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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA, BIODIVERSIDADE E CONSERVAÇÃO DELIMITAÇÃO DE ESPÉCIES NO GÊNERO Phyllodytes (AMPHIBIA, ANURA, HYLIDAE): UM CASO DE TAXONOMIA INTEGRATIVA PPGGBC Jequié Março, 2015 ANA PAULA BARBOSA NASCIMENTO DELIMITAÇÃO DE ESPÉCIES NO GÊNERO Phyllodytes (AMPHIBIA, ANURA, HYLIDAE): UM CASO DE TAXONOMIA INTEGRATIVA Dissertação de mestrado apresentado ao Programa de Pós-Graduação em Genética, Biodiversidade e Conservação da Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, como requisito finalpara aobtenção do grau de Mestre em Genética, Biodiversidade e Conservação. Orientadora: Profº Dra. Caroline Garcia Co-orientadora: Profº Dra. Juliana Zina Co-orientadora: Dra. Lorena Nunes PPGGBC Jequié Março, 2015 Jequié, 27 de Março de 2015. BANCA EXAMINADORA Profa. Drª. Caroline Garcia (Orientadora) – UESB / Jequié ________________________________ Profa. Dra. Soraia Barreto A. Fonteles–UFRB / Cruz das Almas _______________________________ Profa. Dra. Débora Diniz – UESB / Jequié ________________________________ PPGGBC PPGGBC À minha família pelo amor incondicional. AGRADECIMENTOS Agradeço, À UESB e ao Programa de Pós-Graduação em Genética, Biodiversidade e Conservação, pela oportunidade, em especial agradeço aos motoristas Valdisnei, Reinaldo (Show), Tiago e Jhon pelas divertidas saídas de campo e pelas histórias mais inusitadas; AoPrograma de Formação de Recursos Humanos – Petrobras 211 pela concessão da bolsa; Às minhas orientadoras Profa. Dra. Caroline Garcia, Profa. Dra. Juliana Zina e Profa. Dra. Lorena Nunes, pelo exemplo de profissionais, por me ensinarem a trilhar o caminho científico e pelo cuidado muitas vezes de “mãe”. As palavras nunca serão suficientes para descrever minha gratidão. À minha família, em especial minha MÂE por todo esforço depositado a mim privando das suas vontades para que as minhas prevalecessem, a minha irmãzinha, aos meus tios, primos e avós por entenderem minhas ausências, pelo incentivo e por me ensinarem a ser uma pessoa melhor com as palavras mais humildes e sábias possíveis. A Daniel, por extrair de mim os melhores risos e despertar em mim sonhos esquecidos, pela companhia e por silenciar meu turbilhão de pensamentos cantando lindamente pra mim. Aos meus colegas/irmãos de laboratório e de campo, especialmente: Gabriel Novais (pelas enumeras ajudas), Fernando Silva (que segue a risca a palavra “Irmão”), Vanderlan, Marcelle, Luciana, Ramon, Isabella e Michael. À Profa Maria Cecília por mediar minhas saídas de campo no PESC sempre tão solícita, aos salva-parque por me auxiliarem tanto no PESC quanto na Reserva da Natura. Ao diretor do Museu de Biologia Prof. Mello Leitão o senhor Hélio de Queiroz Boudet Fernandes, a curadora do museu Luisa Maria Sarmento Soares e o estagiário do setor de zoologiaAlexander Tamanini MônicoPPGGBC por disponibilizares os exemplares de Phyllodytes luteolus. Aos professores e colegas do programa, pelos ensinamentos e bons exemplos e por tornar meus dias em Jequié mais leves. A Deus, acima de tudo, pois sem Ele, a concretização de mais um plano seria impossível. Enfim, a todos que participaram direta ou indiretamente desse trabalho, muito obrigada! BIOGRAFIA Ana Paula Barbosa Nascimento, filha de Paulo da Cruz Pereira Nascimento e Maria da Piedade Barbosa Nascimento, nasceu em Bom Jesus da Lapa-Bahia aos 11 dias do mês de Setembro de 1990. Estudou nas escolas Batista e no Centro Integrado de Ensino Continuado, onde concluiu o ensino médio, no ano de 2007, aos 17 anos. A inquietude de criança misturada à curiosidade exacerbada a fizeram bióloga desde criança, aos 18 anos quando foi aprovada na Faculdade de Ciências Biológicas na Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia parte desse sonho começou a se concretizar. Desde então, passou a morar no município de Jequié-Bahia. Já no ensino superior, participou do Grupo de Herpetologia, nos laboratórios de Vertebrados e Citogenética da UESB, onde os primeiros alicerces científicos foram construídos para a elaboração de trabalhos e produção da monografia intitulada: Biologia reprodutiva, caracterização cromossômica e morfológica de Hypsiboas crepitans (Anura: Hylidae) do sudoeste baiano, orientada pela Profa. Drª. Juliana Zina. Em 2013 formou-se Bacharel em Ciências Biológicas com Ênfase em Genética. Em seguida, foi aprovada no Programa de Pós-Graduação em Genética, Biodiversidade e Conservação, onde, em conjunto com Profa. Dra. Caroline Garcia, desenvolveu projeto de pesquisa relacionado à taxonomia integrativa como ferramenta de identificação em anuros. Está concluindo, em 2015, o mestrado, aos 24 anos de idade. PPGGBC PPGGBC “Um pouco de ciência nos afasta de Deus. Muito, nos aproxima”. Louis Pasteur RESUMO Atualmente, a taxonomia está