Moreno Valero José Adolfo Aislamiento, caracterización y estudio de algunas reacciones químicas de diterpenos del ent- kaurano, presentes en la Espeletia schultzii wedd parte 2 Universidad de Los Andes-Facultad de Ciencias-Postgrado en Química Aplicada. 2002. p. 68 Venezuela Disponible en: http://bdigital.ula.ve/RediCiencia/busquedas/DocumentoRedi.jsp?file=33587&type=ArchivoDocumento &view=pdf&docu=26867&col=5

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16(17) a.-EPOXI-ENT-KA.UR-9(11)-EN-19-0ATO DE METILO (14]

El producto mayoritario obtenido en la reacción del éster metílico [12] con ÁciClo "mcto"-Cloropcrbenzoico, fue purific1do por cromatogwfía prcpilrativa, rindiendo un aceite iwmogéneo en capa fina. El análisis detallado de sus espectros de RMN-H1 (Fig. 14B; Tabla 14B) y de RMN-C13 (BB y DEPT) (Fig. 14C; Tabla 14C), condujeron a deducir, para este derivado, la fórmula molecular C21H300 3 • En su espectro IR (Fig. 14A; Tabla 14A), destaca una absorción i:p.tensa típica del carbonilo de un éster [vmax: 1.726 cm·1 (C=O)] y bandas atribuibles a vibraciones 1 de enlaces C-0 (vmax: 1.226 y 1.147 cm- ). Es también notable en el mismo la ausencia de absorciones características de hidroxilos, y por ello, es lógico suponer que dos de los oxígenos forman parte del éster y el tercero debe estar integrado a un grupo epóxido formado en la reacción, a expensas de uno de los dobles enlaces existentes en el éster metílico [12], utilizado como material de partida.

Figura 14A: Espectro Infrarrojo (film), del 16(17)a.-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo (14]

80,0

70

60

so

40 %T

30

20 C·H ~~ 10 2.870

C-H C=O t.ZZ5 1.728 0,0 2.933 3700,0 3000 2000 1500 1000 450,0 cm-1

Tabla 14A: Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del16(17)a.-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo (14]

Vmax. (cm-1) 2.933 2.870 1.726 1.679 1.226 1.147 Asignación C-H C-H C=O C=C C-0 C-0 147

El espectro de RMN-H1 muestra, un triplete [8: 5,19; U= 3,5 Hz)], típico de un protón olefínico (H-11) acoplado a los hidrógenos de un metileno vecinal (H-12); en consecuencia, cabe suponer que en este derivado permanece presente el doble enlace trisustituído que poseía el compuesto de partida [12]. Esto fue también 1 cunfirmauo en el especl.ro de RMN-C \ en el cual se identificaron dos picos [8: 156,69 (C-9) y 8: 115,54 (C-11)], cuya posición y orientación en el DEPT-135, permite asignarlos a los carbonos de un doble enlace de este tipo: Más aún, el pico más apantallado, asignable a un =CH se correlaciona en el HMQC (Fig. 14F) con el triplete del protón olefínico que resuena a 8: 5,19. Al quedar confirmada la presencia en la molécula de este doble enlace, es 16 17 evidente que el otro doble enlace (el metilénico /1 ' ) fue el que se epoxidó en el transcurso de la reacción. Ello fue confirmado al observar en el espectro de RMN-H1 un par de dobletes a 8: 2,76 y 8: 2,80 U= 4,5) [H-17A y H-17B], que se correlacionan en el espectro HMQC con un pico asignable a un carbono metilénico unido a un oxígeno [8: 50,83; -CH2-0- (C-17)]; este par de dobletes se correlaciona en el espectro HMBC (Fig. 14G) con un pico (8: 69,19), propio de un carbono cuaternario unido también a un oxígeno [>C-0- (C-16)], con lo cual queda demostrada la naturaleza espiránica del grupo epóxido, y por supuesto su necesaria ubicación en C-16/C-17. Otra evidencia en favor de esta última aseveración, es la denotación de la siguiente secuencia HMBC: C-16 ~ H-14 ~ C-12/H-12 ~ C-16 ~ H-15~ C-17/H-17 ~C-13~H-14/C-14.~H-15/C-15~ H-17~C-16 ~H-13 ~C-14~ H-12~C-13~H-15. La permanencia en la molécula del grupo carbometoxi, presente en el éster de partida, fue también puesta en evidencia mediante los espectro de RMN-H1 y 13 RMN-C [.SH: 3,60, (s) (H-21); .Se: 51,28 (C-21), -OCH3 y .Se: 177,90, -0-C=O (C-19)]. Su ubicación en C-4 fue sustentada por las correlaciones en el HMBC: C-4 ~ H-5~ C-18 ~ H-3 ~ C-19 ~ H-18 ~c-5 ~ H-3~ C-4~ H-18 ~C-3 ~H-5 ~ C-19 ~H-21 Los datos analizados hasta ahora demuestran que la estructura gruesa de este derivado se corresponde con la de un 16,17-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-oato de metilo. Sobre la base de su origen, hemos de aceptar que la estereoquímica en los centros quirales C-4, C-5, C-8, C-10 y C-13 es idéntica a la del éster de partida; por lo tanto sólo faltaría, para completar el estudio, determinar la estereoquímica en C-16. Ello fue posible a través del espectro NOESY (Fig. 14H), dado que en el mismo se observa que el doblete asignado a H-17A (exo) muestra NOE con la señal de H-12f3, mientras que el otro doblete, correspondiente al H-17B (endo), lo hace con la señal del H-15a. Estos hechos, unido al alto rendimiento con que se obtuvo el producto, en la reacción de epoxidación, avalan una orientación a para el anillo oxiránico. Con ello, la estructura y estereoqímicfl, del producto quedó completamente establecida, siendo éste el16,17a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-oato de metilo [14]. 148

1 Figura 14B: Espectro de R.\1N-H (CDCI3, 400 MHz), del 16(17)cx.-Epoxi-ent-Kaur-9{11)-en-19-oato de Metilo [14]

H·13

H·17 1 2 1

--·--.--r-.,._.,...... - .. .,_, ·······-·-········· ... ··- .,. .... -···~··-, ...... -,---,...... - ... -. ···· r··-······· ·-··· ·--······-; "'* J.t J" l'.<:: 1.! ~ ~

H-21 H-18 H-20

H-17 H-11

_J_~~------""' I_____..__,._,JU\..__.}!'VII\.ow./ .--,-,--.-·r-···-... --,..-.-,.-r-.--.-,--,.-.--...... ,...-,-, ...,-,--r-r-¡-..-..--r-r-r-,...... ,.-.--,--.-....--,-.-,--,-.--.---.--,.--.--.--... PPA 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0

Tabla 14B: Desplazamientos Químicos (<>) en el Espectro de RMN-H1

(CDCI3 , 400 MHz) del 16(17)a.-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo (14]

H H-5 H-11 H-13 H-12¡3ec. H-15¡3 H-17 H-18 H-20 H-21

5 1,52 5,19 1,75 2,29 2,13 2,76 y 2,80 1,14 0,90 3,60

m d d m dt d d S S S

](Hz) =10 =3,5 - =2 y 13 =15 :::4,5 - - - 149

13 Figura 14C: Espectro de RMN-C (CDCI3 , 100 MHz), del16(17)a.-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14]

1? 11 13 1 20 1 16 17 1 14~ ··,,i 2 o 9 8 ••••• o 15 3 4 5 CJ C·18 6 J L ! c-zn 18 COOCH3 •r~t7111-.c-a~·~· ~ 19 21 C·15 1 C·Z C·6 r·•~ J 1 . C·3 C·7 ~¡ 4 ·JlWL --,---..,..·-·"-y·- :11 2:1 ao .,

C-11

C·16 C-19 C-9

--~~~-~ .... ···r--·r··r --.,-·--r--.,.-,·-·-r·---r---~-,,----r--.--...---.·-r··--1·--r·--··r·-·,··--·-r--T··-r--r--,.-,,..-.--r-...---y-r- PP~ 150 140 120 tb~ 60 60 40 20

- Tabla 14C: Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-C 13

(CDCl3 , 100 MHz), del16(17)a.-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14]

e C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-7 C-8 C-9 C-10 C-11 o 40,83 20,16 38,30 44,82 46,67 18,41 29,98 42,89 156,69 38,66 115,54

Tipo >CH2 >CH2 >CH2 >C< >CH >CH2 >CH2 >C< =C< >C< =C-H Valores e C-12 C-13 C-14 C-15 C-16 C-17 C-18 C-19 C-20 C-21 deli, tomando alTMS o 32,85 40,69 43,16 49,97 69,19 50,83 28,06 177,90 23,49 51,28 como referencia interna rTipo >CH2 >CH >CH2 >CH2 0-C< O-CH2 -CH3 0-C=O -CH3 OCH3 150

1 Figura 14E: Espectro H\H -COSY (CDCI 3}, del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14]

II-1l.l H-20

H-17

J. O

1.!5

2.0

2.!5

ppm 2.5 2.0 1.5 1.0

Correlaciones Jll/H1 más Destacadas

3 151

(i) 20,16

H COOC @ 3 @ @ 28,06 51,28 177,90

Figura 14F: Espectro HMQC (CDC13), del 16(17)a.-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14)

H-14 H-18 H-13 H-2 H-2H-7 H-1

C-6

C-2 C-20

C-18

C-12 C-3 C-13 -1 C-5 C-15 C-17 C-21

pp~

2.5 2.0 1.5 1.0 152

Figura 14G: Espectro HMBC (CDC13), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo (14]

C-20--~

Correlaciones que Determinan la Posición .. del Grupo Carbometoxi

... 2.5 1.0

Correlaciones que Determinan la Posición del Grupo Epóxido 16(17)

Correlaciones que Determinan la Posición del Doble Enlace Trisustituido ~9 • 11 153

Figura 14H: Espectro NOESY (CDCI3), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14]

1.0

1.5

2.0

2.5

Plll

Efectos NOE más Significativos

IH-12aaxl" ~t)H-12f3ec 1" .. , H-17B 1.----.t L...--~ 154

9(11) a, 16(17) a-DIEPOXI-ENT-KAURAN-19-0ATO DE METILO [15]

Otro de los productos obtenido en la reaccwn del éster metílico [12] con Ácido "meta"-Cloroperbenzoico, fue purificado por cromatografía preparativa, rindiendo un aceite homogéneo en capa fina. Los datos derivados de sus espectros de RMN-H1 (Fig. 15B; Tabla 15B) y RMN-C 13 (BB y DEPT) (Fig. 15C; Tabla 15C), permitieron establecer la fórmula molecular C21H30Ü 4 , a la cual corresponden siete grados de instauración. Su espectro IR (Fig. 15A; Tabla 15A) carece de bandas propias de hidroxilos y de dobles enlaces, y en el mismo sólo destaca la absorción intensa del carbonilo de un éster [vmax: 1.715cm-1 (C=O)] y bandas de mediana· intensidad atribuibles a 1 enlaces C-0 (vmax: 1.163 y 1.149 cm- ). A la luz de estos datos, es lógico suponer que los dos oxígenos que no forman parte del éster, deben pertenecer a grupos epóxido, con lo cual se explican las siete instauraciones que exige la fórmula molecular.

