17'31"W s.n. MO P.caerulea EEUU States 45°10'01"N 119°17'31"W s.n. MO P.caerulea EEUU States 45°10'01"N 119°17'31"W s.n. MO P.caerulea EEUU States 45°10'01"N 119°17'31"W s.n. MO P.caerulea EEUU States 30°26'34"N 091°05'44"W 750570 MO P.caerulea Uruguay 32°30'00"S 056°00'00"W s.n. US P.caerulea Uruguay 32°30'00"S 056°00'00"W 2291 P P.caerulea Uruguay 32°30'00"S 056°00'00"W s.n. P P.caerulea Uruguay 32°29'00"S 058°13'00"W 233 GOET P.caerulea Uruguay 32°29'00"S 058°13'00"W 318 GOET P.caerulea Uruguay 34°43'00"S 055°57'00"W 5683 F, GH, MO P.caerulea Uruguay 34°43'00"S 055°57'00"W 718a MO P.caerulea Uruguay 34°43'00"S 055°57'00"W 718b G, U P.caerulea Uruguay 34°51'00"S 056°10'00"W s.n. P P.caerulea Uruguay 30°54'00"S 055°31'00"W 4455 US P.caerulea Uruguay 34°22'00"S 053°46'00"W 718 GOET P.caerulea Uruguay 34°22'00"S 053°46'00"W 1491 GOET, MO P. cincinnata Argentina 26°04'22"S 058°48'16"W 227 MO P. cincinnata Argentina 24°04'00"S 064°48'00"W 236 MO P. cincinnata Argentina 24°04'00"S 064°48'00"W 2751 SI P. cincinnata Argentina 24°04'00"S 064°48'00"W 1505 MO P. cincinnata Argentina 24°04'00"S 064°48'00"W 3590 SI P. cincinnata Argentina 24°04'00"S 064°48'00"W 814 MO P. cincinnata Argentina 22°32'00"S 063°49'00"W 7629 US P. cincinnata Argentina 22°32'00"S 063°49'00"W 6973 BAB P. cincinnata Argentina 22°05'57"S 063°44'29"W 2731 SI P. cincinnata Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W s.n. BM P. cincinnata Bolivia 14°50'00"S 064°54'00"W 175 LPB P. cincinnata Bolivia 19°37'00"S 064°05'00"W 31258 CTES, MO, SI P. cincinnata Bolivia 20°47'11"S 064°04'35"W 7110 HSB, MO, NY, SI P. cincinnata Bolivia 20°47'11"S 064°04'34"W 1866 HSB, MO P. cincinnata Bolivia 19°49'00"S 064°07'26"W 154 HSB, MO P. cincinnata Bolivia 20°41'46"S 063°54'28"W 257 HSB, MO P. cincinnata Bolivia 19°52'47"S 063°44'16"W 597 HSB, MO, US P. cincinnata Bolivia 19°21'26"S 063°50'56"W 1128 HSB, MO P. cincinnata Bolivia 19°53'00"S 063°45'00"W 248 MO P. cincinnata Bolivia 19°00'00"S 064°30'00"W 48 MO P. cincinnata Bolivia 16°55'00"S 066°45'00"W 440 K P. cincinnata Bolivia 17°49'05"S 064°32'05"W 48214 NY P. cincinnata Bolivia 17°46'00"S 063°04'00"W 36145 MO, NY, USZ P. cincinnata Bolivia 17°18'00"S 063°02'00"W 23 K P. cincinnata Bolivia 20°01'00"S 063°13'00"W 1199 B, S

309

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. cincinnata Bolivia 18°02'23"S 064°25'14"W 7879 MA, MO P. cincinnata Bolivia 19°31'00"S 062°29'00"W 2592 MO P. cincinnata Bolivia 17°48'00"S 063°10'00"W 636 B P. cincinnata Bolivia 17°52'25"S 063°10'45"W 158 MO P. cincinnata Bolivia 17°37'00"S 063°07'00"W 47441 MO, NY P. cincinnata Bolivia 17°46'00"S 063°04'00"W 37020 LPB, MO P. cincinnata Bolivia 17°47'26"S 063°10'29"W 16173 USZ P. cincinnata Bolivia 17°57'00"S 063°10'00"W 5 USZ P. cincinnata Bolivia 17°45'00"S 063°01'00"W 2565 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 16°32'00"S 063°45'00"W 2767 GH, MO, USZ P. cincinnata Bolivia 19°23'44"S 062°32'12"W 47 USZ P. cincinnata Bolivia 20°26'00"S 063°30'00"W 1547 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°52'00"S 062°26'00"W 403 MO P. cincinnata Bolivia 19°35'00"S 062°35'00"W 4 LPB P. cincinnata Bolivia 20°15'00"S 063°10'00"W 61 HUA, LPB, MO P. cincinnata Bolivia 18°52'00"S 062°26'00"W 1629 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°13'00"S 064°05'00"W 4512 USZ P. cincinnata Bolivia 17°52'00"S 060°15'00"W 4661 NY, USZ P. cincinnata Bolivia 18°08'00"S 064°15'00"W 9438 LPB P. cincinnata Bolivia 18°02'00"S 064°27'00"W 46585 MO, NY, USZ P. cincinnata Bolivia 18°00'00"S 064°00'00"W 37 HUA, MO P. cincinnata Bolivia 17°50'00"S 064°18'00"W 4045 LPB, MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°04'00"S 064°24'00"W 17958 LPB, MO P. cincinnata Bolivia 16°10'00"S 062°00'00"W 13094 USZ P. cincinnata Bolivia 16°46'00"S 061°49'00"W 323 LPB, MO, USZ P. cincinnata Bolivia 16°43'00"S 061°55'00"W 731 USZ P. cincinnata Bolivia 16°02'00"S 062°00'00"W 16198 USZ P. cincinnata Bolivia 18°20'00"S 064°10'00"W 36551 LPB, MO, NY, USZ P. cincinnata Bolivia 18°52'00"S 063°57'30"W 38488 MO, NY, USZ P. cincinnata Bolivia 18°56'00"S 064°08'00"W 847 LPB, USZ P. cincinnata Bolivia 18°31'00"S 064°18'00"W 5 USZ P. cincinnata Bolivia 18°31'00"S 064°18'00"W 8247 LPB, USZ P. cincinnata Bolivia 18°49'53"S 063°53'09"W 6799 USZ P. cincinnata Bolivia 18°31'00"S 064°18'00"W 405 LPB, MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°59'18"S 064°05'55"W 4394 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°13'08"S 064°11'39"W 6433 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°51'52"S 063°57'19"W 6663 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°12'54"S 064°24'40"W 2 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°18'22"S 064°08'15"W 5176 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°24'28"S 064°11'23"W 5292 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°18'17"S 064°08'20"W 3639 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 18°21'10"S 064°09'26"W 4193 MO, USZ P. cincinnata Bolivia 16°27'33"S 060°58'18"W 7313 MO P. cincinnata Bolivia 19°45'00"S 063°46'00"W 1354 MO, NY P. cincinnata Bolivia 17°28'13"S 062°59'34"W 53627 LPB, MO, NY, USZ P. cincinnata Bolivia 21°13'00"S 063°25'00"W 39223 CTES, LPB P. cincinnata Bolivia 22°06'00"S 064°15'00"W 2701 B, G P. cincinnata Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 31 GB P. cincinnata Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. W P. cincinnata Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. MO

310

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. cincinnata Brazil 09°15'00"S 036°25'00"W 7136 MO P. cincinnata Brazil 12°27'34"S 041°03'42"W 5209 MO P. cincinnata Brazil 11°27'00"S 041°48'00"W 69 MO P. cincinnata Brazil 11°38'00"S 041°16'00"W 5367 MO P. cincinnata Brazil 15°24'02"S 041°14'08"W 11624 MO P. cincinnata Brazil 14°00'00"S 040°10'00"W 49971 HUA, MO P. cincinnata Brazil 07°16'00"S 039°25'00"W 583 S P. cincinnata Brazil 06°31'00"S 040°41'00"W 950 F P. cincinnata Brazil 07°25'00"S 039°15'00"W 50060 HUA, MO P. cincinnata Brazil 07°16'00"S 039°39'00"W 50153 HUA, MO P. cincinnata Brazil 07°14'03"S 039°24'34"W 4325 US P. cincinnata Brazil 03°43'02"S 038°32'35"W 2518 US P. cincinnata Brazil 14°28'00"S 046°29'00"W 39384 MO P. cincinnata Brazil 14°24'20"S 046°26'47"W 42019 MO P. cincinnata Brazil 14°22'06"S 046°26'23"W 14941 MO P. cincinnata Brazil 15°35'00"S 056°05'00"W A3483 MO, S P. cincinnata Brazil 19°00'33"S 057°39'12"W 3041 S, US P. cincinnata Brazil 15°35'00"S 056°05'00"W 1220B S P. cincinnata Brazil 15°35'00"S 056°05'00"W 184 B P. cincinnata Brazil 15°35'00"S 056°06'00"W 218 B P. cincinnata Brazil 15°35'00"S 056°05'00"W 917 B, BM P. cincinnata Brazil 15°35'00"S 056°05'00"W 961 B, BM, NY P. cincinnata Brazil 19°00'33"S 057°39'12"W 780 BM P. cincinnata Brazil 20°26'34"S 054°38'47"W 10860 US P. cincinnata Brazil 22°06'32"S 056°31'16"W 49196 MO P. cincinnata Brazil 19°00'33"S 057°39'12"W 11111 US P. cincinnata Brazil 20°56'00"S 043°55'00"W 12740 B, C, G, P P. cincinnata Brazil 18°22'00"S 043°32'00"W 5149 MO P. cincinnata Brazil 19°51'00"S 044°44'00"W 10828 HUA, MO P. cincinnata Brazil 20°10'00"S 042°10'00"W 49690 HUA, MO P. cincinnata Brazil 00°02'00"S 049°35'00"W 2483 MG P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°25'53"W 4498 MO P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°08'22"W 2649 MO P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°25'53"W 4395 MO P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°25'53"W 4692 MO P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°25'53"W 4372 MO P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°25'53"W 5221 MO P. cincinnata Brazil 07°11'10"S 037°25'53"W 43 MO P. cincinnata Brazil 08°37'00"S 037°10'00"W 442 MO P. cincinnata Brazil 09°26'00"S 040°45'00"W 2358 US P. cincinnata Brazil 08°07'05"S 035°17'29"W 4228 US P. cincinnata Brazil 08°31'00"S 035°41'00"W 31 MO P. cincinnata Brazil 07°07'00"S 041°15'00"W 7165 B P. cincinnata Brazil 28°40'03"S 052°51'58"W 2516 US P. cincinnata Brazil 28°40'03"S 052°51'58"W 2548 US P. cincinnata Brazil 22°26'00"S 050°36'00"W 5940 MO P. cincinnata Brazil 20°37'00"S 049°38'00"W 3007 MO P. cincinnata Colombia 07°37'35"N 072°36'14"W 20879 A, GH, MO, NY, US P. cincinnata Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 2271 S P. cincinnata Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W A1755 S

311

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. cincinnata Paraguay 25°23'00"S 057°20'00"W 4804 B, BM, G, K P. cincinnata Paraguay 25°30'00"S 057°09'00"W 3339 B, BA, G, P, W P. cincinnata Paraguay 20°13'46"S 058°10'06"W 1357 MO P. cincinnata Paraguay 20°35'04"S 060°05'12"W 50175 AS, MO P. cincinnata Paraguay 20°35'04"S 060°05'12"W 50183 AS, MO P. cincinnata Paraguay 19°58'49"S 059°44'25"W 50330 AS, MO P. cincinnata Paraguay 20°33'24"S 059°50'28"W 50365 AS, MO P. cincinnata Paraguay 20°27'32"S 059°47'25"W 50426 AS, MO P. cincinnata Paraguay 22°07'45"S 056°30'00"W 53581 AS, MO P. cincinnata Paraguay 23°13'00"S 056°24'00"W 195 MO P. cincinnata Paraguay 22°37'45"S 056°04'00"W 56305 MO P. cincinnata Paraguay 22°37'45"S 056°04'00"W 56340 MO P. cincinnata Paraguay 22°37'45"S 056°04'00"W 56305 MO P. cincinnata Paraguay 22°39'00"S 056°01'00"W 7854 MO P. cincinnata Paraguay 22°09'00"S 056°33'00"W 6246 MO P. cincinnata Paraguay 22°48'00"S 059°35'00"W 2368 CTES, MO P. cincinnata Paraguay 20°54'21"S 061°50'27"W 42251 AS, MO P. cincinnata Paraguay 21°10'00"S 059°40'00"W 1454 MO, PY P. cincinnata Paraguay 25°37'00"S 057°27'00"W 32971 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°38'00"S 057°28'00"W 33342 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°40'00"S 057°27'00"W 33465 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 31755 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°20'00"S 057°35'00"W 27654 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°32'00"W 31956 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°35'00"S 057°32'00"W 32118 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°40'00"S 057°29'00"W 28032 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°37'00"S 057°31'00"W 28078 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 31603 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°30'00"S 057°35'00"W 29548 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°20'00"S 057°35'00"W 25447 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°36'00"S 057°36'00"W 36390 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°40'00"S 057°29'00"W 28488 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 29422 AS, MO P. cincinnata Paraguay 27°24'00"S 057°32'00"W 18786 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°40'00"S 057°30'00"W 32699 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 30929 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°34'00"S 057°33'00"W 33822 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°36'00"S 057°34'00"W 33964 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°32'00"S 057°32'00"W 34100 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°36'00"S 057°35'00"W 34278 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°36'00"S 057°36'00"W 34548 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°37'00"S 057°36'00"W 34581 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°38'00"S 057°37'00"W 34668 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°33'00"S 057°34'00"W 35467 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°38'00"S 057°37'00"W 35583 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°23'00"S 057°20'00"W 616 MA P. cincinnata Paraguay 25°11'00"S 057°32'00"W 877 MO P. cincinnata Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W 256 MO P. cincinnata Paraguay 22°41'24"S 057°21'55"W 31314 MO, PY P. cincinnata Paraguay 23°02'00"S 057°41'00"W 3879 MO

312

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. cincinnata Paraguay 22°10'09"S 056°30'59"W 54224 MO P. cincinnata Paraguay 22°17'46"S 056°31'38"W 54260 MO P. cincinnata Paraguay 22°17'46"S 056°31'38"W 54312 MO P. cincinnata Paraguay 22°17'46"S 056°31'38"W 54313 MO P. cincinnata Paraguay 22°13'29"S 057°18'05"W 54502 MO P. cincinnata Paraguay 22°49'00"S 057°25'00"W 37243 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 22°44'00"S 057°28'00"W 38810 AS, MO P. cincinnata Paraguay 22°45'49"S 057°21'12"W 41510 AS, MO P. cincinnata Paraguay 22°13'40"S 057°18'02"W 53591 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°07'00"S 057°19'00"W 35912 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 27122 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 27138 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 27016 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°07'00"S 057°30'00"W 16691 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°15'00"S 057°04'00"W 3671 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 7641 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°08'00"S 057°18'00"W 22205 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°08'00"S 057°18'00"W 20312 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°15'00"S 057°04'00"W 3797 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 20408 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 28772 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 26078 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°08'00"S 057°18'00"W 19290 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 7421 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°09'00"S 057°25'00"W 28787 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°08'00"S 057°15'00"W 19177 AS, MO P. cincinnata Paraguay 26°28'59"S 057°04'10"W 55390 MO P. cincinnata Paraguay 20°48'00"S 061°54'00"W 1684 MO, PY P. cincinnata Paraguay 25°17'00"S 057°25'00"W 17940 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°35'00"S 057°11'00"W 3579 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°25'00"S 057°07'00"W 9906 FCQ, HUA, MO P. cincinnata Paraguay 25°54'00"S 057°09'00"W 8331 MO, PY P. cincinnata Paraguay 25°25'00"S 057°07'00"W 9944 FCQ, MO P. cincinnata Paraguay 25°34'00"S 057°05'00"W 2141 MO P. cincinnata Paraguay 20°21'00"S 061°35'00"W 2204 in part G P. cincinnata Paraguay 23°05'00"S 059°40'00"W 181 MO P. cincinnata Paraguay 22°59'07"S 059°07'52"W 46065 AS, MO P. cincinnata Paraguay 25°02'00"S 057°54'00"W 38358 MO, PY P. cincinnata Venezuela 06°35'00"N 066°35'00"W s.n. W P. cincinnata Venezuela 06°35'00"N 066°35'00"W 6 US P. cincinnata Venezuela 10°04'26"N 069°19'22"W 11183 GH, NY, US P. cincinnata Venezuela 10°04'26"N 069°19'22"W 10998A MO P. cincinnata Venezuela 07°50'30"N 072°27'30"W 120232 MO P. cincinnata Venezuela 09°41'47"N 070°17'55"W 1140 F P. cincinnata Venezuela 09°42'00"N 070°17'00"W 264 MY, U P. edulis f. edulis Caribbean 18°04'00"N 076°40'00"W C15534 BKL, MIN P. edulis f. edulis Costa Rica 10°09'36"N 084°15'36"W 91 CR P. edulis f. edulis Costa Rica 09°55'48"N 084°06'00"W 90 CR P. edulis f. edulis Costa Rica 10°14'24"N 084°44'24"W 681 CR P. edulis f. edulis Costa Rica 10°00'36"N 083°45'36"W 6997 CR

313

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. edulis f. edulis Costa Rica 10°57'00"N 084°39'36"W 10850 CR P. edulis f. edulis Costa Rica 09°46'12"N 083°57'00"W 79110 CR P. edulis f. edulis Costa Rica 10°03'22"N 084°04'58"W 3325 CR P. edulis f. edulis Costa Rica 09°06'41"N 083°03'48"W 9996 INB, MO P. edulis f. edulis Costa Rica 08°54'11"N 082°46'22"W 2059 MO P. edulis f. edulis Costa Rica 09°55'48"N 084°04'12"W 17459 CR, GH P. edulis f. edulis Costa Rica 09°49'48"N 084°06'36"W 1986 CR P. edulis f. edulis El Salvador 14°25'00"N 089°21'00"W 823 B, EAP, LAGU, MO P. edulis f. edulis Hawaiian Isl 21°56'00"N 159°33'00"W 2542 MO P. edulis f. edulis Hawaiian Isl 21°26'00"N 158°05'00"W 10677 MO P. edulis f. edulis Hawaiian Isl 21°32'00"N 157°55'00"W s.n. MO P. edulis f. edulis Honduras 14°07'47"N 087°09'52"W 45045 TEFH P. edulis f. edulis Honduras 14°07'47"N 087°09'52"W 260 CR, TEFH P. edulis f. edulis Honduras 14°34'31"N 086°43'11"W 117 TEFH P. edulis f. edulis Mexico 17°43'20"N 096°32'27"W 22 MO P. edulis f. edulis Mexico 23°10'00"N 099°18'00"W 25 F P. edulis f. edulis Mexico 23°03'00"N 099°13'48"W 367 NY, TEX P. edulis f. edulis Venezuela 08°37'18"N 071°03'53"W 15483 FI P. edulis f. edulis Venezuela 09°21'00"N 070°18'00"W 7306 MO P. edulis f. edulis Venezuela 09°14'38"N 070°13'12"W 301 NY P. edulis f. flavicarpa Bolivia 17°48'00"S 063°12'00"W 3710 LPB, MO, USZ P. edulis f. flavicarpa Brazil 14°06'00"S 039°00'00"W 3060 F P. edulis f. flavicarpa Brazil 23°18'19"S 045°57'57"W 15512 MO, S P. edulis f. flavicarpa Caribbean 18°27'09"N 066°32'20"W 8383 MO P. edulis f. flavicarpa Caribbean 18°20'00"N 064°45'00"W 834 VIST P. edulis f. flavicarpa Colombia 06°33'00"N 075°49'00"W 3649 HUA P. edulis f. flavicarpa Colombia 08°07'00"N 076°37'00"W 4938 MO P. edulis f. flavicarpa Colombia 06°43'00"N 074°00'00"W 1487 HUA, MO P. edulis f. flavicarpa Costa Rica 10°25'53"N 084°00'13"W 1102 DUKE P. edulis f. flavicarpa Costa Rica 09°46'48"N 084°08'24"W 4401 CR P. edulis f. flavicarpa Ecuador 02°01'10"S 079°57'12"W 11147 MO P. edulis f. flavicarpa Ecuador 00°00'31"S 078°58'12"W 66 TEX P. edulis f. flavicarpa Ecuador 00°21'00"S 079°22'00"W 40026 AAU, HUA, MO P. edulis f. flavicarpa Hawaiian Isl 21°24'19"N 157°49'44"W 17333 ASU P. edulis f. flavicarpa Hawaiian Isl 22°13'00"N 159°34'39"W 44945 MO P. edulis f. flavicarpa Hawaiian Isl 21°55'56"N 159°31'25"W 5568 MO, PTBG P. edulis f. flavicarpa Hawaiian Isl 21°56'04"N 159°31'26"W 5211 MO, PTBG P. edulis f. flavicarpa Honduras 14°42'00"N 087°58'00"W 207 TEFH P. edulis f. flavicarpa Honduras 14°02'00"N 086°35'00"W 61 TEFH P. edulis f. flavicarpa Mexico 19°31'12"N 104°13'48"W 566 WIS P. edulis f. flavicarpa Mexico 19°41'18"N 104°48'12"W 459 MIN P. edulis f. flavicarpa Mexico 20°02'57"N 097°32'24"W 1433 MO P. edulis f. flavicarpa Nicaragua 13°03'14"N 086°00'07"W 29878 HULE, MO P. edulis f. flavicarpa Peru 04°28'00"S 078°10'00"W 1571 MO P. edulis f. flavicarpa Peru 05°15'00"S 078°50'00"W 2283 MO P. edulis f. flavicarpa Peru 12°20'00"S 072°44'00"W 50955 MO P. edulis f. flavicarpa Peru 03°41'26"S 073°15'56"W 19995 MO P. edulis f. flavicarpa Peru 12°49'00"S 069°17'00"W 5139 HUA, MO P. edulis f. flavicarpa United States 22°06'24"N 159°40'00"W 721 MO P. edulis f. flavicarpa Venezuela 08°02'15"N 062°35'52"W 4970 MO

314

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. elegans Argentina 31°19'48"S 063°37'12"W 15474 G P. elegans Argentina 28°04'00"S 055°41'00"W 6746 SI P. elegans Argentina 28°01'00"S 058°05'00"W 47777 CTES P. elegans Argentina 28°05'00"S 055°42'00"W 7147 MO P. elegans Argentina 27°29'00"S 055°50'00"W 7885 LIL P. elegans Brazil 28°56'00"S 055°55'00"W 248 MO P. elegans Brazil 30°30'44"S 053°29'29"W 1998 MO P. elegans Brazil 30°02'00"S 051°14'00"W 152 S, US P. elegans Brazil 31°46'00"S 052°20'00"W 105 MA P. elegans Brazil 30°02'00"S 051°12'00"W 246 SP P. elegans Uruguay 30°46'00"S 057°42'00"W 3385 CORD, LP P. gibertii Argentina 27°29'00"S 058°56'00"W 2231 US P. gibertii Argentina 30°21'28"S 059°39'07"W 27021 MO, MU, SI P. gibertii Brazil 19°36'30"S 057°26'00"W 11093 B, US P. gibertii Brazil 02°31'00"S 054°57'00"W 1448 MG P. gibertii Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 1505 NY P. gibertii Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 23497 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 27486 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°22'00"S 057°33'00"W 18707 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°44'00"S 057°44'00"W 35437 AS, MO P. gibertii Paraguay 23°05'00"S 057°40'00"W 1377 FCQ P. gibertii Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 16602 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°04'07"S 057°14'04"W 58593 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°07'00"S 057°30'00"W 16718 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 19351 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 20411 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 17333 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°07'00"S 057°30'00"W 19460 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°07'00"S 057°30'00"W 19464 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°07'00"S 057°30'00"W 19484 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 17428 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W 2202 G, K P. gibertii Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 21649 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 28687 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°37'00"S 057°25'00"W 16936 AS, MO P. gibertii Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 17793 AS, MO P. gibertii Paraguay 23°29'43"S 058°36'34"W 58658 MO P. mooreana Argentina 34°34'00"S 058°24'00"W s.n. OXF P. mooreana Argentina 26°47'00"S 060°27'00"W 2047 US P. mooreana Argentina 27°05'00"S 061°05'00"W 9752 BM, F, GH, LP, MO, NY P. mooreana Argentina 24°20'00"S 061°50'00"W 1459 BAB P. mooreana Argentina 25°24'00"S 060°25'00"W 1362 BAB P. mooreana Argentina 24°21'00"S 061°48'00"W 6583 BAB, MO P. mooreana Argentina 24°28'00"S 061°48'00"W 6523 BAB P. mooreana Argentina 25°00'00"S 061°30'00"W 6424 BAB, MO P. mooreana Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 175 GOET, W P. mooreana Argentina 30°04'59"S 064°57'59"W 262 GOET P. mooreana Argentina 31°24'00"S 064°20'00"W 199 GH, MO, PH P. mooreana Argentina 31°28'00"S 064°22'00"W 20065 MICH P. mooreana Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 4 B

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. mooreana Argentina 31°29'00"S 064°11'00"W 5060 G P. mooreana Argentina 31°29'00"S 064°11'00"W 7959 CORD P. mooreana Argentina 31°29'00"S 064°11'00"W 2302 G P. mooreana Argentina 31°25'00"S 064°11'00"W 11195 G, MO P. mooreana Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 3268 CORD P. mooreana Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 3289 CORD P. mooreana Argentina 31°18'00"S 064°20'00"W 493 CORD P. mooreana Argentina 31°18'00"S 064°20'00"W 1719 CORD P. mooreana Argentina 31°18'00"S 064°18'00"W 53 CORD P. mooreana Argentina 31°18'00"S 064°18'00"W 780 CORD P. mooreana Argentina 30°26'00"S 064°21'00"W 1628 CORD P. mooreana Argentina 30°26'00"S 064°21'00"W 3316 CORD P. mooreana Argentina 31°24'00"S 064°31'00"W 3089 CORD P. mooreana Argentina 31°23'00"S 064°29'00"W 5969 CORD P. mooreana Argentina 32°25'00"S 063°15'00"W 10334 CORD P. mooreana Argentina 29°46'00"S 063°45'00"W 11069 CORD P. mooreana Argentina 31°41'56"S 063°52'06"W 1297 CORD P. mooreana Argentina 31°41'56"S 063°52'06"W 979 CORD P. mooreana Argentina 30°42'00"S 062°00'00"W 17739 CORD P. mooreana Argentina 30°58'00"S 062°50'00"W 452 CORD P. mooreana Argentina 31°31'56"S 063°58'57"W 993 CORD P. mooreana Argentina 31°27'00"S 064°22'00"W 768 CORD P. mooreana Argentina 31°50'00"S 064°51'00"W 223 B, GH, P P. mooreana Argentina 31°50'00"S 064°51'00"W 224a B, P P. mooreana Argentina 23°43'00"S 061°48'00"W 6752 BAB, MO P. mooreana Argentina 24°42'00"S 060°36'00"W 8403 GH P. mooreana Argentina 29°20'00"S 066°20'00"W 15194 G P. mooreana Argentina 29°05'00"S 067°05'00"W 109 B P. mooreana Argentina 22°32'00"S 063°49'00"W 7628 US P. mooreana Argentina 22°56'02"S 064°10'20"W 22912 MO P. mooreana Argentina 22°56'02"S 064°10'20"W 22912 MO P. mooreana Argentina 22°16'00"S 062°42'00"W 471 SI P. mooreana Argentina 22°16'00"S 062°42'00"W 452 SI P. mooreana Argentina 22°16'00"S 062°42'00"W 462 SI P. mooreana Argentina 30°46'08"S 060°35'23"W 2410 MO P. mooreana Argentina 27°47'00"S 064°16'00"W 2524 BM, K P. mooreana Argentina 29°09'00"S 062°39'00"W 17820 CORD P. mooreana Argentina 29°59'06"S 062°06'43"W 10480 CORD P. mooreana Argentina 29°59'06"S 062°06'43"W 10408 CORD P. mooreana Bolivia 19°33'00"S 063°43'00"W 465 B, M P. mooreana Bolivia 21°54'00"S 062°54'00"W 1666 S P. mooreana Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 2130 B P. mooreana Paraguay 21°00'00"S 058°28'00"W 1012 MO P. mooreana Paraguay 22°03'15"S 059°57'14"W 57841 MO P. mooreana Paraguay 20°37'47"S 059°52'48"W 57947 MO P. mooreana Paraguay 21°43'00"S 060°54'00"W 38037 AS, MO P. mooreana Paraguay 23°28'00"S 060°07'00"W 703 MO P. mooreana Paraguay 22°20'00"S 060°05'00"W 1861 HUA, MO, PY P. mooreana Paraguay 21°45'00"S 060°57'00"W 39315 AS, MO P. mooreana Paraguay 23°00'00"S 059°45'00"W 1784 CTES, MO

