Vol XXXI (1): 15-22; July 2020 Journal of the Argentine Society of Genetics

ANALYSIS OF GENOTOXICITY IN ERITHROCYTES OF ( hilarii) FROM ANTHROPIZED AND NATURAL SITES OF ENTRE RÍOS, ANÁLISIS DE GENOTOXICIDAD EN ERITROCITOS DE TORTUGAS (Phrynops hilarii) DE SITIOS ANTROPIZADOS Y NATURALES DE ENTRE RÍOS, ARGENTINA

Castaño G. V. 1, Cabagna Zenklusen M. 2, Prieto Y. 1, Manzano A. S. 1

ABSTRACT 1 Centro de Investigaciones The micronucleus test (MN) is a biomarker of non-destructive genotoxicity that allows Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción chromosomal damage and other nuclear alterations (NA) to be detected. Phrynops hilarii (CICYTTP-CONICET- UADER), Materi is a freshwater chelonium that inhabits regions of central-northern Argentina. The main y España, Diamante, Entre Ríos, objective was to determine the presence of MN and other NA in erythrocytes of natural Argentina. populations of P. hilarii comparing their frequencies between three sites, two anthropized and one of control (cities of Diamante and Paraná) of Entre Ríos, Argentina, during the 2 Universidad Nacional del Litoral, Facultad de Bioquímica y Ciencias period 2015-2016. Eighteen individuals (six per sampling site) were evaluated at the sites: 1- Biológicas, Paraje el Pozo s/n, Santa PD: Pre-Delta National Park (control), 2- AG: Salto Ander Egg (agroecosystem) and 3- SU: Fe, Argentina. Caleta Club Náutico (urban system). Blood was obtained from the femoral vein. The samples were stained with the May Grünwald-Giemsa method and observed under a microscope with Corresponding author: an immersion objective. Micronucleus (MNF) and nuclear alterations (NAF) frequencies Adriana Silvina Manzano were determined every 1000 erythrocytes observed. A significant difference (p<0.05) was [email protected] found between the PD site and the other sites (AG and SU), both for MNF (p=0.0021) and for ORCID 0000-0002-6862-857X NAF (p=0.0011). The highest frequency values ​​corresponded to the AG site (MNF: 3.33 ± 0.62; NAF: 4.67 ± 0.56). Finally, biomonitoring with P. hilarii was useful, so it could be considered as a bioindicator to assess the quality of Argentina’s environments.

Genotoxicity biomarkers, micronucleus test, nuclear alterations Cite this article as: Key words: Castaño G. V., Cabagna Zenklusen M., Prieto Y., Manzano A. S. 2020. ANALYSIS OF GENOTOXICITY IN RESUMEN ERITHROCYTES OF TURTLES (Phrynops hilarii) FROM ANTHROPIZED AND El test de micronúcleos (MN) es un biomarcador de genotoxicidad no destructivo que permite NATURAL SITES OF ENTRE RÍOS, detectar daño cromosómico y otras alteraciones nucleares (AN). Phrynops hilarii es un quelonio ARGENTINA. BAG. Journal of Basic de agua dulce que habita regiones del centro-norte de Argentina. El objetivo principal fue and Applied Genetics XXXI (1): 15-22. determinar la presencia de MN y otras AN en eritrocitos de poblaciones naturales de P. hilarii comparando sus frecuencias entre tres sitios, dos antropizados y uno de control (ciudades de Diamante y Paraná) de Entre Ríos, Argentina, durante el periodo 2015-2016. Dieciocho Received: 10/22/2019 individuos (seis por sitio de muestreo) fueron evaluados en los sitios: 1- PD: Parque Nacional Revised version received: 03/03/2020 Pre-Delta (control), 2- AG: Salto Ander Egg (agroecosistema) y 3- SU: Caleta Club Náutico Accepted: 03/15/2020 (sistema urbano). Se extrajo sangre de la vena femoral. Las muestras se tiñeron con el método General Editor: Elsa Camadro May Grünwald-Giemsa y se observaron bajo un microscopio con el objetivo de inmersión. Las frecuencias de micronúcleos (FMN) y alteraciones nucleares (FAN) se determinaron cada DOI: 10.35407/bag.2020.31.01.02 1000 eritrocitos observados. Se encontró diferencia significativa (p<0,05) entre el sitio PD y ISSN online version: 1852-6233 los otros sitios (AG y SU), tanto para FMN (p=0,0021) como para FAN (p=0,0011). Los valores de las frecuencias más altos correspondieron al sitio AG (FMN: 3,33±0,62; FAN: 4,67±0,56). Finalmente, el biomonitoreo con P. hilarii fue útil, por lo que podría considerarse como especie bioindicadora para evaluar la calidad de los ambientes de Argentina.