passando por um contexto crítico devido ao enorme contingente de espécies que por algum motivo foram categorizadas erroneamente. Assim, a taxonomia integrativa, na qual diferentes ferramentas são aplicadas com o intuito de melhor definir as espécies, vem se tornando atrativa. Diante de propostas taxonômicas controversas e presença de poucos dados para uma análise diagnóstica robusta testamos o potencial de evidências múltiplas utilizando dados citogenéticos, morfométricos e bioacústicos na distinção de espécies do gênero Phyllodytes. As coletas foram realizadas em cinco localidades do estado da Bahia e fotografias foram tiradas de machos depositados em museu no Espírito Santo, sendo que no total foram analisados quatro espécies de Phyllodytes(P. luteulos, P. melanomystax, Phyllodystessp.1 e Phyllodytes sp. 2) totalizando 100 exemplares. Para as análises morfométricas seis marcos anatômicos foram utilizados e permitiram visualizar diferenças intra e interespecíficas. Com relação às análises citogenéticas as espécies Phyllodytes sp.1 e P. melanomystax diferiram quanto ao número diploidee posicionamento das Regiões Organizadoras de Nucléolos (RONs)deP.luteolus e Phyllodytes sp.2. Além disso, o bandamento C apresentou padrões diferenciados permitindo ainda a identificação de três padrõespara o gênero. Osparâmetros acústicos analisadosdiferenciaram as espécies quanto à duração do canto, número de notas e estrutura do canto. Os resultados obtidos permitiram caracterizar e diferenciar com confiança as espécies de Phyllodytes analisadas. Embora cada ferramenta apresente limitações em algum nível, uma abordagem integrativa utilizando ferramentas citogenéticas, bioacusticas e morfométricas mostrou-se efetiva na delimitação das espécies estudadas. Dessa forma, sugerimos que estudos dessa natureza sejam expandidos tanto para outros grupos de anuros, como para outros grupos animais. Palavras-chave: Bioacústica,PPGGBC diversidade criptica e morfometria geométrica. ABSTRACT Currently, the taxonomy is going through a critical context due to the huge number of species that for some reason were categorized incorrectly. Thus, the integrative taxonomy, in which different tools are applied in order to better define the species, is becoming attractive. Before controversial taxonomic proposals and presence of few data for a robust diagnostic analysis tested the potential of multiple evidence using cytogenetic, morphometric data and bioacoustic the distinction of Phyllodytes genus. Samples were collected at five locations in the state of Bahia and photographs were taken of males deposited in museum in the Espírito Santo, and in total we analyzed four species Phyllodytes (P. luteulos, P. melanomystax, Phyllodystes sp.1 and Phyllodytes sp.2) totaling 100 copies. For morphometric analyzes six anatomical landmarks were used and allowed us to visualize intra and interspecific differences. Regarding cytogenetic analyzes the Phyllodytes sp.1 species and P. melanomystax differed on the diploid number and positioning of the Regions Organising of nucleoli (RONs) of P.luteolus and Phyllodytes sp.2. Furthermore, the C-banding showed different patterns still allowing the identification of three patterns for the genre. The acoustic parameters analyzed differentiate the species as the length of the corner, number of notes and structure of the corner. The results allowed to characterize and differentiate with confidence species Phyllodytes analyzed. Although each tool displays limitations on some level, an integrative approach using cytogenetic tools, bioacoustic and morphometric proved to be effective in the delimitation of species. Thus, we suggest that such studies are expanded to other frogs both groups, as forother animal groups. Keywords: Diversity bioacoustic, diversity ciptica e morphometric geometric, PPGGBC LISTA DE FIGURAS Figura 1. Marcos anatômicos utilizados nas análises morfométricas. Em evidência um exemplar de Phyllodytes luteolus. Figura 2.Cariótipos submetidos a coloração convencional com Giemsa: a) P.luteolus - Ilhéus b) Phyllodytes sp.2 c) P. luteolus – Barragem d) Phyllodytes sp.1 - PESC e) Phyllodytes sp.1 – Reserva Particular da Natura f) Phyllodytes sp.1 – Barra Grande g) Phyllodytes melanomystax - Reserva Particular da Natura. Em destaque os cromossomos nucleolares submetidos à impregnação por nitrato de prata. Figura 3.Cariótipos submetidos a bandamento C de: a) P.luteolus - Ilhéus b) Phyllodytes sp.2 - PESC c) Phyllodytes sp.1 - PESC d) Phyllodytes sp.1 – Reserva Particular da Natura e) Phyllodytes melanomystax - Reserva Particular da Natura. Figura 4.Representação dos dados obtidos através da análise dos índices de variância de cada Componente Principal (PCA) entre as quatro espécies do gênero Phyllodytes. Em destaque as grades de deformação evidenciando