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. mooreana Paraguay 22°21'00"S 060°02'00"W 2534 CTES P. mooreana Paraguay 22°02'20"S 060°36'50"W 4437 MO P. mooreana Paraguay 23°00'00"S 060°00'00"W s.n. K P. mooreana Paraguay 21°56'00"S 059°37'00"W 1167 MO P. mooreana Paraguay 21°48'00"S 061°41'00"W 206 GA, MO P. mooreana Paraguay 22°40'00"S 059°45'00"W 39363 AS, MO P. mooreana Paraguay 23°20'00"S 059°40'00"W 504 MO P. palmatisecta Argentina 24°44'00"S 061°49'00"W 6538 BAB P. palmatisecta Argentina 24°44'00"S 061°49'00"W 6546 BAB P. palmatisecta Argentina 30°48'00"S 065°10'00"W 136 B P. palmatisecta Argentina 30°44'00"S 064°48'00"W 824 CORD P. palmatisecta Argentina 29°48'00"S 064°43'00"W 11008 CORD P. palmatisecta Argentina 30°01'00"S 064°38'00"W 17160 CORD P. palmatisecta Argentina 30°06'00"S 063°56'00"W 1129 CORD P. palmatisecta Argentina 24°26'00"S 061°40'00"W 1474 BAB P. palmatisecta Argentina 30°32'00"S 065°58'00"W 9145 CORD P. palmatisecta Argentina 25°06'00"S 065°00'00"W 10294 US P. palmatisecta Argentina 24°22'48"S 066°29'15"W 6043 US P. palmatisecta Argentina 29°06'05"S 063°56'14"W 21763 CORD P. palmatisecta Argentina 28°18'00"S 064°12'00"W 21793 CORD, MO, SI P. palmatisecta Argentina 28°18'00"S 064°12'00"W 21524 CORD P. palmatisecta Argentina 28°02'00"S 064°47'00"W 17922 CORD P. palmatisecta Argentina 26°25'00"S 064°47'00"W 7555 US P. palmatisecta Argentina 26°24'00"S 064°47'00"W 7694 BM, GH, K, MO, US P. palmatisecta Argentina 26°30'00"S 064°55'00"W 12571 G P. palmatisecta Argentina 26°25'00"S 064°45'00"W 7522 F, US P. palmatisecta Bolivia 21°54'00"S 062°54'00"W 1568 S, US P. palmatisecta Paraguay 22°03'15"S 059°57'14"W 57798 MO P. palmatisecta Paraguay 22°03'15"S 059°57'14"W 57809 MO P. palmatisecta Paraguay 20°37'47"S 059°52'48"W 58074 MO P. palmatisecta Paraguay 20°27'32"S 059°47'25"W 50425 AS, MO P. palmatisecta Paraguay 22°01'49"S 060°36'52"W 49960 AS, MO P. palmatisecta Paraguay 21°27'00"S 061°30'00"W 2963 FCQ P. palmatisecta Paraguay 20°42'00"S 061°56'00"W 16405 MO, SI, US P. tenuifila Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 1034 US P. tenuifila Argentina 27°22'00"S 058°31'00"W 2076 MO P. tenuifila Argentina 25°13'00"S 058°07'00"W 30287 CTES P. tenuifila Argentina 25°06'00"S 058°16'00"W 30512 CTES P. tenuifila Argentina 24°14'46"S 065°05'17"W 3459 MO P. tenuifila Argentina 24°10'00"S 065°29'00"W 852 MO P. tenuifila Argentina 23°45'21"S 064°51'14"W 7078 MO P. tenuifila Argentina 23°45'21"S 064°51'14"W 7078 MO P. tenuifila Argentina 23°38'00"S 064°56'00"W 8780 SI P. tenuifila Argentina 23°43'00"S 064°30'00"W 2892 SI P. tenuifila Argentina 23°44'32"S 064°51'09"W 2864 MO P. tenuifila Argentina 23°40'00"S 064°26'00"W 3449 MO, SI P. tenuifila Argentina 24°16'00"S 064°14'00"W 8858 SI P. tenuifila Argentina 24°18'56"S 064°31'34"W 34872 MO P. tenuifila Argentina 25°54'49"S 054°37'08"W 3278 MO P. tenuifila Argentina 27°29'00"S 055°29'00"W 4619a US

317

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. tenuifila Argentina 26°54'59"S 054°12'18"W 4678 MO P. tenuifila Argentina 28°08'00"S 055°37'00"W 321 LIL P. tenuifila Argentina 27°02'15"S 055°02'01"W 352 MO, SI P. tenuifila Argentina 27°05'00"S 054°57'00"W 881 SI P. tenuifila Argentina 26°23'00"S 054°12'00"W 1310 SI P. tenuifila Argentina 25°47'00"S 054°03'00"W 1924 MO P. tenuifila Argentina 25°47'00"S 054°03'00"W 1924 SI P. tenuifila Argentina 27°08'00"S 053°55'00"W 2604 SI P. tenuifila Argentina 27°08'00"S 053°55'00"W 3117 SI P. tenuifila Argentina 26°54'59"S 054°12'18"W 5927 CTES, MO P. tenuifila Argentina 26°42'00"S 054°11'00"W 1810 SI P. tenuifila Argentina 27°08'00"S 053°55'00"W 3117 MO P. tenuifila Argentina 25°36'00"S 054°34'00"W 8303 S P. tenuifila Argentina 25°46'00"S 054°07'00"W 2010 SI P. tenuifila Argentina 27°05'00"S 054°57'00"W 289 MO, SI P. tenuifila Argentina 26°35'16"S 054°15'34"W 2067 SI P. tenuifila Argentina 27°29'00"S 055°08'00"W 526 CTES P. tenuifila Argentina 27°24'00"S 055°21'00"W 3466 SI P. tenuifila Argentina 27°31'02"S 054°58'59"W 3778 LIL P. tenuifila Argentina 26°36'00"S 054°06'00"W 1789 SI P. tenuifila Argentina 23°02'00"S 064°48'00"W 7193 MO P. tenuifila Argentina 23°06'40"S 064°52'17"W 33153 CTES P. tenuifila Argentina 22°55'00"S 064°27'00"W 4546 SI P. tenuifila Argentina 23°07'00"S 064°28'00"W 4011 SI P. tenuifila Argentina 23°02'00"S 064°21'00"W 3338 SI P. tenuifila Argentina 22°26'00"S 064°44'00"W 3745 SI P. tenuifila Argentina 22°24'00"S 064°44'00"W 3863 MO, SI P. tenuifila Argentina 22°26'00"S 064°44'00"W 2055 SI P. tenuifila Argentina 26°42'00"S 065°17'00"W 5959 US P. tenuifila Argentina 26°24'00"S 064°47'00"W 7919a BM, US P. tenuifila Argentina 26°24'00"S 064°47'00"W 7914 GH, MO P. tenuifila Bolivia 14°08'00"S 066°22'00"W 3312 LPB, MO P. tenuifila Bolivia 19°30'00"S 064°10'00"W 9090 LPB P. tenuifila Bolivia 19°09'31"S 063°50'23"W 1081 MO P. tenuifila Bolivia 19°26'53"S 063°46'47"W 974 HSB, MO P. tenuifila Bolivia 19°37'34"S 064°19'02"W 1222 MO P. tenuifila Bolivia 19°23'00"S 064°12'00"W 6293 LPB, MO P. tenuifila Bolivia 18°10'00"S 065°10'00"W 9355 LPB P. tenuifila Bolivia 17°43'38"S 064°54'15"W 7073 LPB, MO, NY P. tenuifila Bolivia 17°56'00"S 065°13'00"W 428 MO P. tenuifila Bolivia 16°13'00"S 067°44'00"W 21819 LPB P. tenuifila Bolivia 16°12'00"S 067°43'00"W 16 MO P. tenuifila Bolivia 16°12'00"S 067°43'00"W 17 MO P. tenuifila Bolivia 16°05'00"S 067°40'00"W 173 MO P. tenuifila Bolivia 16°21'00"S 067°34'00"W 33 MO P. tenuifila Bolivia 15°41'00"S 067°06'00"W 68 MO P. tenuifila Bolivia 16°37'00"S 067°39'00"W 319 MO P. tenuifila Bolivia 16°21'00"S 067°34'00"W 233 MO P. tenuifila Bolivia 16°23'00"S 067°31'00"W 235 MO P. tenuifila Bolivia 16°04'24"S 067°41'21"W 4832 HUA, MO

318

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. tenuifila Bolivia 20°06'16"S 058°08'28"W 2181 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 20°06'16"S 058°08'28"W 2193 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 18°16'00"S 064°16'00"W 1146 B P. tenuifila Bolivia 18°05'42"S 063°54'55"W 4567 NY, USZ P. tenuifila Bolivia 17°49'10"S 064°42'29"W 84 BOLV P. tenuifila Bolivia 18°20'51"S 064°21'39"W 5069 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 18°40'36"S 063°55'02"W 3221 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 18°55'51"S 064°06'39"W 4311 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 18°35'27"S 064°07'21"W 6369 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 18°51'46"S 063°57'25"W 6592 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 18°31'00"S 064°06'00"W 1236 USZ P. tenuifila Bolivia 18°29'00"S 064°06'00"W 3944 US P. tenuifila Bolivia 18°31'54"S 064°05'51"W 97 USZ P. tenuifila Bolivia 18°33'00"S 063°59'00"W 36209 LPB, MO, NY, USZ P. tenuifila Bolivia 18°31'00"S 064°05'08"W 1236 USZ P. tenuifila Bolivia 14°32'23"S 061°29'53"W 469 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 14°41'27"S 061°10'14"W 3673 MO, USZ P. tenuifila Bolivia 22°12'00"S 064°32'00"W 10091 MO P. tenuifila Bolivia 22°10'00"S 064°26'00"W 11172 HUA, MO P. tenuifila Bolivia 22°07'00"S 064°40'00"W 17434 NY P. tenuifila Bolivia 22°02'16"S 064°26'34"W 6217 MO P. tenuifila Bolivia 22°01'22"S 064°32'22"W 5256 MO P. tenuifila Bolivia 21°50'00"S 063°37'00"W 1599 S P. tenuifila Bolivia 21°50'00"S 064°08'00"W 3371 B P. tenuifila Brazil 25°52'40"S 050°49'16"W 3048 G, GH, S, US P. tenuifila Brazil 25°07'00"S 048°50'00"W 699 MO P. tenuifila Brazil 29°45'37"S 051°08'50"W 582 NY P. tenuifila Brazil 30°01'59"S 051°13'48"W 544 S P. tenuifila Brazil 28°37'00"S 049°57'00"W A1363 S, US P. tenuifila Brazil 26°36'00"S 051°06'00"W 9399 B, G, S P. tenuifila Brazil 27°03'49"S 053°18'41"W 12595 NY P. tenuifila Brazil 26°50'00"S 053°41'00"W 12776 NY P. tenuifila Brazil 24°00'21"S 048°20'58"W 211 NY P. tenuifila Paraguay 25°25'00"S 054°36'00"W 6230 B, G, US P. tenuifila Paraguay 25°29'21"S 054°48'35"W 941 G P. tenuifila Paraguay 26°17'15"S 055°46'14"W 53196 AS, MO P. tenuifila Paraguay 26°10'00"S 055°27'00"W 7872 FCQ, MO P. tenuifila Paraguay 24°32'00"S 055°46'00"W 1858 MO P. tenuifila Paraguay 25°21'37"S 057°36'23"W 633 MO P. tenuifila Paraguay 26°05'00"S 056°51'00"W 468 MO P. tenuifila Paraguay 25°40'00"S 057°30'00"W 39052 AS, MO P. tenuifila Paraguay 25°40'00"S 057°30'00"W 39060 AS, MO P. tenuifila Paraguay 25°57'00"S 057°28'00"W 37673 AS, MO P. tenuifila Paraguay 24°34'41"S 058°02'09"W 40231 AS, MO P. tucumanensis Argentina 34°34'00"S 058°24'00"W s.n. OXF, S P. tucumanensis Argentina 27°36'00"S 066°19'00"W 23 GOET P. tucumanensis Argentina 27°36'00"S 066°19'00"W 1210 BAB, GH, LIL, MO, SI P. tucumanensis Argentina 27°05'00"S 061°05'00"W 9800 BM, GH, MO, US P. tucumanensis Argentina 29°45'45"S 063°44'18"W 21749 CORD P. tucumanensis Argentina 29°46'00"S 063°45'00"W 11061 CORD

319

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. tucumanensis Argentina 29°53'00"S 063°46'00"W 12384 CORD P. tucumanensis Argentina 29°51'05"S 063°44'09"W 11092 CORD, MO P. tucumanensis Argentina 23°34'00"S 065°22'00"W 1223 MO P. tucumanensis Argentina 23°44'00"S 065°29'00"W 17618 MO P. tucumanensis Argentina 24°10'25"S 065°20'15"W 3445 MO P. tucumanensis Argentina 23°53'58"S 065°27'38"W 2652 CORD, CTES, SI P. tucumanensis Argentina 24°04'00"S 065°23'00"W 34602 MO P. tucumanensis Argentina 24°07'00"S 064°50'00"W 555 SI P. tucumanensis Argentina 23°54'00"S 065°26'00"W 3146 MO P. tucumanensis Argentina 23°55'00"S 065°28'00"W 3119 MO, SI P. tucumanensis Argentina 23°56'00"S 065°28'00"W 2374 MO P. tucumanensis Argentina 27°23'00"S 055°02'00"W 21155 US P. tucumanensis Argentina 25°01'00"S 066°13'00"W 271 SI P. tucumanensis Argentina 24°45'00"S 065°44'00"W 337 MO, MU, SI P. tucumanensis Argentina 29°29'16"S 063°41'36"W 23616 CORD P. tucumanensis Argentina 26°24'00"S 064°47'00"W 7451 F, GH, US P. tucumanensis Argentina 26°44'00"S 065°12'00"W 2244 GH, K, MO, US P. tucumanensis Argentina 26°48'00"S 065°05'00"W 2227 US P. tucumanensis Argentina 27°12'00"S 065°18'00"W 657 US P. tucumanensis Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 2 K P. tucumanensis Bolivia 21°10'00"S 065°20'00"W 75 MO P. tucumanensis Bolivia 20°01'00"S 065°08'00"W 74 MO P. tucumanensis Bolivia 20°56'00"S 065°14'00"W 74 LPB P. tucumanensis Bolivia 20°45'00"S 065°14'00"W 73 LPB, MO P. tucumanensis Bolivia 17°50'00"S 066°20'00"W 9765 MO P. tucumanensis Bolivia 18°07'00"S 065°10'00"W 56 MO P. tucumanensis Bolivia 15°58'00"S 067°40'00"W 573 USZ P. tucumanensis Bolivia 21°31'00"S 064°46'00"W 3051 BM, F, G, GH, K, MO, S, SI P. tucumanensis Bolivia 21°43'00"S 064°43'00"W 86 LPB, TEX P. tucumanensis Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 60 P P. tucumanensis Paraguay 21°40'00"S 057°57'00"W 4103 FCQ P. tucumanensis Paraguay 21°03'00"S 060°32'00"W 3061 FCQ, MO P. tucumanensis Paraguay 25°36'00"S 055°58'00"W 3787 MO, US P. tucumanensis Paraguay 25°45'00"S 056°13'00"W 25070 MO P. tucumanensis Paraguay 26°00'00"S 056°50'00"W 51930A MO P. umbilicata Argentina 28°17'18"S 065°59'24"W 19084 CORD P. umbilicata Argentina 27°24'00"S 066°16'00"W 1211 BA, BAB, BM, GH, LIL P. umbilicata Argentina 27°27'00"S 066°23'00"W 1211 MO P. umbilicata Argentina 27°39'00"S 067°02'00"W 113 B P. umbilicata Argentina 28°17'16"S 065°59'41"W 20466 CORD P. umbilicata Argentina 28°17'12"S 065°59'10"W 20340 CORD P. umbilicata Argentina 28°17'13"S 065°59'40"W 20485 CORD P. umbilicata Argentina 23°34'00"S 065°22'00"W 9218 US P. umbilicata Argentina 23°12'00"S 065°21'00"W 9011 US P. umbilicata Argentina 23°27'00"S 064°55'00"W 1618 MO P. umbilicata Argentina 29°05'00"S 067°05'00"W 59 B P. umbilicata Argentina 29°05'00"S 067°05'00"W 59 B P. umbilicata Argentina 26°07'00"S 064°55'00"W 6645 MO P. umbilicata Argentina 25°44'00"S 065°36'00"W 10006 SI P. umbilicata Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W s.n. BM

320

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. umbilicata Bolivia 17°00'00"S 066°30'00"W 6795 BM P. umbilicata Bolivia 17°45'00"S 065°45'00"W 5940 BM P. umbilicata Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W s.n. NY P. umbilicata Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 202 W P. umbilicata Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 3397 US P. umbilicata Bolivia 15°03'00"S 066°55'00"W 6894 LPB, TEX P. umbilicata Bolivia 18°56'33"S 065°23'14"W 8702 LPB P. umbilicata Bolivia 18°56'31"S 065°24'41"W 537 HSB, MO P. umbilicata Bolivia 18°56'31"S 065°24'41"W 537 HSB, MO P. umbilicata Bolivia 18°56'06"S 065°23'07"W 11168 MA P. umbilicata Bolivia 19°59'00"S 064°26'00"W 954 MO P. umbilicata Bolivia 18°57'00"S 065°23'00"W 154 MO P. umbilicata Bolivia 18°58'00"S 065°25'00"W 8418 LPB, MO P. umbilicata Bolivia 19°12'00"S 064°31'00"W s.n. P P. umbilicata Bolivia 17°21'14"S 066°21'57"W 432 K P. umbilicata Bolivia 17°17'13"S 066°18'38"W 14507 MA P. umbilicata Bolivia 17°44'26"S 064°51'16"W 727 P. umbilicata Bolivia 17°50'00"S 065°55'00"W 7604 GH, MO P. umbilicata Bolivia 17°25'19"S 065°41'57"W 7744 MO P. umbilicata Bolivia 17°50'00"S 065°55'00"W 51 MO P. umbilicata Bolivia 17°33'20"S 065°20'29"W 53 MO P. umbilicata Bolivia 17°25'19"S 065°41'57"W 7744 MA, MO P. umbilicata Bolivia 17°46'00"S 064°50'00"W 6616 LPB P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 065°20'00"W 27102 BOLV, LPB P. umbilicata Bolivia 17°24'36"S 065°47'04"W 3738 F, NY P. umbilicata Bolivia 17°43'00"S 065°02'00"W 8635 BM, G, GH, GOET, K P. umbilicata Bolivia 17°26'00"S 065°29'00"W 14471 LPB, MO P. umbilicata Bolivia 17°50'00"S 064°45'00"W 13930 MO P. umbilicata Bolivia 17°40'00"S 065°09'00"W 15921 LPB, MO P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 065°18'00"W 6576 K, LPB P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 065°16'00"W 7003 LPB, MO, NY P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 065°18'00"W 91 LPB P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 065°18'00"W 53 LPB P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 065°18'00"W 1877 LPB P. umbilicata Bolivia 17°33'00"S 065°20'00"W 8584 LPB P. umbilicata Bolivia 17°50'00"S 064°45'00"W 13930 LPB, MO P. umbilicata Bolivia 17°48'41"S 064°46'05"W 475 BOLV, MO P. umbilicata Bolivia 17°46'02"S 064°48'32"W 1153 BOLV, MO P. umbilicata Bolivia 17°40'17"S 064°58'31"W 1452 MO, USZ P. umbilicata Bolivia 17°20'24"S 066°06'30"W 2130 MO P. umbilicata Bolivia 17°23'00"S 065°50'00"W 7 LPB, MO P. umbilicata Bolivia 17°23'00"S 065°49'00"W 8 LPB P. umbilicata Bolivia 17°55'56"S 065°27'45"W 458 BOLV, MO P. umbilicata Bolivia 17°39'00"S 065°24'00"W 506 P P. umbilicata Bolivia 17°03'48"S 066°31'34"W 456 HUA, MO P. umbilicata Bolivia 17°35'00"S 066°38'00"W 16 LPB P. umbilicata Bolivia 17°24'00"S 066°17'00"W 270 USZ P. umbilicata Bolivia 17°20'00"S 066°17'00"W 7396 HUA, LPB, SI, US P. umbilicata Bolivia 17°20'00"S 066°17'00"W 1647 GH, LPB, MO P. umbilicata Bolivia 19°24'37"S 065°02'41"W 256 MO

321

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. umbilicata Bolivia 19°32'02"S 065°27'12"W 68 MO P. umbilicata Bolivia 19°33'00"S 065°25'00"W 951 LPB P. umbilicata Bolivia 19°20'00"S 065°20'00"W 97 LPB P. umbilicata Bolivia 18°06'00"S 066°08'00"W 3020 LPB P. umbilicata Bolivia 17°50'00"S 064°40'00"W 719 AAU, MO P. umbilicata Bolivia 17°49'00"S 064°45'00"W 2300 LPB, MO, USZ P. umbilicata Bolivia 17°49'05"S 064°46'00"W 5410 NY, USZ P. umbilicata Bolivia 18°36'21"S 064°07'45"W 5441 MO, USZ P. umbilicata Bolivia 21°28'00"S 064°54'00"W 2454 B, BM, G, GH, K, NY P. umbilicata Bolivia 21°27'00"S 064°55'00"W 2454 BM, G, GH, GOET, K P. umbilicata Bolivia 21°53'59"S 064°35'13"W 6163 MO P. umbilicata Bolivia 22°01'46"S 064°50'29"W 3711 MO P. umbilicata Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 1211 GH, UC, US P. chrysophylla Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 4201 MO P. chrysophylla Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 4179 MO P. chrysophylla Argentina 25°02'00"S 061°31'00"W 1373 BAB P. chrysophylla Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 161 US P. chrysophylla Argentina 31°24'00"S 062°17'00"W 708 CORD P. chrysophylla Argentina 28°41'00"S 059°00'00"W 15893 MO P. chrysophylla Argentina 31°30'00"S 058°08'00"W 3173 MO, SI P. chrysophylla Argentina 31°16'00"S 057°59'00"W 3017 CORD, CTES P. chrysophylla Argentina 31°24'00"S 058°02'00"W 1366 SI P. chrysophylla Argentina 32°03'00"S 060°27'00"W 185 SI P. chrysophylla Argentina 30°54'00"S 057°56'00"W 1260 SI P. chrysophylla Argentina 31°00'00"S 057°54'00"W 1522 SI P. chrysophylla Argentina 30°54'00"S 057°56'00"W 455 SI P. chrysophylla Argentina 31°51'00"S 059°01'00"W 11279 MO P. chrysophylla Argentina 24°42'00"S 060°36'00"W 8400 GH P. chrysophylla Argentina 24°15'00"S 065°08'00"W 236 LP P. chrysophylla Argentina 27°55'00"S 055°46'00"W 1959 BAB P. chrysophylla Argentina 27°32'00"S 055°37'00"W 9586 CTES P. chrysophylla Argentina 28°05'57"S 055°32'10"W 1731 SI P. chrysophylla Argentina 27°08'00"S 055°24'00"W 7168 CTES P. chrysophylla Argentina 29°15'00"S 061°46'00"W 2959 SI P. chrysophylla Argentina 31°25'00"S 061°25'00"W 491 MO P. chrysophylla Argentina 27°11'00"S 065°18'00"W 745 MA, US P. chrysophylla Argentina 26°24'00"S 064°47'00"W 7504 F, GH, MO, US P. chrysophylla Bolivia 18°19'00"S 059°34'00"W 911 LP P. chrysophylla Bolivia 17°41'00"S 063°25'00"W 36995 MO P. chrysophylla Bolivia 17°36'00"S 063°08'00"W 23495 LPB, MO P. chrysophylla Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n.160 LPS P. chrysophylla Paraguay 24°48'00"S 056°02'00"W 323273 K P. chrysophylla Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W s.n. F P. chrysophylla Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 6878* BM P. chrysophylla Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 2287 S P. chrysophylla Paraguay 22°47'00"S 057°54'00"W 6360* G P. chrysophylla Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 7804 BM P. chrysophylla Paraguay 25°15'00"S 054°47'00"W 4948 US P. chrysophylla Paraguay 22°28'00"S 060°02'00"W 2060 CTES P. chrysophylla Paraguay 22°30'00"S 060°00'00"W 2251 CTES, MO

322

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. chrysophylla Paraguay 22°28'00"S 060°02'00"W 2471 CTES P. chrysophylla Paraguay 25°09'00"S 055°34'00"W 9562* BM, G, K, P, W P. chrysophylla Paraguay 24°05'00"S 055°30'00"W 4825 B P. chrysophylla Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W 103 K P. chrysophylla Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W 2360 B, BM, G, K, P, W P. chrysophylla Paraguay 25°17'35"S 057°34'28"W A2183* S P. chrysophylla Paraguay 25°22'00"S 057°37'00"W 3123 MO P. chrysophylla Paraguay 25°18'00"S 057°25'00"W 6469 MO P. chrysophylla Paraguay 25°22'00"S 057°36'00"W 467 MO P. chrysophylla Paraguay 23°26'00"S 057°26'00"W 7547 BM, G, K P. chrysophylla Paraguay 22°30'00"S 058°30'00"W 4825 BM, G P. chrysophylla Paraguay 22°30'00"S 058°30'00"W 5286 GH, GOET P. chrysophylla Paraguay 22°22'58"S 056°53'50"W 53999 AS, MO P. chrysophylla Paraguay 22°33'06"S 056°52'44"W 54351 MO P. chrysophylla Paraguay 22°50'00"S 057°25'00"W 38962 AS, MO P. chrysophylla Paraguay 22°40'20"S 057°20'59"W 41390 AS, MO P. chrysophylla Paraguay 22°41'08"S 057°31'06"W 41513 AS, MO P. chrysophylla Paraguay 25°08'00"S 057°15'00"W 19719 AS, MO P. chrysophylla Paraguay 25°12'00"S 057°07'00"W 26203 FCQ, MO P. chrysophylla Paraguay 25°27'00"S 056°51'00"W 39 G P. chrysophylla Paraguay 25°19'00"S 057°15'00"W 139 G P. chrysophylla Paraguay 27°26'55"S 056°49'23"W 51603 AS, MO P. chrysophylla Paraguay 26°28'59"S 057°04'10"W 55348 MO P. chrysophylla Paraguay 23°30'38"S 058°46'56"W 57185 MO P. chrysophylla Paraguay 24°10'00"S 058°01'00"W 480 NY, US P. chrysophylla Paraguay 23°14'00"S 057°08'00"W 45793 CTES P. chrysophylla Paraguay 23°41'00"S 056°14'00"W 4329 B, G, K, P, W P. chrysophylla Uruguay 34°51'00"S 056°10'00"W 1031 P P. chrysophylla Uruguay 31°45'00"S 056°05'00"W 32335 SI P. foetida Argentina 28°18'00"S 065°22'00"W 17287 CORD P. foetida Argentina 27°24'00"S 058°51'00"W 6328 MO P. foetida Argentina 30°57'00"S 064°16'00"W 1583 CORD P. foetida Argentina 30°21'00"S 064°40'00"W 717 CORD P. foetida Argentina 31°24'00"S 064°31'00"W 1848 CORD P. foetida Argentina 31°34'00"S 064°42'00"W 15 CORD P. foetida Argentina 29°46'00"S 063°45'00"W 10694 CORD P. foetida Argentina 30°51'00"S 064°29'00"W 8514 CORD, MO P. foetida Argentina 27°29'00"S 056°48'00"W 15740 MO P. foetida Argentina 23°43'00"S 061°48'00"W 6753 BAB P. foetida Argentina 26°00'00"S 058°38'00"W 2616 G, MO, US P. foetida Argentina 24°05'29"S 061°56'33"W 46385 CTES, MO P. foetida Argentina 25°17'00"S 057°43'00"W 44409 CTES P. foetida Argentina 24°02'00"S 064°20'00"W 11497 MO P. foetida Argentina 24°07'00"S 064°50'00"W 551 SI P. foetida Argentina 24°17'00"S 064°14'00"W 9016 SI P. foetida Argentina 24°16'00"S 064°15'00"W 2984 SI P. foetida Argentina 30°26'00"S 066°09'00"W 4303 CORD P. foetida Argentina 30°09'00"S 066°33'00"W 4316 CORD P. foetida Argentina 28°55'00"S 067°31'00"W 7794 GH, K, MO, US P. foetida Argentina 29°00'00"S 067°00'00"W 3144 CORD

323

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Argentina 26°48'00"S 055°01'00"W 3407 SI P. foetida Argentina 27°55'00"S 055°49'00"W 1202 SI P. foetida Argentina 27°21'00"S 055°31'00"W 1931 SI P. foetida Argentina 27°26'00"S 055°34'00"W 1688 MO, SI P. foetida Argentina 27°29'00"S 055°29'00"W 266 SI P. foetida Argentina 27°23'00"S 055°35'00"W 5735 CTES P. foetida Argentina 27°29'00"S 055°50'00"W 6762 LIL P. foetida Argentina 27°29'00"S 055°50'00"W 31827 CTES P. foetida Argentina 27°59'00"S 055°31'00"W 21824 CTES P. foetida Argentina 25°34'00"S 054°34'00"W 2427 LIL P. foetida Argentina 26°12'00"S 054°35'00"W 10724 LP P. foetida Argentina 27°29'00"S 055°08'00"W 4846 LIL P. foetida Argentina 27°16'00"S 055°35'00"W 6607 SI P. foetida Argentina 27°15'20"S 055°31'52"W 24719 MO P. foetida Argentina 27°16'00"S 055°33'00"W 1882 SI P. foetida Argentina 27°16'00"S 055°29'00"W 1735 SI P. foetida Argentina 25°29'00"S 064°57'00"W 1220 GOET P. foetida Argentina 25°34'26"S 064°58'07"W 3854 MO P. foetida Argentina 22°43'00"S 064°43'00"W 4534 SI P. foetida Argentina 23°36'00"S 062°35'00"W 166 MO P. foetida Argentina 30°37'58"S 067°28'51"W 690 MO P. foetida Argentina 30°37'00"S 067°27'00"W 29593 MO P. foetida Argentina 30°38'00"S 067°27'00"W 8466 CORD P. foetida Argentina 30°37'00"S 067°29'00"W 5993 BAB P. foetida Argentina 32°22'00"S 065°57'00"W 14985 CORD P. foetida Argentina 33°48'00"S 061°33'00"W 46860 CTES P. foetida Argentina 29°09'00"S 062°39'00"W 17809 CORD P. foetida Argentina 27°22'06"S 065°10'26"W 1167 MA, US P. foetida Argentina 26°28'00"S 064°47'00"W 10338 BM, GH, MO P. foetida Argentina 26°25'00"S 064°50'00"W 10430 MO P. foetida Argentina 26°33'00"S 065°16'00"W 4339 SI P. foetida Argentina 26°28'00"S 065°22'00"W 3670 MO, SI P. foetida Bangladesh 22°30'00"N 091°45'00"E 10263 MO P. foetida Belize 17°30'52"N 088°12'02"W 128 MO P. foetida Belize 17°52'45"N 088°18'47"W 23944 MO P. foetida Belize 17°31'00"N 088°12'00"W 354 MO P. foetida Belize 17°32'56"N 088°20'50"W 7578 MO P. foetida Belize 17°17'14"N 088°36'32"W 8413 MO P. foetida Belize 16°43'00"N 088°59'00"W 898 BM, MO P. foetida Belize 16°44'00"N 088°59'00"W 10816 MO P. foetida Belize 17°14'00"N 088°55'00"W 960 MO P. foetida Belize 17°13'25"N 088°46'47"W 1796 MO P. foetida Belize 17°13'25"N 088°46'47"W 1826 MO P. foetida Belize 16°43'00"N 088°58'00"W 10088 MO P. foetida Belize 17°13'25"N 088°46'47"W 1824 MO P. foetida Belize 18°23'33"N 088°22'44"W 4891 MO P. foetida Belize 18°24'00"N 088°28'00"W 5622 MEXU, MO P. foetida Belize 17°46'00"N 088°39'00"W 17226 MO P. foetida Belize 18°07'00"N 088°40'00"W 7633 MO P. foetida Belize 17°45'00"N 089°09'00"W 498 MO