Palabras clave: biomarcadores de genotoxicidad, prueba de micronúcleos, alteraciones nucleares Available online at www.sag.org.ar/jbag

ARTICLE 2 - RESEARCH 15 Genotoxicidad en Eritrocitos de Tortugas

Hernández Guzmán et al., 2015). Se consideran como INTRODUCCIÓN AN las siguientes características descriptas por Carrasco El test de micronúcleos (MN) es un biomarcador de et al. (1990): 1- núcleo escotado (KN): invaginación genotoxicidad no destructivo que puede aplicarse en relativamente pequeña en la membrana nuclear y distintos tipos de células (epiteliales, sanguíneas, cromatina no condensada; 2- núcleo mellado (EN): sexuales, entre otras) y organismos (animales, vegetales presencia de una muesca en el núcleo; 3- lóbulo o brote y humanos), para detectar daño cromosómico (Pastor nuclear (LN): morfología semejante a un MN conectado Benito, 2002; Poletta, 2011; Lajmanovich et al., 2012; o unido al núcleo; 4- célula binucleada (BN): célula Caraffa et al., 2013). Este test, es un método sensible y con presencia de dos núcleos de tamaños semejantes o rápido que puede realizarse tanto en ensayos de laboratorio similares. El mecanismo por el cual se producen las AN como a campo, sin necesidad de sacrificar al individuo en no es conocido con claridad. López González et al. (2017) evaluación para la obtención de la muestra (Lajmanovich mencionaron que cuando la célula detecta una región et al., 2012; Zapata Restrepo et al., 2017). Esto es de gran de ácido desoxirribonucleico (ADN) afectada, se inicia importancia, ya que puede emplearse en sucesivos un proceso de reparación y eliminación de la cromatina. muestreos y en especies con escaso número de individuos La región alterada se mueve a la periferia del núcleo y o en peligro de extinción (Lajmanovich et al., 2012). se elimina por exocitosis. Antes de que el proceso de Los MN son masas de cromatina con forma de pequeños reparación y eliminación de la cromatina culmine, la núcleos cercanos al núcleo principal en las células de la membrana nuclear presenta algunas imperfecciones, interfase, pudiendo originarse de manera espontánea ocasionando AN. o como respuesta a la acción de ciertos agentes (Pastor Los agentes genotóxicos son sustancias que pueden Benito, 2002) como pueden ser los hidrocarburos actuar de forma directa o indirecta sobre el material (Barsiené y Andreikénaité, 2007), metales (Paolín et al., genético (ADN) y provocar efectos a concentraciones 2010), plaguicidas (Pastor Benito, 2002; Lajmanovich subletales (Gutiérrez, 2013). Estos agentes pueden ser et al., 2014), fármacos (Arranz Gutiérrez, 2016), entre liberados al ambiente por distintas actividades humanas, otros. Cuando esto ocurre, el material genético queda ya sean productivas como la minería, la agricultura y excluido de los núcleos de las nuevas células durante la distintos procesos industriales o por actividades urbanas anafase mitótica, dando lugar a formaciones