UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD COAGULANTE, HEMOSTÁTICA Y TOXICIDAD AGUDA POR VIA ORAL Y TÓPICA DEL EXTRACTO SECO HIDROALCOHÓLICO AL 70% DE Castilleja pumila PLVN¶LFKD TESIS PRESENTADA POR: Br. SHIRLEY CRUZKAYNA MENDOZA ALVAREZ PARA OPTAR AL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO FARMACÉUTICO. ASESOR: Dr. NERIO GONGORA AMAUT. CO-ASESORA: Mgt. YANET CUENTAS ROMAÑA. CUSCO - PERÚ 2019 AUSPICIO: PROYECTO ARES DEDICATORIA Mi más profundo agradecimiento primeramente a Dios, quien ha guiado mi camino. A mis padres y familiares por el apoyo constante e incondicional en el logro de uno de mis objetivos en mi vida. A la Universidad Nacional San Antonio Abad del Cusco, a la Facultad de Ciencias de la Salud, La Escuela profesional de Farmacia y Bioquímica, en cuyas aulas me forme profesionalmente. A los docentes que con su experiencia y conocimiento motivaron mis ideales, a mis compañeras y grandes amigas que me dieron su apoyo en todo momento, y en general a todas las personas que han contribuido en esta investigación y hacer posible el logro de este reto, anhelo; personal y profesional. Agradecer de manera especial y sincera a mis dictaminantes por la paciencia y tiempo brindado durante toda la etapa de revisión. ii AGRADECIMIENTO A toda mi familia, principalmente a mi madre Ysabel, por su apoyo y comprensión, a mi padre Ronald, por su apoyo y sus consejos; también a mis abuelitos Inocencia y Erasmo por sus palabras de aliento en cada momento. A ustedes, por aguantar mis malos ratos de estrés y hacerme sonreír. A Yusara, por su atención, aliento y apoyo siempre y en todo momento, desde el inicio, durante y después del trabajo. A mis amigas Hilda, Amelia, Ruth Linda y Myrian por su apoyo y compromiso en siempre estar dispuestas a ayudarme; a todas ustedes gracias por su buen humor, amistad y alegría; así como por todos los buenos recuerdos generados en este tiempo compartido y por las palabras de aliento que me han regalado siempre. A mis docentes de la carrera profesional de Farmacia y Bioquímica, Dr. Nerio Gongora, Mgt. Yanet Cuentas, Mgt. Zany Triveño, Mgt. Carlos Chalco y Dra. Carla del Carpio, por toda su ayuda, sus recomendaciones y sus palabras de aliento. A Sor Esther y Sor Zulma, quienes siempre han estado pendientes de mi avance en el trabajo; regalándome regaños, enojos y sobre todo palabras de aliento, paciencia y comprensión en todo momento y porque siempre me han abierto las puertas de su casa con cariño. Al Laboratorio de Investigación, así mismo al Laboratorio de Ciencias Básicas, dirigido por la Mgt. Anahí Cardona; por prestarme las instalaciones para llevar a cabo el proceso de experimentación; así también al convenio ARES por proporcionar los fondos de donde deriva el presente trabajo. A todos quienes han creído en mí, que me han dado palabras de aliento en los momentos que sentí flaquear, a los que han compartido conmigo. Muchas Gracias. iii CONTENIDO 1 CAPÍTULO I ...................................................................................................... 1 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ........................................................ 1 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ............................................................ 3 1.3 OBJETIVOS ............................................................................................... 4 1.3.1 Objetivo general ................................................................................... 4 1.3.2 Objetivos específicos ........................................................................... 4 1.4 JUSTIFICACION E IMPORTANCIA ........................................................... 4 1.5 LIMITACIONES .......................................................................................... 5 1.6 HIPÓTESIS ................................................................................................ 5 2 CAPÍTULO II ..................................................................................................... 6 2.1 ESTADO DE LA CUESTIÓN ...................................................................... 6 2.2 ANTECEDENTES ...................................................................................... 7 2.2.1 Antecedentes Etnobotánicos ............................................................... 7 2.2.2 Antecedentes de Estudios de Coagulación ....................................... 10 2.3 BASES TEÓRICO CIENTÍFICAS ............................................................. 13 2.3.1 Aspectos botánicos de la planta en estudio ....................................... 13 2.3.2 Hemostasia ........................................................................................ 