324

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Belize 18°00'34"N 088°30'05"W 8500 MO P. foetida Belize 16°32'39"N 088°43'28"W 5538 MO P. foetida Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W s.n. BM P. foetida Bolivia 18°00'00"S 065°15'00"W 5894 BM P. foetida Bolivia 18°00'00"S 065°30'00"W 6946 BM P. foetida Bolivia 18°30'00"S 064°37'00"W 2417 LPB, USZ P. foetida Bolivia 14°52'00"S 064°58'00"W 585 MO, USZ P. foetida Bolivia 14°08'00"S 066°22'00"W 3420 MO P. foetida Bolivia 14°08'00"S 066°24'00"W 1082 LPB P. foetida Bolivia 19°05'41"S 065°14'09"W 6173 US P. foetida Bolivia 19°05'41"S 065°14'09"W B-6173 BM P. foetida Bolivia 19°05'00"S 065°13'00"W 7725 LPB P. foetida Bolivia 20°57'00"S 064°45'00"W 132 HUA, LPB P. foetida Bolivia 19°57'06"S 064°14'24"W 1191 AAU, HSB, MO P. foetida Bolivia 20°31'19"S 063°49'07"W 819 AAU, HSB, MO P. foetida Bolivia 19°06'00"S 064°18'00"W 938 HSB, MO P. foetida Bolivia 20°34'00"S 063°08'00"W 11435 CTES, LPB P. foetida Bolivia 20°42'03"S 063°47'09"W 506 AAU, HSB, MO P. foetida Bolivia 19°10'41"S 063°55'13"W 1186A HSB, MO P. foetida Bolivia 19°09'23"S 065°16'22"W 98 HSB, MO P. foetida Bolivia 18°49'00"S 064°54'00"W 2901 HSB P. foetida Bolivia 17°20'00"S 066°15'00"W 37 LPB P. foetida Bolivia 17°32'20"S 064°56'41"W 462 K P. foetida Bolivia 17°00'00"S 066°00'00"W 5224 BM P. foetida Bolivia 17°00'00"S 066°00'00"W 5116 BM P. foetida Bolivia 17°34'26"S 066°15'47"W 1632 MO P. foetida Bolivia 17°22'20"S 066°08'32"W 4149 GH P. foetida Bolivia 17°50'00"S 066°21'00"W 677 LPB P. foetida Bolivia 18°20'00"S 064°35'00"W 1255 BOLV P. foetida Bolivia 18°20'00"S 064°42'00"W 733 BOLV P. foetida Bolivia 18°20'00"S 064°42'00"W 1255 BOLV P. foetida Bolivia 17°35'00"S 066°15'00"W 268 LPB P. foetida Bolivia 17°35'00"S 066°12'00"W s.n LPB, SI P. foetida Bolivia 17°20'00"S 066°15'00"W 126 LPB, MO, S P. foetida Bolivia 17°20'00"S 066°15'00"W 290 BOLV P. foetida Bolivia 17°40'00"S 066°02'00"W 1945 LPB, MO P. foetida Bolivia 14°34'40"S 068°41'24"W 5847 AAU, LPB, MO P. foetida Bolivia 16°32'00"S 067°23'00"W 23247 LPB P. foetida Bolivia 15°29'00"S 067°54'00"W 592 LPB, NY P. foetida Bolivia 15°14'06"S 068°44'44"W 2302 LPB P. foetida Bolivia 15°45'00"S 068°00'36"W 646 NY, PH, US P. foetida Bolivia 16°27'00"S 067°29'00"W 22594 LPB P. foetida Bolivia 16°28'00"S 067°28'00"W 311 MO P. foetida Bolivia 11°07'00"S 067°33'00"W 8430 MO P. foetida Bolivia 18°03'00"S 064°26'00"W 7872 MO P. foetida Bolivia 17°47'00"S 063°04'00"W 37617 MO P. foetida Bolivia 19°05'00"S 062°45'00"W 2235 USZ P. foetida Bolivia 18°52'00"S 062°23'00"W 1962 LPB, MO, USZ P. foetida Bolivia 20°15'00"S 063°10'00"W 215 HUA, LPB, TEX, US P. foetida Bolivia 20°00'00"S 063°50'00"W 184 HUA, LPB, MO, SI

325

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Bolivia 20°03'00"S 063°31'00"W 33680 SI P. foetida Bolivia 18°55'00"S 062°25'00"W 1962a USZ P. foetida Bolivia 19°26'28"S 062°34'25"W 83 USZ P. foetida Bolivia 19°16'00"S 062°28'00"W 1930 MO P. foetida Bolivia 20°26'00"S 063°30'00"W 1564 MO, USZ P. foetida Bolivia 18°13'00"S 064°05'00"W 4513 USZ P. foetida Bolivia 18°06'00"S 063°55'00"W 4240 USZ P. foetida Bolivia 18°13'00"S 064°05'00"W s.n. LPB P. foetida Bolivia 18°18'45"S 063°40'27"W 313 MO, USZ P. foetida Bolivia 17°40'00"S 063°27'00"W 45036 MO, NY, USZ P. foetida Bolivia 17°58'30"S 064°29'00"W 46547 MO, NY P. foetida Bolivia 18°03'00"S 060°37'00"W x USZ P. foetida Bolivia 18°03'00"S 064°37'00"W 2417 MO, USZ P. foetida Bolivia 18°04'00"S 064°24'00"W 17959 LPB, MO P. foetida Bolivia 18°03'27"S 064°36'13"W 53661 MO, NY, USZ P. foetida Bolivia 16°38'15"S 062°27'00"W 470 LPB, MO, USZ P. foetida Bolivia 16°59'00"S 061°51'00"W 187 MO, USZ P. foetida Bolivia 16°02'00"S 062°00'00"W 16207 USZ P. foetida Bolivia 17°20'00"S 063°13'00"W 7131 LPB, TEX, US P. foetida Bolivia 17°27'00"S 063°40'00"W 5225 G, GH P. foetida Bolivia 18°28'00"S 063°53'00"W 1813 LPB P. foetida Bolivia 18°12'00"S 064°11'06"W 344 LPB, MO, USZ P. foetida Bolivia 18°31'00"S 064°18'00"W 407 LPB, MO, USZ P. foetida Bolivia 18°15'00"S 064°13'00"W 2003 B P. foetida Bolivia 18°52'10"S 063°57'27"W 3871 USZ P. foetida Bolivia 18°43'17"S 064°17'59"W 3958 MO, USZ P. foetida Bolivia 18°43'20"S 064°18'31"W 2856 MO, USZ P. foetida Bolivia 18°26'48"S 064°09'13"W 5218 MO, USZ P. foetida Bolivia 18°31'32"S 064°17'32"W 5430 MO, USZ P. foetida Bolivia 16°26'22"S 060°55'25"W 7294 USZ P. foetida Bolivia 21°50'00"S 063°37'00"W 1407 S P. foetida Bolivia 21°46'00"S 064°36'00"W 211 LPB P. foetida Bolivia 21°50'00"S 062°56'00"W 1606 MO, S P. foetida Bolivia 21°23'00"S 064°04'00"W 39085 LPB P. foetida Borneo 04°37'00"N 114°19'00"E 3855 MO P. foetida Borneo 05°50'24"N 118°07'04"E 20016 MO P. foetida Brasil 07°38'00"S 072°36'00"W 302 MO P. foetida Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W L14 MO P. foetida Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. MO P. foetida Brasil 07°38'00"S 072°36'00"W 302 MO P. foetida Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W 545 MO P. foetida Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W 31934 LP P. foetida Brasil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. C, G P. foetida Brasil 08°17'36"S 071°07'34"W 8204 MO P. foetida Brasil 09°05'00"S 068°38'57"W 7969 MO, NY P. foetida Brasil 07°38'00"S 072°36'00"W 12813 MO P. foetida Brasil 07°36'32"S 072°47'57"W 9234 MO P. foetida Brasil 07°38'00"S 072°35'00"W 62317 MO P. foetida Brasil 08°31'05"S 070°51'57"W 683 MO P. foetida Brasil 00°42'00"N 051°27'00"W 51025 NY

326

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Brasil 05°23'31"S 062°03'37"W 8682 MO P. foetida Brasil 07°08'00"S 072°07'00"W 5137 MO P. foetida Brasil 03°22'00"S 064°42'00"W 16644 MO P. foetida Brasil 04°48'00"S 057°56'00"W 13093 MO P. foetida Brasil 02°47'36"S 057°04'12"W 28109 MO P. foetida Brasil 05°08'00"S 072°49'00"W 17030 MO P. foetida Brasil 03°04'16"S 059°59'48"W 491 MO P. foetida Brasil 10°40'00"S 039°43'00"W 16271 MO P. foetida Brasil 12°31'00"S 040°18'00"W 345 MO P. foetida Brasil 11°57'00"S 040°38'00"W 44267 MO P. foetida Brasil 10°40'42"S 040°08'00"W 5455 MO P. foetida Brasil 12°45'00"S 040°13'00"W 45099 MO P. foetida Brasil 11°18'00"S 041°52'00"W 124 MO P. foetida Brasil 11°47'00"S 037°32'00"W 63144 MA P. foetida Brasil 12°58'00"S 038°30'00"W 252 W P. foetida Brasil 12°58'00"S 038°30'00"W 291 BM, G P. foetida Brasil 12°58'00"S 038°30'00"W 608 BM P. foetida Brasil 12°58'00"S 038°30'00"W 545 BM, S, US P. foetida Brasil 12°58'00"S 038°30'00"W s.n. G P. foetida Brasil 12°57'00"S 038°22'00"W 33712 LP P. foetida Brasil 05°45'00"S 038°42'00"W 50095 HUA, MO P. foetida Brasil 06°36'24"S 039°03'44"W 45 S P. foetida Brasil 15°56'00"S 047°47'00"W 8333 NY P. foetida Brasil 15°37'00"S 047°40'00"W 8901 MO, NY P. foetida Brasil 05°07'00"S 044°40'00"W D598 MG P. foetida Brasil 02°33'00"S 044°03'00"W 10 MG P. foetida Brasil 10°40'54"S 050°39'22"W 4905 MO P. foetida Brasil 15°35'00"S 056°06'00"W 1186 S P. foetida Brasil 21°04'00"S 054°41'00"W B-2018 MO P. foetida Brasil 21°04'00"S 056°50'00"W 74141 MO P. foetida Brasil 20°22'02"S 051°25'08"W 479-B MO P. foetida Brasil 01°29'00"S 048°26'00"W 4151 MO P. foetida Brasil 01°25'00"S 047°32'00"W 56044 MO P. foetida Brasil 02°26'00"S 054°42'00"W s.n. W P. foetida Brasil 07°11'10"S 037°25'53"W 5215 MO P. foetida Brasil 07°11'10"S 037°25'53"W 4812 MO P. foetida Brasil 09°26'00"S 040°46'00"W 4A20M-12-16-29 MO P. foetida Brasil 08°22'00"S 036°42'00"W 9781 MA P. foetida Brasil 08°37'00"S 037°10'00"W 12 MO P. foetida Brasil 09°26'00"S 040°45'00"W 2375 US P. foetida Brasil 05°05'00"S 042°49'00"W 8086 MO P. foetida Brasil 09°00'00"S 042°00'00"W 1119 MO P. foetida Brasil 22°52'00"S 042°01'00"W 10873 B, K P. foetida Brasil 29°05'00"S 053°51'00"W 9552 SP P. foetida Brasil 02°56'27"N 060°27'51"W 710 MO P. foetida Brasil 23°31'00"S 047°20'00"W 18 NY P. foetida Brasil 12°49'00"S 047°08'00"W 56038 MO P. foetida Caribbean 25°05'00"N 077°21'00"W 48417 MO P. foetida Caribbean 25°05'00"N 077°21'00"W 47008 MO P. foetida Caribbean 25°22'19"N 076°31'44"W 5721 MO

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Caribbean 25°05'00"N 077°21'00"W s.n. Nov 1890 MO P. foetida Caribbean 25°05'00"N 077°21'00"W 50710 MO P. foetida Caribbean 25°10'00"N 076°14'00"W 48953 MO P. foetida Caribbean 20°22'45"N 076°38'36"W 2601 B, G, GH, HABA, K, MA P. foetida Caribbean 22°57'00"N 082°41'00"W 2602 B, BM, G, K, MA, MO, US P. foetida Caribbean 23°08'00"N 081°45'00"W 50912 MO P. foetida Caribbean 21°16'00"N 076°31'00"W 228 MO P. foetida Caribbean 21°51'57"N 079°37'06"W 18920 MO P. foetida Caribbean 19°41'04"N 071°40'42"W 5625 MO P. foetida Caribbean 19°41'05"N 071°40'43"W 5625 MO P. foetida Caribbean 18°58'00"N 068°51'00"W 15863 MO P. foetida Caribbean 18°29'00"N 071°05'00"W 5449 MO P. foetida Caribbean 18°29'00"N 071°05'00"W 5449 MO P. foetida Caribbean 18°23'43"N 071°33'55"W 617 JBSD, MO P. foetida Caribbean 18°12'00"N 068°38'00"W 17110 MO P. foetida Caribbean 18°21'00"N 068°37'00"W 10566 MO P. foetida Caribbean 18°23'00"N 068°55'00"W 7693 MO P. foetida Caribbean 19°17'00"N 069°10'00"W 29327 MO P. foetida Caribbean 19°05'00"N 069°35'00"W 34137 MO P. foetida Caribbean 19°34'00"N 070°47'00"W 5519 NY P. foetida Caribbean 18°02'00"N 077°25'00"W 1023 MO P. foetida Caribbean 18°06'00"N 077°01'00"W s.n. 17 Dec 1890 MO P. foetida Caribbean 17°58'00"N 076°48'00"W 605 NY, PH P. foetida Caribbean 17°58'00"N 076°48'00"W 1750 NY P. foetida Caribbean 17°50'00"N 077°22'00"W 28375 MO P. foetida Caribbean 18°00'22"N 076°44'48"W 66 MO P. foetida Caribbean 18°01'42"N 076°44'48"W 8612 NY, UCWI P. foetida Caribbean 17°54'00"N 076°26'00"W 764 GOET P. foetida Caribbean 15°29'00"N 061°17'00"W 71 MO P. foetida Caribbean 16°15'00"N 061°35'00"W s.n. GOET P. foetida Caribbean 16°15'00"N 061°35'00"W 3647 B, C, F, MO, NY, PH, US P. foetida Caribbean 16°02'33"N 061°40'58"W 1924 US P. foetida Caribbean 17°55'07"N 062°51'38"W s.n. GOET P. foetida Caribbean 12°32'00"N 070°01'37"W 13670 ASU P. foetida Caribbean 12°06'00"N 068°54'00"W 13810 ASU P. foetida Caribbean 18°22'28"N 065°43'01"W 3413 MO, NY P. foetida Caribbean 18°25'13"N 065°42'42"W 10072 MO P. foetida Caribbean 18°00'47"N 066°36'52"W 6119 BSC, F, G, MO, NY, PH P. foetida Caribbean 18°11'50"N 067°08'26"W 14 MO P. foetida Caribbean 18°23'00"N 065°46'00"W 6381 MO P. foetida Caribbean 18°00'52"N 066°35'06"W 2530 MO P. foetida Caribbean 18°18'45"N 065°36'34"W 34660 MO P. foetida Caribbean 18°12'49"N 065°44'07"W 60 MO P. foetida Caribbean 18°19'40"N 065°39'10"W s.n. MO P. foetida Caribbean 18°20'00"N 065°42'00"W 7718 MO P. foetida Caribbean 17°59'28"N 066°31'41"W 7540 MO P. foetida Caribbean 18°23'00"N 065°46'00"W 6381 MO P. foetida Caribbean 18°25'00"N 065°50'00"W 11766 MO P. foetida Caribbean 18°23'58"N 066°03'01"W 90 MIN, US P. foetida Caribbean 18°05'19"N 067°08'46"W 810 B, GOET, K, US, W

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Caribbean 18°04'37"N 067°11'15"W s.n. MO P. foetida Caribbean 17°58'46"N 066°17'54"W SAN618 MO P. foetida Caribbean 18°26'45"N 066°15'36"W 9822 MO P. foetida Caribbean 18°07'21"N 065°31'57"W 5050 MO P. foetida Caribbean 17°56'00"N 067°11'00"W 810 MO P. foetida Caribbean 18°03'01"N 065°52'45"W 4944 MO P. foetida Caribbean 18°12'11"N 067°08'24"W 134 MO P. foetida Caribbean 18°16'52"N 065°46'58"W 978 B, F, K, NY, PH, US P. foetida Caribbean 18°23'55"N 066°02'59"W 225 NY P. foetida Caribbean 18°25'00"N 067°09'00"W 573a US P. foetida Caribbean 18°05'19"N 067°08'46"W 810b B P. foetida Caribbean 18°10'00"N 066°58'00"W 1789a NY P. foetida Caribbean 18°23'58"N 066°03'01"W 225 US P. foetida Caribbean 18°25'00"N 065°50'00"W 11766 MO P. foetida Caribbean 11°11'00"N 060°44'00"W s.n. 8 Nov 1932 MO P. foetida Caribbean 11°09'00"N 060°49'00"W 17990 MO P. foetida Caribbean 11°18'01"N 060°32'19"W 3580 MO P. foetida Caribbean 11°10'00"N 060°43'00"W 5513 B, NY, US P. foetida Caribbean 10°28'00"N 061°21'00"W 2608A MO P. foetida Caribbean 10°08'00"N 061°02'00"W s.n. 27 Nov 1932 MO P. foetida Caribbean 10°39'00"N 061°31'00"W 904 NY P. foetida Caribbean 10°25'40"N 061°14'39"W 375a BM, K P. foetida Caribbean 10°25'40"N 061°14'39"W 8322 B, US P. foetida Caribbean 10°25'40"N 061°14'39"W 9343 B, US P. foetida Caribbean 10°25'40"N 061°14'39"W 4722 B P. foetida Caribbean 10°38'44"N 061°12'55"W 672 NY P. foetida Caribbean 10°25'40"N 061°14'39"W 2184 NY, US P. foetida Caribbean 17°46'32"N 064°47'54"W 4740 MO P. foetida Caribbean 17°44'00"N 064°47'00"W 144 MO P. foetida Caribbean 17°44'52"N 064°38'58"W 2a NY P. foetida Caribbean 18°20'00"N 064°58'00"W 10 ASU P. foetida Caribbean 18°24'52"N 064°39'50"W 592A MO P. foetida Colombia 10°57'50"N 074°47'47"W 786 MA P. foetida Colombia 05°46'30"N 074°20'30"W 959 MO P. foetida Colombia 01°18'00"S 069°33'00"W 5963 COAH, MO P. foetida Colombia 04°10'00"S 069°58'00"W 718 GH, MO P. foetida Colombia 07°47'00"N 075°20'00"W 4207 HUA, MO P. foetida Colombia 07°39'00"N 076°41'00"W 113 HUA, JAUM, MO P. foetida Colombia 07°14'51"N 076°26'21"W 2210 MO P. foetida Colombia 05°58'00"N 075°50'00"W 4938 HUA P. foetida Colombia 06°04'04"N 075°47'38"W s.n. HUA P. foetida Colombia 06°18'00"N 075°51'00"W 817 HUA P. foetida Colombia 08°51'00"N 076°26'00"W 510 HUA, MO P. foetida Colombia 08°32'00"N 076°27'00"W 553 HUA, MO P. foetida Colombia 08°32'00"N 076°27'00"W 828 HUA, MA, MO P. foetida Colombia 08°01'28"N 075°05'20"W 4409 HUA, MO P. foetida Colombia 08°02'00"N 075°01'00"W 6935 HUA P. foetida Colombia 07°39'00"N 076°40'00"W 4745 JAUM, MO P. foetida Colombia 07°39'00"N 076°34'00"W 4614 JAUM, MO P. foetida Colombia 07°35'00"N 074°50'00"W 4610 HUA

329

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Colombia 06°15'00"N 075°34'00"W 105 HUA, MO P. foetida Colombia 06°17'29"N 075°32'10"W 444 US P. foetida Colombia 07°14'51"N 076°21'26"W 2210 HUA, MO P. foetida Colombia 08°16'36"N 076°46'00"W 500 HUA P. foetida Colombia 06°29'46"N 075°46'36"W 4672 HUA P. foetida Colombia 06°33'35"N 075°49'41"W 2196 JAUM, MO P. foetida Colombia 06°35'00"N 075°55'00"W 3229 HUA, MO P. foetida Colombia 06°31'00"N 075°49'00"W 2 HUA P. foetida Colombia 06°32'00"N 075°49'00"W 377 HUA P. foetida Colombia 06°32'00"N 075°49'00"W 377a HUA P. foetida Colombia 07°06'17"N 074°44'58"W 1702 HUA P. foetida Colombia 08°05'53"N 076°43'54"W 3436 JAUM, MO P. foetida Colombia 07°56'00"N 076°42'00"W 3756 JAUM, MO P. foetida Colombia 07°01'00"N 073°53'00"W 1931 HUA P. foetida Colombia 06°56'00"N 071°10'00"W 1 COL, MO P. foetida Colombia 06°56'00"N 071°10'00"W 1 HUA P. foetida Colombia 10°57'50"N 074°47'47"W 1079 MA P. foetida Colombia 10°57'00"N 074°47'00"W 4195 LE, MO P. foetida Colombia 10°14'00"N 075°26'00"W 3036 MO P. foetida Colombia 10°25'07"N 075°31'32"W 4155 LE P. foetida Colombia 10°20'32"N 075°32'30"W 4361 MO P. foetida Colombia 10°20'00"N 075°32'00"W 4361 MO P. foetida Colombia 10°25'00"N 075°30'00"W s.n. MO P. foetida Colombia 09°21'27"N 074°48'08"W 3185 MO P. foetida Colombia 09°00'00"N 074°05'00"W 1715 HUA, MO P. foetida Colombia 10°09'00"N 075°16'00"W 851 HUA P. foetida Colombia 10°39'44"N 075°14'13"W 1739 HUA P. foetida Colombia 10°18'27"N 075°24'04"W 10017 MO P. foetida Colombia 04°49'17"N 073°10'03"W 21157 MA P. foetida Colombia 05°22'44"N 074°42'47"W 18168 MO P. foetida Colombia 09°23'50"N 073°29'14"W 329 MO P. foetida Colombia 09°22'01"N 073°36'25"W 172 MO P. foetida Colombia 08°38'00"N 077°22'00"W 14197 MO P. foetida Colombia 08°30'00"N 077°15'00"W 1686 HUA P. foetida Colombia 08°39'02"N 077°21'20"W 100 HUA P. foetida Colombia 07°15'00"N 077°22'00"W 2052 MO P. foetida Colombia 08°51'00"N 076°20'00"W 4927 HUA, MO P. foetida Colombia 08°20'29"N 075°08'08"W 5776 HUA P. foetida Colombia 09°25'00"N 076°10'00"W 263 HUA P. foetida Colombia 07°57'00"N 076°14'00"W 690 HUA P. foetida Colombia 04°36'00"N 074°05'00"W 6 GOET P. foetida Colombia 04°30'49"N 073°21'16"W 14 MO P. foetida Colombia 02°27'42"N 075°34'16"W 2219 G, K P. foetida Colombia 02°54'00"N 075°07'00"W 1095 NY P. foetida Colombia 02°55'00"N 075°17'00"W s.n. W P. foetida Colombia 03°13'00"N 075°12'00"W 11 MO P. foetida Colombia 03°13'00"N 075°12'00"W 20 MO P. foetida Colombia 11°03'00"N 072°36'00"W 925 HUA, MO P. foetida Colombia 10°40'00"N 073°06'00"W 1992 HUA P. foetida Colombia 10°59'00"N 074°31'00"W 10518 MO

330

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Colombia 11°04'40"N 074°13'00"W 33 HUA P. foetida Colombia 10°50'00"N 074°10'05"W 8248 MO P. foetida Colombia 11°14'15"N 074°12'06"W 10011 MO P. foetida Colombia 10°52'00"N 074°08'00"W 3485 HUA P. foetida Colombia 10°55'00"N 074°10'00"W 1204 US P. foetida Colombia 10°55'00"N 074°10'00"W 14 MO P. foetida Colombia 11°14'50"N 074°12'06"W 21103 NY P. foetida Colombia 04°09'12"N 073°38'06"W 1103 MO P. foetida Colombia 04°17'25"N 072°47'26"W 5142 COL P. foetida Colombia 02°16'00"N 078°10'00"W 2944 BM, COL P. foetida Colombia 04°29'00"N 075°42'00"W 4265 HUA P. foetida Colombia 04°57'39"N 075°47'26"W 4882 LE, MO P. foetida Colombia 07°09'00"N 073°18'00"W 749 MO P. foetida Colombia 07°20'58"N 073°54'22"W 7111 MO P. foetida Colombia 09°21'00"N 075°27'00"W 76 HUA, MO P. foetida Colombia 05°23'00"N 074°40'00"W 4252 HUA P. foetida Colombia 03°30'00"N 076°32'00"W 3386 G, K P. foetida Colombia 03°46'03"N 076°24'41"W 11100 GH, NY, PH, US P. foetida Colombia 03°37'07"N 076°06'32"W 8033 HUA P. foetida Colombia 03°43'21"N 076°01'15"W 5988 GH, NY, US P. foetida Colombia 04°05'00"N 076°12'00"W s.n. K, NY P. foetida Colombia 04°21'00"N 076°04'00"W 3695 MO P. foetida Colombia 04°21'00"N 076°04'00"W 2660 MO P. foetida Colombia 04°21'00"N 076°04'00"W 3243 MO P. foetida Costa Rica 09°26'24"N 084°02'24"W 11994 CR, MO P. foetida Costa Rica 10°07'12"N 084°33'00"W 20701 CR, MO P. foetida Costa Rica 10°01'12"N 084°07'12"W 121 CR P. foetida Costa Rica 10°31'48"N 084°17'24"W 20511 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°58'48"N 085°06'36"W 1806 MO P. foetida Costa Rica 10°26'24"N 085°33'00"W 23063 CR, MO P. foetida Costa Rica 10°20'00"N 085°21'10"W 245 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°49'48"N 085°36'36"W 2353 CR, MO P. foetida Costa Rica 11°04'00"N 085°40'00"W 4647 MO P. foetida Costa Rica 10°46'20"N 085°20'45"W 5680 INB, MO P. foetida Costa Rica 09°50'52"N 085°21'26"W 192 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°21'00"N 085°21'00"W 2615 MO P. foetida Costa Rica 10°32'15"N 085°17'53"W 166 MO P. foetida Costa Rica 10°18'31"N 085°30'52"W 2965 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°20'24"N 085°04'12"W 66971 MO P. foetida Costa Rica 10°27'00"N 085°05'00"W 6376 MO P. foetida Costa Rica 10°20'24"N 085°10'12"W 4884 MO P. foetida Costa Rica 10°24'55"N 085°29'00"W 392 MO P. foetida Costa Rica 10°55'49"N 085°51'02"W 977 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°50'54"N 085°41'56"W 2619 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°48'10"N 085°39'10"W 898 INB, MO P. foetida Costa Rica 10°54'00"N 085°43'48"W 19584 CR P. foetida Costa Rica 10°09'36"N 085°21'36"W 1006 CR, INB, MO P. foetida Costa Rica 10°25'53"N 084°00'13"W 9107 DUKE P. foetida Costa Rica 10°05'24"N 084°04'12"W 2203 MO P. foetida Costa Rica 09°57'00"N 083°01'12"W 418 MO

331

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Costa Rica 10°01'48"N 083°07'48"W 66410 MO P. foetida Costa Rica 09°59'24"N 083°03'00"W 1183 BM, CR, MO P. foetida Costa Rica 09°47'00"N 084°56'00"W 19259 MO P. foetida Costa Rica 09°24'00"N 084°09'00"W 443 CR P. foetida Costa Rica 09°55'12"N 084°40'12"W 840510-18 CR P. foetida Costa Rica 08°46'00"N 083°15'00"W 738 INB, MO P. foetida Costa Rica 08°41'33"N 083°28'13"W 5344 INB, MO P. foetida Costa Rica 08°45'36"N 083°36'00"W 168 CR, MO P. foetida Costa Rica 08°42'00"N 083°31'48"W 2071 MO P. foetida Costa Rica 08°39'51"N 083°31'22"W 12156 MO, NY P. foetida Costa Rica 09°38'30"N 085°04'34"W 23966 INB, MO P. foetida Costa Rica 09°55'48"N 084°09'36"W 10623 CR P. foetida Costa Rica 09°40'08"N 084°30'18"W 3107 MO P. foetida Ecuador 03°20'04"S 079°26'40"W 2459 MO, QCA, QCNE P. foetida Ecuador 01°23'30"S 079°11'52"W 6438 F P. foetida Ecuador 02°16'24"S 079°04'25"W E-3742 MO P. foetida Ecuador 02°30'06"S 079°28'48"W 15640 MO P. foetida Ecuador 02°24'51"S 079°20'12"W 16686 MO P. foetida Ecuador 03°30'00"S 080°13'00"W 50205 AAU, QCA P. foetida Ecuador 03°27'00"S 079°58'00"W 15697 S P. foetida Ecuador 03°34'53"S 080°03'36"W 1339 HUA, QCA, TEX P. foetida Ecuador 03°34'53"S 080°03'36"W 1339a HUA P. foetida Ecuador 00°48'00"N 078°54'00"W 40387 AAU, MO, QCA, QCNE P. foetida Ecuador 01°05'00"N 078°58'00"W 1827 MO P. foetida Ecuador 00°53'00"N 079°38'00"W 2302 MO P. foetida Ecuador 00°21'00"N 079°44'00"W 856 MO, QCNE P. foetida Ecuador 00°21'00"N 079°42'00"W 2178 MO, QCNE P. foetida Ecuador 00°44'21"S 090°21'06"W 220 MO P. foetida Ecuador 00°41'00"S 090°18'00"W 18326 MO P. foetida Ecuador 02°10'00"S 080°49'00"W 2458 AAU, HUA, MO P. foetida Ecuador 02°44'00"S 080°13'00"W 63661 AAU, MO P. foetida Ecuador 02°47'00"S 080°13'00"W 63867 AAU P. foetida Ecuador 02°47'00"S 079°55'00"W 63917 AAU P. foetida Ecuador 02°00'00"S 079°58'00"W 54841 MO P. foetida Ecuador 02°48'00"S 080°00'00"W 64003 AAU P. foetida Ecuador 02°13'00"S 080°58'00"W 48468 AAU, MA, MO P. foetida Ecuador 02°12'00"S 079°57'00"W 1359 MO P. foetida Ecuador 01°38'00"S 080°44'00"W 1321 MO P. foetida Ecuador 02°09'00"S 079°59'00"W 9607 MO P. foetida Ecuador 01°36'15"S 079°58'28"W 5022 PH P. foetida Ecuador 02°14'36"S 080°08'02"W 12566 GB P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W D 91 MA P. foetida Ecuador 02°50'00"S 080°08'00"W s.n. K P. foetida Ecuador 02°24'36"S 080°21'36"W 20017 GH, NY, US P. foetida Ecuador 02°55'00"S 079°49'00"W 14597 P, WU P. foetida Ecuador 03°00'00"S 079°46'00"W 49 G, S P. foetida Ecuador 02°11'09"S 080°00'40"W 5013 S, UPS P. foetida Ecuador 02°01'55"S 079°56'50"W 756 AAU, GB P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W 2457 BM, K P. foetida Ecuador 02°01'10"S 079°57'12"W 11146 MO