Figura 15A: Espectro Infrarrojo (film), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

100,0

9S

90 12 SS 17 so

1S %T C-H C-0 70 C-H 2.858 1.163 6S 2.920

60 C=O 1.715 SS

50,0 3700,0 3000 2000 1500 1000 cm·l

Tabla 15A: Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

vmax. (cm-1) 2.920 2.858 1.715 1.163 1.149 Asignación C-H C-H C=O C-0 · C-0 155

La presencia en su espectro de RMN-H1 de un doblete a 8: 3,05 (J =4 _Hz), y de un par de dobletes a 8: 2,79 y 8: 2,84 (J =4,5) [H-17 A y H-17B], los cuales se correlacionan respectivamente en el espectro HMQC (Fig. 15 F) con los picos de un carbono oximetínico 8: 53,68 [0-CH- (C-11)] y de un -CH2-0- [8: 50,64 (C-17)], aporta más evidencias sobre la existencia en la molécula J.e los mencionddos epóxidos. Al tomar en cuenta que en el espectro de RMN-C 13 aparecen, a 8: 68,98 y 8: 69,83, dos picos asignables a carbonos cuaternarios (C-16 y C-9, respectivamente) unidos a un oxígeno (0-C<), es evidente que uno de los epóxidos es trisustituido y el otro es un espiroepóxido. El espectro H\H1-COSY (Fig. 15E) indica que el hidrógeno (H-11) que genera el primero de los dobletes epoxídicos, se encuentr~ acoplado con los hidrógenos (H-12) de un metileno adyacente, con lo cual H-11 forma parte del epóxido trisustituido. El otro epóxido tiene que estar situado entre C-16 y C-17, dado que es la única posición posible en la que puede situarse un espiroepóxido en un esqueleto de la serie del kaurano. El espectro HMBC (Fig. 15G), permitió confirmar la ubicación de ambos epóxidos. Así pues: 1. El carbono cuaternario unido al oxígeno que resuena a 8: 69,83 (C-9), se correlaciona con H-11, H-12, H-14, H-15 y H-20. Por otro lado, C-11 se correlaciona con H-12 y H-13, y los picos de los dos carbonos (C-12 y C-13) correspondientes a estos hidrógenos, cruzan señales con el doblete asignado a H-11. Estos datos sitúan al epóxido trisustituido entre C-9 y C-11. 2. El pico del otro carbono cuaternario unido a un oxígeno, el cual resuena a 8: 68,98 (C-16), se cruza con las señales asignadas a H-12, H-13, H-14, H-15, H-17A y H-17B. Adicionalmente, el pico del carbono que soporta a estos dos últimos hidrógenos (C-17), se cruza con las señales asignadas a H-15 y más aún, los picos asignados a C-13 y C-15 se correlacionan ambos con los dobletes que originan H-17A y H-17B. Estos datos confirman definitivamente la ubicación del espiroepóxido. La estereoquímica de ambos epóxidos se determinó a través del espectro NOESY (Fig. 15H). Así pues, el doblete de H-11 muestra NOE con las señales de H-1aec., H-1pax., H-12aax., H-12Pec. y H-20, lo cual sólo es posible si el anillo oxiránico tiene orientación a. El doblete asignado a H-17A (endo) se correlaciona con las señales de H-15a (exo), H-15P (endo) y H-14exo, mientras que el asignado a H-17B (exo) lo hace sólo con la de H-12pax. y débilmente con la de H-13. Sobre la base de estas observaciones es evidente que el espiroepóxido posee orientación a. A tenor de lo anteriormente expuesto, se identificó este derivado como el 9(11) a, 16(17) a-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]. 156

1 Figura 15B: Espectro de RMN-H (CDC13, 400 MHz), del 9(11)a., 16(17)a.-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

17

H·14 H·18

H-21 _Vjl~~0JJ~~Ll_ ·-···· --·r ~ · ..... · --,----..-. ~- --,---- - ·~ ·· -··T·-· -··-· ~-· ·· -- ¡-·····-----~ · ···---r··· ---.. ------1······-· Me 2 ~ 2 G 1.8 t.fi 1 4 l.l 1.0 H-18

H-17 H-11

r··-·.,·······,.- ·-···1· ···-·y·-·---.···-·-T-···-,.·-··-· T· ·-T··-·r---r··--r·-· ····¡·······r· ·-- ·1· ·· ·· .. ,...... ··r·· ·· ··· ·r· ·· ····r · · .. , .. ·· ·· ·-,··-·..,--~--1· ·-· .. ,...... -.,.---,.-···-r····-r----T----·r .. --r--· ·· ,.. ·· ·-- ppR 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0

Tabla 15B: Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-H1

(CDC13 , 400 MHz) del 9(11)a., 16(17)a.-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

H H-5 H-11 H-13 H-14exo H-15¡3 H-17 H-18 H-20 H-21

8 1,73 3,05 1,54 . =1,46 2,48 2,79 y 2,84 1,92 0,65 3,62

m d d t m d anch. D S S S

J(Hz) =10 ::4 ::6 - =15 ::4,5 - -- 157

13 Figura 15C: Espectro de RMN-C (CDCI3 , 100 MHz), del 9(11)a., 16(17)a.-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

1 IC-19 1 12 ! !! 13 2~ 0 ,.. 16 17 1 ~ ,,_ 14= •,,,_a 1 4 IIJ '111 IIAfliJ'l; 1 8)\ ... • ,,iF ·C-21 2 • 9 ••• o o 8 3 15 4 5 6

18 COOCH3 C-18 19 21 C-20

C-13 _, .... lol ...... _ oo. l.1 T ''1 .. ,

C-17 C-1 C-12 C-2 C-5 C-7 C-11 C-15 C-13+14

C-4 C-6 C-3 C-8

r----,r-.. --...... --¡-..--·-r-----r- .. ·--...... -,.. --.. -----r--...... ------·----·.---,---- PPil 50 <15 40 35 30 25 20 15

Tabla 15C: Desplazamientos Químicos (B) en el Espectro de RMN-C13

(CDCI3 , 100 MHz), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

e C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-7 C-8 C-9 C-10 C-11 o 39,50 19,81 37,87 44,25 48,69 19,02 31,75 43,39 69,83 38,04 53,68

Tipo >CH2 >CH2 >CH2 >C< >CH >CH2 >CHz >C< 0-C< >C< 0-C-H Valores e C-12 C-13 C-14 C-15 C-16 C-17 C-18 C-19 C-20 C-21 deli, tomando alTMS o 29,07 38,87 38,89 45,61 68,98 50,64 28,55 177,86 14,95 51,31 como referenci a interna Tipo >CH2 >CH >CH2 >CH2 0-C< O-CH2 -CH3 0-C=O -CH3 -OCH3 158

1 Figura 15E: Espectro H\H ·COSY (CDCI3), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

H-21 H·18 H-20

l. O

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

PPII

IIPfll 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0

Correlaciones l{lfHl más Destacadas 12 17

3 159

/, H-17 @ 50,64/ 1 1!: 2,79 (d) 8,87 68 98 @ 1!: 2,84 (d) @' ~ J=4,5Hz

Gl 19,81

H COOC 3 @ @ 51,31 177,86

Figura 15F: Espectro HMQC (CDC13), del 9(11)a., 16(17)a.-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

C-20

C-6 C-2

C-18 C-12 30

C-3 C-13 -14 40 C-1

C-15 C-5 5 \i C-21 50 C-17

C-11 ppo ---···· ~ ...... J

pp~ 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 C.5 160

Figura 15G: Espectro HMBC (CDC13), del 9(11)a, 16(17)a.-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo (15]

H-15 H-14 !. . 1 12 H-12 n.?n-5 ~ H¡li rl·lU • 17 ~~~W~~zy~~~ C-20 ¡-·-·-·----¡-·· . r·l 2 --=..:"---~ C-6 3 C·Z

C·18 C·12 -7 Correlaciones que C-3 Determinan la Posición del Grupo Carbometoxi

·11

60

C-16 ,. C-9

"

··-···- ---- ·······----,e---········-· ····-----n Correlaciones que Detemúnan la Posición ~~~~ - ~ ~ _12JH_1_1-t----t---t-! JO del Grupo Epóxido 9(11) C-7 C·3 1 oCl /Hll Ct3tHt7 C13/H15 ~ ~~c.1 ~c~-e~~M-~ 010______-~ ¡ -.a /~ :-.:-:.~c;-~;c~--s~;;;;;;;;;~ __ ~ t~ -~' ~ ~ C·21 Art ¡ \_;•ll &1 .:17/1115 1 1 ¡ 11-+----' 1

