Estudo Filogeográfico Do Gênero Pterophyllum, Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) Na Bacia Amazônica, Utilizando O Gene Do Citocromo B E Morfometria Geométrica

INSTITUTO NACIONAL DE PESQUISAS DA AMAZÔNIA – INPA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOLOGIA TROPICAL E RECURSOS NATURAIS – PPGBTRN

Estudo filogeográfico do gênero Pterophyllum, Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b e morfometria geométrica

NATASHA VERDASCA MELICIANO

Manaus – AM Maio, 2008.

Livros Grátis

http://www.livrosgratis.com.br

Milhares de livros grátis para download.

NATASHA VERDASCA MELICIANO

Estudo filogeográfico do gênero Pterophyllum, Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b e morfometria geométrica

ORIENTADOR: Dr. TOMAS HRBEK Co-orientador: Dra. Izeni Pires Farias

Financiamento: CT-Amazonia/CNPq (Processo No. 554057/2006-9) BECA (B/2006/01/BMP/09)

Dissertação apresentada ao Programa de Pós - Graduação em Biologia tropical e Recursos Naturais do convênio INPA/UFAM, como parte dos requisitos para obtenção do título de Mestre em

Ciências Biológicas, área de concentração em Genética, Conservação e Biologia Evolutiva.

Manaus – AM Maio, 2008. FICHA CATALOGRÁFICA

M522 Meliciano, Natasha Verdasca Estudo filogeográfico do gênero Pterophyllum, Heckel, 1840 (Cichlidae/Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b e morfometria geométrica / Natasha Verdasca Meliciano.--- Manaus : [s.n.], 2008. xii, 71 f. : il.

Dissertação (mestrado) --- INPA/UFAM, Manaus, 2008 Orientador : Tomas Hrbek Co-orientador : Izeni Pires Farias Área de concentração : Genética, Conservação e Biologia Evolutiva

1. Pterophyllum – Filogeografia. 2. Pterophyllum – Morfometria. 3. Peixes - Amazônia. I. Título.

CDD 19. ed. 597.58

SINOPSE

Neste trabalho foi desenvolvido, um estudo filogeográfico e populacional dos peixes do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae), no contexto

amazônico, utilizando como ferramentas o gene mitocondrial do citocromo

b e morfometria geométrica, buscando entender como este grupo, com três espécies (P. scalare, P. altum e P. leopoldi), está atualmente distribuído e os prováveis processos evolutivos que provocaram ou que mantêm a disposição genética e morfométrica encontrada nestes peixes ao longo da bacia amazônica. Foi observado que este grupo é resultante de antigos

eventos de fragmentação seguidos por episódios de expansão geográfica, em conjunto com processos de fluxo gênico restrito e isolamento por distância. A variabilidade morfológica pode ser explicada por fatores genéticos, ambientais e ecológicos, o que mostra plasticidade fenotípica destes peixes.

Aos meus queridos pais, Maria Fernanda Ferreira Verdasca Meliciano e Rogério Ruas dos Santos Meliciano. Às minhas amigas e irmãs, Vanessa Verdasca Meliciano e Priscilla Verdasca Meliciano.

II AGRADECIMENTOS

Não só nesta trajetória, mas durante toda minha vida, gostaria de agradecer a Deus, pois me presenteou com a vida, força e coragem, reafirmando minha fé perdida. Agradeço a minha família pelo apoio, compreensão, carinho e paciência demonstrado, independente de minhas atitudes. Maior gratidão devo aos meus pais, Rogério Ruas dos Santos Meliciano e Maria Fernanda Ferreira Verdasca Meliciano, pela palavra sempre oportuna. À minha mãe dedico gratidão adicional por ter apoiado este sonho, mesmo quando esteve com sua saúde frágil. Agradeço também as minhas duas irmãs, Vanessa Verdasca Meliciano e Priscilla Verdasca Meliciano, que me deram forte base familiar. Ao meu querido Olavo, agradeço pela ajuda neste projeto, pelo carinho, apoio e compreensão, estando sempre presente, ao meu lado, mesmo fisicamente distante. Agradeço aos meus antigos amigos e aos novos, que conquistei nesta jornada, especialmente: Annelyse, Cleiton, Murilo, Marcelo (Brasa), Sílvia, Renato, Carlos (Kaká), Pedro (Peter), Rafael (Narck), Rafael (Rafolia), Marco, Gisele, Michelly, Rafael (Angrizzane), Frida e Rafinha, por terem assumido o papel de família postiça. Agradeço a todas as pessoas que me ajudaram no desenvolvimento deste trabalho, que agora as considero como amigas e colegas de ofício. A meu ver, realmente praticaram ciência, democratizando o conhecimento e trabalhando em equipe. Sou grata aos meus amigos de trabalho no laboratório, pelo ótimo ambiente que promoveram e pelos ensinamentos que melhoraram decisivamente minha pesquisa: Adam, Andréia, Áureo, Carlinha, Cleiton, Cocy (Vegas), Daniel, Eduardo, Edvaldo, Fábio, Kelmer, Liza, Mário, Marina, Pedro Sena, Pedro Ivo, Rafinha, Themis, Valéria, Waleska e Will, todos unidos formam um exemplo de equipe. Agradeço aos docentes Dr. Lúcia Rappi-py Daniel, Dr. Eliana Feldberg e Dr. Jasen Zuanon, pela prestatividade e por contribuir cientificamente para este trabalho. Agradeço a equipe da RDS Piagaçú – Purus, pela ajuda durante algumas coletas. Tenho gratidão a muitas outras pessoas que me assistiram durante as coletas deste trabalho, que mesmo sem saber o significado deste projeto me ajudaram muito sem interesse algum: Senhor Carlos, Senhora Ray e família, Senhora Iolanda, Senhora Rosa e família, Senhor Elder Batista, Senhor Fábio, Senhora Raimunda Farias e família, “Serelepe” e ao Senhor Xavier, Senhora Raimunda e família Nogueira.

III Agradeço, especialmente, meu orientador o professor Dr. Tomas Hrbek, por acreditar em mim, por acompanhar e contribuir significativamente no meu desenvolvimento acadêmico. O Dr. Tomas me aceitou sem ao menos me conhecer, me orientou com liberdade e exigência ao mesmo tempo. Respeitou-me como indivíduo e reconheceu-me como pesquisador, permitindo o meu desenvolvimento científico e a realização deste sonho. É com muita admiração, orgulho e respeito que demonstro o meu sincero obrigado. Com muito carinho agradeço minha co-orientadora, a professora Dr. Izeni Pires Farias, pela confiança, por estar sempre presente e pelos ensinamentos de Genética e Biologia Evolutiva. Mesmo sendo minha co-orientadora, esteve sempre muito próxima, me acompanhando de perto, estando disposta sempre que necessário. Agradeço ao programa de Pós-Graduação em Biologia Tropical e Recursos Naturais do convênio INPA/UFAM, especialmente ao curso de Genética, Conservação e Biologia Evolutiva (GCBEV/INPA), pela oportunidade de mestrado. Agradeço aos integrantes docentes do curso GCBEV/INPA, pelos conhecimentos adicionados durante o mestrado. Agradeço a Universidade Federal do Amazonas (UFAM) pelo espaço utilizado do Laboratório de Genética Animal (LEGAL), sob a coordenação da Professora Dr. Izeni Pires Farias. Agradeço a CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de nível Superior) pela bolsa de estudos oferecida. Ao IEB (Instituto Internacional de Educação no Brasil) / programa BECA e ao CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico) pelo financiamento deste trabalho, sob os processos de número: B/2006/01/BMP/09 e 554057/2006-9, respectivamente.

Muito Obrigado!!!

IV RESUMO

Este trabalho foi desenvolvido em dois capítulos: no primeiro foi abordado o enfoque genético e no segundo foi trabalhado o aspecto morfométrico dos peixes do gênero Pterophyllum, amplamente distribuídos pela bacia amazônica, buscando entender os prováveis processos históricos e atuais, que causaram ou que mantêm o padrão filogeográfico haplotípico e morfométrico observados nestes peixes, utilizando, como ferramentas, o gene mitocondrial do citocromo b e morfometria geométrica, aplicados no estudo de peixes amostrados em quatorze localidades ao longo dos principais tributários Negro, Solimões e Amazonas. Como resultado, foi possível observar, neste grupo, a existência de uma complexa história filogeográfica, modelada por processos antigos e incertos de fragmentação, seguidos por episódios de expansão geográfica, juntamente com eventos de fluxo gênico e isolamento influenciados pela distância. Os padrões morfométricos encontrados apresentam forte relação com o grupo haplotípico inferido neste trabalho, além de mostrar significante diferenciação morfométrica de acordo com fatores ambientais e ecológicos como a distinta composição química e física das águas preta e branca, sendo este um exemplo da capacidade adaptativa e de plasticidade fenotípica dos peixes da família Cichlidae.

V ABSTRACT

This study was developed in two chapters: the first chapter focuses on genetic and the second on morphometric aspects of the genus Pterophyllum which is widely distributed in the Amazon basin. The goal was to understand the probable historical and ongoing processes that caused and that maintain phylogeographic and morphometic patterns observed in this group of fishes, using cytochrome b mitochondrial gene and geometric morphometric data. Data were collected for fishes sampled from fourteen localies along the Negro, Solimões and Amazonas rivers. Was observed a complex phylogeographic history resulting from ancient fragmentation events followed by episodes of geographic expansion and resticted gene flow with isolation by distance. Patterns of morphometric variation were strongly related to the observed haplotype groups in additon to showing significant morphometric differentiation related to environmental and ecological factos such as distinct chemical and physical composition of black and white water, highlighting phenotypic adaptability and plasticity of the fishes of the family Cichlidae.

VI SUMÁRIO

FICHA CATALOGRÁFICA ...... I AGRADECIMENTOS...... II AGRADECIMENTOS...... III RESUMO...... V ABSTRACT ...... VI SUMÁRIO ...... VII LISTA DE FIGURAS...... IX LISTA DE GRÁFICOS ...... X LISTA DE TABELAS...... XI

I. Introdução Geral...... 1 I.1. A família Cichlidae ...... 1 I.2. Aspectos evolutivos da família Cichlidae ...... 2 I.3. A Tribo Heroini...... 4 I.4. O gênero Pterophyllum Heckel, 1840...... 5

CAPÍTULO 1 - “Filogeografia do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b”...... 9

1. Introdução...... 9 1.1. Objetivos...... 12

2. Materiais e Métodos ...... 13 2.1. Amostragem...... 13

2.2. Métodos Moleculares: Extração de DNA, Amplificação e Seqüenciamento ...... 14

3. Resultados...... 20 3.1. Análises Moleculares...... 20

3.2. Análises Populacionais ...... 21

4. Discussão e Conclusão ...... 30

VII CAPÍTULO 2 - “Estudo da forma corporal de peixes do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) ao longo da Bacia Amazônica, utilizando morfometria geométrica”...... 36

1. Introdução...... 36 1.1. Objetivos...... 39

2. Materiais e Métodos ...... 40 2.1. Amostragem...... 40

2.2. Métodos Moleculares: Extração de DNA, Amplificação, Seqüenciamento e

Análises...... 41

2.3. Métodos Morfométricos...... 42

3. Resultados...... 46 4. Discussão e Conclusão ...... 51

BIBLIOGRAFIA ...... 55

ANEXOS...... 72

VIII LISTA DE FIGURAS

Introdução geral

Figura 1: Distribuição geográfica mundial da família Cichlidae...... 2 Figura 2: Pterophyllum scalare (Schultze, 1823)...... 6 Figura 3: Pterophyllum altum (Pellegrin, 1903)...... 6 Figura 4: Pterophyllum leopoldi (Gosse, 1963)...... 6 Figura 5: Esquema da distribuição geográfica das espécies do gênero Pterophyllum...... 7

Capítulo 1 – “Filogeografia do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b”

Figura 6: Mapa com a distribuição dos pontos amostrados...... 14 Figura 7: Árvore de relacionamento de haplótipos – critério Máxima Verossimilhança (HYK), indicando os valores de boostrap acima de 60%, onde Careiro = Careiro da Várzea; StaIsa = Santa Isabel e CCast = Careiro do Castanho...... 25 Figura 8: Rede haplotípica de clados hierarquizados por meio da análise NCA (grupo Ptero 2)...... 27 Figura 9: Rede haplotípica de clados hierarquizados por meio da análise NCA (grupo Ptero 3)...... 28

Capítulo 2 – “Estudo da forma corporal de peixes do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) ao longo da Bacia Amazônica, utilizando morfometria geométrica”

Figura 10: Mapa com a distribuição dos pontos amostrados...... 41 Figura 11: Descrição esquemática de pontos anatômicos...... 45

IX LISTA DE GRÁFICOS

Capítulo 1 – “Filogeografia do gênero Pterophylum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b

Gráfico 1: Composição percentual de bases...... 20 Gráfico 2: Relação entre a distância e as taxas de transição (ts) e transversão (tv)...... 20

Capítulo 2 – “Estudo da forma corporal de peixes do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) ao longo da Bacia Amazônica, utilizando morfometria geométrica”

Gráfico 3: Distribuição dos haplótipos ao longo dos dois primeiros componentes principais construídos com as variáveis morfométricas...... 48 Gráfico 4: Distribuição das populações amostradas ao longo dos dois primeiros componentes principais construídos com as variáveis morfométricas...... 48 Gráfico 5: Distribuição das populações amostradas do grupo Ptero 3 ao longo dos dois primeiros componentes principais construídos com as variáveis morfométricas...... 49

X LISTA DE TABELAS

Capítulo 1 – “Filogeografia do gênero Pterophylum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b

Tabela 1: Índices de diversidade genética e testes de neutralidade seletiva por localidade, onde N = Nº amostral e NH = N° de haplótipos, r = índice de Raggedness...... 24 Tabela 2: Análise de Variância Molecular (AMOVA), entre todas as localidades com N>5. É significativa a estrutura populacional (P < 0,001)...... 26 Tabela 3: Comparações par a par dos valores de Φst (abaixo e cor preta) e Nm (acima e cor vermelha) entre as populações analisadas. Os valores em azul correspondem respectivamente aos maiores índices significativos de Φst e de Nm relevante...... 26 Tabela 4: Distância genética intrapopulacional. Os números de coloração azul representam os maiores e os menores valores obtidos...... 26 Tabela 5: Distância genética entre populações par a par. Os números de coloração azul foram representam os maiores valores obtidos...... 27

Capítulo 2 – “Estudo da forma corporal de peixes do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) ao longo da Bacia Amazônica, utilizando morfometria geométrica”

Tabela 6: Pesos das variáveis morfométricas sobre os quatro primeiros componentes da análise de componentes principais...... 29 Tabela 7: Pesos das variáveis morfométricas sobre os cinco primeiros componentes da análise de componentes principais no grupo Ptero 3. Os valores marcados de azul indicam os maiores loadings obtidos...... 47 Tabela 8: Pesos das variáveis morfométricas sobre os cinco primeiros componentes da análise de componentes principais no grupo Ptero 3. Os valores marcados de azul indicam os maiores loadings obtidos...... 50

I. Introdução Geral

I.1. A família Cichlidae

A família Cichlidae pertence à ordem Perciformes e representa um dos mais diversificados grupo de peixes de água doce do mundo. Com 1.300 espécies (de um número maior e estimado de 2000) é considerada a quarta família com o maior número de espécies dentre os vertebrados (Kullander, 1998). Sua distribuição geográfica abrange a África (com o maior número de espécies), o Oriente médio (Iran e Síria), o sul da Índia e do Sri Lanka, as ilhas de Madagascar, Cuba e Hispaniola e as Américas Norte, Central e do Sul (Figura 1) (Kullander, 1998; 2003; Chakrabarty, 2004) Na América do Sul são conhecidas aproximadamente 291 espécies válidas distribuídas em 39 gêneros, sendo um grande número delas encontradas na Amazônia, possuindo importância econômica na região tanto como fonte de proteína animal como para fins ornamentais (Chao, 1995; Kullander, 2003). Os peixes desta família são encontrados nos mais diferentes habitats, compreendendo margens de rios, igarapés, florestas alagadas, lagos e locais rochosos, tendo preferência por ambientes lênticos, existindo algumas espécies adaptadas a ambientes reofílicos (Lowe-McConnell, 1991; Kullander, 2003). São conhecidos pelo comportamento de cuidado parental e, na sua maioria, se alimentam de pequenos invertebrados e de vegetais, com um número pequeno de grupos que se alimentam de outros peixes e de plâncton (Kullander, 2003). A diversidade encontrada neste grupo abrange os mais diferentes aspectos que variam desde características morfológicas e ecológicas, como, também, no comportamento e na dieta (Lowe-McConnell, 1969a; Kullander; Nijssen, 1989), o que demonstra uma grande capacidade

1 adaptativa e plasticidade fenotípica nos peixes desta família (Lowe-McConnell, 1969b; Kocher, 2004). A família Cichlidae é monofilética e está subdividida em oito subfamílias, sendo três do velho mundo (Etroplinae, Pseudocrenilabrinae e Heterochromidinae) e cinco do novo mundo (Retroculinae, Cichlinae, Astronotinae, Geophaginae e Cichlasomatinae), (Farias et al., 1998; Kullander, 1998).

Figura 1: Distribuição geográfica mundial da família Cichlidae.

Fonte: Sparks, 2001

I.2. Aspectos evolutivos da família Cichlidae

A diversidade encontrada na família Cichlidae, como um todo, é atribuída à complexidade de habitats ocupados por este grupo, que não só proporcionaram eventos de especiação, como originaram um rápido processo de irradiação adaptativa (Liem, 1991; Parker; Kornfield, 1997). A diversificação encontrada neste táxon reflete vários mecanismos surpreendentes que incluem, além da complexidade de habitats ocupados, a flutuação de lagos e de outros sistemas aquáticos, eventos genéticos

2 (mutação), distintas características comportamentais e reprodutivas, polimorfismo trófico, adaptações e especializações morfológicas (Parker; Kornfield, 1997; Kocher, 2004). Além destes fatores, a história biogeográfica nesta família também representou um fator contribuinte no desenvolvimento da variabilidade apresentada por estes peixes (Lundberg et al., 1998; Pérez et al., 2007).

A historia evolutiva dos ciclideos teve início a partir de um grupo basal de formato mais plesiomórfico existentes na Índia e Madagascar que divergiram no ancestral comum ao agrupamento formado pelos ciclídeos africanos e neotropicais que, mais adiante, se diferenciaram após o evento vicariante de separação do continente Gondwana em África e América do Sul há aproximadamente 105 - 90 milhões de anos (Ma) (Stiassny, 1991; Farias et al., 1998; 1999; Lundberg et al., 1998; Avise, 2000).

Uma segunda hipótese evolutiva foi proposta em trabalhos mais recentes, os quais cogitam a possibilidade desta família ter passado por prováveis dispersões marinhas durante o período Terciário, alcançando a porção oeste da Índia e de Madagascar posteriormente a separação destas regiões da Gondwana há, aproximadamente, 150 milhões de anos (Ma) (Murray, 2001; Vences et al., 2001; Briggs, 2003).

Desde sua separação, os ciclídeos africanos e neotropicais experimentaram efeitos bem distintos do meio ambiente, que levaram à nítidas diferenças entre estes dois grupos e dentro de cada um, configurando conjuntos evolutivos próprios e com alta diversidade (Farias et al., 1999). No caso sul-americano, principalmente na região noroeste, os ciclídeos tiveram sua história evolutiva influenciada por diferentes mudanças geomorfológicas, dentre as quais se destacam: o desenvolvimento dos Andes, acompanhado de transgressões e regressões marinhas e a formação do moderno fluxo oeste-leste dos rios Amazonas e Orinoco, proporcionando eventos para a especiação e enriquecimento do grupo (Lundberg et al., 1998).

Entre os ciclídeos neotropicais, estudos filogenéticos, tanto de base morfológica quanto molecular, demonstraram uma origem monofilética deste grupo, que, de acordo com os caracteres compartilhados, foi posteriormente

3 subdividido em cinco grandes agrupamentos (subfamílias) conhecidos como: Cichlasomines, Geophagines, Cichlinae, Retroculinae e Astronotinae, sendo Retroculinae a subfamília mais basal e Geophaginae e Cichlasomatinae as mais derivadas (Farias et al., 1998; 1999; Kullander, 1998; López-Fernández et al., 2005).

Farias et al. (1998) utilizando o gene mitocrondrial 16S rRNA, identificou monofilia, em grande parte, nas subfamílias do Neotrópico, além de uma grande variação genética quando comparado com o grupo Africano (8.6%- 19.1%), sugerindo que este grupo apresenta origens mais antigas do que se especula ou que este experimentou um rápido processo de evolução molecular. Uma explicação alternativa estaria baseada na hipótese de que o grupo Africano poderia ter sofrido maiores perdas em número de espécies devido às condições mais áridas neste continente (Lundberg, 1993).

I.3. A Tribo Heroini

A tribo Heroini (Kullander, 1998) pertence à subfamília Cichlasomatinae e é considerada uma das mais diversas tribos entre os ciclídeos neotropicais (Pérez et al., 2007). Compreende mais 139 espécies e está amplamente distribuída desde Buenos Aires, Argentina, até o Texas nos Estados Unidos (Kullander, 2003; Peréz et al., 2007).

Na América do Sul é representada por 27 espécies distribuídas em dez gêneros (Kullander, 1998; Santos, 2006): Heros Heckel, 1840, Pterophyllum Heckel, 1840, Uaru Heckel, 1840, Symphysodon Heckel, 1840, Hoplarchus Kaup, 1860, Mesonauta Günther, 1862, Acaronia Myers, 1940, Caquetaia Fowler, 1945, Hypselecara Kullander, 1986, Heroina Kullander, 1996.

Este grupo é diversificado e apresenta plasticidade morfológica principalmente com relação aos caracteres tróficos, o que dificulta estudos filogenéticos baseados na morfologia deste grupo (Meyer; Wilson, 1990; Peréz, 2007), no entanto a monofilia deste grupo é bem suportada. Cichocki (1976), utilizando dados morfológicos (morfologia; número de espinhos na nadadeira anal; ligamentos do palatino e padrões dentários), encontrou monofilia para o

4 grupo, o que mais tarde foi corroborado por Kullander (1996) e Farias et al. (1998; 1999; 2000; 2001), que também encontraram relação filogenética entre as tribos heroines e cichlasomines. Ainda de acordo com Farias et al. (1998), esta tribo (Heroini) ocupa a posição mais derivada e recente na subfamília Cichlasomatinae tendo seu aparecimento no final do Terciário.

I.4. O gênero Pterophyllum Heckel, 1840

Dentre os diversos ciclídeos ornamentais na Amazônia, encontra-se o Acará-Bandeira (Chapman et al., 1997; Yamamoto et al., 1999). Este peixe pertence ao gênero Pterophyllum Heckel, 1840, sendo um representante da tribo Heroini, que faz parte da subfamília Cichlasomatinae (Kullander, 1998; 2003). As espécies da tribo Heroini apresentam, em geral, um corpo lateralmente bem achatado de contornos dorsais e ventrais arqueados. Isso é bem evidente no gênero Pterophyllum, que também apresenta as nadadeiras dorsal e anal altas com raios de comprimento crescente e decrescente no sentido antero-posterior dando uma aparência triangular a forma corporal (Lowe-McConnell, 1969a; Kullander, 1986). A nadadeira caudal é truncada e apresenta filamentos de raios extensos, a nadadeira pélvica apresenta raios de comprimento alongado e juntamente com a nadadeira anal não apresentam escamas. O corpo apresenta com um contorno pré-dorsal côncavo com a presença de um entalhe próximo do focinho; a base da nadadeira dorsal é convexa e semicircular e o contorno total dorsal é maior que o ventral. O focinho é longo e triangular, visto lateralmente, e a região interorbital é levemente elevada. As mandíbulas são anteriores à região orbital sendo a mandíbula inferior situada posteriormente, levemente projetada para frente e inclinada para cima. O abdômen e o pedúnculo caudal são curtos, as escamas pequenas e lábios moderadamente grossos (Kullander, 1986). A coloração é cinza prateada contrastando com barras verticais de cor cinza amarronzadas ou pretas distribuídas ao longo do corpo. Além disso, contém a região peitoral prateada e uma mancha preta na base da nadadeira

5 dorsal. São encontrados em água branca ou em água negra com aspecto turbido, preferindo habitats lacustres ou águas lênticas próximas às margens de vegetação densa (Kullander, 1986) e alimentam-se de pequenos invertebrados (Yamamoto et al., 1999). Sua distribuição geográfica compreende: Peru, Brasil, Venezuela, Colômbia, Guiana, Guiana Francesa e Suriname (introduzido) (Lowe-McConnell, 1969a; Kullander, 1986; 2003). De acordo com Kullander (1986, 2003) existem três espécies válidas neste gênero: P. scalare (Schultze, 1823), P. altum Pellegrin, 1903 e P. leopoldi (Gosse, 1963). • P. scalare (Localidade tipo: localidade Lee Newman incerta): é a mais estudada dentre todas as espécies conhecidas e bem apreciada entre os peixes ornamentais. Apresenta 7,5cm de comprimento padrão (CP), 30-39 escamas ao longo da linha lateral e o entalhe no contorno pré-dorsal próximo ao focinho, Figura 2: Pterophyllum sendo menos aparente a mancha preta localizada na scalare (Schultze, 1823). base da nadadeira dorsal citada na descrição acima. Sua distribuição geográfica abrange a região da bacia amazônica no Peru, Brasil, Colômbia ao longo dos rios Ucayali, Solimões, Amazonas (até Belém), médio rio Negro e nos rios Madeira e Branco. Também é encontrado nos rios Araguaia (estado de Tocantins) e Oiapoque entre o estado do Amapá (BR) e a Guiana http//cichlidae.com Francesa, no rio Essequibo na Guiana e recentemente foi introduzido no Suriname. (Lowe-McConnell, 1969a; Figura 3: Pterophyllum altum (Pellegrin, 1903). Kullander, 1986; 2003) (Figura 2 e 5).

• P. altum (Localidade tipo: alto do rio Orinoco/ Bjame Saetrang Município de Atabapo): os representantes desta espécie possuem um corpo mais triangular, barras verticais mais amplas, contorno pré-dorsal mais visível, maior número de escamas (46-48) ao longo da linha lateral e comprimento padrão (CP) de 6,5cm. Sua distribuição compreende o alto rio Negro (bacia

Figura 4: Pterophyllum leopoldi (Gosse, 1963). 6 amazônica) e alto rio Orinoco nas regiões da Colômbia e Venezuela, preferencialmente em água preta e limpa (Lowe-McConnell, 1969a; Kullander, 1986; 2003) (Figura 3 e 5). • P. leopoldi (Localidade tipo: nas proximidades (90 km) de Manacapuru): os representantes desta espécie diferenciam-se por terem a região pré-dorsal menos evidente, apresentando um contorno mais contínuo. Na base da nadadeira dorsal, possui a mancha preta, já descrita acima, bem evidente. Dentre as três espécies é a que tem os menores comprimento padrão (CP) e número de escamas ao longo da linha lateral, que são respectivamente 5cm e 27-29. São encontrados nas águas dos rios Solimões e Amazonas desde Manacapuru até Santarém (BR) e na drenagem do rio Essequibo na Guyana (Kullander, 1986; 2003). De acordo com Kullander (1986), esta é a espécie, que apresenta maior semelhança morfológica com o gênero Mesonauta Günther, 1962 (Figura 4 e 5).

Figura 5: Esquema da distribuição geográfica das espécies do gênero Pterophyllum.

* O asterisco de cor verde indica a localidade, aonde a espécie P. scalare foi introduzida.

Historicamente, alguns estudos ressaltaram algumas questões sobre análise taxonômica e filogenética, gerando incertezas na delimitação e na estrutura deste gênero. Existem cinco espécies nominais neste gênero sendo: Zeus scalaris Schultze, 1823 (Platax scalaris Cuvier, 1831), Plataxoïdes dumerilii Castelnau, 1855, Pterophyllum altum Pellegrin, 1903, Pterophyllum eimekei Ahl, 1928 e Pterophyllum leopoldi (Gosse, 1963) (Kullander, 1986;

7 2003). Lowe-McConnell em 1969(a) citou problemas sobre a validação do gênero e a existência de sobreposição dos caracteres merísticos. Kullander em 1986 ressaltou que o grupo apresentava uma baixa resolução taxonômica, tendo como causas a falta ou a conservação precária de exemplares tipo, a existência de espécies sinôminas e a considerável variação dos caracteres merísticos utilizados. Dessa forma, sugeriu que Zeus scalaris, Plataxoïdes dumerilii, Pterophyllum eimekei eram espécie sinônimas de Pterophyllum scalare e que Pterophyllum altum e Pterophyllum leopoldi seriam duas espécies distintas. Atualmente três espécies estão definidas, mas estudos de natureza filogenética, principalmente moleculares, são escassos neste grupo. Kullander (1998) apresentou algumas incertezas filogenéticas e evolutivas na tribo Heroini, em particular, o gênero Pterophyllum, o que foi corroborado por Farias et al. (1998) e Pérez et al. (2007).

CAPÍTULO 1

“Filogeografia do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) na Bacia Amazônica, utilizando o gene do citocromo b”.

