Materiais E Métodos 35
Total Page：16
File Type：pdf, Size：1020Kb
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE – UFRN CENTRO DE BIOCIÊNCIAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICA ANA KARINA DE LIMA NASCIMENTO ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIPROLIFERATIVA DE EXTRATOS DE FOLHAS DE Plukenetia volubilis L. (EUPHORBIACEAE) NATAL 2013 ANA KARINA DE LIMA NASCIMENTO ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIPROLIFERATIVA DE EXTRATOS DE FOLHAS DE Plukenetia volubilis L. (EUPHORBIACEAE) Orientadora: Prof. Katia Castanho Scortecci Co-Orientador: Prof. Hugo Alexandre Rocha Dissertação apresentada ao Programa de Pós Graduação em Bioquímica da Universidade Federal do Rio Grande do Norte como requisito para obtenção do título de Mestre em Bioquímica. NATAL 2013 Ana Karina de Lima Nascimento Página 2 Ana Karina de Lima Nascimento Página 3 ANA KARINA DE LIMA NASCIMENTO ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIPROLIFERATIVA DE EXTRATOS DE FOLHAS DE Plukenetia volubitis L. (EUPHORBTACEAE) Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em Bioquímica da Universidade Federal do Rio Grande do Norte como requisito parcial para obtenção do título de Mestre em Bioquímlca. Aprovado em: 1 810312013 BANCA EXAMINADORA Íe de Oliveira Rocha nto de Bioquímica - UFRN Co-orientador Profa. Dra. Yara Alves Cursino dos Santos Departamen de Biociências - USP Prof. Dr. Va Departamento de Mi lbio e Parasitologia - UFRN Exa inador DEDICATÓRIA Dedico esta obra a minha família, em especial a minha mãe Maria Nazaré de Lima, por todo amor, dedicação e principalmente por ser meu maior exemplo de garra e perseverança. Ao meu namorado João Batista Nóbrega pela paciência e amor. Sem o apoio de vocês teria a batalha teria sido muito mais árdua. AGRADECIMENTOS AGRADECIMENTOS À Deus por me conceder paciência e sabedoria para conclusão deste trabalho, a ele devo todas as vitórias alcançadas. À minha família por todo apoio e confiança, em especial a minha mãe Nazaré Lima por todo seu esforço, pelo apoio e por ser esse exemplo de mulher batalhadora que me incentiva a lutar pelos meus objetivos. Ao meu pai Luís Antônio, pela confiança e orgulho depositados em mim, apesar de não transparecer. A minha vozinha (in memoriam) que mesmo não estando presente entre nós, tenho certeza que de onde estiver continua intercedendo pelas minhas vitórias. Ao meu namorado João Nóbrega, pelo apoio incondicional, pela paciência e principalmente por permanecer do meu lado nos momentos mais difíceis do mestrado, sempre me encorajando e fazendo com que eu acreditasse na minha capacidade. Sem seu apoio tenho certeza que a batalha teria sido muito mais árdua! À minha orientadora a Prof. Dr. Kátia Castanho que mesmo sem me conhecer me concedeu a oportunidade de fazer parte do seu grupo de pesquisa. Obrigada Kátia por ter depositado em mim confiança e credibilidade. Ao Prof. Dr. Hugo Alexandre Rocha, por ter me recebido de portas abertas em seu laboratório epela ajuda incondicional na realização deste projeto. Ao Programa de Pós-graduação em Bioquímica da Universidade Federal do Rio Grande do Norte por oferecer as condições necessárias para o desenvolvimento deste trabalho. À secretária da pós-graduação em Bioquímica Margarita Alexandre Mavromatis por sempre ser prestativa, pelo seu exemplo de competência e organização. À Coordenação de Pessoal de Nível Superior (CAPES) pelo financiamento desta pesquisa. Ana Karina de Lima Nascimento Página 4 Aos integrantes do Grupo de Plantas do LBMG, em especial “Helenas” (Rsrs), amigas que espero levar para o resto da minha vida. À Cris, por compartilhar comigo os momentos de alegrias e também os de estresse durante todo o mestrado, o que seria de mim se não tivesse você pra dividir as lamentações heim amiga? (rsrs). À Amanda, por todos os conselhos, pelas conversas e peloseu jeito alegre de ser que nos contagia, obrigada friend!! À Cecília, minha companheira desde a graduação, obrigada por sempre está disposta a me ajudar, não só a mim, mas a todos do grupo, sei que você tem um coração enorme e te admiro por isso, espero poder sempre contar com sua amizade. À Kellya, pelos momentos de descontração, por nos fazer rir até mesmo no fim de um dia de trabalho cansativo no laboratório. À Renata, por nos transmitir calma com seu jeito paciente de ser. À Ingrid, a última sobrevivente do trio das “Jéssicas” (rs) pelas ajudas nos experimentos.As demais “Jessicas” também, Jéssica Vitória e Nayana que apesar de não fazerem mais parte do grupo, me ajudaram no período das extrações. Aos demais integrantes, Isabel, Nathalia, Sara, Nildiane e Gabriel. Á Naldo e Valeska, que não fazem mais parte do grupo, mas que me ajudaram muito no início da minha vida acadêmica, principalmente Valeska com quem aprendi os primeiros passos no laboratório, obrigada pela sua paciência em ensinar. Ao pessoal do Biopol, por toda ajuda cedida na realização deste trabalho, tenho muito a agradecer a todos vocês, seja aos que estiveram diretamente me acompanhando nos experimentos ou aqueles que simplesmente estiveram dispostos a esclareceralgumas dúvidas, fica aqui minha