1 Correlaciones que C16/~17 Cg/lllS Determinan la Posición 6 del Grupo Epóxido 16(17) ---.:=;.~::;-~=~ t-I-...-. __ - ____+- ___c--~-~11~ @~~--- ·--·- --=- ..... ~ ...... L1~~L _J ~--~ ..... J.... --'----'---'.··¡ __ -~- l.... b>.J; ___:·:±l t... •... ,... , ....•• ~...,.....~....,-.-~ ~,---~...... -~_,-~-.-..,.. 1XN1 ~ Q 2.~ 2 O 1.!1 ... 161

Figura 15H: Espectro NOESY (CDCI3),del 9(11)a., 16(17)a.-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [15]

lX 2() 1

.5

t.O

1.5

2.0

2.5

3.0

PP'I

PP~ 2.5 2.0 1.5 t.O 0.5

Efectos NOE más Significativos

12 17

2

3 162

9(11) a, 16(17) (3-DIEPOXI-ENT-I(AURAN-19-0ATO DE METILO [16]

El producto minoritario obtenido en la epoxidación del Éster Metílico del Ácido Grandiflorénico [12] fue también uu aceite incoloro, que se purificó por cromatografía preparativa. Su fórmula molecular, C21H300 4 , determinada al analizar sus espectros de R11N-H1 (Fig. 16B; Tabla 16B) y RMN-C 13 (Fig. 16C; Tabla 16C), indica que se trata de un isómero del diepóxido [15], anteriormente descrito. Al analizar más detalladamente sus datos espectrales, se confirmó esta aseveración. Así pues: 1. · Su espectro IR (Fig. 16A; Tabla 16A), no muestra bandas de hidroxilos ni de dobles enlaces, pero presenta absorciones características de ésteres [vmax: 1.718 cm·l (C=O) y Vmax: 1.240 y 1.169 cm·l (C-0)]. 2. Su espectro de de RMN-H1 exhibe un doblete a o: 3,10 U= 4Hz) (H-11), asignable a un protón epoxídico. Este doblete, según se desprende del espectro H\H1-COSY (Fig. 16E), se acopla a sólo uno de los hidrógenos de un metileno adyacente (H-12) y también se acopla a través de cuatro enlace al hidrógeno de un metino (H-13). A campos más altos (o: 2,78 y o: 2,83) aparecen un par de dobletes U = 4,5 Hz), atribuibles a los hidrógenos (H-17B y H-17 A) del metileno de un espiroepóxido. También se distinguen en este espectro tres singuletes, dos de ellos asignables a metilos terciarios [o: 1,86 (H-18) y o: 0,65 (H-20)] y el tercero, típico del metoxilo de un grupo carbometoxi [o: 3,62 (H-21)]. 3. Su espectro de RMN-H13 confirma la presencia de un éster metílico

[o: 177,93 (-0-C=O; C-19) y o: 51,28 (-0-CH3; C-21)], de un epóxido trisustuido [o: 69,36 (-0-C<; C-9) y o: 54,15 (-0-C-H; C-11)] y de otro disustituido [o: 66,18 (-0-C<; C-16) y o: 54,88 (-0-C-H; C-11)]. 4. El espectro HMBC (Fig. 16G) permite establecer sin ambigüedad alguna, la posición de ambos epóxidos. En efecto, la secuencia de correlaciones en el anillo C: H-13+-+C-11+-+H-12+-+C-9+-+H-11+-+ C-12, y las correlaciones adicionales de C-9 con H-15 y H-20, determinan la posición del epóxido trisustituido entre C-9 y C-11. Por otro lado, la existencia de cruces entre el pico del C-16 y las señales atribuidas a H-12, H-13, H-14, H-15 y H-17, y también las correlaciones C-13 +-+ H-17; C-15 +-+ H-17 y C-17 +-+ H-15, indican que el espiroepóxido está situado entre C-16 y C-17. Los datos anteriores indican que el compuesto en estudio posee los anillos oxiránicos en las mismas posiciones que el derivado [15]. En consecuencia la diferencia entre estos, debe estar en la estereoquímica de uno o de ambos epóxidos. 163

El espectro NOESY (Fig. 16H) muestra que, en este caso, el epóxido situado entre C-9 y C-11, posee también una disposición a, dado que H-11 muestra NOE con H-laec., H-1J3ax., H-12J3ax. y H-20. Es entonces obvio que la diferencia debe estar en la estereoquímica del espiroepóxido, el cual debe poseer orientación p. Esto quedó iuera de toc.la duda al observdr que H-17A (endo) presenta un efectu NO.E sólo con H-15a (exo) debido a que la orientación J3 del epóxido aleja al H-15J3 (endo) y al H-14 exo. Como es lógico, el H-17B (exo) presenta NOE sólo con H-13. Por último, otra evidencia a favor de la orientación J3 de este epóxido es el hecho de que la señal del H-15J3, en el espectro de RMN-~\ aparece a campos más altos (8: 1,96), que en el caso de su estereoisómero [15], para el cual H-15J3 resuena a 8: 2,48 (Tabla 15C). En conclusión, los datos anteriormente expuestos permiten caracterizar a este otro derivado como el 9(11)a, 16(17)J3-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]. El bajo rendimiento con que se obtiene este isómero en la reacción, apoya esta conclusión, dado que la epoxidación del metileno exocíclico de [12], por la cara J3, presenta un mayor impedimento estérico.

Figura 16A: Espectro Infrarrojo (film), del 9(11)a., 16(17)~-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16)

JM,O

~

17

.,_ 2.800 CH " 2.942 co Q ~o 1.718 1.169 '•'+---....------.------___,...." )ll)•• lOU ..... 1,.. 1000

Tabla 16A: Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del 9(11)a, 16(17)~-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

Vmax. (cm-1) 2.942 2.860 1.718 1.240 1.169 Asignación C-H C-H C=O C-0 C-0 164

1 Figura 16B: Espectro de RMN-H (CDCl3 , 400 MHz), del 9(11)a., 16(17)J3-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

17

H-20

.-.-·---,----··--· ... -· ·· ... ,... ··· ···r··--- ··'!-·····--.-·-··--· r ·- -····r ······ ···r··--· -..-·-··r -·--·- H-21 :tr.• 2.2 2.0 :.11 1.6 t... 1' 1 ~ H-18

H-17 H-11

T ···--,----T··-··"T-··· ·-r--'"Y ·····-y··--·y· .. ··-r·"'"'"r'··~-r .•••.•• 1.. ·~-····---.,-----.,-··-·r--¡··--.,··---r··---"-·-··, ... -....T ...... ,...... 'f-·-~·-.,.-·-·r--··-r······r---...--r·A···- ppm 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0

Tabla 16B: Desplazamientos Químicos (B) en el Espectro de RMN-H1

(CDCI3 , 400 MHz) del 9(11)cx., 16(17)J3-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

H H-5 H-11 H-13 H-14exo H-15f3 H-17 H-18 H-20 H-21

() 1,78 3,10 1,68 =1,24 1,96 2,78 y 2,83 1,86 0,65 3,62

m d d t m d anch. D S S S

J(Hz) =10 ::4 ::6 - =15 ::4,5 - - - 165

13 Figura 16C: Espectro de RMN-C (CDCI3, 100 MHz)s del 9(11)a.) 16(17)P-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

1 12 o J..a. 13 2~ o•·· 17 1 ~ ''· 14~ 16 C-21 ~ 10 9 8 ••••• C-18 15 3 4 5 7 :. 6

18 t:oocH3 ·11 19 21

C-13

··~ JT- ., .... " l C-14 e-3

C-5 C-12 C-15 C-1 C-7 C-4 C-6 C-2 C-8 C-20

J:r---y--~-,.~~"""1""'--r' ppm lJ l. lt l ·- -·--· ' ······-.,---- ~ 50 4!\ 40 "1'i ·•n ;¡~ 'n '"

Tabla 16C: Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-C13

(CDC13, 100 MHz), del9(11)a, 16(17)~-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

e C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-7 C-8 C-9 C-10 C-11 S 39,23 19,84 37,83 44,19 48,69 19,10 32,15 42,32 69,36 38,09 54,15

Tipo >CH2 >CH2 >CH2 >C< >CH >CH2 >CHz >C< 0-C< >C< -0-C-H Valores e C-12 C-13 C-14 C-15 C-16 C-17 C-18 C-19 C-20 C-21 de a, tomando alTMS S 26,82 36,26 39,57 46,19 66,18 54,88 29,12 177,93 14,81 51,28 como referencia interna Tipo >CH2 >CH >CH_.....__2 >CH 2 o~c< O-CH2 -CH3 0-C=O -CH3 -OCH3 166

1 1 Figura 16E: Espectro H ,H -COSY (CDCI3), del 9(11)a, 16(17)p-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

!.0

1.5

2.0

2.5

3.0

o 3.5 .rtiJ) .o·

ppm 3.5 . 3.0 2.5 2.0 1.5 t. O

Correlaciones IJ1/H1 más Destacadas

17

2 167

H-17 a: 2,78(d) li: 2,83(d) J=4,SHz

Q) 19,84

H3COOC ® @ 51,28 177,93

Figura 16F: Espectro HMQC (CDC13), del 9(11)a, 16(17)13-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

H-20

~-~·" ··- C-20 20t'..