1. Introdução

Estudos filogeográficos proporcionam consistente informação evolutiva em peixes de água doce, pois têm a capacidade de estabelecer ligações entre organismos aquáticos e os eventos hidrogeológicos que os cercam, uma vez que estes dependem diretamente dos sistemas fluviais como meio de dispersão (Bermingham; Martin, 1998; Avise 2000; Sivasundar et al., 2001). Neste contexto, marcadores moleculares genéticos (nuclear e mitocondrial) vêm sendo amplamente utilizados, mostrando-se muito eficazes em reconstruções filogeográficas e outras abordagens evolutivas em diferentes níveis taxonômicos, podendo chegar ao de espécie (Avise, 1994; Puorto et al., 2001). Dentre os marcadores moleculares genéticos, o DNA mitocondrial (DNAmt) tem sido empregado extensivamente nos mais diferentes aspectos evolutivos como, por exemplo em: reconstruções genealógicas, estudos filogenéticos, no delineamento de processos evolutivos e na diversificação de um dado taxa em relação a sua distribuição geográfica (Bermingham; Moritiz, 1998; Avise, 2000). Isso se deve ao fato desta molécula ser mais compacta, simples e apresentar um mecanismo de evolução mais rápido, quando comparado ao DNA nuclear. Além disso, possui o padrão de herança vinculado à mãe (Brown et al., 1982; Meyer, 1993; 1994; Ballard; Whitlock, 2004). Essas características, em conjunto, fazem com que esta molécula seja interessante

9 para estudos evolutivos, porque a torna uma ferramenta mais sensível (Lee et al., 1995). Em se tratando do DNAmt, o gene do citocromo b tem sido a região mais conhecida e utilizada em estudos moleculares dos mais variados como em estudos sistemáticos, filogenéticos e populacionais de vertebrados, principalmente de peixes (Meyer; Wilson, 1990; Meyer, 1993; 1994). No entanto, pesquisas moleculares nesse grupo ainda são escassas, se levarmos em conta a grande diversidade de peixes encontrada (Berminghan; Martin, 1998). Isto é mais evidente na região neotropical, mesmo apresentando uma das maiores drenagens de água doce do mundo (amazônica) e uma rica fauna ictiológica, cuja variedade de peixes da família Cichlidae merece destaque (Kullander, 1998; Farias et al., 1998). Até hoje, a maioria dos estudos moleculares estão concentrados em ciclídeos do velho mundo. Ademais, entre os estudos com táxons neotropicais poucos possuem representantes sul-americanos (ex. Zardoya et al., 1996; Roe et al., 1997; Pérez et al., 2007), portanto muitas questões taxonômicas e filogenéticas em relação aos grupos da América do Sul continuam sem respostas (Farias et al., 1998; Kullander; 1998). Farias e colaboradores, em 1998, foram pioneiros no estudo molecular e sistemático de táxons sul- americanos aumentando os esforços em 1999, 2000 e 2001. Farias et al. (1998; 1999; 2000; 2001) e López-Fernández et al. (2005), utilizando dados moleculares e morfológicos em conjunto, obtiveram maior resolução filogenética entre os ciclídeos neotropicias, mostrando a utilidade dos dados moleculares mitocondriais em estudos evolutivos de ciclídeos (Avise, 1986; 2000). A tribo Heroini (Kullander, 1998) é uma das maiores e diversas tribos entre os ciclídeos neotropicais. Atualmente, compreende 139 espécies válidas, que estão amplamente distribuídas desde Buenos Aires (Argentina) até o Texas (Estados Unidos), apresentando maior representatividade na América Central, onde constituem 25% da ictiofauna da região (Kullander, 2003). Além dos níveis de diversidade encontrados, os representantes deste grupo possuem altos níveis de variação morfológica, o que reflete a existência de plasticidade fenotípica, característica entre os ciclídeos (Lowe-McConnell, 1969b; Kocher, 2004; Pérez, 2007). Como conseqüência, estudos vêm

10 utilizando os peixes desta tribo como modelo em análises de biologia evolutiva (Barluenga; Meyer, 2004; Pérez et al., 2007). Os peixes desta tribo também são apreciados no cenário ornamental (ex. Symphysodon, Uaru e Pterophyllum) (Chao, 2001), o que fomenta estudos comportamentais e fisiológicos para a manutenção em cativeiro (Yamamoto et al., 1999). Apesar destes estudos, aspectos taxonômicos, sistemáticos e filogeográficos ainda são problemáticos dentro do grupo, sendo um reflexo de uma história taxonômica e nomenclatural complexa, resultante de descrições sinônimas e equivocadas, precária diagnose e falta de estudos que dessem maior suporte e esclarecimento (Regan, 1905; Miller, 1966; Pérez et al., 2007), dificultando o desenvolvimento de estudos biológicos nestes peixes, uma vez que esta tribo apresenta baixa resolução taxonômica (Pérez et al., 2007). Kullander (1996) reconheceu o grupo de “ciclassomíneos de escama pequena”, chamando-os informalmente de heroníneos. Em 1998 Kullander formalizou a tribo Heroini e ressaltou algumas incertezas filogenéticas e evolutivas no grupo, em particular, sobre o gênero Pterophyllum, o que foi corroborado por Farias et al. (1998) e Pérez et al. (2007). Diante do exposto, o presente trabalho propõe uma análise filogeográfica e populacional dos heroíneos do gênero Pterophyllum Heckel, 1840, no contexto amazônico, utilizando como ferramenta o gene mitocondrial do citocromo b, com finalidade de entender o prováveis processo evolutivos que resultaram o que mantém a distribuição destes peixes na bacia amazônica, contribuindo para o conhecimento de mais um grupo de ciclídeo na América do Sul.

11 1.1. Objetivos

1.1.1. Objetivo Geral

Discutir o padrão evolutivo existente entre os ciclídeos do gênero Pterophyllum da Amazônia, com base nas relações filogeográficas e populacionais do grupo, por meio da ferramenta de marcador molecular do gene mitocondrial do citocromo b.

1.1.2. Objetivos Específicos

• Seqüenciar e caracterizar o segmento do gene mitocondrial citocromo b no grupo de estudo;

• Definir a distribuição genético populacional do gênero ao longo da bacia amazônica;

• Discutir a distribuição filogeográfica entre as espécies do gênero Pterophyllum perante o contexto amazônico, com base nos dados obtidos.

2. Materiais e Métodos

2.1. Amostragem

Levando-se em conta a distribuição dos peixes do gênero Pterophyllum (Kullander, 2003), foram coletados aproximadamente 25 a 30 espécimes ao longo dos rios: Negro, Solimões, Amazonas e alguns afluentes, totalizando catorze localidades (Figura 6), das quais oito foram coletadas, anteriormente, por Izeni P. Farias (seis localidades) e por Tomas Hrbek (dois pontos). As coletas foram autorizadas pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA) sob o processo de n° 02001.000162/2006-67. O processo de captura foi efetuado com o auxílio de um rapiché e de uma rede de cerco. Após a captura, anestesiou-se cada exemplar com 0,4 ml - 1,0 ml de uma solução de eugenol 10% (diluído em etanol), de acordo com o protocolo de eutanásia estabelecido pela American Veterinary Medical Association (AVMA). Posteriormente, a nadadeira peitoral direita de cada espécime foi removida e fixada em um tubo eppendorf contendo álcool 95%. Após a retirada da nadadeira, cada indivíduo foi etiquetado e fixado numa solução de formol diluída a 10%, que foi substituída por uma solução de álcool 70%, sendo estes as amostras que serão utilizadas no próximo capítulo. Do total de coletas, de seis pontos somente foram obtidos o tecido, enquanto que o restante das localidades (oito pontos) tem-se tanto o tecido como o indivíduo fixado. Cada amostra de tecido foi depositada na Coleção de Tecidos de Genética Animal – CTGA (Fiel Depositário/CGEN) do Laboratório de Evolução e Genética Animal (ICB / UFAM).

Figura 6: Mapa com a distribuição dos pontos amostrados.

A figura de triângulo (preto) simboliza a cidade de Manaus, indicando um ponto de referência.

2.2. Métodos Moleculares: Extração de DNA, Amplificação e Seqüenciamento

Uma amostra (5 – 25 mg) de tecido da nadadeira fixada em álcool foi cortada e o DNA total (nuclear e mitocondrial) foi isolado, seguindo o protocolo de extração de DNA via proteinase K/ fenol/ clorofórmio de Sambrook et al. (1989), que compreende as seguintes etapas: (1) rompimento da célula, (2) isolamento dos ácidos nucléicos pela remoção das proteínas e outras estruturas celulares e (3) purificação final, tendo como produto final o DNA diluído. O material genético extraído foi submetido à reação de amplificação da região do gene mitocondrial do citocromo b, via PCR (Polimerase Chain Reaction – Reação da Polimerase em Cadeia), utilizando os primers

14 (iniciadores) Cich_Glu5 Lcytb (forward) – 5’ – GAC YAA TGA CTT GAA AAA CCA C - 3’ e Cich_Thr6 Rcytb (reverse) – 5’ – TGG TGC TCT ACR CTG ACY TAC T - 3’, ambos desenvolvidos para este trabalho por Tomas Hrbek. A PCR foi realizada para um volume final de reação de 15 µl, contendo: 1,5 µl de dNTPs (10 mM); 1,2 µl de tampão 10X (100 mM Tris – HCL / pH 8.4, 500 mM

KCl); 1,2 µl de cada primer (2 µM); 1,5 µl de MgCl2 (25 mM); 1µl de DNA (50 ng/µl); 0,3 µl (0,3 U) da DNA polimerase Taq (1U/µl) e 7,1 µL de água miliq. Os ciclos de amplificação foram realizados da seguinte maneira: um único ciclo de pré-desnaturação de 1 minuto a 72 oC seguido de 35 ciclos de desnaturação a 94 oC por 40 segundos; anelamento a 52 oC por 40 segundos e extensão a 72 oC por 1 minuto, terminando com uma etapa de extensão final realizada a 72 oC por 5 minutos. O produto da PCR foi visualizado em gel de agarose 1%, corado com brometo de etídeo (EtBr - 0,5 µg/mL) e observado em um transluminador de luz UV Image Master (Pharmacia Biotech). As amostras de PCR positivas foram purificadas através da precipitação com acetato de amônia e etanol 95%, para que os produtos da PCR sejam limpos de resíduos de baixo peso molecular, tais como sais, primers e dNTPs. Para a reação de seqüenciamento (também uma PCR) foi utilizado o kit de reação kit “ET Terminator Cycle Sequencing Kit” (Amersham Bioscience), em uma placa específica, para um volume final, por amostra, de 10 µL, contendo: 4 µL de DNA amplificado e purificado; 2 µL de dois oligonucleotídeos (primers - iniciadores) internos (2 µM); 2 µL de tampão do kit e 2 µL de água autoclavada deionizada. Os ciclos da reação de seqüenciamento foram realizados a 52 oC (anelamento) e seguindo protocolo recomendado pelo fabricante do kit de reação kit “ET Terminator Cycle Sequencing Kit” (Amersham Bioscience). Como primers foram utilizados o PteroIntF510_Cytb (forward) - 5’ – CTT TGA GGG GGC TTT TCA GT - 3’ (seguimento final do gene) e PteroIntR701_Cytb (reverse) - 5’ – GTC TTT GTA GGA RAA GTA GGG - 3’ (seguimento inicial do gene), ambos internos e desenvolvidos para este trabalho por Tomas Hrbek. Os produtos resultantes desta PCR foram precipitados adicionando-se 1 µL de acetato de amônia (7,5 M) e 27,5 µL de etanol absoluto, de acordo com as instruções do fabricante. Posteriormente esses produtos foram ressuspendidos e resolvidos no seqüenciador automático ABI 3130xl (Applied Biosystems Inc.).

2.3. Análises Moleculares

2.3.1. Alinhamento, Edição de seqüências e Análises de Composição Molecular

As seqüências obtidas foram editadas manualmente no programa BioEdit Version 7.0.9.0 / 2007 (Hall, 1999) e alinhadas por meio do aplicativo ClustalW (Thompson et al., 1994), implementado no BioEdit. A composição molecular de bases, a identificação de sítios variáveis e a existência de códons de parada inesperados foram checados no programa MEGA 4 / 2007 (Kumar et al., 2004). Com o programa DAMBE / 4.5.53 / 2001 (Xia, 2000) avaliou-se a existência de saturações entre os eventos mutacionais de transversão (TV) e transição (TS), comparando graficamente as distâncias genéticas (p) e o número de substituições (TS ou TV) para casa posição no códon (Farias et al., 2001). Se a relação ts/tv for < 1, será evidenciado a existência de saturação. Do banco de dados gerado foram escolhidas algumas seqüências, que foram submetidas ao banco de dados do GeneBank do NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov), para checagem da identidade do segmento seqüenciado, por meio do aplicativo online BLAST do NCBI .

2.3.2. Análises Populacionais

Com o banco de dados, foi gerada uma árvore haplotípica, utilizando o critério de Máxima Verossilhança (MV) (Felsenstein, 1981) implementado no programa Treefinder / 2008, (Jobb, 2008). A árvore foi gerada com base no modelo molecular evolutivo de Kishino - Hasegawa - Yano (HYK) (1985), que considera composição molecular desigual entre as bases e diferenças nas taxas de substituição nucleotídica (transição e transversão). Como teste de consistência da árvore foi utilizado o método de bootstrap com 1000 pseudoreplicações de amostragem.

16 Com o programa, Arlequin / 3.1 (Excoffier et al., 2005) determinou-se os seguintes parâmetros moleculares populacionais: 1 - o nível de variação genética dentro das populações com base no número de haplótipos observados em cada população (na), assumindo que cada mutação nova gera um novo haplótipo; 2 - o índice de diversidade gênica (h), probabilidade de duas seqüências tomadas ao acaso em uma população sejam diferentes entre si (Li, 1997); 3 - o índice de diversidade nucleotídica (π), média das diferenças nucleotídicas em cada sítio entre duas seqüências tomadas da população ao acaso (Tajima, 1983 ; Nei, 1987; Li, 1997) e 4 - número de sítios segregantes (S), sítios que são variáveis ao longo de seqüências distintas (Li, 1997). Com o mesmo programa (Arlequin / 3.1) foi testada a existência de estrutura de populacional, efetuando-se uma análise de variância molecular (AMOVA) global e par a par, considerando cada ponto de coleta como uma população e N populacional mínimo de cinco, com o nível de significância das comparações par a par ajustado pela correção de Bonferroni (Rice, 1989). Essa análise é análoga às análises de variância convencional (ANOVA), porém avalia a variância de freqüências gênicas, considerando as mutações existentes entre os haplótipos, seguindo níveis hierárquicos de comparações entre haplótipos de: 1 - uma mesma população; 2 - populações distintas vistas para a par e 3 - grupos populacionais regionais (Excoffier et al., 1992). Por causa do N < 5 as localidades Campina, Careiro da Várzea e Novo Airão foram descartadas desta análise. O fluxo gênico foi avaliado com base no número de migrantes por geração (Nm), estabelecido pela relação entre o índice Fst de Wright (1951), o tamanho efetivo populacional (Ne) e a taxa de migração entre duas populações (m), sob o modelo de migração de ilhas, sendo Fst = 1/(4Nm+1) (Wright, 1951). Para o DNAmt a equação é modificada para Fst = 1/(2Nm+1), em conseqüência do mecanismo de evolução haplóide e herança materna desta molécula (Ballard; Whitlock, 2004). O nível de significância das comparações múltiplas foi corrigido pela correção de Bonferroni (Rice, 1989). Para testar se as mutações observadas eram neutras ou estavam sob seleção foram realizados os testes de neutralidade de D de Tajima (1989) e Fs de Fu (1997), com nível de significância ajustado pela correção de Bonferroni (Rice, 1989). O teste de D de Tajima examina a significância da diferença entre

17 o número de sítios segregantes (S) e a diversidade nucleotídica encontrada (π). O teste de Fu é baseado na probabilidade de observar determinado número de alelos em uma amostra de determinado tamanho, levando em conta a diversidade nucleotídica encontrada (π). Ambos os métodos estão embasados no balanço entre a neutralidade e a seleção (Li, 1997; Ford, 2002). Ademais, estes dois testes são sensíveis aos eventos de variação no tamanho populacional, e por isso foram aplicados, também, com esta finalidade analítica (Ford, 2002; Durand et al., 2005; Santos et al., 2007). Em cada população foi observado a distribuição das frequências haplotípicas (Mismatch Distribution) entre o observado e o esperado, considerando a distribuição das diferenças par a par de haplótipos de uma dada população, partindo do pressuposto de que uma população em equilíbrio demográfico (de tamanho constante) apresenta uma distribuição multimodal (Rogers; Harpending, 1992). Para testar a significância dessa distribuição de foi aplicado um teste de utilizando o índice de desigualdade de Harpending (r) com o suporte de consistência de 10.000 replicações e um intervalo de confiança de 95% (Durand et al., 2005). O teste de correlação de Mantel (Mantel, 1967) foi aplicado buscando testar alguma correlação significativa entre as distâncias genéticas populacionais (Φst) encontradas e a distância geográfica entre as mesmas, ajustando o nível de confiança para 1000 permutações com o nível de significância estabelecido em 5%. O cálculo do Nm (número de migrantes), os testes de neutralidade (D de Tajima e Fs de Fu) e de Mantel foram desenvolvidos, também, no programa Arlequin / 3.1, enquanto que a representação gráfica da distribuição e o teste de Mismatch Distribution foram realizados no aplicativo DNAsp / 4. 5 / 2008 (Rozas et al., 2003). Calculou-se, também, a distância genética (d) entre e dentre populações com base na identidade ou similaridade genética entre os indivíduos dentro de uma mesma população e entre populações distintas, tomados dois a dois, com base nas freqüências alélicas encontradas (Nei, 1972), utilizando para isso, o programa MEGA 4 / 2007 (Kumar et al., 2004).

18 2.3.3. Análises Filogeográficas

Com base nos haplótipos obtidos foi estimada uma rede de haplótipos usando o programa TCS 1.18 (Clement et al., 2000) que utiliza o algoritmo de parcimônia estatística (SP) descrito por Templeton et al. (1992), estabelecendo relacionamento entre os haplótipos de acordo com os passos mutacionais. A rede de haplótipos formada foi submetida ao processo descrito por Templeton et al. (1987) e Templeton e Sing (1993) de hierarquização, onde os haplótipos distantes por um passo mutacional entre si são agrupados no sentido da extremidade para o interior da árvore haplotípica, formando uma série de níveis mais complexos de agrupamentos, em que, no final, encontram-se agrupados num único nível maior, que depois é traduzido em uma matriz de dados. Com estes dados e as distâncias geográficas entre as localidades amostradas, que foram estimadas em quilômetros, seguindo o curso dos rios, foi realizada a análise de NCA (Nested Clade Analysis – Análise de Clados Agrupados) (Templeton, 1998) no programa GEODIS 2.4 (Posada et al., 2000). Os resultados desta análise (Dc e Dn significativos) foram interpretados por meio de uma chave de inferência desenvolvida por Templeton (2005), disponível on line pelo endereço http://darwin.uvigo.es. As distância entre os pontos de coleta foi estimada com base no programa GoogleEarth™ (Anexo I ). Embora existam ressalvas com relação a este método (Panchal; Beaumont, 2007), é uma abordagem útil na determinação de antigos e atuais processos evolutivos populacionais, auxiliando no desenvolvimento de prováveis hipóteses filogeográficas (Templeton, 2004), sendo eficiente em testes de hipóteses genealógicas, utilizando, para isso, a freqüência e a informação da distribuição geográfica dos haplótipos obtidos (Crandall; Templeton, 1996) (Anexo II).

19 3. Resultados

3.1. Análises Moleculares

Foram obtidas 244 seqüências alinhadas com 1134 pb (pares de base), do quais 190 foram polimórficos e 175 parcimoniosamente informativos (Anexo III). A composição percentual de bases foi de T = 31,3%; C = 31,1%; A =24,1% e G = 13,5% (Gráfico 1). Foi encontrado apenas um códon parada na porção terminal (3’) da seqüência, correspondente ao códon de parada na tradução do produto final do gene mitocondrial do citocromo b de Pterophyllum scalare (acesso: AF370676, Farias et al., 2001), de acordo com o BLAST efetuado. A relação entre as taxas de transição (ts), transversão (tv) e a distância genética não indicou existência de saturação (Gráfico 2) .

Gráfico 1: Composição percentual de bases.

13,5% 31,3% T C A 24,1% G

31,1%

Gráfico 2: Relação entre a distância e as taxas de transição (ts) em azul e transversão (tv) em verde.

20 3.2. Análises Populacionais

Os parâmetros genéticos populacional podem ser visualizados na Tabela 1. O número de haplótipos por população variou entre 5 (Boa Vista) a 15 (Catalão) e o número de sítios polimórficos esteve entre 9 (Amaná) a 130 (Boa Vista). Os níveis de diversidade gênica (Ĥ) variaram de 0,78977 (+/- 0,58472; Santarém) a 66,01709 (+/-29,38357; Sta. Isabel) e os de diversidade nucleotídica de 0,00069 (+/-0,00057; Santarém) a 0,05821(+/-0,02885; Sta. Isabel). As populações de Catalão, Santarém e Barcelos, mostraram valores negativos e significativos para o teste de neutralidade D de Tajima, enquanto todas as populações estudadas apresentaram resultados negativos e significativos para o teste de neutralidade Fs de Fu, exceto a população de Boa Vista, que obteve resultado negativo, mas não foi significativo (Tabela 1). Depois da correção de Bonferroni (p = 0,000758), nenhum dos valores estimados para teste D de Tajima foram significativos, enquanto que no teste de neutralidade de Fs de Fu sete populações ainda apresentaram significância no resultado, sendo Catalão, Purus, Janauacá, Mamirauá, Santarém, Iranduba e Barcelos (Tabela 1). Dentre estes dois testes de neutralidade, o teste Fs de Fu tem uma capacidade analítica mais sensível para a detecção de expansão demográfica (Fu, 1997; Durand et al., 2005). Na árvore de haplótipos resultante foi possível observar três grupos principais, os quais foram chamados respectivamente de Ptero1, Ptero2 e Ptero3. O agrupamento Ptero2 apresentou amostras de Santa Isabel e Boa Vista, enquanto que o grupo Ptero3 compreendeu a maiorias das localidades, exceto pelos indivíduos dos grupos Ptero2 e Ptero1, sendo este último representado somente por amostras do Careiro da Várzea (Figura7). Nas análises de AMOVA, considerando todas as localidades com N superior a cinco, foi observado estrutura populacional (Φst = 0,53428, p < 0,001), mostrando que 53,43% da variação encontrada ocorreu entre as populações e 46,57% dentro das populações (Tabela 2). A variação entre populações foi mais marcante com relação às populações de Boa Vista e Barcelos, apresentando maiores índices significativos (com a correção de Bonferroni) de Φst (p < 0,0009) entre comparações par a par com as demais

21 populações (Tabela 3). Realizando o mesmo teste apenas para as populações do grupo Ptero 3, foi encontrado um significativo Φst = 0,52399 (p < 0,001) e maior variação interpopulacional (47,6 %) do que intrapopulacional (52,4 %). A estimativa do número efetivo de migrantes por geração (Nm) entre diferentes populações mostrou os menores valores de migrantes por geração (Nm < 1), indicativo de um fluxo gênico restrito, entre as comparações com as localidades de Sta. Isabel, Boa Vista e Barcelos, ao passo que as correlações com as localidades de Catalão e Careiro do Castanho (C.Castanho) apresentaram os maiores níveis de Nm (Catalão X Careiro do Castanho / Nm = 21 e Careiro do Castanho X Janauaca = 10), o que pode ser correlacionado com significância do Φst (Tabela 3). O teste de equilíbrio demográfico mostrou o índice de desigualdade de Harpending (r) significativo (p < 0,05) em quatro populações: Purus, Janauacá, Careiro do Castanho e Barcelos, o que mostra desequilíbrio demográfico nestas populações (Tabela1), indicando que a hipótese nula (Ho) de ausência expansão demográfica pode ser rejeitada nestas populações. No teste de Mantel foi encontrada uma significante correlação positiva entre a variação genética e a distribuição geográfica ao longo de todas as localidades amostradas (r = 0,448004; p = 0,013000). Quando o teste de Mantel foi realizado somente nas localidades do grupo haplotípico Ptero3, não se observou correlação positiva significativa entre a variação genética e a distribuição geográfica ao longo das populações deste grupo com r = 0,187222; e p = 0,085000. As populações de Boa Vista e Santa Isabel apresentaram os maiores índices de distância genética intrapopulacional (d = 0,049 = 4,9%; d = 0,037 = 3,7%, respectivamente), enquanto Campina, Santarém, Novo Airão e Mamirauá mostraram o menores valores, sendo d = 0,001 (0,01%) (Tabela 4). Nas comparações interpopulacionais, tomadas duas a duas, as populações das regiões de Boa Vista, de Santa Isabel e do Careiro da Várzea (Careiro) mostraram os maiores valores de distância genética (d > 0,04), em relação a outras localidades (Tabela 5).

22 3.3. Análises Filogeográficas

Em decorrência da falta de conexão no network entre os haplótipos dos grupos Pteros 1, 2 e 3 pela parcimônia estatística ao nível de confiança de 95% e pela existência de muitas ambigüidades, os networks dos três grupos foram desenvolvidos separadamente de acordo com o grupo filogenético principal formado na árvore de MV. Como resultado, foram obtidos dois networks referentes, somente, aos agrupamentos Ptero 2 e Ptero 3, já que o grupo Ptero 1 contém indivíduos de uma mesma localidade (Careiro da Várzea) e este network seria inviável para as análises de NCA. A redes haplotípicas Ptero 2 e Ptero 3 formaram clados hierarquizados de níveis máximos de 4 e 7, respectivamente (Figura 8 e 9). Os clados hierarquizados cujas hipóteses nulas de panmixia ou de ausência de relação entre a distribuição geográfica e haplotípica foram rejeitadas (p < 0,05) estão discriminados na (Tabela 6). A análise de NCA para o grupo Ptero 2 sugere que o episódio demográfico mais antigo representa uma colonização a longa distância combinada com eventos antigos de expansão geográfica gradual e de fragmentação (nível 4) (Figura 8 e Tabela 6). Já para o grupo ptero 3 a análise de NCA propõe como episódios mais antigos eventos de isolamento por distância e de fluxo gênico restrito, além de episódios de colonização a longa distância combinada com eventos de uma antiga expansão geográfica e gradual juntamente com episódios de fragmentação (nível 6). Num momento mais recente o NCA sugere a existência de fragmentação alopátrica e de colonização a longa distância combinada com uma antiga e gradual expansão geográfica com eventos de fragmentação (nível 5), seguido por eventos de fluxo gênico restrito, isolamento por distância e de fragmentação alopátrica (nível 4), com subseqüentes períodos de colonização a longa distância em conjunto com uma antiga e gradual expansão geográfica e com processos de fragmentação, além da existência eventos de fragmentação alopátrica (nível 3). Nos momentos mais recentes de história genealógica e evolutiva do grupo, a análise de NCA indica provável expansão geográfica contígua (nível 2) (Figura 9 e Tabela 6).

23 Tabela 1: Índices de diversidade genética e testes de neutralidade por localidade, onde N = Nº amostral e NH = N° de haplótipos. Estão representados os parâmetros de todos os indivíduos coletados nestas regiões, independente do grupo haplotípico ocupado. Os valores marcados de vermelho indicam os valores que foram significativos depois da correção de Bonferroni. Populações N S NH Ĥ Π D de Tajima Fs de Fu r (médio) (Diversidade Gênica (Diversidade nucleotídica Haplotípica) /sitio) Catalão 25 39 15 5,87666+/-2,90424 0,00518+/-0,00285 -1.63881* -24.68383** 0,08902

Purus 22 36 14 12,58441+/- 5,90236 0,01109+/-0,00580 1.06495 -12.45321** 0,08865*

Amanã 8 9 7 3,28571+/-1,88714 0,00289+/-0,00189 -0.26159 -5.28612** 0,09082

Janauacá 18 19 13 6,40522+/-3,18243 0,00564+/-0,00313 0.61929 -13.96802** 0,09061*

Sat.Isabel 27 130 8 66,01709+/-29,38357 0,05821+/-0,02885 3.74243 -4.71198* 0,09085

Boa Vista 13 129 5 49,61538+/-22,99347 0,04375+/-0,02279 0.88447 -1.18859 0,09168

Mamairauá 30 12 10 1,86896+/-1,10001 0,00164+/-0,00107 -1.24968 -27.17503** 0,09032

20 Santarém 42 10 10 0,78977+/-0,58472 0,00069+/-0,00057 -1.95025** -34 x10 ** 0,09044

C.Castanho 19 15 8 3,415205 +/1,826763 0,00301+/-0,00180 -0.76355 -22.19569** 0,08970*

Iranduba 12 22 6 10,54545+/-5,17290 0,00929+/-0,00513 1.97847 -4.73806* 0,09124

Barcelos 17 26 12 4,42647+/- 2,29668 0,00390+/-0,00226 -1.71327* -15.98661** 0,09000* Total 233 447 108

Nota: *<0,05; **<0,01; Correção de Bonferroni = 0,000758

24 Figura 7: Árvore de relacionamento de haplótipos – critério Máxima Verossimilhança (HYK), indicando os valores de boostrap acima de 60%, onde Careiro = Careiro da Várzea; StaIsa = Santa Isabel e CCast = Careiro do Castanho;

Tabela 2: Análise de Variância Molecular (AMOVA), entre todas as localidades com N>5. É significativa a estrutura populacional (P < 0,001). Soma dos Componentes da Porcentagem Fonte da variação d.f. quadrados variância de variação Entre populações 10 1781,844 8,22655 Va 53,43 Dentro das populações 222 1591,954 7,17097 Vb 46,57 Total 232 3373,798 15,39752 100 Φst = 0,53428, P<0,001

Tabela 3: Comparações par a par dos valores de Φst (abaixo e cor preta) e Nm (acima e cor vermelha) entre as populações analisadas. Os valores em azul correspondem respectivamente aos maiores índices significativos de Φst e aos valores significativos de baixo Nm. As regiões de Sta. Isabel e Boa Vista representam todos os indivíduos coletados nestas regiões, independente do grupo haplotípico ocupado.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1.Catalão ------3,62,393 6,53057 4,62633 0,57036 0,14570 5,69430 5,81159 21,76281 1,93979 0,24202 2.Purus 0,12124 ------2,04260 1,98533 0,67091 0,19204 1,11917 0,84761 1,77230 2,37188 0,42245 3.Amanã 0,07112 0,19665* ------2,12719 0,85255 0,23437 5,92176 1,16324 3,13211 1,59236 0,16769 4.Janauacá 0,09754 0,20118* 0,19032 ------0,65774 0,17242 1,38778 1,06459 10,63784 1,35073 0,23328 5.Sta.Isabel 0,46713* 0,42702* 0,36967* 0,43188* ------5,58,518 0,48004 0,37964 0,61772 0,82292 0,65899 6.Boa Vista 0,77436* 0,72250* 0,68086* 0,74358* 0,08217 ------0,11102 0,08194 0,15459 0,23217 0,17723 7.Mamirauá 0,08072* 0,30880* 0,07786 0,26486* 0,51018* 0,81831* ------5,42796 4,08526 0,81009 0,11602 8.Santarém 0,07922* 0,37103* 0,30062* 0,31957* 0,56842* 0,85920* 0,08435* ------4,41031 0,53716 0,07618 9.C.Castanho 0,02246 0,22004* 0,13766 0,04489 0,44734* 0,76384* 0,10905* 0,10183 ------1,29603 0,17032 10.Iranduba 0,20494* 0,17410 0,23896 0,27016* 0,37795* 0,68290* 0,38165* 0,48209* 0,27839* ------0,36236 11.Barcelos 0,67384* 0,54204* 0,74885* 0,68187* 0,43141* 0,73831* 0,81167* 0,86779* 0,74591* 0,57980* ------*P<0,0009 (Correção de Bonferroni)

Tabela 4: Distância genética intrapopulacional. Os números de coloração azul representam os maiores e os menores valores obtidos. As regiões de Sta. Isabel e Boa Vista possuem todos os indivíduos coletados nestas regiões, independente do grupo haplotípico ocupado.

