DIAGNÓSTICO DE LA HEMOFILIA Y OTROS TRASTORNOS DE LA COAGULACIÓN Verifi Cación Calibración De Pipetas Y Balanzas 2
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Diagnóstico de la hemofi lia y otros trastornos de la coagulación MANUAL DE LABORATORIO Segunda edición Steve Kitchen Angus McCraw Marión Echenagucia Publicado por la Federación Mundial de Hemofilia (FMH) © Federación Mundial de Hemofilia, 2010 La FMH alienta la redistribución de sus publicaciones por organizaciones de hemofilia sin fines de lucro con propósitos educativos. Para obtener la autorización de reimprimir, redistribuir o traducir esta publicación, por favor comuníquese con el Departamento de Comunicación a la dirección indicada abajo. Esta publicación está disponible en la página Internet de la Federación Mundial de Hemofilia, en www.wfh.org. Puede solicitar copias adicionales a la FMH a: Federación Mundial de Hemofilia 1425 René Lévesque Boulevard West, Suite 1010 Montréal, Québec H3G 1T7 CANADÁ Tel.: (514) 875-7944 Fax: (514) 875-8916 Correo electrónico: [email protected] Página Internet: www.wfh.org Diagnóstico de la hemofi lia y otros trastornos de la coagulación MANUAL DE LABORATORIO Segunda edición (2010) Steve Kitchen Angus McCraw Marión Echenagucia Especialista en Especialista en (co-autor, Capacitación de Capacitación de Automatización) Laboratorio de la FMH Laboratorio de la FMH Banco Municipal de Sheffi eld Haemophilia Katharine Dormandy Sangre del D.C. and Thrombosis Centre Haemophilia Centre Universidad Central de Royal Hallamshire and Thrombosis Unit Venezuela Hospital The Royal Free Hospital Caracas, Venezuela Sheffi eld, U.K. London, U.K. en representación del COMITÉ DE CIENCIAS DE LABORATORIO DE LA FMH Presidente (2010): Steve Kitchen, Sheffi eld, U.K. Vicepresidente: Sukesh Nair, Vellore, India Esta edición ha sido revisada por los siguientes especialistas, quienes al momento de su redacción eran miembros del Comité de Ciencias de Laboratorio de la Federación Mundial de Hemofi lia: Mansoor Ahmed Clarence Lam Norma de Bosch Sukesh Nair Ampaiwan Chuansumrit Alison Street Marión Echenagucia Alok Srivastava Andreas Hillarp Algunos capítulos también fueron revisados por miembros del Comité sobre la enfermedad de von Willebrand y trastornos de coagulación poco comunes de la Federación Mundial de Hemofi lia. Reconocimiento: Algunos de los métodos descritos se basan en procedimientos operativos estándar para laboratorio diseñados en el Centro de Hemofi lia de Sheffi eld por Annette Bowyer, a quien agradecemos profundamente su aporte. Los autores y la Federación Mundial de la Hemofi lia están muy agradecidos a Pura Lawler por la revisión de esta traducción. Aviso importante: Los productos comerciales que se mencionan en este manual deben entenderse como ejemplos pertinentes al momento de la redacción y no suponen el respaldo de la Federación Mundial de Hemofi lia (FMH), los autores o el Comité de Ciencias de Laboratorio de la FMH. Tampoco signifi ca que cualquier otro producto sea inadecuado o poco confi able. Los fabricantes de los materiales que se usan en las pruebas de laboratorio pueden modifi car su composición, por lo que al momento de redactarse esta edición no se puede predecir el grado de confi abilidad de tales productos en el futuro. Información de contacto de los autores [email protected] [email protected] Índice 1 Equipamiento de laboratorio .................................................................................... 1 2 Verifi cación calibración de pipetas y balanzas .................................................... 3 3 Seguridad en el laboratorio ....................................................................................... 5 4 Obtención de muestras y variables preanalíticas ............................................. 11 5 Control interno de calidad y evaluación externa de calidad ......................... 14 6 Técnica de inclinación manual del tubo de ensayo .......................................... 20 7 Preparación y calibración de un pool de plasma normal (PPN) .................. 22 8 Cómo determinar un rango de referencia normal ............................................ 24 9 Reactivos ...................................................................................................................... 28 10 Recuento de plaquetas ............................................................................................. 30 11 Tiempo de sangrado.................................................................................................. 35 12 Tiempo de protrombina (TP) .................................................................................. 37 13 Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) ........................................ 40 14 Ensayos de mezcla para una investigación exhaustiva de los TP y TTPA anormales ......................................................................................................... 