Potencial De Fungos Micoparasitas No Biocontrole Da Pinta-Preta Do Mamoeiro. Orientador: Prof
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POTENCIAL DE FUNGOS MICOPARASITAS NO BIOCONTROLE DA PINTA-PRETA DO MAMOEIRO JANIELI MAGANHA SILVA VIVAS UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE DARCY RIBEIRO – UENF CAMPOS DOS GOYTACAZES – RJ MARÇO – 2018 POTENCIAL DE FUNGOS MICOPARASITAS NO BIOCONTROLE DA PINTA-PRETA DO MAMOEIRO JANIELI MAGANHA SILVA VIVAS “Tese apresentada ao Centro de Ciências e Tecnologias Agropecuárias da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro, como parte das exigências para obtenção do título de Doutora em Produção Vegetal” Orientador: Prof. Silvaldo Felipe da Silveira. CAMPOS DOS GOYTACAZES – RJ MARÇO – 2018 POTENCIAL DE FUNGOS MICOPARASITAS NO BIOCONTROLE DA PINTA-PRETA DO MAMOEIRO JANIELI MAGANHA SILVA VIVAS “Tese apresentada ao Centro de Ciências e Tecnologias Agropecuárias da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro, como parte das exigências para obtenção do título de Doutora em Produção Vegetal” Aprovada em 08 de março de 2018. Comissão Examinadora: AGRADECIMENTOS A Deus, por sua presença forte e constante em minha vida; A todos os meus familiares, em especial aos meus pais, Maria Rita Maganha Silva e Ely Ferreira Silva, pelo apoio, oração constante e por torcerem sempre por minha felicidade e realização. À minha irmã, Juliete Maganha Silva, que sempre esteve ao meu lado como uma verdadeira companheira inseparável; Ao meu esposo, Marcelo Vivas, pelo companheirismo, comprometimento e incentivo; Ao meu orientador, professor Silvaldo Felipe da Silveira, pela oportunidade, pela confiança e por todos os ensinamentos, além do grande incentivo; Aos Colegas de Laboratório pela amizade e convivência; Ao CNPq, pela concessão da bolsa de Doutorado; À Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro e ao Centro de Ciências e Tecnologia em Agropecuária, pela oportunidade de realização do curso. ii SUMÁRIO RESUMO V ABSTRACT Vii 1. INTRODUÇÃO ........................................................................................ 1 2. REVISÃO DE LITERATURA.................................................................... 4 2.1. A importância da cultura do mamoeiro ............................................ 4 2.2. A pinta-preta no mamoeiro .............................................................. 5 2.3. Controle da pinta-preta do mamoeiro.............................................. 7 2.4. Controle biológico .......................................................................... 9 2.4.1. O gênero Acremonium sp ......................................................... 11 2.4.2. A espécie Hansfordia pulvinta ................................................. 12 2.5. Indução de resistência sistêmica em mamoeiro .............................. 13 3.TRABALHOS ............................................................................................ 16 3.1. IDENTIFICAÇÃO DE Acremonium spp. MICOPARASITAS DE Asperisporium caricae.............................................................................. 16 3.1.1. Resumo .................................................................................... 16 3.1.2. Abstract .................................................................................... 17 3.1.3. Introdução ................................................................................ 17 3.1.4. Material e Métodos ................................................................... 19 3.1.5. Resultados ............................................................................... 21 3.1.6. Discussão.................................................................................. 31 3.1.7. Conclusão ................................................................................. 33 3.1.8. Referências .............................................................................. 33 3.2. Antagonismo de fungos com potencial de biocontrole da pinta preta causado por Asperisporium caricae .............................................. 38 iii 3.2.1. Resumo ................................................................................... 38 3.2.2. Abstract ..................................................................................... 39 3.2.3. Introdução ................................................................................ 40 3.2.4. Material e Métodos ................................................................... 41 3.2.5. Resultados e Discussão ........................................................... 45 3.2.6. Conclusão................................................................................. 52 3.2.7. Referências............................................................................... 52 3.3. Sensibilidade de fungos micoparasitas a produtos alternativos com potencial de uso no controle da pinta-preta do mamoeiro ...................... 