Localidades Distância Erro Padrão Localidades Distância Erro Padrão 1.Campina 0,001 0,000 8.Catalão 0,005 0,001 2.Purus 0,008 0,002 9.Careiro 0,002 0,001 3.Iranduba 0,007 0,002 10.C.Castanho 0,002 0,001 4.Amanã 0,002 0,001 11.NovoAirão 0,001 0,000 5.Mamirauá 0,001 0,000 12.Barcelos 0,003 0,001 6.Janauacá 0,004 0,001 13.Sta.Isabel 0,049 0,008 7.Santarém 0,001 0,000 14.BoaVista 0,037 0,006 Subtotal 1 0,024 0,006 Subtotal 2 0,099 0,018 TOTAL 0,123 0,024

26 Tabela 5: Distância genética entre populações par a par. Os números de coloração azul representam os maiores valores obtidos. As regiões de Sta. Isabel e Boa Vista possuem todos os indivíduos coletados nestas regiões, independente do grupo haplotípico ocupado.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1.Campina ----- 2.Purus 0,006 ----- 3.Iranduba 0,005 0,009 ----- 4.Amanã 0,001 0,007 0,006 ----- 5.Mamirauá 0,001 0,007 0,006 0,002 ----- 6.Janauacá 0,003 0,008 0,008 0,004 0,004 ----- 7.Santarém 0,000 0,006 0,005 0,002 0,001 0,003 ----- 8.Catalão 0,002 0,007 0,007 0,003 0,003 0,005 0,002 ----- 9.Careiro 0,086 0,087 0,086 0,087 0,086 0,087 0,086 0,086 ----- 10. C.Castanho 0,001 0,007 0,006 0,003 0,002 0,003 0,001 0,003 0,087 ----- 11.NovoAirão 0,014 0,011 0,014 0,015 0,015 0,015 0,014 0,014 0,087 0,015 ----- 12.Barcelos 0,009 0,013 0,011 0,011 0,010 0,011 0,010 0,011 0,086 0,010 0,016 ----- 13.Sta.Isabel 0,049 0,052 0,051 0,050 0,049 0,051 0,049 0,050 0,055 0,050 0,054 0,049 ----- 14.BoaVista 0,071 0,072 0,071 0,072 0,071 0,072 0,071 0,072 0,037 0,071 0,073 0,068 0,047 ----

Figura 8: Diagrama da rede haplotípica de clados hierarquizados por meio da análise NCA (grupo Ptero 2).

1-1 2-3 1 2 1-4 7

1-2 2-1 3-2 1-9 1-5 4 6 10 1-6 1-3 3 2-4 2-2 9 1-7

2-5 5 1-8 3-1 8 4-1

Cada cor representa um nível hierárquico e haplótipos hipotéticos intermediários são indicados por “o”.

27 Figura 9: Diagrama da rede haplotípica de clados hierarquizados por meio da análise NCA (grupo Ptero 3).

Cada cor representa um nível hierárquico e haplótipos hipotéticos intermediários são indicados por “o”. 28 Tabela 6. Resultado das análises do agrupamento dos clados hierarquizados para os grupos Ptero 2 e Ptero 3, mostrando somente clados com permutações significativas (X2) para estrutura geográfica (p < 0.05).

Grupo Clado Chave de inferência Padrão inferido

Ptero 2

Colonização à distância combinados com 1-2-11-YES-12-13-YES-21- 4-1 antigos eventos de expansão geográfica gradual NO e de fragmentação.

Ptero 3

2-20 1-2-11-12-NO Expansão geográfica contígua.

3-12 1–2–11-17-NO Resultado inconclusivo.

3-19 1-19-20-2-3-4-9-NO Fragmentação alopátrica.

Colonização à distância combinados com 1-19-20-2-11-12-13-YES-21- 3-20 antigos eventos de expansão geográfica gradual NO e de fragmentação.

4-1 1-2-3-4-9-NO Fragmentação alopátrica.

Fluxo gênico restrito com isolamento por 4-4 1- 2- 3- 4- NO distância.

Colonização à distância combinados com 5-2 1-19-20-2-3-5-15-NO-21-NO antigos eventos de expansão geográfica gradual e de fragmentação.

5-3 1- 19- 20- 2- 3- 4- 9-NO Fragmentação alopátrica.

Colonização à distância combinados com 1-19-20-2-11-YES-12-13- 6-1 antigos eventos de expansão geográfica gradual YES-21-NO e de fragmentação.

Fluxo gênico restrito com isolamento por 6-3 1- 2- 3- 4-NO distância.

7-1 1- 2- 11- 17-NO Resultado Inconclusivo.

29 4. Discussão e Conclusão

Neste trabalho foram estudas características gerais do genoma mitocondrial de vertebrados como a composição molecular de bases e a existência de saturação. A menor porcentagem observada de guanina (13,5%) em relação às demais bases constitui um fenômeno comummente encontrado no DNA mitocondrial dos vertebrados (Gráfico 1) (Zhang; Hewitt, 1996). Eventos de saturação não foram vistos o que é esperado entre táxons muito próximos, assim como em níveis populacionais (Meyer, 1993; Farias et al., 2001) (Gráfico 2). A árvore de Máxima Verossimilhança apresenta três grandes grupos definidos (bootstrap < 95%) sendo denominados, aqui, de Ptero 1, Ptero 2 e Ptero 3, podendo estar relacionados com as três espécies definidas para o gênero (P. leopoldi, altum e scalare, nesta ordem), se considerarmos a distribuição geográfica do gênero Pterophyllum, proposto no esquema da figura 5. Tomas Hrbek, em comunicação pessoal, identificou os indivíduos do Careiro da Várzea como P. leopoldi, no entanto análises mais detalhadas para identificação dos espécimes coletados são necessárias. O grupo Ptero 1 e Ptero 2 formam um grupo monofilético e possuem uma distribuição geográfica mais restrita as localidades do Careiro da Várzea (Careiro), de Sta. Isabel e de Boa Vista, enquanto que o grupo Ptero 3 está agrupado de maneira monofilética (grupo irmão) ao conjunto Ptero 1 e Ptero 2 e tem uma distribuição mais ampla ao longo de toda região amostrada neste trabalho, exceto na região do Careiro da Várzea (Figura 7), sendo Santa Isabel e Boa Vista localidades de simpatria entre dois destes grupos (Ptero 2 e Ptero 3), influenciando os maiores índices de diversidade genética e nucleotídica, de sítios polimórficos e de distância genética nestas populações (Tabelas 1 e 4). A definição destes três grupos haplotípicos (Ptero 1, Ptero 2 e Ptero 3), também, pode estar agindo sobre os níveis de distância genética interpopulacional e de Φsts encontrados nas comparações entre essas três populações (Careiro, Boa Vista e Sta. Isabel) e as demais localidades, como mostra nas Tabelas 3 e 5. No

30 entanto, ao se analisar separadamente o grupo Ptero 3 foi observado um Φst significativo na análise de AMOVA com o Φst = 0,52399 (p < 0,001), sendo maior variação interpopulacional (47,6 %) do que intrapopulacional (52,4 %). Os índices populacionais de diversidade genética elevados em comparação aos de diversidade nucleotídica (Tabela 1) podem estar relacionados a eventos de expansão populacional depois de longos períodos de redução do tamanho efetivo populacional (Grant; Bowen, 1998), o que pode ser corroborado pelos resultados significativos obtidos nos testes de neutralidade e de desigualdade de Harpending (r) em algumas das populações estudadas (Tabela 1), atuando, também, nas inferências de expansão populacional do NCA (Tabela 6). Embora as espécies Pterophyllum leopoldi e Pterophyllum scalare terem registros de distribuição geográfica simpátrica entre o eixo Santarém - Manacapurú foi evidenciado uma baixa resolução filogenética nestas localidades, o que também foi observado no network formado, exceto pelo agrupamento formado por cinco indivíduos de Iranduba (bootstrap 95%), provável resultado de antiga fragmentação alopátrica, como sugerido pela análise de NCA (Clado 5-3, Figura 9 e Tabela 6), porém, vale ressaltar, que este conjunto, composto por estes indivíduos de iranduba, continua fazendo parte do grupo Petro 3 (Figura 7). Os resultados populacionais obtidos neste trabalho sugerem que as populações de Acará-Bandeira não se comportam como uma população panmítica ao longo de sua ampla distribuição pela bacia amazônica, possuindo níveis significativos de estrutura populacional e maior variação genética entre populações do que dentro destas, como pode ser visto nos resultados gerados pela AMOVA (Análise de Variância Molecular) (Tabela 2), tendo Φsts significativos e fluxo gênico restrito entre várias comparações populacionais (Tabela 3), que podem estar relacionados com ampla distribuição geográfica entre as localidades amostradas, como indicado no teste de NCA (Clados 4-4 e 6-3, Figura 9 e Tabela 6). Mesmo não existindo correlação significativa entre a distância geográfica e a variação genética pelo teste de Mantel é possível observar elevado fluxo gênico

31 entre localidades mais próximas entre si (Tabela 3). Dessa forma, o baixo fluxo gênico observado entre algumas localidades pode estar relacionado com a ampla distribuição do grupo. Peixes com ampla distribuição geográfica podem exibir baixa conectividade genética quando possuem características biológicas e comportamentais tais como o territorialismo, sedentarismo e preferência por habitats mais isolados, resultando em baixa dispersão e conseqüente estrutura populacional, sendo este o caso dos peixes da família Cichlidae, que possuem comportamento territorialista e habitam preferencialmente ambientes lacustres e mais lênticos (Lowe-McConnell, 1991; Chelappa; Yamamoto, 1999; Kullander, 2003). Espécies do gênero Cichla (Tucunaré) da bacia amazônica apresentam pronunciado territorialismo (filopatria), o que pode ter determinado o baixo fluxo gênico encontrado entre suas populações (Willis et al., 2007). Mesmo em áreas geográficas mais restritas os peixes dessa família podem apresentar reduzido fluxo gênico e estrutura gênica entre diferentes locais, como é caso dos ciclídeos africanos (ex. Melanochromis auratus), podendo ser conseqüência de variações geológicas e ambientais pontuais (Markert et al., 1999), ocasionando eventos de adaptação e de especiação. Em contrapartida espécies migradoras e de ampla dispersão como, Colossoma macropomum (Tambaqui) mostraram o comportamento populacional de panmixia ao longo da bacia Amazônica (Santos et al., 2007). Sivasundar, Bermingham e Ortí (2001) encontraram pouca estrutura genética entre os peixes migradores da espécie Prochilodus lineatus ao longo de mais de 1.500 quilômetros (km) de extensão geográfica na bacia dos rios Paraná – Paraguai. Mesmo com evidências de estrutura populacional, é possível observar, tanto na árvore de Máxima Verossimilhança como no network (Ptero 3, Figura 9), haplótipos compartilhados entre localidades muito distantes, principalmente, ao longo do eixo Solimões – Amazonas. Uma hipótese que pode explicar o resultado observado está na dinâmica das planícies de inundação periódicas (“várzea” e “igapó”) muito comuns na bacia amazônica, estabelecendo certo fluxo (Tabela 3) e o provável padrão de colonização à distância proposto pelo NCA (Clado 5-2,

32 Figura 9 e Tabela 6). Dessa maneira, os sistemas de “várzea” e “igapó” podem formar um amplo sistema aquático interconectado, aumentando as possibilidades de eventos de migração e de fluxo gênico (Cantanhede et al., 2005). O significante fluxo gênico restrito observado nas comparações entre as populações de Barcelos, Santa Isabel e Boa Vista com as demais localidades (Tabela 3) e o padrão do agrupamento formado da árvore MV (Figura 7) pode estar relacionado às diferenças químicas e físicas dos dois tipos de água encontradas nos rios Negro e Solimões (Sioli, 1984). Esta hipótese também foi sugerida por Thoisy et al. (2006), Vasconcelos et a (2006) e Willis et al. (2007) para explicar o padrão de diversificação das populações de Melanosuchus niger, Caiman crocodilus e espécies do genero Cichla coletadas entre estes dois tipos de águas. Se pode sugerir, com pouca clareza, o mesmo padrão de diferenciação para a população de Novo Airão (água preta), tendo como base os índices de distância genética interpopulacional, mais elevados em relação às demais localidades de coletadas em água branca, além da consistência filogenética de 71,7% na análise de MV (Tabela 5 e Figura 7). A população de Barcelos se diferencia significativamente das outras populações do rio Negro, padrão que pode ser visto na distribuição haplotípica do network Ptero 3 (Figura 9), na árvore da MV (Figura 7) e nos índices populacionais de Nm e de Φst da Tabela 3, evidenciando um reduzido ou quase inexistente fluxo gênico e estrutura gênica, refletindo a hipótese de que uma tenha acontecido uma fragmentação alopátrica (Clado 3-19, Figura 9 e Tabela 6) nesta região do rio Negro. São desconhecidos registros científicos que abordem eventos geomorfológicos antigos nesta área ou que descrevam padrões semelhantes biogeográficos em outros grupos de animais. Uma provável explicação para o padrão encontrado nesta região poderia estar relacionada a influência das populações de Pterophyllum do rio Branco na região de Barcelos. No entanto, para testar tal hipótese é necessário uma amostragem desta localidade. Lovejoy e Araújo (2000) encontraram maior relação entre os peixes do gênero Potamorrhaphis das regiões de Apure (baixo Orinoco), Barcelos (rio Negro) e

33 Santarém (rio Amazonas) do entre populações mais próximas e de mesma drenagem como Belém (rio Amazonas), Atabapo e Santa Rita (duas últimas são do rio Orinoco). Além disso neste estudo foi observado forte estrutura genética de acordo com localidade amostrada, o que foi relacionada com a baixa capacidade de dispersão do grupo estudado. Com base nesses dados, estes pesquisadores sugeriram a existência uma conexão entre as áreas de Barcelos, Santarém e Apure por meio da bacia do rios Branco, Essequibo (na Guiana) e Orincoco. Também chama atenção a relação difusa entre a distribuição geográfica e a haplotípica ao longo de todo o grupo Ptero 3 (Figuras 7 e 9) como, por exemplo, o forte agrupamento filogenético formado entre alguns indivíduos das populações de Purus e de Novo Airão, como mostra na Figura 7 (bootstrap de 98,93%). Esta duas populações encontram-se geograficamente mais distantes entre si, quando comparadas com as populações de: Iranduba, Janauacá, Catalão e Careiro do Castanho e Careiro da Várzea em relação aos peixes da localidade Purus, ao passo que a população de Novo Airão situa-se mais próxima das localidades: Janauacá, Catalão, Careiro do Castanho, Careiro da Várzea, Iranduba e Barcelos (Anexo I). Além disso, estas duas localidades são mais influenciadas por uma dinâmica hídrica distinta, relacionada aos rios Negro e Solimões (Figura 6). Mas olhando-se atentamente pode-se perceber que algumas áreas são intermediárias entre estas duas populações como as regiões de Iranduba, Catalão, Janauacá, Careiro do Castanho e Careiro da Várzea e, por conseguinte sugere-se a possibilidade de existir uma provável conexão entre essas localidades, garantindo fluxo gênico. No geral, os padrões filogeográficos que resultaram na distribuição e diversificação observados nos peixes do grupo Pterophyllum são obscuros, mostrando um mosaico de processos evolutivos, o que indica uma histórica complexidade biogeográfica demonstrada pela região neotropical (Hubert; Renno, 2006). Apesar dos níveis de estruturação (Φst) significantes, pouca relação entre a distribuição geográfica e haplotípica foi observada, apresentando fluxo gênico, aparentemente, influenciado pela distância geográfica entre as populações

34 amostradas, pela ampla distribuição geográfica destes peixes e pelas diferenças entre as espécies do gênero.

35 CAPÍTULO 2 “Estudo da forma corporal de peixes do gênero Pterophyllum Heckel, 1840 (Cichlidae / Heroini) ao longo da Bacia Amazônica, utilizando morfometria geométrica”.

1. Introdução

Pesquisas relacionadas ao formato corporal dos organismos assumem importante papel em estudos biológicos, uma vez que podem refletir experiências biológicas e evolutivas (Bookstein, 1991; Zelditch et al., 2004), tendo como base o conceito de que o fenótipo apresentado por um organismo decorre da interação existente entre um dado genótipo e o meio ambiente em que se encontra (Ricklefs; Miles, 1994) e que a evolução de um mesmo fenótipo em populações naturais situadas em um mesmo ambiente pode ser evidência de seleção natural e de adaptação (Mcguigan et al., 2005). De um outro ponto de vista, variações estruturais podem afetar o comportamento e a interação ecológica dos organismos, principalmente se levarmos em conta características físicas e químicas do ambiente (Webb, 1984). Dessa maneira, o formato corporal pode ter relevância evolutiva e ecológica para um dado organismo (Klingenberg et al., 2003). Diante disto, análises morfométricas podem ser de grande valia (Schluter, 1993), sendo utilizada em distintas abordagens biológicas durante anos (Monteiro et al., 2002; Rosenberg, 2002). Historicamente, o estudo da variação corporal consistia em medidas relativas de estruturas anatômicas que eram analisadas por meio de arranjos canônicos, componentes principais e outras ferramentas de estatísticas multivariadas, configurando a técnica denominada de morfometria tradicional (Monteiro et al., 2002).

36 O avanço de ferramentas estatísticas e computacionais, das teorias matemáticas de espaço forma (Goodall, 1983; Kendall, 1984) e o desenvolvimento de novas abordagens metodológicas (Bookstein, 1991), permitiram novas aplicações biológicas para esse tipo de estudo, que se tornou mais acurado em definir, quantificar e explicar estatisticamente as origens, manutenção e as conseqüências dos padrões morfológicos encontrados, sendo esta nova abordagem chamada de morfometria geométrica, a qual considera variações geométricas da forma (espaço geométrico ocupado) com base numa configuração de pontos anatômicos e na redução dos efeitos inerentes ao tamanho, a localização e a posição estrutural ocupada, oferecendo dados mais informativos, de fácil manipulação e maior compreensão dos resultados obtidos (Monteiro et al., 2002; Parsons et al., 2003). No caso dos peixes da família Cichlidae, a plasticidade fenotípica e as variações estruturais apresentadas são bem evidentes, assumindo um importante papel no desenvolvimento ecológico e comportamental de cada espécie (Klingenberg et al., 2003), como é visto nos ciclídeos dos lagos africanos, que representam um excepcional exemplo de especiação, irradiação e convergência adaptativa, apresentando elevado número de morfotipos, além dos altos níveis de endemismo (Greenwood, 1991). Dessa forma, torna-se importante a determinação do grau de variação morfométrico, assim como das características morfológicas neste grupo de peixes, podendo ser de grande valia o uso combinado de ferramentas moleculares neste tipo de quantificação, auxiliando na elaboração dos prováveis mecanismos evolutivos atuantes nesses peixes (Monteiro; Gomes-Jr, 2005; Kassan et al., 2007). Kocher et al (1993), utilizando dados do DNA mitocondrial e de morfometria, identificaram separação genética evolutiva entre dois ciclídeos de morfotipos similares entre dois lagos africanos Malawi e Tanganyika, mostrando que outros aspectos, além dos genéticos, estão influenciando o padrão morfométrico observado. Monteiro e Gomes-Jr (2005), utilizando dados combinados de morfometria geométrica e parâmetros genéticos (herdabilidade, Ne e número de

37 gerações) encontraram tendências de seleção direcional entre populações da espécie de peixes Poecilia vivipara, indicando a existência de aspectos genéticos na determinação morfológica deste peixes, sendo um exemplo de que este tipo de estudo combinado pode ser de grande utilidade, podendo ser aplicado em outros grupos de peixes. Já Ready et al., (2006) não encontraram relação entre os dados moleculares e os morfotipos das espécies do gênero Symphysodon, questionando a determinação morfológica das espécies deste gênero. Klingenberg et al. (2003) em estudos com o gênero Amphilophus, utilizando morfometria geométrica detectaram diferenças significativas entre as três espécies do estudo (A. citrinellus, A. labiatus, A. zaliosus), especialmente em A.citrinellus, que apresentou diferenças de acordo com a distribuição e os morfotipos de cor e de trófico. Parsons et al. (2003) analisando duas dessas espécies (A. citrinellus, A. zaliosus) e comparando os dois tipos de abordagem morfométrica (clássica e moderna) entre si, concluíram que tanto um método quanto o outro eram eficazes em diferenciar morfologicamente cada espécie, no entanto o poder de resolução de dados oferecido pela morfometria geométrica era maior. Diante do exposto, o presente trabalho pretende utilizar dados de morfometria geométrica e de genética molecular (DNAmt - citocromo b) para testar e existência de prováveis relações entre os padrões morfológicos, genéticos e geográficos encontrados nos ciclídeos do gênero Pterophyllum ao longo da bacia amazônica.

38 1.1. Objetivos

1.1.1 Objetivo Geral

Discutir os padrões de variação morfológica dos peixes do gênero Pterophyllum ao longo da bacia amazônica, com base na caracterização genética e na distribuição geográfica do grupo, por meio das ferramentas de morfometria geométrica e de genética molecular (gene mitocondrial do citocromo b).

1.1.2. Objetivos Específicos

• Caracterizar e quantificar a variação morfométrica dos peixes do gênero Pterophyllum, ao longo de sua distribuição na bacia amazônica brasileira;

• Testar e discutir as prováveis relações existentes entre os padrões morfométricos encontrados nas populações dos peixes do gênero Pterophyllum e sua respectiva caracterização genética;

• Testar e discutir as prováveis relações existentes entre os padrões morfométricos encontrados nas populações dos peixes do gênero Pterophyllum e sua respectiva distribuição geográfica;

39 2. Materiais e Métodos

2.1. Amostragem

Levando-se em conta a distribuição dos peixes do gênero Pterophyllum na bacia amazônica (Kullander, 2003), foram coletados aproximadamente 20 a 30 espécimes ao longo dos rios: Negro, Solimões, Amazonas e alguns afluentes, totalizando oito localidades (Figura 10), das quais duas foram coletadas, por Tomas Hrbek. As coletas foram autorizadas pelo Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA) sob o processo de n° 02001.000162/2006-67. O processo de captura foi efetuado com o auxílio de um rapiché e de uma rede de cerco. Após a captura, anestesiou-se cada exemplar com 0,4 ml -1,0 ml de uma solução de eugenol 10% (diluído em etanol), de acordo com o protocolo de eutanásia estabelecido pela American Veterinary Medical Association (AVMA). Posteriormente, a nadadeira peitoral direita de cada espécime foi removida e fixada em um tubo eppendorf contendo álcool 95%. Cada amostra de tecido foi depositada na Coleção de Tecidos de Genética Animal – CTGA (Fiel Depositário/CGEN) do Laboratório de Evolução e Genética Animal (ICB / UFAM). Após a retirada da nadadeira, cada indivíduo foi etiquetado e fixado numa solução de formol diluída a 10%, que depois foi substituída por uma solução de álcool 70%.

40 Figura 10: Mapa com a distribuição dos pontos amostrados.

A figura de triângulo (preto) simboliza a cidade de Manaus, indicando um ponto de referência.

2.2. Métodos Moleculares: Extração de DNA, Amplificação, Seqüenciamento e Análises

Amostras de tecido foram retiradas da nadadeira peitoral e submetidas ao método de extração de DNA total (nuclear e mitocondrial) via proteinase K/ fenol/ clorofórmio desenvolvido por Sambrook et al. (1989) e descrito na seção de materiais e métodos do capítulo anterior, assim como os procedimentos de amplificação e seqüenciamento do gene mitocondrial do citocromo b. Com estes dados foi gerada uma árvore de relacionamento de haplótipos de Máxima Verossimilhança, seguindo os critérios de analíticos propostos na seção 2.3.2 do capítulo 1, resultando na árvore representada pela figura 7.

41 2.3. Métodos Morfométricos

2.3. 1. Coleta de dados Morfométricos

Cada exemplar fixado em álcool 70% teve seu perfil esquerdo fotografado por uma câmera digital (Cânon EOS Rebel XT), em máxima resolução, mantendo sempre a câmera na mesma distância, em posição perpendicular e central ao exemplar, com zoom constante de 5.4 mm (zoom natural), utilizando somente o foco e a luminosidade como recurso fotográfico. Foram escolhidos de 15 – 20 indivíduos por localidade, totalizando 142 indivíduos. Os espécimes que tiveram sua boca e opérculos fixados acidentalmente abertos foram descartados deste estudo.

2.3.2. Demarcação de pontos anatômicos e Obtenção de dados morfométricos

Em cada indivíduo fotografado foram digitalizados pontos anatômicos referências, num total de dezenove, utilizando o aplicativo tpsDig/2.10/2006 (Rohlf, 2006). Os pontos foram selecionados com base no critério de homologia morfométrica e pela maior capacidade de cobrir a extensão corporal (Sneath; Sokal, 1973), utilizando como referencial os esquemas de marcos anatômicos propostos por Klingenberg et al., 2003 e Parsons et al., 2003, sumarizado na figura abaixo (Figura 11). A obtenção dos dados brutos de morfometria geométrica foi efetuada, seguindo a metodologia de sobreposição dos marcos anatômicos GLS (Generalized Least Squares Procrustes Superimposition – Supersobreposição dos Quadrados Mínimos de Procrustes), que utiliza como critério de otimização a soma mínima dos quadrados das distâncias, ou distância de Procrustes, entre os

42 pontos homólogos (Rohlf; Slice, 1990; Rohlf; Marcus, 1993), retirando, consequentemente, da análise morfométrica os efeitos do tamanho, da localização e da posição corporal (Bookstein, 1989; Monteiro; Gomes-Jr, 2005). De cada espécime fotografado e marcado é calculado seu respectivo centro de configuração (média das coordenadas X e Y de cada ponto). Com isso, uma medida conhecida como centróide é calculada (raiz quadrada da soma dos quadrados das distâncias entre todos os pontos da configuração e seu respectivo centro), sendo esta a única medida de tamanho morfométrico considerada, por ser desvinculada da forma (Zelditch et al, 2004). Feito isto, uma configuração de pontos foi selecionada ao acaso e, a partir desta, outras configurações foram sobrepostas, passando por eventos de translação, rotação e escalonamento, tendo como base de referência o centróide (escalonado para o valor de 1 e centrado na origem 0,0) e os pontos homólogos de cada configuração, utilizando como método de otimização a soma mínima dos quadrados das distâncias entre os pontos homólogos das configurações. Então uma configuração média é calculada e o processo de sobreposição é iniciado mais de uma vez até a configuração média resultante do último ciclo de sobreposição não se diferencie da configuração média gerada do ciclo anterior (Rohlf; Slice 1990; Rohlf; Marcus 1993), sendo esta a configuração média chamada de “consenso”. Como conseqüência dos efeitos de translação, rotação e escalonamento as formas comparadas entre si assumem novas posições no espaço (conhecida como espaço de Kendall, ou espaço forma), que ao serem projetadas em um espaço tangente, foram traduzidas em novas coordenadas de (X, Y) de pontos. Estas coordenadas alinhadas foram, então, projetadas num espaço de deformação, gerando componentes de deformação parciais e uniformes, sendo estes as variáveis utilizadas nas análises (Monteiro et al., 2002; Zelditch. et al, 2004; Monteiro; Gomes-Jr, 2005). Estes componentes de deformação refletem as diferenças entre uma dada forma em relação a uma outra configuração de referência (muitas vezes é a forma consenso). Neste caso a referência utilizada foi o consenso de todas as configurações gerado pela sobreposição dos marcos

43 anatômicos GLS. A utilização dos componentes parciais e uniformes é muito comum na literatura como meio de acesso as variações estruturais da forma e como dados para análises estatísticas multivariadas (Bookstein, 1991). A sobreposição de imagens foi efetuada no aplicativo tpsSuper/1.14/2004 (Rohlf, 2007) e os componentes de deformação uniformes e parciais foram obtidos pelo aplicativo tpsRelw/1.45/2007.

2.4. Análises Estatísticas

Como as variáveis geradas (componentes parciais e uniformes) pelo procedimento descrito acima (Supersobreposição dos Quadrados Mínimos de Procrustes) estavam correlacionadas, foi efetuado uma Análise de Componentes Principais ACP (Principal Components Analysis - PCA) para produzir um menor número de variáveis independentes. Os primeiros componentes gerados pela análise, que compreendessem 50% da variação total morfológica (Gauch, 1982, Simões et al.,2008) foram utilizados como variáveis dependentes em uma análise de variância multivariada (MANOVA), para testar a significância da variação morfológica entre as localidades coletadas e entre os grupos de haplotípicos de cada indivíduo. Os grupos haplotípicos foram determinados com base nas seqüências do gene mitocondrial do citocromo b, numa árvore de haplótipos utilizando o critério de Máxima Verossilhança (MV) (Felsenstein, 1981), sendo esta árvore gerada no capítulo anterior deste trabalho (Figura 7). Seis morfotipos não tiveram sua seqüência determinada e, portanto, não ocuparam posição na árvore de MV (Máxima Verossimilhança). Todas as análises estatísticas foram realizadas através do programa computacional Systat/ 8.0 (Wilkinson, 1990). O critério de escolha dos primeiros componentes principais que totalizem a soma de 50% de toda a variação encontrada tem como respaldo o fato de que os primeiros componentes principais contém a maior parte da informação de similaridade entre

44 amostras, ao passo que componentes principais mais distantes tendem a reter variação relativa ao ruído do tratamento adotado (Gauch, 1982).

Figura 11: Descrição esquemática de pontos anatômicos.

1. Junção entre o pré-maxilar e o etmoidal; 2. Junção entre o lábio inferior e a mandíbula; 3. Concavidade pré-dorsal; 4. Final da porção mandibular; 5. Margem anterior ocular; 6. Margem posterior ocular; 7. Margem inferior ocular; 8. Limite opercular; 9. Base superior da nadadeira peitoral; 10. Base inferior da nadadeira peitoral; 11. Base anterior da nadadeira pélvica; 12. Base posterior da nadadeira pélvica; 13. Base anterior da nadadeira anal; 14. Base posterior da nadadeira anal; 15. Base inferior da nadadeira caudal; 16. Base superior da nadadeira caudal; 17. Centro da base da nadadeira caudal sobre a linha lateral; 18. Base posterior da nadadeira dorsal; 19. Base anterior da nadadeira dorsal.

45 3. Resultados

Para cada um dos 142 espécimes estudados, foram geradas 17 variáveis morfométricas (1 componente de deformação uniforme e 16 componentes de deformação parciais), que ao serem reduzidos de dimensionalidade, resultaram em dezoito componentes principais, dos quais somente os quatro primeiros (CP1= 22%; CP2= 14,6%; CP3= 9,5%; CP4= 7,4%) foram utilizados como variáveis dependentes, porque explicaram um total de 50% da variação encontrada. Os baixos valores de loadings apresentados nos quatro primeiros componentes indicaram que nenhuma das variáveis utilizadas teve maior peso em relação às outras em cada componente (Tabela 7). No teste estatístico de MANOVA, utilizando os quatro primeiros componentes principais como variáveis dependentes, observou-se significância entre a variação morfológica e as diferentes localidades (Wilks' Lambda = 0,903; p < 0,01; 130 g.l., onde PC2 e PC3 com p < 0,05). Também foi encontrado resultado significativo com relação ao grupo haplotípico de cada indivíduo e a variação morfológica encontrada (Wilks' Lambda = 0,457; p < 0,001; 136 g.l., onde PC1 com p < 0,001). A separação da distribuição morfométrica dos indivíduos em relação aos grupos de haplótipos e as diferentes localidades também foi evidenciada na representação gráfica dos componentes 1 e 2, sendo mais marcante ao longo do componente 1 (CP1) a separação em relação ao grupo haplotípico (Ptero 2 e Ptero 3) e no componente 2 (CP2) a distinção dos morfotipos entre as localidades (Gráficos 3 e 4). Através da determinação morfométrica foi possível sugerir o grupo haplotípico dos seis indivíduos, cujo grupo haplotípico era indeterminado anteriormente, sendo, provavelmente cinco indivíduos do haplótipo Ptero 2 e um do grupo Ptero 3 (Gráfico 3).