.,__C-2 " !:'\ ?.0 C-6 ··~,'7 L2- ~ 1 12 C-12 ~~~ Ja,1~ 1 L·1H 30 ~7-oo ~ C-7 C:!L.., 13(6) C-3 o (§) a--~D C-1 ~1·-((] hlf":: C-14 >;;;;¡ """ ~o L-14 ___j r-15 , r.-15 1 ! ~ ~ .. ~ ~ @5 C-21 50 11 l :~· 17 ' C-11 -----=-C-17 l. 21 1 OPI o o . ··~····-··

ppm 3.5 3.0 2.5 ?..O 1.5 1.0 168

Figura 16G: EspPctro HMBC (CDCI3), del 9(11)a, 16(17)~-Diepoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [16]

1 11

e -20 17 e-6 e-2 e-12 e-18 ....; C-7 C-13

40 C-R e-4 e -5 e-21 50 e-11 e-17

60

C-16 9/.H20

10

C-9 PP~

PP• 1.75 1.50 1.25 l.OO 0.75 0.50

Correlaciones que Correlaciones que Correlaciones que Determinan la Posición Determinan la Posición Determinan la Posición del Grupo Carbometoxi del Grupo Epóxido 9(11) del Grupo Epóxido 16(17)

1 ~1 ~ (0-8 ~ ~ 8-8 ~ (0-§1 169

Figura 16H: Espectro NOESY (CDCI3), del 9(11)a, 16(17)p-Diepoxi-ent-Kauran-19~oato de Metilo (16]

18 20

.5

11/20

17A!ISa ~ .....,..

ppm

2.5 2.0 1.5 t. O 0.5

Efectos NOE ~ más Significativos

17

3 170

PARTE EXPERIMENTAL

1. TÉCNICAS GENERALES APLICADAS 1.1. Cromatografia en Columna: Para la cromatografía en columna (húmeda, seca y al vacío) se utilizó gel de sílice 60 (63-200 J..tm; 70-230 mesh) de lH casa Merck. Las columnas se desarrollaron siguiendo técnicas convencionales descritas en la literatura (Coll & Bo_wden, 1986). 1.2. Cromatografía en Capa Fina: Para la cromatografía de capa fina analítica se utilizaron placas de gel sílice sobre soporte de vidrio de la casa Merck, HF 254 (0,25 mm de espesor). Las placas se desarrollaron en los sistemas de eluyentes adecuados y se revelaron rociándolas con una mezcla de "oleum" [AcOH-H20-H2S04 (20:4:1) v/v] y luego calentándolas en corriente de aire a 100° C por varios minutos, hasta que aparecieron las manchas. 1.3. Cromatografía Preparativa: Para la cromatografía preparativa se utilizó gel de sílice fluorescente (HF 254) sobre placas de vidrio, con un espesor de 0,5 mm. Las placas se prepararon suspendiendo la gel de sílice en agua [relación 1:2 (p/p)], y luego extendiéndola sobre las placas de vidrio. Posteriormente se activaron en estufa (120° C 1 24 horas). 1.4. Puntos de Fusión: Los puntos de fusión fueron determinados en ún aparato Fisher-Johns dotado de plancha de calentamiento para el rango 20-300 °C, y están sin corregir. 1.5. Rotaciones Específicas: Las rotaciones específicas se tomaron en un equipo del tipo Polarímetro Dr. Steeg & Reuter G.m.b. H. de 60 Hz. 1.6. Espectros de Infrarrojo: Se realizaron en un espectrofotómetro infrarrojo-FT Perkin Elmer. Modelo FT-1725X, en pastillas de KBr, o film sobre celdas de NaCl.

1 13 1.7. Espectros de RMN- H y de RMN-C : Se corrieron en un equipo de Resonancia Magnética Nuclear Bruker-Avance DRX 400, a 400 y 100 MHz, respectivamente. Se utilizaron solventes deuterados. 1.8. Espectros de Masas: Se midieron en un Espectrofotómetro Hewlett Packard, modelo 5930A, a un potencial de 70 eV. 171

2. RECOLECCIÓN, SECADO Y PREPARACIÓN DEL MATERIAL VEGETAL. El duramen (núcleo lignificado en el cual se insertan las hojas) de la planta, se colectó en el mes de julio de 2000, a partir de ejemplares adultos de frailejón (Espelctia schultzii Wedd.) recogidos PTI Gcwiclia (Munidpio R;:mgc1, Estado MP.rida), 8. una altitud de a}Jruxhha.uamení.e 3.100 m. s. n. 111. La determinación botánica de la especie fue confirmada por el Ing. For. Juan Carmona Arzola. Un Voucher Specimen U. M. Amaro, N° 1642) se encuentra depositado en el Herbario MERF de la Facultad de Farmacia. El material vegetal (duramen) de la planta, se secó a la temperatura ambiente y a la sombra durante dos semanas. Posteriormente se limpió y se procedió a molerlo finamente en un molino eléctrico.

3. EXTRACCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL. El material vegetal molido (:: 3,750 g), se extrajo hasta agotamiento durante varios días, con acetona, a la temperatura ambiente. Posteriormente, dicho material se secó bajo campana y se extrajo con metanol caliente en forma continua en un sohxlet. Las disoluciones procedentes de ambas extracciones fueron filtradas y luego concentradas al vacío en un rotavapor a temperatura no mayor de 40° C. Los extractos obtenidos se mantuvieron por varios días en campana de vacío para asegurar la completa evaporación de los solventes. Luego se pesaron y se conservaron en recipientes de vidrio ámbar, en nevera a 4 °C, hasta el inicio de los procesos de separación. El extracto de acetona pesó 135 g. y el de metanol 118 g.

4. SEPARACIÓN CRO:MATCGRÍ.FICA DE LOS PRODUCTOS. El extracto acetónico se redisolvió en· acetona, se le añadió gel de sílice, se homogenizó, y luego, se eliminó el solvente en un rotavapor. La gel húmeda se extendió en una bandeja, y se mantuvo a la temperatura ambiente bajo campana, durante 24 horas, hasta que se eliminó por completo el solvente. La mezcla seca se homogeneizó en un mortero y se pasó a través de un tamiz fino, quedando lista como cabeza para la cromatografía en columna. La cabeza se colocó en la parte superior de una columna al vacío, la cual se preparó de acuerdo a la técnica de Coll & Bowden (1986). Dicha columna se eluyó con hexanos, mezclas hexanos-acetato de etilo en orden de polaridad creciente, y finalmente acetato de etilo 100% y metanol 100%. Se recogieron fracciones de 1 litro, las cuales se concentraron al vacío, se analizaron por capa fina y se reunieron adecuadamente. Los resultados de esta cromatografía general se presentan en la Tabla 17. 172

Tabla 17: Resultados de la Cromatografía del Extracto en Acetona.

Reuniones Fracciones Masa (g) Eluyente Productos

A 1-4 6,50 Hcxano.s 100% ceras B 5-8 8,20 Hexanos-AcOEt (19:1) mezclas de aceites e 9-12 23,15 Hexanos-AcOEt (9:1) mezclas: [1], [2] D 13-23 18,50 Hexanos-AcOEt (4:1) mezclas: [3],[5],[6],[7] Hexanos-AcOEt (4:1), E 24-32 14,25 mezclas complejas: Hexanos-AcOEt (7:3) [3], [4],[5],[7] F 33-37 12,00 Hexanos- AcOEt (7:3) mezclas: [4], [5] G 38-42 12,50 Hexanos- AcOEt (3 :2) mezclas de ácidos H 43-47 8,30 Hexanos- AcOEt (1:1) mezclas complejas I 48-52 4,15 Hexanos- AcOEt (1:3) mezclas complejas J 53 22,13 AcOEt 100% mezcla de sustancias

4.1. Aislamiento y Purificación de los Productos [1] y [2]. El residuo aceitoso obtenido (:: 23,15 g) al evaporar a sequedad la reunión e (fracciones: 9-12), fue recromatografiado en columna de gel de sílice, usando como solvente mezclas hexanos-eH2el2 en orden de polaridad creciente hasta la proporción 7:3. Las fracciones obtenidas fueron reunidas de acuerdo a su análisis por TLe, juntándose en seis reuniones (e-1~e-6) (Tabla 18).

Tabla 18: Resultados de la Cromatografía de la Reunión C.

Reuniones Fracciones Masa (g) Eluyente Productos

e-1 1-4 1,20 Hexanos-eH2el2 (9:1) mezclas de aceites

e-2 5-16 6,80 Hexanos-eH2el2 ( 4:1) producto [2] impuro

e-3 17-19 5,20 Hexanos-eH2el2 ( 4:1) productos [2] y [3]

e-4 20-32 3,30 Hexanos-CH2Cl2 (7:3) productos [2] y [3]

e-5 33-39 3,10 Hexanos-CH2Cl 2 (7:3) producto [3] impuro

C-6 40-48 1,20 Hexanos-CH2Cl2 (7:3) mezclas 173

De la reunión e-2 precipitó un sólido blanco el cual fue repurificado por repetidos procesos de rec1lstalización en acetona, proporcionando agujas blancas del compuesto [2]. Las subfracciones C-3 y C-4, contenían el producto (2] mezclado con otro producto mayoritario [1], el cual pudo separarse por cristalización fraccionada en metanol. De la subfracción C-5 también se logró ~eparar el producto [1] por recristalización en metanol.

Fórmula Molecular: e 20H32Ü Masa Molecular: 288 glmol Punto de Fusión: 140-141° e (metanol)

Rotación Específica: [a]n: -79° (e, 0,45; eHel3) Espectro IR: (KBr), Fig. lA; Tabla lA. 1 Espectro RMN-H : (eDel3), Fig. lB; Tabla lB. 13 Espectro RMN-e : (eDel3), Fig. 1e; Tabla 1e. Espectro de Masas (EM): (lE, 70 eV), Fig. lD. 1 Espectro H\ H -eOSY: (eDel3), Fig. lE.

Espectro HMQe: (eDel3), Fig. lF.

Espectro HMBe: (eDel3), Fig. lG.

ENT-KAUR-16-EN-19-AL [2]

Fórmula Molecular: C20H30Ü Masa Molecular: 286 glmol Punto de Fusión: 112-114° e (acetona)

Rotación Específica: [a]n: -97° (e, 1,07; eHel3) Espectro IR: (KBr), Fig. 2A; Tabla 2A.

1 Espectro RMN-H : (eDel3), Fig. 2B; Tabla 2B. 13 Espectro RMN-e : (CDel3), Fig. ze; Tabla 2e. Espectro de Masas (EM): (IE, 70 eV), Fig. 2D .

1 . Espectro H\ H -eOSY: (eDel3), Fig. 2E.

Espectro HMQe: (eDC1 3), Fig. 2F.

