ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﻳﻲﺷﻨﺎﺳﺎ ﺧﺼﻮﺻﻴﻴو ﺗﻌ ﺑﺎﻛﺘﺮﻴﻦ يﻬﺎﻳﺎت ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺗﻮﻟ ﻴ يآﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻴﺪروﻟﺘﻴﻫ ﻚ ﻴﺪروﻟﺘﻴﻫ يآﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻴ ﺟﺪا ﺷﺪه از درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ
3 2 1 ﺑﺎﺑﺎوﻟﻴﺎنﺣﻤﻴﺪ ، ﻣﺤﻤﺪ ﻋﻠﻲ آﻣﻮزﮔﺎر *، و اﺣﻤﺪ ﻋﻠﻲ ﭘﻮرﺑﺎﺑﺎﺋﻲ
1 هﺗﻬﺮان، داﻧﺸﮕﺎ ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﻜﻲ ﺑﻘﻴﻪ اﷲ ،)ﻋﺞ( ﻣﺮﻛﺰ ﺗﺤﻘﻴﻘﺎت ﺑﻴﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮژي ﻛﺎرﺑﺮدي و ﻣﺤﻴ ﺖﻂ زﻳﺴ ﺖﻂ زﻳﺴ
2 ﺗﻬﺮان، داﻧﺸﮕﺎه ﺗﻬﺮان ، ﭘﺮدﻳﺲ ﻋﻠﻮم ، داﻧﺸﻜﺪه زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ ، ﮔﺮوه ﻣﻴﻜﺮوﺑﻴﻮﻟﻮژ ي، آزﻣﺎﻳﺸﮕﺎه اﻛﺴﺘﺮﻣﻮﻓﻴﻞ
3 ﻗﻢ، داﻧﺸﮕﺎه آزاد اﺳﻼﻣﻲ، داﻧﺸﻜﺪه ﻋﻠﻮم ﮔﺮوه ﻣﻴﻜﺮوﺑﻴﻮﻟﻮژي
:ﺗﺎرﻳﺦ درﻳﺎﻓﺖ 20/12/86 ﺗﺎرﻳﺦ ﭘﺬﻳﺮش: 87/9/6
ﻴﺪهﭼﻜ ﻴﺪهﭼﻜ
درﻳﺎﭼﻪ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻳﻜﻲ از درﻳﺎﭼﻪ ﻫﺎ ي ﺷﻮر در ﻣﻨﻄﻘﻪ ﻛﻮﻳﺮ ﻣﺮﻛﺰي اﻳﺮان ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ. اﻳﻦ درﻳﺎﭼﻪ ﺷﻜﻠﻲ ﺷﺒﻴﻪ ﺑﻪ ﻳﻚ ﻣﺜﻠﺚ دارد أﻛﻪ ر ﺑس آن ﻪ ﺳﻤﺖ ﺷﻤﺎل ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ. ﻃﻮل ﻗﺎﻋﺪه اﻳﻦ ﻣﺜﻠﺚ 35 ﻛﻴﻠﻮﻣﺘﺮ و ارﺗﻔﺎع آن 38 ﻛﻴﻠﻮﻣﺘﺮ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ. ﻏﺮﺑﺎل ﮔﺮي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎ از ﻧﻘﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ درﻳﺎﭼﻪ ﻣﻨﺠﺮ ﺑﻪ ﺟﺪاﺳﺎزي61 ﺑﺎﻛﺘﺮي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و 22 ﺑﺎﻛﺘﺮي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺗﻮاﻧﺎ ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻫﻴﺪروﻻزﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺷﺪ اﻳﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎ ﺑﻪ ﻃﻮر اﭘﺘﻴﻤﻢ در ﻣﺤﻴﻂ ﺑﺎ 15- 5 درﺻﺪ ﻧﻤﻚ ، دﻣﺎي 37-34 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد و pH 2/7 رﺷﺪ ﻣﻲ ﻛﻨﻨﺪ ﺗﻌﺪاد ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، ﻟﻴﭙﺎز، DNAase، اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز، ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز، ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﭘﻜﺘﻴﻨﺎزﺳﻠ ﻮﻻز، ، ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز و ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ﺑﻪ ﺗﺮﺗﻴﺐ 32، 20، 27، 40، 40، 9، 11، 24، 16 و 20 ﻣﻴﺎنﺑﻮد ﻛﻪ در اﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ ﺗﻌﺪادي ﻧﻴﺰﻗﺎدر ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻣﺨﻠﻮﻃﻲ از اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﺑﻮدﻧﺪ . آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺑﻴﺸﺘﺮﻳﻦ ي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺷﺪه در ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي DNase و اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز و در ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز و در ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎزو ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز ﺑﻮدﻧﺪ . . ﻛﻤﺘﺮﻳﻦ ﻣﻴﺰان آﻧﺰﻳﻢ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺷﺪه ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ آﻧﺰﻳﻢ ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز ﺑﻮد . از اﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ، ﭼﻨﺪﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪ ﺑﺎ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺗﻨﻮﻋﻲ از آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ارزﺷﻤﻨﺪ اﻧﺘﺨﺎب ﺷﺪﻧﺪ ﻛﻪ ﺷﺎﻣﻞ AMB1 (8 آﻧﺰﻳﻢ و) AMB7, AMB10, AMB1(7 آﻧﺰﻳﻢ ) و ,AMB5, AMB6, AMB11 AMB13 (6 آﻧﺰﻳﻢ و) AMB2, AMB3, AMB8, AMB9 (5 آﻧﺰﻳﻢ ) و AMB4, AMG1 (4 آﻧﺰﻳﻢ ) و AMC1, AMC2 (3 آﻧﺰﻳﻢ ) و AMG2 ،AMC17 ،AMC8 ،AMC3 (2 آﻧﺰﻳﻢ ) و AMG3 (1 آﻧﺰﻳﻢ .ﺑﻮدﻧﺪ) ﻧﻬﺎﻳﺘﺎً ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ﻋﻼوه ﺑﺮ ﺻﻔﺎت ﻓﻨﻮﺗﻴﭙﻲ از ﻧﻈﺮ ﻬﺎيوﻳﮋﮔﻴ ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ و ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ ﺑﺎ ﺗﻜﻨﻴﻚ 16S rDNA ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ و ﺗﻌﻴﻴﻦ ﺗﻮاﻟﻲ ﺷﺪﻧﺪ، ﻛﻪ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﮔﺮم ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻛﻪ ﻣﺜﺒﺖ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺴﻬﺎي Nesterenkonia ، Halobacillus, Thalassobacillus, Bacillus, Salinicoccus، Staphylococcus ،Marinococcus ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎيو ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺴﻬﺎي Idiomarina, Salicola و Halomonas ﺑﻮدﻧﺪ يﺑﺎﻛﺘﺮ. ﺟﻨﺲ Halobacillus ﻓﺮاوان يﺗﺮﻳﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮ ﺟﺪا ﺷﺪه از درﻳﺎﭼﻪ و ﺑﻴﺸﺘﺮﻳﻦ ﺗﻨﻮع آﻧﺰﻳﻢ را ﻧﺸﺎن داد . .
واژه ﻫﺎي ﻛﻠﻴﺪي: اﻛﺴﺘﺮﻣﻮﻓﻴﻞ، ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ، ي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ، ﻏﺮﺑﺎل ﮔﺮي ، ﻏﺮﺑﺎل ﮔﺮي
*ﻧﻮﻳﺴﻨﺪه ﻣﺴﺌﻮل، ﺗﻠﻔﻦ ﺗﻤﺎس 02161112723، ﭘﺴﺖ اﻟﻜﺘﺮوﻧﻴﻚ: [email protected]
ﻣﻘﺪﻣﻪ ﻣﻘﺪﻣﻪ
درﻳﺎﭼﻪ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻳﻜﻲ از درﻳﺎﭼﻪ ﻫﺎ در ﻣﻨﻄﻘﻪ ﻛﻮﻳﺮ ﺳﻤﺖ ﺷﻤﺎل ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ . ﻃﻮل ﻗﺎﻋﺪه اﻳﻦ ﻣﺜﻠﺚ 35 ﻛﻴﻠﻮﻣﺘﺮ ﻣﺮﻛﺰي اﻳﺮان و ﺑﺰرﮔﺘﺮﻳﻦ ﭘﻼﻳﺎ ي ﺷﻮر در اﻳﺮان اﺳﺖ . اﻳﻦ و ارﺗﻔﺎع آن 38 ﻛﻴﻠﻮﻣﺘﺮ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ . ﻋﻤﻖ ﻧﻤﻚ آن ﺑﻴﻦ 54 - درﻳﺎﭼﻪ ﺷﻜﻠﻲ ﺷﺒﻴﻪ ﺑﻪ ﻳﻚ ﻣﺜﻠﺚ دارد، ﻛﻪ ر أس آن ﺑﻪ 5 ﻣﺘﺮ ﻣﺘﻐﻴﻴﺮ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ ﻛﻪ ﺗﻮﺳﻂ ﻻﻳﻪ ﻫﺎي ﺧﺎك رس از
24 24
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﻳﻜﺪﻳﮕﺮ ﺟﺪا ﺷﺪه اﻧﺪ. ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﺗﺸﻜﻴﻞ دﻫﻨﺪه ﻧﻤﻚ (اﻧﺪ 23)، در اﻳﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﺗﻨﻮع زﻳﺴﺘﻲ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي درﻳﺎﭼﻪ، ﻣﻮادي از ﻗﺒﻴﻞ ﺳﺪﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ، ﺳﺪﻳﻢ ﺳﻮﻟﻔﺎت، دوﺳﺖ ﺟﺪا ﺷﺪه از ﺑﺨﺸﻬﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ در درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران ﻣﻨﻴﺰﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ، ﻣﻨﻴﺰﻳﻢ ﺳﻮﻟﻔﺎت و .... ﺑﻮده و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﻓﺼﻮل و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﺗﻮﺻﻴﻒ .ﺷﺪه اﺳﺖ .ﺷﺪه اﺳﺖ ﺳﺎل ﺧﺸﻚ و اﺷﺒﺎع از ﻧﻤﻚ اﺳﺖ. وﻳﮋﮔﻴﻬﺎي ﺷﺎﺧﺺ اﻳﻦ ﺷﺎﺧﺺ ا وﻳﮋﮔﻴﻬﺎي ﻣﻮاد و روﺷﻬﺎ روﺷﻬﺎ ﻣﻮاد و درﻳﺎﭼﻪ از ،ﺟﻨﺒﻪ ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ ﺑﺎﻻ ﺑﻮدن ﻋﻴﺎر ﻣﻨﻴﺰﻳﻢ آن ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﺳﺎﻳﺮ درﻳﺎﭼﻪ ﻫﺎ و ﺷﻮراﺑﻪ ﻫﺎي ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﺷﺪه در اﻳﺮان، از ﻧﻤﻮﻧﻪ ﮔﻴﺮي از ﻧﻘﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ درﻳﺎﭼﻪ ﻣ: ﺑﻪ ﻨﻈﻮر ﺟﺪاﺳﺎزي ،ﺟﻨﺒﻪ ﺑﻴﻮﻟﻮژﻳﻚ ﻣﻴﺰان ﺷﻮري اﺷﺒﺎع ﻧﻤﻚ و ﻻﻳﻪ ﻫﺎي رﻧﮕﻲ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺑﺎ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ (ﻧﻤﻚ ﻗﺮﻣﺰ، ﻧﺎرﻧﺠﻲ، ﺳﺒﺰ، ﺳﻴﺎه) و از ﺟﻨﺒﻪ اﻗﺘﺼﺎدي ، ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ، از ﻧﻘﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ ﺣﺼﻮل ﻣﻘﺪار زﻳﺎد ﻧﻤﻚ را ﻣﻲ ﺗﻮان ﻧﺎم ﺑﺮد اﻳﻦ. درﻳﺎﭼﻪ ﺑﻪ (آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ از 5 ﻧﻘﻄﻪ درﻳﺎﭼﻪ ﻃﺒﻖ ﻋﻼﻣﺖ ﮔﺬاري روي ﻋﻠﺖ ﺑﺎﻻ ﺑﻮدن ﻣﻴﺰان ﺷﻮري ﻳﻚ زﻳﺴﺘﮕﺎه ﻣﻨﺎﺳﺐ ﺑﺮاي ﻧﻧ ﺎﻣﻘﺸﻪ ﺑﺎ ﻬﺎي ﻣﺴﻴﺮ ﻣﻨﺘﻬﻲ ﺑﻪ درﻳﺎﭼﻪ ، ﻣﻨﻄﻘﻪ ﺟﺰﻳﺮه دﺳﺘﻪ اي از اﻛﺴﺘﺮﻣﻮﻓﻴﻞ ﻫﺎ ﺑﻪ ﻧﺎم ﻧﻤﻚ دوﺳﺘﻬﺎ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ. ﺳﺮﮔﺮداﻧﻲ، ﻣﻨﻄﻘﻪ ﻧﻤﻚ ﭘﺎرﺳﻴﺎن، ﻣﻨﻄﻘﻪ ﻧﻤﻚ ﻛﺎﻧﺴﺎر و ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻣﻴﻜﺮوارﮔﺎﻧﻴﺴﻢ ﻫﺎﻳﻲ ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ ﻣﻲ ﻣﻨﻄﻘﻪ 18 ﻛﻴﻠﻮﻣﺘﺮي در) دو ﻣﺎه آﺑﺎن و اردﻳﺒﻬﺸﺖ ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺗﻮاﻧﻨﺪ ﺑﺼﻮرت ﺑﻬﻴﻨﻪ در ﻣﺤﻴﻂ ﻣﺤﺘﻮي 15 -5 درﺻﺪ ﻧﻤﻚ ﮔﻴﺮي اﻧﺠﺎم ﺷﺪ ﺷﻜﻞ. 1 ﻧﻘﺎط ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﺮداري را ﺑﺮ روي ر (رﺷﺪ ﻛﻨﻨﺪ 8 و21). اﻟﺒﺘﻪ اﻳﻦ ﻣﺤﺪوده ﻧﻤﻚ ﺑﺴﺘﮕﻲ ﺑﻪ ﻧﻘﺸﻪ و در ﺟﺪول 1 ﻣﺸﺨﺼﺎت ﻧﻘﺎط ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﺮداري ﻧﺸﺎن ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ و دﻣﺎ دارد آﻧ. ﻬﺎ ﺑﻪ ﻃﻮر وﺳﻴﻊ در داده ﺷﺪه اﺳﺖ ﻓﺮاواﻧ. ﻲ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺟﺪا ﺷﺪه از ﻣﺤﻠﻬﺎي ﺎﻫزﻳﺴﺘﮕ ﻬﺎي ﺷﻮر ﻣﺎﻧﻨﺪ درﻳﺎﭼﻪ ﻫﺎي ﺷﻮر، ﺧﺎﻛﻬﺎ و ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﺮداري در ﺟﺪول 2 ﻧﺸﺎن داده ﺷﺪه اﺳﺖ . .