Tabela 7: Pesos das variáveis morfométricas sobre os quatro primeiros componentes da análise de componentes principais.

Variável Morfométrica CP1 CP2 CP3 CP4 UNIX_PW -0,053 -0,100 0,008 -0,108 UNIY_PW -0,023 -0,025 -0,044 0,037 PW1_X 0,041 -0,035 0,231 0,128 PW1_Y 0,049 -0,068 0,166 0,013 PW2_X 0,044 0,113 -0,131 -0,080 PW2_Y 0,058 0,071 -0,089 -0,079 PW3_X 0,014 0,001 -0,056 0,149 PW3_Y 0,076 0,064 0,012 0,136 PW4_X -0,065 0,049 0,068 0,123 PW4_Y 0,011 0,098 0,061 0,062 PW5_X 0,002 -0,131 -0,172 0,075 PW5_Y 0,034 0,142 -0,153 -0,069 PW6_X 0,008 0,063 0,039 0,203 PW6_Y -0,073 -0,010 -0,036 -0,200 PW7_X 0,042 -0,101 -0,048 0,026 PW7_Y -0,073 0,020 0,052 -0,072 PW8_X -0,009 0,117 0,162 -0,119 PW8_Y 0,010 -0,072 0,208 0,063 PW9_X 0,001 0,045 0,098 -0,229 PW9_Y -0,041 -0,119 0,029 -0,057 PW10_X -0,009 0,111 0,010 0,102 PW10_Y -0,057 -0,033 -0,008 0,136 PW11_X 0,082 -0,087 0,056 -0,056 PW11_Y 0,049 0,055 0,140 -0,213 PW12_X -0,111 -0,02 -0,038 -0,048 PW12_Y -0,075 -0,035 -0,098 0,055 PW13_X 0,075 -0,038 0,035 0,086 PW13_Y -0,064 -0,044 0,065 -0,099 PW14_X 0,05 0,115 0,005 0,048 PW14_Y -0,084 0,102 0,046 0,078 PW15_X -0,105 0,029 0,021 -0,024 PW15_Y -0,111 0,028 0,054 0,090 PW16_X -0,097 0,097 0,044 0,050 PW16_Y -0,111 -0,005 0,002 0,055 Eigenvalues 7,511 4,976 3,252 2,525 % da Variação Explicada 22,091 14,634 9,566 7,425

47 Gráfico 3: Distribuição dos haplótipos ao longo dos dois primeiros componentes principais construídos com as variáveis morfométricas.

Gráfico 4: Distribuição das populações amostradas ao longo dos dois primeiros componentes principais construídos com as variáveis morfométricas.

Considerando o padrão de distribuição da variação morfométrica encontrado ao longo da distribuição geográfica do grupo haplotípico Ptero 3 (Gráfico 3), foi aplicado, novamente, uma Análise de Componentes Principias (PCA), para a redução de dimensionalidade das variáveis correlacionadas em um número menor de variáveis independentes, utilizando somente as variáveis morfométricas dos indivíduos do grupo Ptero 3. Como resultado observou-se que os cinco primeiros componentes principais explicaram 50% da variação morfológica do grupo Ptero 3 ( CP1= 18,8%; CP2= 13%; CP3= 9%; CP4= 6,5%; CP5= 6%), onde os componentes 1 e 2 apresentaram algumas variáveis com valores loadings maiores em relação aos demais (p > 0,6) (Tabela 8). Com estes componentes como variáveis dependentes foi desenvolvido uma MANOVA para testar significância da variação morfométrica em relação à distribuição das populações do grupo Ptero 3, resultando num F significativo (Wilks' Lambda = 0,445; p < 0,001; 104 g.l., onde PC 1 com p < 0,001). Na representação da distribuição morfológica do grupo Ptero 3 nos componentes principais, notou-se uma separação gráfica de grupos ao longo do eixo PC1 (Gráfico 5).

Gráfico 5: Distribuição das populações amostradas do grupo Ptero 3 ao longo dos dois primeiros componentes principais construídos com as variáveis morfométricas.

Tabela 8: Pesos das variáveis morfométricas sobre os cinco primeiros componentes da análise de componentes principais no grupo Ptero 3. Os valores marcados de azul indicam os maiores loadings obtidos.

Variável Morfométrica CP1 CP2 CP3 CP4 CP5 UNIX_PW -0,471 0,065 0,516 -0,135 0,274 UNIY_PW -0,061 -0,215 0,077 0,655 -0,222 PW1_X 0,014 0,790 -0,090 0,271 0,058 PW1_Y -0,346 0,672 -0,044 0,233 -0,330 PW2_X 0,371 -0,423 -0,216 -0,245 -0,148 PW2_Y 0,119 -0,269 -0,124 -0,415 0,318 PW3_X 0,070 -0,200 -0,295 0,020 -0,035 PW3_Y 0,286 0,148 -0,412 -0,152 -0,358 PW4_X 0,534 0,074 0,340 0,059 0,110 PW4_Y 0,528 0,163 0,053 0,021 0,161 PW5_X -0,665 -0,515 -0,291 0,112 0,080 PW5_Y 0,573 -0,599 -0,021 -0,045 -0,080 PW6_X 0,385 0,141 -0,459 0,355 -0,041 PW6_Y -0,091 -0,186 0,381 0,169 0,249 PW7_X -0,536 -0,108 0,057 0,063 0,420 PW7_Y 0,244 0,196 -0,092 -0,241 0,008 PW8_X 0,566 0,553 0,024 0,007 -0,010 PW8_Y -0,159 0,720 0,076 -0,165 0,025 PW9_X 0,001 0,513 0,011 0,088 0,307 PW9_Y -0,572 0,065 0,052 0,391 0,269 PW10_X 0,627 -0,063 0,082 -0,099 0,049 PW10_Y 0,095 -0,174 0,273 0,595 0,191 PW11_X -0,657 0,193 0,319 -0,117 -0,329 PW11_Y 0,038 0,693 0,089 -0,179 0,223 PW12_X -0,008 -0,246 0,550 0,125 -0,445 PW12_Y 0,035 -0,508 -0,105 -0,008 0,511 PW13_X -0,220 0,256 -0,730 -0,249 0,166 PW13_Y -0,138 0,223 0,569 -0,394 0,008 PW14_X 0,571 0,068 -0,336 0,352 0,223 PW14_Y 0,777 0,052 0,060 -0,015 -0,137 PW15_X 0,419 0,222 0,000 0,143 0,567 PW15_Y 0,659 0,084 0,286 0,380 -0,122 PW16_X 0,830 0,036 0,176 -0,155 0,002 PW16_Y 0,403 -0,159 0,582 -0,212 0,167 Eigenvalues 6,388 4,367 3,111 2,255 2,064 % da Variação Explicada 18,789 12,843 9,151 6,634 6,069

50 4. Discussão e Conclusão

Neste estudo observaram-se variações morfométricas significativas relacionadas ao grupo haplotípico e à distribuição geográfica do gênero em questão, sugerindo que fatores ecológicos e genéticos estão influenciando o perfil morfométrico destes peixes. Parte dessa variação pode ser decorrente de diferenças morfológicas entre as espécies do gênero, pois com base nas diferenças e semelhanças morfológicas entre os indivíduos se pode determinar uma espécie (Puorto et al., 2001). Klingenberg e colaboradores (2003) ao estudarem três espécies de ciclídeos do gênero Amphilophus em lagos próximos da Nicarágua encontraram variação morfométrica significativa entre as espécies, corroborando descrições taxonômicas pré-existentes para o grupo. Já Ready e colaboradores (2006) não encontraram variação morfométrica entre algumas espécies descritas do gênero Symphysodon. Contudo estudos mais aprofundados nas três espécies, separadamente, são necessários para avaliar e quantificar a variação morfológica pertinente às espécies válidas para o gênero Pterophyllum. Considerando a distribuição morfométrica ao longo dos componentes principais foi possível constatar que a maior parte da variação morfológica encontrada (22%) é explicada por divergência genética, seguido pela distribuição geográfica (14,5%) entre as populações, sendo que nenhuma variável morfométrica teve peso relevante no resultado geral encontrado (Tabela 7; Gráficos 3 e 4). Dessa maneira, analisando separadamente a variação morfológica observada entre as localidades dos haplótipos Ptero 2 e Ptero 3 (Gráficos 3 e 4) é possível sugerir a atuação de fatores ecológicos locais, mostrando um exemplo da capacidade adaptativa e de plasticidade fenotípica da família Cichlidae e da tribo Heroini (Lowe-McConnell, 1969b; 1999; Kocher, 2004; Pérez et al., 2007). Nas populações amostradas foi observado maior variação morfométrica intralocal do que entre localidades distintas, principalmente entre as populações do eixo Solimões – Amazonas (Gráfico 4 e 5). Ready et al (2006) observaram um

51 padrão parecido de variação morfológica similar ao analisarem populações de Symphysodon ao longo da bacia amazônica (principalmente entre o eixo Solimões-Amazonas), sugerindo uma distribuição morfológica populacional pouco relacionada às localidades amostradas, encontrando maior variação morfológica dentro das populações consideradas no estudo. Dessa forma, a pequena variação morfológica encontrada entre as populações de Pterophyllum, tanto no geral quanto no grupo Ptero 3, pode ser conseqüência da ampla distribuição geográfica deste grupo, ao longo de grandes tributários e canais principais que, juntamente com as florestas de inundação, podem estar garantindo um certo nível de fluxo gênico entre regiões (Tabela 3 do Capítulo 1), mantendo a similaridade genética (Tabela 5 do Capítulo 1) e a menor variação morfológica entre estas populações. Cantanhede e colaboradores (2005), estudando populações de peixe boi da espécie Trichechus inunguis, mamífero com distribuição ampla na bacia amazônica, encontraram relativo fluxo gênico e semelhança fenotípica entre as diferentes populações do grupo, considerando-o como uma população panmítica mantida pela dispersão relacionada à dinâmica das planícies de inundação, o que também foi visto por Hrbek et al. (2005) em populações de Pirarucu (Araipama gigas). Outra hipótese, aqui sugerida, é de nível ecológico e comportamental em que a ampla distribuição geográfica e a menor sobreposição dos indivíduos e das espécies, associadas à abundante disponibilidade de recursos pode estar acarretando níveis de competitividade e de pressão seletiva baixos, gerando uma distribuição morfológica mais homogenia entre as localidades, pois indivíduos que apresentam nichos ecológicos similares e em simpatria, podem apresentar maior divergência fenotípica quando comparadas em alopatria em decorrência da competitividade entre si, gerada pela falta de recursos (Schluter, 2000; Adams et al., 2007). No entanto, maiores esforços devem ser aplicados no desenvolvimento e na validação desta última hipótese. Um outro padrão de distribuição morfométrica pode ser sugerido ao olharmos para o gráfico 5 com relação aos indivíduos das localidades de Barcelos, Boa Vista e Santa Izabel do grupo Ptero 3, resultando em uma significativa

52 separação morfológica destas populações em relação aos demais morfotipos das outras regiões. Uma possível explicação pode estar nas diferenças de origem e de composição química e física das águas dos principais afluentes (rios Negro, Solimões e Amazonas), onde estas populações (do grupo Ptero 3) estão situadas, influenciando a diferenciação morfológica, o reduzido fluxo gênico e a estrutura genética populacional observados entre estas regiões em relação as outras localidades (Gráfico 5 e Tabela 3 do Capítulo 1) (Lowe-McConnell, 1969b; Sioli, 1984; Lowe-McConnell, 1991). Um fenômeno similar foi constatado na diferenciação morfológica e populacional em outros grupos de animais distribuídos ao longo dos principais tributários da bacia amazônica (Vasconcelos et al., 2006; Willis et al., 2007), sendo considerado como um fator geológico limitante para distribuição geográfica das espécies e para o fluxo gênico populacional, promovendo oportunidades de diversificação (Willis et al., 2007). Entretanto mesmo entre as populações do rio Negro (água preta) é possível constatar elevada distribuição morfológica dentro das localidades amostradas (Gráfico 4 e 5), o que sugere fluxo gênico (Tabela 3 do Capítulo 1). Numa visão conjunta de todo o contexto de distribuição morfológica nota- se uma separação morfométrica entre os indivíduos da região de Barcelos (Gráficos 3 e 4) e as localidades restantes, apresentando um perfil de distribuição haplotípica semelhante quando comparada a árvore de haplótipos (Figura 7) e ao network Ptero 3 (Figura 9), gerados no Capítulo 1. Atualmente não se encontra barreira geológica significativa nesta região e são desconhecidos registros científicos que abordem eventos geomorfológicos antigos nesta área ou que descrevam padrões semelhantes biogeográficos em outros grupos de animais, porém não pode descartar a existência de alguma causa na diferenciação morfológica e genética encontrada. Dessa maneira, fica difícil determinar os prováveis processos que conduziram este resultado, no entanto sugere-se que fatores ambientais históricos e/ou atuais estejam relacionados à separação morfológica e genética observada, assumindo o papel de causa (primário) ou de manutenção (secundário) do resultado observado, levando-se em consideração a

53 complexidade em se distinguir eventos ecológicos primários de secundários (Coyne; Orr, 2004). Num contexto geral, a utilização em conjunto de ferramentas moleculares e de morfometria geométrica pode ser de grande valia em estudos evolutivos, principalmente em organismos que apresentam alto grau de polimorfismo e plasticidade fenotípica como os ciclídeos. O perfil de variação e determinação morfológica encontrados nos ciclídeos do gênero Pterophyllum é composto por fatores tanto ambientais quanto genéticos e a existência de variação morfológica intraespecífica e interespecífica, de eventos de migração e de plasticidade fenotípica não podem ser descartados. No entanto a determinação dos fatores contribuintes para os eventos mencionados ainda são incertos e maiores esforços devem ser aplicados.

54 BIBLIOGRAFIA

Adams, D. C.; West, M. E.;Collyer, M. L. 2007. Location-specific sympatric morphological divergence as a possible response to species interactions in West Virginia Plethodon salamander communities. Journal of Animal Ecology, 76: 289–295.

Avise, J. C. 1986. Mitochondrial DNA and the evolutionary genetics of higher animals. Phil. Trans. R. Soc. Lond., B312: 325-342.

Avise, J. C. 1994. Molecular markers, natural history and evolution. Chapman and Hall, New York, NY.

Avise, J. C. 2000. Phylogeography: The history and formation of species. Harvard Univ. Press, Cambridge, Massachusetts, 447p.

Ballard, W. O.; Whitlock, M. C. 2004. The incomplete natural history of mitochondria. Molecular Ecology, 13: 729-744.

Barluenga, M.; Meyer, A. 2004. The Midas cichlid species complex: incipient sympatric speciation in Nicaraguan cichlid fishes? Molecular Ecology, 13: 2061-2076.

Bermingham, E.; Martin, A. P. 1998. Comparative mtDNA phylogeography of neotropical freshwater fishes: Testing sharded history to infer the evolutionary landscape of lower Central America. Molecular Ecology, 7: 499-518.

Bermingham, E.; Moritiz, C. 1998. Comparative phylogeography: concepts and applications. Molecular Ecology, 7: 367-369.

Bookstein, F. L. 1989. Principal warps: thin-plate splines and the decompositions of deformations. IEEE Transactions on Pattern Analysis and machine Intelligence, 11 (6): 567-585.

Bookstein, F. L. 1991. Morphometric tools for landmark data. Cambridge University Press, Cambridge, New York, 435p.

Briggs, J. C. 2003. Fishes and Birds: Gondwana Life Rafts Reconsidered. Systematic Biology, 52 (4): 548-553.

Brown, W. M.; Pranger, E. M.; Wang, A.; et al. 1982. Mitochondrial DNA sequences of primates: Tempo and mode of evolution. Journal of Molecular Evolution, 18: 225-239.

Cantanhede, A. M.; Silva, V. M. F.; Farias, I. P.; Hrbek, T.; Lazzarini, S. M.; Alves- Gomes, J. 2005. Phylogeography and population genetics of the endangered Amazonian manatee, Trichechus inunguis Natterer, 1883 (Mammalia, Sirenia). Molecular Ecology, 14: 401–413.

Chakrabarty, P. 2004. Cichlid biogeography: comment and review. Fish and Fisheries, 5: 97-119.

Chao, N. L. 1995. Ornamental fish resource of Amazonia and aquatic conservation. Ofi Journal, Part 1. Species diversity, 12: 241-260.

Chao, N. L. 2001. The fishery, diversity, and conservation of ornamental fishes in the Rio Negro Basin - A review of Project Piaba (1989-99) p.161-204. In: Chao, N.L.; Petry, P.; Prang, G.; Sonneschien, L.; Tlusty, M.; Conservation and manegement of ornamental fish resources of the Rio Negro Basin,

56 Amazonia, Brazil - Project Piaba. Editora da Universidade do Amazonas, Manaus, Amazonas, Brasil, 301p.

Chapman, F. A.; Fitz-Coy, S.; Thunberg, J. T. 1997. United States of America International Trade in Ornamental Fish. Journal of the World Aquaculture Society, 28 (1): 1-10.

Chelappa, S.; Yamamoto, M. E. 1999. Prior residence, body size and the dynamics of territorial disputes between male freshwater angelfish. Journal of Fish Biology, 55: 1163–1170.

Cichocki, F. P. 1976. Cladistic history of cichlid fishes and reprodutive strategies of the Amarican genera Acarichthys, Biotodoma and Geophagus. Unpublished PhD dissertation, University Michigan, Ann Arbor, USA.

Clement, M.; Posada, D.; Crandall, K. A. 2000. TCS: a computer program to estimate gene genealogies. Molecular Ecology, 9: 1657-1659.

Coyne, J. A.; Orr, H. A. 2004. Speciation. Sinauer Associates, Sunderland, MA.

Crandall, K. A.; Templeton, A. R. 1996. Applications of intraspecific phylogenies. In: Harvey, P. H.; Brow, A. J. L.; Smith, J. M.; Nee, S. New Uses for New Phylogenies. Oxford University, Press. Oxford, 81-99.

Durand, J.-D.; Tine, M.; J.;, P.; Thiaw, O. T.; Lae, R. 2005. Impact of glaciations and geographic distance on the genetic structure of a tropical estuarine fish, Ethmalosa fimbriata (Clupeidae, S. Bowdich, 1825). Molecular Phylogenetics and Evolution, 36: 277–287.

57 Excoffier, L.; Smouse, P. E.; Quattro, J. M. 1992. Analysis of molecular variance inferred from metric distances among DNA haplotypes: Application to human mitochondrial DNA restriction data Genetics, 131: 479–491.

Excoffier, L.; Laval, G.; Schneider, S. 2005. Arlequin ver. 3.0: An integrated software package for population genetics data analysis. Evol. Bioinform. Online., 1: 47-50.

Farias, I. P.; Schneider, H.; Sampaio, I. 1998. Molecular phylogeny of neotropical cichlids: The relationship of Cichlasomines and Heroines. p. 499-508. In: MALABARBA, L.R.; REIS, R.E.; VARI, R.P.; LUCENA, Z.M.; LUCENA, C.A.S. Phylogeny and classification of Neotropical fishes., EDIPUCRS, Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, 603p.

Farias, I. P.; Orti, G.; Sampaio, I.; Schneider, H.; Meyer, A. 1999. Molecular DNA phylogeny of the family Cichlidae: Monophyly and fast molecular evolution of the neotropical assemblage. Journal of Molecular Evolution, 48: 703-711.

Farias, I. P.; Ortí, G.; Meyer, A. 2000. Total Evidence: Molecules, Morphology, and the Phylogenetics of Cichlid Fishes. Journal of Experimental Zoology, 288: 76–92.

Farias, I. P.; Orti, G.; Sampaio, I.; Schneider, H.; Meyer, A. 2001. The cytochrome b gene as phylogenetic marker: The limits of resolution for analyzing relationships among cichlid fishes. Journal of Molecular Evolution, 53: 89- 103.

Felsenstein, J. 1981. Evolutionary trees from DNA sequences: a maximum likelihood approach. Journal of Molecular Evolution, 17: 368-376.

58 Ford, M. J. 2002. Applications of selective neutrality tests to molecular ecology. Molecular Ecology, 11: 1245–1262.

Fu Y-X. 1997. Statistical tests of neutrality of mutations against population growth, hitchhiking and background selection. Genetics, 147: 915-925.

Gauch, H. G. 1982. Noise reduction by eigenvector ordinations. Ecology, 63: 1643–1649.

Goodall, C. R. 1983. The statistical analysis of growth in two dimensions. Doctoral dissertation. Department of Statistics. Harvard University.

Grant, W. S.; Bowen, B. W. 1998. Shallow population histories in deep evolutionary lineages of marine fishes: insights from sardines and anchovies and lessons for conservation. Journal of Heredity 89 415–426.

Greenwood, P. H. 1991. Speciation, p. 86-102. In: Keenleyside, M. H. A. Cichlid fishes: behavior, ecology and evolution, Croom Hlem, London, 378p.

Hall, T. A. 1999. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. Nucl. Acids. Symp. Ser., 95: 95-8.

Hrbek, T.; Farias, I. P.; Crossa, M.; Sampaio, I.; Porto, J. I. R.; Meyer, A. 2005. Population genetic analysis of Arapaima gigas, one of the largest freshwater fishes of the Amazon basin: implications for its conservation. Animal Conservation, 8: 297–308.

Hubert, N.; Renno, J. F. 2006. Historical biogeography of South American freshwater fishes. Journal of Biogeography, 33: 1414–1436.

59 Jobb, G. 2008. TREEFINDER version of March 2008. Munich, Germany, www.treefinder.de.

Kassan, D.; Yamaoka, K.; Rusuwa, B.; Hori, M. 2007. The robustness of geometric morphometrics in testing the morphological equivalence hypothesis among cichlid species from East African Great Lakes. Biological Journal of the Linnean Society, 91: 1–9.

Kendall, D. G. 1984. Shape-manifolds, Procrustean metrics and complex projective spaces. Bulletin of the London Mathematical. London Mathematical Society, 16: 81–121.

Klingenberg, C. P.; Barluenga, M.; Meyer, A. 2003. Body shape variation in cichlid fishes of the Amphilophus citrinellus species coplex. Biological Journal of the Linnean Society, 80: 397-408.

Kocher, T. D.; Conroy, J. A.; McKaye, K. R.; Stauffer, J. R. 1993. Similar morphologies of cichlid fish in Lakes Tanganyika and Malawi are due to convergence. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2: 158–165.

Kocher, T. D. 2004. Adaptive evolution and explosive speciation: The cichlid fish model. Nature, 5 p.288-298.

Kullander, S. O. 1986. Cichlid fishes of the Amazon River drainage of Peru. Livro. Swedish Museum of Natural History, Stockholm, Suécia, 431p.

Kullander, S. O.; Nijssen, H. 1989. The cichlids of Surinam. Teleostei: Labroidei. E. J. Brill. Leiden, 256p.

60 Kullander, S. O. 1996. Heroina isonycteina, a new genus and species of cichlid fish from western Amazonas, with comments on cichlasomine systematics. Ichthyol Explorer Freshwaters, 7: 149-172.

Kullander, S. O. 1998. A phylogeny and classification of the South American cichlidae (Teleostei: Perciformes) p.461-498. In: Malabarba, L. R.; Reis, R. E.; Vari, R. P.; Lucena, Z. M.; Lucena, C. A. S. Phylogeny and classification of Neotropical fishes., EDIPUCRS, Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, 603p.

Kullander, S. O. 2003. Family Cichlidae (Cichlids). p. 605-654. In: Reis, E. R.; Kullander, S. O.; Ferraris, C. J. Jr. 2003. Check List of the Freshwater Fishes of South and Central America. EDIPUCRS, Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, 742p.

Kumar, S.; Tamura, K.; Nei, M. 2004. MEGA3: integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment. Briefings in Bioinformatics, 5: 150-163.

Lee, W. J.; Conroy, J.; Howell, W. H.; Kocher, T. D. 1995. Structure and evolution of teleost mitochondrial control regions. Journal of Molecular Evolution, 41: 54-66.

Li, W-H. 1997. Molecular Evolution. Sinauer Associates, Sunderland, MA, 486p.

Liem, K. F. 1991. Functional Morphology, p. 129 -150. In: Keenleyside, M. H. A. Cichlid fishes: behavior, ecology and evolution. Croom Helm, London, 378p.

López-Fernández, H.; Honeycutt, R. L.; Stiassny, M. L. J.; Winemiller, K. O. 2005. Morphology, molecules, and character congruence in the phylogeny of

61 South American geophagine cichlids (Perciformes, Labroidei). Zoologica Scripta, 34: 627-651.

Lovejoy, N. R.; Araújo, M. L. G. 2000. Molecular systematics, biogeography and population structure of Neotropical freshwater needlefishes of the genus Potamorrhaphis. Molecular Ecology, 9: 259-268.

Lowe-McConnell, R. H. 1991. Ecology of cichlids in South American and African waters excluding the African Lakes, p. 61-85. In: Keenleyside, M. H. A. Cichlid fishes: behavior, ecology and evolution, Croom Helm, London, 378p.

Lowe-McConnell, R. H. 1999. Especiação: Os Grandes Lagos Africanos como Laboratórios de Evolução, p. 120-128. In: Lowe-McConnell, R.H. Estudos ecológicos de comunidades de peixes tropicais. 534p.

Lowe-McConnell, R. H. 1969a. The cichlid fishes of Guyana, South America, with notes on their ecology and breeding behaviour. Zoological Journal of the Linnean Society, 48: 255-302.

Lowe-McConnell, R. H. 1969b. Speciation in tropical freshwater fishes. Zoological Journal of the Linnean Society, 51-75.

Lundberg, J. G. 1993. African-South American freshwater fish clades and continental drift: Problems with a paradigm. p.156-198. In: Goldblatt, P. Biological relationships between Africa and South America. Yale Univ. Press, New Haven, Connecticut.

Lundberg, J. G.; Marshall, L. G.; Guerrero, J.; Horton, B.; Malabarba, M. C. S. L.; Wesseling, F. 1998. The stage for neotropical fish diversification: A history of tropical South American Rivers. In: Malabarba, L.R.; Reis, R.E.; Vari,

62 R.P.; Lucena, Z.M.; Lucena, C.A.S. Phylogeny and classification of Neotropical fishes. EDIPUCRS, Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil, 603p.

Mantel, N. 1967. The detection of disease clustering and a generalized regression approach. Cancer Research, 27: 209-220.

Markert, J. A.; Arnegard, M. E.; Danley, P. D.; Kocher, T. D. 1999. Biogeography and population genetics of the Lake Malawi cichlid Melanochromis auratus: habitat transience, philopatry and speciation. Molecular Ecology, 8: 1013– 1026.

McGuigan, K.; Chenoweth, S. F.; Blows, M. W. 2005. Phenotypic Divergence along Lines of Genetic Variance. The American Naturalist, 165 (1): 32-43.

Meyer, A.; Wilson, A. C. 1990. Origin of tetrapods inferred from their mitochondrial DNA affiliation to lungfish. Journal of Molecular Evolution, 31: 359-364.

Meyer, A. 1993. Evolution of mitochondrial DNA in fishes. In: Hochachka; Mommsen. Biochemistry and molecular biology of fishes, Vol.2. Elsevier Science Publishers B.V, 1-38.

Meyer, A. 1994. DNA Technology and phylogeny of fish: Molecular phylogenetic studies of fish. p.219-249. In: Beaumont, A.R. Genetic and evolution of aquatic organisms, Chapman and Hall, London.

Miller, R. R. 1966. Geographical distribution of Central American freshwater fishes. Copeia, 4: 773-801.

63 Monteiro, L. R.; Diniz-Filho, A. F.; Reis, S. F.; Araújo, E. D. 2002. Geometric estimates of heritability in biological shape. Evolution, 56 (3): 563-572.

Monteiro, L. R.; Gomes-Jr, J. G. 2005. Morphological divergence rate tests for natural selection: Uncertainty of parameter estimation and robustness of results. Genetics and Molecular Biology, 28 (2): 345-355.

Murray, A. M. 2001. The fossil record and biogeography of the Cichlidae (Actinopterygii, Labroidei). Biological Journal of the Linnean Society, 74: 517-532.

NCBI. National Center for Biotechnology Information. Disponível em: www.ncbi.nlm.nih.gov, Acessado em: 15 jan 2008.

Nei, M. 1972. Genetic distance between populations. American Naturalist, 106: 293-292.

Nei, M. 1987. Molecular Evolutionary Genetics. Columbia University Press, New York, NY.

Panchal, M.; Beaumont, M. A. 2007. The automation and evaluation of nested clade phylogeographic analysis. Evolution, 61: 1466-1480.

Parker, A.; Kornfield, I. 1997. Evolution of the Mitochondrial DNA Control Region in the mbuna (Cichlidae) Species Flock of Lake Malawi, East Africa. Journal of Molecular Evolution, 40: 70-83.

Parsons, K. J.; Beren, W. R.; Hrbek, T. 2003. Getting into shape: An empirical comparison of traditional truss-based morphometric methods with a newer

64 geometric method applied to New World cichlids. Environmental Biology of Fishes 67: 417–431.

Pérez, G. A. C.; Líban, O.; Ortí, G.; Bermingham, E.; Doadrio, I.; Zardoya, R. 2007. Phylogeny and biogeography of 91 species of heroine cichlids (Teleostei: Cichlidae) based on sequences of the cytochrome b gene. Molecular Phylogenetics and Evolution, 43: 91–110.

Posada, D.; Maxwell, T. J.; Templeton, A. R. 2000. TreeScan: a bioinformatic application to search for genotype/phenotype associations using haplotype trees. Bioinformatics, 21: 2130-2132.

Puorto, G.; Salomão, M. G.; Theakston, R. D. G.; Thorpe, R. S.; Warrel, D. A.; Wuster, W. 2001. Combining mitochondrial DNA sequences and morphological data to infer species boundaries: phylogeography of lanceheaded pitvipers in the Brazilian Atlantic forest, and the status of Bothrops pradoi (Squamata: Serpentes: Viperidae). Journal of Evolutionary Biology, 14: 527-538.

Ready, J. S.; E. J. G. Ferreira, E. J. G.; Kullander, S. O. 2006. Discus fishes: mitochondrial DNA evidence for a phylogeographic barrier in the Amazonian genus Symphysodon (Teleostei: Cichlidae). Journal of Fish Biology, 69: 200–211.

Regan, C. T. 1905. A revision of fishes of the American cichlid genus Cichlasoma and of the allied genera. Annals and Magazine of Natural History, 7 (15): 60- 67.