332

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Ecuador 01°51'00"S 079°58'00"W 4142 K P. foetida Ecuador 02°12'00"S 079°50'00"W 23598 GH, NY, US P. foetida Ecuador 02°00'00"S 079°58'00"W 12510 MO P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°58'00"W 2047 MO P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°58'00"W 10522 MO, QCNE P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W s.n. K P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W 10a US P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W s.n. US P. foetida Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W s.n. K P. foetida Ecuador 01°58'00"S 079°44'00"W 660 K P. foetida Ecuador 02°16'28"S 080°08'40"W 3051 S, UPS P. foetida Ecuador 02°12'48"S 080°04'32"W 3091 S P. foetida Ecuador 02°27'00"S 079°40'00"W 13378 MO P. foetida Ecuador 02°11'00"S 079°46'00"W 3932 MO P. foetida Ecuador 01°57'00"S 079°43'00"W 128 WIS P. foetida Ecuador 00°39'00"N 078°10'00"W 28929 AAU, QCA P. foetida Ecuador 00°50'00"N 078°28'00"W 12576 F P. foetida Ecuador 03°57'27"S 079°26'35"W 7897 AAU, MO P. foetida Ecuador 03°58'00"S 079°28'00"W 378 AAU, MO P. foetida Ecuador 03°59'58"S 079°23'40"W 849 LOJA P. foetida Ecuador 04°08'39"S 079°49'19"W 15198 AAU, GB P. foetida Ecuador 04°23'09"S 079°47'45"W 22559 GB, QCA P. foetida Ecuador 03°59'00"S 079°21'00"W 20313 GB P. foetida Ecuador 00°35'00"S 079°22'00"W 4241 RPSC, SEL P. foetida Ecuador 00°36'00"S 079°20'00"W 9921 GB, MO, QCA, S P. foetida Ecuador 01°47'00"S 079°27'00"W 83 NY, S P. foetida Ecuador 01°47'00"S 079°27'00"W 17912 S P. foetida Ecuador 00°31'00"S 080°27'00"W 21782 AAU, HUA, QCA P. foetida Ecuador 00°24'00"S 079°55'00"W 27942 AAU, HUA, K, MO, NY P. foetida Ecuador 01°03'00"S 080°35'00"W 42783 AAU, HUA, MA, MO P. foetida Ecuador 01°16'00"S 081°06'00"W 7272 AAU P. foetida Ecuador 00°37'00"S 080°26'00"W 56044 AAU, MO P. foetida Ecuador 00°38'00"S 080°26'00"W E-177 MO P. foetida Ecuador 01°30'00"S 080°46'00"W 22643 MO P. foetida Ecuador 00°53'00"S 079°43'00"W 4412 K P. foetida Ecuador 00°29'00"S 080°27'00"W 15465a F P. foetida Ecuador 01°21'00"S 080°44'00"W 505 S P. foetida Ecuador 01°21'00"S 080°44'00"W 534 S P. foetida Ecuador 00°36'46"S 080°26'03"W 19649 S P. foetida Ecuador 01°16'00"S 081°04'00"W 588 MO, QCNE P. foetida Ecuador 01°31'00"S 080°44'00"W 11763 MO P. foetida Ecuador 01°17'00"S 081°04'00"W 13993 MO, QCNE P. foetida Ecuador 01°18'00"S 081°06'00"W 125 MO, QCNE P. foetida Ecuador 01°04'00"S 077°37'00"W 2795 MO P. foetida Ecuador 01°04'00"S 077°36'00"W 2700 MO P. foetida Ecuador 01°04'00"S 077°36'00"W 1261 MO P. foetida Ecuador 01°04'00"S 077°36'00"W 413 MO P. foetida Ecuador 00°29'00"S 077°00'00"W 320 MO P. foetida Ecuador 01°02'00"S 077°39'00"W 3 AAU P. foetida Ecuador 00°26'47"S 077°00'39"W 278 AAU, GB

333

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Ecuador 00°25'00"S 076°37'00"W 1710 MO P. foetida Ecuador 00°28'00"S 076°36'00"W 115 MO, QCNE P. foetida Ecuador 01°04'00"S 077°36'00"W 15626 BEREA, MO, QCNE P. foetida Ecuador 01°04'00"S 077°36'00"W 6050 MO, QCNE P. foetida Ecuador 00°28'14"S 076°59'43"W 1579 GB, QCA P. foetida Ecuador 02°12'00"S 077°16'00"W 14631 MO, QCNE P. foetida Ecuador 00°21'00"S 079°22'00"W 40660 AAU, MO P. foetida Ecuador 00°02'00"N 079°21'00"W 1712 S, UPS P. foetida Ecuador 00°19'00"S 078°59'00"W 14811 S P. foetida Ecuador 00°31'00"S 079°22'00"W 56038 AAU, GB, MO, QCA, QCNE P. foetida Ecuador 00°15'36"S 079°10'51"W 7584 MO P. foetida Ecuador 04°21'00"S 078°40'00"W 17258 MO P. foetida El Salvador 13°48'00"N 090°04'00"W JMR02495 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°48'00"N 090°04'00"W JMR01966 B, BM, LAGU, MEXU, MO P. foetida El Salvador 13°48'00"N 090°04'00"W JMR02081 B, BM, LAGU, MEXU, MO P. foetida El Salvador 13°48'00"N 090°04'00"W JMR01952 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°49'00"N 089°59'00"W 775 B, BM, EAP, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°49'00"N 089°59'00"W 800 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°42'00"N 090°00'00"W 821 LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°49'00"N 089°56'00"W ISB00114 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°49'00"N 089°56'00"W 897 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°49'00"N 089°59'00"W 471 B, BM, EAP, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°49'00"N 089°56'00"W ISB00821 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°53'16"N 089°56'24"W 42175 MO P. foetida El Salvador 13°28'00"N 089°14'00"W 57 B, HBG, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°35'22"N 089°17'20"W 779 LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°40'00"N 089°15'00"W s.n. B, F, HBG, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°29'04"N 089°14'42"W RT-00036 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°29'00"N 089°10'00"W RA-148 ITIC, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°11'00"N 087°55'00"W 575 LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°17'00"N 087°45'00"W DR-00631 LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°17'00"N 087°45'00"W DR-00629 LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°18'00"N 088°15'00"W 2349 MO P. foetida El Salvador 13°18'00"N 088°15'00"W 2375 B, LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°19'00"N 088°15'00"W s.n. MA P. foetida El Salvador 14°23'00"N 089°22'00"W DR-00917 B, BM, LAGU, MO P. foetida El Salvador 14°16'00"N 089°28'00"W 1964 LAGU, MO P. foetida El Salvador 13°40'00"N 089°38'00"W 1748 B, BM, LAGU, MHES, MO P. foetida Guiana 03°55'00"N 053°05'00"W s.n. W P. foetida Guiana 03°55'00"N 053°05'00"W s.n. G P. foetida Guatemala 15°17'59"N 089°42'14"W 14481 MEXU, MO P. foetida Guatemala 15°51'26"N 089°12'00"W 10115 MO P. foetida Guatemala 16°59'34"N 089°41'28"W 712 MO P. foetida Guatemala 16°59'34"N 089°41'28"W 715 MO P. foetida Guatemala 16°21'55"N 089°25'59"W 2689 MO P. foetida Guatemala 16°55'04"N 089°53'15"W 2550 MO P. foetida Guatemala 16°54'43"N 089°54'12"W 3573 MO P. foetida Guatemala 16°53'28"N 089°51'17"W 6046 MO P. foetida Guatemala 16°07'29"N 089°27'01"W 6367 MO P. foetida Guatemala 17°13'30"N 089°36'47"W 88 MO

334

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Guatemala 16°53'05"N 089°56'47"W 6085 MO P. foetida Guatemala 16°30'05"N 089°24'50"W 2296 MO P. foetida Guatemala 16°58'09"N 089°54'34"W 9673 MO P. foetida Guatemala 14°21'48"N 090°27'38"W 3169 MO P. foetida Guatemala 15°01'45"N 089°37'54"W 25638 MO P. foetida Guinea 07°20'54"N 008°57'15"W 5074 MO P. foetida Guyana 05°41'00"N 060°38'00"W 2174 MO P. foetida Guyana 07°16'00"N 058°43'00"W 3161 K, MO, NY, US P. foetida Guyana 06°30'00"N 058°11'00"W 9258 MO P. foetida Guyana 07°22'00"N 060°28'00"W 4194 MO P. foetida Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W s.n. K P. foetida Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W 5072 NY, US P. foetida Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W 4 BM, K, US P. foetida Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W 2526 MO P. foetida Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W 558 B P. foetida Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W 632 G, K, U, US, W P. foetida Guyana 06°48'00"N 058°09'00"W 4563 NY, US P. foetida Guyana 06°52'00"N 058°25'00"W 16767 GH, NY, US P. foetida Guyana 06°00'00"N 060°10'00"W 5410 BM, NY P. foetida Honduras 15°47'00"N 086°48'00"W 8419 MO P. foetida Honduras 15°47'22"N 087°32'46"W 24257 FTG, MO P. foetida Honduras 13°18'00"N 087°11'00"W 7 MO P. foetida Honduras 13°12'00"N 087°22'00"W 31974 MO P. foetida Honduras 13°35'00"N 087°22'00"W 163 MO P. foetida Honduras 14°57'31"N 087°44'16"W 6212 MO, TEFH P. foetida Honduras 14°55'52"N 087°47'06"W 6718 MO, TEFH P. foetida Honduras 14°19'04"N 087°35'40"W 5318 MO, TEFH P. foetida Honduras 15°02'15"N 087°34'33"W 7684 MO, TEFH P. foetida Honduras 14°45'55"N 087°38'45"W 6958 TEFH P. foetida Honduras 14°35'00"N 087°53'00"W 2004 MO P. foetida Honduras 15°23'00"N 088°01'00"W 5682 MO, TEFH P. foetida Honduras 14°05'13"N 086°47'52"W 2423 MO P. foetida Honduras 13°56'23"N 086°50'25"W 125 MO P. foetida Honduras 14°09'00"N 087°05'00"W 40 HUA P. foetida Honduras 14°04'22"N 087°19'11"W 236 MO P. foetida Honduras 14°10'51"N 087°07'48"W 40 MO P. foetida Honduras 14°06'56"N 087°11'41"W 4074 TEFH P. foetida Honduras 14°05'06"N 087°10'01"W 171 MO P. foetida Honduras 14°04'43"N 087°09'14"W 177 MO P. foetida Honduras 14°04'10"N 087°10'36"W 82 MO P. foetida Honduras 14°02'36"N 087°01'40"W 31746 MO P. foetida Honduras 15°46'00"N 084°34'00"W 1008 MO, TEFH P. foetida Honduras 14°42'00"N 084°57'00"W 4150 MO, TEFH P. foetida Honduras 13°54'46"N 088°23'29"W 345 TEFH P. foetida Honduras 16°21'00"N 086°26'00"W 4367 TEFH P. foetida Honduras 14°26'30"N 085°58'14"W 42064 TEFH P. foetida Honduras 14°53'00"N 088°02'00"W 3686 B, MO P. foetida Honduras 13°19'39"N 087°31'21"W 116 TEFH P. foetida Honduras 15°25'00"N 087°45'00"W 176 MO P. foetida Mexico 23°37'00"N 102°34'30"W 5792 MEXU, MO

335

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Mexico 21°49'54"N 102°43'12"W 1296 MO P. foetida Mexico 27°19'00"N 112°49'00"W 7057 ARIZ P. foetida Mexico 27°18'52"N 112°50'01"W 2001-310 MO P. foetida Mexico 19°24'00"N 090°38'00"W 2378 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°48'00"N 090°57'00"W 2277 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°41'24"N 091°37'48"W 14562 WIS P. foetida Mexico 18°13'00"N 090°55'00"W 13445 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°18'00"N 091°21'00"W 6153 CICY, MO P. foetida Mexico 18°58'43"N 089°18'21"W 30601 MO P. foetida Mexico 18°20'30"N 092°03'05"W 692 CICY, MO P. foetida Mexico 14°54'00"N 092°17'00"W 3499 MO P. foetida Mexico 15°17'00"N 092°41'00"W 16359 MO P. foetida Mexico 16°17'22"N 093°52'37"W 37012 MEXU, MO P. foetida Mexico 17°43'10"N 092°04'22"W 28770 MO P. foetida Mexico 16°42'53"N 092°59'05"W 68 MO P. foetida Mexico 15°12'28"N 092°35'04"W 432 KESC P. foetida Mexico 16°39'00"N 090°48'00"W 11982 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°39'00"N 090°48'00"W 18616 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°39'00"N 090°48'00"W 13762 MEXU P. foetida Mexico 16°53'47"N 093°26'07"W 25191 MO P. foetida Mexico 16°45'48"N 093°18'54"W 207 MO P. foetida Mexico 15°44'54"N 093°10'03"W 826 MO P. foetida Mexico 15°45'42"N 093°09'48"W 82 MO P. foetida Mexico 15°45'42"N 093°09'48"W 82 MO P. foetida Mexico 17°23'54"N 093°01'52"W 26480 MO P. foetida Mexico 14°58'48"N 092°13'48"W 1550 ASU, MO P. foetida Mexico 16°47'23"N 093°10'24"W 347 HEM, MO P. foetida Mexico 16°20'40"N 092°36'20"W 8042 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°19'40"N 093°34'41"W 7413 MEXU, MO P. foetida Mexico 17°18'36"N 099°27'36"W 6339 MEXU P. foetida Mexico 18°20'24"N 100°06'00"W 624 MEXU P. foetida Mexico 16°51'00"N 099°55'00"W 764 MEXU, MO P. foetida Mexico 17°03'00"N 098°40'00"W 87 MO P. foetida Mexico 18°20'00"N 100°39'00"W 8045 herb. Hinton P. foetida Mexico 16°52'00"N 099°58'00"W 7165 MO P. foetida Mexico 16°52'16"N 099°53'00"W 306 MO P. foetida Mexico 19°30'00"N 105°03'00"W 417 MO P. foetida Mexico 20°19'37"N 103°11'05"W 664 MO P. foetida Mexico 19°42'00"N 104°23'00"W 3051 ZEA P. foetida Mexico 19°02'35"N 100°06'20"W 4411 herb. Hinton, MA P. foetida Mexico 18°42'00"N 100°55'00"W 1185 MEXU, MO P. foetida Mexico 19°28'00"N 100°29'00"W 13049 herb. Hinton P. foetida Mexico 21°04'48"N 104°33'36"W 21876 ASU, MO P. foetida Mexico 22°15'00"N 104°40'00"W 547 MEXU, MO P. foetida Mexico 21°50'00"N 104°43'00"W 18648 MEXU, MO P. foetida Mexico 21°30'00"N 104°54'00"W 3839 MEXU, MO P. foetida Mexico 25°33'36"N 100°12'36"W 172 MIN P. foetida Mexico 24°36'36"N 099°52'48"W 21602 herb. Hinton P. foetida Mexico 25°20'00"N 099°37'00"W 17782 herb. Hinton P. foetida Mexico 25°59'00"N 099°51'00"W 17947 herb. Hinton

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Mexico 17°43'48"N 096°18'36"W 65493 MO P. foetida Mexico 17°03'36"N 096°43'12"W 2292 MEXU P. foetida Mexico 18°09'00"N 097°10'48"W F-3869 MEXU P. foetida Mexico 16°14'00"N 095°09'00"W 72 MO P. foetida Mexico 18°06'00"N 096°07'00"W 3366 MEXU, MO P. foetida Mexico 17°54'52"N 096°44'55"W 97 MO P. foetida Mexico 16°14'00"N 095°55'00"W 18769 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°41'30"N 097°51'00"W 646 MO P. foetida Mexico 16°21'00"N 095°20'00"W 85 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°20'00"N 095°14'00"W 5272 MO, US P. foetida Mexico 16°33'00"N 094°57'00"W 21923 MO P. foetida Mexico 17°36'00"N 096°32'00"W 847 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°22'30"N 095°44'00"W 3028 MO P. foetida Mexico 17°42'56"N 096°18'18"W 4246 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°27'00"N 095°09'00"W 5853 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°06'00"N 097°12'00"W 20159 MO P. foetida Mexico 16°30'00"N 095°03'00"W 962 UC P. foetida Mexico 15°41'24"N 096°23'36"W 26498 herb. Hinton P. foetida Mexico 15°45'53"N 096°07'11"W 7741 MEXU, MO P. foetida Mexico 17°06'00"N 097°54'00"W 7162 MEXU, MO P. foetida Mexico 16°19'40"N 095°12'57"W 110 MO P. foetida Mexico 18°11'00"N 097°12'00"W 4187 MEXU, MO P. foetida Mexico 17°57'52"N 097°02'06"W 510 HEM, KESC, MO P. foetida Mexico 18°13'00"N 096°22'00"W 2215 MO P. foetida Mexico 18°13'00"N 096°22'00"W 2221 MO P. foetida Mexico 18°10'00"N 097°29'00"W 3751 MEXU P. foetida Mexico 18°12'36"N 097°30'36"W 11763 MEXU P. foetida Mexico 19°09'36"N 098°18'36"W F-2661 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°13'48"N 097°33'00"W F-415 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°16'48"N 097°28'48"W F-3751 MEXU, MO P. foetida Mexico 21°09'00"N 099°06'00"W 2399 MO P. foetida Mexico 18°06'00"N 088°43'00"W 2378 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°28'45"N 088°47'29"W 1696 MEXU, MO P. foetida Mexico 20°52'15"N 086°53'25"W 1261 CICY, MO P. foetida Mexico 19°54'00"N 088°45'36"W 1889 MA, MO P. foetida Mexico 21°37'48"N 098°53'24"W 1834 TEX, XAL P. foetida Mexico 21°16'00"N 098°47'00"W 2121 MO P. foetida Mexico 21°23'00"N 098°57'00"W s.n. CAS P. foetida Mexico 21°16'22"N 098°47'29"W 1435 IEC, MO P. foetida Mexico 27°24'00"N 108°51'00"W 1296 MO P. foetida Mexico 29°52'00"N 109°26'00"W L19411 ASU P. foetida Mexico 27°01'36"N 108°57'23"W 94-826 MO P. foetida Mexico 26°56'15"N 108°53'00"W 94-470 MO P. foetida Mexico 26°55'15"N 108°55'09"W 9545B MO, TEX P. foetida Mexico 26°47'24"N 109°13'48"W 93-950 ARIZ P. foetida Mexico 17°33'00"N 092°57'00"W 37482 MEXU P. foetida Mexico 17°46'10"N 091°01'00"W 144 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°21'05"N 092°24'58"W 3093 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°20'38"N 092°35'25"W 4120 MO P. foetida Mexico 17°49'12"N 093°30'36"W 3325 MO

337

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Mexico 22°18'00"N 097°51'00"W 487 MO P. foetida Mexico 23°46'00"N 099°15'00"W 1982 MO P. foetida Mexico 20°27'00"N 097°19'00"W 18 MEXU, MO P. foetida Mexico 20°01'00"N 096°38'00"W 26987 F, MO, XAL P. foetida Mexico 19°48'00"N 097°13'00"W 14684 MO P. foetida Mexico 20°10'12"N 097°34'12"W 11 MEXU P. foetida Mexico 20°25'00"N 097°19'00"W 419 MEXU, MO P. foetida Mexico 18°51'00"N 097°06'00"W 2438 G, GH, L, P P. foetida Mexico 18°12'00"N 094°46'00"W 25127 NY P. foetida Mexico 18°18'00"N 094°48'00"W 3343 MO P. foetida Mexico 21°11'00"N 089°58'30"W 977 CICY, MO P. foetida Mexico 21°17'50"N 089°34'27"W 300 CICY, FLAS P. foetida Mexico 20°53'24"N 089°25'12"W 8792 MEXU, MO P. foetida Mexico 20°30'00"N 088°42'36"W 23582 MA P. foetida Mexico 20°55'48"N 089°56'24"W 9079 MO P. foetida Mexico 21°31'44"N 087°44'44"W 2434 CICY, MO P. foetida Nicaragua 14°01'30"N 083°23'00"W 650 P. foetida Nicaragua 13°41'30"N 084°50'30"W 7272 HUA, MO P. foetida Nicaragua 14°01'40"N 083°23'00"W 10701 HUA, MO P. foetida Nicaragua 14°01'00"N 083°24'00"W 7900 MO P. foetida Nicaragua 14°18'30"N 083°41'30"W 7809 MO P. foetida Nicaragua 14°19'00"N 083°12'00"W 10497 HUA, MO P. foetida Nicaragua 13°32'00"N 084°30'00"W 12747 MO P. foetida Nicaragua 14°18'00"N 083°41'00"W 7758 MO P. foetida Nicaragua 13°48'00"N 084°50'00"W 1412 MO P. foetida Nicaragua 14°09'00"N 083°29'00"W 10581 MO P. foetida Nicaragua 12°10'00"N 084°18'00"W 2643 MO P. foetida Nicaragua 12°28'00"N 085°44'00"W 10129 MO P. foetida Nicaragua 12°36'00"N 085°32'00"W 9279 MO P. foetida Nicaragua 12°37'11"N 085°24'47"W 34566 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°38'30"N 086°20'20"W 2766 MO P. foetida Nicaragua 11°31'00"N 086°10'00"W 105 CR, MO P. foetida Nicaragua 11°43'00"N 086°19'00"W 2913 MO P. foetida Nicaragua 12°30'00"N 087°10'00"W 1802 MO P. foetida Nicaragua 12°30'00"N 087°10'00"W 1805 MO P. foetida Nicaragua 12°07'00"N 085°28'00"W 22969 MO P. foetida Nicaragua 12°02'00"N 085°08'00"W 30801 MO P. foetida Nicaragua 12°04'00"N 085°24'00"W 17428 MO P. foetida Nicaragua 12°21'13"N 085°12'16"W 32203 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°54'05"N 085°26'29"W 32565 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°47'34"N 085°01'41"W 27393 HULE, MO P. foetida Nicaragua 13°13'13"N 086°17'46"W 100 HULE, MO P. foetida Nicaragua 13°11'00"N 086°37'00"W 2072 MO P. foetida Nicaragua 13°11'00"N 086°37'00"W 2222 MO P. foetida Nicaragua 13°01'00"N 086°13'00"W 9355 MO P. foetida Nicaragua 13°01'00"N 086°14'00"W 9398 MO P. foetida Nicaragua 13°02'00"N 086°18'00"W 14017 MO P. foetida Nicaragua 13°07'00"N 086°15'00"W 15259 MO P. foetida Nicaragua 13°23'00"N 086°24'00"W 23202 MO P. foetida Nicaragua 13°09'52"N 086°18'25"W 30017 HULE, MO

338

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Nicaragua 11°56'00"N 085°57'00"W 2254 MO P. foetida Nicaragua 12°01'00"N 085°56'00"W 692 MO P. foetida Nicaragua 11°48'00"N 086°02'00"W 9930 MO P. foetida Nicaragua 12°00'30"N 085°56'30"W 7209 MO P. foetida Nicaragua 11°47'00"N 085°55'00"W 2857 MO P. foetida Nicaragua 11°47'40"N 085°53'45"W 756 MO P. foetida Nicaragua 11°45'00"N 085°59'00"W 530 MO P. foetida Nicaragua 12°01'00"N 085°56'00"W 4634 MO P. foetida Nicaragua 11°46'00"N 085°57'00"W 7858 MO P. foetida Nicaragua 11°56'00"N 085°58'00"W 120 C, G, K, MPU, P P. foetida Nicaragua 11°58'12"N 085°56'36"W 30156 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°43'00"N 086°00'00"W 5958 HULE, MO P. foetida Nicaragua 14°13'49"N 085°19'15"W 184 HULE, MO P. foetida Nicaragua 14°06'00"N 085°25'49"W 220 HULE, MO P. foetida Nicaragua 12°18'00"N 086°42'00"W 17250 MO P. foetida Nicaragua 12°05'00"N 086°43'00"W 4687 MO P. foetida Nicaragua 12°24'00"N 086°31'00"W 7798 B, MO P. foetida Nicaragua 12°11'00"N 086°40'00"W 9762 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°16'00"N 086°44'00"W 1054 MO P. foetida Nicaragua 12°26'00"N 086°40'00"W 9786 MO P. foetida Nicaragua 12°23'00"N 087°01'00"W 6560 MO P. foetida Nicaragua 12°23'00"N 087°01'00"W 6561 MO P. foetida Nicaragua 12°16'40"N 086°45'00"W 1279 MO P. foetida Nicaragua 12°21'15"N 086°28'50"W 2904 MO P. foetida Nicaragua 12°23'00"N 086°32'00"W 1097 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°46'00"N 086°16'00"W 2511 MO P. foetida Nicaragua 12°48'00"N 086°16'00"W 2527 MO P. foetida Nicaragua 12°23'00"N 086°51'00"W 3210 MO P. foetida Nicaragua 12°23'00"N 086°59'00"W 2561 MO P. foetida Nicaragua 12°40'30"N 086°17'05"W 10450 MO P. foetida Nicaragua 12°15'00"N 086°43'00"W 11145 HUA, MO P. foetida Nicaragua 13°28'00"N 086°36'00"W 6844 MO P. foetida Nicaragua 12°16'05"N 086°28'25"W 9083 MO P. foetida Nicaragua 12°15'00"N 086°19'00"W 8979 MO P. foetida Nicaragua 12°12'00"N 086°21'00"W 9018 MO P. foetida Nicaragua 12°22'00"N 086°04'00"W 8785 MO P. foetida Nicaragua 12°27'00"N 086°04'00"W 18726 MO P. foetida Nicaragua 11°49'00"N 086°28'00"W 21493 MO P. foetida Nicaragua 12°12'00"N 086°21'00"W 8616 MO P. foetida Nicaragua 12°07'00"N 086°16'00"W 205 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°15'00"N 086°28'00"W 634 MO P. foetida Nicaragua 12°07'50"N 086°18'35"W 636 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°14'00"N 086°26'50"W 8575 MO P. foetida Nicaragua 12°16'25"N 086°28'55"W 8589 MO P. foetida Nicaragua 12°17'00"N 086°21'00"W 615 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°06'00"N 086°16'00"W 990 MO P. foetida Nicaragua 12°30'00"N 086°04'00"W 1425 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°10'00"N 086°08'00"W 7285 MO P. foetida Nicaragua 11°48'00"N 086°30'00"W 448 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°14'00"N 086°25'00"W 3538 HUA, MO

339

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Nicaragua 12°10'00"N 086°07'00"W 1573 BM, ENAG, F, GH, MO P. foetida Nicaragua 12°09'00"N 086°08'00"W 5444 MO P. foetida Nicaragua 12°09'00"N 086°08'00"W 6093 BM, ENAG, F, GH, MO P. foetida Nicaragua 12°09'00"N 086°08'00"W 6281 MO P. foetida Nicaragua 11°47'30"N 086°31'00"W 6234 HUA, MO P. foetida Nicaragua 11°48'00"N 086°30'00"W 6250 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°06'00"N 086°16'00"W 20468 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°15'00"N 086°28'00"W 13172 HUA, MO P. foetida Nicaragua 12°10'00"N 086°08'00"W 39008 MO P. foetida Nicaragua 12°29'00"N 086°03'00"W 11112 MO P. foetida Nicaragua 12°03'30"N 086°30'30"W 43669 MO P. foetida Nicaragua 11°52'00"N 086°30'00"W 6048 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°52'00"N 086°30'00"W 18256 HULE, MO P. foetida Nicaragua 12°29'28"N 086°04'05"W 28006 HULE, MO P. foetida Nicaragua 12°09'00"N 086°09'00"W 27276 P. foetida Nicaragua 11°58'00"N 086°07'00"W 4232 HUA, MO P. foetida Nicaragua 11°59'00"N 086°09'00"W 3447 MO P. foetida Nicaragua 11°58'00"N 086°08'00"W 6147 MO P. foetida Nicaragua 12°00'00"N 086°09'00"W 10435 MO P. foetida Nicaragua 11°59'00"N 086°08'00"W 8928 MO P. foetida Nicaragua 12°38'00"N 085°47'00"W 745 MO P. foetida Nicaragua 12°37'00"N 086°03'00"W 18321 MO P. foetida Nicaragua 12°43'00"N 086°16'00"W 10505 MO P. foetida Nicaragua 12°35'00"N 086°04'00"W 7316 MO P. foetida Nicaragua 12°48'00"N 086°15'00"W 5332 MO P. foetida Nicaragua 12°37'00"N 086°02'00"W 9426 MO P. foetida Nicaragua 12°47'30"N 086°07'30"W 6034 MO P. foetida Nicaragua 13°42'44"N 086°30'06"W 27313 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°07'15"N 084°21'04"W 1062 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°02'30"N 084°28'25"W 966 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°07'15"N 084°21'04"W 1607 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°02'30"N 084°28'25"W 3855 HULE, MO P. foetida Nicaragua 11°09'00"N 085°47'00"W 3773 MO P. foetida Nicaragua 11°34'00"N 085°37'00"W 584 MO P. foetida Nicaragua 11°29'00"N 085°32'00"W 956 MO P. foetida Nicaragua 11°11'00"N 085°48'00"W 317 MO P. foetida Nicaragua 11°38'00"N 086°00'50"W 2583 MO P. foetida Nicaragua 11°39'00"N 085°57'30"W 2470 MO P. foetida Nicaragua 11°35'00"N 085°35'00"W 1655 MO P. foetida Nicaragua 11°32'00"N 085°42'00"W s.n. IA P. foetida Nicaragua 11°05'14"N 085°42'57"W 33796 HULE, MO P. foetida Panama 08°26'30"N 080°06'30"W 10172 MO P. foetida Panama 08°26'30"N 080°06'30"W 4538 MO P. foetida Panama 08°26'30"N 080°06'30"W 5534 MO P. foetida Panama 08°26'30"N 080°06'30"W 1525 MO P. foetida Panama 09°19'00"N 082°09'00"W 2142 MO P. foetida Panama 09°14'42"N 082°23'00"W 1562 MO P. foetida Panama 09°14'42"N 082°23'00"W 1718 MO P. foetida Panama 08°55'00"N 082°10'00"W 1955 MO P. foetida Panama 09°14'42"N 082°23'00"W 1831 MO