redondas como el vertido de efluentes cloacales, emisiones en el citoplasma de la célula hija. El material genético vehiculares, aguas residuales hospitalarias y de desprendido puede tener dos orígenes: 1- derivar de estaciones de combustible, entre otras (Paz et al., 2008; cromosomas enteros (efecto aneugénico), donde el Zuluaga Quintero et al., 2009; Gutiérrez, 2013; González daño genotóxico ha afectado a proteínas del cinetocoro, Torres et al., 2015). Para evaluar el riesgo potencial de al centrómero o al huso mitótico, generando un retraso poblaciones naturales expuestas a agentes genotóxicos, mitótico y un desequilibrio en la distribución de los son utilizadas especies indicadoras o centinelas y cromosomas, 2- pueden formarse de fragmentos distintos biomarcadores, ya que suministran señales de cromosómicos acéntricos que han sido excluidos de alarma temprana ante la presencia a tóxicos (Cabagna los núcleos de las nuevas células (efecto clastogénico) Zenklusen, 2012; Caraffaet al., 2013). durante la anafase mitótica (Cabagna Zenklusen, 2012). Los son organismos muy sensibles a cambios Numerosos trabajos en fauna han aplicado el test de en las condiciones del ambiente, por lo que en muchos MN en eritrocitos, para evaluar a través de su frecuencia casos fueron utilizados como indicadores o centinelas de (FMN) los efectos provocados por distintos agentes en contaminación, debido a que presentan características el material genético y en la división celular (Pollo et como: poblaciones persistentes en diferentes hábitats al., 2012; Caraffa et al., 2013; Latorre et al., 2015). Para (acuáticos y terrestres), longevidad, posición alta en la determinar el potencial de una especie como organismo cadena alimentaria, alta sensibilidad a contaminantes, bioindicador o centinela se utiliza como valor referencia amplia distribución geográfica y fidelidad al sitio la frecuencia basal de micronúcleos (FBMN). Este (Gardner y Oberdorster, 2005; Poletta et al., 2008; valor refiere al número de MN provocados de manera Poletta et al., 2013). Dentro de estos, las tortugas han espontánea como resultado de procesos normales de sido propuestas como organismos bioindicadores y/o replicación y/o división celular (Cabagna Zenklusen, centinelas para evaluar su exposición a sustancias 2012; Latorre et al., 2015). tóxicas (Andreani et al., 2007; De Solla et al, 2007; De Otras alteraciones nucleares (AN) pueden analizarse Solla et al., 2008; Latorre et al., 2015). al aplicar el test de MN y son utilizadas como un Phrynops hilarii es un quelonio de agua dulce complemento, ya que en varios estudios fueron perteneciente al orden Testudines, suborden señaladas como respuesta a la acción de determinados y familia . La distribución geográfica de la agentes tóxicos (Ayllon y García Vázquez, 2000; especie abarca algunas regiones de Sudamérica (Latorre Cabagna Zenklusen, 2012; Hayretdağ et al., 2014; et al., 2015).