Rice, W. R. 1989. Analyzing tables of statistical tests. Evolution, 43: 223-225.

65 Ricklefs, R. E.; Miles, D. B. 1994. Ecological and evolutionary inferences from morphology: An ecological perspective. p.13-41. In: Wainwright, P.C.; Reilly, S.M. Ecological morphology. University of Chicago Press, Chicago.

Roe, K. L.; Conkel, D.; Lydeard, C. 1997. Molecular Systematic of Middle American cichlid fishes and evolution of trophic-types in Cichlasoma (Amphilophus) and C. (Thorichthys). Molecular Phylogenetics and Evolution, 7: 366-376.

Rogers, A. R.; Harpending, H. 1992. Population growth makes waves in the distribution of pairwise genetic differences. Molecular Biology and Evolution, 9: 552–569.

Rohlf, F. J.; Slice, D. E. 1990. Extensions of the Procrustes method for the optimal superimposition of landmarks. Systematic Zoology, 39: 40–59.

Rohlf, F. J.; Marcus, L. F. 1993. A revolution in morphometrics. Trends Ecol. Evo., 8: 129-132.

Rohlf, F. J. 2006. tpsDig version 2.10. Ecology and Evolution, SUNY at Stony Brook. http://life.bio.sunysb.edu/morph/.

Rohlf, F. J. 2007. Relative warps version 1.45. Ecology and Evolution, SUNY at Stony Brook. http://life.bio.sunysb.edu/morph/.

Rosenberg, M. S. 2002. Fiddler crab claw shape variation: a geometric morphometric analysis across the genus Uca (Crustacea: Brachyura: Ocypodidae). Biological Journal of the Linnean Society, 75: 147–162.

66 Rozas, J.; Sánchez-Del Barrio, J. C.; Messenguer, X.; Rozas, R. 2003. DnaSP, DNA polymorphism analyses by the coalescent and other methods Bioinformatics, 19: 2496-2497.

Sambrook, J.; Fritsch, E. F.; Maniatis, T. 1989. Molecular cloning: A laboratory manual. Cold Spring Harbor, New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2ª ed.

Santos, C. A. 2006. Caracterizção Cromossômica de espécies de acarás da subfamília Cichlasomatinae (Perciformes: Cichlidae) da Amazônia Central. Tese de mestrado (CDD 19.ed.), INPA, Manaus, Amazonas, Brasil, 71p.

Santos, M. C. F.; Ruffino, M. L.; Farias, I. P. 2007. High levels of genetic variability and panmixia of the tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1816) in the main channel of the Amazon River Journal of Fish Biology 71: 1-12.

Schluter, D. 1993. Adaptative radiation in sticklebacks: size, shape, and habitat use efficiency. Ecology, 74: 699-709.

Schluter, D. 2000. The ecology of adaptive radiation. Oxford University Press, Oxford.

Simões, P. I.; Lima, A. P.; Magnusson, W. E. 2008. Acoustic and Morfological Differentiation in the Frog Allobates femoralis: Relationships with the upper Madeira River and Other Potential Geological Barriers Biotropica, (aceito em Dez/2007 (ref. 10.1111/j.1744-7429.2008.00416.x).

Sioli, H. 1984. The Amazon and its main affluents: hydrography, morphology of the river courses and river types. Ecology of a Mighty Tropical River and its

67 Basin, p. 127-165. In: Sioli, H. The Amazon. Limnology and Landscape. Dr. W. Junk Publishers, Dordrecht, The Netherlands.

Sivasundar, A.; Bermingham, E.; Orti, G. 2001. Population structure and biogeography of migratory freshwater fishes (Prochilodus: Characiformes) in major South American Rivers. Molecular Ecology, 10: 407-417.

Sneath, P. H.; Sokal, R. R. 1973. Numerical taxonomy. Freeman, San Francisco.

Stiassny, M. L. J. 1991. Phylogenetic intrarelationships of the family Cichlidae: An overview. In: Keenleyside, M.H.A. Cichlid fishes: Behaviour ecology and evolution. London, Chapman and Hall, p.378.

Tajima, F. 1983 Evolutionary relationships of DNA sequences in finite populations. Genetics, 105: 437-460.

Tajima, F. 1983. Evolutionary relationships of DNA sequences in finite populations. Genetics, 105: 437-460.

Templeton, A. R.; Boerwinkle, E.; Sing, C. F. 1987. A cladistic analysis of phenotypic associations with haplotypes inferred from restriction endonuclease mapping. I. Basic theory and an analysis of alcohol dehydrogenase activity in Drosophila. Genetics, 117: 343-351.

Templeton, A. R.; Crandall, K. A.; Sing, C. F. 1992 A cladistic analysis of phenotypic associations with haplotypes inferred from restriction endonuclease mapping and DNA sequence data: III. Cladogram estimation. Genetics, 132: 619-633.

68 Templeton, A. R.; Sing, C. F. 1993 A cladistic analysis of phenotypic associations with haplotypes inferred from restriction endonuclease mapping: IV. Nested analyses with cladogram uncertainty and recombination. Genetics 134: 659- 669.

Templeton, A. R. 1998. Nested clade analyses of phylogeographic data: Testing hypotheses about gene flow and population history. Molecular Ecology, 7: 381-397.

Templeton, A. R., 2004. Statistical phylogeography: methods of evaluating and minimizing inference errors. Mol. Ecol. 13: 789-809.

Templeton, A. R. 2005. Bioinformatics and Molecular Evolution. Disponível em: http://darwin.uvigo.es, Acessado em: 20 jan. 2008.

Thoisy, B.; Hrbek, T.; Farias, I. P.; Vasconcelos, W. R.; Lavergne, A. 2006. Genetic structure, population dynamics, and conservation of Black caiman (Melanosuchus niger). Biological Conservation, 133: 474-482.

Thompson, J. D.; Higgins, D. G.; Gibson, T. J. 1994. Clustal W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Research, 22: 4673-4680.

Vasconcelos, W. R.; Hrbek, T.; Da Silveira, R.; Thoisy, B.; Marioni, B.; Farias, I. P. 2006. Population genetic analysis of Caiman crocodilus (Linnaeus, 1758) from South America. Genetics and Molecular Biology, 29: 220–230.

Vences, M.; Sonnenberg, R.; Kosuch, J.; Veith, M. 2001. Reconciling fossils and molecules: Cenozoic divergence of cichlid fishes and the biogeography of Madagascar. Journal Biogeography, 28: 1091-1099.

Webb, P. W. 1984. Body form, locomotion and foraging in aquatic vertebrates. American Zoologist, 24: 107-120.

Wilkinson, L. 1990. SYSTAT inc., Evanston Illinois. 677pp.

Willis, S. C.; Nunes, M. S.; Montaña, C. G.; Farias, I. P.; Lovejoy, N. R. 2007. Systematics, biogeography, and evolution of the Neotropical peacock basses Cichla (Perciformes: Cichlidae). Molecular Phylogenetics and Evolution, 44: 291–307.

Wright, S. 1951. The genetical structure of populations. Annals of Eugenics, 15: 323-354.

Xia, X. 2000. Data analysis in molecular biology and evolution. Kluwer Academic publishers, Boston. 276p.

Yamamoto, M. E.; Chellappa, S.; Cacho, M. S. R. F.; Huntingford, F. A. 1999. Mate guarding in an Amazonian cichlid, Pterophyllum scalare. Journal of Fish Biology, 55: 888-891.

Zardoya, R.; Vollmer, D. M.; Craddoc, C.; Streelman, J. T.; Karl, S. A.; Meyer, A. 1996. Evolutionary conservation of microsatetillite flanking regions an their use in resolving the phylogeny of cichlid fishes (Pisces: Perciformes). Proccedings of Royal Society Lond B, 263: 1589 - 1598.

Zelditch, M. L.; Swiderski, D. L.; Sheets, H. D.; Fink, W. L. 2004. Geometric morphometrics for biologists. Part II: Analysis shape variables, Livro. Elsevier Academy Press, 153-290.

70 Zhang, D. X.; Hewitt, G. M. 1996. Nuclear integrations: challenges for mitochondrial DNA markers. Trends in Ecology and Evolution, 11: 247–251.

ANEXOS

ANEXO I DISTÂNCIA GEOGRÁFICA ENTRE LOCALIDADE

Indica-se, neste anexo, a distâncias (em Km) entre as localidades amostradas, de acordo com o curso do rio, por meio do programa GoogleEarth™. Localidades 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1. Campina **** 2. Catalão 622 **** 3. Purus 244 377 **** 4. Novo Airão 742 200 497 **** 5. Amanã 112 734 689 854 **** 6. Janauacá 557 64 347 185 692 **** 7. Santa Isabel 1.357 741 1.111 621 1.467 797 **** 8. Boa Vista 1.382 759 1.134 639 1.490 820 30 **** 9. Mamirauá 39 660 622 781 96 630 1.394 1.417 **** 10. Santarém 1.342 743 1.097 863 1.454 784 1.479 1.503 1.381 **** 11. Careiro do Castanho 675 114 430 249 787 75 864 888 713 786 **** 12. Iranduba 573 61 326 181 669 36 797 818 610 781 111 **** 13. Barcelos 1.060 438 811 318 1.167 521 303 321 1.094 1.181 567 494 **** 14. Careiro da Várzea 628 38 384 157 740 71 773 797 667 716 121 68 476 ****

72 ANEXO II

Indica-se, neste anexo, as distribuição haplotípica do agrupamento Ptero 2 e 3 no network do NCA (Nested Clade Analysis) (Figuras 8 e 9) .

Network : Ptero 2 Novo Santa Boa Campina Catalão Purus Airão Amanã Janauacá Isabel Vista Mamirauá Santarém Careiro do Castanho Iranduba Barcelos Haplótipos N° 1 1 2 5 3 1 4 1 5 2 6 4 7 3 8 1 9 5 10 1 TOTAL 0 0 0 0 0 0 14 10 0 0 0 0 0

73 Network : Ptero 3

Santa Careiro do Campina Catalão Purus Novo Airão Amanã Janauacá Isabel Boa Vista Mamirauá Santarém Castanho Iranduba Barcelos Haplótipos N° 1 3 2 1 3 1 4 1 5 1 6 2 7 1 8 1 1 9 1 10 1 11 1 12 1 4 13 1 14 1 15 3 1 16 1 17 1 18 1 19 2 20 1 21 1 22 1 23 2 24 1 2 25 1 26 4 27 2 28 2 4 1 1 14 28 10 4 29 1

74 Continuação Santa Careiro do Campina Catalão Purus Novo Airão Amanã Janauacá Isabel Boa Vista Mamirauá Santarém Castanho Iranduba Barcelos Haplótipo N° 30 3 1 31 1 32 1 33 1 34 1 35 1 36 1 37 1 38 2 39 4 1 1 2 2 40 1 1 41 2 42 1 43 4 44 4 45 1 46 1 47 2 48 2 49 1 50 1 51 1 52 1 1 1 53 1 54 1 55 1 56 4 1 57 1 58 1 59 1 60 6

75 Continuação Novo Santa Boa Careiro do Campina Catalão Purus Airão Amanã Janauacá Isabel Vista Mamirauá Santarém Castanho Iranduba Barcelos Haplótipo N° 61 1 62 1 63 1 64 1 65 1 66 1 67 1 68 1 69 1 70 1 71 3 1 2 72 1 73 2 74 1 75 1 76 1 77 12 3 78 1 79 1 TOTAL 2 25 22 4 8 18 13 3 30 42 19 12 17

76 ANEXO III ALINHAMENTO GERAL

Indica-se, neste anexo, o alinhamento geral do gene (citocromo b) de 244 indivíduos estudados, mostrando as regiões de sítios variáveis, a cada 84 bases de intervalo.

1Campina CCC CTC CTA AAA ATC GCA AAT GAC GCA CTA ATT GAT CTC CCC GCA CCA TCC AAT ATT TCT GCC TGA TGA AAC TTT GGC TCC CTA [84] 2Campina ...... [84] 3Catalão ...... [84] 4Catalão ...... [84] 5Catalão ...... [84] 6Catalão ...... [84] 7Catalão ...... [84] 8Catalão ...... [84] 9Purus ...... C ...... [84] 11Purus ...... C ...... [84] 12Purus ...... [84] 14Careiro ...... G ..C ...... T ...... C ...... T.. [84] 16Careiro ...... G ..C ...... T ... ..C ...... C ...... T.. [84] 17Careiro ...... G ..C ...... T ... ..C ...... C ...... T.. [84] 18Careiro ...... G ..C ...... T ... ..C ...... C ...... T.. [84] 19Careiro ...... G ..C ...... T ...... C ...... T.. [84] 20NovoAirão ...... C ...... [84] 21NovoAirão ...... C ...... [84] 22NovoAirão ...... C ...... [84] 23NovoAirão ...... C ...... [84] 24Amanã ...... [84] 25Amanã ...... [84] 26Amanã ...... [84] 27Amanã ...... [84] 33Mamirauá ...... [84] 34Mamirauá ...... [84] 35Mamirauá ...... [84] 39Janauacá ...... [84] 42Janauacá ...... G [84] 44Janauacá ...... G [84] 45Janauacá ...... G [84] 47Janauacá ...... [84] 48Janauacá ...... G [84] 49Janauacá ...... [84] 50Janauacá ...... [84] 51Janauacá ...... [84] 52Janauacá ...... [84] 53Janauacá ...... [84]

77 54Janauacá ...... G [84] 56Janauacá ...... G [84] 58Janauacá ...... [84] 59Janauacá ...... G [84] 60Janauacá ...... A ...... G [84] 61Janauacá ...... [84] 62Janauacá ...... G [84] 63Purus ...... [84] 66Purus ...... [84] 67Purus ...... [84] 68Purus ...... [84] 69Purus ...... [84] 71Purus ...... [84] 73Purus ...... [84] 75Purus ...... [84] 77Purus ...... [84] 79Purus ...... [84] 80Purus ...... [84] 81Purus ...... [84] 82Purus ...... [84] 83Purus ...... C ...... [84] 84Purus ...... C ...... [84] 86Purus ...... [84] 87Purus ...... [84] 88Purus ...... C ...... [84] 89Purus ...... [84] 92StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 93StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 95StaIsa ...... C ...... [84] 96StaIsa ...... C ...... [84] 98StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 99StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 100StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 103StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 104StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 105StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 106StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 108StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 109StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 111StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 112StaIsa ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 113StaIsa ...... C ...... [84] 114StaIsa ...... C ...... [84] 115StaIsa ...... C ...... [84] 117BoaVista ...... C ...... [84] 118BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 119BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 120BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84]

78 121BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 122BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 123BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 124BoaVista ...... C ...... [84] 126BoaVista ...... C ...... [84] 127BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 128BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 129BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 130BoaVista ...... C ...... C ...... C ...... T.. [84] 132StaIsa ...... C ...... [84] 133StaIsa ...... C ...... [84] 134StaIsa ...... C ...... [84] 135StaIsa ...... C ...... [84] 136StaIsa ...... C ...... [84] 137StaIsa ...... C ...... [84] 138StaIsa ...... C ...... [84] 139StaIsa ...... C ...... [84] 140StaIsa ...... C ...... [84] 141Catalão ...... [84] 142Catalão ...... [84] 144Catalão ...... [84] 145Catalão ...... [84] 146Catalão ...... G [84] 147Catalão ...... [84] 148Catalão ...... [84] 149Catalão ...... [84] 150Catalão ...... C ...... [84] 151Catalão ...... [84] 152Catalão ...... [84] 153Catalão ...... C ...... [84] 154Catalão ...... [84] 155Catalão ...... [84] 156Catalão ...... [84] 157Catalão ...... [84] 160Catalão ...... [84] 161Catalão ...... [84] 162Catalão ...... C ...... [84] 163Amanã ...... G ...... [84] 166Amanã ...... G ...... [84] 167Amanã ...... G ...... [84] 173Amanã ...... G ...... [84] 174Mamirauá ...... [84] 175Mamirauá ...... [84] 176Mamirauá ...... [84] 177Mamirauá ...... [84] 178Mamirauá ...... [84] 179Mamirauá ...... [84] 180Mamirauá ...... [84]

79 181Mamirauá ...... [84] 182Mamirauá ...... [84] 183Mamirauá ...... [84] 184Mamirauá ...... [84] 185Mamirauá ...... [84] 187Mamirauá ...... [84] 188Mamirauá ...... [84] 189Mamirauá ...... [84] 190Mamirauá ...... [84] 191Mamirauá ...... [84] 192Mamirauá ...... [84] 193Mamirauá ...... [84] 194Mamirauá ...... [84] 197Mamirauá ...... [84] 198Mamirauá ...... [84] 200Mamirauá ...... [84] 205Mamirauá ...... [84] 206Mamirauá ...... [84] 207Mamirauá ...... [84] 208Mamirauá ...... [84] 214Santarém ...... [84] 215Santarém ...... [84] 216Santarém ...... [84] 217Santarém ...... [84] 218Santarém ...... [84] 219Santarém ...... [84] 221Santarém ...... [84] 222Santarém ...... [84] 224Santarém ...... [84] 225Santarém ...... [84] 228Santarém ...... [84] 229Santarém ...... [84] 230Santarém ...... [84] 232Santarém ...... [84] 233Santarém ...... [84] 235Santarém ...... [84] 237Santarém ...... [84] 238Santarém ...... [84] 239Santarém ...... [84] 240Santarém ...... [84] 241Santarém ...... [84] 242Santarém ...... [84] 243Santarém ...... [84] 244Santarém ...... [84] 245Santarém ...... [84] 246Santarém ...... [84] 247Santarém ...... [84] 248Santarém ...... [84]

80 249Santarém ...... [84] 250Santarém ...... [84] 251Santarém ...... [84] 252Santarém ...... [84] 253Santarém ...... [84] 254Santarém ...... [84] 255Santarém ...... [84] 256Santarém ...... C ...... [84] 257Santarém ...... [84] 259Santarém ...... [84] 260Santarém ...... [84] 261Santarém ...... [84] 262Santarém ...... [84] 263Santarém ...... [84] 266CCast ...... [84] 267CCast ...... [84] 268CCast ...... [84] 270CCast ...... [84] 272CCast ...... [84] 273CCast ...... [84] 274CCast ...... [84] 275CCast ...... [84] 276CCast ...... [84] 277CCast ...... [84] 278CCast ...... G ...... [84] 279CCast ...... [84] 280CCast ...... G [84] 281CCast ...... [84] 282CCast ...... [84] 283CCast ...... G [84] 284CCast ...... [84] 285CCast ...... [84] 286CCast ...... G [84] 292Iranduba ...... C ...... C ...... C ...... [84] 293Iranduba ...... C ...... C ...... C ...... [84] 294Iranduba ...... [84] 295Iranduba ...... [84] 297Iranduba ...... C ...... C ...... C ...... [84] 298Iranduba ...... [84] 299Iranduba ...... [84] 300Iranduba ...... [84] 302Iranduba ...... [84] 303Iranduba ...... C ...... C ...... [84] 304Iranduba ...... [84] 305Iranduba ...... C ...... C ...... C ...... [84] 307Barcelos ...... [84] 308Barcelos ...... C ...... A ...... [84] 309Barcelos ...... C ...... [84]

81 310Barcelos ...... C ...... [84] 311Barcelos ...... C ...... [84] 312Barcelos ...... [84] 313Barcelos ...... C ...... [84] 314Barcelos ...... C ...... [84] 315Barcelos ...... C ...... [84] 316Barcelos ...... C ...... [84] 317Barcelos ...... C ...... [84] 318Barcelos ...... [84] 320Barcelos ...... [84] 322Barcelos ...... C ...... [84] 323Barcelos ...... C ...... [84] 324Barcelos ...... C ...... [84] 325Barcelos ...... C ...... [84]

1Campina TTA GGC CTT TGC CTT GCT GCC CAA ATT CTA ACG GGC CTC TTC CTT GCA ATA CAT TAC ACC TCA GAT ATC GCA ACA GCC TTT TCA [168] 2Campina ...... [168] 3Catalão ...... [168] 4Catalão ...... [168] 5Catalão ...... [168] 6Catalão ...... [168] 7Catalão ...... [168] 8Catalão ...... [168] 9Purus ...... [168] 11Purus ...... [168] 12Purus ...... [168] 14Careiro C...... T ..C ...... G ..A ...... C ...... G ...... C ... [168] 16Careiro C...... T ..C ...... G ..A ...... C ...... G ...... C ... [168] 17Careiro C...... T ..C ...... G ..A ...... C ...... G ...... C ... [168] 18Careiro C...... T ..C ...... G ..A ...... C ...... G ...... C ... [168] 19Careiro C...... T ..C ...... G ..A ...... C ...... G ...... C ... [168] 20NovoAirão ...... [168] 21NovoAirão ...... [168] 22NovoAirão ...... [168] 23NovoAirão ...... [168] 24Amanã ...... [168] 25Amanã ...... [168] 26Amanã ...... [168] 27Amanã ...... [168] 33Mamirauá ...... [168] 34Mamirauá ...... [168] 35Mamirauá ...... [168] 39Janauacá ...... [168] 42Janauacá ...... [168] 44Janauacá ...... [168] 45Janauacá ...... [168] 47Janauacá ...... [168] 48Janauacá ...... [168]

82 49Janauacá ...... [168] 50Janauacá ...... [168] 51Janauacá ...... [168] 52Janauacá ...... [168] 53Janauacá ...... [168] 54Janauacá ...... [168] 56Janauacá ...... [168] 58Janauacá ...... [168] 59Janauacá ...... [168] 60Janauacá ...... [168] 61Janauacá ...... [168] 62Janauacá ...... [168] 63Purus ...... [168] 66Purus ...... [168] 67Purus ...... [168] 68Purus ...... [168] 69Purus ...... [168] 71Purus ...... [168] 73Purus ...... [168] 75Purus ...... [168] 77Purus ...... [168] 79Purus ...... [168] 80Purus ...... [168] 81Purus ...... [168] 82Purus ...... [168] 83Purus ...... [168] 84Purus ...... [168] 86Purus ...... [168] 87Purus ...... [168] 88Purus ...... [168] 89Purus ...... [168] 92StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 93StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 95StaIsa ...... [168] 96StaIsa ...... C ...... G ..A ...... C ..T ...... [168] 98StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 99StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 100StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 103StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 104StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 105StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 106StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 108StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 109StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 111StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 112StaIsa C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 113StaIsa ...... [168] 114StaIsa ...... [168]

83 115StaIsa ...... [168] 117BoaVista ...... [168] 118BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 119BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 120BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 121BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 122BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 123BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 124BoaVista ...... [168] 126BoaVista ...... [168] 127BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 128BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 129BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 130BoaVista C...... T ..C ...... G ..A ...... C ..T ... ..G ...... C ... [168] 132StaIsa ...... [168] 133StaIsa ...... [168] 134StaIsa ...... [168] 135StaIsa ...... [168] 136StaIsa ...... [168] 137StaIsa ...... [168] 138StaIsa ...... [168] 139StaIsa ...... [168] 140StaIsa ...... [168] 141Catalão ...... [168] 142Catalão ...... [168] 144Catalão ...... [168] 145Catalão ...... [168] 146Catalão ...... [168] 147Catalão ...... [168] 148Catalão ...... [168] 149Catalão ...... [168] 150Catalão ...... [168] 151Catalão ...... [168] 152Catalão ...... [168] 153Catalão ...... [168] 154Catalão ...... [168] 155Catalão ...... [168] 156Catalão ...... [168] 157Catalão ...... [168] 160Catalão ...... [168] 161Catalão ...... [168] 162Catalão ...... [168] 163Amanã ...... [168] 166Amanã ...... [168] 167Amanã ...... [168] 173Amanã ...... [168] 174Mamirauá ...... [168] 175Mamirauá ...... [168]

84 176Mamirauá ...... [168] 177Mamirauá ...... [168] 178Mamirauá ...... [168] 179Mamirauá ...... [168] 180Mamirauá ...... [168] 181Mamirauá ...... [168] 182Mamirauá ...... [168] 183Mamirauá ...... [168] 184Mamirauá ...... [168] 185Mamirauá ...... [168] 187Mamirauá ...... [168] 188Mamirauá ...... [168] 189Mamirauá ...... [168] 190Mamirauá ...... [168] 191Mamirauá ...... [168] 192Mamirauá ...... [168] 193Mamirauá ...... [168] 194Mamirauá ...... [168] 197Mamirauá ...... [168] 198Mamirauá ...... [168] 200Mamirauá ...... [168] 205Mamirauá ...... [168] 206Mamirauá ...... [168] 207Mamirauá ...... [168] 208Mamirauá ...... [168] 214Santarém ...... [168] 215Santarém ...... [168] 216Santarém ...... [168] 217Santarém ...... [168] 218Santarém ...... [168] 219Santarém ...... [168] 221Santarém ...... [168] 222Santarém ...... [168] 224Santarém ...... [168] 225Santarém ...... [168] 228Santarém ...... [168] 229Santarém ...... [168] 230Santarém ...... [168] 232Santarém ...... [168] 233Santarém ...... [168] 235Santarém ...... [168] 237Santarém ...... [168] 238Santarém ...... [168] 239Santarém ...... [168] 240Santarém ...... [168] 241Santarém ...... [168] 242Santarém ...... [168] 243Santarém ...... [168]

85 244Santarém ...... [168] 245Santarém ...... [168] 246Santarém ...... [168] 247Santarém ...... [168] 248Santarém ...... [168] 249Santarém ...... [168] 250Santarém ...... [168] 251Santarém ...... [168] 252Santarém ...... [168] 253Santarém ...... [168] 254Santarém ...... [168] 255Santarém ...... [168] 256Santarém ...... [168] 257Santarém ...... [168] 259Santarém ...... [168] 260Santarém ...... [168] 261Santarém ...... [168] 262Santarém ...... [168] 263Santarém ...... [168] 266CCast ...... [168] 267CCast ...... [168] 268CCast ...... [168] 270CCast ...... [168] 272CCast ...... [168] 273CCast ...... [168] 274CCast ...... [168] 275CCast ...... [168] 276CCast ...... [168] 277CCast ...... [168] 278CCast ...... [168] 279CCast ...... [168] 280CCast ...... [168] 281CCast ...... [168] 282CCast ...... [168] 283CCast ...... [168] 284CCast ...... [168] 285CCast ...... [168] 286CCast ...... [168] 292Iranduba ...... T ...... [168] 293Iranduba ...... T ...... [168] 294Iranduba ...... [168] 295Iranduba ...... [168] 297Iranduba ...... T ...... [168] 298Iranduba ...... [168] 299Iranduba ...... [168] 300Iranduba ...... [168] 302Iranduba ...... [168] 303Iranduba ...... T ...... [168]

86 304Iranduba ...... [168] 305Iranduba ...... T ...... [168] 307Barcelos ...... [168] 308Barcelos ...... [168] 309Barcelos ...... [168] 310Barcelos ...... [168] 311Barcelos ...... [168] 312Barcelos ...... [168] 313Barcelos ...... [168] 314Barcelos ...... [168] 315Barcelos ...... [168] 316Barcelos ...... [168] 317Barcelos ...... [168] 318Barcelos ...... [168] 320Barcelos ...... [168] 322Barcelos ...... [168] 323Barcelos ...... [168] 324Barcelos ...... [168] 325Barcelos ...... [168]

1Campina TCC GTC GCC CAC ATT TGT CGA GAC GTA AAC TAC GGT TGA CTA ATT CGG AGC ATG CAT GCT AAC GGT GCT TCC TTT TTC TTC ATC [252] 2Campina ...... [252] 3Catalão ...... [252] 4Catalão ...... [252] 5Catalão ...... [252] 6Catalão ...... [252] 7Catalão ...... [252] 8Catalão ...... [252] 9Purus ...... A ...... C ...... [252] 11Purus ...... A ...... C ...... [252] 12Purus ...... [252] 14Careiro ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 16Careiro ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 17Careiro ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 18Careiro ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 19Careiro ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 20NovoAirão ...... A ...... C ...... [252] 21NovoAirão ...... A ...... C ...... [252] 22NovoAirão ...... A ...... C ...... [252] 23NovoAirão ...... A ...... C ...... [252] 24Amanã ...... [252] 25Amanã ...... [252] 26Amanã ...... [252] 27Amanã ...... [252] 33Mamirauá ...... C ...... [252] 34Mamirauá ...... [252] 35Mamirauá ...... [252] 39Janauacá ...... [252]

87 42Janauacá ...... [252] 44Janauacá ...... [252] 45Janauacá ...... [252] 47Janauacá ...... [252] 48Janauacá ...... A ...... [252] 49Janauacá ...... [252] 50Janauacá ...... [252] 51Janauacá ...... [252] 52Janauacá ...... [252] 53Janauacá ...... [252] 54Janauacá ...... A ...... [252] 56Janauacá ...... [252] 58Janauacá ...... [252] 59Janauacá ...... A ...... [252] 60Janauacá ...... A ...... [252] 61Janauacá ...... A ...... [252] 62Janauacá ...... A ...... [252] 63Purus ...... [252] 66Purus ...... A ...... C ...... [252] 67Purus ...... A ...... C ...... [252] 68Purus ...... [252] 69Purus ...... [252] 71Purus ...... [252] 73Purus ...... [252] 75Purus ...... [252] 77Purus ...... [252] 79Purus ...... A ...... C ...... [252] 80Purus ...... [252] 81Purus ...... [252] 82Purus ...... [252] 83Purus ...... A. ..A ...... C ...... [252] 84Purus ...... A. ..A ...... C ...... [252] 86Purus ...... [252] 87Purus ...... [252] 88Purus ...... A ...... T ... ..C ...... [252] 89Purus ...... [252] 92StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 93StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 95StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 96StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 98StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 99StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 100StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 103StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 104StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 105StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 106StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 108StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252]

88 109StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 111StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 112StaIsa ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 113StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 114StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 115StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 117BoaVista ...... C ...... C ...... [252] 118BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 119BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 120BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 121BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 122BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 123BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 124BoaVista ...... C ...... C ...... [252] 126BoaVista ...... C ...... C ...... [252] 127BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 128BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 129BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 130BoaVista ...... C ...... A .AT ..A ..C ...... C ...... [252] 132StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 133StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 134StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 135StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 136StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 137StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 138StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 139StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 140StaIsa ...... C ...... C ...... [252] 141Catalão ...... [252] 142Catalão ...... [252] 144Catalão ...... [252] 145Catalão ...... [252] 146Catalão ...... A ...... [252] 147Catalão ...... [252] 148Catalão ...... [252] 149Catalão ...... [252] 150Catalão ...... [252] 151Catalão ...... [252] 152Catalão ...... [252] 153Catalão ...... A. ..A ...... C ...... [252] 154Catalão ...... [252] 155Catalão ...... [252] 156Catalão ...... [252] 157Catalão ...... [252] 160Catalão ...... [252] 161Catalão ...... [252] 162Catalão ...... A. ..A ...... C ...... [252] 163Amanã ...... [252]