340

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Panama 09°14'00"N 082°30'00"W 1370 MO P. foetida Panama 09°04'49"N 079°37'15"W 8929 MO P. foetida Panama 09°07'10"N 079°42'02"W 4899 MO P. foetida Panama 09°07'50"N 079°43'20"W 3290 MO, TEFH P. foetida Panama 09°08'29"N 079°50'35"W 843a MO P. foetida Panama 09°06'06"N 079°36'56"W 724 MO P. foetida Panama 09°10'00"N 079°51'00"W 613 MO P. foetida Panama 09°10'21"N 079°47'53"W 303 MO P. foetida Panama 09°09'00"N 079°51'00"W 4 MO P. foetida Panama 08°55'50"N 079°34'19"W 3081 MO P. foetida Panama 09°00'43"N 079°35'49"W 1379 MO P. foetida Panama 09°10'07"N 079°51'07"W 6396a MO P. foetida Panama 09°18'06"N 080°00'05"W 1573 MO P. foetida Panama 09°13'30"N 079°32'00"W 899 MO P. foetida Panama 09°09'55"N 079°50'15"W 4641 MO P. foetida Panama 08°58'40"N 079°36'47"W 529 MO P. foetida Panama 09°09'47"N 079°50'14"W 17034 MO P. foetida Panama 09°12'32"N 079°37'00"W 3538 MO P. foetida Panama 09°14'38"N 079°48'57"W 11069 MO P. foetida Panama 09°07'10"N 079°42'02"W 9323 MO P. foetida Panama 09°09'45"N 079°50'30"W 7400 MO P. foetida Panama 08°33'06"N 082°19'06"W 5048 MO P. foetida Panama 08°34'00"N 082°25'00"W 45 MO P. foetida Panama 08°37'00"N 080°11'00"W 1744 MO P. foetida Panama 08°22'42"N 080°06'12"W 4099 MO P. foetida Panama 08°26'18"N 080°19'12"W 2906 MO P. foetida Panama 09°17'08"N 079°54'27"W 557 MA P. foetida Panama 09°12'00"N 079°36'00"W 2707 MO P. foetida Panama 09°38'00"N 079°34'00"W 4025 MO P. foetida Panama 09°23'09"N 079°46'57"W 10903 MO P. foetida Panama 09°06'06"N 079°36'56"W 107 MO P. foetida Panama 09°31'44"N 079°39'57"W 1765 MO P. foetida Panama 09°30'00"N 079°40'00"W 3589 MO P. foetida Panama 08°06'00"N 077°40'00"W 292 MO P. foetida Panama 08°07'00"N 077°40'00"W 1551 MO P. foetida Panama 08°51'00"N 077°55'00"W 15404 MO P. foetida Panama 08°08'00"N 077°41'00"W 15546 MO P. foetida Panama 07°44'00"N 077°30'00"W 14591 MO P. foetida Panama 08°06'00"N 077°43'00"W 3399 MO P. foetida Panama 08°07'00"N 077°43'00"W 5525 MO P. foetida Panama 07°55'00"N 077°44'00"W 15504 MO P. foetida Panama 08°15'00"N 077°45'00"W 3974 MO P. foetida Panama 07°44'00"N 077°30'00"W 14591 MO P. foetida Panama 07°55'00"N 077°44'00"W 4972 MO P. foetida Panama 07°25'10"N 080°09'59"W 19 MO P. foetida Panama 08°44'00"N 079°51'00"W 4805 MO P. foetida Panama 09°15'00"N 078°57'00"W 3870 MO P. foetida Panama 09°05'00"N 079°17'00"W 33 MO P. foetida Panama 08°41'00"N 079°55'00"W 35939 MO P. foetida Panama 09°05'00"N 078°27'00"W 5955 MO

341

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Panama 09°12'44"N 078°57'51"W 1729 MO P. foetida Panama 08°35'00"N 079°53'00"W 43 MO P. foetida Panama 08°56'00"N 079°34'00"W 2733 MO P. foetida Panama 09°10'09"N 079°04'53"W 12584 IBE, MISS, MO P. foetida Panama 09°10'33"N 079°04'53"W 5350 MO P. foetida Panama 09°05'00"N 079°17'41"W 5141 MO P. foetida Panama 08°47'35"N 079°33'22"W 2042 MO P. foetida Panama 08°40'00"N 077°24'00"W 13675 MO P. foetida Panama 09°19'20"N 078°13'58"W 380 MO P. foetida Panama 09°13'45"N 078°01'45"W 5013 MO P. foetida Panama 09°18'00"N 078°14'00"W 36 MO P. foetida Panama 08°55'00"N 077°44'00"W 1749 MO P. foetida Panama 09°16'00"N 078°14'00"W 6364 MO P. foetida Panama 09°27'00"N 079°06'00"W 7531 MO P. foetida Panama 08°39'59"N 077°24'59"W 4639 MO P. foetida Panama 08°39'59"N 077°24'59"W 4652 MO P. foetida Panama 07°30'52"N 081°51'49"W 2395 MO P. foetida Panama 07°37'00"N 081°44'00"W 2215 MA P. foetida Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 935 K, NY, PH, US P. foetida Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 4791 BM P. foetida Paraguay 20°19'22"S 059°45'32"W 58128 MO P. foetida Paraguay 20°33'24"S 059°50'28"W 50015 AS, MO P. foetida Paraguay 20°07'00"S 061°55'00"W 3300 FCQ, MO P. foetida Paraguay 22°39'04"S 056°01'33"W 6089 MO P. foetida Paraguay 22°39'00"S 056°03'00"W 6940 HUA, MO, PY P. foetida Paraguay 21°43'00"S 060°54'00"W 38023 AS, MO P. foetida Paraguay 21°17'00"S 061°36'00"W 39247 AS, MO P. foetida Paraguay 20°54'21"S 061°50'27"W 42212 AS, MO P. foetida Paraguay 21°12'37"S 061°39'26"W 49860 AS, MO P. foetida Paraguay 22°40'00"S 060°07'00"W 2083 CTES P. foetida Paraguay 22°26'00"S 060°01'00"W 2459 CTES P. foetida Paraguay 21°45'00"S 059°00'00"W 2624 CTES P. foetida Paraguay 25°43'00"S 057°15'00"W 1415 MO P. foetida Paraguay 22°21'00"S 060°02'00"W 1235 MO P. foetida Paraguay 25°06'39"S 056°20'31"W 56034 MO P. foetida Paraguay 26°15'01"S 055°45'54"W 52780 AS, MO P. foetida Paraguay 23°59'39"S 055°28'44"W 49396 AS, MO P. foetida Paraguay 25°44'00"S 057°44'00"W 35423 AS, MO P. foetida Paraguay 25°36'00"S 057°36'00"W 35607 AS, MO P. foetida Paraguay 25°34'00"S 057°33'00"W 34361 AS, MO P. foetida Paraguay 25°26'00"S 057°32'00"W 36144 AS, MO P. foetida Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 31401 AS, MO P. foetida Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 30820 AS, MO P. foetida Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 24392 AS, MO P. foetida Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 23487 AS, MO P. foetida Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 23558 AS, MO P. foetida Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 31732 AS, MO P. foetida Paraguay 25°16'00"S 057°40'00"W 577 GH, MO, NY, US P. foetida Paraguay 22°50'00"S 057°06'00"W 2227 FCQ P. foetida Paraguay 25°04'07"S 057°14'04"W 58611 MO

342

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Paraguay 25°18'00"S 057°06'00"W 3756 FCQ, MO P. foetida Paraguay 25°07'00"S 057°30'00"W 16697 AS, MO P. foetida Paraguay 25°20'00"S 057°05'00"W 441 MO P. foetida Paraguay 25°36'00"S 055°58'00"W 3789 MO, US P. foetida Paraguay 27°29'20"S 056°45'17"W 59180 MO P. foetida Paraguay 27°26'43"S 056°45'02"W 46149 AS, MO P. foetida Paraguay 27°26'43"S 056°45'02"W 46192 AS, MO P. foetida Paraguay 27°26'55"S 056°49'23"W 52165 AS, MO P. foetida Paraguay 20°43'00"S 061°56'00"W 1629 MO, PY P. foetida Paraguay 25°34'10"S 057°07'57"W 6094 MO P. foetida Paraguay 23°32'00"S 058°08'00"W 37498 FCQ, MO P. foetida Paraguay 25°03'23"S 057°52'58"W 41686 AS, MO P. foetida Paraguay 24°55'25"S 058°11'07"W 54744 MO P. foetida Paraguay 22°50'00"S 059°40'00"W 47090 AS, MO P. foetida Paraguay 23°07'52"S 059°13'01"W 47177 AS, MO P. foetida Paraguay 23°07'52"S 059°13'01"W 47203 AS, MO P. foetida Paraguay 22°58'50"S 059°07'05"W 45950 AS, MO P. foetida Paraguay 22°58'50"S 059°07'05"W 45951 AS, MO P. foetida Paraguay 22°59'07"S 059°07'52"W 46021 AS, MO P. foetida Paraguay 22°59'07"S 059°07'52"W 46067 AS, MO P. foetida Paraguay 23°27'12"S 057°28'11"W 56956 MO P. foetida Paraguay 23°30'38"S 058°46'56"W 57103 MO P. foetida Paraguay 23°28'00"S 058°58'00"W 20138 MO P. foetida Paraguay 23°41'00"S 058°56'00"W 1905 S P. foetida Paraguay 23°50'26"S 056°23'47"W 48096 AS, MO P. foetida Paraguay 24°38'00"S 056°28'00"W 45826 CTES P. foetida Peru 08°22'57"S 074°32'17"W 17607 MO P. foetida Peru 15°47'46"S 074°21'49"W 13497 MO P. foetida Peru 08°22'00"S 074°33'00"W 5766 MO P. foetida Peru 05°55'50"S 078°38'57"W 27143 MO P. foetida Peru 05°48'22"S 078°44'04"W 925 MO P. foetida Peru 05°37'00"S 078°29'00"W 22780 MO P. foetida Peru 05°03'24"S 078°20'17"W 24730 MO P. foetida Peru 04°55'00"S 078°19'00"W 1342 MO P. foetida Peru 05°09'36"S 078°17'20"W 4237 MO P. foetida Peru 05°30'00"S 078°33'00"W 58339 HUA, MO P. foetida Peru 06°52'00"S 078°02'00"W 6174 MO P. foetida Peru 06°50'39"S 078°01'48"W 13348 MO P. foetida Peru 04°28'00"S 078°10'00"W 312 MO P. foetida Peru 09°29'00"S 078°17'00"W 6 MO P. foetida Peru 05°25'00"S 078°50'00"W 61283 MO P. foetida Peru 07°26'00"S 078°56'00"W 15501 MO P. foetida Peru 06°00'00"S 078°55'00"W 2229 MO P. foetida Peru 05°46'52"S 078°45'19"W 911 MO P. foetida Peru 05°19'16"S 078°41'05"W 196 MO P. foetida Peru 04°58'46"S 079°05'01"W 25093 MO P. foetida Peru 04°58'46"S 079°05'01"W 4753 MO P. foetida Peru 05°10'00"S 078°48'00"W 2602 MO P. foetida Peru 05°17'00"S 078°42'00"W 2771 MO P. foetida Peru 05°21'00"S 078°43'00"W 2051 MO

343

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Peru 13°28'00"S 072°26'00"W 2958 MA P. foetida Peru 13°31'05"S 072°31'07"W 5753 AMAZ, CUZ, HUT, MO P. foetida Peru 13°28'02"S 072°29'55"W 6543 CUZ, MO P. foetida Peru 13°28'23"S 072°25'59"W 2958 MO P. foetida Peru 13°31'30"S 072°31'07"W 7719 CUZ, MO, USM P. foetida Peru 13°23'33"S 072°52'02"W 3740 AMAZ, CUZ, HUT, MO P. foetida Peru 12°46'04"S 072°38'00"W 6282 AMAZ, CUZ, HUT, MO P. foetida Peru 13°14'00"S 072°31'00"W 2075 AMAZ, CUZ, HUT, MO P. foetida Peru 13°13'43"S 072°25'32"W 3055 CUZ, MO, USM P. foetida Peru 09°25'00"S 075°58'00"W 9555 MO P. foetida Peru 14°49'00"S 074°51'00"W 8445 CUZ, MO P. foetida Peru 07°51'00"S 077°39'00"W 1203 HUA P. foetida Peru 08°07'00"S 079°02'00"W 7877 MO P. foetida Peru 08°11'00"S 079°02'00"W 3 MO P. foetida Peru 06°45'00"S 079°52'00"W 990 MO P. foetida Peru 05°52'00"S 079°43'00"W 2115 MO P. foetida Peru 06°37'00"S 079°22'00"W 61378 MO P. foetida Peru 06°44'00"S 079°47'00"W 936 MO P. foetida Peru 11°56'35"S 076°42'35"W 556 MO P. foetida Peru 12°08'00"S 076°56'00"W 893 MO P. foetida Peru 03°44'53"S 073°14'50"W 959 F, MO, NY, US P. foetida Peru 03°50'06"S 073°19'42"W 19118 MO P. foetida Peru 04°40'00"S 074°28'00"W 38168 HUA, MO P. foetida Peru 04°10'00"S 073°20'00"W 3600 HUA, MO P. foetida Peru 03°58'16"S 073°25'08"W 14468 MO P. foetida Peru 04°10'00"S 073°20'00"W 10390 MO P. foetida Peru 04°42'00"S 074°18'00"W 3740 MO P. foetida Peru 08°42'00"S 073°12'00"W 18695 MO P. foetida Peru 04°21'00"S 070°11'00"W 20784 MO P. foetida Peru 03°37'00"S 074°42'00"W 4556 MO P. foetida Peru 03°45'57"S 073°13'54"W 29695 MO P. foetida Peru 03°40'00"S 073°15'00"W 7061 MO P. foetida Peru 03°53'26"S 073°21'03"W 11683 IBE, MO P. foetida Peru 03°42'19"S 073°14'54"W 24169 MO P. foetida Peru 03°53'00"S 073°22'00"W 11381 IBE, MO P. foetida Peru 03°38'34"S 073°12'50"W 8727 MO P. foetida Peru 03°53'17"S 073°21'04"W 11683 IBE P. foetida Peru 03°41'39"S 073°15'57"W 32188 IBE P. foetida Peru 03°45'00"S 073°14'00"W 23727 FSU, IBE, MISS, MO P. foetida Peru 05°05'00"S 073°50'00"W 13371 MO P. foetida Peru 04°45'00"S 073°38'00"W 8807 MO P. foetida Peru 10°08'47"S 075°15'20"W 36617 HOXA, MO, USM P. foetida Peru 06°30'05"S 076°21'56"W 69-196 MO, WIS P. foetida Peru 06°23'00"S 076°38'00"W 51089 MO P. foetida Peru 06°30'00"S 076°25'00"W 37848 HUA, MO P. foetida Peru 06°34'58"S 076°19'48"W 6843 US P. foetida Peru 06°13'00"S 076°48'00"W 9719 MO P. foetida Peru 08°11'03"S 076°30'45"W 8436 MO P. foetida Peru 06°36'00"S 076°10'00"W 6914 MO P. foetida Peru 03°29'50"S 080°23'15"W 5972 MO

344

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Peru 09°02'50"S 075°30'17"W 20960 MO P. foetida Peru 09°03'00"S 075°35'00"W 16525 MO P. foetida United States 45°10'01"N 119°17'31"W 3154 MO P. foetida United States 28°01'11"N 082°46'18"W 3714 RSA P. foetida United States 21°19'49"N 158°04'05"W 10679 MIL P. foetida United States 21°36'26"N 157°56'32"W 7306 ARIZ P. foetida United States 21°15'39"N 157°48'18"W 1385 A P. foetida United States 30°00'30"N 097°51'41"W 24 MO P. foetida United States 27°30'23"N 099°30'27"W 12 MO, US P. foetida United States 27°02'01"N 098°14'01"W s.n. MO P. foetida United States 26°14'07"N 097°34'54"W 7000 MO, NY, US P. foetida United States 27°28'00"N 099°33'00"W 5777 MO P. foetida United States 27°28'00"N 099°33'00"W 5777 MO P. foetida Uruguay 31°06'00"S 055°40'00"W 1651 CTES P. foetida Venezuela 10°37'54"N 071°38'26"W 1150 MO P. foetida Venezuela 10°36'00"N 066°21'00"W 7943 MO P. foetida Venezuela 10°39'00"N 061°31'00"W 1183 MO P. foetida Venezuela 06°35'00"N 066°35'00"W 2723 MO P. foetida Venezuela 10°24'00"N 066°09'00"W 209 MO P. foetida Venezuela 10°35'00"N 066°45'00"W s.n. MO P. foetida Venezuela 06°35'00"N 066°35'00"W 872 B P. foetida Venezuela 06°35'00"N 066°35'00"W 244 GH, NY, US P. foetida Venezuela 10°23'00"N 066°58'00"W 6169 B, US P. foetida Venezuela 01°55'00"N 067°04'00"W 90-4-63 MO P. foetida Venezuela 02°00'00"N 066°30'00"W 9384 MO P. foetida Venezuela 04°02'00"N 067°39'00"W 1842 MO P. foetida Venezuela 03°10'00"N 065°33'00"W 1 MO P. foetida Venezuela 05°41'00"N 067°36'00"W 14647 MO P. foetida Venezuela 03°13'00"N 065°58'00"W 288 MO P. foetida Venezuela 03°13'00"N 065°58'00"W 541 MO P. foetida Venezuela 03°13'00"N 065°58'00"W 104 MO P. foetida Venezuela 04°54'00"N 067°34'00"W 3757 MO P. foetida Venezuela 01°56'00"N 067°03'00"W 7534 MO P. foetida Venezuela 02°48'00"N 065°14'00"W 7384A MO P. foetida Venezuela 03°39'00"N 065°43'00"W JPB-288 MO P. foetida Venezuela 03°39'00"N 065°43'00"W JPB-541 MO P. foetida Venezuela 03°39'00"N 065°43'00"W JPB-104 MO P. foetida Venezuela 08°55'19"N 064°26'30"W 4971 MO P. foetida Venezuela 10°03'00"N 065°19'00"W 10389 MO P. foetida Venezuela 08°58'00"N 064°32'00"W 2298 MO P. foetida Venezuela 10°09'00"N 064°42'00"W 2674 MO P. foetida Venezuela 10°13'00"N 064°37'00"W 5573 MO P. foetida Venezuela 07°28'52"N 068°25'13"W SPB 807 MO P. foetida Venezuela 06°38'00"N 069°37'00"W 5742 MO P. foetida Venezuela 07°38'56"N 067°36'14"W SPB 834 MO P. foetida Venezuela 07°08'00"N 067°01'00"W 315 MO P. foetida Venezuela 07°30'00"N 069°25'00"W 4325 MO P. foetida Venezuela 10°25'00"N 067°17'00"W s.n. MO P. foetida Venezuela 10°18'00"N 067°19'00"W 127697 MO P. foetida Venezuela 10°25'00"N 067°17'00"W 475 G, GH, GOET, K, NY

345

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. foetida Venezuela 08°14'21"N 070°49'04"W 5769 MO P. foetida Venezuela 08°07'00"N 062°25'00"W 10736B MO P. foetida Venezuela 07°10'00"N 066°30'00"W 7195 MO P. foetida Venezuela 07°35'00"N 063°07'00"W 11280 MO P. foetida Venezuela 07°27'00"N 063°13'00"W 2459 MO P. foetida Venezuela 06°42'52"N 061°05'18"W 5935 MO P. foetida Venezuela 08°09'00"N 062°17'00"W 6796 MO P. foetida Venezuela 07°18'00"N 061°30'00"W 3673 MO P. foetida Venezuela 06°00'00"N 063°30'00"W s.n. MO P. foetida Venezuela 09°09'00"N 061°57'29"W 1610 NY P. foetida Venezuela 10°35'00"N 066°56'00"W 1395 MO, NY P. foetida Venezuela 10°37'30"N 066°34'50"W 21588 MO P. foetida Venezuela 10°25'00"N 066°55'30"W 137 MO P. foetida Venezuela 10°28'00"N 066°59'00"W 6027 B, US P. foetida Venezuela 10°30'00"N 066°55'00"W 9548 GH, NY, US P. foetida Venezuela 10°25'00"N 066°55'00"W 7141 NY, US P. foetida Venezuela 10°30'00"N 066°55'00"W 9468 GH, US P. foetida Venezuela 10°30'00"N 066°55'00"W 227a US P. foetida Venezuela 10°23'00"N 066°58'00"W 6163 US P. foetida Venezuela 11°19'00"N 069°24'00"W 113618 MO P. foetida Venezuela 10°47'52"N 068°19'03"W 87 MA P. foetida Venezuela 11°30'00"N 069°42'00"W 7865 BR, MO P. foetida Venezuela 08°43'47"N 067°44'52"W 110 MO P. foetida Venezuela 09°18'00"N 067°23'00"W 4261 MO P. foetida Venezuela 10°10'40"N 070°05'50"W 105525 MO P. foetida Venezuela 10°10'00"N 065°35'00"W 10383 MO P. foetida Venezuela 10°09'00"N 065°48'00"W 116361 MO P. foetida Venezuela 10°05'00"N 066°46'00"W 7819 US P. foetida Venezuela 10°19'00"N 067°05'00"W 224 G, NY, US P. foetida Venezuela 10°21'00"N 067°02'00"W 11607 US P. foetida Venezuela 10°56'19"N 064°12'22"W 130983 MO P. foetida Venezuela 09°14'00"N 069°32'00"W 11162 MO P. foetida Venezuela 10°28'00"N 064°10'00"W s.n. B P. foetida Venezuela 10°12'44"N 064°30'30"W 107738 MO P. foetida Venezuela 10°23'52"N 064°08'22"W 108674 MO P. foetida Venezuela 09°26'00"N 072°33'00"W 18341 MA, MO P. foetida Venezuela 10°12'00"N 071°02'00"W 7088 NY P. misera Argentina 38°43'00"S 063°20'00"W 11032 LIL P. misera Argentina 34°34'00"S 058°24'00"W s.n. K, OXF P. misera Argentina 33°19'49"S 060°13'37"W 8888 GH P. misera Argentina 33°31'50"S 059°52'07"W 720 LP, MO P. misera Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 526 B P. misera Argentina 27°27'00"S 058°59'00"W 18847 LP P. misera Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 59 LP P. misera Argentina 27°28'00"S 058°53'00"W 6729 CTES P. misera Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 160 BR, LIL, US P. misera Argentina 27°29'00"S 058°56'00"W 8415 F P. misera Argentina 24°20'00"S 061°50'00"W 1452 BAB P. misera Argentina 26°37'00"S 059°29'00"W 1033 HUA P. misera Argentina 27°48'00"S 058°50'00"W 30963 US

346

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Argentina 27°48'00"S 058°50'00"W 16116 MO P. misera Argentina 28°32'00"S 057°10'00"W 3585 ASU, K, LL, TEX P. misera Argentina 28°29'00"S 059°03'00"W 3713 BR, C, G, GH, LP, MO P. misera Argentina 27°32'00"S 057°44'00"W 3893 MO, P P. misera Argentina 27°26'00"S 057°20'00"W 4061 F, MO P. misera Argentina 27°26'00"S 058°15'00"W s.n. P P. misera Argentina 27°30'00"S 056°44'00"W 23783 PMA P. misera Argentina 27°36'26"S 056°26'01"W 61326 MEL P. misera Argentina 27°36'00"S 056°15'00"W 1538 CORD P. misera Argentina 27°44'22"S 056°28'32"W 37537 G, WIS P. misera Argentina 27°35'00"S 056°29'00"W 7115 MO, SI P. misera Argentina 28°01'58"S 058°01'52"W 6653 BR, C, GH, L, P, US P. misera Argentina 30°11'11"S 057°40'13"W 280 F, GH, LIL, MO P. misera Argentina 29°43'00"S 057°05'00"W 7606 G P. misera Argentina 27°19'00"S 058°35'00"W 1363 LIL P. misera Argentina 27°19'00"S 058°35'00"W 7646 F P. misera Argentina 27°19'00"S 058°35'00"W 7659 F, LIL P. misera Argentina 27°32'55"S 058°31'22"W 12283 MICH P. misera Argentina 28°05'00"S 056°40'00"W 6334 MICH, SPF, TEX, U P. misera Argentina 28°33'00"S 056°03'00"W 1992 K P. misera Argentina 28°06'50"S 055°39'38"W 21053 F, GH, LP, WIS P. misera Argentina 28°04'44"S 056°44'43"W 8614 CTES P. misera Argentina 28°14'00"S 056°06'00"W 4011 CTES P. misera Argentina 32°40'00"S 059°30'00"W 254 F, US P. misera Argentina 32°35'00"S 058°13'00"W 12339 LP, US P. misera Argentina 31°22'00"S 057°59'51"W 10899 LIL P. misera Argentina 31°12'00"S 057°59'00"W 1296 MU, SI P. misera Argentina 31°11'00"S 057°59'00"W 1623 NY, SI P. misera Argentina 33°13'00"S 059°23'00"W 1048 BAB P. misera Argentina 26°11'00"S 058°11'00"W 2618 GH, MO, US P. misera Argentina 25°52'00"S 057°53'00"W 387 US P. misera Argentina 25°04'00"S 058°07'00"W 2245 HUA P. misera Argentina 25°32'03"S 057°35'34"W 3414 P P. misera Argentina 25°22'00"S 057°39'00"W 5085 LIL P. misera Argentina 27°23'00"S 055°53'00"W 1513 S P. misera Argentina 27°22'01"S 055°53'45"W 87 US P. misera Argentina 27°23'00"S 055°54'00"W 6016 GH, U P. misera Argentina 27°23'00"S 055°53'00"W 20985 B P. misera Argentina 27°23'00"S 055°53'00"W 20267 B P. misera Argentina 28°02'00"S 055°39'00"W 6750 MO P. misera Argentina 27°29'00"S 055°44'00"W 6912 SI P. misera Argentina 27°28'00"S 055°44'00"W 2649 K, LIL P. misera Argentina 27°28'00"S 055°44'00"W 2684 LIL, P P. misera Argentina 27°29'00"S 055°50'00"W 328 BAB, US P. misera Argentina 27°08'00"S 053°55'00"W 1527 SI P. misera Argentina 25°41'00"S 054°27'00"W 168 LP P. misera Argentina 25°45'16"S 054°30'10"W s.n. MO P. misera Argentina 25°40'00"S 054°27'00"W 6516 F, GH, U P. misera Argentina 25°35'00"S 054°34'00"W 8301 US P. misera Argentina 27°26'00"S 055°32'00"W 11653 LIL

347

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Argentina 27°17'00"S 055°35'00"W 3478 MO P. misera Argentina 27°16'00"S 055°35'00"W 1060 SI P. misera Argentina 27°16'00"S 055°35'00"W 1642 MO, SI P. misera Argentina 27°16'00"S 055°35'00"W 1649 MO, SI P. misera Argentina 27°17'00"S 055°35'00"W 3478 SI P. misera Argentina 27°16'00"S 055°35'00"W 3020 SI P. misera Argentina 26°43'00"S 054°48'00"W 1365 L, LIL, W P. misera Argentina 22°16'00"S 062°42'00"W 620 SI P. misera Argentina 28°28'00"S 059°22'00"W 14827 B P. misera Argentina 28°28'00"S 059°22'00"W 225 US P. misera Argentina 29°09'00"S 059°39'00"W 1686 LP P. misera Bolivia 13°57'41"S 066°58'08"W s.n. NY P. misera Bolivia 14°12'00"S 066°37'00"W 3292A MO P. misera Bolivia 13°57'41"S 066°58'08"W 1619 B, GH, NY P. misera Bolivia 14°08'00"S 066°22'00"W 15285 LPB P. misera Bolivia 14°08'00"S 066°22'00"W 5982 BOLV, LPB, NY, SI, TEX P. misera Bolivia 14°08'00"S 066°22'00"W 3292 A CTES, F, K, LPB, MO P. misera Bolivia 10°49'00"S 065°22'00"W 35039 MO P. misera Bolivia 14°30'00"S 066°30'00"W 1605a USZ P. misera Bolivia 14°51'00"S 066°20'00"W 18848 LPB P. misera Bolivia 20°54'00"S 064°06'00"W 1621 S P. misera Bolivia 16°30'00"S 065°30'00"W 1708 USZ P. misera Bolivia 16°59'00"S 065°25'00"W 1933 LPB P. misera Bolivia 14°21'19"S 068°32'17"W 10896 LPB, MA, MO P. misera Bolivia 14°26'34"S 068°34'47"W 2598 LPB, MO, USZ P. misera Bolivia 16°24'00"S 067°31'00"W 1153 LPB P. misera Bolivia 11°14'00"S 068°16'00"W 8380 MO P. misera Bolivia 12°01'00"S 068°16'00"W 343 LPB, MO P. misera Bolivia 14°50'00"S 063°40'00"W 37188 NY P. misera Bolivia 18°50'00"S 062°20'00"W 75302 MO, USZ P. misera Bolivia 18°30'11"S 060°58'46"W 2471 USZ P. misera Bolivia 18°30'00"S 060°59'00"W 2471 USZ P. misera Bolivia 18°52'00"S 062°26'00"W 1794 USZ P. misera Bolivia 17°09'00"S 061°43'00"W 592 LPB, MO, USZ P. misera Bolivia 14°42'32"S 061°09'18"W 3714 K, MO, NY, USZ P. misera Bolivia 14°40'00"S 061°09'00"W 100 F, MO, NY, USZ P. misera Bolivia 16°00'00"S 062°00'00"W 3711 G, LPB, MO, USZ P. misera Bolivia 13°35'39"S 060°54'45"W 286 MO, USZ P. misera Bolivia 16°17'00"S 061°59'00"W 490 MO, USZ P. misera Bolivia 14°49'00"S 061°09'00"W 5712 USZ P. misera Bolivia 14°49'00"S 061°09'00"W 3308 USZ P. misera Bolivia 14°45'42"S 061°08'26"W 7013 MO, NY, USZ P. misera Bolivia 14°44'19"S 061°00'17"W 1399 MO, USZ P. misera Bolivia 14°46'17"S 061°02'38"W 1562 MO, USZ P. misera Bolivia 14°44'19"S 061°00'17"W 2178 USZ P. misera Bolivia 14°46'17"S 061°02'38"W 2963 MO, USZ P. misera Bolivia 14°44'36"S 061°01'12"W 2996 MO, NY, USZ P. misera Bolivia 14°44'41"S 060°57'47"W 3193 MO, NY, USZ P. misera Bolivia 14°44'33"S 061°00'54"W 3423 MO, USZ P. misera Bolivia 14°46'17"S 061°02'38"W 3472 MO, USZ