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Particularmente en Argentina se la puede encontrar superficies agrícolas, pasturas implantadas y en menor en áreas de la región centro-norte del país entre las medida, por pasturas y bosques naturales, así como provincias de Buenos Aires, Entre Ríos, Corrientes, también, por áreas industriales y urbanas, con sitios Santa Fe, Córdoba, Misiones, Chaco, Formosa, Santiago de parches dispersos de bosques nativos (Aceñolaza y del Estero y Mendoza (Derocco et al., 2005). Las áreas Rodríguez, 2013). que habita pueden presentar distintas condiciones topográficas, fisicoquímicas, entre otras, como lagunas, Captura de individuos y extracción de sangre esteros, arroyos lentos, ríos, cursos fluviales con Se capturaron 18 individuos (seis por sitio de muestreo) lecho de fango o arena y bañados asociados a juncos y con trampas tipo embudo (Aguirre León, 2011) a las que vegetación flotante; además, se la puede encontrar en se les agregó cebos atrayentes (trozos de peces). De cada áreas antropizadas como arrozales, cuneta al borde de individuo se registró el largo curvilíneo del caparazón campos cultivados y tajamares, en los cuales se encuentra (LC, mm) con un centímetro de 1mm de precisión. El especialmente expuesta a sustancias tóxicas (Cei, 1993; peso corporal (MC, kg) de los individuos se registró con Cabrera, 1998; Richard y Waller, 2000; Carreira et al., balanza manual electrónica con 0,01 kg de precisión. Los 2005; Tortato, 2007). animales fueron marcados en el borde de su caparazón Los estudios de genotoxicidad basados en la aplicación mediante la realización de una pequeña muesca con del test de MN y la evaluación de otras AN en reptiles de sierra manual para el control de recapturas. Argentina, son recientes (Poletta et al., 2008; Poletta et La extracción de sangre se realizó de la vena femoral al., 2009; Poletta, 2011; Shaumburg et al., 2012; López con jeringas estériles de 1ml previamente heparinizadas González et al., 2013; Shaumburg et al., 2014; Shaumburg (anticoagulante) y aguja TERUMO® 25G 0.5mm, sin et al., 2016; López González et al., 2017). En lo que anestésicos para evitar la alteración de los componentes respecta a tortugas de nuestro país, los datos hallados de la sangre (Duguy, 1982; Troiano y Silva, 1998; son escasos y acotados a la descripción de la FBMN y a Attademo et al., 2012). Todos los animales luego de la la FMN en P. hilarii y Trachemys dorbigni en condiciones extracción fueron reincorporados a su lugar. Las muestras de cautiverio, sin indagar en la descripción de otras fueron llevadas refrigeradas al Laboratorio de Muestras AN (Boned et al., 2011; López González et al., 2012; Biológicas del Centro de Investigaciones Científicas y Latorre et al., 2015). El objetivo principal de este trabajo Transferencia de Tecnología a la Producción (CICYTTP- fue determinar la presencia de MN y otras AN en los CONICET) de la cuidad de Diamante, Entre Ríos, para eritrocitos de poblaciones naturales de Phrynops hilarii su posterior procesamiento. Para las actividades y comparando sus frecuencias entre sitios antropizados y manipulación de los animales se siguieron los Principios control (en las ciudades de Diamante y Paraná) de Entre Éticos para la Investigación en el Laboratorio, Granja Ríos, Argentina. y Animales Silvestres (REFBR-CONICET, 2005), y se contaron con los permisos correspondientes de la Dirección Recursos Naturales de la provincia de Entre MATERIALES Y MÉTODOS Ríos (Resolución Nº1721) y de la Administración de Área de estudio y sitios de muestreo Parque Nacionales (Nº CRCE 6). El estudio se realizó en un área comprendida entre los departamentos Diamante y Paraná de la provincia de Test de micronúcleos Entre Ríos, Argentina. Los sitios seleccionados fueron Para la evaluación de MN y otras AN a través del test de dos zonas antropizadas y una de control: 1- PD: Parque MN, se prepararon extendidos sanguíneos de cada uno Nacional Pre-Delta (control, 32° 03’ 43” S y 60° 38’ 39” de los individuos en portaobjetos limpios y secados O), 2- AG: Salto Ander Egg (agroecosistema, 32° 07’ al aire. Posteriormente se tiñeron con solución May 42.64’’ S y 60° 25.40’ 13” O) y 3- SU: Caleta Club Náutico Grünwald-Giemsa y se observaron en un microscopio (sistema urbano, 31°42’ 55” S y 60° 30’ 17” O), durante Carl Zeiss Axiostar con objetivo de inmersión. los meses cálidos (Octubre-Marzo) de los años 2015 y Para el conteo de MN se seleccionaron los eritrocitos 2016 (Figura 1). Los sitios pertenecen a la ecorregión intactos y se reconocieron siguiendo los criterios Delta e Islas del Paraná y Espinal (Burkart et al., 1999), descriptos por Fenech (2000), donde señala que el con temperaturas medias anuales inferiores a los 20°C y diámetro del MN no debe superar el 1/6 o 1/3 del tamaño las precipitaciones medias anuales abarcan un periodo del núcleo principal y debe estar separado de este y de mayor frecuencia entre los meses de octubre-abril presentar una morfología, coloración e intensidad (73% del total anual), sin embargo, en los meses de similar a la del núcleo principal. verano pueden presentarse lapsos de déficit hídrico Para determinar la FMN de las muestras por sitio, se (Rojas y Saluso, 1987). El uso intensivo de la tierra en realizó el conteo de la cantidad de células que presentaron estas regiones, le da al paisaje un perfil muy antrópico, MN en 1000 eritrocitos observados por frotis de cada debido a que se encuentra principalmente ocupado por individuo (López González et al., 2017).