Espectro HMBe: (eDel3), Fig. 2G. 174

4.2. Aislamiento y Purificación de los Productos [3], [5], [6] y [7].

La reunión D (:: 18,50 g) de la cromatografía general, fue recromatografiada en columna de gel de sílice, usando como eluyente mezclas hexanos-CH2Cl 2 en orden de polaridad creciente hasta la proporción 1:1. Las íracciuntls fueron analizadas por TLC y adecuadamente reunidas, en ocho subfracciones (D-1~D-8), arrojando los resultados indicados en la Tabla 19.

Tabla 19: Resultados de la Cromatografía de la Reunión D.

Reuniones Fracciones Masa (g) Eluyente Productos

D-1 1-6 0,85 Hexanos-CH2Cl2 (9:1) producto [3] impuro

D-2 7-14 1,50 Hexanos-CH2Cl2 (4:1) producto [3] impuro

D-3 15-22 1,85 Hexanos-CH2Cl2 ( 4:1) productos [3] y [6]

D-4 23-30 2,25 Hexanos-CH2Cl2 (7:3) productos [3] y [5]

D-5 31-35 3,20 Hexanos-CH2Cl2 (7:3) producto [5] impuro

D-6 36-42 4,50 Hexanos-CH2Cl2 (3:2) productos [5] y [7]

D-7 43-47 1,30 Hexanos-CH2Cl2 (3 :2) productos [5] y [7]

D-8 48-52 1,40 Hexanos-CH2Cl2 (1:1) mezclas

Las reuniones D-1 (:: 0,85 g) y D-2 (:: 1,50 g) fueron inducidas a cristalizar obteniéndose un sólido blanco muy impuro, cuya pureza no pudo mejorarse por recristalización; en consecuencia, se pasó a través de una columna de gel de sílice eluida en mezclas hexanos-acetato de etilo 9:1, y posteriormente una pequeña porción de este sólido se purificó por cromatografía preparativa sobre placas de gel de sílice eluídas con hexanos-acetato de etilo 19:1 (doble recorrido). El producto así obtenido [3], recristalizó de metanol en agujas blancas.

La reunión D-3 (:: 1,85 g) fue disuelta en éter etílico y se le burbujeó CH2N2 hasta completa saturación. Al eliminar el solvente, se obtuvo un residuo, cuya capa fina revelaba la presencia mayoritaria de dos productos que no dejaban cola en el cromatograma. Una porción de este residuo fue purificada por cromatografía preparativa en placas de gel de sílice, eluidas en múltiple recorrido con la mezcla hexanos-acetato de etilo 19:1; de esta manera se obtuvo el éster [6] puro, como un aceite (:: 30 mg). El resto del residuo fue cristalizado de metanol, dando el éster [8]. 175

La reunión D-5 (::: 3,20 g) mostraba en capa fina una mancha mayoritaria. Por repetidos procesos de cristalización en mezclas hexanos-acetato de etilo se logró purificar el compuesto [5]. De la reunión D-4 se logró también separar este mismo compuesto, por cristalización fraccionada en metano!. Las subfracciones D-6 y U-7 fueron reunidas (::: 5,80 g) v recrornatografiadas en columna de gel de sílice (hexanos-acetato de etilo 4:1). De esta manera se separó un sólido blanco [7], que fue purificado por cromatografía preparativa en placas de gel de sílice eluidas en hexanos-CH2Cl 2 1:1 y posterior recristalización en metanol.

ÁCIDO ENT-KAUR-16-EN-19-ÓICO [3]

Fórmula Molecular: C20H30Ü 2 Masa Molecular: 302 glmol Punto de Fusión: 178-180°C (metanol)

Rotación Específica: [a]0 : -112°. (e, 0,50; CHC13) Espectro IR: (KBr), Fig. 3A; Tabla 3A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 3B; Tabla 3B. 13 Espectro RMN-C : (CDCl3), Fig. 3C; Tabla 3C. Espectro de Masas (EM): (IE, 70 eV), Fig. 3D. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDC1 3), Fig. 3E.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 3F.

Espectro HMBC: (CDCl3), Fig. 3G.

ÁCIDO 15a.-ACETOXI- ENT-KAUR-16-EN-19-ÓICO [5]

Fórmula Molecular: C22H320 4 Masa Molecular: 360 glmol Punto de Fusión: 172-173°C (hexanos-acetato de etilo)

Rotación Específica: [a.] 0 : -83° (e, 0,72; CHC13) Espectro IR: (KBr), Fig. 5A; Tabla 5A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 5B; Tabla 5B. 13 Espectro RMN-C : (CDCl 3), Fig. 5C-1 y 5C-2; Tabla 5C. Espectro de Masas (EM): (IE, 70 eV), Fig. 5D. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDC13), Fig. 5E.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 5F.

Espectro HMBC: (CDC1 3), Fig. 5G.

Espectro NOESY: (CDC13), Fig. 5H. 176

16a,17-EPOXI- ENT-KAURAN-19-0ATO DE METILO [6]

Fórmula Molecular: C21H320 3 Masa Molecular: 332 g/mol Punto de Fusión: Aceite

Rotación Específica: [a]n: -93° (e, 0,48; CHCl3) Espectro IR: (film), Fig. 6A; Tabla 6A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 6B; Tabla 6B. 13 Espec'tro RMN-C : (CDCl3), Fig. 6C; Tabla 6C. Espectro de Masas (EM): (IE, 70 eV), Fig. 6D. 1 1 Espectro H , H -COSY: (CDCl 3), Fig. 6E.

Espectro HMQC: (CDC1 3), Fig. 6F.

Espectro HMBC: (CDC13), Fig. 6G.

ÁCIDO ENT-KAUR-9(11),16-DIEN-19-ÓICO [7]

Fórmula Molecular: C20H28Ü 2 Masa Molecular: 300 g/mol Punto de Fusión: 159-161 oc (metanol)

Rotación Específica: [a]n: -34° (e, 1,22; CHC13) Espectro IR: (KBr), Fig. 7A; Tabla 7A. 1 Espectro RMN-H : (CDC13), Fig. 7B; Tabla 7B. 13 Espectro RMN-C : (CDC13), Fig. 7C-1 y 7C-2; Tabla 7C. Espectro de Masas (E:M): (IE, 70 e V), Fig. 7D. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDCl 3), Fig. 7E.

Espectro HMQC: (CDCl 3), Fig. 7F.

Espectro HMBC: (CDCl3), Fig. 7G.

4.3. Aislamiento y Purificación del Producto [4].

De la reunión F (:: 12,0 g) precipitó un sólido cristalino blanco, el cual se revelaba en capa fina como una mancha mayoritaria alargada, típica de un ácido carboxílico. El cromatograma reveló también pequeñas cantidades de otro compuesto menos polar, identificado como el ácido [5]. El producto mayoritario [4] se purificó por repetidas cristalizaciones en mezclas hexanos-acetato de etilo, proporcionando agujas blancas. 177

ÁCIDO 15a~HIDROXI-ENT-KAUR-16-EN-19-ÓICO [4)

Fórmula Molecular: C20H30Ü 3 Masa Molecular: 318 glmol Punto de fusión: 227-29°C (hexanos··acelato de etilol)

Rotación Específica: [a]n: -129° (e, 0,43; CHCl3) Espectro IR: (KBr), Fig. 4A; Tabla 4A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 4B; Tabla 4B. 13 Espectro RMN-C : (CDCl3), Fig. 4C; Tabla 4C. Espectro de Masas (EM): (lE, 70 e V), Fig. 4D. 1 Espectro Hl, H -COSY: (CDCl3), Fig. 4E.

Espectro HMQC: (CDCl3), Fig. 4F.

Espectro HMBC: (CDCl3), Fig. 4G.

5. METILACIÓN DEL ÁCIDO ENT-KAUR-16-EN-19-ÓICO [3] La reunión D-3 (:: 1,85 g), obtenida al recromatografiar la fracción D de la cromatografía general fue disuelta en éter etílico y se saturó con CH2N2 generado "in situ" al tratar nitrosometilurea con KOH. La eliminación del solvente, produjo un residuo que fue purificado por cromatografía preparativa en placas de gel de sílice, eluidas con hexanos-acetato de etilo 19:1 (múltiples recorridos); Se logró aislar de esta manera el éster [8] (:: 980 mg) y una pequeña cantidad del éster [6] (:: 30 mg). El éster [8] fue repurificado por cristalización en metano!.

ENT-KAUR-16-EN-19-0ATO DE METILO [8)

Fórmula Molecular: C21H32Ü 2 Masa Molecular: 316 glmol Punto de Fusión: 71-74 °C (metanol a 4° C)

Rotación Específica: [a]n: -106° (e, 0,52; CHCl3) Espectro IR: (KBr), Fig. BA; Tabla 8A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 8B; Tabla BB. 13 Espectro RMN-C : (CDCl3), Fig. BC; Tabla 8C. Espectro de Masas (EM): (lE, 70 e V), Fig. 8D. 1 Espectro Hl, H -COSY: (CDCl3), Fig. BE.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. BF.

Espectro HMHC: (CDCl3), Fig. BG. 178

6. REACCIÓN DEL ENT-KAUR-16-EN-19-0ATO DE METILO (8] CON KMn04 EN ACETONA A= 120 mg de ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8], disueltos en acetona a la temperatura ambiente, se le añadieron 6,32 mg (0,4 moles) de IOAn04 y la solución fue mantenida en agitación constante durante 12 horas; durante este tiempo la !'eacción fue monitoreada par ~:1p:1 fina, observándose lü cvoludón de la misma hasta que se consumió por completo el producto de partida (:: 10 horas). Una vez completada la reacción se filtró la solución sobre carbón activo y se evaporó el solvente, obteniéndose un residuo que se purificó por cromatografía preparativa en placas de gel de sílice eluidas en hexanos-acetato de etilo 19:1. El derivado (9] cristalizó de mezclas hexanos-acetato de etilo en escamas blancas.

ENT-16,17-NOR-KAURAN-16-0NA-19-0ATO DE METILO [9]

Fórmula Molecular: C20H30Ü 3 Masa Molecular: 318 glmol Punto de Fusión: 144-145°C (hexanos-acetato de etilo)

Rotación Específica: [a]n: -66° (e, 0,61; CHCl3) Espectro IR: (I

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 9F.