348

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Bolivia 15°54'20"S 061°25'33"W 5074 LPB P. misera Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. M P. misera Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. M P. misera Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. K P. misera Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W s.n. B P. misera Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 668 B P. misera Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 2488 B P. misera Brazil 07°30'35"S 072°58'20"W 1185 MO, NY P. misera Brazil 07°30'35"S 072°58'20"W 1185 NY P. misera Brazil 03°28'00"S 060°17'00"W 21727 NY P. misera Brazil 02°52'00"S 060°29'00"W 21772 NY P. misera Brazil 02°45'00"S 060°55'00"W 21242 NY, US P. misera Brazil 02°49'39"S 060°30'33"W 20371 NY P. misera Brazil 03°21'15"S 064°42'41"W 2618 MO, W P. misera Brazil 03°02'00"S 060°10'00"W B-994 MO P. misera Brazil 17°11'18"S 039°23'14"W 2998 SPF P. misera Brazil 17°31'34"S 039°13'24"W 2486 MO P. misera Brazil 04°10'00"S 040°44'00"W 285 S P. misera Brazil 14°59'09"S 047°47'02"W 600110 GH, MO P. misera Brazil 14°59'00"S 047°47'00"W s.n. LIL P. misera Brazil 02°50'00"S 045°02'00"W 1629 K P. misera Brazil 15°27'38"S 055°44'59"W 428 BM P. misera Brazil 15°35'46"S 056°05'48"W s.n. S P. misera Brazil 15°35'46"S 056°05'48"W s.n. S P. misera Brazil 16°15'00"S 056°37'00"W 597 MG P. misera Brazil 19°00'33"S 057°39'12"W 782 K P. misera Brazil 19°36'30"S 057°26'00"W 11092 US P. misera Brazil 21°39'00"S 052°15'00"W 975 SPF P. misera Brazil 19°00'00"S 057°39'00"W 381 LP P. misera Brazil 21°55'23"S 056°22'55"W 547 SPF P. misera Brazil 21°46'00"S 054°27'00"W 25239 G P. misera Brazil 19°37'38"S 043°53'23"W 1158 C P. misera Brazil 01°20'00"S 048°29'00"W 30360 US P. misera Brazil 00°02'00"S 049°35'00"W 2428 MG P. misera Brazil 01°25'00"S 048°27'00"W 1082 K, NY P. misera Brazil 00°57'00"S 054°55'00"W 4367 NY P. misera Brazil 26°13'00"S 051°05'00"W 28436 MO P. misera Brazil 25°12'00"S 050°04'00"W 1171a GH, MO P. misera Brazil 25°42'00"S 049°34'00"W 7357 BM, BR, F, G, GH, K P. misera Brazil 25°27'00"S 049°46'00"W 20670 CAS, ESA, GB P. misera Brazil 23°21'32"S 053°44'39"W 4302 U P. misera Brazil 23°21'00"S 053°44'00"W 15789 C P. misera Brazil 23°23'44"S 053°36'50"W 4348 F, LL, NY, TEX, U, US P. misera Brazil 25°52'00"S 050°23'00"W 23275 MO, NY, RB, US P. misera Brazil 25°52'00"S 050°23'00"W 410 C, GB, MO, NY, WIS P. misera Brazil 26°13'00"S 051°05'00"W 2674 CAS, H, HUEFS, MO, US P. misera Brazil 09°26'00"S 040°45'00"W 2544 US, WIS P. misera Brazil 22°54'10"S 043°12'27"W 12742 B, E, G, P, R P. misera Brazil 22°52'46"S 042°01'07"W 4733 B P. misera Brazil 22°44'00"S 041°52'00"W 111 RB, SPF

349

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Brazil 22°11'21"S 041°25'49"W 3284 SPF P. misera Brazil 30°01'59"S 051°13'48"W 153 G, K P. misera Brazil 29°57'04"S 051°05'38"W 494 S P. misera Brazil 29°38'01"S 053°15'27"W 10385 US P. misera Brazil 29°38'00"S 053°15'00"W A1139 MO P. misera Brazil 30°15'00"S 054°55'00"W 15696 C, CTES, MO P. misera Brazil 29°50'00"S 051°09'00"W 40428 B, MO P. misera Brazil 30°06'00"S 051°19'00"W 40148 B P. misera Brazil 30°00'00"S 051°11'40"W 60 B, E, G, GOET, HBG, K P. misera Brazil 28°17'57"S 054°15'47"W 1139 GH, R, S, US P. misera Brazil 29°43'00"S 054°53'00"W 25972 ICN, MO, TEX, UB P. misera Brazil 11°42'00"S 062°56'00"W 1204 MG P. misera Brazil 03°24'00"N 061°26'00"W 582 MO, NY P. misera Brazil 03°24'00"N 061°26'00"W 683 MO, NY P. misera Brazil 03°01'00"N 060°29'00"W 7853 B, G, K, L, MG, US P. misera Brazil 27°06'32"S 053°23'51"W 9754 B, F, US P. misera Brazil 26°12'00"S 051°07'00"W 8758 NY, R, US P. misera Brazil 28°15'00"S 048°52'00"W 12722 NY, R P. misera Brazil 26°14'00"S 051°04'00"W 12428 US P. misera Brazil 24°30'00"S 048°50'00"W s.n. P P. misera Brazil 23°08'00"S 046°30'00"W 663 SPF P. misera Brazil 23°10'00"S 046°25'00"W 49249A MO, RBR P. misera Brazil 21°45'00"S 052°07'00"W 1133 SP, SPF P. misera Brazil 23°31'00"S 046°43'00"W 10580 SP, SPF P. misera Brazil 23°30'00"S 047°27'00"W 15484 US P. misera Brazil 23°30'06"S 047°27'29"W 277 C, P, R, US P. misera Colombia 05°46'30"N 074°20'30"W 1934 COL P. misera Colombia 06°06'19"N 071°48'11"W 3418 MO P. misera Colombia 05°46'30"N 074°20'30"W 2726 COL, F, US P. misera Colombia 05°46'30"N 074°20'30"W 954 K P. misera Colombia 01°18'00"S 069°33'00"W 5858a US P. misera Colombia 07°55'53"N 076°44'46"W 1013 COL, HUA, JAUM, MO P. misera Colombia 10°54'00"N 074°44'00"W 1538 NY, US P. misera Colombia 10°19'46"N 075°24'30"W s.n. B, P P. misera Colombia 08°20'00"N 074°30'00"W 4383 COL, HUA, MO, NY P. misera Colombia 06°16'00"N 071°06'00"W 2670 COL, US P. misera Colombia 05°03'00"N 072°27'00"W 80 K P. misera Colombia 07°44'00"N 077°05'00"W 675 MO P. misera Colombia 08°30'00"N 077°20'00"W 3240 HUA P. misera Colombia 06°31'00"N 076°58'00"W 9219 B, COL P. misera Colombia 07°26'00"N 077°07'00"W 9768 MO P. misera Colombia 07°26'26"N 077°07'08"W 9241 COL, GH, MO P. misera Colombia 07°09'00"N 077°12'00"W 6090 COL P. misera Colombia 08°18'00"N 075°08'00"W 1719 COL P. misera Colombia 08°18'00"N 075°08'00"W 1704 COL P. misera Colombia 07°54'00"N 075°33'00"W 1474 HUA, NY P. misera Colombia 04°18'11"N 074°48'03"W 15200 COL, HUA, MA P. misera Colombia 11°03'00"N 072°36'00"W 926 COL, HUA, MO, US P. misera Colombia 10°55'00"N 073°55'00"W 10758 COL, MO P. misera Colombia 10°58'00"N 074°30'00"W 356 WIS

350

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Colombia 10°53'19"N 074°03'21"W 7278 COL P. misera Colombia 11°00'00"N 074°15'00"W 8911 COL P. misera Colombia 11°14'50"N 074°12'06"W 4924 COL P. misera Colombia 04°05'06"N 073°19'10"W 1748 COL P. misera Colombia 04°05'00"N 073°35'00"W 2474 COL, US P. misera Colombia 09°00'15"N 072°54'11"W 18292 COL P. misera Colombia 09°00'15"N 072°54'11"W 18346 COL P. misera Colombia 03°26'14"N 076°31'21"W 930 MO P. misera Colombia 04°12'23"N 075°58'31"W 2860 CUVC, MO P. misera Colombia 04°12'23"N 075°58'31"W 2865 CUVC, MO P. misera Costa Rica 10°52'26"N 084°48'16"W 2794 MO P. misera Costa Rica 10°53'44"N 084°46'43"W 99 MO P. misera Costa Rica 10°50'30"N 084°47'20"W 3060 K, MO P. misera Costa Rica 10°53'18"N 084°46'37"W 2778 MA P. misera Costa Rica 10°45'00"N 083°36'00"W 25135 MO P. misera Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W 818 B, G, K, U, US P. misera Guyana 03°45'00"N 059°18'00"W 4639 B, GB, NY, P, U, US P. misera Guyana 03°45'00"N 059°20'00"W 7296 B, MO, P, U, WIS P. misera Guyana 04°54'30"N 058°55'00"W s.n. K P. misera Guyana 04°03'00"N 058°35'00"W 5539 K P. misera Panama 08°26'30"N 080°06'30"W 356 BM, K P. misera Panama 09°14'33"N 079°51'02"W 12187 US P. misera Panama 09°09'42"N 079°50'19"W 456 US P. misera Panama 09°14'33"N 079°51'02"W 6841 K, US P. misera Panama 09°08'32"N 079°50'39"W 19029 GH P. misera Panama 09°08'18"N 079°50'29"W 121 MO P. misera Panama 09°09'17"N 079°50'53"W 5269 MO P. misera Panama 09°09'31"N 079°52'05"W 263 F, MO P. misera Panama 09°09'46"N 079°49'59"W 26 GH, MO P. misera Panama 09°10'41"N 079°50'37"W 95 F, MO P. misera Panama 09°09'00"N 079°51'00"W 258 BH, GH, MO, US P. misera Panama 09°08'00"N 079°42'00"W 4484 MO, PMA, WIS P. misera Panama 09°08'29"N 079°50'35"W 8273 F, MO, SCZ P. misera Panama 09°08'29"N 079°50'35"W 11929 MO P. misera Panama 09°09'17"N 079°50'53"W 574 F, GH P. misera Panama 09°09'17"N 079°50'53"W 3 F P. misera Panama 09°09'17"N 079°50'53"W 52 MICH P. misera Panama 09°08'29"N 079°50'35"W 8278 MO P. misera Panama 09°08'20"N 079°50'27"W 8214 MO P. misera Panama 09°09'46"N 079°49'59"W 717 GH, MO P. misera Panama 09°08'18"N 079°50'29"W 157 MO P. misera Panama 09°08'18"N 079°50'29"W 13251 F, MO P. misera Panama 09°08'18"N 079°50'29"W 13251 MO, SCZ P. misera Panama 09°09'17"N 079°50'53"W 4 F, UMO P. misera Panama 09°07'07"N 079°42'06"W 6281 MO P. misera Panama 09°18'00"N 079°47'00"W 3998 GH, K, US P. misera Panama 09°20'00"N 079°55'00"W 169 NY, US P. misera Panama 09°03'00"N 079°45'00"W 687 US P. misera Panama 09°05'00"N 078°27'00"W 5942 MO P. misera Panama 08°29'00"N 079°57'00"W 28 MO

351

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Panama 09°05'00"N 079°55'00"W 3128 MO P. misera Panama 09°09'00"N 079°50'00"W 5128 MO P. misera Paraguay 25°14'00"S 056°49'00"W 1418A G P. misera Paraguay 25°21'00"S 057°40'00"W 1932 NY P. misera Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W s.n. K P. misera Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 1418 BM, G, K P. misera Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 2081 S P. misera Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 10499 LIL P. misera Paraguay 22°39'00"S 056°01'00"W 6073 MO P. misera Paraguay 22°48'00"S 056°34'00"W 4668 FCQ P. misera Paraguay 22°40'00"S 056°05'00"W 1242 MO, PY P. misera Paraguay 21°02'00"S 057°52'00"W 13964 LIL P. misera Paraguay 23°32'00"S 060°28'00"W 107 B P. misera Paraguay 26°05'00"S 056°51'00"W 465 MO P. misera Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 31610 AS, MO P. misera Paraguay 25°27'00"S 057°33'00"W 36881 AS, MO, P P. misera Paraguay 25°30'00"S 057°30'00"W 29148 AS, MO, NY P. misera Paraguay 25°35'00"S 057°33'00"W 33609 AS, MO P. misera Paraguay 25°36'00"S 057°35'00"W 34290 AS, MO P. misera Paraguay 25°36'00"S 057°36'00"W 34465 AS, MO P. misera Paraguay 25°38'00"S 057°37'00"W 34670 AS, MO P. misera Paraguay 25°39'00"S 057°38'00"W 35097 AS, MO P. misera Paraguay 25°27'00"S 057°33'00"W 36018 AS, MIN, MO P. misera Paraguay 25°27'00"S 057°33'00"W 36019 AS, B, MO P. misera Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 44159 AS, LPB, MO P. misera Paraguay 25°30'00"S 057°09'00"W 12607 B, BM, C, E, G, GH, K P. misera Paraguay 25°23'00"S 057°16'00"W 12373 B, BM, C, E, F, G, GH, K P. misera Paraguay 20°26'00"S 060°15'00"W 17897 MO P. misera Paraguay 23°24'23"S 057°26'04"W 7333 A, B, BM, G, GH, K, P, W P. misera Paraguay 22°47'38"S 056°21'12"W 56349 MO P. misera Paraguay 22°07'22"S 057°54'51"W 58906 MO P. misera Paraguay 23°25'00"S 057°05'00"W 2445 MO, PY P. misera Paraguay 23°02'39"S 057°00'41"W 39887 AS, MO P. misera Paraguay 25°08'00"S 057°18'00"W 19286 AS, MO P. misera Paraguay 25°08'00"S 057°16'00"W 20295 AS, MO P. misera Paraguay 25°08'00"S 057°18'00"W 20313 AS, MO P. misera Paraguay 25°09'00"S 057°30'00"W 20801 AS, MO P. misera Paraguay 25°16'00"S 057°19'00"W 3512 B, G, K, P, W P. misera Paraguay 25°15'00"S 057°04'00"W 6413 B, BM, C, G, GH, K, MICH P. misera Paraguay 25°16'00"S 057°34'00"W 2215 MO P. misera Paraguay 25°23'00"S 057°09'00"W 4850 GH, NA, NY, US P. misera Paraguay 25°16'00"S 057°19'00"W 8923 S P. misera Paraguay 25°09'00"S 057°21'00"W 2622 CTES P. misera Paraguay 25°45'00"S 056°26'00"W 3788 C, F, GH, LP, NY, US P. misera Paraguay 27°26'55"S 056°49'23"W 51570 AS, MO P. misera Paraguay 27°28'21"S 056°45'34"W 52051 AS, MO, NY P. misera Paraguay 26°42'00"S 057°16'00"W 38424 AS, MO P. misera Paraguay 26°42'00"S 057°16'00"W 38493 AS, MO P. misera Paraguay 26°40'00"S 057°14'00"W 38557 AS, MO P. misera Paraguay 26°28'59"S 057°04'10"W 55304 MO

352

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. misera Paraguay 27°09'00"S 056°47'00"W 5240 C, E, GH, K, P, US P. misera Paraguay 25°30'00"S 057°09'00"W 608 B, E, F, G, HBG, K P. misera Paraguay 25°29'00"S 057°14'00"W 2205 BR, G, GOET, K, P P. misera Paraguay 25°37'00"S 057°26'00"W 25026 AS, MO P. misera Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 28664 AS, B, MO P. misera Paraguay 25°37'00"S 057°24'00"W 28714 AS, MO P. misera Paraguay 25°47'00"S 057°25'00"W 17593 AS, MO P. misera Paraguay 25°25'00"S 057°07'00"W 9934 FCQ, HUA, MO P. misera Paraguay 25°58'00"S 057°27'00"W 37688 AS, MO, NY P. misera Paraguay 25°52'00"S 057°08'00"W 51843 MO P. misera Paraguay 25°30'00"S 057°09'00"W 426b B P. misera Paraguay 23°41'00"S 058°56'00"W 1863 S P. misera Paraguay 24°55'41"S 058°10'42"W 40602 AS, MO P. misera Paraguay 24°50'00"S 058°20'00"W 43119 MO, PY P. misera Paraguay 24°55'25"S 058°11'07"W 54667 MO P. misera Paraguay 24°25'00"S 058°50'00"W 1557 MO, US P. misera Paraguay 23°33'00"S 057°54'00"W 3247 FCQ P. misera Paraguay 25°17'00"S 057°41'00"W 1032 BM, CM, E, F, G, GH, K P. misera Paraguay 25°17'00"S 057°41'00"W 896 NY P. misera Paraguay 23°08'00"S 057°23'00"W 972 US P. misera Peru 06°37'00"S 078°57'00"W 12992 MO P. misera Peru 03°24'00"S 072°50'00"W 37138 MO P. misera Peru 03°28'00"S 072°48'00"W 6611 BH, US, USM P. misera Peru 03°44'40"S 073°18'57"W 25805 IBE, MO P. misera Peru 12°49'00"S 069°17'00"W 5129 MO P. misera Uruguay 31°23'00"S 057°58'00"W s.n.21 BA, US P. misera Venezuela 08°20'24"N 063°09'09"W 6516 US P. misera Venezuela 07°21'00"N 067°24'00"W 849 MO, NY P. misera Venezuela 07°38'00"N 066°10'00"W 13284 US P. misera Venezuela 07°10'58"N 065°09'58"W 874 WIS P. misera Venezuela 08°09'01"N 063°31'35"W 6313 US P. misera Venezuela 08°27'00"N 062°31'00"W 6405 US P. misera Venezuela 08°01'45"N 063°51'24"W 6470 US P. misera Venezuela 08°43'00"N 061°58'00"W 115344 MO P. misera Venezuela 08°23'47"N 062°39'48"W 6621 US P. misera Venezuela 08°54'00"N 069°43'00"W 144 MO P. misera Venezuela 08°25'25"N 072°11'00"W 120424 MO P. misera Venezuela 09°36'44"N 070°22'14"W 10871 GH, US P. misera Venezuela 09°07'00"N 072°40'00"W 13217 HUA, MO P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 175 CTES P. morifolia Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 1033 US P. morifolia Argentina 26°56'00"S 059°32'00"W 2233 S, US P. morifolia Argentina 26°56'00"S 058°40'00"W 2621 F P. morifolia Argentina 26°56'00"S 058°40'00"W 2346 CTES P. morifolia Argentina 26°56'00"S 058°40'00"W 2352 CTES P. morifolia Argentina 26°56'00"S 058°40'00"W 3411 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 2293 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 3356 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 3684 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 6434 CTES

353

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 6522a CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 6714 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 6777 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 7357 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 8401 CTES P. morifolia Argentina 27°20'00"S 058°56'00"W 9494 CTES P. morifolia Argentina 27°25'00"S 059°02'00"W 1033 US P. morifolia Argentina 30°31'00"S 064°34'00"W 211 SI P. morifolia Argentina 30°31'00"S 064°34'00"W 210 SI P. morifolia Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 4507 G P. morifolia Argentina 31°30'00"S 065°00'00"W 14215 G P. morifolia Argentina 31°30'00"S 065°00'00"W 15195 G P. morifolia Argentina 31°30'00"S 065°00'00"W 18680 G P. morifolia Argentina 31°24'00"S 064°07'00"W 367 CORD P. morifolia Argentina 31°20'00"S 064°17'00"W 17408 CORD P. morifolia Argentina 31°22'00"S 064°15'00"W 105 CORD P. morifolia Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 754 CORD P. morifolia Argentina 31°24'00"S 064°11'00"W 830 CORD P. morifolia Argentina 31°18'00"S 064°18'00"W 789 CORD P. morifolia Argentina 31°02'00"S 064°07'00"W 3473 CORD P. morifolia Argentina 31°10'00"S 064°20'00"W 132 SI P. morifolia Argentina 31°14'00"S 064°19'00"W 10896 CORD P. morifolia Argentina 31°09'00"S 064°19'00"W 3342 CORD P. morifolia Argentina 31°22'39"S 065°07'51"W 261 CTES, MO, SI P. morifolia Argentina 31°07'00"S 064°52'00"W 14012 CORD P. morifolia Argentina 31°07'00"S 064°52'00"W 14007 CORD P. morifolia Argentina 31°22'00"S 064°26'00"W 772 CORD P. morifolia Argentina 31°24'00"S 064°31'00"W 10886 MO P. morifolia Argentina 30°06'00"S 063°56'00"W 1398 CORD P. morifolia Argentina 25°59'00"S 058°10'00"W 2840 F, MO, US P. morifolia Argentina 25°52'00"S 059°15'00"W 6296 MO P. morifolia Argentina 24°52'00"S 059°15'00"W 6296 BAB, MO P. morifolia Argentina 24°11'00"S 065°13'00"W 5844 MO P. morifolia Argentina 24°11'00"S 065°18'00"W 27 CTES P. morifolia Argentina 23°54'00"S 065°27'00"W 6634 US P. morifolia Argentina 24°15'00"S 065°12'00"W 22347 CTES P. morifolia Argentina 23°12'00"S 065°20'00"W 8355 F, GH, K, MO, US P. morifolia Argentina 23°34'00"S 065°22'00"W 9217 US P. morifolia Argentina 24°18'00"S 064°30'00"W 1476 MO P. morifolia Argentina 24°14'00"S 065°15'00"W 3678 LPB P. morifolia Argentina 23°54'00"S 065°13'00"W 3-223 US P. morifolia Argentina 24°10'36"S 065°29'02"W 34242 HUA P. morifolia Argentina 23°41'00"S 064°53'00"W 6239 MO P. morifolia Argentina 24°17'00"S 064°28'00"W 875 MO, US P. morifolia Argentina 24°04'50"S 064°23'21"W 34875 MO P. morifolia Argentina 24°17'39"S 064°27'59"W 426 CTES, SI P. morifolia Argentina 23°56'00"S 065°27'00"W 4369 SI P. morifolia Argentina 27°19'00"S 055°32'00"W 11243 CTES, LP P. morifolia Argentina 27°21'00"S 055°34'00"W 15118 US P. morifolia Argentina 26°01'35"S 053°49'26"W 2069 SI

354

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. morifolia Argentina 25°51'00"S 054°10'00"W 1958 SI P. morifolia Argentina 26°01'35"S 053°49'26"W 836 MO, SI P. morifolia Argentina 27°53'00"S 055°19'00"W 79 MO P. morifolia Argentina 24°35'00"S 065°23'00"W 9451 US P. morifolia Argentina 25°06'00"S 065°33'00"W 299 C P. morifolia Argentina 26°06'45"S 064°38'05"W 30468 CTES P. morifolia Argentina 22°11'49"S 063°43'07"W 9112 MO P. morifolia Argentina 25°35'00"S 063°57'00"W 302 B, F, GOET P. morifolia Argentina 24°24'00"S 063°41'00"W 500 W P. morifolia Argentina 24°53'00"S 064°50'00"W 1193 CTES P. morifolia Argentina 23°45'00"S 063°02'00"W 269 CTES, MO P. morifolia Argentina 25°17'00"S 065°30'00"W 1168 CTES P. morifolia Argentina 25°48'00"S 064°58'00"W 1511 RB, US P. morifolia Argentina 25°48'00"S 064°58'00"W 1513 SP, US P. morifolia Argentina 24°33'00"S 066°12'00"W 70 F P. morifolia Argentina 25°44'00"S 064°59'00"W 7631 US P. morifolia Argentina 24°54'00"S 065°24'00"W 8088 CAS, US, W P. morifolia Argentina 26°06'00"S 065°06'00"W 5800 US P. morifolia Argentina 22°19'00"S 063°50'00"W 4610 SI P. morifolia Argentina 22°16'00"S 062°42'00"W 638 SI P. morifolia Argentina 25°46'00"S 064°58'00"W 1512 US P. morifolia Argentina 22°06'31"S 063°42'29"W 12160 MO, US P. morifolia Argentina 27°27'00"S 064°56'00"W 125 W P. morifolia Argentina 29°45'00"S 062°58'00"W 9006 US P. morifolia Argentina 28°03'00"S 063°59'00"W 1327 S, WIS P. morifolia Argentina 27°14'00"S 065°34'00"W 389 B, F, GOET, US P. morifolia Argentina 27°47'00"S 065°34'00"W 118 US P. morifolia Argentina 26°14'00"S 065°29'00"W 3690 US P. morifolia Argentina 26°30'00"S 064°45'00"W 2901 US P. morifolia Argentina 26°44'00"S 065°02'00"W 13281 MO P. morifolia Argentina 26°13'00"S 065°17'00"W 1179 CTES P. morifolia Argentina 27°02'00"S 065°01'00"W 4564 F, US P. morifolia Argentina 27°03'00"S 064°56'00"W 4565 F, US P. morifolia Argentina 26°29'00"S 065°22'00"W 4567 F, US P. morifolia Argentina 27°43'00"S 065°19'00"W 5914 F, MO, US P. morifolia Argentina 26°14'00"S 065°29'00"W 9747 F, US P. morifolia Argentina 26°52'00"S 065°11'00"W 1101 RB, US P. morifolia Argentina 26°41'54"S 065°20'18"W 5900 CAS, US P. morifolia Argentina 26°24'00"S 064°48'00"W 10345 BM, MO, S P. morifolia Argentina 26°42'47"S 065°20'12"W 10426 BM, MO, S P. morifolia Argentina 26°14'00"S 065°29'00"W s.n.Jan1916 US P. morifolia Argentina 27°06'00"S 065°20'00"W 3756 US P. morifolia Argentina 26°58'24"S 065°14'00"W 2450 US P. morifolia Argentina 27°14'00"S 065°34'00"W 14913 US P. morifolia Argentina 26°49'00"S 065°13'00"W 1145 B P. morifolia Argentina 26°49'00"S 065°13'00"W 142 P P. morifolia Argentina 27°12'00"S 065°18'00"W 670 US P. morifolia Argentina 26°49'00"S 065°13'00"W 1146 GOET P. morifolia Argentina 26°23'00"S 065°01'00"W 379 US P. morifolia Argentina 26°26'00"S 064°51'00"W 10361 BM, MO, S

355

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. morifolia Argentina 26°44'00"S 065°02'00"W 9525 US P. morifolia Argentina 26°48'00"S 065°15'00"W 58 US P. morifolia Argentina 26°44'49"S 065°31'26"W 2675 US P. morifolia Argentina 26°15'11"S 065°27'31"W 1120 F, US P. morifolia Argentina 26°16'17"S 065°31'08"W 246 US P. morifolia Argentina 26°13'00"S 065°17'00"W 24/1548 US P. morifolia Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 3 K P. morifolia Bolivia 16°23'00"S 063°27'30"W 2272 GH, K, MO, NY, US, W, WIS P. morifolia Bolivia 14°28'00"S 067°30'00"W 8252 HUA, LPB, US P. morifolia Bolivia 14°28'00"S 067°33'00"W 84621 MO P. morifolia Bolivia 19°48'00"S 064°05'00"W 5731 US P. morifolia Bolivia 19°55'00"S 064°25'00"W 1246 MO P. morifolia Bolivia 19°42'41"S 064°28'37"W 1155 HSB, MO P. morifolia Bolivia 20°06'00"S 064°25'00"W 942 MO P. morifolia Bolivia 19°03'54"S 064°15'38"W 733 MO P. morifolia Bolivia 19°05'40"S 064°17'21"W 694 LPB P. morifolia Bolivia 20°19'00"S 063°52'00"W 2115 HSB, LPB P. morifolia Bolivia 20°29'23"S 063°52'04"W 1670 LPB P. morifolia Bolivia 19°48'00"S 063°57'00"W 386 MO P. morifolia Bolivia 19°48'52"S 063°43'10"W 654 HSB, MO, US P. morifolia Bolivia 19°34'00"S 063°54'00"W 328 MO P. morifolia Bolivia 17°44'00"S 064°44'00"W 2344 LPB, MO, USZ P. morifolia Bolivia 17°34'00"S 066°21'00"W 4788 US P. morifolia Bolivia 17°56'27"S 065°20'24"W 5892 BM P. morifolia Bolivia 17°20'00"S 066°15'00"W 2205 US P. morifolia Bolivia 17°20'00"S 066°15'00"W 4652 US P. morifolia Bolivia 17°54'00"S 065°21'00"W 55 BOLV P. morifolia Bolivia 14°26'20"S 067°32'11"W 4396 LPB P. morifolia Bolivia 14°22'00"S 067°33'00"W 362 LPB, MO P. morifolia Bolivia 14°19'47"S 068°33'35"W 1984 BOLV, LPB, MO, NY, USZ P. morifolia Bolivia 16°55'00"S 067°10'00"W 4422 LPB, MO, US P. morifolia Bolivia 15°47'00"S 068°39'00"W 613 BM, F, G, GH, K, P P. morifolia Bolivia 15°47'00"S 068°39'00"W 619 p.p. BM, K P. morifolia Bolivia 16°14'00"S 067°40'00"W 17628 LPB, TEX P. morifolia Bolivia 16°13'00"S 067°45'00"W 7512 LPB, TEX, US P. morifolia Bolivia 16°15'00"S 067°49'00"W 1735 LPB, MO, WIS P. morifolia Bolivia 16°12'00"S 067°45'00"W 133 MO P. morifolia Bolivia 16°12'00"S 067°43'00"W 12 MO P. morifolia Bolivia 16°23'00"S 067°28'00"W 323 MO P. morifolia Bolivia 16°26'00"S 067°28'00"W 317 MO P. morifolia Bolivia 15°30'00"S 067°25'00"W 1067 LPB P. morifolia Bolivia 17°27'00"S 063°40'00"W 5349 GH, K, NY P. morifolia Bolivia 18°10'00"S 063°52'00"W 43475 LPB, MO, NY P. morifolia Bolivia 17°48'00"S 060°13'00"W 328 LPB, MO, US, USZ P. morifolia Bolivia 17°20'00"S 059°40'00"W 1455 USZ P. morifolia Bolivia 15°47'00"S 062°55'00"W 78 LPB, MO, NY, U, USZ P. morifolia Bolivia 15°41'00"S 062°46'00"W 1400 MO P. morifolia Bolivia 17°30'00"S 063°50'00"W 13571 BOLV, LPB, USZ P. morifolia Bolivia 18°02'00"S 064°35'00"W 1550 USZ P. morifolia Bolivia 16°30'00"S 061°53'00"W 16540 LPB, MO, USZ