ARTICLE 2 - RESEARCH 17 Genotoxicidad en Eritrocitos de Tortugas

Figura 1. Área de estudio y sitios de muestreo. 1-Parque Nacional Pre Delta (sitio control). 2-Salto Ander Egg (sitio agroecosistema). 3-Caleta Club Náutico (sitio urbano).

La FAN total se obtuvo sumando todas las AN que se se distinguieron tres tipos de AN: eritrocito con brote observaron en las muestras de los seis individuos de nuclear (LN), eritrocito con núcleo mellado (EN) y cada área y se expresaron cada 1000 eritrocitos contados eritrocito con micronúcleo (MN) (Figura 2). por individuo por sitio (Cabagna Zenklusen et al., 2011). En la Tabla 2 se exponen los valores de la FMN, FAN, LN y EN de los sitios muestreados. En el sitio control (PD), los datos corresponden a los resultados basales de Análisis estadístico las frecuencias en este sitio. Los datos descriptivos de los individuos a los que se Se observaron diferencias significativas (p<0,05) extrajeron las muestras son: media ± error estándar entre el sitio PD y los otros sitios (AG y SU), tanto para la (EE) y tamaño de la muestra (n). Los datos fueron FMN (p= 0,0021) como para la FAN (p=0,0011), mientras testeados en cuanto a su normalidad (Shapiro- que para los demás parámetros celulares (LN y EN) no Wilks) y homocedasticidad (test de Levene). Para las se encontraron diferencias significativas (p>0,05) entre comparaciones de medias se utilizó el test no paramétrico los sitios. Entre las áreas antropizadas, los mayores Kruskal Wallis (p<0,05). Todos los análisis estadísticos registros de las frecuencias correspondieron al sitio AG. fueron realizados con el software estadístico INFOSTAT Además, no se encontró correlación entre los parámetros versión 2012 profesional (Di Rienzo et al., 2012). biológicos (MC y LC de P. hilarii) y las frecuencias de MN y de AN de los sitios AG (MC-FMN: r2= 0,62 y LC-FMN: r2= 0,31; MC-FAN: r2= 0,24 y LC-FAN: r2-0,24), SU (MC- RESULTADOS FMN: r2= -0,72 y LC-FMN: r2= -0,60; FAN-MC: r2= -0,03 En la Tabla 1 se consignan los valores de los parámetros y FAN-LC: r2= 0,09) y PD (FMN-MC: r2= 0,13 y FMN-LC: biológicos determinados en los individuos analizados r2= -0,39; FAN-MC: r2= 0,29 y FAN-LC: r2= 0,10). de cada sitio. En los extendidos sanguíneos analizados

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Tabla 1. Parámetros biológicos de P. hilarii, peso corporal (MC) y longitud Tabla 2. Parámetros celulares evaluados en P. hilarii. FMN: frecuencia caparazón (LC). Sitios: control (PD), agroecosistema (AG) y sistema de micronúcleos; FAN: frecuencia de alteraciones nucleares; LN: lóbulo urbano (SU). n: tamaño de la muestra. Los valores se expresaron como nuclear; EN: núcleo mellado; en 1000 eritrocitos contados por muestra. media ± EE. Sitios: control (PD), agroecosistema (AG) y sistema urbano (SU). n: tamaño de la muestra. Todos los valores se expresaron como media ± EE. Superíndices a y b en las columnas señalan diferencias significativas entre los sitios (p<0,05). (*) Sin diferencias significativas. SITIOS n MC (Kg) LC (mm)

PD 6 2,36 ± 0,38 316,33 ± 9,01 SITIOS n FMN FAN LN* EN* AG 6 1,62 ± 0,64 216,17 ± 34,31 a a SU 6 1,99 ± 0,49 281,50 ± 26,68 PD 6 0,17 ± 0,17 0,50 ± 0,22 0,33 ± 0,21 0 AG 6 3,33 ± 0,62b 4,67 ± 0,56b 1,17 ± 0,40 0,17 ± 0,17

SU 6 2,00 ± 0,36b 2,67 ± 0,42b 0,50 ± 0,22 0,17 ± 0,17

Figura 2. Eritrocitos de Phrynops hilarii: a) normal; b) eritrocito con brote; c) eritrocito con núcleo mellado; d) eritrocito con micronúcleo. Escala: 5µm.