eterna gratidão. A Raniere por me acompanhar nos experimentos com células. A Rafael pela ajuda nos testes antioxidantes. À Ruth, Dayane, Karol, Moacir e Cinthia pelos favores na cultura de células. À Jailma uma pessoa que não mede esforços pra ajudar o próximo. E aos demais integrantes do Biopol: Daniel, Max, Vinícus, Rony, Sara, Letícia, Mariana, Joana, Monique, Almino, Pablo, Arthur e Marília por sempre me receberem tão bem no laboratório. Desculpa se esqueci de citar alguém, os agradecimentos se estende a toda essa família que sempre esteve disposta a me ajudar. Acredito que o segredo do Ana Karina de Lima Nascimento Página 5 sucesso de um trabalho em equipe está na união, e isso vocês tem de sobra! À Nednaldo que apesar de pegar no meu pélogo quando comecei os experimentos no Biopol, com seu jeito metódico, semprecobrandopra eu pesquisasse e lêsse milhares deartigos. Na época confesso que minha vontade era fugir toda vez que o encontrava nos corredores do CB ou do departamento de Bioquímica (rsrs), mas hoje sou grata por toda cobrança, e reconheço que isso me fez amadurecer bastante na pesquisa. Obrigada Ned! À turma do mestrado por dividir comigo os momentos que julgo terem sido os mais “tensos” (períododas disciplinas). À Richele, minha companheira dos seminários em dupla, pelo seu exemplo de determinação e pela amizade construída, espero que perdure por muito tempo. À Daniel Chaves pelos seus jargões que alegravam a turma (Sucesso!). À Heleni por adoçar nossas vidas e por nos fazer engordar um pouquinho com seus dotes culinários. À Cris pelos milagrosos bolos de cenoura que amolece corações (rsrs). À Larissa e Ivanice por compartilhar as alegrias, angústias e até os choros (rs). À Fernanda pela sua tranquilidade que nos contagia. À Patrícia por ser um exemplo de didática, competência e de elegância (rs). À Tafarel, Thiago Barros, Thiago Costa, Hugo, Anderson e Raphael Russi, por todos os momentos de estudo e de descontração. Enfim a todos da turma do mestrado em Bioquímica (2011). Aos professores do departamento de Bioquímica por todos os conhecimentos transmitidos. Á professora Silvana Zucolotto do Departamento de Farmácia (UFRN) pela colaboração na realização dos experimentos de triagem fitoquímica. E à sua aluna Júlia, por ter se disponibilizado a me ajudar com esses experimentos, mesmo em período de TCC. Obrigada pelo apoio! Ana Karina de Lima Nascimento Página 6 Aosprofessores da banca de qualificação (Matheus Pedrosa, Tatjana Keesen e Silvana Zucolotto) pelas sugestões que contribuíram enormemente para conclusão deste trabalho. À minha amiga de infância Anyelle Palhares, pela ajuda com as regras da ABNT. Obrigada amiga, sei que apesar da distância posso contar sempre com você, saiba que a recíproca é verdadeira! Aos amigos Kesinho, Pablo, Luciana e Cecília por todo apoio desde a graduação. Pessoas que sempre depositaram em mim confiança e isso foi muito importante nessa trajetória! Aos meus compadres Glícia e João Paulo pela amizade, confiança e por dividirem comigo momentos felizes. À minha prima-irmã Ana Catarina por sempre me apoiar e por entender minha ausência quando tinha que me dedicar ao mestrado. Às minhas afilhadas Ana Beatriz, Maria Clara e Maria Vitória que mesmo sem entender nada, me dão forças pra continuar! Enfim, a todos que contribuíram de forma direta ou indireta para realização deste trabalho. Ana Karina de Lima Nascimento Página 7 “O que vale na vida não é o ponto de partida e sim a caminhada. Caminhando e semeando, no fim terás o que colher.” (Cora Coralina) Ana Karina de Lima Nascimento Página 8 RESUMO Plukenetia volubilis, conhecida popularmente como sacha incha ou amêndoa lopo, é uma planta oleaginosa e trepadeira pertecente a família Euphorbiaceae. Suas sementes apresentam alto valor nutritivo e suas folhas são utilizadas pela população amazônica para tratar doenças de pele, contudo essa ação não é comprovada cientificamente. Dentro deste contexto, no presente trabalho foi realizada uma prospecção química e biológica de diferentes extratos obtidos das folhas de P. volubilis: extrato aquoso (EA), metanólito (EM), etanólico (EE), clorofórmico (EC) e hexânico (EH). A triagem fitoquímica foi realizada por meio de reações químicas de identificação e análise por cromatografia em camada delgada (CCD), utilizando diferentes eluentes e reveladores. Como parte das análises de constituição química dos extratos, foram realizadas dosagens de compostos fenólicos, açúcares totais e proteínas. Em relação às atividades biológicas foi avaliada a capacidade antioxidante dos extratos e seus efeitos sob células tumorais e normais. Com os resultados obtidos foi possível detectar por meio das reações químicas a presença de compostos fenólicos, flavonóides, saponinas e alcalóides. Por meio da análise de CCD foi possível verificar a presença de compostos com estruturas de terpenos, polifenóis e flavonóides. O extrato metanólico (EM) apresentou uma banda de coloração verde e Rf 0,65 similar ao padrão de flavonóide canferol. Com as metodologias de dosagem química foi observada uma elevada quantidade de açúcares totais nos extratos de P. volubilis.