89 166Amanã ...... [252] 167Amanã ...... [252] 173Amanã ...... [252] 174Mamirauá ...... [252] 175Mamirauá ...... [252] 176Mamirauá ...... [252] 177Mamirauá ...... [252] 178Mamirauá ...... [252] 179Mamirauá ...... [252] 180Mamirauá ...... [252] 181Mamirauá ...... [252] 182Mamirauá ...... C ...... [252] 183Mamirauá ...... [252] 184Mamirauá ...... [252] 185Mamirauá ...... [252] 187Mamirauá ...... [252] 188Mamirauá ...... [252] 189Mamirauá ...... C ...... [252] 190Mamirauá ...... [252] 191Mamirauá ...... [252] 192Mamirauá ...... [252] 193Mamirauá ...... C ...... [252] 194Mamirauá ...... [252] 197Mamirauá ...... [252] 198Mamirauá ...... [252] 200Mamirauá ...... [252] 205Mamirauá ...... [252] 206Mamirauá ...... [252] 207Mamirauá ...... [252] 208Mamirauá ...... [252] 214Santarém ...... [252] 215Santarém ...... [252] 216Santarém ...... [252] 217Santarém ...... [252] 218Santarém ...... [252] 219Santarém ...... [252] 221Santarém ...... [252] 222Santarém ...... [252] 224Santarém ...... [252] 225Santarém ...... [252] 228Santarém ...... [252] 229Santarém ...... [252] 230Santarém ...... [252] 232Santarém ...... [252] 233Santarém ...... [252] 235Santarém ...... [252] 237Santarém ...... [252] 238Santarém ...... [252]

90 239Santarém ...... [252] 240Santarém ...... [252] 241Santarém ...... [252] 242Santarém ...... [252] 243Santarém ...... [252] 244Santarém ...... [252] 245Santarém ...... [252] 246Santarém ...... [252] 247Santarém ...... [252] 248Santarém ...... [252] 249Santarém ...... [252] 250Santarém ...... [252] 251Santarém ...... [252] 252Santarém ...... [252] 253Santarém ...... [252] 254Santarém ...... [252] 255Santarém ...... [252] 256Santarém ...... [252] 257Santarém ...... [252] 259Santarém ...... [252] 260Santarém ...... [252] 261Santarém ...... [252] 262Santarém ...... [252] 263Santarém ...... [252] 266CCast ...... [252] 267CCast ...... [252] 268CCast ...... [252] 270CCast ...... [252] 272CCast ...... [252] 273CCast ...... [252] 274CCast ...... [252] 275CCast ...... [252] 276CCast ...... [252] 277CCast ...... [252] 278CCast ...... [252] 279CCast ...... [252] 280CCast ...... A ...... [252] 281CCast ...... A...... [252] 282CCast ...... [252] 283CCast ...... A ...... [252] 284CCast ...... [252] 285CCast ...... [252] 286CCast ...... A ...... [252] 292Iranduba ...... C ...... [252] 293Iranduba ...... C ...... [252] 294Iranduba ...... [252] 295Iranduba ...... [252] 297Iranduba ...... C ...... [252]

91 298Iranduba ...... [252] 299Iranduba ...... [252] 300Iranduba ...... [252] 302Iranduba ...... [252] 303Iranduba ...... C ...... [252] 304Iranduba ...... [252] 305Iranduba ...... C ...... [252] 307Barcelos ...... [252] 308Barcelos ...... [252] 309Barcelos ...... [252] 310Barcelos ...... [252] 311Barcelos ...... [252] 312Barcelos ...... [252] 313Barcelos ...... [252] 314Barcelos ...... [252] 315Barcelos ...... [252] 316Barcelos ...... [252] 317Barcelos ...... [252] 318Barcelos ...... [252] 320Barcelos ...... [252] 322Barcelos ... A...... [252] 323Barcelos ...... [252] 324Barcelos ...... A...... [252] 325Barcelos ...... [252]

1Campina TGC ATC TAC CTT CAC ATC GGA CGA GGA CTT TAC TAC GGT TCA TAC CTC TAT AAA GAA ACA TGA AAT GTT GGC GTT ATC CTC CTC [336] 2Campina ...... [336] 3Catalão ...... [336] 4Catalão ...... [336] 5Catalão ...... [336] 6Catalão ...... [336] 7Catalão ...... [336] 8Catalão ...... [336] 9Purus ... ..T ...... G ...... C ...... [336] 11Purus ... ..T ...... G ...... C ...... [336] 12Purus ...... [336] 14Careiro ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C A.. ..T ...... T ... [336] 16Careiro ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C A.. ..T ...... T ... [336] 17Careiro ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C A.. ..T ...... T ... [336] 18Careiro ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C A.. ..T ...... T ... [336] 19Careiro ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C A.. ..T ...... T ... [336] 20NovoAirão ...... G ...... C ...... [336] 21NovoAirão ...... G ...... C ...... [336] 22NovoAirão ...... G ...... C ...... [336] 23NovoAirão ...... G ...... C ...... [336] 24Amanã ...... [336] 25Amanã ...... [336] 26Amanã ...... [336]

92 27Amanã ...... [336] 33Mamirauá ...... [336] 34Mamirauá ...... [336] 35Mamirauá ...... [336] 39Janauacá ...... [336] 42Janauacá ...... [336] 44Janauacá ...... [336] 45Janauacá ...... [336] 47Janauacá ...... [336] 48Janauacá ...... C ...... [336] 49Janauacá ...... [336] 50Janauacá ...... [336] 51Janauacá ...... [336] 52Janauacá ...... [336] 53Janauacá ...... [336] 54Janauacá ...... C ...... [336] 56Janauacá ...... [336] 58Janauacá ...... [336] 59Janauacá ...... C ...... [336] 60Janauacá ...... C ...... [336] 61Janauacá ...... C ...... [336] 62Janauacá ...... C ...... [336] 63Purus ...... [336] 66Purus ... ..T ...... G ...... C ...... [336] 67Purus ... ..T ...... G ...... C ...... [336] 68Purus ...... [336] 69Purus ...... [336] 71Purus ...... [336] 73Purus ...... [336] 75Purus ...... [336] 77Purus ...... [336] 79Purus ...... G ...... C ...... [336] 80Purus ...... [336] 81Purus ...... [336] 82Purus ...... [336] 83Purus ...... G ...... C ...... [336] 84Purus ...... G ...... C ...... [336] 86Purus ...... [336] 87Purus ...... [336] 88Purus ... ..T ...... G ...... C ...... [336] 89Purus ...... [336] 92StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 93StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 95StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 96StaIsa ..T ..T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 98StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 99StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 100StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336]

93 103StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 104StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 105StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 106StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 108StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 109StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 111StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 112StaIsa ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 113StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 114StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 115StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 117BoaVista ...... C ... ..C ...... [336] 118BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 119BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 120BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 121BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 122BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 123BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 124BoaVista ...... C ... ..C ...... [336] 126BoaVista ...... C ... ..C ...... [336] 127BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 128BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 129BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 130BoaVista ..T ..T ...... T ...... C ... ..T ... ..C ...... C ... ..C ... ..T ..C ... ..T ... [336] 132StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 133StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 134StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 135StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 136StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 137StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 138StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 139StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 140StaIsa ...... C ... ..C ...... [336] 141Catalão ...... [336] 142Catalão ...... [336] 144Catalão ...... [336] 145Catalão ...... [336] 146Catalão ...... C ...... [336] 147Catalão ...... [336] 148Catalão ...... [336] 149Catalão ...... [336] 150Catalão ...... [336] 151Catalão ...... [336] 152Catalão ...... [336] 153Catalão ...... G ...... C ...... [336] 154Catalão ...... [336] 155Catalão ...... [336] 156Catalão ...... [336]

94 157Catalão ...... [336] 160Catalão ...... [336] 161Catalão ...... [336] 162Catalão ...... G ...... C ...... [336] 163Amanã ...... [336] 166Amanã ...... [336] 167Amanã ...... [336] 173Amanã ...... [336] 174Mamirauá ...... [336] 175Mamirauá ...... [336] 176Mamirauá ...... [336] 177Mamirauá ...... [336] 178Mamirauá ...... [336] 179Mamirauá ...... [336] 180Mamirauá ...... [336] 181Mamirauá ... ..T ...... [336] 182Mamirauá ...... [336] 183Mamirauá ...... [336] 184Mamirauá ...... [336] 185Mamirauá ...... [336] 187Mamirauá ...... [336] 188Mamirauá ...... [336] 189Mamirauá ...... [336] 190Mamirauá ...... [336] 191Mamirauá ...... [336] 192Mamirauá ...... [336] 193Mamirauá ...... [336] 194Mamirauá ...... [336] 197Mamirauá ...... [336] 198Mamirauá ...... [336] 200Mamirauá ...... [336] 205Mamirauá ...... [336] 206Mamirauá ...... [336] 207Mamirauá ...... [336] 208Mamirauá ...... [336] 214Santarém ...... [336] 215Santarém ...... [336] 216Santarém ...... [336] 217Santarém ...... [336] 218Santarém ...... [336] 219Santarém ...... [336] 221Santarém ...... [336] 222Santarém ...... [336] 224Santarém ...... [336] 225Santarém ...... [336] 228Santarém ...... [336] 229Santarém ...... [336] 230Santarém ...... [336]

95 232Santarém ...... [336] 233Santarém ...... [336] 235Santarém ...... [336] 237Santarém ...... [336] 238Santarém ...... [336] 239Santarém ...... [336] 240Santarém ...... [336] 241Santarém ...... [336] 242Santarém ...... [336] 243Santarém ...... [336] 244Santarém ...... [336] 245Santarém ...... [336] 246Santarém ...... [336] 247Santarém ...... [336] 248Santarém ...... [336] 249Santarém ...... [336] 250Santarém ...... [336] 251Santarém ...... [336] 252Santarém ...... [336] 253Santarém ...... [336] 254Santarém ...... [336] 255Santarém ...... [336] 256Santarém ...... [336] 257Santarém ...... [336] 259Santarém ...... [336] 260Santarém ...... [336] 261Santarém ...... [336] 262Santarém ...... [336] 263Santarém ...... [336] 266CCast ...... [336] 267CCast ...... [336] 268CCast ...... [336] 270CCast ...... [336] 272CCast ...... [336] 273CCast ...... [336] 274CCast ...... [336] 275CCast ...... [336] 276CCast ...... [336] 277CCast ...... [336] 278CCast ...... [336] 279CCast ...... [336] 280CCast ...... C ...... [336] 281CCast ...... [336] 282CCast ...... [336] 283CCast ...... C ...... [336] 284CCast ...... [336] 285CCast ...... [336] 286CCast ...... C ...... [336]

96 292Iranduba ...... C ...... [336] 293Iranduba ...... C ...... [336] 294Iranduba ...... [336] 295Iranduba ...... [336] 297Iranduba ...... C ...... [336] 298Iranduba ...... [336] 299Iranduba ...... [336] 300Iranduba ...... [336] 302Iranduba ...... [336] 303Iranduba ...... C ...... [336] 304Iranduba ...... [336] 305Iranduba ...... C ...... [336] 307Barcelos ...... [336] 308Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 309Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 310Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 311Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 312Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 313Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 314Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 315Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 316Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 317Barcelos ...... T ...... C ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 318Barcelos ...... C ... ..C ...... [336] 320Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 322Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 323Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 324Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336] 325Barcelos ...... T ...... C ...... C ... ..C ...... [336]

1Campina CTC TTA GTA ATA ATA ACT GCA TTT GTA GGT TAT GTT CTC CCG TGA GGA CAA ATA TCC TTT TGA GGC GCC ACA GTC ATT ACT AAC [420] 2Campina ...... [420] 3Catalão ...... [420] 4Catalão ...... [420] 5Catalão ...... [420] 6Catalão ...... [420] 7Catalão ...... [420] 8Catalão ...... [420] 9Purus ...... A ...... T ...... [420] 11Purus ...... A ...... T ...... [420] 12Purus ...... [420] 14Careiro ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 16Careiro ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 17Careiro ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 18Careiro ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 19Careiro ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 20NovoAirão ...... A ...... T ...... [420] 21NovoAirão ...... A ...... T ...... [420]

97 22NovoAirão ...... A ...... T ...... [420] 23NovoAirão ...... A ...... T ...... [420] 24Amanã ...... [420] 25Amanã ...... [420] 26Amanã ...... [420] 27Amanã ...... [420] 33Mamirauá ...... [420] 34Mamirauá ...... [420] 35Mamirauá ...... [420] 39Janauacá ...... [420] 42Janauacá ...... [420] 44Janauacá ...... [420] 45Janauacá ...... [420] 47Janauacá ...... [420] 48Janauacá ...... [420] 49Janauacá ...... [420] 50Janauacá ...... [420] 51Janauacá ...... [420] 52Janauacá ...... [420] 53Janauacá ...... [420] 54Janauacá ...... [420] 56Janauacá ...... [420] 58Janauacá ...... [420] 59Janauacá ...... [420] 60Janauacá ...... [420] 61Janauacá ...... [420] 62Janauacá ...... [420] 63Purus ...... [420] 66Purus ...... A ...... T ...... [420] 67Purus ...... A ...... T ...... [420] 68Purus ...... [420] 69Purus ...... [420] 71Purus ...... [420] 73Purus ...... [420] 75Purus ...... [420] 77Purus ...... [420] 79Purus ...... A ...... T ...... [420] 80Purus ...... [420] 81Purus ...... [420] 82Purus ...... [420] 83Purus ...... A ...... T ...... [420] 84Purus ...... A ...... T ...... [420] 86Purus ...... [420] 87Purus ...... [420] 88Purus ...... A ...... T ...... [420] 89Purus ...... [420] 92StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 93StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420]

98 95StaIsa ...... [420] 96StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 98StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 99StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 100StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 103StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 104StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 105StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 106StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 108StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 109StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 111StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 112StaIsa ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 113StaIsa ...... [420] 114StaIsa ...... [420] 115StaIsa ...... [420] 117BoaVista ...... [420] 118BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 119BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 120BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 121BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 122BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 123BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 124BoaVista ...... [420] 126BoaVista ...... [420] 127BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 128BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 129BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 130BoaVista ..T C...... G ...... C ... ..G ... ..C ..T ..A ...... T ...... T ..T ...... [420] 132StaIsa ...... [420] 133StaIsa ...... [420] 134StaIsa ...... [420] 135StaIsa ...... [420] 136StaIsa ...... [420] 137StaIsa ...... [420] 138StaIsa ...... [420] 139StaIsa ...... [420] 140StaIsa ...... [420] 141Catalão ...... [420] 142Catalão ...... [420] 144Catalão ...... [420] 145Catalão ...... [420] 146Catalão ...... [420] 147Catalão ...... [420] 148Catalão ...... [420] 149Catalão ...... [420] 150Catalão ...... [420] 151Catalão ...... [420]

99 152Catalão ...... [420] 153Catalão ...... A ...... T ...... [420] 154Catalão ...... [420] 155Catalão ...... [420] 156Catalão ...... [420] 157Catalão ...... [420] 160Catalão ...... [420] 161Catalão ...... [420] 162Catalão ...... A ...... T ...... [420] 163Amanã ...... [420] 166Amanã ...... [420] 167Amanã ...... [420] 173Amanã ...... [420] 174Mamirauá ...... [420] 175Mamirauá ...... [420] 176Mamirauá ...... [420] 177Mamirauá ...... [420] 178Mamirauá ...... [420] 179Mamirauá ...... [420] 180Mamirauá ...... [420] 181Mamirauá ...... [420] 182Mamirauá ...... [420] 183Mamirauá ...... [420] 184Mamirauá ...... [420] 185Mamirauá ...... [420] 187Mamirauá ...... [420] 188Mamirauá ...... [420] 189Mamirauá ...... [420] 190Mamirauá ...... [420] 191Mamirauá ...... [420] 192Mamirauá ...... [420] 193Mamirauá ...... [420] 194Mamirauá ...... [420] 197Mamirauá ...... [420] 198Mamirauá ...... [420] 200Mamirauá ...... [420] 205Mamirauá ...... [420] 206Mamirauá ...... [420] 207Mamirauá ...... [420] 208Mamirauá ...... [420] 214Santarém ...... [420] 215Santarém ...... [420] 216Santarém ...... [420] 217Santarém ...... [420] 218Santarém ...... [420] 219Santarém ...... [420] 221Santarém ...... [420] 222Santarém ...... [420]

100 224Santarém ...... [420] 225Santarém ...... [420] 228Santarém ...... [420] 229Santarém ...... [420] 230Santarém ...... [420] 232Santarém ...... [420] 233Santarém ...... [420] 235Santarém ...... [420] 237Santarém ...... [420] 238Santarém ...... [420] 239Santarém ...... [420] 240Santarém ...... [420] 241Santarém ...... [420] 242Santarém ...... [420] 243Santarém ...... [420] 244Santarém ...... [420] 245Santarém ...... [420] 246Santarém ...... [420] 247Santarém ...... [420] 248Santarém ...... [420] 249Santarém ...... [420] 250Santarém ...... [420] 251Santarém ...... [420] 252Santarém ...... [420] 253Santarém ...... [420] 254Santarém ...... [420] 255Santarém ...... [420] 256Santarém ...... [420] 257Santarém ...... [420] 259Santarém ...... C ...... [420] 260Santarém ...... [420] 261Santarém ...... [420] 262Santarém ...... [420] 263Santarém ...... [420] 266CCast ...... [420] 267CCast ...... [420] 268CCast ...... [420] 270CCast ...... [420] 272CCast ...... [420] 273CCast ...... [420] 274CCast ...... [420] 275CCast ...... [420] 276CCast ...... [420] 277CCast ...... [420] 278CCast ...... [420] 279CCast ...... [420] 280CCast ...... [420] 281CCast ...... [420]

101 282CCast ...... [420] 283CCast ...... [420] 284CCast ...... [420] 285CCast ...... [420] 286CCast ...... [420] 292Iranduba ...... T ...... [420] 293Iranduba ...... T ...... [420] 294Iranduba ...... [420] 295Iranduba ...... [420] 297Iranduba ...... T ...... [420] 298Iranduba ...... [420] 299Iranduba ...... [420] 300Iranduba ...... [420] 302Iranduba ...... [420] 303Iranduba ...... T ...... [420] 304Iranduba ...... [420] 305Iranduba ...... T ...... [420] 307Barcelos ...... [420] 308Barcelos ...... T ...... [420] 309Barcelos ...... T ...... [420] 310Barcelos ...... T ...... [420] 311Barcelos ...... T ...... [420] 312Barcelos ...... T ...... [420] 313Barcelos ...... T ...... [420] 314Barcelos ...... T ...... [420] 315Barcelos ...... T ...... [420] 316Barcelos ...... T ...... [420] 317Barcelos ...... T ...... [420] 318Barcelos ...... T ...... [420] 320Barcelos ...... T ...... [420] 322Barcelos ...... T ...... [420] 323Barcelos ...... T ...... [420] 324Barcelos ...... T ...... [420] 325Barcelos ...... T ...... [420]

1Campina CTC CTC TCC GCA ATC CCT TAT ATC GGT AAC TCC CTT GTT CAA TGA CTT TGA GGG GGC TTT TCA GTA GAC AAT GCA ACC CTA ACC [504] 2Campina ...... [504] 3Catalão ...... [504] 4Catalão ...... [504] 5Catalão ...... [504] 6Catalão ...... [504] 7Catalão ...... [504] 8Catalão ...... [504] 9Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 11Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 12Purus ...... [504] 14Careiro ...... T ...... C ...... G ...... C ...... [504] 16Careiro ...... T ...... C ...... G ...... C ...... [504]

102 17Careiro ...... T ...... C ...... G ...... C ...... [504] 18Careiro ...... T ...... C ...... G ...... C ...... [504] 19Careiro ...... T ...... C ...... G ...... C ...... [504] 20NovoAirão ...... G...... T ...... [504] 21NovoAirão ...... G...... T ...... [504] 22NovoAirão ...... G...... T ...... [504] 23NovoAirão ...... G...... T ...... [504] 24Amanã ...... [504] 25Amanã ...... [504] 26Amanã ...... [504] 27Amanã ...... [504] 33Mamirauá ...... [504] 34Mamirauá ...... [504] 35Mamirauá ...... [504] 39Janauacá ...... [504] 42Janauacá ...... [504] 44Janauacá ...... [504] 45Janauacá ...... [504] 47Janauacá ...... [504] 48Janauacá ...... [504] 49Janauacá ...... [504] 50Janauacá ...... [504] 51Janauacá ...... [504] 52Janauacá ...... [504] 53Janauacá ...... [504] 54Janauacá ...... [504] 56Janauacá ...... [504] 58Janauacá ...... [504] 59Janauacá ...... [504] 60Janauacá ...... [504] 61Janauacá ...... [504] 62Janauacá ...... [504] 63Purus ...... [504] 66Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 67Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 68Purus ...... [504] 69Purus ...... [504] 71Purus ...... [504] 73Purus ...... [504] 75Purus ...... [504] 77Purus ...... [504] 79Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 80Purus ...... [504] 81Purus ...... [504] 82Purus ...... [504] 83Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 84Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 86Purus ...... [504]

103 87Purus ...... [504] 88Purus ...... G...... C ..T ...... [504] 89Purus ...... [504] 92StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 93StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 95StaIsa ...... [504] 96StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 98StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 99StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 100StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 103StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 104StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 105StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 106StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 108StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 109StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 111StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 112StaIsa ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 113StaIsa ...... [504] 114StaIsa ...... [504] 115StaIsa ...... [504] 117BoaVista ...... [504] 118BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 119BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 120BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 121BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 122BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 123BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 124BoaVista ...... [504] 126BoaVista ...... [504] 127BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 128BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 129BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 130BoaVista ...... T ... ..T ... ..C ...... G ...... C ...... [504] 132StaIsa ...... [504] 133StaIsa ...... [504] 134StaIsa ...... [504] 135StaIsa ...... [504] 136StaIsa ...... [504] 137StaIsa ...... [504] 138StaIsa ...... [504] 139StaIsa ...... [504] 140StaIsa ...... [504] 141Catalão ...... [504] 142Catalão ...... [504] 144Catalão ...... [504] 145Catalão ...... [504] 146Catalão ...... [504]

104 147Catalão ...... [504] 148Catalão ...... [504] 149Catalão ...... C ...... [504] 150Catalão ...... [504] 151Catalão ...... [504] 152Catalão ...... [504] 153Catalão ...... G...... C ..T ...... [504] 154Catalão ...... [504] 155Catalão ...... [504] 156Catalão ...... [504] 157Catalão ...... [504] 160Catalão ...... [504] 161Catalão ...... [504] 162Catalão ...... G...... C ..T ...... [504] 163Amanã ...... [504] 166Amanã ...... [504] 167Amanã ...... [504] 173Amanã ...... [504] 174Mamirauá ...... [504] 175Mamirauá ...... [504] 176Mamirauá ...... [504] 177Mamirauá ...... [504] 178Mamirauá ...... [504] 179Mamirauá ...... [504] 180Mamirauá ...... [504] 181Mamirauá ...... [504] 182Mamirauá ...... [504] 183Mamirauá ...... [504] 184Mamirauá ...... [504] 185Mamirauá ...... [504] 187Mamirauá ...... [504] 188Mamirauá ...... [504] 189Mamirauá ...... [504] 190Mamirauá ...... [504] 191Mamirauá ...... [504] 192Mamirauá ...... [504] 193Mamirauá ...... [504] 194Mamirauá ...... [504] 197Mamirauá ...... [504] 198Mamirauá ...... [504] 200Mamirauá ...... [504] 205Mamirauá ...... [504] 206Mamirauá ...... [504] 207Mamirauá ...... [504] 208Mamirauá ...... [504] 214Santarém ...... [504] 215Santarém ...... [504] 216Santarém ...... [504]

105 217Santarém ...... [504] 218Santarém ...... [504] 219Santarém ...... [504] 221Santarém ...... [504] 222Santarém ...... [504] 224Santarém ...... [504] 225Santarém ...... [504] 228Santarém ...... [504] 229Santarém ...... [504] 230Santarém ...... [504] 232Santarém ...... [504] 233Santarém ...... [504] 235Santarém ...... [504] 237Santarém ...... [504] 238Santarém ...... [504] 239Santarém ...... [504] 240Santarém ...... [504] 241Santarém ...... [504] 242Santarém ...... [504] 243Santarém ...... [504] 244Santarém ...... [504] 245Santarém ...... [504] 246Santarém ...... [504] 247Santarém ...... [504] 248Santarém ...... [504] 249Santarém ...... [504] 250Santarém ...... [504] 251Santarém ...... [504] 252Santarém ...... [504] 253Santarém ...... [504] 254Santarém ...... [504] 255Santarém ...... [504] 256Santarém ...... [504] 257Santarém ...... [504] 259Santarém ...... [504] 260Santarém ...... [504] 261Santarém ...... [504] 262Santarém ...... [504] 263Santarém ...... [504] 266CCast ...... [504] 267CCast ...... [504] 268CCast ...... [504] 270CCast ...... [504] 272CCast ...... [504] 273CCast ...... [504] 274CCast ...... [504] 275CCast ...... [504] 276CCast ...... [504]

106 277CCast ...... [504] 278CCast ...... [504] 279CCast ...... [504] 280CCast ...... [504] 281CCast ...... [504] 282CCast ...... [504] 283CCast ...... [504] 284CCast ...... [504] 285CCast ...... [504] 286CCast ...... [504] 292Iranduba ...... T ..C ...... [504] 293Iranduba ...... T ..C ...... [504] 294Iranduba ...... [504] 295Iranduba ...... [504] 297Iranduba ...... T ..C ...... [504] 298Iranduba ...... [504] 299Iranduba ...... [504] 300Iranduba ...... [504] 302Iranduba ...... [504] 303Iranduba ...... T ..C ...... [504] 304Iranduba ...... [504] 305Iranduba ...... T ..C ...... [504] 307Barcelos ...... [504] 308Barcelos ...... T ...... [504] 309Barcelos ...... T ...... [504] 310Barcelos ...... T ...... [504] 311Barcelos ...... T ...... [504] 312Barcelos ...... T ...... [504] 313Barcelos ...... T ...... [504] 314Barcelos ...... T ...... [504] 315Barcelos ...... T ...... [504] 316Barcelos ...... T ...... [504] 317Barcelos ...... T ...... [504] 318Barcelos ...... T ...... [504] 320Barcelos ...... T ...... [504] 322Barcelos ...... T ...... [504] 323Barcelos ...... T ...... [504] 324Barcelos ...... T ...... [504] 325Barcelos ...... T ...... [504]

1Campina CGC TTC TTT GCC TTC CAT TTT CTT CTG CCA TTT ATC ATT GCA GCC ATA ACA ATA GTT CAC CTC ATT TTT CTC CAT GAA ACC GGC [588] 2Campina ...... [588] 3Catalão ...... [588] 4Catalão ...... [588] 5Catalão ...... [588] 6Catalão ...... [588] 7Catalão ...... [588] 8Catalão ...... [588]

107 9Purus ...... T ...... C ...... [588] 11Purus ...... T ...... C ...... [588] 12Purus ...... [588] 14Careiro ..T ..T ..C ...... C ..A ...... A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 16Careiro ..T ..T ..C ...... C ..A ...... A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 17Careiro ..T ..T ..C ...... C ..A ...... A ... ..C ..T ...... [588] 18Careiro ..T ..T ..C ...... C ..A ...... C ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 19Careiro ..T ..T ..C ...... C ..A ...... A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 20NovoAirão ...... T ...... C ...... C ...... [588] 21NovoAirão ...... T ...... C ...... C ...... [588] 22NovoAirão ...... T ...... C ...... C ...... [588] 23NovoAirão ...... T ...... C ...... C ...... [588] 24Amanã ...... [588] 25Amanã ...... [588] 26Amanã ...... [588] 27Amanã ...... [588] 33Mamirauá ...... [588] 34Mamirauá ...... [588] 35Mamirauá ...... [588] 39Janauacá ...... [588] 42Janauacá ...... [588] 44Janauacá ...... [588] 45Janauacá ...... [588] 47Janauacá ...... [588] 48Janauacá ...... C ...... [588] 49Janauacá ...... [588] 50Janauacá ...... [588] 51Janauacá ...... [588] 52Janauacá ...... [588] 53Janauacá ...... [588] 54Janauacá ...... C ...... [588] 56Janauacá ...... [588] 58Janauacá ...... [588] 59Janauacá ...... C ...... [588] 60Janauacá ...... C ...... [588] 61Janauacá ...... C ...... [588] 62Janauacá ...... C ...... [588] 63Purus ...... [588] 66Purus ...... T ...... C ...... [588] 67Purus ...... T ...... C ...... [588] 68Purus ...... [588] 69Purus ...... [588] 71Purus ...... [588] 73Purus ...... [588] 75Purus ...... [588] 77Purus ...... [588] 79Purus ...... T ...... C ...... C ...... [588] 80Purus ...... [588]

108 81Purus ...... [588] 82Purus ...... [588] 83Purus ...... T ...... C ...... C ...... [588] 84Purus ...... T ...... C ...... C ...... [588] 86Purus ...... [588] 87Purus ...... [588] 88Purus ...... T ...... C ...... [588] 89Purus ...... [588] 92StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 93StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 95StaIsa ...... [588] 96StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 98StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 99StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 100StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 103StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 104StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 105StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 106StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 108StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 109StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 111StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 112StaIsa ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 113StaIsa ...... [588] 114StaIsa ...... [588] 115StaIsa ...... [588] 117BoaVista ...... [588] 118BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 119BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 120BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 121BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 122BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 123BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 124BoaVista ...... [588] 126BoaVista ...... [588] 127BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 128BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 129BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 130BoaVista ..T ..T ..C ...... A ...... G ... ..A ... ..A ... ..C ..T ...... [588] 132StaIsa ...... [588] 133StaIsa ...... [588] 134StaIsa ...... [588] 135StaIsa ...... [588] 136StaIsa ...... [588] 137StaIsa ...... [588] 138StaIsa ...... [588] 139StaIsa ...... [588] 140StaIsa ...... [588]

109 141Catalão ...... [588] 142Catalão ...... [588] 144Catalão ...... [588] 145Catalão ...... [588] 146Catalão ...... C ...... [588] 147Catalão ...... [588] 148Catalão ...... [588] 149Catalão ...... [588] 150Catalão ...... [588] 151Catalão ...... [588] 152Catalão ...... [588] 153Catalão ...... T ...... C ...... C ...... [588] 154Catalão ...... [588] 155Catalão ...... [588] 156Catalão ...... [588] 157Catalão ...... [588] 160Catalão ...... [588] 161Catalão ...... [588] 162Catalão ...... T ...... C ...... C ...... [588] 163Amanã ...... [588] 166Amanã ...... [588] 167Amanã ...... [588] 173Amanã ...... [588] 174Mamirauá ...... [588] 175Mamirauá ...... [588] 176Mamirauá ...... [588] 177Mamirauá ...... [588] 178Mamirauá ...... [588] 179Mamirauá ...... [588] 180Mamirauá ...... [588] 181Mamirauá ...... [588] 182Mamirauá ...... [588] 183Mamirauá ...... [588] 184Mamirauá ...... [588] 185Mamirauá ...... [588] 187Mamirauá ...... [588] 188Mamirauá ...... [588] 189Mamirauá ...... [588] 190Mamirauá ...... [588] 191Mamirauá ...... [588] 192Mamirauá ...... [588] 193Mamirauá ...... [588] 194Mamirauá ...... [588] 197Mamirauá ...... [588] 198Mamirauá ...... [588] 200Mamirauá ...... [588] 205Mamirauá ...... [588] 206Mamirauá ...... [588]