15 2.3.3 Ácido Tranexámico ............................................................................ 32 2.3.4 Determinación de la Toxicidad Aguda. .............................................. 34 2.3.5 Determinación de la Cantidad de personas para realizar las pruebas In Vitro««««««« ....................................................................................... 39 2.4 DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS .................................................. 40 CAPÍTULO III ........................................................................................................ 41 3.1 Materiales. ................................................................................................ 41 3.1.1 Material Biológico. ............................................................................. 41 iv 3.1.2 Materiales e Instrumentos de Laboratorio. ........................................ 41 3.2 Diseño Metodológico. ............................................................................... 43 3.2.1 Tipo de Investigación. ........................................................................ 43 3.2.2 Determinación de la Cantidad de personas para realizar la prueba de Tiempo de Coagulación y Tiempo de Protrombina. ........................................ 43 3.2.3 Diseño de la Investigación. ................................................................ 45 3.3 Identificación y Operacionalización de Variables. .................................... 51 3.3.1 Variables Implicadas. ......................................................................... 51 3.3.2 Variables No Implicadas. ................................................................... 55 3.4 Criterios de Inclusión y Exclusión. ............................................................ 58 3.5 Técnicas e Instrumentos de Recolección de Datos. ................................ 59 3.6 Técnicas para el Procesamiento y Análisis de Datos. .............................. 59 3.7 Procedimientos. ....................................................................................... 60 3.7.1 Descripción de los Procedimientos. ................................................... 61 4 CAPÍTULO IV ................................................................................................. 83 4.1 Ensayos Preliminares. .............................................................................. 83 4.1.1 Determinación de Porcentaje de Humedad de la planta Castilleja pumila “PLVN¶LFKD”. ...................................................................................................... 83 4.1.2 Determinación de Porcentaje de Rendimiento del extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “PLVN¶LFKD”. ................................. 84 4.1.3 Pruebas de Solubilidad del extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “PLVN¶LFKD”. ........................................................................... 85 4.1.4 Determinación del Análisis Fitoquímico Cualitativo del extracto seco hidroalcohólico al 70% Castilleja pumila “PLVN¶LFKD”. ...................................... 86 4.2 Prueba de la Actividad Coagulante In Vitro. ............................................. 88 4.2.1 Evaluación del Tiempo de Coagulación por el Método de White- Modificado. ..................................................................................................... 88 v 4.2.2 Evaluación del Tiempo de Protrombina en plasma por el Método de Quick-Modificado. ........................................................................................... 94 4.3 Prueba de la Actividad Hemostática In Vivo. .......................................... 101 4.4 Pruebas de Toxicidad. ............................................................................ 109 4.4.1 Evaluación de la Toxicidad Oral del extracto seco hidroalcohólico de Castilleja pumila ³PLVN¶LFKD´DOHQUDWRQHVGHH[SHULPHQWDFLyQ ........... 109 4.4.2 Evaluación de la Toxicidad Dérmica del extracto seco hidroalcohólico de Castilleja pumila ³PLVN¶LFKD´DOHQUDWRQHVGHH[SHULPHQWDFLyQ ...... 113 CONCLUSIONES ................................................................................................ 115 RECOMENDACIONES Y SUGERENCIAS ......................................................... 117 BIBLIOGRAFIA«««««««««««««««««««««««««««««« ÍNDICE DE TABLAS TABLA N° 1: 5HVXPHQGH2SHUDFLRQDOL]DFLyQGH9DULDEOHV,PSOLFDGDV««.««57 TABLA N° 2: Resumen de Operacionalización de Variables no Implicadas«««58 TABLA N° 3: Distribución de los sujetos de experimentación en grupos y concentración del extracto a probar ««««««««««««««««««««68 TABLA N° 4: Distribución de los sujetos de experimentación en grupos y concentración del extracto a probar««««««««««««««««««««72 TABLA N° 5: Distribución de los sujetos de experimentación en grupos y concentración