ﻬﺑﻴﺎﺑﺎﻧ ﺎي ﻧﻤﻜﺰار، ﺣﻮﺿﭽﻪ ﻫﺎي ﺑﺮداﺷﺖ ﻧﻤﻚ، ﻣﻌﺎدن ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﺎﻳﻲ و ﺷﺮاﻳﻂ رﺷﺪ : ﺟﺪاﺳﺎزي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي 9 ﻧﻤﻚ، ﻏﺬاﻫﺎي ﺷﻮر و دﻳﮕﺮ ﻣﻨﺎﻃﻖ ﭘﺮاﻛﻨﺪه ﻫﺴﺘﻨﺪ ( ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺑﺮ روي ﻣﺤﻴﻂ يﻣﻐﺬ آﮔﺎر يدار ﺑﻮد ﻛﻪ ﺑﺪان يدار آﮔﺎر يﻣﻐﺬ 22 و ). ﺟﻨﺒﻪ ﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ اﺧﻴﺮاً ﺗﻮﺟﻪ ﻣﺤﻘﻘﻴﻦ را ﺑﻪ ﺧﻮد ﺟﻠﺐ ﻧﻤﻜﻬﺎي زﻳﺮ اﻓﺰوده ﺷﺪه اﺳﺖ . . ﻛﺮده اﺳﺖ ﺑﻴﺸﺘﺮ در ارﺗﺒﺎط ﺑﺎ ﻣﻜﺎﻧﻴﺴﻢ ﻓﻴﺰﻳﻮﻟﻮژي آداﭘﺘﻪ NaCl,81 g/l ; MgSO4.7H2O, 9.7 g/l ; MgCl2.6H2O, ﺷﺪن اﻳﻦ ﻣﻴﻜﺮوارﮔﺎﻧﻴﺴﻢ ﻫﺎ ﺑﻪ ﺷﻮري ﺑﺎﻻ، اﻛﻮﻟﻮژي و g/l ; CaCl2, 3.6 g/l ; KCl, 2.0 g/l ; NaHCO3, 0.06 7.0 g/l ; NaBr, 0.026 g/l ; Distilled water, 1000 ml ﻛﺎرﺑﺮدﻫﺎي ﺑﻴﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮژي آﻧﻬﺎ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ (22 ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي). ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي). pH ﻣﺤﻴﻂ ﺟﺪاﺳﺎزي ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﭘﺘﺎس 1 ﻣﻮﻻر ﻗﺒﻞ از ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺑﻪ ﻋﻠﺖ داﺷﺘﻦ ﺧﺼﻮﺻﻴﺎﺗﻲ ﻣﺎﻧﻨﺪ رﺷﺪ اﺗﻮﻛﻼو ﻛﺮدن در 2/7 ﺗﺎ 4/7 (ﺗﻨﻈﻴﻢ ﮔﺸﺖ 7 ). ). ﺳﺮﻳﻊ، ﻧﻴﺎز ﻏﺬاﻳﻲ ﻛﻢ، اﺳﺘﻔﺎده از ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺑﻌﻨﻮان ﺑﻌﻨﻮان ﺗﻨﻬﺎ ﻣﻨﺒﻊ ﻛﺮﺑﻦ و اﻧﺮژي و ﻛﺎﻫﺶ ﺧﻄﺮ آﻟﻮدﮔﻲ در ﻣﺤﻴﻂ و ﺑﺮاي اﻓﺘﺮاق ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺗﺤﻤﻞ ﻛﻨﻨﺪه ﻧﻤﻚ از ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي اﻣﻜﺎن دﺳﺘﻜﺎري ژﻧﺘﻴﻜﻲ ﺑﺮاي اﻫﺪاف ﺗﺠﺎري ﺑﺴﻴﺎر ﻣﻬﻢ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ و ﻣﻄﻠﻖ ﻧﻴﺰ از ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ ﻧﻮﺗﺮﻳﻨﺖ آﮔﺎر ﻫﺴﺘﻨﺪ. ﻳﻜﻲ از اﺳﺘﻔﺎده ﻫﺎي ﺗﺠﺎري اﻳﻦ ﻣﻴﻜﺮوارﮔﺎﻧﻴﺴﻢ ﻫﺎ ﺳﻨﺘﺘﻴﻚ ﻛﻪ ﺑﺪون ﻧﻤﻚ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ. ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي رﺷﺪ ﻛﻨﻨﺪه اﺳﺘﻔﺎده از آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻻزي ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ، ﺑﺮ روي اﻳﻦ ﻣﺤﻴﻂ، اﺣﺘﻤﺎﻻ ً◌ ﻫﺎﻟﻮﺗﻮﻟﺮاﻧﺖ ﺑﻮدﻧﺪ اﻣﺎ ﻛﻠﻨﻲ زﻳﺮا اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﻧﻪ ﺗﻨﻬﺎ ﺗﺤﻤﻞ ﻛﻨﻨﺪه ﻧﻤﻚ ﻫﺴ ﺘﻨﺪ، ﺑﻠﻜﻪ ﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ روي اﻳﻦ ﻣﺤﻴﻂ ﺑﺪون ﻧﻤﻚ ﻧﺘﻮاﻧﻨﺪ رﺷﺪ ﻛﻨﻨﺪ ﺗﺤﻤﻞ ﻛﻨﻨﺪه ﺣﺮارت ﻧﻴﺰ ﻣﻲ (ﺑﺎﺷﻨﺪ 13 ). اﮔﺮﭼﻪ اﻳﻦ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻫﺴﺘﻨﺪ. در ﻣﻮرد ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ رﺷﺪ ﺑﺮ روي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻬﺎ ي ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﺗﺤﻤﻞ ﻛﻨﻨﺪه ﻧﻤﻚ ﺑﺎ ﻣﺤﻴﻂ ﻓﺎﻗﺪ ﻧﻤﻚ ﻣﺸﺎﻫﺪه ﺷﺪ، رﺷﺪ ﺑﻬﻴﻨﻪ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎ در ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎ ﺑﻬﻴﻨﻪ رﺷﺪ ﭘﺘﺎﻧﺴﻴﻞ ﺑﺎﻻ را ﺑﺮاي اﺳﺘﻔﺎده در ﻓﺮآﻳﻨﺪ ﻫﺎي ﺻﻨﻌﺘﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺣﻀﻮر ﻧﻤﻜﻬﺎي 0 ، 5/2 ، 5 درﺻﺪ ﺗﻌﻴﻴﻦ ﮔﺸﺖ . ﭼﻨﺎﻧﭽﻪ . ﺗﻌﻴﻴﻦ ﮔﺸﺖ درﺻﺪ ﻣﻲ ﻛﻨﻨﺪ، ﺗﻨﻬﺎ ﻳﻚ ﺗﻌﺪاد ﻛﻤﻲ از اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﺷﺪه ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ
25 25
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﻳاﺳﻮﻳﻪ ﻲ زﻳﺮ 3 درﺻﺪ ﻧﻤﻚ رﺷﺪ ﺑﻬﻴﻨﻪ داﺷﺘﻪ ﺑﺎﺷﺪ ،ﻫﺎﻟﻮﺗﻮﻟﺮاﻧﺖ در ﻏﻴﺮ اﻳﻦ ﺻﻮرت ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ . .
! 18
ﺷﻜﻞ1 - ﻧﻘﺎط ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﺮداري ﺑﺮ روي ﻧﻘﺸﻪ
ﺟﺪول1 -ﻣﺸ ﺨﺼﺎت ﻧﻘﺎط ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﺮداري ﺷﺪه ﻧﻘﺎط ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﺮداري ﻣﺸﺨﺼﺎت ﺟﻐﺮاﻓﻴﺎﻳﻲ دﻣﺎ pH ﻧﻮع ﻧﻤﻮﻧﻪ اﺑﺘﺪاي درﻳﺎﭼﻪ C h: 808 m° 32 7 ﺧﺎك ﺷﻮر و ﻟﺠﻦ ﻧﻤﻜﻲ N: 34.31265 E: 51.7667 E: 51.7667 ﺟﺰﻳﺮه ﺳﺮﮔﺮداﻧﻲ C h: 809 m° 34 6.8 ﺧﺎك ﺷﻮر، ﻟﺠﻦ ﻧﻤﻜﻲ ، ﻧﻤﻚ ﺑﺎ درﺻﺪ N: 34.58166 E: 51.76385 ﻣﻨﻴﺰﻳﻢ ﺑﺎﻻ ﻣﻨﻴﺰﻳﻢ ﺑﺎ ﻣﻨﻄﻘﻪ ﻧﻤﻚ ﭘﺎرﺳﻴﺎن C h: 805 m° 29 7 ﻧﻤﻚ ﺳﻴﺎه، ﻧﻤﻚ ﺳﻔﻴﺪ، ﻧﻤﻚ ﺳﺒﺰو ﻗﺮﻣﺰ N: 34.50729 E: 51.72439 ﻣﻨﻄﻘﻪ ﻧﻤﻚ ﻛﺎﻧﺴﺎر C h: 804 m° 30 7 ﻧﻤﻚ ﺳﻴﺎه، ﻧﻤﻚ ﺳﻔﻴﺪ، ﻧﻤﻚ ﺳﺒﺰو ﻗﺮﻣﺰ N: 34.50106 E: 51.76385 ﻣﻨﻄﻘﻪ 18 ﻛﻴﻠﻮﻣﺘﺮ ي C h:799 m° 30 7 ، ﻧﻤﻚ ﻗﺮﻣﺰ و ﻧﺎرﻧﺠﻲﺳﺒ ﺰ N: 34.64378 E: 51.83838
وﻳﮋه ﻣﺤﺘﻮي ﺳﻮﺑﺴﺘﺮاي ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ و10 درﺻﺪ ﻧﻤﻚ ﻛﺸﺖ درﺻﺪ داده ﺗﺎ ﺑﺘﻮان ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ را در آﻧ ﻬﺎ ﻣﺸﺎﻫﺪه ﻛﺮد . . ﻣﺸﺎﻫﺪه ﻛﺮد ﻬﺎ ﻏﺮﺑﺎل ﮔﺮي ﻣﻴﻜﺮوارﮔﺎﻧﻴﺴﻢ ﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ: در اﻳﻦ ﻣﺮﺣﻠﻪ ﺳﻨﺠﺶ ﺑﻪ روش ﭘﻠﻴﺖ اﻧﺠﺎم ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ آﻣﻴﻼز: ﺑﺮاي ﺑﺮرﺳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﮔﺮدﻳ .ﺪ ﻫﺮ ﻳﻚ از ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺟﺪا ﺷﺪه را ﺑﺮ روي ﻣﺤﻴﻂ آﻣﻴﻼز از ﻣﺤﻴﻂ ﺑﺎ ﺗﺮﻛﻴﺐ زﻳﺮ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ : :
26 26
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
; درﺻﺪStarch agar, 30 g/l ; NaCl (solar salt), 10 ﭘﻮﺷﻴﺪه ﺷﺪ، ﻇﻬﻮر ﻳﻚ ﻧﺎﺣﻴﻪ ﺷﻔﺎف اﻃﺮاف ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ ﻧﺸﺎﻧﻪ Distilled water, 1000ml ;pH, 7.2 ﻫﻴﺪروﻟﻴﺰ ﻧﺸﺎﺳﺘﻪ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ (5 ). ). ﺑﻌﺪ از اﻧﻜﻮﺑﺎﺳﻴﻮن در دﻣﺎي 37 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﺑ ﻪ ﻣﺪت ﻪ ﺑ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد درﺟﻪ
7 روز، ﭘﻠﻴﺖ ﻫﺎ ﺑﺎ (ﻣﺤﻠﻮل 0.3) درﺻﺪ I2, 0.6 درﺻﺪ KI
27 27
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﭘﺮوﺗﺌﺎز: Skim milk, 10 درﺻﺪ ; رﺷﺪ در ﺳﻄﺢ ﭘﻠﻴﺖ ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ و اﺳﺘﻔﺎده از اﻳﻨﻮﻟﻴﻦ N.A , 28 g/l ; NaCl (solar salt), 10 درﺻﺪ Agar ,15 ; ﺑ ﻋﻨﻮانﻪ ﺗﻨﻬﺎ ﻣﻨﺒﻊ ﻛﺮﺑﻦ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ. (1 ) ) g/l ; Distilled water, 1000ml ; pH 7.2 ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز: ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﻣﺤﻴﻂ ﺑﻪ ﺟﺰ Skim milk در 121 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ درﺟﻪ ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز ﮔﺮاد 15 دﻗﻴﻘﻪ اﺗﻮﻛﻼو ﮔﺸﺖ و skim milk از ﻃﺮﻳﻖ Pectin, 1 ; (NH ) SO , 0.14 ;K HPO , ﺻﺎف ﻛﺮدن اﺳﺘﺮﻳﻞ ﮔﺸﺖ . 4 2 درﺻﺪ 4 2 4 درﺻﺪ Nutrient ; ﺪدرﺻ MgSO4.7H2O, 0.02 ; درﺻﺪ 0.2 اﻳﺠﺎد ﻫﺎﻟﻪ ﺷﻔﺎف اﻃﺮاف ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﻲ ; FeSO4.7H2O, 5 mg/l ) درﺻﺪ solution, 0.1 20 (ﺑﺎﺷﺪ. ) ; MnSO4.H2O, 1.6 mg/L ; ZnSO4.7H2O, 1.4 mg/l ,Agar ; درﺻﺪ CaCL2, 2 mg/l ) ;NaCl(solar salt), 10 ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻟﻴﭙﺎز: .Peptone , 10 g/l ; CaCl2 2 ; Distilled water, 1000ml; pH 7. 2 ,(H2O, 0.1 g/l ; Tween 80, 10 g/l ; NaCl (solar salt درﺻﺪ 10 درﺻﺪDistilled water, 1000ml; pH, 7.2 ; ﭘﻜﺘﻴﻦ از ﻃﺮﻳﻖ ﺻﺎف ﻛﺮدن اﺳﺘﺮﻳﻞ و ﺑﻘﻴﻪ ﻣﺤﻴﻂ در دﻣﺎي ﺑﻌﺪ از ﺗﻬﻴﻪ ﻣﺤﻴﻂ ﻓﻮق در دﻣﺎي 115 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﺑﻪ 121 درﺟﻪ ﺑ ﻪ ﻣﺪت 15 دﻗﻴﻘﻪ اﺳﺘﺮﻳﻞ ﺷﺪ . . ﻣﺪت 20 دﻗﻴﻘﻪ اﺗﻮﻛﻼو ﺷﺪ . . ﺑﺎ اﺿﺎﻓﻪ ﻛﺮدن ﻟﻮﮔﻞ ، اﻳﺠﺎد ﻫﺎﻟﻪ ﺷﻔﺎف اﻃﺮاف ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ اﻳﺠﺎد رﺳﻮب ﺳﻔﻴﺪ رﻧﮓ اﻃﺮاف ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ ﺑﻌﺪ از 48 ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ. (10 ) ) ﺳﺎﻋﺖ ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ .( 26 ) ) ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز : ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ : ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻧﻮﻛﻠﺌﺎز: ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز DNase CMC, 5 g/l ; NaNO3, 1 g/l ; K2HPO4, 2 g/l ; KCl, 1 : g/l ; MgSO4, 0.5 g/l ; yeast extract, 0.5 g/l ; glucose, DNA agar, 42 g/l ; toluidin blue, 0.008 g/l ; NaCl ; Agar, 17 g/l ; درﺻﺪ g/l ; NaCl(solar salt), 10 1 ,Distilled water, 1000ml; pH ; درﺻﺪsolar salt), 10) Distilled water, 1000ml; pH 7.2 7.2 ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻟﺰ از ﻃﺮﻳﻖ ﺻﺎف ﻛﺮدن اﺳﺘﺮﻳﻞ و ﺑﻘﻴﻪ ﺑﻌﺪ از اﻧﻜﻮﺑﺎﺳﻴﻮن ﺑﺮاي 7 روز ﺑﺎ اﺿﺎﻓﻪ ﻛﺮدن HCL 1 ﻣﺤﻴﻂ در دﻣﺎي 121 درﺟﻪ ﺑ ﻪ ﻣﺪت 15 دﻗﻴﻘﻪ اﺳﺘﺮﻳﻞ ﺷﺪ. ﻧﺮﻣﺎل ، اﻳﺠﺎد ﻫﺎﻟﻪ ﺷﻔﺎف اﻃﺮاف ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ (ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ 14 .) اﺿﺎﻓﻪ ﻛﺮدن ﻣﻌﺮف ﻛﻨﮕﻮرد 1/0 ﺻﺪدر ﺑﻌﺪ از ﻧﻴﻢ ﺳﺎﻋﺖ ﺷﺴﺘﻦ ﺑﺎ ﻣﺤﻠﻮل 1 ﻣﻮﻻر ﻧﻤﻚ و اﻳﺠﺎد ﻫﺎﻟﻪ ﺷﻔﺎف ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز: ,Inulin, 2 g/l ; (NH4)2SO4 ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ (2 و 18 ) ) 0.5 g/l ; MgSO4.7H2O, 0.2 g/l ; KH2PO4 , 3 g/l ; ; ; ; NaCl (solar salt), 10 Agar, 20 درﺻﺪ درﺻﺪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز: ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ Distilled water, 1000ml; pH 7.2 :ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز :ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز اﻳﻨﻮﻟﻴﻦ ﻳاز ﻃﺮ ﻖ ﺻﺎف ﻛﺮدن اﺳﺘﺮﻳﻞ و ﺑﻘﻴﻪ ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﻣﺤﻴﻂ Yeast extract, 1g/l ; pullulan, 5 g/l ; NaCl(solar salt), در 121 درﺟﻪ اﺗﻮﻛﻼو ﺷﺪ . . Distilled water, 1000ml; pH 7.2 ; درﺻﺪ 10
28 28
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﭘﻮﻟﻮﻻن از ﻃﺮﻳﻖ ﺻﺎف ﻛﺮدن اﺳﺘﺮﻳﻞ و ﺑﻘﻴﻪ ﻣﺤﻴﻂ در دﻣﺎي ﻛﻴﺘﻴﻦ در دﻣﺎي 105 درﺟﻪ ﺑ ﻪ ﻣﺪت 5 دﻗﻴﻘﻪ ﺟﺪاﮔﺎﻧﻪ دﻗﻴﻘﻪ 121 درﺟﻪ ﺑ ﻪ ﻣﺪت 15 دﻗﻴﻘﻪ اﺳﺘﺮﻳﻞ ﺷﺪ . اﺗﻮﻛﻼو و ﺑﻘﻴﻪ ﻣﺤﻴﻂ در دﻣﺎي 121 درﺟﻪ ﺑﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﻪ ﺑﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﻣﺪت 15 دﻗﻴﻘﻪ اﺳﺘﺮﻳﻞ ﺷﺪ . . اﺿﺎﻓﻪ ﻛﺮدن اﺗﺎﻧﻮل 97 درﺻﺪ، ﺷﻔﺎف ﺑﻮدن ﻣﺎﻳﻊ ، ﻧﺸﺎﻧﻪ ، ﺟﻮاب ،ﻣﺜﺒﺖ اﺳﺖ زﻳﺮا ﺣﻀﻮر ﭘﻮﻟﻮﻻن در ﻣﺤﻴﻂ ﺑﺎ اﺗﺎﻧﻮل ﻛﻠﻮﻛﻴﺘ ﻳﻴﻦ ﻴﺪي ﺳﻮﺑﺴﺘﺮاﻳﻲ اﺳﺖ ﻛﻪ از ﭘﻮﺳﺖ ﺷﺎه ﻣﻴﮕﻮ 97 درﺻﺪ رﺳﻮب ﺳﻔﻴﺪ ﻣﻲ دﻫﺪ (15 .) ،ﺗﻬﻴﻪ ﻣﻲ ﺷﻮد اﻳﻦ ﺗﺮﻛﻴﺐ از آزﻣﺎﻳﺸﮕﺎه ﻣﻴﻜﺮوﺑﻴﻮﻟﻮژي ﺻﻨﻌﺘﻲ داﻧﺸﮕﺎه اﻟﺰﻫﺮاء ﺗﻬﻴﻪ ﺷﺪ . . ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ﻛ: ﻣﺤﻴﻂ ﺸﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ :ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز اﻳﺠﺎد ﻫﺎﻟﻪ ﺷﻔﺎف اﻃﺮاف ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ آ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ (17 .) .) NaCl 10 ; درﺻﺪ TSB, 30 g/l ; chitin cloidal, 0.1 agar 12 g/l ; Distilled water, 1000ml; pH 7.2 ; درﺻﺪ
