Identificação De Genes Epigeneticamentente Inativados Em Carcinoma Epidermóide De Cavidade Oral
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IDENTIFICAÇÃO DE GENES EPIGENETICAMENTENTE INATIVADOS EM CARCINOMA EPIDERMÓIDE DE CAVIDADE ORAL CLÁUDIA MARIA PEREIRA Dissertação apresentada à Fundação Antônio Prudente para a obtenção do título de Mestre em Ciências Área de Concentração: Oncologia Orientador: Prof. Dr. André Lopes Carvalho Co-Orientador: Dr. André Luiz Vettore de Oliveira São Paulo 2007 FICHA CATALOGRÁFICA Preparada pela Biblioteca da Fundação Antônio Prudente Pereira, Cláudia Maria Identificação de genes epigeneticamentente inativados em carcinoma epidermóide de cavidade oral / Cláudia Maria Pereira – São Paulo, 2007. 93p. Dissertação (Mestrado)-Fundação Antônio Prudente. Curso de Pós-Graduação em Ciências - Área de concentração: Oncologia. Orientador: André Lopes Carvalho Descritores: 1. CAVIDADE ORAL. 2. CARCINOMA EPIDERMOIDE. 3. METILAÇÃO. 4. DEOXICITIDINA. “Comece fazendo o que é necessário, depois o que é possível e de repente você estará fazendo o impossível” São Francisco de Assis DEDICATÓRIA Dedico a minha dissertação primeiramente à Santíssima Trindade e a Nossa Senhora, que estiveram sempre ao meu lado, me direcionando e protegendo durante toda esta jornada. Dedico também aos meus pais Eure e Célia, por todo apoio, amor e carinho e por me ajudarem a conquistar este objetivo tão sonhado. Dedico aos meus irmãos (Antônio, Fernando, Carlos, Roberto e Caio), aos meus sobrinhos e cunhadas, que estiveram sempre presentes, me apoiando, me ajudando a enfrentar todas as dificuldades e que tornaram possível a execução deste mestrado. Dedico à minha querida Tia Santinha, minha segunda mãe, por todo carinho, pelos deliciosos doces e pelas inúmeras orações que a mim dedicou, sempre pedindo a Deus pela minha proteção e saúde. Dedico ao meu querido Vinícius por toda sua compreensão, amor, carinho e apoio na realização deste sonho. Dedico ao meu orientador Prof. Dr. André Lopes Carvalho e ao meu co-orientador Dr. André Luiz Vettore de Oliveira, por confiarem e acreditarem em mim durante estes dois anos. AGRADECIMENTOS Agradeço ao meu orientador Prof. Dr. André Lopes Carvalho pela sua paciência, pelos seus ensinamentos, tanto no laboratório de genética, quanto no ambulatório de cabeça e pescoço, pela oportunidade de cursar o Mestrado na Fundação Antônio Prudente, sempre me incentivando a ultrapassar fronteiras, a atingir novos horizontes, a vencer novos desafios, por toda calma e confiança em mim depositadas. Agradeço ao meu co-orientador Dr. André Luiz Vettore de Oliveira que desde nosso primeiro contato acreditou que eu pudesse realizar trabalhos tão distintos de minha área de atuação, por ter me acolhido na equipe do Laboratório de Genética do Câncer; pelos ensinamentos que me transformaram de cirurgiã-dentista à bióloga molecular e por ter me ensinado a verdadeira postura dentro de um laboratório. Agradeço a Dra. Addah Regina Freire, pois através de suas mãos, eu tive a oportunidade de conhecer a Fundação Antônio Prudente, um centro de excelência no ensino. Pela sua bondade, por ser um exemplo de profissional capacitado e preocupado com o bem-estar daqueles que mais padecem. Agradeço ao Prof. Dr. Luiz Paulo Kowalski por ter me dado a oportunidade de freqüentar o Hospital do Câncer, me permitindo entender mais profundamente o paciente portador de câncer. Agradeço à Andréa Seixas por ter dedicado horas de seu trabalho (inclusive aos sábados e domingos) para a realização de experimentos extremamente essenciais à minha tese, pela sua alegria, enorme boa- vontade e companhia nos almoços no Roda & Luz. Agradeço a Alex Simões Satto que teve como incumbência, apresentar-me ao laboratório de genética do câncer, me ensinado a executar os primeiros protocolos e pelas horas de dedicação à minha pesquisa. Agradeço à Maria Cristina do laboratório da Dra. Ana Maria Camargo, por todo apoio a mim dedicado durante as fases mais difíceis da minha pesquisa. Por ter me ajudado, mesmo à distância, a superar enormes barreiras e dificuldades, tornando-se uma peça-chave para o desfecho do meu trabalho. Agradeço à querida amiga Danielle Renzoni pelo carinho com que me recebeu no laboratório, me ensinando os primeiros passos da biologia molecular, pelas longas e gostosas conversas, pela sua amizade e por ter me apresentado à cidade de São Paulo. Agradeço à minha querida amiga, colega de laboratório e irmã-gêmea Valéria Cristina Andrade pelas noites incansáveis passadas no laboratório, entre experimentos exaustivos e muita alegria. Pela sua amizade, por ter me socorrido nas piores horas de sufoco em que me encontrei e pela sua companhia nos momentos de solidão. Agradeço à querida amiga, colega de apartamento e laboratório Roberta Cardim Lessa pelos desabafos, comemorações, pelos passeios, pela ajuda