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en las especies anteriormente mencionadas (C. mydas, C. DISCUSIÓN caretta y un híbrido entre C. caretta y L. olivácea). Actualmente existe un gran interés en estudios Los autores Matson et al. (2005) determinaron la FMN ecotoxicológicos con reptiles, debido a que las en las tortugas Emys orbicularis expuestas a descargas características fisiológicas y ecológicas que presentan, industriales y Borrat et al. (2011) en la especie C. mydas permiten evaluar el estado de contaminación de un expuesta a las actividades agrícolas, y Quiroz Herrera ambiente (Quiróz Herrera y Palacio Baena, 2017). y Palacio Baena (2017) en L. olivácea para determinar Varios autores han aplicado el test de MN (Zúñiga efectos genotóxicos de contaminantes en una zona González et al., 2000; 2001; Poletta, 2011; Shaumburg expuesta a los agroquímicos y metales pesados. et al., 2012; 2014; Zapata et al., 2016; López González et Las FMN obtenidas de las tortugas de los trabajos al., 2017), y de otras AN (Strunjak Perovic et al., 2010; de Matson et al. (2005) y Borrat et al. (2011), fueron Hayretdağ et al., 2014; Hernández Guzmán et al., 2015; superiores a los valores obtenidos de los sitios López González et al., 2017) en caimanes, serpientes y en antropizados (AG y SU). No obstante, en el estudio de otras especies de tortugas. Quiroz Herrera y Palacio Baena (2017), los resultados de Los resultados de la FMN obtenidos del sitio PD sus análisis fueron bajos en relación a los valores de los (control) del presente trabajo fueron tomados como sitios AG y SU. valores basales, al igual que la FAN para dicho sitio, Finalmente, las muestras analizadas de P. hilarii del debido a que no hay antecedentes hasta el momento de sitio PD tuvieron escasas AN, lo cual, podría asociarse a valores basales en individuos de P. hilarii en la naturaleza eventos espontáneos (Cabagna Zenklusen, 2012), ya que (Tabla 2). Los datos de FBMN obtenidos, fueron menores las tortugas capturadas en esta área (Parque Nacional), en comparación con los reportados por los autores corresponden a un sitio protegido, relativamente alejado Boned et al. (2011) y Latorre et al. (2015) para individuos de campos agrícolas e industrias. de esta especie en condiciones de cautiverio. Asimismo, El aumento de las frecuencias de MN y AN observadas se encontró en el trabajo de Zapata et al. (2016) que la en P. hilarii de los sitios AG y SU, podrían estar asociadas FBMN obtenida de individuos de Trachemys callirostris fuertemente a las actividades náuticas y agrícolas, expuestos a las actividades agrícolas, industriales y produciendo un incremento de las alteraciones con mineras fue mayor que el resultado obtenido en el respecto a las frecuencias obtenidas en el sitio PD. presente estudio; de igual manera ocurrió en el trabajo Estos resultados, coinciden con algunos de los trabajos de Da Silva Silveira (2016), en el cual la FBMN obtenida anteriormente mencionados, como los de Matson et de las especies: Chelonia mydas, Caretta caretta y un al. (2005), Hayretdağ et al. (2014) y López González et híbrido entre las especies C. caretta y Lepidochelys olivácea al. (2017), ya que en los mismos, los sitios utilizados de áreas expuestas a descargas de contaminantes de en sus estudios, expuestos a contaminantes o ensayos residuos sólidos y metales pesados fueron mayores a las de laboratorio por inducción a tóxicos, produjeron un del presente trabajo. aumento en las frecuencias de MN y AN con respecto a Por otra parte, Zúñiga González et al. (2000; 2001) sus controles. informaron valores de la FBMN para varias especies de De acuerdo a los resultados obtenidos en el presente vertebrados tanto en la naturaleza como en cautiverio, trabajo, consideramos que el biomonitoreo realizado en el cual, detallaron datos para dos especies de tortugas con P. hilarii fue útil, por lo que podría ser utilizada de agua dulce Macroclemys temminckii y Kinosternon como especie bioindicadora para evaluar calidad de los subrubrum, cuyos valores reportados fueron nulos, ambientes de Argentina. Si bien el número de individuos pudiendo deberse estos resultados al bajo número de analizados fue bajo, cabe resaltar que estos animales individuos analizados, ya que los autores utilizaron un se encontraban en libertad, expuestos naturalmente individuo de la primera especie mencionada y dos de la a las condiciones de los ambientes que habitan. En segunda (Poletta, 2011). este contexto, este trabajo es el primero de este tipo, En lo que respecta a la FBAN, los datos obtenidos en y consideramos que ampliar el número de individuos el presente trabajo son los primeros en tortugas P. hilarii y sitios de estudio podría incrementar el valor de los de poblaciones naturales, ya que solamente se encontró resultados hallados, y es un desafío que nos planteamos en la bibliografía el trabajo de Da Silva Silveira (2016), en para futuros trabajos en el área de estudio. el cual describe eritrocitos con brotes además de los MN

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ARTICLE 2 - RESEARCH 21 Genotoxicidad en Eritrocitos de Tortugas

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