Validación Del Analizador Hematológico Lasercyte En Burros Sanos
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UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FACULTAD DE VETERINARIA VALIDACIÓN DEL ANALIZADOR HEMATOLÓGICO LASERCYTE EN BURROS SANOS TESIS DOCTORAL Carlos Antonio González De Cara -Córdoba 2017- TITULO: VALIDACIÓN DEL ANALIZADOR HEMATOLÓGICO LASERCYTE EN BURROS SANOS AUTOR: Carlos Antonio González De Cara © Edita: UCOPress. 2017 Campus de Rabanales Ctra. Nacional IV, Km. 396 A 14071 Córdoba www.uco.es/publicaciones [email protected] DEPARTAMENTO DE MEDICINA Y CIRUGÍA ANIMAL UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA VALIDACIÓN DEL ANALIZADOR HEMATOLÓGICO LASERCYTE EN BURROS SANOS Carlos Antonio González De Cara Córdoba, 2017 DEPARTAMENTO DE MEDICINA Y CIRUGÍA ANIMAL UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA VALIDACIÓN DEL ANALIZADOR HEMATOLÓGICO LASERCYTE EN BURROS SANOS Memoria de tesis presentada por D. Carlos Antonio González De Cara, Licenciado en Veterinaria por la Universidad de Córdoba, para optar al grado de DOCTOR Los directores: Dr. Alejandro Pérez Écija Dr. Francisco J Mendoza García D. ALEJANDRO PÉREZ ÉCIJA, DOCTOR EN VETERINARIA POR LA UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA, PROFESOR CONTRATADO DOCTOR DEL DEPARTAMENTO DE MEDICINA Y CIRUGÍA ANIMAL DE LA UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA, INFORMA: Que D. Carlos Antonio González De Cara ha realizado bajo mi dirección, en el Departamento de Medicina y Cirugía Animal de la Universidad de Córdoba, el trabajo titulado: “Validación del analizador hematológico Lasercyte en burros sanos”, y que a mi criterio dicho trabajo reúne los méritos suficientes para optar al Grado de Doctor en Veterinaria. Y para que así conste, firma el presente informe en Córdoba, a 13 de marzo de dos mil diecisiete. D. FRANCISCO JAVIER MENDOZA GARCÍA, DOCTOR EN VETERINARIA POR LA UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA, PROFESOR TITULAR DEL DEPARTAMENTO DE MEDICINA Y CIRUGÍA ANIMAL DE LA UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA, INFORMA: Que D. Carlos Antonio González De Cara ha realizado bajo mi dirección, en el Departamento de Medicina y Cirugía Animal de la Universidad de Córdoba, el trabajo titulado: “Validación del analizador hematológico Lasercyte en burros sanos”, y que a mi criterio dicho trabajo reúne los méritos suficientes para optar al Grado de Doctor en Veterinaria. Y para que así conste, firma el presente informe en Córdoba, a 1 de marzo de dos mil diecisiete. “La imaginación es más importante que el conocimiento” Albert Einstein AGRADECIMIENTOS Con estas líneas me gustaría agradecer a todas las personas que han ayudado a que esta Tesis saliera adelante y que, de una manera u otra, han estado a mi lado a lo largo de estos años. En primer lugar agradecer a mis Directores de Tesis, el Prof. Alejando Pérez Écija y el Prof. Javier Mendoza por su dedicación y paciencia conmigo, por haberme transmitido la ilusión y la pasión por la investigación, sin ellos este trabajo habría sido imposible. Gracias al Prof. Mariano Herrera, mi maestro y mi amigo, gracias por haber confiado en mí desde que entré en la Facultad, gracias por haberme dado un sin fin de oportunidades para mi desarrollo profesional y personal, gracias por haber sido y ser mi maestro. A mi compañero, amigo y hermano Raúl, por aguantarme en los días buenos y sobre todo en los días malos en los que mi sangre “granaina” aflora…a Cristina, por enseñarme el valor de una amistad, por cuidar de mis pequeños como si fueran suyos y por darme una sonrisa siempre que lo he necesitado. A Marta y Luis por estar siempre ahí presentes, apoyándome en mis íres y devenires. Agradecer por supuesto a mi familia, sin los que no podría haber hecho nada de lo que he hecho. En especial a los que no están y tanto echo de menos; a mi Padre por haberme dado su cabezonería, por enseñarme la honestidad y buen hacer de las cosas, por apoyarme siempre y darme la confianza con la que salir siempre con la cabeza por delante. A mi abuela María, por su amor y paciencia, por esas tardes de historias y por creer en Saeta cuando nadie lo hacía. A mi tío Valero, que me enseñó a apreciar el trabajo con los animales y junto a mi tío Antonio me hicieron cambiar el miedo a dedicación y pasión por los caballos. A mi madre, Encarna, porque los que la conocen saben de lo que hablo, de una chispa vital que te incita al movimiento y no te deja parar ni un solo segundo, gracias por no dejarme caer…. y por recogerme cuando lo he hecho…, gracias por tus consejos y tu apoyo incondicional. Y por supuesto, a mis hermanos y sobrinos, por ser fuente de motivación y apoyo en todo momento. Finalmente y no menos importante, a ti Almudena por tu cariño y comprensión, por aguantarme y apoyarme, sobre todo estos últimos meses. ÍNDICE I. RESUMEN 15 II. ABSTRACT 17 III. INTRODUCCIÓN 21 IV. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 27 Capítulo 1. Principios de hematología veterinaria. 