(1) (1) (2) (3)
(4) (4) (5) (6)
(7) (7) (8) (9)
(10)
29 29
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺷـــﻜﻞ2-ﻓﻌﺎﻟﻴـــﺖ (ﺘﻴﻜﻲ، آﻣﻴﻠـــﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ(1 ﻴ)ﭘﺮوﺗﺌـــﻮﻟ (، 2 ﻲ)ﻟﻴﭙـــﻮﻟﻴﺘﻴﻜ (، 3ﻧﻮﻛﻠﺌـــﺎز ي) 4، ) ) (، (اﻳﻨﻮﻻزي 5 )ﭘﻜﺘﻴﻨﺎزي (، 6ﺳﻠﻮﻻزي ) (، 7 ي)ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز (، 8ﮔﺰﻳﻼﻧـﺎزي ) (و 9ﻛﻴﺘﻴﻨـﺎزي ) 10 ) ) ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ در ﺳﻄﺢ ﭘﻠﻴﺖ
ﺟﺪول 3 - ﻧﺘﺎﻳﺞ ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ ﺑﺮرﺳﻲ ﺷﺮاﻳﻂ ﻓﻴﺰﻳﻮﻟﻮژﻳﻚ و ﺑﻴﻮﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ در ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ AMB9 AMB8 AMB AMB AMB5 AMB AMB3 AMB2 AMB1 7 6 4 ﺗﻮﻟﻴﺪ رﻧﮕﺪاﻧﻪ زرد ﻛﺮم زرد ﭘﺮﻧﮓ زرد ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ زرد ﻛﺮم/ﺳ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ ﻓﻴﺪ واﻛﻨﺶ ﮔﺮم + + + + + + + + + آراﻳﺶ ﻣﻴﻜﺮوﺳﻜﻮﭘﻲ ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻮﻗﻌﻴﺖ اﺳﭙﻮر ﻣﺮﻛﺰي/ ﻣﺮﻛﺰي/ ﻣﺮﻛﺰي ﻣﺮﻛﺰي/ ﻣﺮﻛﺰي/ ﻣﺮﻛﺰي/ ﻣﺮﻛﺰي/ - ﻣﺮﻛﺰي/ ﺑﻴﻀﻮي ﺑﻴﻀﻮي ﺑﻴﻀﻮي ،ﻧﺰدﻳﻚ ﺑﻴﻀﻮي ﺑﻴﻀﻮي ﺑﻴﻀﻮي ﺑﻴﻀﻮي ﺑﻴﻀﻮ/اﻧﺘﻬﺎ ي ﺣﺮﻛﺖ + + + + + + + + + ﺑﻲ ﻫﻮازي اﺧﺘﻴﺎري - + - - - + + - + ﻛﺎﺗﺎﻻز + + + + + + + + + اﻛﺴﻴﺪاز - + + + + - + + + ﻣﺤﺪوده رﺷﺪ ﻧﻤﻚ 25-1 25-5 25-5 25-5 25-5 20-0 25-5 25-1 25-0 درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ ﺑﻬﻴﻨﻪ رﺷﺪ ﻧﻤﻚ درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 10 درﺻﺪ 5 10 5 5 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ 0 ﻣﺤﺪوده دﻣﺎﻳﻲ C 10-50 10-40 10-45 10-45 10-40 10-40 10-45 10-50 10-50 ﻣﺤﺪوده PH 6-11 5-11 6.5-11 -11 6.5-11 6-11 6-11 5-11 5-11 6.5 ﻫﻴﺪروﻟﻴﺰ ژﻻﺗﻴﻦ ------اوره ------ﺳﻴﻤﻮن ﺳﻴﺘﺮات ------MRVP ﺗﻮﻟﻴﺪ H2S ------اﺣﻴﺎي ﻧﻴﺘﺮات ------ﺗﻮﻟﻴﺪ اﺳﻴﺪ از : ﮔﻠﻮﻛﺰ + + - + + + + - + ﮔﺎﻻﻛﺘﻮز ------ﻓﺮوﻛﺘﻮز + - + + + + - + + ﺳﺎﻛﺎرز ------ﻣﺎﻟﺘﻮز - + + + - + + + + ﮔﺰﻳﻠﻮز - - + + - + - + - ﻣﺎﻧﻴﺘﻮل + - + + + - - + + راﻣﻨﻮز ------ﻣﺼﺮف ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻛﺮﺑﻦ : دﻛﺴﺘﺮﻳﻦ + + w +w+ + + + + + ﺳﻠﻮﺑﻴﻮز + + + + + + + + + ﺗﺮه ﻫﺎﻟﻮز + + w+ + + + + + + آﺳﻜﻮﻟﻴﻦ + + w +w +w+ + + + +
30 30
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﮔﻠﻴﺴﻴﺮﻳﻦ + + w+ + + + + + + ﻧﺸﺎﺳﺘﻪ + + + w +w+ + + + + ﮔﻠﻮﻛﺰ + + w +w+ + + + + + آدوﻧﻴﺘﻮل + + w +w+ + + + + + ﺳﺎﻟﻴﺴﻴﻦ + + w + + +w +w+ + + ﻣﺎﻟﺘﻮز + + w +w +w+ + + + + د-ﺳﻮرﺑﻴﺘﻮل + + w +w +w+ + + + + W : we ak W: weak
ﺟﺪول 3 - ﻧﺘﺎﻳﺞ ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ ﺑﺮرﺳﻲ ﺷﺮاﻳﻂ ﻓﻴﺰﻳﻮﻟﻮژﻳﻚ و ﺑﻴﻮﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ در ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ( )اداﻣﻪ ﺟﺪول A MB 2 AMB3 AMB4 AMB5 AMB6 AMB7 AMB8 AMB9 AMB9 AMB8 AMB7 AMB6 AMB5 AMB4 AMB3 AMB2 AMB1 ﻣﺼﺮف اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ L-آﺳﭙﺎراژﻳﻦ + + - + + + + + + L-آﻻﻧﻴﻦ + + - - - + + + +
L-ﻫﻴﺴﺘﻴﺪﻳﻦ w - +w - +w +w - +w+ -
L-ﻟﻮﺳﻴﻦ + - + w - + + +w +w+ L-آرژﻧﻴﻦ + + + + + + + + +
L-ﻣﺘﻴﻮﻧﻴﻦ + w + - - +w +w+ + +
L-ﺳﻴﺴﺘﺌﻴﻦ w - - - +w+ - - + +
L-ﻟﻴﺰﻳﻦ - - w +w - - - +w+ +
L- ﺗﻴﺮوزﻳﻦ w +w +w - - - - +w+ - ﺣﺴﺎﺳﻴﺖ ﺑﻪ آﻧﺘﻲ ﺑﻴﻮﺗﻴﻚ ﺳﻔﺎﻟﻮﺗﻴﻦ 30mcg ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﻛﻠﺮاﻣﻔﻨﻴﻜﻞ 30mcg ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ارﻳﺘﺮوﻣﺎﻳﺴﻴﻦ 15mcg ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﺗﺘﺮاﺳﺎﻳﻜﻠﻴﻦ 30mcg ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﻧﻮوﺑﻴﻮﺳﻴﻦ 5mcg ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﭘﻨﻲ ﺳﻴﻠﻴﻦ u pe 10 ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم discs discs رﻳﻔﺎﻣﭙﻴﺴﻴﻦ 5mcg ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﺑﺎﺳﻴﺘﺮاﺳﻴﻦ 04u per. ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم discs ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ :
31 31
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
آﻣﻴﻼز + + + + + + + + + ﭘﺮوﺗﺌﺎز + - - - + + - + + ﻟﻴﭙﺎز + - - - + + + - + ﻧﻮﻛﻠﺌﺎز + + + + + + + + + اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز + + + + + + + + + ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز - - - _ - - - - - ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز - - - - - + - - - ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز + - - - - - + - - ﭘﻜﺘﻴﺒﻨﺎز + + + _ + - + + - ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز + + + _ - - = - -
ﺟﺪول ﻧﺘﺎﻳﺞ 3 -ﻣﺮ ﺑﻮط ﺑﻪ ﺑﺮرﺳﻲ ﺷﺮاﻳﻂ ﻓﻴﺰﻳﻮﻟﻮژﻳﻚ و ﺑﻴﻮﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ در ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ( )اداﻣﻪ ﺟﺪول AMG3 AMG2 AMG1 AMC2 AMC1 AMB13 AMB12 AMB11 AMB10 ﺗﻮﻟﻴﺪ رﻧﮕﺪاﻧﻪ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ زرد ﻧﺎرﻧﺠﻲ ﺻﻮرﺗﻲ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ ﻛﺮم/ﺳﻔﻴﺪ ﻛﺮم واﻛﻨﺶ ﮔﺮم + + + + ﻛﻮﻛﻮس + ﻛﻮﻛﻮس + - - - آراﻳﺶ ﻣﻴﻜﺮوﺳﻜﻮﭘﻲ ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻣﻴﻠﻪ اي ﻛﻮﻛﺴﻲ ﻛﻮﻛﺴﻲ ﻛﻮﻛﻮﺑﺎﺳﻴﻞ ﻣﻴﻠﻪ ﻛﻮﺗﺎه ﺧﻤﻴﺪه ﻣﻮﻗﻌﻴﺖ اﺳﭙﻮر E/C E/C E/C E/C - - - - - ﺣﺮﻛﺖ + + + - + + - + + ﺑﻲ ﻫﻮازي اﺧﺘﻴﺎري + w - - + +w+ + - - ﻛﺎﺗﺎﻻز + + + + + + + + + اﻛﺴﻴﺪاز + + + + + + + + + ﻣﺤﺪوده رﺷﺪ ﻧﻤﻚ 1-25 5-25 1-25 5-25 0-25 0-20 0-25 5-25 10-25 درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ درﺻﺪ ﺑﻬﻴﻨﻪ رﺷﺪ ﻧﻤﻚ درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 15 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 5 درﺻﺪ 15 درﺻﺪ 0 ﻣﺤﺪوده دﻣﺎﻳﻲ C 10-50 10-45 10-50 10-40 10-40 10-50 10-50 10-50 10-40 ﻣﺤﺪوده PH 5-11 5-11 5-11 6-11 6-11 5-11 6-11 6-11 5-10 ﻫﻴﺪروﻟﻴﺰ ژﻻﺗﻴﻦ ------اوره ------ﺳﻴﻤﻮن ﺳﻴﺘﺮات ------MRVP ﺗﻮﻟﻴﺪ H2S ------اﺣﻴﺎي ﻧﻴﺘﺮات - + + ------ﺗﻮﻟﻴﺪ اﺳﻴﺪ از : ﮔﻠﻮﻛﺰ - + + + - - - - - ﮔﺎﻻﻛﺘﻮز - - + ------ﻓﺮوﻛﺘﻮز - + + + - + - - - ﺳﺎﻛﺎرز ------ﻣﺎﻟﺘﻮز - + + ------ﮔﺰﻳﻠﻮز ------ﻣﺎﻧﻴﺘﻮل - - + + + - - - - راﻣﻨﻮز ------ﻣﺼﺮف ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻛﺮﺑﻦ : دﻛﺴﺘﺮﻳﻦ + + w + +w - - +w+ - ﺳﻠﻮﺑﻴﻮز + + + w + +w +w +w+ -
32 32
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺗﺮه ﻫﺎﻟﻮز + + w + +w - +w +w+ - آﺳﻜﻮﻟﻴﻦ w +w +w +w + +w+ + - - ﮔﻠﻴﺴﻴﺮﻳﻦ + + w + +w +w - +w+ + ﻧﺸﺎﺳﺘﻪ + + + w + +w +w +w+ - ﮔﻠﻮﻛﺰ + + w + +w +w +w +w+ + آدوﻧﻴﺘﻮل + + w + +w +w +w +w+ -
ﺳﺎﻟﻴﺴﻴﻦ + + w + + - +w +w+ - ﻣﺎﻟﺘﻮز + + w+ - - - + - د-ﺳﻮرﺑﻴﺘﻮل + + w + +w +w +w +w+ -
ﺟﺪول 3 - ﻧﺘﺎﻳﺞ ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ ﺑﺮرﺳﻲ ﺷﺮاﻳﻂ ﻓﻴﺰﻳﻮﻟﻮژﻳﻚ و ﺑﻴﻮﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ در ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ( )اداﻣﻪ ﺟﺪول AMG3 AMG2 AMG1 AMC2 AMC1 AMB13 AMB12 AMB11 AMB10 ﻣﺼﺮف اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ L-آﺳﭙﺎراژﻳﻦ + + + - - + + + - L-آﻻﻧﻴﻦ + - + ------
L-ﻫﻴﺴﺘﻴﺪﻳﻦ w +w - - - - - +w +w+
L-ﻟﻮﺳﻴﻦ w +w - - +w + + +w+ - L-آرژﻧﻴﻦ + + + + + + + + +
L-ﻣﺘﻴﻮﻧﻴﻦ + + + w + + - +w+ - L-ﺳﻴﺴﺘﺌﻴﻦ + ------
L-ﻟﻴﺰﻳﻦ + w +w+ - - + - + -
L- ﺗﻴﺮوزﻳﻦ w - - - - - +w+ - - ﺣﺴﺎﺳﻴﺖ ﺑﻪ آﻧﺘﻲ ﺑﻴﻮﺗﻴﻚ ﺳﻔﺎﻟﻮﺗﻴﻦ 30mcg ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﻛﻠﺮاﻣﻔﻨﻴﻜﻞ 30mcg ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ارﻳﺘﺮوﻣﺎﻳﺴﻴﻦ 15mcg ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس سﺣﺴﺎ ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﺗﺘﺮاﺳﺎﻳﻜﻠﻴﻦ 30mcg ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﻧﻮوﺑﻴﻮﺳﻴﻦ 5mcg ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س ﭘﻨﻲ ﺳﻴﻠﻴﻦ u 10 ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم رﻳﻔﺎﻣﭙﻴﺴﻴﻦ 5mcg ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﺣﺴﺎس ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺑﺎﺳﻴﺘﺮاﺳﻴﻦu 4/0 ﻣﻘﺎوم ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻧﻴﻤﻪ ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﻣﻘﺎوم ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎس ﺣﺴﺎ س
33 33
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ : آﻣﻴﻼز + + + + - + + - - ﭘﺮوﺗﺌﺎز + - + + - - - - - ﻟﻴﭙﺎز - + + - - - - + + ﻧﻮﻛﻠﺌﺎز + + + + - - - + - اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز + + + + - + - - - ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز - + - _ - - - - -
ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز + - + w+ - - - - - ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز - - - - + + + - - ﭘﻜﺘﻴﺒﻨﺎز + + + _ + - + - - ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز + - - + + - + - -
79.54 90
80 63.64
70 59.1
60 50 36.36 38.64 38.64 ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ 36.36 50
31.82
ﺑﺎﺳﻴﻞ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ 22.73 40
20.45 30 18.18 13.64 13.64 4.54
20 9.1 9.1 9.1 4.54 4.54 10
0 Amylase protease Lipase DNAase Inulinase Xylanase Cellulase Pectinase Pullulanase Chitinase
60
50 50
ﺷﻜﻞ 3 - ﻧﻤﻮدار ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ درﺻﺪ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ و ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ از ﻧﻈﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ 40 31.82 ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ 29.41 29.41 29.41 30 ﻛﻮﻛﻮس ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ 22.73 18.18 20 17.65 17.65 13.64 11.76 11.76 11.76 9.1 9.1 10 5.88 4.54 4.54 4.54 0 0 Amylase Protease Lipase DNAase Inulinase Xylanase cellulase pectinase Pullulanase Chitinase