Espectro HMBC: (CDC13), Fig. 9G.

7. REACCIÓN DELENT-KAUR-16-EN-19-0ATODEMETILO (8] CONREACIVODE]ONES A una solución del éster (8] (:: 80 mg) en acetona, mantenida a la 25° C y con agitación constante, se le fue añadiendo Reactivo de Jones (K2Cr20¡/H2S04), gota a gota, hasta que la solución conservó el color naranja del reactivo. Luego se dejó reposar durante una hora y transcurrido este tiempo se diluyó con metano! hasta que desapareció el color naranja. La evaporación del solvente dejó un residuo que mostraba en capa fina una mancha mayoritaria, cuyo Rr era igual al del producto (9] obtenido en la reacción de [8] con I

8. REACCIÓN DEL ENT-KA.UR-16-EN-19-0ATO DE METILO (8] CON TETRAACETATO DE PLOMO A una solución de 400 mg del éster (8] en benceno se le añadió igual cantidad de Pb(CH3-C00)4 y 0,5 ml de ácido acético. La solución se mantuvo a reflujo durante 35 minutos, monitoreándola por TLC a intervalos de 10 minutos. Al cabo de media hora se observó la desaparición de la mancha del producto de partida y la aparición de dos nuevas manchas de similar Rr· El residuo obtenido (:: 320 mg), después de eliminar el solvente se cromatografió en columna de gel de sílice usando como solvente acetato de etilo. Los dos productos mayoritarios, fueron purificados por cromatografía preparativa sobre placas de gel de sílice eluidas con hexanos-acetato de etilo 49:1 (once recorridos). De esta manera se obtuvieron 88 mg de [10] (polvo blanco amorfo) y 61 mg de [11] (cristales blancos).

15a-ACETOXI-ENT-KA.UR-16-EN-19-0ATO DE METILO (10]

Fórmula Molecular: C23H34Ü 4 Masa Molecular: 3 74 g/ mol Espectro IR: (KBr), Fig. lOA; Tabla lOA. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. lOB; Tabla lOB. 13 Espectro RMN-C : (CDCl 3), Fig. lOC-1 y lOC-2; Tabla lOC. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDCl3), Fig. lOE.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. lOF.

Espectro HMBC: (CDC1 3), Fig. lOG.

17-ACETOXI- ENT-KA.UR-15-EN-19-0ATO DE METILO [11]

Fórmula Molecular: C23H34Ü 4 Masa Molecular: 3 74 g/ mol Punto de Fusión: 120-122 °C (éter etílico)

Rotación Específica: [a.]o: -83° (e, 0,45; CHCl3) Espectro IR: (KBr), Fig. llA; Tabla llA. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. llB; Tabla 11B. 13 Espectro RMN-C : (CDCl3), Fig. 11C-1 y 11C-2; Tabla 11C. Espectro de Masas (EM): (lE, 70 eV), Fig. llD. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDCl3), Fig. llE.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. llF.

Espectro HMBC: (CDC13), Fig. llG. 180

9. METILACIÓN DEL ÁCIDO ENT-KAUR- 9(11), 16-DIEN-19-ÓICO (7] . 500 mg del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7) fueron disueltos en éter etílico y metilados con CH2N2 siguiendo el procedimiento descrito en la sección 5 (pag. 177). La eliminación del solvente al vacío produjo un residuo f;:: 510 mg), el r:ual fue purWc::~rJn por r.rnmatografía en columna de gel d.e sflice rindie!!d.a U!! aceite (: 480 mg) homogéneo en TLC.

ENT-KAUR-9(11),16-DIEN-19-0ATO DE METILO (12)

Fórmula Molecular: C21H30Ü 2 Masa Molecular: 314 glmol Punto de Fusión: aceite Espectro IR: (film), Fig. 12A; Tabla 12A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 12B; Tabla 12B. 13 Espectro RMN-C : (CDC1 3), Fig. 12C-1 y C-2; Tabla 12C. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDCl3), Fig. 12E.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 12F.

Espectro HMBC: (CDCl3), Fig. 12G.

10. REACCIÓN DELENI'-KAUR-9(11),16-DIEN-19-0ATODEMETILO (12) CONKMn04 160 mg del ent-Kaur-9(11),16-dien-19-oato de Metilo [12), disueltos en acetona a la temperatura ambiente, fueron tratados con KMn04 (8 mg;;:: 0,4 moles), siguiendo el mismo procedimiento descrito en la sección 6 (pag. 178). La reacción se mantuvo por espacio de 18 horas. t;l producto mayoritario fue separado por TLC preparativa sobre placas de gel de sílice eluidas con hexanos-acetato de etilo 9:1.

ENT-16,17-NOR-KAUR-9(11) ·EN-16-0NA-19-0ATO DE METILO (13)

Fórmula Molecular: C20H28Ü 3 Masa Molecular: 314 glmol Punto de Fusión: aceite

Rotación Específica: [a]0 : -73°. (e, 0,55; CHCl3) Espectro IR: (film), Fig. 13A; Tabla 13A. 1 Espectro RMN-H : (CDCl 3), Fig. 13B; Tabla 13B. 13 Espectro RMN-C : (CDC1 3), Fig. 13C-1 y 13C-2; Tabla 13C.

Espectro HMBC: (CDC1 3), Fig. 13G. 181

11. REACCIÓN DEL ENT-KA.UR-9(11),16-DIEN-19-0ATO DE METILO (12] CON ÁCIDO "meta"-CLOROPERBENZOICO (m-CPBA) EN DTCLOR011ETANO. Una disolución en diclorometano compuesta por de 200 mg del éster [12] y 200 mg de m-CPBA (ácido "meta"-cloroperbenzoico) se mantuvo en agitación co!l~taP-te a la temperatU!'e. :tmbiente por espacio de una h.~:::~. La reacción se monitoreó por TLC a intervalos de 10 minutos, observándose que el producto de partida se había consumido totalmente al cabo de 50 minutos, transformándose en una mezcla en la que destacaban tres manchas mayoritarias. La solución se filttó y se evaporó a sequedad dejando un residuo(:: 195 mg), el cual fue cromatografiado en columna seca de polietileno, usando como adsorbente gel de sílice y como eluyente hexanos-acetato de etilo 49:1. Una vez ; concluida la elusión, se cortó la columna de polietileno en seis bandas, cada una de 15 cm de longitud, y el absorbente procedente de de estas bandas fue extraído con acetona utilizando embudos Büchner. Las fracciones fueron analizadas por capa fina, observándose que sólo se había logrado una separación parcial de los tres productos en las bandas intermedias N° 3, N° 4 y N° 5. Los residuos procedentes de estas bandas fueron purificados por TLC preparativa en placas de gel de sílice, eluidas con hexanos-acetato de etilo 19:1. De esta manera se obtuvieron puros los derivados [14] (:: 72 mg), [15] (:: 43 mg), y [16] (::: 15 mg), pero ninguno de ellos se logró cristalizar. En las restantes bandas se observaron manchas de varios productos minoritarios, los cuales no pudieron separarse.

16(17) a-EPOXI-ENT-KAUR-9(11)-EN-19-0ATO DE METILO [14)

Fórmula Molecular: C21H30Ü 3 Masa Molecular: 330 glmol Punto de Fusión: aceite Espectro IR: (film), Fig. 14A; Tabla 14A.

1 Espectro RMN-H : (CDCl 3), Fig. 14B; Tabla 14B.

13 Espectro RMN-C : (CDCl 3), Fig. 14C; Tabla 14C.

1 Espectro H\ H -COSY: (CDC1 3), Fig. 14E.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 14F.

Espectro HMBC: (CDC1 3), Fig. 14G.

Espectro NOESY: (CDC13), Fig. 14H. 182

9(11) a, 16(17) a-DIEPOXI-ENT-KAURAN-19-0ATO DE METILO [15]

Fórmula Molecular: C21H30Ü 4 Masa 11olccular: 316glmol Punto de Fusión: aceite Espectro IR: (film), Fig. 15A; Tabla 15A.

1 Espectro RMN-H : (CDCl3), Fig. 15B; Tabla 15B.

13 Espectro RMN-C : (CDC13), Fig. 15C; Tabla 15C. 1 Espectro H\ H -COSY: (CDCl3), Fig. 15E.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 15F.

Espectro HMBC: (CDC13), Fig. 15G.

Espectro NOESY: (CDC13), Fig. 15H.

9(11) a, 16(17) J3-DIEPOXI-ENT-KAURAN-19-0ATO DE METILO [16]

Fórmula Molecular: C21H30Ü 4 Masa Molecular: 346 glmol Punto de Fusión: aceite Espectro IR: (film), Fig. 16A; Tabla 16A.

1 Espectro RMN-H : (CDC13); Fig. 16B; Tabla 16B.

13 Espectro RMN-C : (CDCl3), Fig. 16C; Tabla 16C.

1 Espectro H\ H -COSY: (CDCl3), Fig. 16E.

Espectro HMQC: (CDC13), Fig. 16F.

Espectro HMBC: (CDC13), Fig. 16G.