56 3.3.1. Resumo .................................................................................... 56 3.3.2. Abstract .................................................................................... 57 3.3.3. Introdução ................................................................................ 58 3.3.4. Material e Métodos ................................................................... 60 3.3.5. Resultados e Discussão ........................................................... 64 3.3.6. Conclusão ................................................................................. 72 3.3.7. Referências .............................................................................. 72 3.4. O progresso da pinta preta e fungos micoparasitas em diferentes genótipos de mamoeiro sob condições naturais de inoculação ............. 76 3.4.1. Resumo .................................................................................... 76 3.4.2. Abstract ..................................................................................... 77 3.4.3. Introdução ................................................................................. 78 3.4.4. Material e Métodos ................................................................... 79 3.4.5. Resultados e Discussão ........................................................... 82 3.4.6. Conclusão ................................................................................. 90 3.4.7. Referências .............................................................................. 91 4. RESUMO E CONCLUSÃO GERAL ......................................................... 94 5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS........................................................ 96 iv RESUMO VIVAS, Janieli Maganha Silva D. Sc., Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro. Março de 2018. Potencial de fungos micoparasitas no biocontrole da pinta-preta do mamoeiro. Orientador: Prof. Silvaldo Felipe da Silveira. Para o controle da pinta-preta do mamoeiro, causada pelo fungo Asperisporium caricae, a pulverização com fungicidas é ainda a principal medida, havendo, portanto, a necessidade de se buscar alternativas de controle de maior sustentabilidade, tais como o controle biológico. Esta possibilidade se consolida pelo fato de ocorrerem no campo fungos de coloração branca colonizando lesões da pinta-preta do mamoeiro. O objetivo deste trabalho foi: i) identificar as espécies de fungos micoparasitas de Asperisporium caricae; ii) avaliar a atividade antagônica dos fungos a A. caricae; iii) analisar a sensibilidade de fungos micoparasitas a indutores de resistência; e, iv) determinar o progresso da pinta- preta e de fungos micoparasitas em diferentes genótipos de mamoeiro sob condições naturais de inoculação. Para a identificação, isolados de Acremonium com potencial de micoparasitismo foram caracterizados quanto à morfologia, extraiu-se o DNA genômico e sequenciaram-se as regiões gênicas LSU, RPB2 e Actina. No estudo de antagonismo, um isolado de cada espécie foi avaliado em co-cultivo com os esporos em germinação do patógeno. Além disso, avaliou-se a atividade enzimática (protease e lípase) dos fungos, em meio de cultura específico para cada enzima, bem como a produção de componentes voláteis e não voláteis, com atividade antagônica a A. caricae. No estudo de sensibilidade, v quatro isolados antagonistas - três de Acremonium (um de cada espécie) e um de Hansfordia pulvinata - foram cultivados em meio de cultura juntamente com os produtos alternativos: Agro-Mos®, Bion®, Ecolife®, Hortifos pk®, Matriz G®, Vitaphol®. Avaliou-se a toxicidade dos produtos testados com base no índice biológico, calculado a partir dos valores de crescimento micelial, esporulação e germinação dos conídios. Os produtos considerados compatíveis com os isolados de fungos micoparasitas foram pulverizados em plantas sintomáticas, sob condições de telado. Por fim, avaliou-se, ao longo de um ano, a ocorrência natural da pinta-preta e de fungos micoparasitas em três genótipos de mamoeiro no campo, em lavoura de Mimoso do Sul - ES, sendo estimada, mensalmente, a incidência e a severidade da doença pinta-preta e dos fungos micoparasitas na folha intermediária e na última folha. Obtiveram-se as frequências dos gêneros dos fungos micoparasitas nas diferentes épocas do ano. Foi possível identificar ocorrência de três novas espécies de Acremonium sp. associadas ao micoparasitismo em pinta-preta do mamoeiro: Acremonium sp I (CF/UENF 446, COAD 1733), Acremonium sp II (CF/UENF449, COAD1730) e Acremonium sp III (COAD 1731), todas pertencentes à família Bionectriaceae e ao complexo de espécies de A. sclerotigenum. Confirmou-se no co-cultivo o evento de micoparasitismo para a maioria dos isolados micoparasitas, com exceção de Simplicilium