34 34
90 79.54 80
70 63.64 59.1 ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺷﻜﻞ4 - ﻧﻤﻮدار ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ درﺻﺪ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ و ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ از ﻧﻈﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ
ﺷﻜﻞ 5 - ﻧﻤﻮدار ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ درﺻﺪ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ از ﻧﻈﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ
80 72.8 70
60
50
40
30
20 15.48 11.71 10 35 35 0 Gram Negative bacteria Gram Positive bacili Gram Positive cocci ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺷﻜﻞ 6-ﻧﻤﻮدار ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻫﺎي ﻧﺴﺒﻲ از ﻧﻈﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ
ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز: ﻣﺤﻴﻂ ﻛﺸﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﻴﻜﺮوﺳﻜﻮﭘﻲ ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده ازﻋﺪﺳﻲ 100 ﻣﻴﻜﺮوﺳﻜﻮپ ﻧﻮري :ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز ) ﺷﺪه،ﺑﺮرﺳﻲ ﺣﺮﻛﺖ در ﺑﺎﻛﺘﺮي از ﻃﺮﻳﻖ روﺷﻬﺎي ﻻم (ﻣﺮﻃﻮب 12) و ﻛﺸﺖ در ﻣﺤﻴﻂ ﻧﻴﻤﻪ ﺟﺎﻣﺪ (4 و) ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ و) ,peptone ; درﺻﺪ yeast extract, 0.2 ; درﺻﺪXylan, 1 ﻛﺎﺗﺎﻻز ﺑﻪ وﺳﻴﻠﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺣﺒﺎب در ﻣﺤﻠﻮل 3 درﺻﺪ ﻫﻴﺪروژن درﺻﺪ CaCl2 0.015 + درﺻﺪ MgSO4 0.05 ; درﺻﺪ 0.5 ﭘﺮاﻛﺴﻴﺪ ﻣﻮرد ﺑﺮرﺳﻲ ﻗﺮار ﮔﺮﻓﺖ ﻓﻌﺎ. ﻟﻴﺖ اﻛﺴﻴﺪازي ﺑﺎ ,Distilled water ; درﺻﺪ Agar, 2 ; درﺻﺪ NaCl, 10 ; 1000ml; pH 7.2 اﺳﺘﻔﺎده از دﻳﺴﻜﻬﺎي آﻣﺎده اﻛﺴﻴﺪاز (ﺷﺮﻛﺖ اﻳﺮان دارو) 18 ﮔﺰﻳﻼن از ﻃﺮﻳﻖ ﺻﺎف ﻛﺮدن اﺳﺘﺮﻳﻞ و ﺑﻘﻴﻪ ﻣﺤﻴﻂ در ﺗﻌ ﺷﺪﻴﻴﻦ . ﺑﺎ ذوب ژﻻﺗﻴﻦ در دﻣﺎي درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد دﻣﺎي 121 درﺟﻪ ﺑ ﻪ ﻣﺪت 15 دﻗﻴﻘﻪ اﺳﺘﺮﻳﻞ ﺷﺪ . ﻫﻴﺪروﻟﻴﺰ ژﻻﺗﻴﻦ در ﻣﺤﻴﻂ ﻧﻮﺗﺮﻳﻨﺖ ژﻻﺗﻴﻦ آﮔﺎر اﻧﺠﺎم ﺷﺪ. اﻧﺠﺎم ﺷﺪ ﺑﺮرﺳﻲ ﻣﺼﺮف ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻛﺮﺑﻦ در ﻣﺤﻴﻂ Carbohydrate اﺿﺎﻓﻪ ﻛﺮدن ﻣﻌﺮف ﻛﻨﮕﻮرد 1/0 درﺻﺪ و ﺷﺴﺘﻦ ﺑﺎ درﺻﺪ Utilization Medium و ﺗﻮﻟﻴﺪ اﺳﻴﺪ از ﻗﻨﺪ ﻫﺎ ﺑﺮاﺳﺎس ﻣﺤﻠﻮل ﻧﻤﻚ ﻣﻮﻻر و اﻳﺠﺎد ﻧﻮاﺣﻲ ﺷﻔﺎف ﻧﺸﺎﻧﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ روش و ﻣﺤﻴﻂ ﺗﻮﺻﻴﻪ ﺷﺪه ﺑﻪ وﺳﻴﻠﻪ Ventosa و ﻫﻤﻜﺎران ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ (24 و 25 .) .) 1982 (20 ) ﺷﺪا ﻧﺠﺎم . اﺣﻴﺎي ﻧﻴﺘﺮات ، ﻣﻴﺘﻞ رد، 2 در ﺷﻜﻞ ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ آﻣﻴﻠﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ، ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ، ﻟﻴﭙﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ، وژزﭘﺮﺳﻜﻮﺋﺮ ﺑﺮاﺳﺎس روﺷﻬﺎي ﺗﻮﺻﻴﻪ ﺷﺪه Krieg و ﻧﻮﻛﻠﺌﺎزي، اﻳﻨﻮﻻزي، ﭘﻜﺘﻴﻨﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ، ﺳﻠﻮﻻزي، ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎزي، Smibert 1994 (19 ﺻﻮرت) ﮔﺮﻓﺖ آزﻣﺎﻳﺸ. ﺗﻤﺎم ﻬﺎي ﺑﺎﻻ ﻛﻴﺘﻴﻨﺎزي و ﮔﺰﻳﻼﻧﺎزي ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ در ﺳﻄﺢ ﭘﻠﻴﺖ ﻧﺸﺎن داده در ﻣﺤﻴﻄﻬﺎي ﺑﺎ 10 درﺻﺪ ﺳﺪﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ اﻧﺠﺎم ﺷﺪ . رﺷﺪ . ﺷﺪ ﺷﺪه اﺳﺖ . ﺑﺎﻛﺘﺮي از ﻃﺮﻳﻖ ﺗﺮاﻛﻢ ﻧﻮري (OD) و ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺧﺼﻮﺻﻴﺎت ﻣﻮرﻓﻮﻟﻮژﻳﻜﻲ و ﺑﻴﻮﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ : ﺧﺼﻮﺻﻴﺎت اﺳﭙﻜﺘﺮوﻓﺘﻮﻣﺘﺮ ﺷﻴﻤﺎدزو ﻣﺪل UV-220-02 در ﻃﻮل ﻣﻮج 620 ﻣﺮﻓﻮﻟﻮژﻳﻜﻲ ﻛﻠﻨﻲ ﻫﺎ ﺑﺮ روي ﻣﺤﻴﻂ ﻧﻮﺗﺮﻧﻴﺖ آﮔﺎر ﺑﻪ اﺿﺎﻓﻪ ﻧﺎﻧﻮﻣﺘﺮ اﻧﺪازه ﮔﻴﺮي و ﺗﺤﻤﻞ ﻧﻤﻚ ﺳﺪﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ در 35 25 0 10 درﺻﺪ ﺳﺪﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ ﺑﻌﺪ از دو روز ﻣﺸﺎﻫﺪه ﺷﺪ . رﻧﮓ ﺣﻀﻮر ﺗﺮاﻛﻢ ﺗﺎ درﺻﺪ ﻧﻤﻚ در دﻣﺎي درﺟﻪ آﻣﻴﺰي ﮔﺮم ﺑﺮ اﺳﺎس روش Burke (12 ) ﺷﺪه،اﻧﺠﺎم ﺑﺮاي ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد در ﻣﺤﻴﻂ ﻧﻮﺗﺮﻳﻦ ﺑﺮاث ﻣﻮرد ﺳﻨﺠﺶ ﻗﺮار 11 5 pH ﺣﺼﻮل اﻃﻤﻴﻨﺎن ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از KOH 3 درﺻﺪ ﻧﻴﺰ ﺑﺮرﺳﻲ ﮔﺮﻓﺖ . ﻣﺤﺪوده ﺑﺮاي رﺷﺪ ﺑﺎ ﺗﻨﻈﻴﻢ ﻧﻬﺎﻳﻲ ﺑﻴﻦ ﺗﺎ pH 7 6 pH 5 واﻛﻨﺶ ﮔﺮم در ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ ﺗﻜﺮار ﺷﺪ (4 ). ﺷﻜﻞ ﺗﻌﻴﻴﻦ و ﺑﺮاي ﺗﻨﻈﻴﻢ ﺑﺎﻓﺮ ﺳﻴﺘﺮات ، و ﺑﺎﻓﺮ
36 36
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﻓﺴﻔﺎت و pH 8 ﺑﺎﻓﺮ ﺗﺮﻳﺲ و 9 و10وpH 11 ﺑﺎﻓﺮ ﮔﻠﻴﺴﻴﻦ و ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ﺟﺪول ﻛﺎرﺧﺎﻧﻪ ﺳﺎزﻧﺪه دﻳﺴﻜﻬﺎ ﻣﻮرد ﺗﻔﺴﻴﺮ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ. رﺷﺪ در دﻣﺎﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ در ﻣﺤﻴﻂ ﻧﻮﺗﺮﻳﻨﺖ ﻗﺮار ﮔﺮﻓﺖ دﻳﺴﻜ. ﻬﺎي آﻧﺘﻲ ﺑﻴﻮﺗﻴﻜﻲ ﻛﻪ ﺑﺮاي آﻧﺘﻲ ﺑﻴﻮﮔﺮام ﺑﺮاث در دﻣﺎﻫﺎي 50 -10 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﺑﺮ ر ﺳﻲ و اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ از ﺷﺮﻛﺖ ﭘﺎدﺗﻦ ﻃﺐ ﺗﻬﻴﻪ ﮔﺸﺖ . ﻣﻘﺎوﻣﺖ آﻧﺘﻲ ﺑﻴﻮﺗﻴﻜﻲ ﺑﺎ ﺗﻠﻘﻴﺢ ﺳﻮﺳﭙﺎﻧﺴﻴﻮن ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎ ﺑﺮاي ﻣﺸﺎﻫﺪه اﺳﭙﻮر ﺑﺎﻛﺘﺮي از ﻣﺤﻴﻂ اﺳﭙﻮرﻻﺳﻴﻮن آﮔﺎر 6 (cfu/ml 10×1) در ﭘﻠﻴﺖ ﻫﺎي ﻣﻮﻟﺮ ﻫﻴﻨﺘﻮن آﮔﺎر داراي ﺣﺎوي 50 ﮔﺮم ﺳﺪﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ (، 3) ﺑﺎ ﺗﺮﻛﻴﺐ زﻳﺮ اﺳﺘﻔﺎده 10 درﺻﺪ ﺳﺪﻳﻢ ﻛﻠﺮاﻳﺪ و ﺑﺎ ﺑﻜﺎرﮔﻴﺮي دﻳﺴﻜﻬﺎي آﻧﺘﻲ دﻳﺴﻜ ﻟﻴﺘﺮ(ﺷﺪ ﮔﺮم در ). ). ﮔﺮم در ﻟﻴﺘﺮ(ﺷﺪ ﺑﻴﻮﺗﻴﻜﻲ اﻧﺠﺎم و ﻫﺎﻟﻪ ﻫﺎي ﻋﺪم رﺷﺪ ﺑﻌﺪ از 2 روز ﮔﺮﻣﺎ Nutrient broth, 6.0; MnSO4, 4H2O, 0.03; KH2PO4, ﮔﺬاري در دﻣﺎي 37 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد اﻧﺪازه ﮔﻴﺮي ﮔﺮدﻳﺪ Agar, 12; Distilled water, 1000ml ;0.25
Bacillus coagulans 75 Bacillus megaterium
72 Bacillus cereus 79
Bacillus licheniformis 100
Bacillus subtilis 34 Bacillus halodurans AMB6
Bacillus haloalkaliphilus 93 Filobacillus milensis AMB12 100 AMB11
85 Thalassobacillus devorans
88 AMB3 100 100 AMB5 AMB1 75 Halobacillus truperi
AMB8 97 74 AMB2 59 AMB4 62 Halobacillus litoral AMB10 48 91 AMB9 Halobacillus halophilus Virgibacillus salexigenes
0.01 ﺷﻜﻞ 7 - درﺧﺖ ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ ﻧﺸﺎن دﻫﻨﺪه ارﺗﺒﺎط ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ﻣﻴﻠﻪاي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺟﺪا ﺷﺪه از درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ( AMB2 ،AMB1، AMB12 ،AMB11 ،AMB10 ،AMB9 ،AMB8 ،AMB6 ،AMB5 ،AMB4 ،AMB3) ﺑﺎ دﻳﮕﺮ اﻧﻮاع ﺑﺎﺳﻴﻠﻮس ﺟﻨﺴﻬﺎيﻫﺎ و واﺑﺴﺘﻪ ﺟﻨﺴﻬﺎيﻫﺎ و ﺑﺮاﺳﺎس ﺳﻜﻮاﻧﺲ 16S rRNA
Idiomarina loihiensis 100 AMG2
Salicola marensis 100 37 AMG3 Halomonas merdiana DSM 5425 (AJ306891) 68 AMG1 100 Halomonas aquamarina DSM 30161 (AJ306888) ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺷﻜﻞ 8 - درﺧﺖ ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ ﻧﺸﺎن دﻫﻨﺪه ارﺗﺒﺎط ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه از درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ (AMG2 ،AMG1 و )AMG3 ﺑﺎ دﻳﮕﺮ اﻧﻮاع ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻣﻴﻠﻪاي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺑﺮاﺳﺎس ﺳﻜﻮاﻧﺲ 16S rRNA
ﺑﺮاي ﺑﺮرﺳﻲ اﺳﺘﻔﺎده ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻛﺮﺑﻨﻲ ﻗﻨﺪي ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺑﻪ وﺳﻴﻠﻪ اﺳﺘﺨﺮاج DNA ﺗﻮاﻟﻲو آﻧﺎﻟﻴﺰ 16S rRNA : ﺑﺮاي : ﺑﺎﻛﺘﺮي از ﻣﺤﻴﻂ ﭘﻴﺸﻨﻬﺎد ﺷﺪه ﺑﻪ وﺳﻴﻠﻪ Ventosa و اﺳﺘﺨﺮاج DNA ژﻧﻮﻣﻲ از ﺑﻴﻮﻣﺲ آﻣﺎده، از ﻛﻴﺖ ﻣﺨﺼﻮص (ﻫﻤﻜﺎران 1982 () 20) ﺑﺎ ﺗﺮﻛﻴﺐ زﻳﺮ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ (W/V اﺳﺘﺨﺮاج DNA (ژﻧﻮﻣﻲ Bioneer ﺷﺪ) .اﺳﺘﻔﺎده .اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ) درﺻﺪ ) : ) : در ﺻﺪ ژن 16S rRNA ﺟﺪا ﺷﺪه ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﭘﺮاﻳﻤﺮﻫﺎي NaCl, 5; KCl, 0.2; MgSO .7H O, 0.02; KNO , 0.1; 3 2 4 (ﻳﻮﻧﻴﻮرﺳﺎل 8fd (universal primers ﺑﺎ ﺗﻮاﻟﻲ ﺑﺎ ﺗﻮاﻟﻲ (NH4)2HPO4, 0.1; KH2PO4, 0.05; Filter-sterilised subsrrate, 0.1; Carbohydrate, 0.2; pH, 7.2 GGACAGTTTGATCA/CTGGC-3′-′5 و ﺑﺑﺮاي ﺮرﺳﻲ اﺳﺘﻔﺎده ﻣﻨﺒﻊ ﻧﻴﺘ آﻣﻴﻨﻪ(ﺮوژن اﺳﻴﺪ ) از ﻣﺤﻴﻂ ﺑﺎ ) اﺳﻴﺪ آﻣﻴﻨﻪ(ﺮوژن 1492R 5′CACGGATCCTACGGGTACCTTGTTACGACTT- 3 W/V ﺗﺮﻛﻴﺐ زﻳﺮ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ( .)درﺻﺪ .ﺗﻜﺜﻴﺮ ﺷﺪ .ﺗﻜﺜﻴﺮ ﺷﺪ NaCl,10 ; KCl, 0.2 ; MgSO .7H O,0.02 ; KH PO , 5 35 PCR 4 2 2 4 Amino acid, 0.1 ; pH 7.2 ; 0.05 واﻛﻨﺶ در ﺳﻴﻜﻞ ﺑﻪ ﻣﺪت دﻗﻴﻘﻪ ﺑﺎ دﻣﺎي ذوب 45 95 ﻣﺤﻴﻂ ﺗﻮﻟﻴﺪ اﺳﻴﺪ از ﻗﻨﺪ ﻫﺎ ﺑﺮاﺳﺎس ﻣﺤﻴﻂ ﭘﻴﺸﻨﻬﺎدي اوﻟﻴﻪ درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد، ﺑﻪ ﻣﺪت ﺛﺎﻧﻴﻪ ، دﻣﺎي ذوب 55 1 95 Ventosa (و ﻫﻤﻜﺎران 1982 ) (20 ) (ﺗﻨﻈﻴﻢ ﺷﺪ W/V درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﺑﻪ ﻣﺪت دﻗﻴﻘﻪ، دﻣﺎي درﺟﻪ در 1.30 annealing درﺻﺪ ): ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﺑﻪ ﻣﺪت دﻗﻴﻘﻪ، دﻣﺎي ﺳﻨﺘﺰ 10 72 ,NaCl, 5; Pepton, 1 ; Yeast extract, 0.5; Phenol red رﺷﺘﻪ ﻫﺎ درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد ﺑﻪ ﻣﺪت دﻗﻴﻘﻪ و دﻣﺎي 0.001; Carbohydrate, 1
38 38
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
