Anais VII Simpósio da Amazônia Meridional em Ciências Ambientais: Resumos Expandidos I – Scientific Electronic Archives. Vol 11: 2018, Special Edition ANAIS VII SIMPÓSIO DA AMAZÔNIA MERIDIONAL EM CIÊNCIAS AMBIENTAIS: RESUMOS EXPANDIDOS – VOL II. “Amazônia de transição: Origem, desenvolvimento e perspectivas futuras" Realização Apoio Sinop, MT, 2018 327 Anais VII Simpósio da Amazônia Meridional em Ciências Ambientais: Resumos Expandidos I – Scientific Electronic Archives. Vol 11: 2018, Special Edition UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO CÂMPUS UNIVERSITÁRIO DE SINOP INSTITUTO DE CIÊNCIAS NATURAIS, HUMANAS E SOCIAIS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS AMBIENTAIS NÚCLEO DE ESTUDOS DA BIODIVERSIDADE DA AMAZÔNIA MATO-GROSSENSE COMITÊ CIENTÍFICO VII SIMAMCA ADILSON PACHECO DE SOUZA ANDERSON BARZOTTO ANDRÉA CARVALHO DA SILVA CRISTIANO ALVES DA COSTA DANIEL CARNEIRO DE ABREU DÊNIA MENDES DE SOUZA VALLADÃO DOMINGOS DE JESUS RODRIGUES EDJANE ROCHA DOS SANTOS FABIANA DE FÁTIMA FERREIRA FABIANO ANDRE PETTER FELICIO GUILARDI JUNIOR FLÁVIA RODRIGUES BARBOSA GENEFER ELECIANNE RAIZA DOS SANTOS JACQUELINE KERKHOFF JEAN REINILDES PINHEIRO JULIANE DAMBROS KLEBER SOLERA LARISSA CAVALHEIRO DA SILVA LEANDRO DÊNIS BATTIROLA LUCÉLIA NOBRE CARVALHO LÚCIA YAMAZAKI LUIS FELIPE MORETTI INIESTA MARLITON ROCHA BARRETO MONIQUE MACHINER RAFAEL CAMILO CUSTÓDIO ARIAS RAFAEL SOARES DE ARRUDA RAFAELLA TELES ARANTES FELIPE RENATA ZACHI DE OSTI ROBERTO DE MORAES LIMA SILVEIRA SHEILA RODRIGUES DO NASCIMENTO PELISSARI SOLANGE MARIA BONALDO TALITA BENEDCTA SANTOS KÜNAST URANDI JOÃO RODRIGUES JUNIOR WESLEY PISIN 328 Anais VII Simpósio da Amazônia Meridional em Ciências Ambientais: Resumos Expandidos I – Scientific Electronic Archives. Vol 11: 2018, Special Edition ÍNDICE MEIÓTICO E VIABILIDADE POLÍNICA DO LIMÃO ATRAVÉS DE TESTES COLORIMÉTRICOS Patrícia Ana de Souza Fagundes1; Alex Souza Rodrigues1; Uéliton Alves de Oliveira1; Kelli Évelin Müller Zortéa2; Jakeline Santos Cochev2; Ana Aparecida Bandini Rossi4 1Granduandos do Curso de Bacharelado e Licenciatura em Ciências Biológicas, Universidade do Mato Grosso – UNEMAT- Departamento de Ciências Biológicas e Agrárias, Alta Floresta, MT, Brasil. E-mail: patrí[email protected]; [email protected]; [email protected]. 2 Doutorandas em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede Bionorte. Universidade do Estado de Mato Grosso – UNEMAT, Campus de Alta Floresta, MT, Brasil. E-mail: [email protected]; [email protected]. 4Doutora em Genética e Melhoramento de Plantas. Professora da Faculdade de Ciências Biológicas e Agrárias; PPGBioAgro; PGMP; PPGBioNorte – Universidade do Estado de Mato Grosso – UNEMAT, Campus de Alta Floresta, MT, Brasil. E-mail: [email protected] Resumo Este trabalho objetivou avaliar os aspectos reprodutivos de limão (Citrus aurantifolia spp), por meio da estimativa do índice meiótico e viabilidade polínica. A estimativa do índice meiótico (IM) foi realizada em botões florais em pré-antese para observação das células em pós-meiose. Foram preparadas oito lâminas utilizando a técnica de esmagamento da antera e coloração com orceína acética 2%. Para estimativa da viabilidade polínica, foram utilizados os corantes: lugol, reativo de Alexander e carmim acético 2%. O índice meiótico encontrado foi considerado baixo, com média de 73,55%. Foi possível avaliar a viabilidade polínica do limão com os três corantes testados. A média da viabilidade polínica foi estatisticamente diferente entre os corantes, sendo que o lugol apresentou média superior e estatisticamente diferente dos demais corantes, porém pode ter superestimado a viabilidade. O índice meiótico do limão neste estudo foi considerado baixo e está de acordo com a viabilidade polínica estimada pelos corantes carmim acético e reativo de Alexander. Não é recomendado o uso do lugol para a avaliação da viabilidade polínica do limão, uma vez que este corante pode ter superestimado a média de viabilidade polínica da espécie. Palavras-chave: Citrus aurantifolia; Biologia reprodutiva; Planta medicinal; Citoquímicos. Introdução O limão (Citrus aurantifolia spp) pertence a família Rutaceae. O gênero Citrus é conhecido por conter espécies naturais e híbridas cultivadas, incluindo frutas como: laranja, limão, toranja, lima, tangerina, bergamota e a cidra (COSTA, 2010; PIRANI, 2015). O limão é utilizado na culinária, na limpeza e na medicina popular. Segundo Ramos et al. (2003) o limão possui ação medicinal, sendo usado para curar diversas enfermidades e para suprir a deficiência de vitamina C, uma vez que as frutas pertencentes ao gênero Citrus são ricas em vitamina C. Essa planta apresenta porte médio a grande, podendo chegar a quatro metros de altura, a copa é densa, vigorosa e as folhas são verdes e lanceoladas (JUNIOR et al., 2005). A floração ocorre durante o ano todo e apresenta um grande número de flores, porém a percentagem de frutos férteis é muita baixa (JUNIOR et al., 2005). O conhecimento sobre a biologia reprodutiva das espécies auxilia no entendimento da fertilidade das plantas, sendo a viabilidade polínica um fator com influência direta sobre o 329 Anais VII Simpósio da Amazônia Meridional em Ciências Ambientais: Resumos Expandidos I – Scientific Electronic Archives. Vol 11: 2018, Special Edition sucesso da fertilização e no rendimento de culturas com reprodução sexuada (CABRAL et al. 2013; PATEL & MANKAD, 2014). Estudos sobre a viabilidade do pólen podem, portanto, auxiliar em programas de conservação e melhoramento de espécies de interesse (SEREJO et al., 2012), como o limão. O grão de pólen é formado durante a meiose e qualquer anormalidade na meiose pode levar a formação de gametas com número cromossômico desbalanceado e geralmente inviável e à baixa produtividade da planta (NASCIMENTO et al., 2014). A viabilidade polínica pode ser estimada por método direto nas técnicas de germinação in vitro ou in vivo e por métodos indiretos, baseados em parâmetros citológicos como os testes colorimétricos (ALMEIDA et al., 2011). Os métodos colorimétricos utilizam corantes químicos específicos que reagem com componentes celulares presentes nos grãos de pólen maduro, dentre os quais os mais utilizados são, o lugol, o carmim acético e o reativo de Alexander (PAGLIARINI & POZZOBON, 2004). Diante do exposto o presente estudo teve como objetivo avaliar os aspectos reprodutivos do limão, por meio da avaliação do índice meiótico e da viabilidade polínica da espécie. Metodologia O trabalho foi realizado no Laboratório de Genética Vegetal e Biologia Molecular do CETAM (Centro de Tecnologia da Amazônia Meridional) na Universidade do Estado de Mato Grosso, Campus Universitário de Alta Floresta. Botões florais em pré-antese e flores em antese foram coletados no perímetro urbano de Alta Floresta e fixados em solução Carnoy 3:1 (álcool absoluto: ácido acético) por 24 horas e depois transferidos para álcool 70% e mantido a 4ºC até o uso. As lâminas foram preparadas utilizando a técnica de esmagamento das anteras, descrita por Guerra e Souza (2002). O índice meiótico (IM) foi avaliado em botões florais em pré-antese para observação das células em pós-meiose. Foram montadas oito lâminas, coradas com orceína acética 2% e contabilizados 250 produtos pós-meióticos por lâmina, totalizando 2.000 produtos pós- meióticos. As contagens foram realizadas com auxílio de microscópio óptico binocular e em objetiva de 40x. Tétrades com quatro células do mesmo tamanho foram consideradas normais e qualquer desvio (mônade, díade, tríade e políade) foi considerado anormal. O índice meiótico foi estimado pela equação (1): (1) Para a estimativa da viabilidade polínica, foram confeccionadas oito lâminas por corante (lugol, carmim acético 2% e reativo de Alexander) e contabilizadas 250 células por lâmina. A observação foi realizada pelo método de varredura em microscópio óptico binocular com objetiva de 40x. A viabilidade polínica foi estimada por meio da percentagem de grãos de pólen viáveis obtidos pela equação (2): (2) Os dados da viabilidade polínica foram transformados em e a normalidade foi verificada pelo teste de Lilliefors. Os dados de viabilidade polínica tiveram sua significância determinada por meio do teste F. As médias significativas foram comparadas pelo teste Tukey em nível de 5% de probabilidade. As análises estatísticas foram realizadas com o auxílio do programa Genes (CRUZ, 2013). 330 Anais VII Simpósio da Amazônia Meridional em Ciências Ambientais: Resumos Expandidos I – Scientific Electronic Archives. Vol 11: 2018, Special Edition Resultados e Discussão O índice meiótico variou de 57,2% a 91,6% com média de 73,55% para a espécie (Tabela 1). A média para a espécie é considerada baixa, pois de acordo com Love (1949), para serem consideradas citologicamente estáveis às plantas devem apresentar IM acima de 90%. Tabela1. Percentual do índice meiótico (IM) dos cinco indivíduos de limão avaliados, evidenciando as irregularidades pós-meióticas (mônode, díade, tríade) e regulares (tétrade). Lâminas Mônode Díade Tríade Tétrade IM % 1 8 12 1 229 91,60 2 4 9 10 227 90,80 3 5 13 12 220 88,00 4 - 1 106 143 57,20 5 - - 140 150 60,00 6 - - 54 200 80,00 7 - - 91 159 63,60 8 - - 107 143 57,20 Média 2,12 4,37 65,12 183,87 73,55 Dentre as irregularidades observadas, as tríades ocorreram em maior frequência (Figura 1). Este tipo de irregularidade está relacionado com anormalidades durante a divisão meiótica, tais como divisão assincrônica e desorientação das fibras do fuso, entre outras (SOUZA & PEREIRA, 2011). Figura 1. Células em pós-meiótico e grãos de