110 207Mamirauá ...... [588] 208Mamirauá ...... [588] 214Santarém ...... [588] 215Santarém ...... [588] 216Santarém ...... [588] 217Santarém ...... [588] 218Santarém ...... [588] 219Santarém ...... [588] 221Santarém ...... [588] 222Santarém ...... [588] 224Santarém ...... [588] 225Santarém ...... [588] 228Santarém ...... [588] 229Santarém ...... [588] 230Santarém ...... [588] 232Santarém ...... [588] 233Santarém ...... [588] 235Santarém ...... [588] 237Santarém ...... [588] 238Santarém ...... [588] 239Santarém ...... [588] 240Santarém ...... [588] 241Santarém ...... [588] 242Santarém ...... [588] 243Santarém ...... [588] 244Santarém ...... [588] 245Santarém ...... [588] 246Santarém ...... [588] 247Santarém ...... [588] 248Santarém ...... [588] 249Santarém ...... [588] 250Santarém ...... [588] 251Santarém ...... [588] 252Santarém ...... [588] 253Santarém ...... [588] 254Santarém ...... [588] 255Santarém ...... [588] 256Santarém ...... [588] 257Santarém ...... [588] 259Santarém ...... [588] 260Santarém ...... [588] 261Santarém ...... [588] 262Santarém ...... [588] 263Santarém ...... [588] 266CCast ...... [588] 267CCast ...... [588] 268CCast ...... [588] 270CCast ...... [588]

111 272CCast ...... [588] 273CCast ...... [588] 274CCast ...... [588] 275CCast ...... [588] 276CCast ...... [588] 277CCast ...... [588] 278CCast ...... [588] 279CCast ...... [588] 280CCast ...... C ...... [588] 281CCast ...... A...... [588] 282CCast ...... [588] 283CCast ...... C ...... [588] 284CCast ...... [588] 285CCast ...... [588] 286CCast ...... C ...... [588] 292Iranduba ...... C ...... C ...... [588] 293Iranduba ...... C ...... C ...... [588] 294Iranduba ...... [588] 295Iranduba ...... [588] 297Iranduba ...... C ...... C ...... [588] 298Iranduba ...... [588] 299Iranduba ...... [588] 300Iranduba ...... [588] 302Iranduba ...... [588] 303Iranduba ...... C ...... C ...... [588] 304Iranduba ...... [588] 305Iranduba ...... C ...... C ...... [588] 307Barcelos ...... C ...... [588] 308Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 309Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 310Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 311Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 312Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 313Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 314Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 315Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 316Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 317Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 318Barcelos ...... [588] 320Barcelos ...... A ...... C ...... [588] 322Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 323Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 324Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588] 325Barcelos ...... A ... ..T ... ..C ...... [588]

1Campina TCA ACC AAC CCA GCA GGC CTG AAC TCA GAC ACA GAC AAA GTT TCC TTC CAC CCC TAC TTC TCC TAC AAA GAC CTT CTA GGC TTC [672] 2Campina ...... [672] 3Catalão ...... [672]

112 4Catalão ...... [672] 5Catalão ...... [672] 6Catalão ...... [672] 7Catalão ...... [672] 8Catalão ...... [672] 9Purus ...... [672] 11Purus ...... [672] 12Purus ...... [672] 14Careiro ..C ..T ...... A ...... T ... ..T ...... T ...... T ... ..T ... ..T ...... T [672] 16Careiro ..C ..T ...... A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... T [672] 17Careiro ..C ..T ...... A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... T [672] 18Careiro ..C ..T ...... A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... T [672] 19Careiro ..C ..T ...... A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... T [672] 20NovoAirão ...... [672] 21NovoAirão ...... [672] 22NovoAirão ...... [672] 23NovoAirão ...... [672] 24Amanã ...... [672] 25Amanã ...... [672] 26Amanã ...... [672] 27Amanã ...... [672] 33Mamirauá ...... [672] 34Mamirauá ...... [672] 35Mamirauá ...... [672] 39Janauacá ...... [672] 42Janauacá ...... [672] 44Janauacá ...... [672] 45Janauacá ...... [672] 47Janauacá ...... [672] 48Janauacá ...... A ...... [672] 49Janauacá ...... [672] 50Janauacá ...... [672] 51Janauacá ...... [672] 52Janauacá ...... [672] 53Janauacá ...... G ...... [672] 54Janauacá ...... A ...... [672] 56Janauacá ...... [672] 58Janauacá ...... T...... [672] 59Janauacá ...... A ...... [672] 60Janauacá ...... A ...... [672] 61Janauacá ...... A ...... [672] 62Janauacá ...... [672] 63Purus ...... [672] 66Purus ...... [672] 67Purus ...... [672] 68Purus ...... [672] 69Purus ...... [672] 71Purus ...... [672]

113 73Purus ...... [672] 75Purus ...... [672] 77Purus ...... [672] 79Purus ...... [672] 80Purus ...... [672] 81Purus ...... [672] 82Purus ...... A ...... [672] 83Purus ...... [672] 84Purus ...... [672] 86Purus ...... [672] 87Purus ...... [672] 88Purus ...... [672] 89Purus ...... [672] 92StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 93StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 95StaIsa ...... [672] 96StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 98StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 99StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 100StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 103StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 104StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 105StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 106StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 108StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 109StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 111StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 112StaIsa ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 113StaIsa ...... [672] 114StaIsa ...... [672] 115StaIsa ...... [672] 117BoaVista ...... [672] 118BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 119BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 120BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 121BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 122BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 123BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 124BoaVista ...... [672] 126BoaVista ...... [672] 127BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 128BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 129BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 130BoaVista ..C ..T ...... T.A ...... T ... ..T ...... T ...... T ...... T ...... [672] 132StaIsa ...... [672] 133StaIsa ...... [672] 134StaIsa ...... [672] 135StaIsa ...... [672]

114 136StaIsa ...... [672] 137StaIsa ...... [672] 138StaIsa ...... [672] 139StaIsa ...... [672] 140StaIsa ...... [672] 141Catalão ...... [672] 142Catalão ...... [672] 144Catalão ...... [672] 145Catalão ...... [672] 146Catalão ...... A ...... [672] 147Catalão ...... [672] 148Catalão ...... [672] 149Catalão ...... [672] 150Catalão ...... [672] 151Catalão ...... [672] 152Catalão ...... [672] 153Catalão ...... A...... [672] 154Catalão ...... [672] 155Catalão ...... [672] 156Catalão ...... [672] 157Catalão ...... [672] 160Catalão ...... [672] 161Catalão ...... [672] 162Catalão ...... [672] 163Amanã ...... [672] 166Amanã ...... [672] 167Amanã ...... [672] 173Amanã ...... [672] 174Mamirauá ...... [672] 175Mamirauá ...... [672] 176Mamirauá ...... [672] 177Mamirauá ...... [672] 178Mamirauá ...... [672] 179Mamirauá ...... [672] 180Mamirauá ...... [672] 181Mamirauá ...... [672] 182Mamirauá ...... [672] 183Mamirauá ...... [672] 184Mamirauá ...... [672] 185Mamirauá ...... [672] 187Mamirauá ...... [672] 188Mamirauá ...... [672] 189Mamirauá ...... [672] 190Mamirauá ...... [672] 191Mamirauá ...... [672] 192Mamirauá ...... [672] 193Mamirauá ...... [672] 194Mamirauá ...... [672]

115 197Mamirauá ...... [672] 198Mamirauá ...... [672] 200Mamirauá ...... [672] 205Mamirauá ...... [672] 206Mamirauá ...... [672] 207Mamirauá ...... [672] 208Mamirauá ...... [672] 214Santarém ...... [672] 215Santarém ...... [672] 216Santarém ...... [672] 217Santarém ...... [672] 218Santarém ...... [672] 219Santarém ...... [672] 221Santarém ...... [672] 222Santarém ...... [672] 224Santarém ...... [672] 225Santarém ...... [672] 228Santarém ...... [672] 229Santarém ...... [672] 230Santarém ...... [672] 232Santarém ...... [672] 233Santarém ...... [672] 235Santarém ...... [672] 237Santarém ...... [672] 238Santarém ...... [672] 239Santarém ...... [672] 240Santarém ...... [672] 241Santarém ...... [672] 242Santarém ...... [672] 243Santarém ...... [672] 244Santarém ...... [672] 245Santarém ...... [672] 246Santarém ...... [672] 247Santarém ...... [672] 248Santarém ...... [672] 249Santarém ...... [672] 250Santarém ...... [672] 251Santarém ...... [672] 252Santarém ...... [672] 253Santarém ...... [672] 254Santarém ...... [672] 255Santarém ...... [672] 256Santarém ...... [672] 257Santarém ...... [672] 259Santarém ...... [672] 260Santarém ...... [672] 261Santarém ...... [672] 262Santarém ...... [672]

116 263Santarém ...... [672] 266CCast ...... [672] 267CCast ...... [672] 268CCast ...... [672] 270CCast ...... [672] 272CCast ...... [672] 273CCast ...... [672] 274CCast ...... [672] 275CCast ...... [672] 276CCast ...... [672] 277CCast ...... [672] 278CCast ...... [672] 279CCast ...... [672] 280CCast ...... A ...... [672] 281CCast ...... [672] 282CCast ...... [672] 283CCast ...... A ...... [672] 284CCast ...... [672] 285CCast ...... [672] 286CCast ...... A ...... [672] 292Iranduba ...... [672] 293Iranduba ...... [672] 294Iranduba ...... [672] 295Iranduba ...... [672] 297Iranduba ...... [672] 298Iranduba ...... [672] 299Iranduba ...... [672] 300Iranduba ...... [672] 302Iranduba ...... [672] 303Iranduba ...... [672] 304Iranduba ...... [672] 305Iranduba ...... [672] 307Barcelos ...... [672] 308Barcelos ...... [672] 309Barcelos ...... [672] 310Barcelos ...... [672] 311Barcelos ...... [672] 312Barcelos ...... [672] 313Barcelos ...... [672] 314Barcelos ...... [672] 315Barcelos ...... [672] 316Barcelos ...... [672] 317Barcelos ...... [672] 318Barcelos ...... [672] 320Barcelos ... ..A ...... [672] 322Barcelos ...... [672] 323Barcelos ...... [672] 324Barcelos ...... [672]

117 325Barcelos ...... [672]

1Campina GCT CTC CTA CTA ATT GCA CTA ATT TCC CTC TCA CTT TTT TCC CCC AAC CTC TTA GGA GAC CCA GAC AAT TTT ACC CCC GCT AAT [756] 2Campina ...... [756] 3Catalão ...... [756] 4Catalão ...... [756] 5Catalão ...... [756] 6Catalão ...... [756] 7Catalão ...... [756] 8Catalão ...... [756] 9Purus ...... [756] 11Purus ...... [756] 12Purus ...... [756] 14Careiro ..C ...... A ... ..C ... ..C ...... C...... C ..C [756] 16Careiro ..C ...... A ... ..C ... ..C ...... C...... C ..C [756] 17Careiro ..C ...... A ... ..C ... ..C ...... C...... C ..C [756] 18Careiro ..C ...... A ... ..C ... ..C ...... C...... C ..C [756] 19Careiro ..C ...... A ... ..C ... ..C ...... C...... C ..C [756] 20NovoAirão ...... [756] 21NovoAirão ...... [756] 22NovoAirão ...... [756] 23NovoAirão ...... [756] 24Amanã ...... [756] 25Amanã A...... C...... C [756] 26Amanã A...... C...... C [756] 27Amanã ...... [756] 33Mamirauá ...... [756] 34Mamirauá A...... C...... C [756] 35Mamirauá ...... [756] 39Janauacá ...... [756] 42Janauacá ...... [756] 44Janauacá ...... [756] 45Janauacá ...... [756] 47Janauacá ...... [756] 48Janauacá ...... [756] 49Janauacá ...... [756] 50Janauacá ...... [756] 51Janauacá ...... [756] 52Janauacá ...... [756] 53Janauacá ...... [756] 54Janauacá ...... [756] 56Janauacá ...... [756] 58Janauacá ...... T...... [756] 59Janauacá ...... [756] 60Janauacá ...... [756] 61Janauacá ...... [756] 62Janauacá ...... [756] 63Purus ...... [756]

118 66Purus ...... [756] 67Purus ...... T ...... [756] 68Purus ...... [756] 69Purus ...... [756] 71Purus ...... [756] 73Purus ...... T...... [756] 75Purus ...... T...... [756] 77Purus ...... T...... [756] 79Purus ...... [756] 80Purus ...... [756] 81Purus ...... [756] 82Purus ...... [756] 83Purus A...... C...... C [756] 84Purus ...... [756] 86Purus ...... [756] 87Purus ...... T...... [756] 88Purus ...... T ...... [756] 89Purus ...... [756] 92StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 93StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 95StaIsa ...... T ...... [756] 96StaIsa ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 98StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 99StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 100StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 103StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 104StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 105StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 106StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 108StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 109StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 111StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 112StaIsa ..C ...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 113StaIsa ...... T ...... [756] 114StaIsa ...... T ...... [756] 115StaIsa ...... T ...... [756] 117BoaVista ...... T ...... [756] 118BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 119BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 120BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 121BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 122BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 123BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 124BoaVista ...... T ...... [756] 126BoaVista ...... T ...... [756] 127BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 128BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 129BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756]

119 130BoaVista ..C ...... A...... A.A ... ..C ... ..C ...... C.. ..G ...... C ...... C ..C [756] 132StaIsa ...... T ...... [756] 133StaIsa ...... T ...... [756] 134StaIsa ...... T ...... [756] 135StaIsa ...... T ...... [756] 136StaIsa ...... T ...... [756] 137StaIsa ...... T ...... [756] 138StaIsa ...... T ...... [756] 139StaIsa ...... T ...... [756] 140StaIsa ...... T ...... [756] 141Catalão ...... [756] 142Catalão ...... [756] 144Catalão ...... C ...... [756] 145Catalão ...... [756] 146Catalão ...... [756] 147Catalão ...... T ...... [756] 148Catalão ...... [756] 149Catalão ...... [756] 150Catalão ...... [756] 151Catalão ...... [756] 152Catalão ...... [756] 153Catalão ...... [756] 154Catalão ...... [756] 155Catalão ...... [756] 156Catalão ...... [756] 157Catalão ...... [756] 160Catalão ...... [756] 161Catalão ...... [756] 162Catalão ...... [756] 163Amanã ...... [756] 166Amanã ...... [756] 167Amanã ...... [756] 173Amanã ...... [756] 174Mamirauá ...... [756] 175Mamirauá ...... [756] 176Mamirauá ...... [756] 177Mamirauá ...... [756] 178Mamirauá A...... C...... C [756] 179Mamirauá ...... [756] 180Mamirauá ...... C ...... [756] 181Mamirauá ...... [756] 182Mamirauá ...... [756] 183Mamirauá ...... [756] 184Mamirauá A...... C...... C [756] 185Mamirauá ...... [756] 187Mamirauá ...... [756] 188Mamirauá ...... [756] 189Mamirauá ...... [756]

120 190Mamirauá ...... [756] 191Mamirauá ...... [756] 192Mamirauá A...... C...... C [756] 193Mamirauá ...... [756] 194Mamirauá ...... [756] 197Mamirauá ...... [756] 198Mamirauá ...... [756] 200Mamirauá ...... [756] 205Mamirauá A...... C...... C [756] 206Mamirauá ...... [756] 207Mamirauá ...... [756] 208Mamirauá ...... [756] 214Santarém ...... [756] 215Santarém ...... [756] 216Santarém ...... [756] 217Santarém ...... [756] 218Santarém ...... [756] 219Santarém ...... [756] 221Santarém ...... [756] 222Santarém ...... [756] 224Santarém ...... [756] 225Santarém ...... [756] 228Santarém ...... [756] 229Santarém ...... [756] 230Santarém ...... [756] 232Santarém ...... T ...... [756] 233Santarém ...... [756] 235Santarém ...... [756] 237Santarém ...... [756] 238Santarém ...... [756] 239Santarém ...... T ...... [756] 240Santarém ...... [756] 241Santarém ...... [756] 242Santarém ...... [756] 243Santarém ...... [756] 244Santarém ...... A ...... [756] 245Santarém ...... A ...... [756] 246Santarém ...... [756] 247Santarém ...... [756] 248Santarém ...... [756] 249Santarém ...... [756] 250Santarém ...... [756] 251Santarém ...... [756] 252Santarém ...... [756] 253Santarém ...... [756] 254Santarém ...... [756] 255Santarém ...... [756] 256Santarém ...... [756]

121 257Santarém ...... [756] 259Santarém ...... [756] 260Santarém ...... [756] 261Santarém ...... [756] 262Santarém ...... [756] 263Santarém ...... [756] 266CCast ...... [756] 267CCast ...... [756] 268CCast ...... [756] 270CCast ...... [756] 272CCast ...... [756] 273CCast ...... [756] 274CCast ...... [756] 275CCast ...... [756] 276CCast ...... [756] 277CCast ...... [756] 278CCast ...... [756] 279CCast ...... [756] 280CCast ...... [756] 281CCast ...... [756] 282CCast ...... [756] 283CCast ...... [756] 284CCast ...... [756] 285CCast ...... [756] 286CCast ...... [756] 292Iranduba ..C ...... [756] 293Iranduba ..C ...... [756] 294Iranduba ...... [756] 295Iranduba ...... [756] 297Iranduba ..C ...... [756] 298Iranduba ...... [756] 299Iranduba ...... [756] 300Iranduba ...... [756] 302Iranduba ...... [756] 303Iranduba ...... [756] 304Iranduba ...... [756] 305Iranduba ..C ...... [756] 307Barcelos ...... A...... [756] 308Barcelos ...... A...... [756] 309Barcelos ...... A...... [756] 310Barcelos ...... A...... [756] 311Barcelos ...... A...... [756] 312Barcelos ...... A...... [756] 313Barcelos ...... A...... [756] 314Barcelos ...... A...... [756] 315Barcelos ...... A...... [756] 316Barcelos ...... A...... [756] 317Barcelos ...... A...... [756]

122 318Barcelos ...... [756] 320Barcelos ...... A...... [756] 322Barcelos ...... A...... [756] 323Barcelos ...... A...... [756] 324Barcelos ...... A...... [756] 325Barcelos ...... [756]

1Campina CCC CTT GTT ACT CCC CCA CAT ATT AAA CCA GAG TGA TAC TTT CTT TTT GCC TAC GCC ATT CTT CGC TCC ATC CCT AAT AAA CTA [840] 2Campina ...... [840] 3Catalão ...... [840] 4Catalão ...... [840] 5Catalão ...... [840] 6Catalão ...... [840] 7Catalão ...... [840] 8Catalão ...... [840] 9Purus ...... C ...... [840] 11Purus ...... C ...... [840] 12Purus ...... [840] 14Careiro ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ...... [840] 16Careiro ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ...... [840] 17Careiro ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ...... [840] 18Careiro ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ...... [840] 19Careiro ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ...... [840] 20NovoAirão ...... C ...... [840] 21NovoAirão ...... C ...... [840] 22NovoAirão ...... C ...... [840] 23NovoAirão ...... C ...... [840] 24Amanã ...... [840] 25Amanã ...... [840] 26Amanã ...... [840] 27Amanã ...... [840] 33Mamirauá ...... [840] 34Mamirauá ...... [840] 35Mamirauá ...... [840] 39Janauacá ...... C ...... [840] 42Janauacá ...... [840] 44Janauacá ...... [840] 45Janauacá ...... [840] 47Janauacá ...... [840] 48Janauacá ...... G ...... [840] 49Janauacá ...... C ...... [840] 50Janauacá ...... C ...... [840] 51Janauacá ...... [840] 52Janauacá ...... [840] 53Janauacá ...... [840] 54Janauacá ...... G ...... [840] 56Janauacá ...... [840] 58Janauacá ...... [840]

123 59Janauacá ...... G ..C ...... [840] 60Janauacá ...... G ..C ...... [840] 61Janauacá ...... G ...... [840] 62Janauacá ...... G ...... [840] 63Purus ...... [840] 66Purus ...... C ...... [840] 67Purus ...... C ...... [840] 68Purus ...... [840] 69Purus ...... [840] 71Purus ...... [840] 73Purus ...... [840] 75Purus ...... [840] 77Purus ...... [840] 79Purus ...... C ...... [840] 80Purus ...... [840] 81Purus ...... [840] 82Purus ...... [840] 83Purus ...... [840] 84Purus ...... C ...... [840] 86Purus ...... [840] 87Purus ...... [840] 88Purus ...... C ...... [840] 89Purus ...... [840] 92StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 93StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 95StaIsa ...... G ...... [840] 96StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 98StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 99StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 100StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 103StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 104StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 105StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 106StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 108StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 109StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 111StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 112StaIsa ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 113StaIsa ...... G ...... [840] 114StaIsa ...... G ...... [840] 115StaIsa ...... G ...... [840] 117BoaVista ...... G ...... [840] 118BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 119BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 120BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 121BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 122BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 123BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840]

124 124BoaVista ...... G ...... [840] 126BoaVista ...... G ...... [840] 127BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 128BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 129BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 130BoaVista ... ..C ... ..C ..T ... ..C ..C ..G ... ..A ...... C ... ..T ...... G [840] 132StaIsa ...... G ...... [840] 133StaIsa ...... G ...... [840] 134StaIsa ...... G ...... [840] 135StaIsa ...... G ...... [840] 136StaIsa ...... G ...... [840] 137StaIsa ...... G ...... [840] 138StaIsa ...... G ...... [840] 139StaIsa ...... G ...... [840] 140StaIsa ...... G ...... [840] 141Catalão ...... [840] 142Catalão ...... [840] 144Catalão ...... [840] 145Catalão ...... [840] 146Catalão ...... G ...... [840] 147Catalão ...... [840] 148Catalão ...... [840] 149Catalão ...... [840] 150Catalão ...... [840] 151Catalão ...... [840] 152Catalão ...... [840] 153Catalão ...... C ...... [840] 154Catalão ...... [840] 155Catalão ...... [840] 156Catalão ...... [840] 157Catalão ...... [840] 160Catalão ...... [840] 161Catalão ...... [840] 162Catalão ...... C ...... [840] 163Amanã ...... [840] 166Amanã ...... [840] 167Amanã ...... [840] 173Amanã ...... [840] 174Mamirauá ...... [840] 175Mamirauá ...... [840] 176Mamirauá ...... [840] 177Mamirauá ...... [840] 178Mamirauá ...... [840] 179Mamirauá ...... [840] 180Mamirauá ...... [840] 181Mamirauá ...... [840] 182Mamirauá ...... [840] 183Mamirauá ...... [840]

125 184Mamirauá ...... [840] 185Mamirauá ...... [840] 187Mamirauá ...... [840] 188Mamirauá ...... [840] 189Mamirauá ...... [840] 190Mamirauá ...... [840] 191Mamirauá ...... [840] 192Mamirauá ...... [840] 193Mamirauá ...... [840] 194Mamirauá ...... [840] 197Mamirauá ...... [840] 198Mamirauá ...... [840] 200Mamirauá ...... [840] 205Mamirauá ...... [840] 206Mamirauá ...... [840] 207Mamirauá ...... [840] 208Mamirauá ...... [840] 214Santarém ...... [840] 215Santarém ...... [840] 216Santarém ...... [840] 217Santarém ...... [840] 218Santarém ...... [840] 219Santarém ...... [840] 221Santarém ...... [840] 222Santarém ...... [840] 224Santarém ...... [840] 225Santarém ...... [840] 228Santarém ...... [840] 229Santarém ...... [840] 230Santarém ...... [840] 232Santarém ...... [840] 233Santarém ...... [840] 235Santarém ...... [840] 237Santarém ...... [840] 238Santarém ...... [840] 239Santarém ...... [840] 240Santarém ...... [840] 241Santarém ...... [840] 242Santarém ...... [840] 243Santarém ...... [840] 244Santarém ...... [840] 245Santarém ...... [840] 246Santarém ...... [840] 247Santarém ...... [840] 248Santarém ...... [840] 249Santarém ...... [840] 250Santarém ...... [840] 251Santarém ...... [840]

126 252Santarém ...... [840] 253Santarém ...... [840] 254Santarém ...... [840] 255Santarém ...... [840] 256Santarém ...... [840] 257Santarém ...... [840] 259Santarém ...... [840] 260Santarém ...... [840] 261Santarém ...... [840] 262Santarém ...... [840] 263Santarém ...... [840] 266CCast ...... [840] 267CCast ...... [840] 268CCast ...... [840] 270CCast ...... [840] 272CCast ...... [840] 273CCast ...... [840] 274CCast ...... [840] 275CCast ...... [840] 276CCast ...... [840] 277CCast ...... C ...... [840] 278CCast ...... [840] 279CCast ...... [840] 280CCast ...... G ...... [840] 281CCast ...... [840] 282CCast ...... [840] 283CCast ...... G ...... [840] 284CCast ...... [840] 285CCast ...... [840] 286CCast ...... G ...... [840] 292Iranduba ...... [840] 293Iranduba ...... [840] 294Iranduba ...... [840] 295Iranduba ...... [840] 297Iranduba ...... [840] 298Iranduba ...... [840] 299Iranduba ...... [840] 300Iranduba ...... [840] 302Iranduba ...... [840] 303Iranduba ...... [840] 304Iranduba ...... [840] 305Iranduba ...... [840] 307Barcelos ...... G ...... [840] 308Barcelos ...... G ...... [840] 309Barcelos ...... G ...... [840] 310Barcelos ...... G ...... [840] 311Barcelos ...... G ...... [840] 312Barcelos ...... G ...... [840]

127 313Barcelos ...... G ...... [840] 314Barcelos ...... G ...... [840] 315Barcelos ...... G ...... [840] 316Barcelos ...... G ...... [840] 317Barcelos ...... G ...... [840] 318Barcelos ...... G ...... [840] 320Barcelos ...... G ...... [840] 322Barcelos ...... G ...... [840] 323Barcelos ...... G ...... [840] 324Barcelos ...... G ...... [840] 325Barcelos ...... [840]

1Campina GGC GGT GTC CTC GCA CTA CTC TTT TCT ATC CTT ATT CTT ATG CTT GTA CCA ATT CTC CAC ACC TCC AAG CTC CGC GCC CTC ACC [924] 2Campina ...... [924] 3Catalão ...... [924] 4Catalão ...... [924] 5Catalão ...... [924] 6Catalão ...... [924] 7Catalão ...... T [924] 8Catalão ...... [924] 9Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 11Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 12Purus ...... G ...... [924] 14Careiro ... ..G ... ..T ...... T ... ..C ... ..A ...... T ...... T ...... T [924] 16Careiro ..G ..G ... ..T ...... T ... ..C ... ..A ...... T ...... T ...... T [924] 17Careiro ... ..G ... ..T ...... T ... ..C ... ..A ...... T ...... T ...... T [924] 18Careiro ..G ..G ... ..T ...... T ... ..C ... ..A ...... T ...... T ...... T [924] 19Careiro ... ..G ... ..T ...... T ... ..C ... ..A ...... T ...... T ...... T [924] 20NovoAirão ...... A ...... T ...... A ...... [924] 21NovoAirão ...... A ...... T ...... A ...... [924] 22NovoAirão ...... A ...... T ...... A ...... T ... [924] 23NovoAirão ...... A ...... T ...... A ...... [924] 24Amanã ...... [924] 25Amanã ...... C ...... [924] 26Amanã ...... C ...... [924] 27Amanã ... ..A ...... [924] 33Mamirauá ...... [924] 34Mamirauá ...... C ...... [924] 35Mamirauá ...... [924] 39Janauacá ...... G ...... [924] 42Janauacá ...... [924] 44Janauacá ...... [924] 45Janauacá ...... [924] 47Janauacá ...... [924] 48Janauacá ...... G ...... [924] 49Janauacá ...... G ...... [924] 50Janauacá ...... G ...... [924] 51Janauacá ...... [924]

128 52Janauacá ...... [924] 53Janauacá ...... [924] 54Janauacá ...... G ...... [924] 56Janauacá ...... [924] 58Janauacá ...... G ...... [924] 59Janauacá ...... G ...... [924] 60Janauacá ...... G ...... [924] 61Janauacá ...... [924] 62Janauacá ...... [924] 63Purus ...... G ...... [924] 66Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 67Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 68Purus ...... G ...... [924] 69Purus ...... G ...... [924] 71Purus ...... G ...... [924] 73Purus ...... G ...... [924] 75Purus ...... G ...... [924] 77Purus ...... G ...... [924] 79Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 80Purus ...... G ...... [924] 81Purus ...... [924] 82Purus ...... [924] 83Purus ...... C ...... [924] 84Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 86Purus ...... G ...... [924] 87Purus ...... G ...... [924] 88Purus ...... A ...... T ...... A ...... [924] 89Purus ...... G ...... [924] 92StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 93StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 95StaIsa ...... [924] 96StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 98StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 99StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 100StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 103StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 104StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 105StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 106StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 108StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 109StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 111StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 112StaIsa ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 113StaIsa ...... [924] 114StaIsa ...... [924] 115StaIsa ...... [924] 117BoaVista ...... [924] 118BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924]

129 119BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 120BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 121BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 122BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 123BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 124BoaVista ...... [924] 126BoaVista ...... [924] 127BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 128BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 129BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 130BoaVista ... ..A ..T ..T ...... T ..C ..C ... ..A ...... T ...... T ...... [924] 132StaIsa ...... [924] 133StaIsa ...... [924] 134StaIsa ...... [924] 135StaIsa ...... [924] 136StaIsa ...... [924] 137StaIsa ...... [924] 138StaIsa ...... [924] 139StaIsa ...... [924] 140StaIsa ...... [924] 141Catalão ...... [924] 142Catalão ...... [924] 144Catalão ...... [924] 145Catalão ...... G ...... [924] 146Catalão ...... G ...... [924] 147Catalão ...... [924] 148Catalão ...... G ...... [924] 149Catalão ...... G ...... [924] 150Catalão ...... G ...... [924] 151Catalão ...... T [924] 152Catalão ...... [924] 153Catalão ...... A ...... T ...... A ...... [924] 154Catalão ...... G ...... [924] 155Catalão ...... [924] 156Catalão ...... [924] 157Catalão ...... G ...... [924] 160Catalão ...... T [924] 161Catalão ...... T [924] 162Catalão ...... A ...... T ...... A ...... [924] 163Amanã ...... [924] 166Amanã ...... [924] 167Amanã ...... [924] 173Amanã ...... [924] 174Mamirauá ...... [924] 175Mamirauá ...... [924] 176Mamirauá ...... [924] 177Mamirauá ...... T [924] 178Mamirauá ...... C ...... [924]