Espectro NOESY: (CDC13), Fig. 16H. 183

CONCLUSIONES

1. El estudio de revisión bibliográfica sobre la fitoquímica de los frailejones (especies _l)erleueclentes al género Espeletia "sen:iu lato"), el cual se realiza por primera vez en el presente Trabajo de Grado, demuestra que las especies de este género biosintetizan diversos metabolitos secundarios, pero todas ellas se especializan en la elaboración, en alto rendimiento, de diterpenos de la serie del ent-kaurano. Este hecho, puede tener importantes connotaciones de interés quimiotaxonómico. · 2. A través de los datos recopilados de la literatura científica que se han presentado y discutido en este Trabajo de Grado, se ha puesto en evidencia que los diterpenos de la serie del ent-kaurano poseen una amplia gama de actividades biológicas y/o farmacológicas. Es por ello que los estudios fitoquímicos de las fuentes naturales con capacidad para biosintetizar estos diterpenos, encuentran una justificación relevante en la búsqueda de nuevos metabolitos potencialmente activos. Otro tanto puede decirse de los estudios centrados en la transformación química de estas sustancias, con vistas a obtener derivados que permitan establecer los parámetros que definan y cuantifiquen las relaciones estructura química-actividad biológica de estos diterpenos. · 3. La resina extraída del duramen (núcleo lignificado donde se insertan las hojas), del Frailejón de Octubre (Espeletia schultzii Wedd.), resultó ser una fuente interesante de diterpenos de la serie del ent-Kaurano. En el presente estudio se lograron aislar e identificar siete de estos diterpenos, pero uno de ellos fue aislado como éster metílico. 4. Los diterpenos: ent-Kaur-16-en-19-ol [1] (Kaurenol),· ent-Kaur-16-en-19-al [2] (Kaurenal), Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] (Ácido ent-Kaurenóico), Ácido 15a-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico[4] (Ácido Grandiflorólico), Ácido 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [5] (Ácido 15a-Hidroxigrandiflorólico) y Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7] (Ácido Grandiflorénico), habían sido descritos con anterioridad como sustancias naturales presentes en el género Espeleüa s.l. 5. El Ácido 16a,17-Epoxi- ent -Kauran-19-óico, aislado y purificado como su éster metílico, el16a,17-Epoxi- ent -Kauran-19-óico oato de Metilo [6], no lo hemos encontrado descrito en la literatura, y por consiguiente es un nuevo producto natural. 184

6. El estudio comparativo, mediante técnicas bidimensionales de Resonancia Magnética Nuclear (H\ H1-COSY, HMQC y HMBC), de los compuestos [1], [2], [3], [4], [5], [6] y [7], permitió asignar, sin ambigüedad, todas las señales en sus respectivos espectros de RMN-C 13 y la mayoría de las señales en sus espectros riA RMN-H\ En el caso dP.l ácido [7], habían sido repcrhdce estudios detallados de RMN, pero en el presente trabajo se corrigieron 13 algunas de las asignaciones hechas en su espectro de RMN-C • Estos estudios, realizados por primera vez para los compuestos (1]-[5], pusieron en evidencia la notable utilidad que tienen las técnicas bidimensionales de RMN en la resolución de problemas estructurales. 7. Los Ácidos ent-Kaurénóico [3] y Grandiflorénico [7], convertidos en sus respectivos ésteres metílicos [8] y [12], demostraron ser sustratos adecuados para utilizarlos como materiales de partida en la obtención de compuestos generados mediante reacciones de oxidación del (de los) doble(s) enlace(s), presentes en estos ésteres, con diversos agentes oxidantes. Ello quedó claramente demostrado en los procesos que condujeron a los derivados [9], (10], [11], (13], (15] y (16]. 8. La identificación y/o caracterización estructural de los derivados (10], [11], [13], [15] y [16], pudo hacerse sin dificultad a través de estudios espectrales, en los cuales se puso una vez más de manifiesto la amplia utilidad de las técnicas bidimensionales de RMN, y particularmente la importancia de los espectros NOESY en la determinación de su configuración relativa. 185

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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ÍNDICES

ÍNDICE DE CUADROS

Leyenda Página 1 Diterpenos Aislados de la Espeletia schultzii ...... 18 2 Reacciones de Oxidación del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 93 3 Mecanismo Propuesto para la Reacción del ent-Kaur-16-en-19-oato de

Metilo [8] con Pb(Ac0)4 en Benceno/AcOH ...... 130 4 Reacciones de Oxidación del ent-Kaur-9(11),16-dien-19-oato de Metilo[12] .. 131

ÍNDICE DE ESQUEMAS

No Leyenda Página I Procedimiento Empleado en el Aislamiento, Separación y Purificación de los Diterpenos del ent-Kaurano de la Espeletia schultzii ...... 16 1 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 24 2 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 35 3 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 44 4 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del Ácido 15a.-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [4] ...... 54 5 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [5] ...... · ... 65 6 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del 16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... :. 76 7 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7] ...... 87 8 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del

ent- Kau~·'r -~u-v~.L-.l~-uCI.LU""' ~~ "" -~~~ ·· u.le "fet1'lo1V [8] ,,, •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• ... 9~ 9 Interpretación del Patrón de Fragmentación en el Espectro de Masas del ent-16,17-Nor-Kauran-16-ona-19-oato de Metilo [9] ...... 108 11 Interpretación del Patrón de Fragmer;tación en el Espectro de Masas del 17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en-19-oato de Metilo [11] ...... 125 205

ÍNDICE DE FIGURAS

Leyenda Página 1 Fotografías del Frailejón de Octubre (l:!,'speletia schultzii Wedd.) ...... ,. ... 17 1A Espectro Infrarrojo (KBr), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 19 1 1B Espectro de RMN-H (CDCl 3 , 400 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 21 13 1C Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 22 1D Espectro de Masas (I.E., 70 eV), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ....:...... 23

1 1E Espectro H\H -COSY (CDCl3) del ent-Kaur-16-en-19-ol [!]...... 26

1F Espectro HMQC (CDCl 3), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 27

1G Espectro HMBC (CDCl3), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 28 2A Espectro Infrarrojo (KBr), del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 30

1 2B Espectro de RMN-H (CDCl 3, 400 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 32 13 2C Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 33 2D Espectro de Masas (1. E., 70 eV), del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 34

1 2E Espectro H\H -COSY (CDCl3) del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 36

2F Espectro HMQC (CDC13), del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 37

2G Espectro HMBC (CDCl3), del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 38 3A Espectro Infrarrojo (KBr), del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 40

1 3B Espectro de RMN-H (CDCl 3 , 400 MHz), del Ácido ent-Kaur-16-en-19- óico [3] ...... 41

13 3C Espectro de RMN-C (CDCl 3 , 100 MHz), del Ácido ent-Kaur-16-en-19- óico [3] ...... 42 2D Espectro de Masas (I. E, 70 eV), del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 43

1 1 3E Espectro H ,H -COSY (CDCl 3) del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 45

3F Espectro HMQC (CDCl 3), del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 46

3G Espectro HMBC (CDCl3), del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 47 4A Espectro Infrarrojo (KBr), del Ácido 15a-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-6ico ... 50

1 4B Espectro de RMN-H (CDC13, 400 MHz), del Ácido 15a-Hidroxi-ent- Kaur-16-en-19-óico [4] ...... 51

13 4C Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del Ácido 15a-Hidroxi-ent- Kaur-16-en-19-óico [4] ...... 52 4D Espectro de Masas (I. E., 70 e V), del Ácido 15a-Hidroxi-ent-Kaur-16-en- 1";:¡-o~co -~ Lr4] ...... 53 205

1 4E Espectro .H\H -COSY (CDCl 3) del Ácido 15a.-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19- óico [4] ...... 55

4f Espectro HMQC (CDCl 3), del Ácido 15a.-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico ... 56

4G Espectro HMQC (CDCl 3), del Ácido 15a.-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico ... 57 5A Espectw InfrcilTojo (KBr), del Ácido i5a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19- óico [5] ...... 59

1 5B Espectro de RMN-H (CDCl3, 400 MHz), del Ácido 15a.-Acetoxi-ent- Kaur-16-en-19-óico [5] ...... 61

13 5C-1 Espectro de RMN-C ' (CDCl3, 100 MHz), del Ácido 15a.-Acetoxi-ent- Kaur-16-en-19-óico [5] ...... 62

13 5C-2 Espectro de RMN-C (CDCl 3, 100 MHz), del Ácido 15a.-Acetoxi-ent- Kaur-16-en-19-óico [5] ...... 63 5D Espectro de Masas (I. E., 70 eV), del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en- 19-óico [5] ...... 64

1 5E Espectro H\H -COSY (CDCl3) del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19- óico [5] ...... 66

5F Espectro HMQC (CDCl 3), del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico ... 67

5G Espectro HMBC (CDCl3),del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico ... 68

5H Espectro NOESY (CDC13) del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico ... 69 51 Interacciones NOESY entre H-15f3 y H-7f3, H-9f3 y H-11f3 ...... 70 6A Espectro Infrarrojo (film), del 16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... 71

1 6B Espectro de RMN-H (CDCl3, 400 MHz), del 16a.,17-Epoxi-ent-Kauran- 19-oato de Metilo [6] ...... 73

13 6C Espectro de RMN-C (CDCl 3, 100 MHz), del 16a.,17-Epoxi-ent-Kauran- 19-oato de Metilo [6] ...... ;...... 74 6D Espectro de Masas (I. E., 70 eV), del 16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... 75

1 6E Espectro H\H -COSY (CDCl 3) del 16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... 77

6F Espectro HMQC (CDCl3),del16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo ... 78

6G Espectro HMBC (CDCl3),del16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo ... 79 6H Correlaciones HMBC que Determinan la Posición del Grupo Carbometoxi (C-19) y del Grupo Epoxi (C-16/C-17) ...... 80 7A Espectro Infrarrojo (KBr), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7] ..... 81

1 7B Espectro de RMN-H (CDCl3 , 400 MHz), del Ácido ent-Kaur-9(11),16- dien-19-óico [7] ...... 83 207

13 7C-1 Espectro RMN-C (CDCl3, 100 MHz), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien- 19-óico [7] ...... , .. 84 13 7C-2 Espectro RMN-C (CDCl 3, 100 MHz), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien- 19-óico [7] ...... 85 7D Espectro U.e Masas (. E., 70 eV), del Ácido ent-Kaur-9(11),1o-dien-19- óico [7] ...... 86 1 7E Espectro H\H -COSY (CDCl3) del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico ... 88

7F Espectro HMQC (CDCl3), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7] ...... 89

7G-1 Espectro HMBC (CDCl3), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7] ...... 90

7G-2 Espectro HMBC (CDC1 3), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7] ...... 91 8A Espectro Infrarrojo (KBr), del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 94

1 8B Espectro de RMN-H (CDCl3 , 400 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 96 13 BC Espectro de RMN-C (CDC13, 100 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 97 BD Espectro de Masas (1. E., 70 eV), del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo .. .. . 98