356

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. morifolia Bolivia 16°31'13"S 061°50'47"W 728 MO, USZ P. morifolia Bolivia 16°38'00"S 062°27'00"W 606 USZ P. morifolia Bolivia 17°01'00"S 063°13'00"W 45043 LPB, MO, NY, US, USZ P. morifolia Bolivia 17°27'00"S 063°40'00"W 1403 US P. morifolia Bolivia 17°27'00"S 063°40'00"W 5347 B, BM, F, GH, MO, PH, US P. morifolia Bolivia 17°27'00"S 063°40'00"W 8019 BM, F, G, GH, GOET, K P. morifolia Bolivia 18°32'00"S 064°01'00"W 183 LPB, USZ P. morifolia Bolivia 18°20'00"S 064°10'00"W 36544 MO, NY P. morifolia Bolivia 18°31'51"S 064°01'00"W 183 LPB, USZ P. morifolia Bolivia 18°38'25"S 064°01'02"W 4244 MO, USZ P. morifolia Bolivia 18°52'26"S 063°56'53"W 6702 MO, USZ P. morifolia Bolivia 18°51'46"S 063°57'25"W 6597 MO, USZ P. morifolia Bolivia 18°52'10"S 063°57'27"W 5183 MO, USZ P. morifolia Bolivia 15°22'00"S 061°28'00"W 1084 K, MO, USZ P. morifolia Bolivia 16°00'00"S 061°00'00"W 12425 LPB, SI, TEX, US P. morifolia Bolivia 16°25'00"S 061°04'00"W 5 LPB P. morifolia Bolivia 16°19'00"S 060°48'00"W 32276 CTES, LPB P. morifolia Bolivia 21°15'00"S 063°30'00"W 903 M P. morifolia Bolivia 22°33'00"S 064°25'00"W 18668 CTES, ENCB, MO P. morifolia Bolivia 22°22'00"S 064°29'00"W 10016 HUA, MO P. morifolia Bolivia 21°54'00"S 062°54'00"W 1600 DUKE, S, US P. morifolia Bolivia 21°32'00"S 064°12'00"W 32259 MO P. morifolia Bolivia 21°49'00"S 064°16'00"W 802 MO P. morifolia Bolivia 21°42'19"S 064°04'29"W 4314 MO P. morifolia Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 10 SP P. morifolia Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 3963 B, US P. morifolia Brazil 15°26'00"S 055°45'00"W s.n. 31 May 1903 MO, S P. morifolia Brazil 21°56'00"S 046°23'00"W 1701 S P. morifolia Brazil 22°02'00"S 046°35'00"W 1328 S P. morifolia Brazil 19°39'00"S 043°43'00"W 1153 AAU, C, DUKE, F, NY P. morifolia Brazil 18°33'00"S 054°46'00"W 17847 RB P. morifolia Brazil 29°41'00"S 053°48'00"W 1203 S P. morifolia Brazil 28°17'58"S 054°15'47"W s.n. Apr 1900 S P. morifolia Brazil 28°23'00"S 053°55'00"W 47322 B P. morifolia Brazil 22°54'20"S 047°03'39"W 850 US P. morifolia Brazil 22°21'00"S 047°23'00"W s.n. 28 Apr 1975 BM P. morifolia Brazil 22°26'10"S 046°49'18"W s.n. 26 May 1936 SP P. morifolia Brazil 22°54'00"S 047°05'00"W 382 S P. morifolia Brazil 22°54'00"S 047°05'00"W 423 S P. morifolia Brazil 22°24'00"S 047°33'00"W 535 C, US P. morifolia Brazil 21°52'00"S 047°20'00"W 31478 SPF, UEC P. morifolia Brazil 22°42'00"S 046°47'00"W 245 SP P. morifolia Brazil 22°26'00"S 046°50'00"W s.n.(SP20276 SP P. morifolia Brazil 22°12'00"S 047°45'00"W 95/73 IAC, SP, SPF P. morifolia Brazil 22°33'00"S 047°24'00"W s.n. IAC, MO, SPF, UPCB P. morifolia Brazil 22°33'53"S 047°24'06"W 734 SP P. morifolia Brazil 22°33'42"S 047°24'10"W s.n.(SP58175) SP P. morifolia Brazil 22°26'00"S 046°57'00"W s.n. April 1937 IAC, SP P. morifolia Brazil 21°46'00"S 048°33'00"W s.n.(SP13602) SP P. morifolia Brazil 23°29'00"S 046°37'00"W s.n. IAC, SPF

357

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. morifolia Colombia 01°38'05"N 077°15'23"W s.n. W P. morifolia Ecuador 03°52'00"S 080°05'00"W 560 QCA P. morifolia Ecuador 03°37'00"S 079°40'00"W 27086 GB, QCA P. morifolia Ecuador 02°00'00"S 079°58'00"W 12620 MO P. morifolia Ecuador 02°00'00"S 079°58'00"W 54789 MO P. morifolia Ecuador 03°52'00"S 080°04'00"W 6043 GB, MO, QCNE P. morifolia Guatemala 14°38'02"N 089°59'18"W 628 BM, F, MEXU, MO P. morifolia Guatemala 14°38'02"N 089°59'18"W 77391 F, US P. morifolia Guatemala 14°33'58"N 089°56'27"W 32109 F P. morifolia Guatemala 14°25'09"N 090°14'27"W 3772 GH, NY, US P. morifolia Mexico 23°37'00"N 102°34'30"W s.n. P P. morifolia Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 2845 GH P. morifolia Paraguay 25°21'00"S 054°36'00"W 188 MO P. morifolia Paraguay 22°31'00"S 055°45'00"W 485 A, GH, MO P. morifolia Paraguay 25°27'00"S 056°01'00"W 9329 B, BM P. morifolia Paraguay 25°27'00"S 056°01'00"W 5009 CTES P. morifolia Paraguay 26°10'00"S 055°17'00"W 3415 MO P. morifolia Paraguay 26°07'00"S 055°32'00"W 3415 FCQ, MO P. morifolia Paraguay 23°59'39"S 055°28'44"W 50777 AS, MO P. morifolia Paraguay 24°45'00"S 056°26'00"W 3793 CTES, DS, NY P. morifolia Paraguay 25°45'00"S 056°26'00"W 4869 CTES P. morifolia Paraguay 26°48'00"S 055°23'00"W 269 MO P. morifolia Paraguay 26°03'00"S 056°50'00"W 1163 MO, PY P. morifolia Peru 09°15'00"S 074°57'30"W 941 P P. morifolia Peru 09°15'00"S 074°57'30"W s.n. GH P. morifolia Peru 05°00'00"S 078°57'00"W 3931 MO P. morifolia Peru 12°38'30"S 072°20'20"W 2896 AMAZ, CUZ, HUT, MO, USM P. morifolia Peru 12°38'25"S 072°20'25"W 1357 CUZ, MO P. morifolia Peru 12°58'31"S 072°39'31"W 6108 AMAZ, CUZ, HUT, MO, USM P. morifolia Peru 12°50'00"S 072°39'00"W 7949 F, G, US P. morifolia Peru 13°19'00"S 072°02'00"W 1112 MO P. morifolia Venezuela 10°23'00"N 067°16'00"W 471 BR, G, GH, GOET, K, MO, NY, OXF, PH P. morifolia Venezuela 10°11'00"N 067°27'00"W s.n. Nov 1965 F, MO, NY, S, US, W P. suberosa Argentina 28°18'00"S 065°22'00"W 17284 CORD P. suberosa Argentina 26°11'00"S 058°57'00"W 568 CTES P. suberosa Argentina 24°27'00"S 065°17'00"W 3069 SI P. suberosa Argentina 23°41'00"S 064°52'00"W 2830 SI P. suberosa Argentina 24°02'00"S 064°15'00"W 4449 SI P. suberosa Argentina 24°14'00"S 064°13'00"W 9038 SI P. suberosa Argentina 27°23'00"S 055°53'00"W 1511 S P. suberosa Argentina 27°23'00"S 055°53'00"W 1512 S P. suberosa Argentina 27°16'00"S 055°35'00"W 452 SI P. suberosa Argentina 22°26'00"S 064°44'00"W 3722 SI P. suberosa Bolivia 15°46'00"S 068°38'00"W 610b P P. suberosa Bolivia 15°46'00"S 068°38'00"W 612 BM, G, GH, K, NY, P, S, W P. suberosa Bolivia 15°14'09"S 068°44'45"W 2309 LPB P. suberosa Bolivia 17°40'27"S 063°09'42"W 40425 NY P. suberosa Bolivia 17°45'00"S 063°11'00"W 41 USZ P. suberosa Bolivia 18°09'00"S 063°52'00"W 1657 S, W P. suberosa Bolivia 18°33'54"S 063°59'55"W 4184 MO, USZ

358

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. suberosa Bolivia 18°55'51"S 064°06'39"W 4300 MO, USZ P. suberosa Bolivia 18°30'17"S 064°07'26"W 6277 MO, USZ P. suberosa Bolivia 18°52'28"S 063°56'49"W 6682 MO P. suberosa Bolivia 18°33'30"S 064°00'40"W 3375 MO, USZ P. suberosa Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 5875 C P. suberosa Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 21461 C P. suberosa Brazil 21°53'00"S 046°21'00"W 1855 S P. suberosa Brazil 21°56'00"S 046°23'00"W 640 S P. suberosa Brazil 19°37'00"S 043°53'00"W 1176 C P. suberosa Brazil 19°37'00"S 043°53'00"W 1177 C P. suberosa Brazil 09°26'00"S 040°45'00"W 1237 WIS P. suberosa Brazil 09°26'00"S 040°45'00"W 465 WIS P. suberosa Brazil 22°54'10"S 043°12'27"W 8 W P. suberosa Brazil 22°54'10"S 043°12'27"W 595 BR P. suberosa Brazil 30°02'00"S 051°13'00"W 247 S P. suberosa Brazil 27°26'54"S 048°32'11"W 12264 NY, R, US P. suberosa Brazil 23°32'51"S 046°38'10"W 343 C P. suberosa Brazil 23°32'51"S 046°38'10"W 436 C P. suberosa Caribbean 18°24'00"N 075°01'00"W 34255 NY P. suberosa Caribbean 18°24'00"N 075°01'00"W 34150 NY P. suberosa Caribbean 16°15'00"N 061°35'00"W 3616 C, US P. suberosa Caribbean 18°04'00"N 063°03'00"W 2721 U P. suberosa Caribbean 18°04'00"N 063°03'00"W 2734 U P. suberosa Caribbean 17°38'00"N 063°14'00"W 314 U P. suberosa Caribbean 17°38'00"N 063°14'00"W 1668 U P. suberosa Caribbean 25°05'00"N 077°21'00"W s.n. 1933 WIS P. suberosa Caribbean 25°04'00"N 077°25'00"W 2213 F P. suberosa Caribbean 25°04'00"N 077°25'00"W 2237 F P. suberosa Caribbean 25°35'00"N 079°20'00"W 2318 F P. suberosa Caribbean 25°43'00"N 079°18'00"W 2351 F P. suberosa Caribbean 20°57'00"N 073°40'00"W 883 F P. suberosa Caribbean 25°06'00"N 077°18'00"W 242 F, GH P. suberosa Caribbean 24°26'00"N 077°57'00"W 389 F P. suberosa Caribbean 20°30'00"N 076°00'00"W 15109 US P. suberosa Caribbean 20°30'00"N 076°00'00"W 1431 S P. suberosa Caribbean 20°30'00"N 076°00'00"W 8675 LS P. suberosa Caribbean 23°02'28"N 081°34'39"W 28 BSC, NY P. suberosa Caribbean 23°02'28"N 081°34'39"W 584 BSC, NY P. suberosa Caribbean 23°02'28"N 081°34'39"W 9645 LS P. suberosa Caribbean 23°02'28"N 081°34'39"W 130 BSC, NY P. suberosa Caribbean 22°24'00"N 079°58'00"W 4807 US P. suberosa Caribbean 22°22'36"N 080°00'53"W 441 MIN P. suberosa Caribbean 20°52'00"N 076°54'00"W 197b GOET P. suberosa Caribbean 20°30'00"N 076°00'00"W 1199 GOET P. suberosa Caribbean 20°30'00"N 076°00'00"W 197a GOET P. suberosa Caribbean 21°22'51"N 077°55'01"W 121 F, NY, US P. suberosa Caribbean 21°22'51"N 077°55'01"W 580 F, NY, US P. suberosa Caribbean 21°22'51"N 077°55'01"W 2529 F, NY, US P. suberosa Caribbean 20°28'56"N 075°48'32"W 18968 MO P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 822 S

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 950 S P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 12349 B, S P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 15525 US P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 2451 LS P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 6363 LS P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 7496 LS, US P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 2252 BSC P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 7923 BSC P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 8258 BSC P. suberosa Caribbean 23°07'55"N 082°21'51"W 3306 BSC P. suberosa Caribbean 22°25'03"N 083°41'53"W 3722 BSC P. suberosa Caribbean 22°25'03"N 083°41'53"W 13197 LS P. suberosa Caribbean 22°25'03"N 083°41'53"W 10564 NY, US P. suberosa Caribbean 22°25'03"N 083°41'53"W 3224 BSC P. suberosa Caribbean 22°48'00"N 083°01'00"W 10741 MO P. suberosa Caribbean 22°24'00"N 079°58'00"W 395 LS P. suberosa Caribbean 22°24'00"N 079°58'00"W 615 LS P. suberosa Caribbean 22°24'00"N 079°58'00"W 3075 US P. suberosa Caribbean 18°41'00"N 070°09'00"W 1616 GOET P. suberosa Caribbean 18°25'00"N 070°02'00"W 310 US P. suberosa Caribbean 19°41'04"N 071°40'42"W 5626 MO P. suberosa Caribbean 19°30'00"N 070°20'00"W 4203 IBE P. suberosa Caribbean 18°06'00"N 077°21'00"W 389 F, GH, NY, US P. suberosa Caribbean 17°47'48"N 077°04'29"W 1580 US P. suberosa Caribbean 17°55'00"N 077°36'00"W s.n. HUA P. suberosa Caribbean 17°55'00"N 077°36'00"W s.n. HUA P. suberosa Caribbean 17°56'40"N 076°55'52"W s.n. 1894 BKL P. suberosa Caribbean 18°13'00"N 063°01'00"W 3498 U P. suberosa Caribbean 17°04'25"N 061°48'17"W 235 GOET P. suberosa Caribbean 15°18'00"N 061°23'00"W s.n. W P. suberosa Caribbean 16°10'02"N 061°40'08"W 512 GOET P. suberosa Caribbean 17°38'02"N 063°14'17"W 6182 MO P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 063°00'00"W 30271 WIS P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 192 U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 271 U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 313 U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 342 U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 490 U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 690 U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 713 NY, U P. suberosa Caribbean 17°30'00"N 062°58'00"W 837 NY, U P. suberosa Caribbean 12°30'00"N 069°58'00"W 6515 NY, U P. suberosa Caribbean 12°10'00"N 068°14'00"W 7042 U P. suberosa Caribbean 12°10'00"N 068°14'00"W 7263 U P. suberosa Caribbean 12°10'00"N 068°14'00"W 7396 U P. suberosa Caribbean 12°10'00"N 069°00'00"W 4726 U P. suberosa Caribbean 12°10'00"N 069°00'00"W 4926 U P. suberosa Caribbean 12°10'00"N 069°00'00"W 5107 U P. suberosa Caribbean 18°12'11"N 067°08'24"W 811c B P. suberosa Caribbean 18°08'31"N 066°15'59"W 2941 GOET, US

360

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. suberosa Caribbean 18°08'30"N 067°07'40"W 4853 BKL P. suberosa Caribbean 18°18'00"N 065°18'00"W 80 MO, NY P. suberosa Caribbean 18°01'48"N 066°40'02"W 1763 MO, NY P. suberosa Caribbean 10°39'00"N 061°31'00"W 7726 US P. suberosa Caribbean 10°39'00"N 061°31'00"W 961 NY P. suberosa Caribbean 18°26'00"N 064°36'00"W 557 NY, US P. suberosa Caribbean 18°20'00"N 064°54'00"W 88 G P. suberosa Caribbean 18°20'00"N 064°47'39"W 614 NY, VIST P. suberosa Caribbean 18°20'13"N 064°43'13"W 870 VIST P. suberosa Caribbean 18°25'00"N 064°38'00"W 24 GH P. suberosa Caribbean 18°25'00"N 064°38'00"W 39 GH P. suberosa Caribbean 18°25'00"N 064°38'00"W 141 GH P. suberosa Caribbean 12°07'00"N 061°40'00"W 1720 GH P. suberosa Caribbean 12°07'00"N 061°40'00"W 316 US P. suberosa Caribbean 14°40'00"N 061°00'00"W 811 P P. suberosa Caribbean 14°40'00"N 061°00'00"W 873 NY P. suberosa Caribbean 14°40'00"N 061°00'00"W 874 C P. suberosa Caribbean 14°40'00"N 061°00'00"W 4690 C P. suberosa Caribbean 14°40'00"N 061°00'00"W 589 BM P. suberosa Caribbean 13°05'00"N 061°12'00"W 615 GH P. suberosa Caribbean 13°05'00"N 061°12'00"W 1314 BM P. suberosa Caribbean 13°08'00"N 061°13'00"W 15718 B P. suberosa Colombia 05°46'30"N 074°20'30"W 6 COL P. suberosa Colombia 05°46'30"N 074°20'30"W 191 COL P. suberosa Colombia 06°53'37"N 075°13'12"W 6433 HUA, JAUM P. suberosa Colombia 06°42'00"N 075°49'00"W 7248 MO P. suberosa Colombia 06°18'00"N 075°36'00"W 77 COL, HUA P. suberosa Colombia 06°14'55"N 075°36'18"W 1466 COL P. suberosa Colombia 06°11'00"N 075°17'00"W 200 COL P. suberosa Colombia 09°46'52"N 075°52'20"W 82 COL P. suberosa Colombia 09°47'37"N 075°50'34"W 7 COL P. suberosa Colombia 10°24'00"N 075°31'00"W 121 S P. suberosa Colombia 10°21'45"N 075°29'57"W 5044 HUA P. suberosa Colombia 04°59'28"N 075°35'23"W 5274 HUA P. suberosa Colombia 05°03'02"N 075°33'58"W 418 HUA P. suberosa Colombia 05°03'02"N 075°32'00"W 416 HUA P. suberosa Colombia 05°06'00"N 075°31'00"W 15 HUA P. suberosa Colombia 01°07'00"N 072°50'00"W 2223 COL P. suberosa Colombia 10°43'00"N 073°28'00"W 24402 Unknown, US P. suberosa Colombia 08°39'49"N 077°21'37"W 169 COL P. suberosa Colombia 04°27'00"N 074°48'00"W 6970 COL, HUA P. suberosa Colombia 05°07'00"N 074°28'00"W 3 COL P. suberosa Colombia 12°31'00"N 081°43'00"W 2725 COL P. suberosa Colombia 10°53'19"N 074°03'21"W 1914 COL P. suberosa Colombia 04°52'00"N 075°37'00"W 171 HUA P. suberosa Colombia 12°34'00"N 081°42'00"W 5170 COL, HUA P. suberosa Colombia 12°34'00"N 081°42'00"W 5195 COL P. suberosa Colombia 12°34'00"N 081°42'00"W 5188 COL P. suberosa Colombia 12°33'19"N 081°43'03"W s.n. COL P. suberosa Colombia 13°21'59"N 081°20'52"W 191 COL

361

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. suberosa Colombia 12°33'10"N 081°43'49"W 5574 CR P. suberosa Colombia 12°31'02"N 081°42'31"W 5542 CR P. suberosa Colombia 06°56'00"N 073°01'00"W 898 COL P. suberosa Colombia 04°20'00"N 076°12'00"W 972 COL, HUA, MO P. suberosa Colombia 03°39'37"N 076°41'34"W 227 HUA, WIS P. suberosa Colombia 03°31'13"N 076°40'05"W 1154 COL P. suberosa Colombia 03°38'18"N 076°42'24"W 1386 COL P. suberosa Colombia 03°35'00"N 076°36'00"W 3075 COL P. suberosa Colombia 03°36'00"N 076°35'00"W 3075 COL, US P. suberosa Costa Rica 09°54'00"N 084°01'48"W 8, 2 IRVC P. suberosa Ecuador 02°36'00"S 079°28'00"W 102 TEX P. suberosa Ecuador 01°36'00"S 079°02'00"W 696 S P. suberosa Ecuador 03°40'00"S 079°39'00"W 660 WIS P. suberosa Ecuador 00°52'00"N 079°51'00"W 764 BM P. suberosa Ecuador 02°46'00"S 079°40'00"W 35 TEX P. suberosa Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W 42b S P. suberosa Ecuador 02°10'00"S 079°54'00"W s.n. K P. suberosa Ecuador 01°54'00"S 079°48'00"W 15217 K, NY, S, UPS P. suberosa Ecuador 02°10'17"S 079°25'34"W E-3559 NY P. suberosa Ecuador 04°04'00"S 079°36'00"W 8009 F P. suberosa Ecuador 03°45'00"S 079°37'00"W 1140 LOJA P. suberosa Ecuador 01°49'00"S 079°31'00"W 236 NY, S P. suberosa El Salvador 13°51'36"N 089°48'04"W 20188 US P. suberosa Guatemala 15°46'30"N 090°13'30"W 1405 P P. suberosa Guatemala 15°46'30"N 090°13'30"W 2512 US P. suberosa Guatemala 15°46'30"N 090°13'30"W 1481 P P. suberosa Guatemala 15°46'30"N 090°13'30"W 2323 P P. suberosa Guatemala 15°14'28"N 090°17'11"W 635 DUKE P. suberosa Guatemala 14°37'55"N 090°37'15"W 27552 EAP P. suberosa Guatemala 14°37'55"N 090°41'37"W 15243 EAP P. suberosa Guatemala 14°37'55"N 090°41'37"W 15989 EAP P. suberosa Guatemala 15°23'13"N 091°37'05"W 26507 EAP P. suberosa Guatemala 14°44'05"N 091°07'39"W 25309 EAP P. suberosa Hawaiian Isl 21°38'02"N 158°02'48"W 16334 ASU P. suberosa Hawaiian Isl 21°03'05"N 157°52'38"W 3101 NY P. suberosa Honduras 15°13'30"N 086°15'30"W 3058 EAP P. suberosa Honduras 15°13'30"N 086°15'30"W 20635 EAP P. suberosa Honduras 14°39'00"N 087°55'00"W 10891 EAP P. suberosa Honduras 14°33'00"N 087°56'00"W 23340 EAP P. suberosa Honduras 15°30'20"N 087°59'50"W 3840 EAP P. suberosa Honduras 17°24'43"N 083°55'46"W 9728 TEFH P. suberosa Honduras 14°10'00"N 088°00'00"W 24324 EAP P. suberosa Honduras 15°28'00"N 086°43'00"W 30881 WIS P. suberosa Mexico 16°19'12"N 092°58'12"W 54392 CAS P. suberosa Mexico 16°47'08"N 092°59'23"W 52183 CAS P. suberosa Mexico 16°43'12"N 092°52'12"W 54010 CAS P. suberosa Mexico 16°54'36"N 092°58'48"W 51972 CAS P. suberosa Mexico 16°07'48"N 092°21'36"W 846 MEXU P. suberosa Mexico 27°39'00"N 108°42'00"W 1883 ARIZ P. suberosa Mexico 17°40'00"N 100°00'00"W 303 US

362

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. suberosa Mexico 20°30'00"N 099°00'00"W 58 GH P. suberosa Mexico 20°30'00"N 099°00'00"W 59 GH P. suberosa Mexico 20°28'00"N 099°12'00"W s.n. 1905 UC P. suberosa Mexico 21°00'00"N 099°11'24"W s.n., 1937 ARIZ, MO P. suberosa Mexico 20°47'07"N 099°26'43"W 5448 BH P. suberosa Mexico 20°47'03"N 099°25'45"W 4380 BH P. suberosa Mexico 21°00'00"N 099°11'24"W 1789 BH P. suberosa Mexico 18°51'36"N 100°27'00"W 5034A ASU, herb. Hinton P. suberosa Mexico 19°07'36"N 100°07'26"W 2060 MEXU, MO P. suberosa Mexico 21°31'48"N 104°52'48"W 666 UC P. suberosa Mexico 18°10'12"N 097°39'00"W 5443-a MEXU P. suberosa Mexico 18°05'24"N 097°21'00"W 7045 MEXU P. suberosa Mexico 17°03'00"N 096°43'00"W 2168 F, GH P. suberosa Mexico 17°36'00"N 096°55'00"W 509 HEM, KESC, MO P. suberosa Mexico 17°13'46"N 097°42'16"W 506 HEM, KESC, MO P. suberosa Mexico 18°12'03"N 097°23'57"W 4018 MEXU P. suberosa Mexico 18°10'12"N 097°27'36"W F-476 MEXU P. suberosa Mexico 18°13'12"N 097°22'48"W 2428 MEXU P. suberosa Mexico 18°16'12"N 097°30'00"W 2388 MEXU P. suberosa Mexico 18°23'24"N 097°26'24"W 2085 MEXU P. suberosa Mexico 18°51'36"N 097°40'48"W 14178 MEXU P. suberosa Mexico 18°27'00"N 097°23'00"W 804 MEXU P. suberosa Mexico 18°09'00"N 097°26'24"W 7186 MEXU P. suberosa Mexico 18°12'00"N 097°25'00"W s.n. Jul 1907 UC P. suberosa Mexico 18°02'24"N 097°29'24"W 4072 UC P. suberosa Mexico 18°02'24"N 097°29'24"W 4073 UC P. suberosa Mexico 18°27'36"N 097°23'24"W 2037b MEXU P. suberosa Mexico 21°12'25"N 099°28'31"W 909 CAS P. suberosa Mexico 19°52'12"N 087°37'48"W 2054 CAS P. suberosa Mexico 19°37'48"N 087°55'12"W 6461 ASU P. suberosa Mexico 21°13'48"N 086°48'00"W 1547 MEXU P. suberosa Mexico 21°12'21"N 086°42'56"W 17623 MEXU P. suberosa Mexico 21°36'00"N 098°39'36"W 3316 TEX, XAL P. suberosa Mexico 22°13'00"N 100°15'00"W 5048 UC P. suberosa Mexico 22°13'00"N 100°15'00"W 5049 UC P. suberosa Mexico 22°09'00"N 100°59'00"W 3520 GH P. suberosa Mexico 25°54'00"N 107°39'00"W 6510 ARIZ P. suberosa Mexico 25°54'00"N 107°39'00"W 6550 ARIZ P. suberosa Mexico 28°22'48"N 109°18'36"W 77-160 ARIZ P. suberosa Mexico 28°22'48"N 109°18'36"W 77-181 ARIZ P. suberosa Mexico 26°59'54"N 108°57'19"W 4869 ARIZ P. suberosa Mexico 20°26'00"N 098°20'00"W 15740 MICH, UC P. suberosa Mexico 19°15'00"N 096°53'00"W 7128 UC P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 1388 EAP, GH P. suberosa Mexico 19°15'00"N 096°33'36"W 9039 UC P. suberosa Mexico 21°06'00"N 097°57'36"W 5862 F P. suberosa Mexico 19°19'48"N 096°37'48"W 7513 F P. suberosa Mexico 19°24'00"N 096°43'48"W 764 F P. suberosa Mexico 19°22'48"N 096°39'00"W 1838 F P. suberosa Mexico 19°43'12"N 096°24'36"W 5281 F

363

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. suberosa Mexico 18°42'36"N 097°19'48"W 4156 WIS P. suberosa Mexico 18°42'36"N 097°19'48"W 4157 WIS P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 3657 BR P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 3659 BR, G, P P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 3661 BR, G, P P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 4124 C P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 751 G, GH P. suberosa Mexico 19°12'00"N 096°08'00"W 217 NY P. suberosa Mexico 20°26'00"N 098°20'00"W 6234 F, GH, MO, NY, UC, US P. suberosa Mexico 21°12'45"N 087°44'30"W 1304 F P. suberosa Mexico 21°15'36"N 088°37'12"W 2169 F P. suberosa Mexico 21°12'45"N 087°44'30"W 24417 G P. suberosa Mexico 21°12'45"N 087°44'30"W 898 F P. suberosa Mexico 21°15'36"N 088°37'12"W 2168 F, MO P. suberosa Nicaragua 13°25'00"N 086°14'25"W 270 HULE, MO P. suberosa Panama 08°26'30"N 080°06'30"W 1849 GH P. suberosa Paraguay 23°28'30"S 058°28'00"W 344 W P. suberosa Peru 09°15'00"S 074°57'30"W 734 P P. suberosa Peru 12°03'00"S 077°03'00"W 154 G, P P. suberosa Peru 12°03'00"S 077°03'00"W 2855 F P. suberosa Peru 12°03'00"S 077°03'00"W 14772 PH P. suberosa Peru 12°03'00"S 077°03'00"W 1438 K P. suberosa Peru 12°03'00"S 077°03'00"W 1439 K P. suberosa Peru 12°03'00"S 077°03'00"W 2651 W P. suberosa Peru 03°34'00"S 080°26'29"W 7638 F P. suberosa United States 25°28'00"N 080°29'00"W s.n. 29 1929 CM P. suberosa United States 29°08'18"N 083°02'07"W s.n. s.d. C P. suberosa United States 26°50'56"N 082°18'14"W 295-B UMO P. suberosa United States 26°50'56"N 082°18'14"W 295-A UMO P. suberosa United States 25°46'26"N 080°11'38"W 1162 ARIZ P. suberosa United States 25°37'00"N 080°32'00"W 3280 CM P. suberosa United States 25°45'00"N 080°20'00"W s.n. 1937 DUKE P. suberosa United States 25°46'26"N 080°11'38"W 109 CAS P. suberosa United States 25°36'53"N 080°18'39"W 1006 CAS P. suberosa United States 25°29'05"N 080°30'45"W 5787 C, NY, S P. suberosa United States 25°30'00"N 080°20'00"W 398 DUKE P. suberosa United States 25°42'44"N 080°15'25"W 906 DUKE P. suberosa United States 25°37'00"N 080°32'00"W 3983 COL P. suberosa United States 26°34'00"N 081°53'00"W 1160 ARIZ P. suberosa United States 25°05'10"N 080°26'51"W 1161 ARIZ P. suberosa United States 27°49'44"N 081°35'03"W 3219 CAS P. suberosa United States 27°11'45"N 082°29'26"W s.n. DUKE P. suberosa United States 21°29'00"N 158°09'00"W 1072 US P. suberosa United States 21°23'00"N 157°53'00"W H-610 US P. suberosa United States 21°26'00"N 157°58'00"W 6114 US P. suberosa United States 21°33'57"N 157°53'40"W 1764 WIS P. suberosa United States 21°38'00"N 157°56'00"W 7318 ARIZ P. suberosa Venezuela 10°26'00"N 067°02'00"W 2336 GOET P. suberosa Venezuela 10°25'00"N 067°17'00"W 2328a GOET P. urnifolia Argentina 28°25'00"S 065°11'00"W 13308 F, MO