130 179Mamirauá ...... [924] 180Mamirauá ...... [924] 181Mamirauá ... ..A ...... [924] 182Mamirauá ...... [924] 183Mamirauá ...... [924] 184Mamirauá ...... C ...... [924] 185Mamirauá ...... [924] 187Mamirauá ...... [924] 188Mamirauá ...... [924] 189Mamirauá ...... [924] 190Mamirauá ...... [924] 191Mamirauá ...... [924] 192Mamirauá ...... [924] 193Mamirauá ...... [924] 194Mamirauá ...... [924] 197Mamirauá ...... [924] 198Mamirauá ...... [924] 200Mamirauá ...... [924] 205Mamirauá ...... C ...... [924] 206Mamirauá ...... [924] 207Mamirauá ...... [924] 208Mamirauá ...... [924] 214Santarém ...... [924] 215Santarém ...... [924] 216Santarém ...... [924] 217Santarém ...... [924] 218Santarém ...... [924] 219Santarém ...... [924] 221Santarém ...... T ...... [924] 222Santarém ...... [924] 224Santarém ...... [924] 225Santarém ...... [924] 228Santarém ...... [924] 229Santarém ...... [924] 230Santarém ...... [924] 232Santarém ...... [924] 233Santarém ...... [924] 235Santarém ...... [924] 237Santarém ...... [924] 238Santarém ...... [924] 239Santarém ...... [924] 240Santarém ...... [924] 241Santarém ...... [924] 242Santarém ...... [924] 243Santarém ...... [924] 244Santarém ...... [924] 245Santarém ...... [924] 246Santarém ...... [924]

131 247Santarém ...... [924] 248Santarém ...... [924] 249Santarém ...... [924] 250Santarém ...... [924] 251Santarém ...... T...... [924] 252Santarém ...... [924] 253Santarém ...... [924] 254Santarém ...... [924] 255Santarém ...... [924] 256Santarém ...... G ...... [924] 257Santarém ...... G ...... [924] 259Santarém ...... [924] 260Santarém ...... [924] 261Santarém ...... [924] 262Santarém ...... [924] 263Santarém ...... T...... [924] 266CCast ...... [924] 267CCast ...... [924] 268CCast ...... [924] 270CCast ...... [924] 272CCast ...... [924] 273CCast ...... [924] 274CCast ...... [924] 275CCast ...... [924] 276CCast ...... G ...... [924] 277CCast ...... G ...... [924] 278CCast ...... [924] 279CCast ...... [924] 280CCast ...... [924] 281CCast ...... [924] 282CCast ...... G ...... [924] 283CCast ...... G ...... [924] 284CCast ...... [924] 285CCast ...... [924] 286CCast ...... G ...... [924] 292Iranduba ...... G ...... C ...... T...... C ...... [924] 293Iranduba ...... G ...... T.. ..C ...... T...... C ...... [924] 294Iranduba ...... [924] 295Iranduba ...... [924] 297Iranduba ...... G ...... T.. ..C ...... T...... C ...... [924] 298Iranduba ...... [924] 299Iranduba ...... G ...... [924] 300Iranduba ...... [924] 302Iranduba ...... [924] 303Iranduba ...... G ...... [924] 304Iranduba ...... G ...... [924] 305Iranduba ...... G ...... C ...... T...... C ...... [924] 307Barcelos ..T ...... T ...... [924]

132 308Barcelos ..T ...... T ...... [924] 309Barcelos ..T ...... T ...... [924] 310Barcelos ..T ...... T ...... [924] 311Barcelos ..T ...... T ...... [924] 312Barcelos ..T ...... T ...... [924] 313Barcelos ..T ...... T ...... [924] 314Barcelos ..T ...... T ...... [924] 315Barcelos ..T ...... T ...... [924] 316Barcelos ..T ...... T ..C ...... [924] 317Barcelos ..T ...... T ..C ...... [924] 318Barcelos ...... [924] 320Barcelos ..T ...... T ...... [924] 322Barcelos ..T ...... T ...... [924] 323Barcelos ..T ...... T ...... [924] 324Barcelos ...... T ...... [924] 325Barcelos ...... [924]

1Campina TTT CGC CCC CTT ACT CAA ATT CTA TTT TGG CTC CTA ATC GCA GAT GTA GCA ATC TTA ACT TGA ATT GGA GGA ATG CCT GTC GAA [1008] 2Campina ...... [1008] 3Catalão ...... [1008] 4Catalão ...... [1008] 5Catalão ...... [1008] 6Catalão ...... [1008] 7Catalão ...... [1008] 8Catalão ...... [1008] 9Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 11Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 12Purus ...... [1008] 14Careiro ...... C ..C ... C.C T...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 16Careiro ...... C ..C ... C.C T...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 17Careiro ...... C ..C ... C.C T...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 18Careiro ...... C ..C ... C.C T...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 19Careiro ...... C ..C ... C.C T...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 20NovoAirão ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 21NovoAirão ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 22NovoAirão ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 23NovoAirão ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 24Amanã ...... [1008] 25Amanã ...... [1008] 26Amanã ...... [1008] 27Amanã ...... [1008] 33Mamirauá ...... [1008] 34Mamirauá ...... [1008] 35Mamirauá ...... [1008] 39Janauacá ...... [1008] 42Janauacá ...... [1008] 44Janauacá ...... [1008] 45Janauacá ...... [1008]

133 47Janauacá ...... [1008] 48Janauacá ...... G .T...... [1008] 49Janauacá ...... [1008] 50Janauacá ...... [1008] 51Janauacá ...... [1008] 52Janauacá ...... [1008] 53Janauacá ...... [1008] 54Janauacá ...... G .T...... [1008] 56Janauacá ...... [1008] 58Janauacá ...... [1008] 59Janauacá ...... G .T...... [1008] 60Janauacá ...... G .T...... [1008] 61Janauacá ...... G ...... [1008] 62Janauacá ...... G ...... [1008] 63Purus ...... G ...... [1008] 66Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 67Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 68Purus ...... G...... [1008] 69Purus ...... G...... [1008] 71Purus ...... [1008] 73Purus ...... [1008] 75Purus ...... [1008] 77Purus ...... [1008] 79Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 80Purus ...... [1008] 81Purus ...... [1008] 82Purus ...... [1008] 83Purus ...... [1008] 84Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 86Purus ...... [1008] 87Purus ...... [1008] 88Purus ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 89Purus ...... [1008] 92StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... G...... [1008] 93StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... G...... [1008] 95StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 96StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 98StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ...... T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 99StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 100StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 103StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 104StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 105StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 106StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 108StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 109StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 111StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 112StaIsa ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008]

134 113StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 114StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 115StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 117BoaVista ..C ...... G ...... [1008] 118BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 119BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 120BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ...... T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 121BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 122BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 123BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 124BoaVista ..C ...... G ...... [1008] 126BoaVista ..C ...... G ...... [1008] 127BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 128BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 129BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 130BoaVista ...... C ..C ... C.C ...... A ... T.. ..T ... A...... T ... C.. ..C ... ..C ...... A ...... [1008] 132StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 133StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 134StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 135StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 136StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 137StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 138StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 139StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 140StaIsa ..C ...... G ...... [1008] 141Catalão ... ..T ...... [1008] 142Catalão ...... [1008] 144Catalão ...... [1008] 145Catalão ...... [1008] 146Catalão ...... G .T...... [1008] 147Catalão ...... [1008] 148Catalão ...... [1008] 149Catalão ...... [1008] 150Catalão ...... [1008] 151Catalão ...... [1008] 152Catalão ...... [1008] 153Catalão ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 154Catalão ...... [1008] 155Catalão ...... [1008] 156Catalão ...... [1008] 157Catalão ...... [1008] 160Catalão ...... [1008] 161Catalão ...... [1008] 162Catalão ...... A ...... A ...... G ...... [1008] 163Amanã ...... [1008] 166Amanã ...... [1008] 167Amanã ...... [1008] 173Amanã ...... [1008]

135 174Mamirauá ...... [1008] 175Mamirauá ...... [1008] 176Mamirauá ...... [1008] 177Mamirauá ...... [1008] 178Mamirauá ...... [1008] 179Mamirauá ...... [1008] 180Mamirauá ...... [1008] 181Mamirauá ...... [1008] 182Mamirauá ...... [1008] 183Mamirauá ...... [1008] 184Mamirauá ...... [1008] 185Mamirauá ...... [1008] 187Mamirauá ...... [1008] 188Mamirauá ...... [1008] 189Mamirauá ...... [1008] 190Mamirauá ...... [1008] 191Mamirauá ...... [1008] 192Mamirauá ...... [1008] 193Mamirauá ...... [1008] 194Mamirauá ...... [1008] 197Mamirauá ...... [1008] 198Mamirauá ...... [1008] 200Mamirauá ...... [1008] 205Mamirauá ...... [1008] 206Mamirauá ...... [1008] 207Mamirauá ...... [1008] 208Mamirauá ...... [1008] 214Santarém ...... [1008] 215Santarém ...... [1008] 216Santarém ...... [1008] 217Santarém ...... [1008] 218Santarém ...... [1008] 219Santarém ...... [1008] 221Santarém ...... [1008] 222Santarém ...... [1008] 224Santarém ...... [1008] 225Santarém ...... [1008] 228Santarém ...... [1008] 229Santarém ...... [1008] 230Santarém ...... [1008] 232Santarém ...... [1008] 233Santarém ...... [1008] 235Santarém ...... [1008] 237Santarém ...... [1008] 238Santarém ...... [1008] 239Santarém ...... [1008] 240Santarém ...... [1008] 241Santarém ...... [1008]

136 242Santarém ...... [1008] 243Santarém ...... [1008] 244Santarém ...... [1008] 245Santarém ...... [1008] 246Santarém ...... [1008] 247Santarém ...... [1008] 248Santarém ...... [1008] 249Santarém ...... [1008] 250Santarém ...... [1008] 251Santarém ...... [1008] 252Santarém ...... [1008] 253Santarém ...... [1008] 254Santarém ...... [1008] 255Santarém ...... [1008] 256Santarém ...... [1008] 257Santarém ...... [1008] 259Santarém ...... [1008] 260Santarém ...... T...... [1008] 261Santarém ...... [1008] 262Santarém ...... [1008] 263Santarém ...... [1008] 266CCast ...... [1008] 267CCast ...... [1008] 268CCast ...... [1008] 270CCast ...... [1008] 272CCast ...... [1008] 273CCast ...... [1008] 274CCast ...... [1008] 275CCast ...... [1008] 276CCast ...... [1008] 277CCast ...... [1008] 278CCast ...... [1008] 279CCast ...... [1008] 280CCast ...... G ...... [1008] 281CCast ...... [1008] 282CCast ...... [1008] 283CCast ...... G .T...... [1008] 284CCast ...... [1008] 285CCast ...... [1008] 286CCast ...... G .T...... [1008] 292Iranduba ...... A ...... G...... G ...... [1008] 293Iranduba ...... A ...... G...... G ...... [1008] 294Iranduba ...... [1008] 295Iranduba ...... [1008] 297Iranduba ...... A ...... G...... G ...... [1008] 298Iranduba ...... C ...... [1008] 299Iranduba ...... [1008] 300Iranduba ...... [1008]

137 302Iranduba ...... [1008] 303Iranduba ...... [1008] 304Iranduba ...... [1008] 305Iranduba ...... A ...... G...... G ...... [1008] 307Barcelos ...... A ...... [1008] 308Barcelos ...... A ...... [1008] 309Barcelos ...... A ...... [1008] 310Barcelos ...... A ...... [1008] 311Barcelos ...... A ...... [1008] 312Barcelos ...... A ...... [1008] 313Barcelos ...... A ...... [1008] 314Barcelos ...... A ...... [1008] 315Barcelos ...... A ...... [1008] 316Barcelos ...... A ...... [1008] 317Barcelos ...... A ...... [1008] 318Barcelos ..C ...... G ...... [1008] 320Barcelos ...... A ...... [1008] 322Barcelos ...... A ...... [1008] 323Barcelos ...... A ...... [1008] 324Barcelos ...... A ...... A...... [1008] 325Barcelos ...... [1008]

1Campina CAC CCT TTC ATT ATT ATC GGT CAA ATC GCA TCC TTC CTC TAC TTC TTC ATC TTC CTT ATT TTA TTA CCC ATC ACC GGA CTA GTA [1092] 2Campina ...... [1092] 3Catalão ...... [1092] 4Catalão ...... C...... [1092] 5Catalão ...... [1092] 6Catalão ...... G ...... [1092] 7Catalão ...... [1092] 8Catalão ...... [1092] 9Purus ...... T ...... [1092] 11Purus ...... T ...... [1092] 12Purus ...... [1092] 14Careiro ... ..C ..T ...... T ..C ...... C...... C ... C...... A ... ..T ...... A.C [1092] 16Careiro ... ..C ..T ...... T ..C ...... C...... C ... C...... A ... ..T ...... A.C [1092] 17Careiro ... ..C ..T ...... T ..C ...... C...... C ... C...... A ... ..T ...... A.C [1092] 18Careiro ... ..C ..T ...... T ..C ...... C...... C ... C...... A ... ..T ...... A.C [1092] 19Careiro ... ..C ..T ...... T ..C ...... C...... C ... C...... A ... ..T ...... A.C [1092] 20NovoAirão ...... T ...... [1092] 21NovoAirão ...... T ...... [1092] 22NovoAirão ...... T ...... [1092] 23NovoAirão ...... T ...... [1092] 24Amanã ...... [1092] 25Amanã ...... [1092] 26Amanã ...... [1092] 27Amanã ...... [1092] 33Mamirauá ...... [1092] 34Mamirauá ...... [1092]

138 35Mamirauá ...... [1092] 39Janauacá ...... [1092] 42Janauacá ...... [1092] 44Janauacá ...... [1092] 45Janauacá ...... [1092] 47Janauacá ...... [1092] 48Janauacá ...... T ...... [1092] 49Janauacá ...... [1092] 50Janauacá ...... [1092] 51Janauacá ...... [1092] 52Janauacá ...... [1092] 53Janauacá ... ..C ...... [1092] 54Janauacá ...... T ...... [1092] 56Janauacá ...... [1092] 58Janauacá ...... [1092] 59Janauacá ...... T ...... [1092] 60Janauacá ...... T ...... [1092] 61Janauacá ...... T ...... [1092] 62Janauacá ...... T ...... [1092] 63Purus ...... T ...... [1092] 66Purus ...... T ...... [1092] 67Purus ...... T ...... [1092] 68Purus ...... [1092] 69Purus ...... [1092] 71Purus ...... [1092] 73Purus ...... [1092] 75Purus ...... [1092] 77Purus ...... [1092] 79Purus ...... T ...... [1092] 80Purus ...... [1092] 81Purus ...... [1092] 82Purus ...... [1092] 83Purus ...... [1092] 84Purus ...... T ...... [1092] 86Purus ...... [1092] 87Purus ...... [1092] 88Purus ...... T ...... [1092] 89Purus ...... [1092] 92StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 93StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 95StaIsa ...... C. [1092] 96StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 98StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 99StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 100StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 103StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 104StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 105StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092]

139 106StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 108StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 109StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 111StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 112StaIsa ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 113StaIsa ...... C. [1092] 114StaIsa ...... C. [1092] 115StaIsa ...... C. [1092] 117BoaVista ...... C. [1092] 118BoaVista ... ..C ..T ..C ... ..T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 119BoaVista ... ..C ..T ..C ... ..T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 120BoaVista ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 121BoaVista ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 122BoaVista ... ..C ..T ..C ... ..T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 123BoaVista ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 124BoaVista ...... C. [1092] 126BoaVista ...... C. [1092] 127BoaVista ... ..C ..T ..C ... ..T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 128BoaVista ... ..C ..T ..C ... ..T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 129BoaVista ... ..C ..T ...... T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 130BoaVista ... ..C ..T ..C ... ..T ..C ...... T ...... C ... C...... A ... ..T ... ..G ... [1092] 132StaIsa ...... C. [1092] 133StaIsa ...... C. [1092] 134StaIsa ...... C. [1092] 135StaIsa ...... C. [1092] 136StaIsa ...... C. [1092] 137StaIsa ...... C. [1092] 138StaIsa ...... C. [1092] 139StaIsa ...... C. [1092] 140StaIsa ...... C. [1092] 141Catalão ...... [1092] 142Catalão ...... [1092] 144Catalão ...... T ...... [1092] 145Catalão ...... [1092] 146Catalão ...... T ...... [1092] 147Catalão ...... [1092] 148Catalão ...... [1092] 149Catalão ...... [1092] 150Catalão ...... [1092] 151Catalão ...... [1092] 152Catalão ...... [1092] 153Catalão ...... T ...... [1092] 154Catalão ...... [1092] 155Catalão ...... [1092] 156Catalão ...... [1092] 157Catalão ...... [1092] 160Catalão ...... [1092] 161Catalão ...... [1092]

140 162Catalão ...... T ...... [1092] 163Amanã ...... [1092] 166Amanã ...... [1092] 167Amanã ...... [1092] 173Amanã ...... C ...... [1092] 174Mamirauá ...... C ...... [1092] 175Mamirauá ...... C ...... [1092] 176Mamirauá ...... C. [1092] 177Mamirauá ...... [1092] 178Mamirauá ...... [1092] 179Mamirauá ...... [1092] 180Mamirauá ...... [1092] 181Mamirauá ...... [1092] 182Mamirauá ...... [1092] 183Mamirauá ...... [1092] 184Mamirauá ...... [1092] 185Mamirauá ... ..C ...... [1092] 187Mamirauá ...... [1092] 188Mamirauá ...... [1092] 189Mamirauá ...... [1092] 190Mamirauá ...... [1092] 191Mamirauá ...... [1092] 192Mamirauá ...... [1092] 193Mamirauá ...... [1092] 194Mamirauá ...... [1092] 197Mamirauá ...... [1092] 198Mamirauá ...... [1092] 200Mamirauá ...... [1092] 205Mamirauá ...... [1092] 206Mamirauá ...... [1092] 207Mamirauá ...... [1092] 208Mamirauá ...... [1092] 214Santarém ...... [1092] 215Santarém ...... [1092] 216Santarém ...... [1092] 217Santarém ...... [1092] 218Santarém ...... [1092] 219Santarém ...... [1092] 221Santarém ...... [1092] 222Santarém ...... [1092] 224Santarém ...... [1092] 225Santarém ...... [1092] 228Santarém ...... [1092] 229Santarém ...... [1092] 230Santarém ...... [1092] 232Santarém ...... [1092] 233Santarém ...... [1092] 235Santarém ...... [1092]

141 237Santarém ...... [1092] 238Santarém ...... [1092] 239Santarém ...... [1092] 240Santarém ...... [1092] 241Santarém ...... [1092] 242Santarém ...... [1092] 243Santarém ...... T ...... [1092] 244Santarém ...... [1092] 245Santarém ...... [1092] 246Santarém ...... [1092] 247Santarém ...... T ...... [1092] 248Santarém ...... [1092] 249Santarém ...... [1092] 250Santarém ...... [1092] 251Santarém ...... [1092] 252Santarém ...... [1092] 253Santarém ...... [1092] 254Santarém ...... [1092] 255Santarém ...... [1092] 256Santarém ...... [1092] 257Santarém ...... [1092] 259Santarém ...... [1092] 260Santarém ...... T...... G ...... [1092] 261Santarém ...... T ...... [1092] 262Santarém ...... [1092] 263Santarém ...... [1092] 266CCast ...... T ...... [1092] 267CCast ...... [1092] 268CCast ...... [1092] 270CCast ...... [1092] 272CCast ...... [1092] 273CCast ...... [1092] 274CCast ...... [1092] 275CCast ...... [1092] 276CCast ...... [1092] 277CCast ...... [1092] 278CCast ...... [1092] 279CCast ...... [1092] 280CCast ...... T ...... [1092] 281CCast ...... [1092] 282CCast ...... [1092] 283CCast ...... T ...... [1092] 284CCast ...... [1092] 285CCast ...... [1092] 286CCast ...... T ...... [1092] 292Iranduba ...... [1092] 293Iranduba ...... [1092] 294Iranduba ...... [1092]

142 295Iranduba ...... [1092] 297Iranduba ...... [1092] 298Iranduba ...... [1092] 299Iranduba ...... [1092] 300Iranduba ...... [1092] 302Iranduba ...... [1092] 303Iranduba ...... [1092] 304Iranduba ...... [1092] 305Iranduba ...... [1092] 307Barcelos ...... [1092] 308Barcelos ...... [1092] 309Barcelos ...... [1092] 310Barcelos ...... [1092] 311Barcelos ...... [1092] 312Barcelos ...... [1092] 313Barcelos ...... [1092] 314Barcelos ...... [1092] 315Barcelos ...... [1092] 316Barcelos ...... [1092] 317Barcelos ...... [1092] 318Barcelos ...... C. [1092] 320Barcelos ...... [1092] 322Barcelos ...... [1092] 323Barcelos ...... [1092] 324Barcelos ...... [1092] 325Barcelos ...... [1092]

1Campina GAA AAT AAA ATA TTT GCA TAA CTT CCT GCA GCA GTA ACT CAG [1134] 2Campina ...... [1134] 3Catalão ...... G.. ... [1134] 4Catalão ...... G.. ... [1134] 5Catalão ...... G.. ... [1134] 6Catalão ...... G.. ... [1134] 7Catalão ...... G.. ... [1134] 8Catalão ...... G.. ... [1134] 9Purus ...... [1134] 11Purus ...... [1134] 12Purus ...... G.. ... [1134] 14Careiro ..G ...... C. G...... [1134] 16Careiro ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 17Careiro ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 18Careiro ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 19Careiro ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 20NovoAirão ...... G.. ... [1134] 21NovoAirão ...... G.. ... [1134] 22NovoAirão ...... [1134] 23NovoAirão ...... G.. ... [1134] 24Amanã ...... [1134]

143 25Amanã ...... C [1134] 26Amanã ...... [1134] 27Amanã ...... [1134] 33Mamirauá ...... [1134] 34Mamirauá ...... [1134] 35Mamirauá ...... [1134] 39Janauacá ...... [1134] 42Janauacá ...... [1134] 44Janauacá ...... [1134] 45Janauacá ...... [1134] 47Janauacá ...... [1134] 48Janauacá ...... [1134] 49Janauacá ...... G.. ... [1134] 50Janauacá ...... G.. ... [1134] 51Janauacá ...... G.. ... [1134] 52Janauacá ...... G.. ... [1134] 53Janauacá ...... G.. ... [1134] 54Janauacá ...... G.. ... [1134] 56Janauacá ...... [1134] 58Janauacá ...... [1134] 59Janauacá ...... [1134] 60Janauacá ...... [1134] 61Janauacá ...... [1134] 62Janauacá ...... [1134] 63Purus ...... [1134] 66Purus ...... [1134] 67Purus ...... C...... [1134] 68Purus ...... [1134] 69Purus ...... [1134] 71Purus ...... G.. ... [1134] 73Purus ...... G.. ... [1134] 75Purus ...... G.. ... [1134] 77Purus ...... G.. ... [1134] 79Purus ...... [1134] 80Purus ...... G.. ... [1134] 81Purus ...... G.. ... [1134] 82Purus ...... G.. ... [1134] 83Purus ...... [1134] 84Purus ...... [1134] 86Purus ...... [1134] 87Purus ...... G.. ... [1134] 88Purus ...... G.. ... [1134] 89Purus ...... G.. ... [1134] 92StaIsa ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 93StaIsa ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 95StaIsa ...... G.. ... [1134] 96StaIsa ..G ...... C. G...... [1134] 98StaIsa ..G ...... C. G...... [1134]

144 99StaIsa ..G ...... C. G...... C [1134] 100StaIsa ..G ...... C. G...... [1134] 103StaIsa ..G ...... C. G...... [1134] 104StaIsa ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 105StaIsa ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 106StaIsa ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 108StaIsa ..G ...... C. G...... [1134] 109StaIsa ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 111StaIsa ..G ...... C. G...... [1134] 112StaIsa ..G ...... C. G...... [1134] 113StaIsa ...... [1134] 114StaIsa ...... [1134] 115StaIsa ...... [1134] 117BoaVista ...... [1134] 118BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 119BoaVista ..G ...... C. G...... G.. ... [1134] 120BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 121BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 122BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 123BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 124BoaVista ...... [1134] 126BoaVista ...... [1134] 127BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 128BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 129BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 130BoaVista ..G ...... C. G...... [1134] 132StaIsa ...... [1134] 133StaIsa ...... [1134] 134StaIsa ...... [1134] 135StaIsa ...... [1134] 136StaIsa ...... [1134] 137StaIsa ...... [1134] 138StaIsa ...... [1134] 139StaIsa ...... [1134] 140StaIsa ...... [1134] 141Catalão ...... [1134] 142Catalão ...... [1134] 144Catalão ...... [1134] 145Catalão ...... [1134] 146Catalão ...... [1134] 147Catalão ...... [1134] 148Catalão ...... [1134] 149Catalão ...... [1134] 150Catalão ...... [1134] 151Catalão ...... [1134] 152Catalão ...... [1134] 153Catalão ...... [1134] 154Catalão ...... [1134]

145 155Catalão ...... [1134] 156Catalão ...... [1134] 157Catalão ...... [1134] 160Catalão ...... [1134] 161Catalão ...... [1134] 162Catalão ...... [1134] 163Amanã ...... G.. ... [1134] 166Amanã ...... [1134] 167Amanã ...... [1134] 173Amanã ...... [1134] 174Mamirauá ...... [1134] 175Mamirauá ...... [1134] 176Mamirauá ...... [1134] 177Mamirauá ...... [1134] 178Mamirauá ...... [1134] 179Mamirauá ...... [1134] 180Mamirauá ...... [1134] 181Mamirauá ...... [1134] 182Mamirauá ...... [1134] 183Mamirauá ...... [1134] 184Mamirauá ...... [1134] 185Mamirauá ...... [1134] 187Mamirauá ...... [1134] 188Mamirauá ...... [1134] 189Mamirauá ...... [1134] 190Mamirauá ...... [1134] 191Mamirauá ...... [1134] 192Mamirauá ...... [1134] 193Mamirauá ...... [1134] 194Mamirauá ...... [1134] 197Mamirauá ...... [1134] 198Mamirauá ...... [1134] 200Mamirauá ...... [1134] 205Mamirauá ...... [1134] 206Mamirauá ...... [1134] 207Mamirauá ...... [1134] 208Mamirauá ...... [1134] 214Santarém ...... [1134] 215Santarém ...... [1134] 216Santarém ...... [1134] 217Santarém ...... [1134] 218Santarém ...... [1134] 219Santarém ...... [1134] 221Santarém ...... [1134] 222Santarém ...... [1134] 224Santarém ...... [1134] 225Santarém ...... [1134] 228Santarém ...... [1134]

146 229Santarém ...... [1134] 230Santarém ...... [1134] 232Santarém ...... [1134] 233Santarém ...... [1134] 235Santarém ...... [1134] 237Santarém ...... [1134] 238Santarém ...... [1134] 239Santarém ...... [1134] 240Santarém ...... [1134] 241Santarém ...... [1134] 242Santarém ...... [1134] 243Santarém ...... [1134] 244Santarém ...... [1134] 245Santarém ...... [1134] 246Santarém ...... [1134] 247Santarém ...... [1134] 248Santarém ...... [1134] 249Santarém ...... [1134] 250Santarém ...... [1134] 251Santarém ...... [1134] 252Santarém ...... [1134] 253Santarém ...... [1134] 254Santarém ...... [1134] 255Santarém ...... [1134] 256Santarém ...... [1134] 257Santarém ...... [1134] 259Santarém ...... [1134] 260Santarém ...... [1134] 261Santarém ...... [1134] 262Santarém ...... [1134] 263Santarém ...... [1134] 266CCast ...... [1134] 267CCast ...... [1134] 268CCast ...... [1134] 270CCast ...... [1134] 272CCast ...... [1134] 273CCast ...... [1134] 274CCast ...... [1134] 275CCast ...... [1134] 276CCast ...... [1134] 277CCast ...... [1134] 278CCast ...... [1134] 279CCast ...... [1134] 280CCast ...... [1134] 281CCast ...... [1134] 282CCast ...... [1134] 283CCast ...... [1134] 284CCast ...... [1134]

147 285CCast ...... [1134] 286CCast ...... [1134] 292Iranduba ...... [1134] 293Iranduba ...... [1134] 294Iranduba ...... [1134] 295Iranduba ...... [1134] 297Iranduba ...... [1134] 298Iranduba ...... [1134] 299Iranduba ...... [1134] 300Iranduba ...... [1134] 302Iranduba ...... [1134] 303Iranduba ...... [1134] 304Iranduba ...... [1134] 305Iranduba ...... [1134] 307Barcelos ...... [1134] 308Barcelos ...... [1134] 309Barcelos ...... [1134] 310Barcelos ...... [1134] 311Barcelos ...... [1134] 312Barcelos ...... [1134] 313Barcelos ...... [1134] 314Barcelos ...... [1134] 315Barcelos ...... A...... [1134] 316Barcelos ...... [1134] 317Barcelos ...... [1134] 318Barcelos ...... [1134] 320Barcelos ...... [1134] 322Barcelos ...... [1134] 323Barcelos ...... [1134] 324Barcelos ...... [1134] 325Barcelos ...... [1134]

148

Livros Grátis

( http://www.livrosgratis.com.br )

Milhares de Livros para Download:

Baixar livros de Administração Baixar livros de Agronomia Baixar livros de Arquitetura Baixar livros de Artes Baixar livros de Astronomia Baixar livros de Biologia Geral Baixar livros de Ciência da Computação Baixar livros de Ciência da Informação Baixar livros de Ciência Política Baixar livros de Ciências da Saúde Baixar livros de Comunicação Baixar livros do Conselho Nacional de Educação - CNE Baixar livros de Defesa civil Baixar livros de Direito Baixar livros de Direitos humanos Baixar livros de Economia Baixar livros de Economia Doméstica Baixar livros de Educação Baixar livros de Educação - Trânsito Baixar livros de Educação Física Baixar livros de Engenharia Aeroespacial Baixar livros de Farmácia Baixar livros de Filosofia Baixar livros de Física Baixar livros de Geociências Baixar livros de Geografia Baixar livros de História Baixar livros de Línguas

Baixar livros de Literatura Baixar livros de Literatura de Cordel Baixar livros de Literatura Infantil Baixar livros de Matemática Baixar livros de Medicina Baixar livros de Medicina Veterinária Baixar livros de Meio Ambiente Baixar livros de Meteorologia Baixar Monografias e TCC Baixar livros Multidisciplinar Baixar livros de Música Baixar livros de Psicologia Baixar livros de Química Baixar livros de Saúde Coletiva Baixar livros de Serviço Social Baixar livros de Sociologia Baixar livros de Teologia Baixar livros de Trabalho Baixar livros de Turismo