nos experimentos, pela sua amizade e pelos cuidados a mim dedicados nas noites em que me encontrei doente e febril. Agradeço à querida amiga e colega de laboratório Ana Carolina de Carvalho, nossa mascote do laboratório, pela sua amizade, solidariedade, pela sua alegria, companhia, pelo carinho e boa-vontade, sempre presente e disponível em importantes etapas da minha pesquisa. Agradeço à amiga e colega de laboratório Viviane Sonaglio por seu carinho, sua amizade, por sua alegria, pelo seu profissionalismo, pela sua companhia nos cafés do Joinha, pelas consultas médicas e principalmente por dar a luz à princesinha do laboratório, a Ana Luiza. Agradeço a mais nova amiga Mev Hernandez pelo grande e importante apoio a mim dedicados nos últimos meses do mestrado, pela sua amizade, pela solidariedade, pelo seu companheirismo e por sua alegria. Agradeço ao amigo e colega de laboratório Luís Sakamoto pela sua enorme boa-vontade, companheirismo, gentileza e paciência (principalmente paciência), sempre me ajudando nas dificuldades que me deparei durante os meus experimentos. Agradeço às amigas e colegas de laboratório Mariana Retori e Dra. Ivete, que mesmo desfrutando de pouco tempo de suas companhias, me ajudaram a superar barreiras como a insegurança e com o medo de transpor novos horizontes. Agradeço à amiga e colega de laboratório Luciane Kagohara pela amizade, alegria, pelas brincadeiras, pelas dicas e orientações durantes os experimentos, necessários para os meus primeiros passos no laboratório. Agradeço aos colegas de laboratório Fábio Piccoli pela sua alegria, pelas conversas e ensinamentos; Fabrício Carvalho, pelos ensinamentos e pela descontração; Roberta Félix, por seu enorme carinho e vontade de ajudar; à Maria Isabel por ser exemplo de profissional e mulher; Fernanda Góes por todo carinho e apoio; à mineira Manoella pelos “causos” compartilhados; à Luciana Wernersbach pela sua gentileza e presteza; à Érica por sua alegria e descontração; Benjamim Heck pela sua amizade e sinceridade; Mariana Brait e Simone pelo carinho e pelas sugestões e ao Émerson por sua amizade e dedicação. Ao Dr. Filipe Rodrigues Silva (CENARGEM-EMBRAPA) pelo trabalho desenvolvido nas análises de bioinformática que foram fundamentais para meu trabalho Agradeço ao Dr. Mauro Ikeda pela sua amizade, educação e por todos os ensinamentos durante o atendimento ambulatorial do paciente portador de câncer de cabeça e pescoço. Aos funcionários do Departamento de Anatomia Patológica, em nome do Dr. Fernando Soares, pela importante colaboração e contribuição com as amostras tumorais. Agradeço ao Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital do Câncer A.C. Camargo pela importante colaboração. Aos funcionários e alunos do Laboratório da Dra. Dirce Carraro, pelo acolhimento, pelo carinho e pela extração do RNA das amostras tumorais, tão importantes para o meu trabalho. Agradeço às funcionárias da Biblioteca (Suely, Rose, Francyne, Elaine e Erika) que formam uma equipe maravilhosa, prestativa, competente e que foi essencial na realização do meu mestrado. Pela formatação da dissertação e pelas correções feitas na bibliografia. A toda equipe do Serviço de Arquivo Médico e Estatístico do Hospital do Câncer A.C. Camargo (S.A.M.E.), na pessoa da Dona Hirde Contezine, pelo acolhimento, pela dedicação, pelo excelente trabalho, pelos ensinamentos e pelos bate-papos gostosos. Agradeço ao Dr. Benedito Mauro Rossi, meu médico, pela sua humildade, pelo enorme apoio e carinho a mim dedicados e por ter me ajudado durante momentos difíceis do mestrado. Às queridas amigas Rai e Júlia pela atenção, simpatia, amizade, por toda ajuda e ensinamentos. Agradeço a CAPES pela bolsa de estudos à mim concedida e à FAPESP pelo apoio financeiro. Agradeço ao Instituto Ludwig pela oportunidade de desenvolver a minha pesquisa no Laboratório de Genética do Câncer, a toda sua equipe pelo convívio diário e por toda ajuda durante a realização da minha pesquisa. Agradeço à Secretaria de Pós-graduação da Fundação Antônio Prudente (Dr. Luís Fernando Lima Reis, Ana Maria e Luciana Pitombeira) pelo carinho, pelos cuidados, pela compreensão, por estarem sempre atentos às necessidades dos alunos e pela presteza. Agradeço ao Dr. Ricardo Gómez Santiago e Dr. Raphael Bessa pela colaboração, pelo tempo atribuído à leitura dos meus relatórios e pelas importantes sugestões. Agradeço a todos que de alguma forma contribuíram para a realização deste trabalho. Agradeço à Banca Julgadora de Dissertação pelo tempo atribuído na leitura desta dissertação. AGRADECIMENTOS ESPECIAIS Agradeço a Deus e aos meus queridos Santo Antônio de Pádua, Santo Antônio de Santana Galvão e Santa Terezinha que me apoiaram em momentos valiosos e me socorreram nas situações difíceis. Agradeço aos meus pais, dos quais eu tenho bastante orgulho, pelo esforço que empregaram para tornar este