اﺿﺎﻓﻲ ﻧﻬﺎﻳﻲ 72 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻲ ﮔﺮاد واﻧﺠﺎم ﺳﭙﺲ ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺑﻴﺸﺘﺮاز ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ و ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ ﻣﺤﺼﻮﻻت PCR ﺑﺮاي ﺗﻌﻴﻴﻦ ﺗﻮاﻟﻲ ﺑﻪ ﻛﺸﻮر ﻛﺮه ﻓﺮﺳﺘﺎده آﻧﺰﻳﻢ ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز در ﻫﺮ دو ﻣﺸﺎﺑﻪ اﺳﺖ. ﺷﺪ . ﺑﺮاﺳﺎس ﺷﻜﻞ 4 ﻧﻴﺰ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺑﻴﺸﺘﺮ اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎيدر ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎيدر آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﻴﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑ ﺸﺘﺮ از ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺑﻮده وﺗﻨﻬﺎ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻧﺘﺎﻳﺞ ﻧﺘﺎﻳﺞ آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز در ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﺑﺎ ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﺟﺪاﺳﺎزي ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﺎﻳﻲ از ﻧﻘﺎط ﻣﺨﺘﻠﻒ اﺑﺘﺪا: در ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ اﺧﺘﻼف ﻓﺎﺣﺸﻲ را ﻧﺸﺎن ﻣﻲ دﻫﺪ، ﻫﻤﭽﻨﻴﻦ ﺣﺪود 140 اﻳﺰوﻟﻪ از ﺧﺎك، آب ، ﻟﺠﻦ، ﻧﻤﻚ و رﺳﻮﺑﺎت آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺗﻮﻟﻴﺪ ي DNase، اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز و ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز در ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﺟﺪا ﺷﺪ . از ﻣﻴﺎن آﻧﻬﺎ 135 ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺑﻴﺸﺘﺮ اﺳﺖ . ﺑﺮاﺳﺎس ﺷﻜﻞ 5 در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ اﻳﺰوﻟﻪ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻲﻧﺴﺒ و ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ اﺟﺒﺎري، 7 اﻳﺰوﻟﻪ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ، ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺗﺤﻤﻞ ﻛﻨﻨﺪه ﻧﻤﻚ ﺑﻮدﻧﺪ. ﺑﺮاﺳﺎس ﺷﺒﺎﻫﺘﻬﺎي ﻓﻨﻮﺗﻴﭙﻲ در ﻤﻬﺎآﻧﺰﻳ ي آﻣﻴﻼز، DNase و اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز ﺑﺎ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺑﺴﻴﺎر ﺑﺎﻻ در ﻣﻴﺎن اﻳﺰوﻟﻪ ﻫﺎي ﺟﺪاﺳﺎزي ﺷﺪه ، در ﻧﻬﺎﻳﺖ 83 ﺳﻮﻳﻪ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺟﺪا ﻪﻛ ﺷﺎﻣﻞ 24 ﺑﺎﺳﻴﻞ ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ، 44 ﺳﻠﻮﻻز و ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز در ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻧﺸﺎن داده ﺑﺎﺳﻴﻞ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و 17 ﻛﻮﻛﻮس ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﻮدﻧﺪ . ﺷﺪه اﺳﺖ . ﺷﻜﻞ 6 ﺑﻴﺎﻧﮕﺮ اﻳﻦ ﺣﻘﻴﻘﺖ اﺳﺖ ﻛﻪ در ﻛﻞ
ﺑﺮرﺳﻲ ﻓﻌﺎﻟﻴﺘ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻬﺎي ي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ در ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺗﻮﻟﻴﺪ ي ﻫﻴﺪروﻻزي در ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺟﺪا ﺳﺎزي ﺷﺪه: ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎﻳﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه در ﻣﺮﺣﻠﻪ ﺑﻌﺪ از ﻬﺎيﺳﻴﻠاز ﺑﺎ ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ و ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ ﻧﻈﺮ ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻜﻲ ﺑﺮرﺳﻲ هﺪﺷ ﻛﻪ اﻧﺘﺨﺎب ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺑﺮﺗﺮ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﺎﻳﻲ : از 83 ﺳﻮﻳﻪ ﺑﺎﻛﺘﺮي ﻫﻴﺪروﻟﻓﻌﺎﻟﻴﺘﻬﺎي ﻴﺘﻴﻜﻲ ﺗﻨﻮع زﻳﺎدي در ﻣﻴﺎن ﻬﺎﺑﺎﻛﺘﺮﻳ .داﺷﺘﻨﺪ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ 20 ﺳﻮﻳﻪ ﺑﺮاﺳﺎس ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ در ﺗﻮﻟﻴﺪ از 83 ﻛﻠﻨﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه روي ﻣﺤﻴﻂ ﻏﺮﺑﺎل ﮔﺮي، 32 ﻛﻠﻨﻲ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺑﻴﺸﺘﺮ و ﻓﺮاواﻧﻲ ﻣﻴﻜﺮوارﮔﺎﻧﻴﺴﻢ ﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه آﻣﻴﻼز، 20 ﻛﻠﻨﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﭘﺮوﺗﺌﺎز ، 27 ﻛﻠﻨﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه ، اﻧﺘﺨﺎب ﺷﺪ ه و از اﻳﻦ 20 ﺳﻮﻳﻪ 11 ﺑﺎﺳﻴﻞ ﮔﺮم ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻟﻴﭙﺎز ، 40 ﻛﻠﻨﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻧﻮﻛﻠﺌﺎز ، 40 ﻛﻠﻨﻲ ﻣﺜﺒﺖ اﺳﭙﻮردار ، 1 ﺑﺎﺳﻴﻞ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﺪون اﺳﭙﻮر ، 3 ﺑﺎﺳﻴﻞ ﻨﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛ ﻨﺪه اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز، 9 ﻛﻠﻨﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز، 11 ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ و 5 ﻛﻮﻛﻮس ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﻮدﻧﺪ ﺟﺪول. در 3 ﻛﻠﻨﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز، 24 ﻛﻠﻨﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ وﻳﮋﮔﻴﻬﺎي ﻓﻴﺰﻳﻮﻟﻮژﻳﻚ و ﺑﻴﻮﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ اﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻛﻨﻨﺪه ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز، 16 ﻛﻠﻨﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز و 20 ﻛﻠﻨﻲ ﻣﻨﺘﺨﺐ ﻧﺸﺎن داده ﺷﺪه اﺳﺖ . . ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ﺑﻮدﻧﺪ ﺑﻨﺎﺑﺮاﻳﻦ ﺑﺎﻻﺗﺮﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺷﺪه ﺑﺮرﺳﻴﻬﺎي ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ: ﺑﺮ اﺳﺎس ﺗﺮادف ﺑدر اﻳﻦ ﺎﻛﺘﺮي ﻫﺎ اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز و DNase و ﭘﺎﻳﻴﻦ ﺗﺮﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ رﻓﺖ 16S rRNA يﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﺷﺪه ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺷﺪه ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز ﺑﻮد ﻋﺪه اي از ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺟﺪا ﺷﺪه ﻗﺎدر ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺟﻨﺴﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒ ﻲ Halobacillus، ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻣﺨﻠﻮﻃﻲ از اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﺑﻮدﻧﺪ . . ﺑﻮدﻧﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ Bacillus ،Thalassobacillus ،Salinococcus، ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﺑﻴﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺟﺪا ﺷﺪه ﺑﺮ اﺳﺎس ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ Staphylococcus ،Marinococcus ،Nesterenkonia 3 آﻧﺰﻳﻢ: ﺑﺮ اﺳﺎس ﺷﻜﻞ در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ در , Halomonas ،Salicola , Idiomarina هﺑﻮد ﻛﻪ هﺑﻮد ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ و ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ يﺷﺒﺎﻫﺘﻬﺎ ﺑﻴﻦ 94 -99 درﺻﺪ ﺑﻴﻦ ﮔﻮﻧﻪ ﻫﺎ و ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ ي ي اﻛﺜﺮ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎيدر ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﻴﺸﺘﺮ از ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ اﻳﻦ ﺟﻨﺴﻬﺎ را ﻧﺸﺎن دادﻧﺪ ﻛﻪ ﻧﺸﺎن دﻫﻨﺪه ﺗﻔﺎوت وﻟﻲﻣﻨﻔﻲ ﺑﻮد در ﻣﻮرد آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎزﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ در ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﻗﺎﺑﻞ ﻣﻼﺣﻈﻪ در ﺳﻄﺢ ﮔﻮﻧﻪ ﺑﺎ ﮔﻮﻧﻪ ﻫﺎ ي ﺷﻨﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪه در
39 39
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
اﻳﻦ ﺟﻨﺴﻬﺎ ﻫﺴﺘﻨﺪ و اﺣﺘﻤﺎﻻً يدر ﮔﻮﻧﻪ ﻫﺎ يﺟﺪﻳﺪ ﻲﻣ ﺳﺮﻳﻊ اﻟﺮﺷﺪ ﺑﻮده، ﻧﻴﺎز ﻫﺎي ﻏﺬاﻳﻲ ﺷﺎن ﺳﺎده اﺳﺖ، ﺗﻮاﻧﻨﺪ ﻗﺮار ﮔﻴﺮﻧﺪ. ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ﻳﺎﻓﺘﻪ ﻫﺎي ﺣﺎﺻﻞ از ﺑﺮرﺳﻲ ﻣﺤﺪوده وﺳﻴﻌﻲ از ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت را ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻣﻨﺒﻊ ﻛﺮﺑﻦ وﻣﻨﺒﻊ ﺗﺮادف رﻓﺖ S rDNA 16 ﻛﻪ ﻣﺒﺘﻨﻲ ﺑﺮ ﺗﻌﻴﻴﻦ ﺗﻮاﻟﻲ ژﻧﺘﻴﻜﻲ اﻧﺮژي اﺳﺘﻔﺎده ﻣﻲ ﻛﻨﻨﺪ و در ﻧﻬﺎﻳﺖ دﺳﺘﻜﺎري ژﻧﺘﻴﻜﻲ ﺷﺎن 900 -750 ﻧﻮﻛﻠﺌﻮﺗﻴﺪ از ژن S rDNA 16 ﺑﻮد، درﺧﺘﭽﻪ ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﺳﺎﻳﺮ ﻣﻴﻜﺮو ارﮔﺎﻧﻴﺴﻢﻫﺎ ﺳﺎده ﺗﺮ اﺳﺖ ﺑ. ﻪ ﻋﻼوه، ﻪ ﺑ. ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻳﺎﻓﺖ ﺷﺪه ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از روش آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ داراي ﭘﻮﺷﺸﻬﺎي ﻣﺤﻠﻮل ﻏﻨﻲ از ﻧﻤﻚ هدﺑﻮ ﻛﻪ هدﺑﻮ neighbor joining رﺳﻢ و ﻗﺮاﺑﺖ ژﻧﺘﻴﻜﻲ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺑﻮﻣﻲ اﺣﺘﻤﺎﻻ ً◌ ﺑﺮاي ﺣﻔﻆ ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﻛﺎﺗﺎﻟﻴﺘﻴﻜﻲ ﺷﺎن در ﻣﺤﻴﻄﻬﺎي ﻣﺤﻴﻄﻬﺎي ﺑﺎ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﺎﻳﻲ ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﺷﺪه، ﻣﺸﺨﺺ ﺑﺎ آب ﻓﻌﺎل ﭘﺎﻳﻴﻦ ﺿﺮوري اﺳﺖ ﭼﻨﻴﻦ ﺧﺼﻮﺻﻴﺎﺗﻲ ﻣﻲ .(ﺷﺪ ﺗﺼﺎوﻳﺮ 7، 8 و 9 ) ﺗﻮاﻧﺪ در ﻛﺎرﺑﺮد اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ در زﻣﻴﻨﻪﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ در ﻧﻈﺮ ﮔﺮﻓﺘﻪ ﺷﻮد . . ﮔﺮﻓﺘﻪ ﺷﻮد از 83 اﻳﺰوﻟﻪ ﻣﺤﻴﻄﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه 36 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Halobacillus، 7 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ ﺑﻴﺸﺘﺮ اﻳﺰوﻟﻪﻫﺎي ﻣﺤﻴﻄﻲ ﻗﺎدر ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ Thalassobacillus، 6 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ، ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺴﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﺨﺼﻮص Salinicoccus، 1 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Marinococcus ، ا ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ اﺳﭙﻮر دار ﺑﻮدﻧﺪ ﻛﻪ ﭼﻨﻴﻦ ﻳﺎﻓﺘﻪ اي ﻧﻴﺰ ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Nesterenkonia، ا ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺑﺎ ﺷﺮاﻳﻂ اﻛﺴﺘﺮﻳﻤﻲ ﻛﻪ در اﻳﻦ درﻳﺎﭼﻪ ﭘﺮ ﺷﻮر ﺑ ﻪ ﻋﻠﺖ ﺑﺎﻻ ﻪ ﺑ ﺟﻨﺲ Staphylococcus 10 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ ﺑﻮدن ﻧﻤﻚ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻳﻚ ﻓﺎﻛﺘﻮر اﻛﺴﺘﺮﻳﻢ ﺣﺎﻛﻢ اﺳﺖ Halomonas ، 11 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Salicola ، ا ﺳﻮﻳﻪ ﻛﺎﻣﻼ ً◌ ﻗﺎﺑﻞ اﻧﺘﻈﺎر ﺑﻨﻈﺮ ﻣﻲ رﺳﺪ . . 