UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO Passiflora L. (Passifloraceae)
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UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS DE RIBEIRÃO PRETO JULIANO GERALDO AMARAL Passiflora L. (Passifloraceae): estudos fitoquímicos suportados no desenvolvimento de estratégias de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas Ribeirão Preto 2018 JULIANO GERALDO AMARAL Passiflora L. (Passifloraceae): estudos fitoquímicos suportados no desenvolvimento de estratégias de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto/USP para obtenção do Título de Doutor em Ciências Área de Concentração: Produtos Naturais e Sintéticos Orientador: Prof. Dr. Norberto Peporine Lopes Versão corrigida da tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas em 09/04/2018. A versão original encontra-se disponível na Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto/USP. Ribeirão Preto 2018 AUTORIZO A REPRODUÇÃO E DIVULGAÇÃO TOTAL OU PARCIAL DESTE TRABALHO, POR QUALQUER MEIO CONVENCIONAL OU ELETRÔNICO, PARA FINS DE ESTUDO E PESQUISA, DESDE QUE CITADA A FONTE. Amaral, Juliano Geraldo Passiflora L. (Passifloraceae): estudos fitoquímicos suportados no desenvolvimento de estratégias de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas. Ribeirão Preto, 2018. 226 p. : il. ; 30cm. Tese de Doutorado, apresentada à Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto/USP – Área de concentração: Produtos Naturais e Sintéticos. Orientador: Lopes, Norberto Peporine. 1. Espectrometria de massas. 2. Rede molecular. 3. Passiflora. 4. Produtos naturais. FOLHA DE APROVAÇÃO Juliano Geraldo Amaral Passiflora L. (Passifloraceae): estudos fitoquímicos suportados no desenvolvimento de estratégias de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto/USP para obtenção do Título de Doutor em Ciências Área de Concentração: Produtos Naturais e Sintéticos. Aprovado em: Banca Examinadora Prof. Dr. ____________________________________________________________ Instituição: _____________________________ Assinatura:____________________ Prof. Dr. ____________________________________________________________ Instituição: _____________________________ Assinatura:____________________ Prof. Dr. ____________________________________________________________ Instituição: _____________________________ Assinatura:____________________ Prof. Dr. ____________________________________________________________ Instituição: _____________________________ Assinatura:____________________ Prof. Dr. ____________________________________________________________ Instituição: _____________________________ Assinatura:____________________ Dedicatória A Deus, pelo dom da vida e por me guiar, iluminar e dar tranquilidade para seguir em frente com os meus objetivos. Aos meus pais, José Expedito do Amaral e Maria da Graças Pereira Amaral, pelo amor incondicional. Vocês são o meu maior exemplo. Aos meus irmãos, José Expedito do Amaral Júnior e Tânia de Fátima Amaral. O amor de vocês e nossa amizade são os meus maiores títulos. E, em especial, à minha esposa, Cristhiane Teixeira Tolentino Amaral, pelo seu amor, carinho e coragem em me apoiar em todos os momentos desta nossa jornada. Não seria possível chegar até aqui sem seu amor. Eu te amo. Agradecimentos Ao Prof. Dr. Norberto Peporine Lopes, pelo exemplo de cientista e por todos os ensinamentos, orientações, oportunidades, incentivos e amizade. Obrigado pela confiança, você sempre fará parte da minha vida. A todos os professores do Núcleo de Pesquisa de Produtos Naturais e Sintéticos. Levo para sempre os seus ensinamentos. Ao Prof. Dr. Mateus Freire Leite e sua família, por todo incentivo, acolhimento e apoio na realização deste projeto. A amizade de vocês é um presente de Deus. Ao Dr. João Paulo Barreto de Sousa e sua esposa Lidiane Sousa, por toda atenção, amizade e carinho. Vocês são essenciais em nossa vida. Ao Prof. Me. Marcelo Reis da Costa, pelos ensinamentos e amizade fraterna. Ao Herbário da Universidade Estadual de Feira de Santana e à Dra. Teonildes Sacramento Nunes, pelo fornecimento das amostras e pelo apoio na realização deste projeto. A todos meus amigos de bancada, vocês transformaram os dias tristes em alegres e as tarefas difíceis em fáceis. A amizade e o aprendizado que tive com vocês jamais esquecerei. Muito obrigado, meus bons amigos. A José Carlos Tomaz, Isabel Cristina Casanova Turatti e Jacqueline Nakau Mendonça, pelo apoio, ensinamentos, paciência e, sobretudo, pela amizade. Vocês sempre estarão presentes na minha vida. A todos os funcionários do NPPNS, vocês foram fundamentais na realização deste trabalho. Aos funcionários da