364

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. urnifolia Argentina 28°00'02"S 056°04'52"W 10725 CTES P. urnifolia Argentina 24°13'00"S 065°19'00"W 13316 US P. urnifolia Argentina 24°13'00"S 065°17'00"W 910 US P. urnifolia Argentina 27°03'33"S 054°49'37"W 673 SI, US P. urnifolia Argentina 26°28'00"S 054°32'00"W 777 SI, US P. urnifolia Argentina 25°46'42"S 065°01'10"W 9322 BM, CAS, MO, US P. urnifolia Argentina 22°48'00"S 064°23'00"W 1966 CORD, K, US P. urnifolia Argentina 22°23'31"S 064°43'42"W 9662 CAS P. urnifolia Argentina 22°23'31"S 064°43'42"W 9682 CAS P. urnifolia Argentina 31°32'00"S 068°29'00"W 2949 LIL P. urnifolia Argentina 27°26'00"S 065°44'00"W 3620 LIL P. urnifolia Argentina 26°52'00"S 065°41'00"W 10744 MO, U, Z P. urnifolia Argentina 26°53'00"S 065°25'00"W 5933 Unknown, US P. urnifolia Argentina 27°21'00"S 065°48'00"W 2895 US P. urnifolia Argentina 26°53'00"S 065°25'00"W 2100 US P. urnifolia Argentina 27°29'00"S 065°44'00"W 3620 US P. urnifolia Argentina 27°09'00"S 065°15'00"W 15153 MO P. urnifolia Argentina 26°52'31"S 065°24'48"W 967 BAB, CAS, F, GH, MO, US P. urnifolia Argentina 26°52'00"S 065°41'00"W 1495 LIL P. urnifolia Argentina 27°04'00"S 065°30'00"W 12027 LIL, US P. urnifolia Argentina 27°03'23"S 065°40'15"W 24731 CORD P. urnifolia Argentina 26°55'00"S 065°31'00"W s.n. US P. urnifolia Argentina 26°57'00"S 065°32'00"W 7360 US P. urnifolia Argentina 27°10'00"S 065°30'00"W 1487 US P. urnifolia Argentina 26°53'38"S 065°22'41"W s.n. US P. urnifolia Argentina 26°42'00"S 065°20'00"W s.n. US P. urnifolia Argentina 26°44'00"S 065°17'00"W No CTES P. urnifolia Argentina 26°53'38"S 065°22'41"W 13275 BAB, F P. urnifolia Argentina 26°44'00"S 065°17'00"W 203 LIL P. urnifolia Argentina 26°53'38"S 065°22'41"W 1221 BAB, US P. urnifolia Argentina 26°47'00"S 065°24'00"W 698 C, L P. urnifolia Bolivia 15°46'00"S 068°38'00"W 610a P P. urnifolia Bolivia 15°19'00"S 068°12'00"W 1517 , G, GH, GOET, HUEFS, K, MIN P. urnifolia Bolivia 15°19'00"S 068°12'00"W 1517 NY P. urnifolia Bolivia 16°20'00"S 068°00'00"W 1751 LPB, MO, WIS P. urnifolia Bolivia 15°42'10"S 067°28'59"W 4864 RSA P. urnifolia Bolivia 16°14'00"S 067°46'00"W 190 MO P. urnifolia Bolivia 16°37'00"S 067°39'00"W 328 MO P. urnifolia Bolivia 16°14'00"S 067°47'00"W 4822 HUA, LPB, MO P. urnifolia Bolivia 18°47'00"S 068°36'00"W s.n. 01600164 F P. urnifolia Bolivia 18°14'35"S 063°40'06"W 1494 MO, USZ P. urnifolia Brazil 14°10'00"S 053°05'00"W 11562 US P. urnifolia Brazil 24°00'00"S 051°27'00"W 22883 BR, GB, HRB, HUM, MO P. urnifolia Brazil 24°13'26"S 050°55'40"W 13226 P, U P. urnifolia Brazil 23°46'53"S 049°57'08"W 60541 C P. urnifolia Brazil 30°02'00"S 051°14'00"W 25168 HAS P. urnifolia Brazil 27°11'00"S 051°29'00"W 507 C P. urnifolia Brazil 27°15'00"S 051°33'00"W 14682 HB, UPCB, US P. urnifolia Brazil 23°17'14"S 049°01'52"W 56443 BH, HUEFS P. urnifolia Paraguay 22°41'10"S 056°00'38"W 46506 AS, MO

365

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. urnifolia Paraguay 22°38'52"S 056°00'52"W 46579 AS, LPB, MO, UPCB

Figura A.1: Variables bioclimáticas de mayor relevancia para especies nativas de Passiflora. a: P. alata; b: P. chrysophylla; c: P. amethystina; d: P. elegans; e: P. caerulea; f: P. edulis f. edulis; g: P. cincinnata; h: P. edulis f. flavicarpa; i: P. capsularis; j: P. foetida.

366

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Figura A.1 (cont.): Variables bioclimáticas de mayor relevancia para especies nativas de Passiflora. k: P. giberti; l: P. suberosa; m: P. misera; n: P. tenuifila; o: P. mooreana; p: P. tucumanensis; q: P. morifolia; r: P. umbilicata; s: P. palmatisecta; t: P. urnaefolia.

367

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 2: Soluciones y Buffers empleados para estudios citológicos

Buffer Ácido Cítrico - Citrato de Sodio, 0,1 M pH 4,8 Solución A Ácido Cítrico monohidratado 0,84 gr H2O bidestilada 40 ml Solución B Citrato Trisódico bihidratado 1,76 gr Agua destilada estéril (0,1 M) hasta 60 ml Solución stock (10 X) Solución A 40 ml Solución B 60 ml Solución de trabajo (1X)

Solución enzimática de Celulasa y Pectinasa Solución A: de Celulasa al 2% (p/v) 1,6 g Pectinasa al 20% (v/v) 16 ml Buffer Ácido Cítrico – 64 ml Citrato de Sodio, pH 4,8. -Solución B: de Celulasa Ozonuka RS al 2% (p/v) 0,4 g Pectinasa al 20% (v/v) 4 ml

Buffer Ácido Cítrico - Citrato de Sodio, pH 4,8. 16 ml Solución de trabajo Solución A cuatro partes Solución B una parte Agitar en agitador magnético y guardar en tubos Eppendorf a -20 ºC.

Hematoxilina acética Hematoxilina 1 gr. Ácido Acético Glacial 45 cc Agua destilada estéril 55 cc Mezclar con agitación y estacionar durante 15 a 20 días antes de utilizar. Guardar en frasco color caramelo, en oscuridad y a temperatura ambiente.

Buffer Mc Ilvaine Solución A (0.1 M) Ácido Cítrico monohidratado 2.101 gr Agua destilada estéril. 100 ml Solución B (0.2 M) Fosfato Acido Disódico 28.4 gr Agua bi-destilada estéril 100 ml

368

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

En el momento de usar mezclar: 8.8 ml de Solución A + 41.2 ml de Solución B y llevar a ph7.

DAPI (4´6´diamidino-2-phenylindole.2HCl) Solución stock (0.2 mg/ml) DAPI (Sigma) 0.2 mg Agua bidestilada estéril 1 ml Solución de trabajo Solución stock 25 µl Buffer Mc Ilvaine 5 ml

SDS 10% Sodio Dodecil Sulfato 100 gr Agua destilada estéril 5 ml Calentar hasta 68ºC para disolver. Ajustar el pH a 7.2 agregando de unas gotas de HCl concentrado. Llevar hasta un volumen de 1000 ml con agua destilada estéril. Separar en alícuotas y guardar a temperatura ambiente.

RNAsa (libre de DNAsa) RNAsa A (Sigma) hasta una concentración de 10 mg/ml en Acetato de Sodio 0,01M, pH 5.2. Calentar hasta los 100 ºC durante 15 minutos. Luego ajustar el pH a 7.4 agregando 0,1 volúmenes de Tris-ClH (1M). Separar en alícuotas y guardar a -20 ºC.

Paraformaldehido (40%): Paraformaldehido 4 g Agua destilada. 100 ml Calentar hasta 60C y disolver con agitador magnético hasta que adquiera un aspecto lechoso y llegue a temperatura ambiente. Añadir 2 ml de NaOH 1M y agitar hasta que se vea transparente.

Sulfato de Dextrano Preparar el Sulfato de Dextrano (Sigma) al 50 % en agua destilada. Esterilizar por filtración con filtro “Milipore” y guardar a –20 ºC.

Buffer 20XSSC Cloruro de Sodio (3 M) 175.32 gr Citrato de Sodio monohidratado (300 mM) 88.23 gr Agua destilada hasta 1000 ml-Ajustar el pH hasta 7. Autoclavar y guardar a temperatura ambiente.

Buffer 2XSSC Buffer 20XSSC 100 ml

369

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Agua destilada hasta 1000 ml Mezclar por inversión

Solución de BSA 5 % (p/v) BSA (Bovine Serum Albumine) 5gr 4X SSC/Tween-20 Hasta 100ml Mezclar con un vortex.

370

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 3: Análisis estadísticos sobre la cantidad de ADN en especies de Passiflora

H0 = Las diferentes especies de Passiflora poseen genomas con igual cantidad de ADN en su complemento básico  Se rechaza. Se diferencian cinco grupos estadísticos.

371

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Variabilidad intraespecífica en el contenido de ADN del genoma de especies de Passiflora

H0 = Los diferentes genotipos de especies de Passiflora poseen igual cantidad de ADN en su complemento básico  Se rechaza. Las especies P. elegans, P. caerulea y P. edulis f. flavicarpa presentan genotipos en diferentes grupos estadísticos.

372

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

373

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 4: Análisis estadísticos sobre hibridación interespecífica en Passiflora

Cantidad de semillas por fruto

H0 =Todos los cruzamientos producen igual cantidad de semillas por fruto  Se rechaza.

Estadística descriptiva Cruzamiento Variable n Media D.E. Mín Máx P.alataxP.caerulea Semillas por fruto 7 149,14 29,76 115,00 181,00 P.alataxP.cincinnata Semillas por fruto 4 219,50 37,30 172,00 262,00 P.amethystinaxP.alata Semillas por fruto 4 70,00 29,54 32,00 100,00 P.amethystinaxP.caerulea Semillas por fruto 6 79,33 37,84 25,00 140,00 P.amethystinaxP.edulisf.ed.. Semillas por fruto 5 44,80 12,79 29,00 64,00 P.amethystinaxP.edulisf.fl.. Semillas por fruto 3 26,33 14,57 11,00 40,00 P.amethystinaxP.elegans Semillas por fruto 16 40,00 42,13 4,00 135,00 P.amethystinaxP.mooreana2x.. Semillas por fruto 6 29,83 10,70 21,00 47,00 P.amethystinaxP.mooreana4x.. Semillas por fruto 5 24,40 23,24 2,00 55,00 P.caeruleaxP.alata Semillas por fruto 1 28,00 0,00 28,00 28,00 P.caeruleaxP.amethystina Semillas por fruto 4 79,25 76,25 20,00 183,00 P.caeruleaxP.cincinnata Semillas por fruto 8 116,13 85,77 0,00 247,00 P.caeruleaxP.edulisf.eduli.. Semillas por fruto 3 65,67 16,20 47,00 76,00 P.caeruleaxP.edulisf.flavi.. Semillas por fruto 2 162,50 101,12 91,00 234,00 P.cincinnataxP.edulisf.edu.. Semillas por fruto 1 87,00 0,00 87,00 87,00 P.cincinnataxP.edulisf.fla.. Semillas por fruto 1 27,00 0,00 27,00 27,00 P.cincinnataxP.mooreana2x Semillas por fruto 1 50,00 0,00 50,00 50,00 P.edulisf.edulisxP.amethys.. Semillas por fruto 2 39,50 0,71 39,00 40,00 P.edulisf.edulisxP.moorean.. Semillas por fruto 1 1,00 0,00 1,00 1,00 P.edulisf.edulisxP.moorean.. Semillas por fruto 4 12,50 8,70 1,00 21,00 P.edulisf.flavicarpaxP.ala.. Semillas por fruto 1 27,00 0,00 27,00 27,00 P.edulisf.flavicarpaxP.ame.. Semillas por fruto 1 240,00 0,00 240,00 240,00 P.edulisf.flavicarpaxP.cae.. Semillas por fruto 2 211,50 218,50 57,00 366,00 P.edulisf.flavicarpaxP.cin.. Semillas por fruto 1 107,00 0,00 107,00 107,00 P.edulisf.flavicarpaxP.edu.. Semillas por fruto 1 202,00 0,00 202,00 202,00 P.edulisf.flavicarpaxP.moo.. Semillas por fruto 1 224,00 0,00 224,00 224,00 P.elegansxP.amethystina Semillas por fruto 4 24,25 25,47 0,00 55,00 P.elegansxP.caerulea Semillas por fruto 3 25,00 34,64 5,00 65,00 P.elegansxP.cincinnata Semillas por fruto 2 28,00 11,31 20,00 36,00 P.elegansxP.edulisf.edulis.. Semillas por fruto 1 28,00 0,00 28,00 28,00 P.mooreana2xxP.alata Semillas por fruto 1 0,00 0,00 0,00 0,00 P.mooreana2xxP.amethystina.. Semillas por fruto 3 45,67 8,96 40,00 56,00 P.mooreana2xxP.caerulea Semillas por fruto 3 27,67 13,05 13,00 38,00 P.mooreana2xxP.elegans Semillas por fruto 1 61,00 0,00 61,00 61,00 P.mooreana2xxP.mooreana4x Semillas por fruto 4 28,25 10,14 20,00 43,00 P.mooreana4xxP.alata Semillas por fruto 7 10,57 27,53 0,00 73,00 P.mooreana4xxP.amethystina.. Semillas por fruto 4 2,75 2,75 0,00 6,00 P.mooreana4xxP.caerulea Semillas por fruto 1 0,00 0,00 0,00 0,00 P.mooreana4xxP.cincinnata Semillas por fruto 5 11,00 24,04 0,00 54,00 P.mooreana4xxP.edulisf.edu.. Semillas por fruto 3 21,67 28,54 0,00 54,00 P.mooreana4xxP.edulisf.fla.. Semillas por fruto 3 0,00 0,00 0,00 0,00 P.mooreana4xxP.elegans Semillas por fruto 3 5,00 8,66 0,00 15,00 P.mooreana4xxP.mooreana2x Semillas por fruto 6 38,33 22,63 18,00 78,00

Óvulos por ovario

H0 = Todas las especies poseen igual cantidad de óvulos por ovario  Se rechaza. 374

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

375

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 5: Híbridos entre especies argentinas de Passiflora publicados hasta la fecha.

Variedad Cruzamiento Obtentor Cita

P. xbelotii P. alata x P. caerulea W. Masters Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Empress P. alata x P. caerulea W. Masters Vanderplank, Eugenie” 1991

P. “Blue bouquet” ((P. amethystina x P. caerulea) x (P. P. Worley Ulmer & amethystina x P. caerulea))x P. caerulea MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Blue carnival” P. cincinnata x P. caerulea “Constance M. Ulmer & Eliott” Gottschalk MacDougal, 2004

P. “Cary” P. cincinnata x P. umbilicata H. Gommer Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Catherina P. cincinnata x P. caerulea R. McCain Ulmer & Howard” MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Clear Sky” ((P. amethystina x P. caerulea) x P. R. Fischer Ulmer & caerulea) x P. caerulea = 4x MacDougal, 2004

P. “Coronata” P. alata x P. edulis f. edulis S. Pert & J. PSI 2006 A. Cantero Mallado

P. “Dark star” P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea F. Moser Ulmer & MacDougal, 2004

P. “Debby” P. caerulea x P. gibertii L. Sevcik PSI 2003

P. “Excel” P. edulis f. edulis x P. caerulea L. King Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Green lace” P. edulis x P. cincinnata P. Worley & Ulmer & R. McCain MacDougal, 2004

P. “Harlekin” P. mooreana x P. amethystina V. Lorenz PSI 2004

P. “Jara” P. caerulea x (P. caerulea x P. amethystina) R. Fischer Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

376

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. “Jeannette” ((P. amethystina x P. caerulea) x (P. P. Worley Ulmer & amethystina x P. caerulea))x P. caerulea MacDougal, 2004

P. “Jeeny” P. cincinnata x P. caerulea L. Sevcik Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Jelly Joker” P. cincinnata x P. umbilicata C. Laurens Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Jutta” P. umbilicata x P. tucumanensis H. Wouters Ulmer & MacDougal, 2004

P. “Lada” P. cincinnata x P. caerulea L. Sevcik Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Linda” P. cincinnata x P. caerulea “Constance L. Sevcik Ulmer & Eliott” MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Marie” ((P. amethystina x P. caerulea) x (P. P. Worley Ulmer & amethystina x P. caerulea))x P. caerulea MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Maxima” (P. amethystina x P. caerulea) x P. caerulea C. Laurens Ulmer & “Constance Eliott”, MacDougal, 2004

P. “Mirabile” P. alata x P. cincinnata H. Reimann Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Paulo” P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea L. King PSI 2004

P. “Purple Haze” P. caerulea x P. amethsytina C. Laurens Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Purple Rain” P. amethystina x P. caerulea C. Laurens PSI 2003

P. “Rambam” (P. alata x P. caerulea) x P. caerulea S. Prais PSI 2014

P. “Rattana” P. edulis f. edulis x P. edulis f. flavicarpa Y. Vilain PSI 2014

P. “Rinconata” P. cincinnata x P. caerulea “Constance S. Pert PSI 2007 Eliott”

P. “Sapphire” P. edulis f. flavicarpa x P. caerulea J. Ulmer & Vanderplank MacDougal, 2004

P. “Scribble” P. cincinnata x P. gibertii M. Vecchia Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

377

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. “Simpin” P. caerulea x P. amethystina S. Kamstra Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Simply red” P. caerulea x P. amethystina C. Laurens Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003

P. “Si Simona” (P. caerulea x P. amethsytina) x (P. caerulea C. Laurens PSI 2003 x P. amethystina)

P. “Starlight” P. alata x P. caerulea S. Lang PSI 2004

P. “Sonia” (((P. amethystina x P. caerulea) x P. R. Fischer & PSI 2004 caerulea) x P. caerulea = 4x)x P. caerulea F.J. Diez “Constance Eliott”

P. “Vladena” P. cincinnata x P. caerulea L. Sevcik Ulmer & MacDougal, 2004; PSI 2003 PSI. 2003-2014. Passiflora registrated cultivars. Passiflora Society

International.

Ulmer, T; MacDougal, J M. 2004. Passiflora:, passionflowers of the World.

Timber Press, Cambridge, UK. 1-430.

Vanderplank, K. 1991. Passionflowers and passionfruit. Cassell Publishers

Limited, London, 1-176.

378

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 6: Análisis estadísticos sobre citogenética de híbridos interespecíficos Comparación por ANOVA en la viabilidad del polen de los híbridos interespecíficos

H0 = todos los híbridos interespecíficos poseen igual viabilidad del polen 

Se rechaza (p 0,0001).

379

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Capacidad de los cruzamientos para formar nueve bivalentes

H0: Los diferentes cruzamientos presentan igual capacidad para formar nueve bivalentes No se rechaza (p 0,7)

Capacidad de los cruzamientos para formar tétradas de micrósporas normales

H0: Los diferentes cruzamientos poseen igual capacidad para formar tétradas de micrósporas  se rechaza (p 0,0351)

380

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 7: Análisis estadísticos sobre cantidad de ADN en híbridos interespecíficos H0: La cantidad de ADN en las células somáticas de los híbridos interespecíficos es igual a la suma de la cantidad de ADN en las gametas parentales  se rechaza. De los híbridos comparados, cuatro resultaron iguales al promedio de la cantidad de ADN de los genotipos parentales, 14 presentaron una cantidad estadísticamente mayor y cinco una menor.

381

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

382

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 8: Análisis estadísticos de carcateres fenotípicos

Análisis colorimétrico de las hojas

Luminosidad

H0: Las hojas de todas las especies e híbridos poseen la misma luminosidad Se rechaza, la luminosidad de las hojas es diferente entre las especies, entre los híbridos y entre especies e híbridos.

383

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico a

H0: Las hojas de todas las especies e híbridos poseen el mismo valor en la escala a  Se rechaza, el valor en la escala a de las hojas es diferente entre las especies, entre los híbridos y entre especies e híbridos.

384

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

385

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico b

386

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Superficie foliar

Ho: Todas las hojas de especies e híbridos poseen la misma superficie  Se rechaza, la superficie de las hojas es diferente entre las especies, entre los híbridos y entre especies e híbridos.

387

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

388

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Largo de entrenudos

Ho: Todas las hojas de especies e híbridos poseen el mismo largo de entrenudos  Se rechaza, el largo de entrenudos es diferente entre las especies, entre los híbridos y entre especies e híbridos.

389

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

390

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Regresión lineal superficie foliar-largo de entrenudos

Colorimetría de pétalos de flores

P. alata e híbridos

Luminosidad

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen la misma luminosidad en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

391

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico a

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en el componente colorimétrico a, en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

392

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico b

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en el componente colorimétrico b, en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

393

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. amethystina e híbridos

Luminosidad

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en la luminosidad del color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

394

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico a

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en el componente colorimétrico a, en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

395

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico b

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en el componente colorimétrico b, en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

396

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

P. cincinnata e híbridos – Luminosidad

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor la luminosidad del color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

397

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico a

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en el componente colorimétrico a, en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

398

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Componente colorimétrico b

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual valor en el componente colorimétrico b, en el color de los pétalos de las flores  Se rechaza.

399

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Diámetro de flor

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual diámetro de la flor  Se rechaza.

400

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Diámetro de corona

H0 : Todas las especies e híbridos interespecíficos poseen igual diámetro de la corona de las flores  Se rechaza.

401

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

402

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Regresión lineal diámetro de corona-diámetro de flor

403

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 9: Registros de la evaluación de tolerancia a temperaturas invernales de Buenos Aires

Tabla A.9: Registros de la evaluación de la tolerancia de especies e híbridos de Passiflora a las temperaturas invernales de Buenos Aires.

404

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tabla A.9 (cont.): Registros de la evaluación de la tolerancia de especies e híbridos de Passiflora a las temperaturas invernales de Buenos Aires

405

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 10: Formulario y cuestionario técnico para el registro de la variedad

406

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

407

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

408

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

409

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

410

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

411

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

412

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

413

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

414

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

415

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

416

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

417

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

418

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

419

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

420

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

421

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

422

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

423

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

424

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

425

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

426

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

427

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

428

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

429

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

430

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

431

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

432

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

433

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Anexo 11: Inducción de poliploides en Passiflora

Los análisis estadísticos en el Capítulo 5, comparan caracteres entre poliploides y testigos para evaluar si la poliploidización se correlaciona con algún efecto específico en el fenotipo. En la siguiente tabla se presentan los materiales a contrastar:

Tabla A.11: Códigos de las plantas poliploides, testigos y relación de parentesco entre ellas. Código IF Código IF testigo Relación poliploide-testigo poliploide

11-300#1 11-250#1, #3, #4 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-300#3 11-250#1, #3, #4 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-301#2 11-249#1, #2, #3, #4 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-301#3 11-249#1, #2, #3, #4 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-306#1 12-349#1 Hermanos enteros (cruzamiento diferentes de los mismos genotipos parentales)

11-302#1 11-226#1, #3 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-302#2 11-226#1, #3 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-302#4 11-226#1, #3 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-302#5 11-226#1, #3 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-304#1 11-224#1, #3 Hermanos enteros (semillas del mismo fruto)

11-254#1 P1 11-254#1 Igual genotipo (tratamiento de clones)

11-254#1 P4 11-254#1 Igual genotipo (tratamiento de clones)

11-254#1 P6 11-254#1 Igual genotipo (tratamiento de clones)

11-254#1 P9 11-254#1 Igual genotipo (tratamiento de clones)

12-349#1 P1 12-239#1 Igual genotipo (tratamiento de clones)

434

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Tratamientos de inducción de poliploides

H0= el tratamiento de inducción de poliploides a partir de plántulas y estacas de Passiflora con colchicina, resulta en la misma proporción de éxito

no se rechaza

Se utilizaron pruebas de diferencia de proporciones para contrastar el éxito en la obtención de poliploides por inmersión de plántulas y de estacas en la especie P. edulis (valor p=1,000000) y en los cruzamientos de P. amethystina x P. elegans (valor p=0,188858). Debido a que los valores p resultantes son mayores a 0,05, se considera que no hay diferencias estadísticamente significativas.

H0= el tratamiento poliploidizante a partir de plántulas de Passiflora por inmersión en colchicina, con concentraciones de 0,25% y 0,5%, resulta en la misma proporción de éxito  no se rechaza

Para comparar diferencias entre concentraciones de colchicina 0,25% y

0,5% en la poliploidización de plántulas de Passiflora, se contrastaron los

éxitos sobre el tamaño muestral en la especie P. edulis (valor p=0,157794), en los híbridos de P. amethystina x P. elegans (valor p=0,070799) y en los híbridos de P. edulis x P. alata (valor p=0,209817).

Efecto de la poliploidía en el diámetro de flor

H0= el diámetro de las flores de Passiflora no difiere entre poliploides y testigos  no se rechaza

435

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Si bien en nueve de los casos estudiados se observaron diferencias significativas entre poliploides y testigos en el diámetro de la flor (11-300#3,

11-301#2, 11-306#1, 11-302#2, 11-304#1, 11-254#1 P1, P6, P4 y 12-

349#1P1), en los otros seis casos caen en el mismo grupo estadístico (11-

300#1, 11-301#3, 11-302#1, #4 y #5 y 11-254#1P9). Por este motivo, no es posible rechazar la hipótesis nula sobre la igualdad en el diámetro de las flores entre poliploides y testigos.

436

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Efecto de la poliploidía en el diámetro de corona

H0= el diámetro de la corona de las flores de Passiflora no difiere entre poliploides y testigos  no se rechaza

437

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Los testigos 11-250 se encuentran en el mismo grupo estadístico (C) que el poliploide 11-300#3 originado a partir de una semilla del mismo fruto.

Los poliploides con el mismo genotipo que su planta testigo, por haber sido originados a partir de estacas (11-254#1 con 11-254#1 P9, P6, P4 y 11-

254#1 P1; 12-349#1 con 12-349#1 P1), se diferenciaron estadísticamente.

Esto podría indicar que, tratándose del mismo genotipo, la poliploidización podría aumentar el tamaño de la corona en las flores de Passiflora.

438

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Efecto de la polipoidía en el largo de entrenudos

H0= la longitud de los entrenudos no varía entre testigos y poliploides de

Passiflora  no se rechaza

439

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Los poliploides 11-302, inducidos por inmersión de plántulas en Colchicina, no presentan diferencias estadísticas (A) con las plántulas del mismo fruto que no fueron tratadas (11-226). Este hecho se confirma con el genotipo 11-

254#1 y el poliploide del mismo genotipo 11-254#1 P4, que se encuentran en el mismo grupo estadístico (B).

440

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Efecto de la poliploidía en la superficie foliar

H0= el área foliar no varía entre poliploides y testigos de Passiflora  no se rechaza

Los poliploides 11-302 y las plantas testigo de semillas del mismo fruto 11-

226, se encuentran en el mismo grupo estadístico (A), así como también las inducidas y su testigo del mismo 12-349#1 y 12-349#1 P1 (A).

441

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Efecto de la poliploidía en el tamaño de las células estomáticas

H0= las células estomáticas de los poliploides no difieren en su tamaño de las de los testigos  se rechaza

Todos los polipoides se encuentran en diferente grupo estadístico que las plantas testigo. Las células de los poliploides tienen un tamaño mayor que las de los testigos asociados a ellos.

442

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Efecto de la poliploidía en el color de las flores

H0= los componentes del color de las flores no difiere entre poliploides y testigos no se rechaza

443

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Dentro del componente L, que mide la luminosidad del color, se pueden encontrar en el mismo grupo estadístico (C) al poliploide 11-300#1 y a los testigos 11-250, mientras que el poliploide 11-306 se encuentra en el mismo

(B) que el testigo 12-349#1. Es de destacar que entre poliploides y testigos del mismo genotipo las diferencias son significativas, lo que indicaría la necesidad de profundizar en este estudio.

444

Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

En el componente colorimétrico a (escala rojo-verde), se observaron poliploides con diferencias respecto de su testigo como 11-249 (E) con 11-

301#2 y 11-301#3 (D), 11-226 (C) con 11-302#1(B), 11-302#2 y 11-302#4

(A). También hubo casos sin diferencia en casos en que poliploide y testigo eran del mismo genotipo como 11-254#1 y 11-254#1 P9 (E).

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Aspectos reproductivos, citogenéticos y evolutivos aplicados al mejoramiento en el género Passiflora L.

Lo mismo ocurrió con el componente b(escala azul-amarillo), poliploides y testigos diferentes estadísticamente como 11-224(D) y 11-304(E), 12-

349#1(B) y 12-349#1 P1 (D); y otros dentro del mismo grupo como 11-254#1 y los poliploides del mismo genotipo P9 y P6 (B).

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