9 Idiomarina ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ و ﺳﻮﻳﻪ ﻧﺎ ﻣﺸﺨﺺ ﺑﻮ دﻧﺪ. در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ درﺻﺪي ﺑﻴﻦ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي 83 ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﺗﺎﮔﺰوﻧﻮﻣﻲ اﻳﺰوﻟﻪ ﻣﺤﻴﻄﻲ ﻗﺎدر ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ، ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ در ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺗﻤﺎم آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ 4 آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﻣﺨﺘﻠﻒ در ﺟﺪول ﻧﺸﺎن داده ﺷﺪه ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﻣﺬﻛﻮر ﺑﺮ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﻏﺎﻟﺐ ﺑﻮد ه ﺑﺠﺰ ه . اﺳﺖ در ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز ﻛﻪ در ﻣﻮرد اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ، ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﺑﺤﺚ ﻣﻨﻔﻲ ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﻛﻤﺘﺮ ﺑﻮدن ﺗﻌﺪادﺷﺎن ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﺑﻬﺘﺮي ﺑﻮدﻧﺪ. در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ درﺻﺪي ﺑﻴﻦ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي يآﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﻣﺎﻧﻨﺪ آﻣﻴﻼزﻫﺎ، ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ در ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻫﻔﺖ آﻧﺰﻳﻢ آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، ﭘﺮوﺗﺌﺎزﻫﺎ، ﻟﻴﭙﺎزﻫﺎ، DNase ﻫﺎ، ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎزﻫﺎ، ﮔﺰﻳﻼﻧﺎزﻫﺎ، ﻟﻴﭙﺎز، DNase ، اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز، ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز و ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﻛﻴﺘﻴﻨﺎزﻫﺎ ،اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎزﻫﺎ و ﺳﻠﻮﻻزﻫﺎ در ﻓﺮآﻳﻨﺪﻫﺎ و ﺻﻨﺎﻳﻊ ﻣﺜﺒﺖ ﻏﺎﻟﺐ ﺑﻮدﻧﺪ، در ﺣﺎﻟﻲ ﻛﻪ در ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻣﺎﻧﻨﺪ ﺻﻨﺎﻳﻊ ﻏﺬاﻳﻲ، اﻓﺰودﻧﻴﻬﺎي ﺧﻮراﻛﻲ، ﺻﻨﺎﻳﻊ ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز، ﺳﻠﻮﻻز و ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻧﺴﺒﺖ ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ و ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﻜﻲ داراي ﻛﺎرﺑﺮدﻫﺎي زﻳﺎدي ﻫﺴﺘﻨﺪ. ﺑﻪ ﻛﻤﺘﺮ ﺑﻮدن ﺗﻌﺪادﺷﺎن ﺗﻮﻟﻴﺪ يﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﺑﻬﺘﺮ ﺑﻮدﻧﺪ، و در يﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﺑﻬﺘﺮ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻳﻲ ﻛﻪ ﺑﺘﻮاﻧﻨﺪ داراي ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﺑﻬﻴﻨﻪ در ﺷﺮاﻳﻂ ﺳﺨﺖ راﺑﻄﻪ ﺑﺎ آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎيدر ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﻛﻮﻛﻮس ﻫﺎ ي ي ﺻﻨﻌﺘﻲ از ﻧﻈﺮ دﻣﺎ و ﻧﻤﻚ ﺑﺎﺷﻨﺪ اﻫﻤﻴﺖ ﺑﺴﻴﺎر ﺑﺎﻻﻳﻲ دارﻧﺪ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ، ﺗﻨﻬﺎ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ و ﻧﻤﻚ دوﺳﺘﻬﺎ ﻣﻨﺒﻊ اﺣﺘﻤﺎﻟﻲ ﻣ ﻨﺎﺳﺐ ﺑﺮاي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﭼﻨﻴﻦ ﻳﻲ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﭼﻨﻴﻦ ﻨﺎﺳﺐ ﺑﺮاي ﺑﻮدﻧﺪ. در ﻧﻬﺎﻳﺖ در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ درﺻﺪي ﺑﻴﻦ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﻫﺴﺘﻨﺪ. ﻣﻨﻔﻲ و ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ در ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز، ﻣﻴﻜﺮو ارﮔﺎﻧﻴﺴﻢﻫﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺧﻄﺮ آﻟﻮدﮔﻲ در ﻣﺤﻴﻂ DNase ، اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز و ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﻏﺎﻟﺐ ﺑﻮده را ﻛﺎﻫﺶ داده، در ﻏﻠﻈﺘﻬﺎي ﻧﻤﻚ ﺑﺎﻻ ﻣﻲ ﺗﻮاﻧﻨﺪ رﺷﺪ ﻛﻨﻨﺪ، در ﺣﺎﻟﻲ ﻛﻪ در ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز ، ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز، ،
40 40
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺳﻠﻮﻻز، ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز و ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﺳﻮﻳﻪ يﻫﺎ ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه ﺗﻮﻟﻴﺪﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﻗﻮي ﺗﻌﺪاد ﻛﻤﺘﺮﺷﺎن ﺗﻮﻟﻴﺪ يﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﺑﻬﺘﺮ .ﺑﻮدﻧﺪ در ﻣﻮرد اﻳﻦ دو آﻧﺰﻳﻢ ﺑﻮدﻧﺪ . . آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز وDNase ﺑ ﻛﻠﻪ ﻲﻃﻮر ﺗﻌﺪاد زﻳﺎدي از
Nesterenkonia halobia (Y13857) 100
100 Nesterenkonia aethiopica (AY574575) 42 AMC8 Staphylococcus xylosus (EF456699)
22 94 AMC17 Marinococcus halophilus (X90835) 100
AMC3 16 99 Halobacillus halophilus (X62174)
95 100 Marinococcus albus (X90834)
Tetragenococcus muriaticus
Macrococcus lamae (AY119687)
Salinicoccus roseus (X94559) 96 AMC2 72 Salinicoccus luteus (DQ352839)
100 82 Salinicoccus iranensis
Salinicoccus hispanicus (AY028927)
81 AMC1 72 salinicoccus salsiraiae (Q333949) 67
100 salinicoccus siamensis (AB258358) 62 salinicoccus jeotgali (DQ471329) 45 salinicoccus alkaliphilus (AF275710)
salinicoccus kunmingensis (DQ837380)
Jeotgalicoccus psychrophilus
100 Jeotgalicoccus halotolerans (AY028925)
0.02
ﺷﻜﻞ 9 - درﺧﺖ ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ ﻧﺸﺎن دﻫﻨﺪه ارﺗﺒﺎط ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻣﻨﺘﺨﺐ ﻛﻮﻛﺴﻲ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺟﺪا ﺷﺪه از درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران (و ﺑﻴﺪﮔﻞ AMC2 ،AMC1 ، AMC8 ،AMC3 و AMC17) ﺑﺎ دﻳﮕﺮ ﻛﻮﻛﻮس ﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺑﺮاﺳﺎس ﺳﻜﻮاﻧﺲ 16S rRNA
ﻣﻄﺎﻟﻌﺎت ﻣﺸﺎﺑﻪ ﺑﺎ ﺗﺤﻘﻴﻖ اﻧﺠﺎم ﺷﺪه در ﺧﺎرج از ﻛﺸﻮر، ﻓﺮاواﻧﻲ 5 آﻧﺰﻳﻢ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، ﻟﻴﭙﺎز، DNase sanchez-porro و ﻫﻤﻜﺎران در ﺳﺎل 2003 (16 ) ﻛﻪ و ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز را در ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ در
41 41
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﺣﻮﺿﭽﻪﻫﺎي ﺷﻮر در اﺳﭙﺎﻧﻴﺎ ﻧﺸﺎن داده اﺳﺖ، -Flores ﻛﻨﻨﺪه اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ ﻧﺮﻣﺎل اﻳﻦ زﻳﺴﺘﮕﺎﻫﻬﺎ ﻧﻴﺴﺘﻨﺪ . ﺗﺎﻛﻨﻮن . Fernandez و ﻫﻤﻜﺎران در ﺳﺎل 2007 (6 ) ﺗﻨﻮع ژﻧﺘﻴﻜﻲ اﻃﻼﻋﺎت ﻛﻤﻲ در ﻣﻮرد ﻛﺘﺮﻳﻬﺎﺑﺎ و آرﻛﻴﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ 18 ﺑﺎﻛﺘﺮي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه 3 آﻧﺰﻳﻢ ﺗﺠﺰﻳﻪ ﻛﻨﻨﺪه اﻳﻦ ﭘﻠﻴﻤﺮ در ﻣﺤﻴﻄﻬﺎي ﭘﺮ ﺷﻮر وﺟﻮد دارد و ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز و ﻟﻴﭙﺎز را از ﺷﻮراﺑﻪ ﻧﻤﻜﻲ ﺗﻨﻬﺎ ﻳﻚ ﺗﻌﺪاد ﻛﻤﻲ از ﻧﻤﻚ دوﺳﺘﻬﺎي ﮔﺰﻧﻮﻟﻴﺘﻴﻚ دوﺳﺘﻬﺎي Pilluana در ﭘﺮو ﻧﺸﺎن داده اﺳﺖ و Moreno و ﻫﻤﻜﺎران ﺟﺪاﺳﺎزي و ﺗﻮﺻﻴﻒ ﺷﺪه (اﻧﺪ 24). از ﺟﻤﻠﻪ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي از ﺟﻤﻠﻪ ﺳﻮﻳﻪ در ﺳﺎل 2007 (11) ﺗﻨﻮع زﻳﺴﺘﻲ ﻧﻤﻚ دوﺳﺘﻬﺎي اﺟﺒﺎري ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺳﻠﻮﻟﻴﺘﻴﻚ ﺟﺪا ﺷﺪه ﺷﺎﻣﻞ Halocella ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه 4 آﻧﺰﻳﻢ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، ﻟﻴﭙﺎز و .cellulolytica sp. nov (19) ﺑﺎﻛﺘﺮي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﻧﻤﻚ DNase را در زﻳﺴﺘﮕﺎﻫﻬﺎي ﺷﻮر در اﺳﭙﺎﻧﻴﺎ ﻧﺸﺎن داده اﺳﺖ. دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ، ﻣﻴﻠﻪاي ﻏﻴﺮ ﺗﺸﻜﻴﻞ دﻫﻨﺪه اﺳﭙﻮر و ﺑﻲﻫﻮازي وﻳﮋﮔﻲ اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﺑﺎ ﻛﺎرﻫﺎي اﻧﺠﺎم ﺷﺪه ﺑ ﺪﻳﻦ ﺟﺪا ﺷﺪه از ﻣﺮداب ﺷﻮر درﻳﺎﭼﻪ Sivash و ﺑﺎﻛﺘﺮي ﺻﻮرت اﺳﺖ ﻛﻪ اوﻻً در اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ ﻓﺮاواﻧﻲ 10 آﻧﺰﻳﻢ ﻫﺎﻟﻮآﻟﻜﺎﻟﻴﻔﻴﻠﻴﻚ ﺑﻲﻫﻮازي ﺳﻮﻳﻪ Z-7026 ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﻛﻼﺳﺘﺮ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ (آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، ﻟﻴﭙﺎز، Clostredia 3 ، DNase ﺑﺎ درﺻﺪ G+C (ﭘﺎﻳﻴﻦ 27 ) ﺟﺪا ﺷﺪه از ) اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز، ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز، ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز، ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز، ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺟﺎﻣﻌﻪ ﻣﻴﻜﺮﺑﻲ رﺳﻮﺑﺎت درﻳﺎﭼﻪ ﺳﻮدا اﺳﺖ . ﺑﺮﺧﻼف اﻳﻦ . ﺳﻠﻮﻻز و ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ) ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎيدر ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ در ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺟﺪا ﺷﺪه ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺳﻠﻮﻟﻴﺘﻴﻚ ﺟﺪا ﺷﺪه در درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻧﺸﺎن داده ﺷﺪ ه ﺛﺎﻧﻴﺎً ﻣﻮﻓﻖ ﺑﻪ اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻫﻮازي، ﺑﻲﻫﻮازي اﺧﺘﻴﺎري ﺑﻮدﻧﺪ . . ﺟﺪاﺳﺎزي ﺳﻮﻳﻪ هﻫﺎﻳﻲ ﺷﺪ ﻛﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪهﻫﺎي ﻗﺎﺑﻞ ﺗﻮﺟﻪ ﺟﺪاﺳﺎزي ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه DNase و اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز ﻧﺴﺒﺖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز، ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز و ﻛﻴﺘﻴﻨﺎر ﺑﻮدﻧﺪ، اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ از آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺑﻪ ﺳﺎﻳﺮ ي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺑﺮرﺳﻲ ﺷﺪه از ﺑﻴﺸﺘﺮﻳﻦ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺟﻤﻠﻪ ﻳﻲ ﻫﺴﺘﻨﺪ ﻛﻪ ﺑﺮاي اوﻟﻴﻦ ﺑﺎر ﮔﺰارش ﺷﺪهاﻧﺪ، ﻓﺮاواﻧﻲ ﺑﺮﺧﻮردار ﺑﻮدﻧﺪ. ﺗﻤﺎﻣﻲ ﮔﺮوﻫﻬﺎي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﺎﻳﻲ ﺟﺪا ﺛﺎﻟﺜﺎً ﻣﻄﺎﻟﻌﺎت اﻛﻮﻟﻮژﻳﻜﻲ در ﻣﺤﻴﻂ ﺷﻮر درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران ﺷﺪه ي ﺗﺤﻘﻴﻖاﻳﻦ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ DNase ﻪداﺷﺘرا ﻪداﺷﺘرا و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻣﻨﺠﺮ ﺑﻪ ﺟﺪاﺳﺎزي و ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﺗﻌﺪاد ﮔﺴﺘﺮدهاي از وﻟﻴﻜﻦ ﺑﻴﺸﺘﺮﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪهي DNase ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺑﺎ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻣﺨﻠﻮﻃﻲ از ﺟﻨﺲ Halobacillus هﺑﻮد در ﺣﺎﻟﻲ ﻛﻪ در ﺗﺤﻘﻴﻖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎاﻳﻦ ﺷﺪ و اﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎ، ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ارزﺷﻤﻨﺪي ﺑﺮاي Sanchez-Porro 2003 (16 ) ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ DNase در اﻫﺪاف ﺑﻴﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮژﻳﻜﻲ ﻣﺤﺴﻮب ﻣﻲ .