45 15 Tiempo de trombina .................................................................................................. 49 16 Tiempo de trombina en presencia de sulfato de protamina para la detección de heparina ............................................................................................... 51 17 Tiempo de reptilasa ................................................................................................... 52 18 Fibrinógeno (ensayo de Clauss modifi cado) ...................................................... 55 19 Eliminación de la heparina del plasma ............................................................... 58 20 Ensayo de relación fi brinógeno-antígeno por inmunodifusión radial (IDR) .................................................................................................................. 60 21 Prueba de rastreo del factor XIII ............................................................................ 62 22 Ensayos de factor basados en el tiempo de protrombina (factores II, V, VII o X) ............................................................................................... 64 23 Ensayos de factor basados en el TTPA (ensayo de una etapa de los factores VIII:C, IX, XI y XII) .................................................................................... 67 24 Ensayos de factor VIII:C en crioprecipitado ...................................................... 70 25 Ensayo de coagulación de dos etapas para el factor VIII:C ........................... 71 25.1 Producción del reactivo combinado para el ensayo de dos etapas de factor VIII:C .......................................................................................................... 73 26 Ensayo por método cromogénico del factor VIII:C .......................................... 76 27 Ensayo de una etapa para análisis de precralicreína y cininógeno de alto peso molecular en la vía intrínseca .............................................................. 79 28 Prueba de rastreo de los inhibidores de los factores de la coagulación basado en el TTPA ............................................................................. 81 29 Ensayo de la actividad del cofactor ristocetina/del factor von Willebrand (FvW:RCo o FvW:Act) ....................................................................... 83 29.1 Preparación de plaquetas fi jadas ........................................................................ 85 30 Ensayo del antígeno del factor von Willebrand (FvW:Ag) por método ELISA ............................................................................................................. 87 31 Ensayo de enlace al colágeno del factor von Willebrand (FvW:CB) .......... 90 32 Ensayo de enlace del factor VIII para el diagnóstico de la variante Normandía de la enfermedad de von Willebrand ........................................... 93 33 Análisis multimérico del FvW ............................................................................... 99 34 Medición cuantitativa de los inhibidores del factor VIII .............................. 108 35 Ensayo de los inhibidores del factor IX ............................................................. 113 36 Ensayo de la actividad del factor XIII ................................................................ 114 37 Anticoagulantes lúpicos y anticuerpos antifosfolípidos .............................. 117 38 Tiempo de veneno de víbora Russell diluido (TVVRd) ............................... 120 38.1 Preparación de plaquetas lavadas para la prueba de TVVRd ...................... 123 39 Pruebas de la función plaquetaria ...................................................................... 124 39.1 Retracción del coágulo ....................................................................................... 125 39.2 Medición de la agregación plaquetaria ........................................................... 126 40 Liofi lización del plasma ......................................................................................... 135 41 Evaluación y uso de coagulómetros ................................................................... 137 42 Análisis de genética molecular ............................................................................ 144 Equipamiento de laboratorio 1 Todo laboratorio que se dedique al diagnóstico y tratamiento de los trastornos de la coagulación y que utilice todas las técnicas descritas en este manual, o algunas de ellas, requerirá, como mínimo, un equipamiento básico. La evaluación y el uso de coagulómetros semiautomáticos y totalmente automáticos se tratan en el capítulo 41. EL EQUIPAMIENTO BÁSICO DEBERÁ CONSTAR DE: Un refrigerador para almacenar reactivos a 4 °C Lo normal es mantener los reactivos a una temperatura de 2 °C a 8 °C, salvo indicación