secretaria de pós-graduação da FCFRP. A todos os docentes responsáveis pelas disciplinas que cursei durante a pós- graduação, os seus ensinamentos foram primordiais. A todos os professores responsáveis por minha formação, da alfabetização até os dias de hoje, sou eternamente grato. À Universidade Federal da Bahia, em especial, ao Instituto Multidisciplinar em Saúde, pela concessão do afastamento, incentivo e apoio na realização deste projeto. A todos os colegas docentes e técnicos do Instituto Multidisciplinar em Saúde da UFBA que me apoiaram e incentivaram a realizar este trabalho. À bióloga Marluce Veira Campos, pelo apoio e carinho de sempre. A todos os pesquisadores e alunos em cujos projetos tive a oportunidade de colaborar. A todos os alunos e ex-alunos do laboratório 109 do IMS/UFBA, vocês fizeram a diferença. À minha família, que, desde criança, me incentivou, apoiou e acreditou no meu trabalho. Que Deus ilumine todos vocês! À minha família Tolentino e Souza, pelo apoio incondicional. Que Deus abençoe vocês sempre! Aos meus amigos, vocês foram indispensáveis nesta jornada. À Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto e à Universidade de São Paulo, pela oportunidade. A Capes, CNPq e FAPESP, pelo suporte financeiro na realização deste projeto. E a todos aqueles que, de alguma forma, contribuíram para que este trabalho se tornasse realidade. Epígrafe Todo jardim começa com um sonho de amor. Antes que qualquer árvore seja plantada ou qualquer lago seja construído, é preciso que as árvores e os lagos tenham nascido dentro da alma. Quem não tem jardins por dentro não planta jardins por fora. E nem passeia por eles... Rubem Alves i RESUMO AMARAL, J. G. Passiflora L. (Passifloraceae): estudos fitoquímicos suportados no desenvolvimento de estratégias de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas. 2018. 226f. Tese (Doutorado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2018. Os produtos naturais são considerados excelentes fontes de princípios ativos. O gênero Passiflora L. pertencente à família Passifloraceae, possui cerca de 500 espécies e, devido à sua ampla distribuição pela América do Sul, faz do Brasil uma região importante de sua ocorrência. Desde o século XVIII, há estudos científicos voltados ao conhecimento desse gênero, e suas espécies são tradicionalmente utilizadas como sedativas. Quanto à sua composição química, sabe-se que seus metabólitos majoritários são pertencentes à classe dos flavonoides, principalmente os do tipo C-glicosilados. Apesar da grande importância do gênero, os trabalhos concentram-se nas espécies de uso tradicional, P. incarnata; P. alata e P. edulis. Esse fato gera a necessidade da extensão dos estudos a espécies de menor conhecimento cientifico. P. cincinnata é uma espécie nativa do Brasil, com ampla distribuição geográfica, sendo encontrada facilmente no estado da Bahia, entretanto há poucas informações quanto à sua composição química. O avanço da espectrometria de massas, juntamente com a eficiência da CLAE, faz dessas técnicas hifenadas a principal ferramenta para o estudo da química de produtos naturais. Recentemente a estratégia de integração da espectrometria de massa com rede molecular criada pelo GNPS alterou os métodos convencionais de estudo da química de produtos naturais, auxiliando na desreplicação de compostos conhecidos e na identificação de novos metabólitos. Visando o melhor conhecimento da química de espécies de Passiflora, realizou-se um estudo fitoquímico de P. cincinnata, isolando e identificando os seus compostos majoritários: isoorientina; isovitexina; isoscoparina; isovitexina-2”-O-β-glicopiranosídeo; isovitexina-2”-O-β-xilopiranosídeo e isoorientina-2-O-β-xilopiranosídeo, bem como a determinação do perfil fitoquímico dos principais metabólitos presentes em suas folhas e caules por CLAE-DAD-IES-IT- EMn, que levou à identificação de mais 19 metabólitos pertencentes à classe dos flavonoides e dos derivados do ácido clorogênico. Utilizando os dados de EM/EM das substâncias isoladas e das identificadas em P. cincinnata, foram geradas redes moleculares pelo GNPS, identificando mais 16 flavonoides e obtendo um modelo que auxiliou no estudo de desreplicação de 46 espécies mantidas em herbário. A obtenção dos perfis cromatográficos por CLAE-DAD-IES-IT-EM/EM dessas espécies e sua integração com redes moleculares viabilizou a realização de uma proposta de identificação de mais de 100 derivados fenólicos, pertencentes às classes dos flavonoides, proantocianidinas e derivados do ácido clorogênico, gerando maior conhecimento sobre a composição química dessas espécies, abrindo, assim, fronteira para novos estudos e confirmando