ﺷﻮﻧﺪ .ﺷﻮﻧﺪ ﻛﻮﻛﻮسﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﻣﺸﺎﻫﺪه ﻧﺸﺪ و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺑﺮﺧﻼف Sanchez-Porro و ﻫﻤﻜﺎران 2003 (16 ) ﻛﻪ ﻫﻴﭻ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه DNase ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ -Bacillus ﺑﺎﻛﺘﺮي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﺗﺠﺰﻳﻪ ﻛﻨﻨﺪه ﮔﺰﻳﻼن را ﺟﺪا ﻧﻜﺮدﻧﺪ و Salibacillus ﺑﻮدﻧﺪ. ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز از ﺟﻤﻠﻪ اﺣﺘﻤﺎﻻً ﺑﺨﺎﻃﺮ ﻋﺪم ﺗﻌﻴﻴﻦ ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﮔﺰﻧﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ روي ﻣﺤﻴﻂ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻳﻲ ﺑﻮد ﻛﻪ ﺑﺮاي اوﻟﻴﻦ ﺑﺎر در ﻧﻤﻚ دوﺳﺘﻬﺎ ﮔﺰارش ﺟﺎﻣﺪ ﻏﺮﺑﺎﻟﮕﺮي ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ﭘﺎﻳﻴﻦ ﺑﻮدن ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﮔﺰﻧﻮﻟﻴﺘﻴﻜﻲ ﺷﺪ و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺟﺪا ﺷﺪه ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ را ﺑﺮاي اﻳﺠﺎد ﻧﺎﺣﻴﻪ ﺷﻔﺎف در ﺳﻄﺢ ﭘﻠﻴﺖ اﺳﺖ، اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ داﺷﺘﻨﺪ ﺳﻮﻳﻪ. ﺑﻴﺸﺘﺮ ﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﻪﺗﻮاﻧﺴﺘ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﮔﺰﻳﻼﻧﺎزي را ﺟﺪا ﻛﻨ ﺪ ﻛﻪ Halobacillus و Thalassobacillus هﺑﻮد و ﻣﻲ ﻪﺗﻮاﻧﺴﺘ ﻪﺗﻮاﻧﺴﺘ و ﻣﻲ هﺑﻮد ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي روي اﻳﻨﻮﻟﻴﻦ ﺑﻌﻨﻮان ﺗﻨﻬﺎ ﻣﻨﺒﻊ ﻛﺮﺑﻦ رﺷﺪ ﻛﺮده ﻛﻪ ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﻣﻴﻠﻪاي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺗﺸﻜﻴﻞ دﻫﻨﺪه اﺳﭙﻮر Halobacillus و ﺑﻪ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺑﺎﻻي اﻳﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎ در اﺳﺘﻔﺎده از ﺗﺮﻛﻴﺒﺎت ﻣﺨﺘﻠﻒ Thalassobacillus ﺑﻮده وﻟﻴﻜﻦ ﻛﻢ ﺑﻮدن ﺗﻌﺪاد ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي در ﺷﺮاﻳﻂ ﺳﺨﺖ ﻗﺎﺑﻞ ﺗﻮﺟﻴﻪ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ . . ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ ﮔﺰﻳﻼﻧﺎزي ﺟﺪا ﺷﺪه اﺣﺘﻤﺎﻻً ﺑﻌﻠﺖ ﻛﻢ ﺑﻮدن اﻳﻦ ﭘﻠﻴﻤﺮ در زﻳﺴﺘﮕﺎﻫﻬﺎي ﺷﻮر ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ و ﺑﻨﺎﺑﺮاﻳﻦ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ
42 42
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز از ﺟﻤﻠﻪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻳﻲ ﺑﻮد ﻛﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ آن در ﻣﻴﺎن ﻛﻪ در آن ﻗﺎدر ﺑﻪ رﺷﺪ ﺑﺎﺷﺪ ﺗﺎ 17 درﺻﺪ NaCl اﺳﺖ، در ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﺑﺎ ﺎيﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ از ﺣﺎﻟﻲ ﻛﻪ ﻏﻠﻈﺖ ﻧﻤﻜﻬﺎ در درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻓﺮاواﻧﻲ ﺑﻴﺸﺘﺮي ﺑﺮﺧﻮردار ﺑﻮد ه اﺳﺖ ﭼﻨﻴﻦ ﻳﺎﻓﺘﻪاي ﺑﺎ ﻧﺘﺎﻳﺞ ﺑﺴﻴﺎر ﺑﺎﻻﺗﺮ و ﺗﺎ 30 درﺻﺪ ﻧﻤﻚ ﻫﻢ ﻣﻲ .رﺳﺪ -Sanchez Sanchez-Porro و ﻫﻤﻜﺎران2003 (16) ﻣﻄﺎﺑﻘﺖ داﺷﺖ و Porroدر ﻏﺮﺑﺎﻟﮕﺮﻳﺸﺎن ﺳﻮﻳﻪﻫﺎﻳﻲ از ﺟﻨﺲ ﻟﻴﻜﻦ ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ ﺑﺎ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ chromohalobacter ﺟﺪا ﻧﻤﻮدﻧﺪ ﻛﻪ در اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ از اﻳﻦ آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Salicola ، ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ اﺟﺒﺎري ﺟﻨﺲ اﻳﺰوﻟﻪ اي وﺟﻮد ﻧﺪاﺷﺖ وﻟﻲ ﺗﻌﺪاد ﻛﻤﻲ از ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﮔﺮوه ﮔﺎﻣﺎﭘﺮوﺗﻮﺑﺎﻛﺘﺮﻳﺎ ﺑﻮد ﻴﻦاوﻟ. ﺑﺎر ﺗﻮﺳﻂ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Moreno و ﻫﻤﻜﺎران Thalassobacilus Salicola sp. strain IC10 2007 وﺗﻌﺪادﻛﻤﻲ از ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ (11 ) ﺑﻌﻨﻮان ﻳﻚ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﻟﻴﭙﺎز ﺷﻨﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪ . وﻳﮋﮔﻴﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻛﻨﻨﺪه ي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Idiomarina ﺗﻌﻠﻖ اﻳﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮي ﺑﺎ ﺳﻮﻳﻪ ﺟﺪا ﺷﺪه در اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ ﻣﻄﺎﺑﻘﺖ داﺷﺘﻨﺪ ﺳﻮﻳﻪ. ﻣﺎﺑﻘﻲ ﻫﺎ ﺑﺮ اﺳﺎس ﺗﻄﺎﺑﻘﻬﺎي اﻧﺠﺎم ﺷﺪه داﺷﺖ . ﺳﻮﻳﻪﻫﺎي ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ ﺑﺎ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ ﻋﻼوه ﺑﺮ ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ 16S rRNA در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﻛﻠﻲ در ﺑﻴﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺻﻔﺎت ﻓﻨﻮﺗﻴﭙﻲ از ﻧﻈﺮ ﻓﻴﻠﻮژﻧﻲ وﺗﺮادف ﻣﻮرد ﺑﺘﺮﺗﻴﺐ از ﻧﻈﺮ ﺗﻨﻮع آﻧﺰﻳﻤ ﻲ ﻲو ﻓﺮاواﻧ ﺗﻮﻟﻴﺪ آﻧﺰﻳﻢ، ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ دﻗﻴﻖ ﺗﺮ ﻗﺮار ﮔﺮﻓﺘﻪ ﺑﻮدﻧﺪ ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﻫﻴﭻ ﻳﻚ از ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ، ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ و ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي ﮔﺮم ﺟﻨﺴﻬﺎي ﻣﺬﻛﻮر ﻧﺒﻮدﻧﺪ. ﺑﻄﻮر ﻛﻠﻲ در ﺑﻴﻦ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺘﻬﺎ Halobacillus ﻣﺜﺒﺖ ﻗﺮار دارﻧﺪ . ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺟﻨﺲ هﻏﺎﻟﺐ ﺑﻮد و در ﺎﻴﻣ ن ﮔﺮم ﺎﻴﻣ در و هﻏﺎﻟﺐ ﺑﻮد ﻣﻨﻔﻴﻬﺎ ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﺟﻨﺲ Halomonas و Salicola ﻏﺎﻟﺐ ﺑﻴﺸﺘﺮ اﻳﺰوﻟﻪﻫﺎي ﻣﺤﻴﻄﻲ ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ .ﺑﻮدﻧﺪ ﺟﻨﺴﻬﺎي ﺑﻌﻨﻮانﺑﺎﺳﻴﻠﻮس ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻫﺎي ي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﻫﺎي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪه ﺑﻌﻨﻮانﺑﺎﺳﻴﻠﻮس ﺟﻨﺴﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﻣﻄﺎﺑﻖ ﻧﺘﺎﻳﺞ(16) ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺧﺎرج ﺳﻠﻮﻟﻲ ﺷﻨﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪه و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﻓﺮآﻳﻨﺪ ﻫﺎي Halobacillus هﺑﻮد ﻛﻪ در اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ ﻧﺘ ﺎ ﺑﻳﺞ ﻣﺸﺎﺑﻬﻲ ﻪ ﻣﺸﺎﺑﻬﻲ ﺑﻳﺞ ﺎ ﺻﻨﻌﺘﻲ از ﮔﻮﻧﻪ ﻫﺎي ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ اﻳﻦ ﺟﻨﺲ ﺑﺮاي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺻﻨﻌﺘﻲ آﻣﺪدﺳﺖ اﻳﺰوﻟﻪ. و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﺟﺪا ﺷﺪه ﻣﺘﻌﻠﻖ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ اﺳﺘﻔﺎده ﻣﻲ ﻛﻨﻨﺪ . . ﻛﻨﻨﺪ ﺟﻨﺴﻬﺎيﺑﻪ Halomonas و Salicola ﺑﻮدﻧﺪ . ﻋﻼوه ﺑﺮ اﻳﻦ، . ﺑﻮدﻧﺪ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎﺗﻮﻟﻴﺪ ي آﻣﻴﻼز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، ﻟﻴﭙﺎز، DNase، اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز، در اﻳﻦ ﻏﺮﺑﺎﻟﮕﺮي ﻣﺎ ﻣﻮﻓﻖ ﺑﻪ ﺟﺪاﺳﺎزي ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎﻳﻲ از ﺟﻨﺲ ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز، ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز، ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز، ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز و Thalassobacilus و Marinococcus ،Idiomarina، ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز در ﻫﺮ ﺳﻪ ﮔﺮوه ﺑﺎﺳﻴﻠﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ، ﻛﻮﻛﻮﺳﻬﺎي Nesterenkoniaو Staphylococcus هﺷﺪ ﻛﻪ در ﺑﺮرﺳﻴﻬﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ و ﺑﺎﺳ ﻬﺎيﻠﻴ ﮔﺮم ﻣﻨﻔﻲ ﻣﺸﺎﻫﺪه ﺷﺪ . ﺗﻨﻬﺎ ﺗﻮﻟﻴﺪ . اﻧﺠﺎم ﺷﺪه ﺗﻮﺳﻂ Sanchez-Porro در ﺳﺎل 2003 (16 ) ) آﻧﺰﻳﻢ ﻟﻴﭙﺎز در ﻛﻮﻛﻮسﻫﺎي ﮔﺮم ﻣﺜﺒﺖ دﻳﺪه ﻧﺸﺪ . . ﻛﻪ ﺑﺮ روي ﻣﺤﻴﻄﻬﺎي ﺷﻮر ﻣﺨﺘﻠﻒ در ﺟﻨﻮب اﺳﭙﺎﻧﻴﺎ اﻧﺠﺎم ﮔﺮﻓﺖ ازاﻳﻦ ﺟﻨﺴﻬﺎي ذﻛﺮ ﺷﺪه ﻫﻴﭻ ﺳﻮﻳﻪاي ﺟﺪاﺳﺎزي در ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﺗﺎﮔﺰوﻧﻮﻣﻲ 83 اﻳﺰوﻟﻪ ﻣﺤﻴﻄﻲ ﻗﺎدر ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ .ﻧﺸﺪ ﻫﻤﭽﻨﻴﻦ آﻧﻬﺎ در ﻣﻄﺎﻟﻌﺎت ﺧﻮد ﺳﻮﻳﻪﻫﺎﻳﻲ ازﺟﻨﺲ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺟﺪا ﺷﺪه از درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ Salinivibrio ﺟﺪاﺳﺎزي ﻛﺮدﻧﺪ در ﺣﺎﻟﻲ ﻛﻪ در اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻣﺸﺨﺺ ﺷﺪ ﻛﻪ ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪﮔﺎن از اﻳﻦ ﺟﻨﺲ ﻫﻴﭻ ﺳﻮﻳﻪاي ﺟﺪاﺳﺎزي ﻧ ﺸﺪ ﻛﻪ دﻟﻴﻞ اﺻﻠﻲ آﻣﻴﻼآﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ز، ﭘﺮوﺗﺌﺎز، DNase، اﻳﻨﻮﻟﻴﻨﺎز ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺗﻮاﻧآن ﺪرا ﻣﻲ ﺑﻪ ﺑﺎﻻﺗﺮ ﺑﻮدن ﻏﻠﻈﺖ ﻧﻤﻜﻬﺎ در درﻳﺎﭼﻪ ﺟﻨﺴﻬﺎي Halobacillus و Thalassobacillus و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻧﺴﺒﺖ داد ﭼﺮا ﻛﻪ اﻳﻦ ﺑﺎﻛﺘﺮي در-10 ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪﮔﺎن آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﭘﻜﺘﻴﻨﺎز، ﻛﻴﺘﻴﻨﺎز ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ 5/2 درﺻﺪ NaCl داراي رﺷﺪ هدﺑﻬﻴﻨﻪ ﺑﻮ و ﺣﺪاﻛﺜﺮ ﻏﻠﻈﺘﻲ Halobacillus و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﻛﻨﻨﺪﮔﺎن آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﮔﺰﻳﻼﻧﺎز،
43 43
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