29 • 1.1. Eritrocitos. 29 • 1.2. Leucocitos. 43 • 1.3. Plaquetas. 54 Capítulo 2. Técnicas de análisis hematológico. 59 • 2.1. Examen macroscópico de la muestra. 61 • 2.2. Determinación del hematocrito mediante centrifugación. 62 • 2.3. Examen citológico del frotis sanguíneo. 64 • 2.4. Contajes celulares manuales. 74 • 2.5. Fórmula diferencial leucocitaria. 76 • 2.6. Determinación de la hemoglobina. 79 • 2.7. Examen de médula ósea. 80 • 2.8. Analizadores automáticos. 80 • 2.9. Validación y estandarización de técnicas y equipos laboratoriales. 98 • 2.10. Comparación de técnicas y equipos laboratoriales. 112 • 2.11. Estudios comparativos del rendimiento de equipos hematológicos en veterinaria. 120 Capítulo 3. Diferencias entre burros y caballos. 130 • 3.1. Diferencias genéticas. 131 • 3.2. Diferencias morfológicas y anatómicas. 132 • 3.3. Diferencias fisiológicas. 133 • 3.4. Diferencias farmacológicas y terapéuticas. 137 V. AIMS 141 VI. MATERIALES Y MÉTODOS 145 1. Selección de los animales. 147 2. Toma de muestras. 152 3. Procesamiento de las muestras. 153 4. Estudio hematológico manual. 154 5. Estudio hematológico mediante analizador de impedancia. 163 6. Estudio hematológico mediante LaserCyte. 165 7. Validación del sistema LaserCyte en muestras de burros. 166 8. Estudio morfométrico de leucocitos asnales. 176 9. Análisis estadístico. 178 VII. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 181 1. Selección de los Animales. 183 2. Estudio Hematológico Manual. 186 3. Estudio Hematológico mediante analizador de impedancia. 197 4. Estudio hematológico mediante LaserCyte. 203 5. Validación del sistema LaserCyte en muestras de burros. 210 6. Estudio morfométrico de leucocitos asnales. 247 VIII. CONCLUSIONS 253 IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 257 ACRÓNIMOS Y ABREVIATURAS µl Microlitro µm Micrómetro AEFA Asociación Española de Farmacéuticos AINEs Antiinflamatorios no esteroideos Bas Basófilo BCS Body condition score BFU-Es Burst forming unit-erythroid Cel Célula CFU-E Colony forming unit-erythroid CID Coagulación intravascular diseminada CLIA Clinical Laboratory Improvements Amendments guidelines CLSI Clinical Laboratory Standards Institute CV Coeficiente de variación DE Desviación estándar de la media dL Decilitro EDTA Ácido etilendiaminotetraacético Eos Eosinófilo ET Error total fL Femtolitro Gr Gramos Hb Hemoglobina HCT Hematocrito IFCC International Federation of Clinical Chemists IM Intramuscular IV Intravenoso Kg Kilogramos LAE o ALE Límites de error aceptables de Tonks L Litro Lym Linfocitos MCH Mean corpuscular hemoglobin MCHC Mean corpuscular hemoglobin concentration MCV Mean corpuscular volume mg Miligramos mm2 Milímetros cuadrados Mono Monocitos MPC Mean platelet component MPV Mean platelet volume Neu Neutrófilo nm Nanómetro OIE Organización Mundial de Sanidad Animal PCDW Platelet component distribution width. PCT Plaquetocrito PCV Packed cell volume PDW Platelet distribution width Pg Picogramos Plt Plaquetas PO Posología oral QGI Quality goal index RAIA Registro Andaluz de Identificación Animal RBC Red blood cell count RDW Red blood cell distribution width SC Subcutáneo SEHH Sociedad Española de Hematología y Hemoterapia SEQC Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular TEmax o TEa Error total admisible TEc Error total calculado UI Unidad internacional VCM Volumen eritrocitario medio VLDLs Very low density lipoproteins WBC White blood cell count I. RESUMEN Resumen Los burros tienen un papel central en la economía de países en desarrollado, siendo utilizados como medio de transporte, animales de carga y en labores agrarias. Más recientemente, esta especie también está siendo utilizada como mascota, así como en actividades de asinoterapia o para producción de leche. Debido a la escasa investigación en medicina asnal, muchos clínicos extrapolan rangos de referencia y datos publicados para caballos en burros. Este acercamiento se ha demostrado marcadamente erróneo, pudiendo conllevar graves errores diagnósticos, tratamientos inadecuados o innecesarios, así como aumentando un gasto injustificado para el dueño. El análisis hematológico es una de las bases del examen clínico inicial en cualquier paciente veterinario, siendo esencial establecer rangos de referencia especie-específicos y adaptados a la edad, sexo, raza, localización geográfica y equipamiento utilizado para dicha evaluación hematológica. Los analizadores automáticos hematológicos con tecnología láser son uno de los últimos avances en medicina veterinaria, permitiendo una mayor rapidez y fiabilidad en los parámetros obtenidos que los equipos basados en impedancia o las técnicas de estudio hematológico manual. Los objetivos de esta tesis doctoral fueron estudiar los resultados hematológicos en una amplia población de burros de Andalucía, determinar el nivel de acuerdo entre técnicas para esta especie y validar los resultados obtenidos con el equipo LaserCyte (analizador de tipo láser) en