1 1 BE Espectro H ,H -COSY (CDCl3),del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] .... 100

BF Espectro HMQC (CDCl3), del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 101

BG Espectro HMBC (CDC13), del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 102 9A Espectro Infrarrojo (KBr), del ent-16,17-Nor-Kauran-16-ona-19-oato de Metilo [9] ...... 104

1 9B Espectro de RMN-H (CDC13, 400 MHz), del ent-16,17-Nor-Kauran-16- ona-19-oato de Metilo [9] ...... 105

13 9C Espectro de RMN-C (CDC13, 100 MHz), del ent-16,17-Nor-Kauran-16- ona-19-oato de Metilo [9] ...... 1u6 9D· Espectro de Masas (1. E., 70 e V), del ent-16, 17-Nor-Kauran-16-ona-19- oato de Metilo [9] ...... 107

1 9E Espectro H\H -COSY (CDC13) del ent-16,17-Nor-Kauran-16-ona-19-oato de Metilo [9] ...... ;...... 109

9F Espectro HMQC (CDC13), del ent-16,17-Nor-Kauran-16-ona-19-oato de Metilo [9] ...... 110

9G Espectro HMBC (CDC1 3), del ent-16,17-Nor-Kauran-16-ona-19-oato de Metilo [9] ...... 111 lOA Espectro Infrarrojo (KBr), del 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [10] ...... 112

1 lOB Espectro de RMN-H (CDC13 , 400 MHz), del 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16- en-19-oato de Metilo [10] ...... 113 208

13 10C-1 Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16- en-19-oato de Metilo ['j.O] ...... 114

3 10C-2 Espectro de RMN-C' (CDCl 3, 100 MHz), del 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16- en-19-oato de Metilo [10] ...... 115

1 lOE Espectro H\H -COSY (CDCl3) dt:>l 1 !'it:X-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-!9-oatc de Metilo [10] ...... 116

10F Espectro HMQC (CDC13), del 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [10] ...... 117

10G Espectro HMBC (CDC13), del 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [10] ...... 118 11A Espectro Infrarrojo (KBr), del 17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en-19-oato de Metilo [11] ...... 119

1 11B Espectro de RMN-H (CDCl 3 , 400 MHz), del17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en- 19-oato de Metilo [11] ...... 121

13 11C-1 Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en- 19-oato de Metilo [11] ...... 122

13 11C-2 Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en- 19-oato de Metilo [11] ...... 123 11D Espectro de Masas (I. E., 70 eV), del17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en-19-oato de Metilo [11] ...... 124

1 11E Espectro H\H -COSY (CDCl3) del17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en-19-oato de Metilo [11] ...... 126

11F Espectro HMQC (CDC13), del 17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en-19-6ato de Metilo [11] ...... ~ ...... 127

11G Espectro HMBC (CDCl3),del 17-Acetoxi-ent-Kaur-15-en-19-oato de Metilo [11] ...... 128 11H Estereoselectividad en el Ataque Nucleofílico del Aco· al G-15 del ent-Kaur-16-en-19-oato de Metilo [8] ...... 129 12A Espectro Infrarrojo (film), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19-oato de Metilo. .. 133

1 12B Espectro de RMN-H (CDCl 3 , 400 MHz), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19- oato de Metilo [12] ...... 134

13 12C-1 Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19- oato de Metilo [12] ...... 135

13 12C-2 Espectro de RMN-C (CDCl3, 100 MHz), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19- oato de Metilo [12] ...... 136

1 12E Espectro H\H -COSY (CDC1 3), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19-oato de Metilo [12] ...... 137

12F Espectro HMQC (CDC13), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19-oato de Metilo .... 138 209

12G Espectro HMBC (CDCl3), del ent-Kaur-9(11),16-dien-19-oato de Metilo ..... 139 13A Espectro Infrarrojo (film), del ent-16,17-Nor-Kaur-9(11)-en-16-ona-19- oato de Metilo [13] ...... 141

13B Espectro de RMN-H1 (CDCl~. 400 MHz), del ent-16,17-Nor-Kaur-9(11)- en-16-ona-19-oato de Metilo [13] ...... __ 142 13 13C-1 Espectro de RMN-C (CDCl3, 100 MHz), del ent-16,17-Nor-Kaur-9(11)- en-16-ona-19-oato de Metilo [13] ...... 143 13 13C-2 Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del ent-16,17-Nor-Kaur-9(11)- en-16-ona~19-oato de Metilo [13] ...... 144

13G Espectro HMBC (CDC13), del ent-16,17-Nor-Kaur-9(11)-en-16-ona-19- oato de Metilo [13] ...... 145 14A Espectro Infrarrojo (film), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14] ...... 146

1 14B Espectro de RMN-H (CDCl 3, 400 MHz), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur- 9(11)-en-19-oato de Metilo [14] ...... 148

13 14C Espectro de RMN-C (CDC13, 100 MHz), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur- 9(11)-en-19-oato de Metilo [14] ...... 149

1 14E Espectro H\H -COSY (CDCl3), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19- oato de Metilo [14] ...... 150

14F Espectro HMQC (CDC13), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14] ...... 151

14G Espectro HMBC (CDC13), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14] ...... !...... 152

14H Espectro NOESY (CDC13), del 16(17)a-Epoxi-ent-Kaur-9(11)-en-19-oato de Metilo [14] ...... 153 15A Espectro Infrarrojo (film), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo [15] ...... 154

1 15B Espectro de RMN-H (CDC13, 400 MHz), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi­ ent-Kauran-19-oato de Metilo [15] ...... 156

13 15C Espectro de RMN-C (CDCl 3 , 100 MHz), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi- ent-Kauran-19-oato de Metilo (15] ...... 157

1 1 15E Espectro H ,H -COSY (CDC13), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran- 19-oato de Metilo [15] ...... 158

15F Espectro HMQC (CDCl3), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo [15] ...... 159

15G Espectro HMBC (CDC13), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo [15] ...... 160

15H Espectro NOESY (CDC1 3), del 9(11)a, 16(17)a-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo [15] ...... 161 210

16A Espectro Infrarrojo (film), del 9(11)a, 16(17)¡3-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo [16] ...... "163

1 16B Espectro de RMN-H (CDC13 , 400 MHz), del9(11)a, 16(17)¡3-Diepoxi-ent- Kauran-19-oato de Metilo [16] ...... "164 16C Espectro de RMN-C 13 (CDCl~. 100 MHz), del 9(11)a, 1 R(17)!3-Diepoxi- ent-Kauran-19-oato de Metilo [16] ...... "165 1 16E Espectro Hl,H -COSY (CDC13), del 9(11)a, 16(17)¡3-Diepoxi-ent-Kauran- 19-oato de Metilo [16] ...... "166

16F Espectro HMQC (CDC13), del 9(11)a, 16(17)¡3-Diepoxi-ent-Kauran-19- . oato de Metilo [16] ...... "167

16G . Espectro HMBC (CDC13), del 9(11)a, 16(17)¡3-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo (16] ...... "168

16H Espectro NOESY (CDCl3), del 9(11)a, 16(17)¡3-Diepoxi-ent-Kauran-19- oato de Metilo (16] ...... "169

ÍNDICE DE TABLAS

Leyenda Página 1A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del ent-Kaur-16- en-19-ol [1] ...... 19

1 1B Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-H (CDC13, 400 MHz) del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 21

13 !C Desplazamientos Químicos (S) en sl Espactro de RMN-C (CDC13 , 100 MHz), del ent-Kaur-16-en-19-ol [1] ...... 22 1D Fragmentos (m/z) más Notables en el Espectro de Masas del ent-Kaur- 16-en-19-ol [1] ...... 23 2A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del ent-Kaur-16- en-19-al [2] ...... 30

1 2B Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-H (CDCl3 , 400 MHz) del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 32

13 2C Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-C (CDC13 , 100 MHz) del ent-Kaur-16-en-19-al [2] ...... 33 2D Fragmentos (m/z) más Notables en el Espectro de Masas del ent-Kaur- 16-en-19-al [2] ...... 34 3A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3] ...... 40 211

1 3B Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-H (CDCl3 , 400 MHz) del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3) ...... 41

13 3C Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-C (CDCl3, 100 MHz) del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3) ...... 42 3D Fragmentos (m/z) más Notables en el Espectro de Masas del Ácido ent-Kaur-16-en-19-óico [3) ...... 43 4A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del Ácido 15a.- Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [4) ...... 50

1 4B Desplazamientos Químicos (o) en .el Espectro de RMN-H (CDCl3 , 400 MHz), del Ácido 15a.-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [4) ...... 51

13 4C Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-C (CDCl3 , 100 MHz), del Ácido 15a-Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [4) ...... 52 4D Fragmentos (m/z) más Notables en el Espectro de Masas del Ácido 15a.- Hidroxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [4) ...... 53 5A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del Ácido 15a.- Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [5) ...... 59

1 5B Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-H (CDCl3, 400 MHz), del Ácido 15a.-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [5] ...... 61

13 5C Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-C (CDCl3, 100 MHz), del Ácido 15a-Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [5) ...... 62 5D Fragmentos (m/z) más Notables en el Espectro de Masas del Ácido 15a.- Acetoxi-ent-Kaur-16-en-19-óico [5) ...... 64 6A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del16a,17-Epoxi- ent-Kauran-19-oato de Metilo [6) ...... 71

1 6B Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-H (CDCl 3, 400 MHz), del16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... 73

13 6C Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro 'de RMN-C (CDCl3, 100 MHz), del16a.,17-Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... 74 6D Fragmentos (m/z) más Notables en el Espectro de Masas del 16a.,17- Epoxi-ent-Kauran-19-oato de Metilo [6] ...... 75 7A Bandas de Absorción Significativas en el Espectro IR del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7) ...... 81

1 7B Desplazamientos Químicos (8) en el Espectro de RMN-H (CDCl3, 400 MHz), del Ácido ent-Kaur-9(11),16-dien-19-óico [7) ...... 83

13 7C Desplazamientos Químicos (o) en el Espectro de RMN-C (CDCl3, 100