ﭘﻮﻟﻮﻻﻧﺎز ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Thalassobacillus و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎﻳﻲ ﺑﺎ ﭼﻨﺪﻳﻦ ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺳﻮﻳﻪ ﻫﺎي ﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﻟﻴﭙﺎز ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ Salicola و ﺑﻴﺸﺘﺮ ﺗﻮﻟﻴﺪ ارزﺷﻤﻨﺪي ﺑﺮاي اﻫﺪاف ﺑﻴﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮژﻳﻜﻲ ﻣﺤﺴﻮب ﻣﻲ .ﺷﻮﻧﺪ ﻛﻨﻨﺪﮔﺎن ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻻز ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ ﺟﻨﺲ ﺑﻪ ﻃﻮر ﻛﻠﻲ در ﻣﻘﺎﻳﺴﻪ ﺑﻴﻦ ﺟﻨﺴﻬﺎي Halomonas Salinicoccus ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ و ﺑﻨﺎﺑﺮاﻳﻦ اﻳﻦ ﻧﺸﺎﻧﻪ اﻫﻤﻴﺖ ﺟﻨﺴﻬﺎيو Halobacillus، ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺗﺮﻛﻴﺒﻲ از آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ Halobacillus و Thalassobacillus از ﻧﻈﺮ ﺗﻮاﻧﻤﻨﺪي ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺟﻨﺴﻬﺎيدر ﻣﺘﻌﻠﻖ ﺑﻪ Halobacillus ﺑﻴﺸﺘﺮ دﻳﺪه ﻣﻲ ﺷﺪ. آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺑﺎ ارزش ﺻﻨﻌﺘﻲ ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ . ﻣﻄﺎﻟﻌﺎت اﻛﻮﻟﻮژﻳﻜﻲ در اﻳﻦ ﺗﺤﻘﻴﻖ در درﻳﺎﭼﻪ ﻧﻤﻚ آران و ﺑﻴﺪﮔﻞ ﻣﻨﺠﺮ ﺑﻪ ﺟﺪاﺳﺎزي وﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﺗﻌﺪاد ﮔﺴﺘﺮدهاي از ﺑﺮﺧﻲ از ﺳﻮﻳﻪﻫﺎ ﻗﺎدر ﺑﻪ ﺗﻮﻟﻴﺪ ﺗﺮﻛﻴﺒﻲ از آﻧﺰﻳﻤﻬﺎي آﻧﺰﻳﻤﻬﺎ ﺗﻨﻮع ﺑﺎﻛﺘﺮﻳﻬﺎي ﻧﻤﻚ دوﺳﺖ ﻧﺴﺒﻲ ﺷﺪ ﻛﻪ اﻳﻦ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺷﺎﻣﻞ 1ﺳﻮﻳﻪ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ 8 آﻧﺰﻳﻢ، 3 ﺳﻮﻳﻪ ﻣﻴﻜﺮوارﮔﺎﻧﻴﺴﻤﻬﺎ ﺑﺮاي ﻫﻴﺪروﻟﻴﺰ ﭘﻠﻴﻤﺮﻫﺎﻳﻲ ﭼﻮن ﮔﺰﻳﻼن ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﻮﻟﻴﺪ 7 آﻧﺰﻳﻢ، 7 ﺳﻮﻳﻪ 6 آﻧﺰﻳﻢ، 5 ﺳﻮﻳﻪ 5 آﻧﺰﻳﻢ، ،ﭘﻮﻟﻮﻻن، ﭘﻜﺘﻴﻦ و ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ ﻣﺘﻴﻞ ﺳﻠﻮﻟﺰ داراي ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ 9ﺳﻮﻳﻪ 4 آﻧﺰﻳﻢ، 12 ﺳﻮﻳﻪ 3 آﻧﺰﻳﻢ،14 ﺳﻮﻳﻪ2 آﻧﺰﻳﻢ ﺑﺎﻟﻘﻮه ﻣﻲ ﺑﺎﺷﻨﺪ . . ﺷﺪﻧﺪ. اﻳﻦ در ﺣﺎﻟﻲ اﺳﺖ ﻛﻪ Sanchez-Porro در ﺳﺎل (2003 ) ﺗﻨﻬﺎ 4 ﺳﻮﻳﻪ ﺑﺎ 5 ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ ﻫﻴﺪروﻟﻴﺘﻴﻚ ﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﻛﺸﻒ وﺷﻨﺎﺳﺎﻳﻲ ﭼﻨﻴﻦ ﺳﻮﻳﻪﻫﺎﻳﻲ ﻛﻪ ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ ﺗﺠﺰﻳﻪ ﻛﺮده اﺳﺖ ﻫﻤﭽ. ﻨﻴﻦ ﺑﺮﺧﻼف ﻛﺎر آﻧ ﻬﺎ ﺳﻮﻳﻪاي ﺑﺪون ﭘﻠﻴﻤﺮﻫﺎي زﻳﺴﺘﻲ را دارﻧﺪ ﻳﻚ اﻓﻖ ﺗﺎزه را در ﺑﻴﻮﺗﻜﻨﻮﻟﻮژ ي ي ﻓﻌﺎﻟﻴﺖ آﻧﺰﻳﻤﻲ ﻧﺪاﺷﺖوﺟﻮد . ﻣﺪرن ﺑﺎز ﻣﻲ ﻛﻨﺪ . .
ﻣﻨﺎﺑﻊ
1- Allais, J. J., Kammoun, S., Blanc, P., Girard, Bacillus species . Int . J. Syst. Bacteriol . 47:735- C.(1986) Isolation and characterisation of 741 bacterial strains with inulinase activity. Applied 8- Lichfield, C. D.(2002) Halophiles. J. Ind. and Environmental microbiology. 52(5):1086- Microbiol. Biotechnol. .28: 21-22 1090 9- Lichfield, C. D. and Gillevent, P. M.(2002) 2- Apun, K., Malaysia, S.( 1995) Cellulase Microbial diversity and complexity in production. Practical biotechnology. National hypersaline environments. A preliminary center for biotechnology Education assessments. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 28: 3- Atlas, R. M.(1997) Hand book of microbiology 48-55 media, snd, Boca Raton, FL: CRC press 10- Marcia M. C. N., da Silva, R., Gomes, E. (1999) 4- Baron, E. J., & Finegold, S. M.(1990) Bailey and Screening of bacterial strains for pectinolytic Scott s Diagnostic Microbiology. 8 th edn, St. activity : characterization of the Louis: Mosby polygalacturonase produced by bacillus sp, Revista de Microbiology. 30: 299-303 5- Cowan, D. A.(1991) Industrial enzymes in biotechnology, The science and the Busines eds 11- Moreno, M. L., Mellado, E., Garcia, M. T., Moses, V. and Cape, R. E. pp 311-340. Reading ; Ventosa, A.(2007) Diversity of extreme Harwood Academic Publishers halophiles producing hydrolytic enzymes in hypersaline habitats, Halophiles-2007 congress 6- Florez-Fernandez, M. L., Zavaleta, A. I., booklet.1: 59-60 Cardenas-Fernandez, A. M., Cervantes, L. L., Coser, R. M.(2007) Diversity of moderately 12- Murray, R. G. E., Doetsch, R. N., & Robinow, halophilic bacteria producing extracellular C. F.(1994) Determination and cytological light hydrolytic enzymes isolated from Pilluana salt microscopy. In method for General and brine in Peru, Halophiles-2007 congress booklet. molecular bacteriology: pp. 21-41. Edited by 1: 50-51 p.Gerhardt, R.G.E. Murray, W. A. Wood & N. R. Krieg washington. DC: America society for 7- Garabito, M. J., Arahal, D. R., Mellado, E., microbiology Marquez, .M. C., & Ventosa, A.(1997) Bacillus salexigenes sp.nov., a new moderate halophilic
44 44
ﻣﺠﻠﻪ زﻳﺴﺖ ﺷﻨﺎﺳﻲ اﻳﺮان ﺟﻠﺪ 22، ﺷﻤﺎره 1 ر، ﺑﻬﺎ ﺑﻬﺎ 1388
13- Nichaus, F., Bortoldo, C., Kahlor, M., and 20- Ventosa, A., Quesada, E., Rodriguez-Valera, F., Antranikia, G.(1999) Extremophiles as a source Ruiz-Berraguero, F., and Ramos- Cormenzana, of novel enzymes for industrial application. A.(1982) Numerical taxonomy of moderatly Applied Microbiology and Biotechnology. 51: halophilic Gram-negative rods. Journal of 711-729 General Microbiology. 128: 1959-1968 14- Onishi, H., Mori, T., Takechi, S., Tani, K., 21- Ventosa, A., Marquez, M., Garabitom, M., and Kobayashi, T., & Kamekura, M.(1983) Arahal, D.(1998 a) Moderately halophilic Gram- Halophilic nuclease of a moderately halophilic positive bacteria diversity in hypersaline bacillus sp: production, purification and environments. Extremophiles. 2: 297-304. characteristics. Appl. Environ. Microbiol. 45:24- 22- Ventosa, A., Nieto., and Oren, A.(1998 b) 30 Biology of moderatly halophilic aerobic bacteria. 15- Ruben, D., Gonzalez, Elvila C., Arenas, Elisa, Microbial . Mol. Biol. 62: 504-544 B., Vilches, and Miguel A. de Billerbeck.(1993) 23- Ventosa, A., and Nieto, J. J.(1995) selective procedure for isolated of Biotechnological and potential of halophilic microorganism producing pullulanase and microorganisms. World Journal of Microbiology isoamylase. Biotechnology techniques. volume 7 and Biotechnology. 11: 85-94 No.6. pp. 429-434. 24- Waino, M., and Ingvorsen, K.(2003) Production 16- Sanchez-porro. C., Martin. S., Mellado. E., and of B-xylanase and B-xylosidase by the extremely Ventosa, A.( 2003) Diversity of moderately halophilic archaeon Halorhabdus utahensis. halophilic bacteria producing extracellular Extremophile. 7:87-93 hydrolytic enzymes, Journal of Applied Microbiology 2003. 94: 295-300 25- Wejse, P. L., Ingvorsen, K.(2003) Purification and characterization of two extremly halotolerant 17- Shaikh S. A., and Deshpande M. V.( 1993) Xylanase from a novel halophilic bacterium, Chitinolytic enzymes, their contribution to basic Extremophiles, 7: 423-431 and applied research, World Journal of microbiology and biotechnology . 9: 468-475 26- Winkler, U. K., and Stuckmann, M.(1979) Glycogen, hyaluronate, and some other 18- Simankova, M. V., Chernych, N. A., Osipov, G. polysaccharides greatly enhance the formation of A., and Zavarzin, G. A. (1994) Halocella exolipase by serratia marcescens. Journal of cellulolytica gen. nov., a new obligately Biotechnology. 138: 663-670 anaerobic, halophilic, cellulolytic bacterium. Syst. Appl. Microbiol.16:385-389 27- Zvereva, E. A., Fedorova, T. V., Kevbrin, V. V., Zhilina, T. N., Rabinovich, M. (2006) Cellulase 19- Smibert, R. M., Krieg, N. R.(1994) Phenotypic activity of a haloalkaliphilus an aerobic characterization. In Methods for general and bacterium, strain Z-7026. Extremophiles. Molecular Bacteriology, pp. 607-654. Edited by 10:651-1431 P. Gerhardt, R. G. E. Murray, W. A. Wood & N. R. Krieg. Washington, DC: American Society for Microbiology.
45 45
Isolation, Identification and characterization of moderately halophilic bacteria producing hydrolytic enzymes from Aran- Bidgol salt lake Babavalian fard H.1, Amoozegar M.A.2, and Pourbabaee A.A.3 1Applied Biotechnology and Environment Research Center , Baqiyatallah University of Medical sciences, Tehran, I. R. of IRAN 2 Extremophile lab , Microbiology Dept., School of Biology, College of Science , University of Tehran, Tehran , I. R. of IRAN 3 Biology Dept., Faculty of Science , Islamic Azad University, Qom, I. R. of IRAN Abstract Aran-Bidgol salt lake is one of the lakes in central desert zone of Iran and is largest playa in Iran. This lake has shape as like a triangle that top it is towards north. Base length this triangle is 35 Km and high it is 38 Km. Screening bacteria from different points Aran-Bidgol salt lake, led to the isolation of 61 Gram-positive halophilic bacteria and 22 Gram-negative bacteria able to produce different hydrolytic enzymes. These strains are able to grow optimally in media with 5-15 % salts, 35-37ºC temperature and pH 7.2. Strains No. 32, 20, 27, 40, 40, 9, 11, 24, 16 and 20 were produced amylase, protease, lipase, DNase, inulinase, xylanase, carboxy methyl cellulase, pectinase, pullulanase and chitinase. It is interesting that combined hydrolytic activities have been detected in some strains. DNase, inulinase were the most enzymes produced in Gram- positive bacilli and Gram- negative bacteria, lipase and Gram-positive cocci, pullulanase, carboxy methyl cellulase. Among these isolates, several strains with the ability to produce different valuable enzymes were selected, including AMB1(8 enzymes); AMB7, AMB10, AMB12(7 enzymes); AMB5, AMB6, AMB11, AMB13(6 enzymes); AMB2, AMB3, AMB8, AMB9(5 enzymes); AMB4, AMG1(4 enzymes); AMC1, AMC2(3 enzymes); AMC3, AMC8, AMC17, AMG2 (2 enzymes); AMG3(1 enzymes). Selected strains, after more accurate physiological and biochemical studies were identified regarding phylogeny and molecular characteristics using 16S rRNA technique. Sequencing 16S rRNA was performed to complete the identification process, which Gram-positive bacteria were belong to Halobacillus, Thalassobacillus, Bacillus, Salinicoccus and Gram-negative bacteria were belong to Idiomarina, Salicola and Halomonas. Keywords: Extremophiles, halophile, hydrolytic enzymes, screening