Universidade Federal Do Rio Grande Do Sul Faculdade De Farmácia Programa De Pós-Graduação Em Ciências Farmacêuticas
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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE FARMÁCIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS CONSTITUIÇÃO QUÍMICA, AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE IMUNOADJUVANTE E ESTUDOS DE PROPAGAÇÃO DE QUILLAJA BRASILIENSIS Juliane Deise Fleck Porto Alegre, 2007 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE FARMÁCIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS CONSTITUIÇÃO QUÍMICA, AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE IMUNOADJUVANTE E ESTUDOS DE PROPAGAÇÃO DE QUILLAJA BRASILIENSIS Tese apresentada por Juliane Deise Fleck para obtenção do TÍTULO DE DOUTOR em Ciências Farmacêuticas Orientadora: Profa. Dr. Grace Gosmann Co-orientadores: Prof. Dr. Arthur Germano Fett-Neto Prof. Dr. Paulo Michel Roehe Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, em nível de Doutorado – Pesquisa e Desenvolvimento de Matérias-Primas Farmacêuticas – da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e aprovada em 31.07.2007, pela Banca Examinadora constituída por: Prof. Dr. Amauri Braga Simonetti Universidade Federal do Rio Grande do Sul Prof. Dr. Giancarlo Pasquali Universidade Federal do Rio Grande do Sul Prof. Dr. Jarbas Alves Montanha Universidade Federal do Rio Grande do Sul Prof. Dr. Paulo Mazzafera Universidade de Campinas F593c Fleck, Juliane Deise Constituição química, avaliação da atividade imunoadjuvante e estudos de propagação de quillaja brasiliensis / Fleck, Juliane Deise – Porto Alegre : UFRGS, 2007. - xxii, 121 p.: il. Tese (Doutorado). UFRGS. Faculdade de Farmácia. Programa de Pós- Graduação em Ciências Farmacêuticas. 1. Quillaja brasiliensis : Saponinas. 2. Pau-sabão. 3. Rosaceae. 4. Cromatografia líquida de alta eficiência. 4. Atividade adjuvante. 5 MIcropropagação. I. Gosmann, Grace. II. Fett-Neto, Arthur Germano. III. Roehe, Paulo Michel. IV. Título. CDU: 615.2.011:582.972 Bibliotecária responsável: Margarida Maria Cordeiro Fonseca Ferreira, CRB 10/480 Esta tese foi realizada por meio de promoção antecipada e diretamente do mestrado para o doutorado. O projeto foi desenvolvido no laboratório de Fitoquímica (105) do Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas da Universidade Federal do Rio Grande do Sul; no laboratório de Virologia do Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, em Eldorado do Sul, e no laboratório de Fisiologia Vegetal do Departamento de Botânica e Centro de Biotecnologia da UFRGS. O suporte financeiro para o desenvolvimento deste trabalho foi obtido junto à Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). AGRADECIMENTOS À Grace pela orientação, apoio, confiança e constante incentivo pessoal e profissional desde a iniciação científica. Ao Arthur por abrir as portas do laboratório para mim, tornando-me parte da equipe. Pela orientação, dedicação, confiança e estímulo. Ao Professor Paulo Roehe e toda equipe do laboratório de Virologia do IPVDF pela acolhida no laboratório, confiança e colaboração. À amiga Simone Quintana de Oliveira pela amizade no completo e verdadeiro sentido da palavra. Si, obrigado por estar sempre presente em todos os momentos, compartilhando alegrias e dificuldades. Ao Flávio, pelo exemplo de dedicação e amor à pesquisa, pela colaboração e ensinamentos desde a iniciação científica. À amiga Simone Gnoatto pelo carinho e sincera amizade, compartilhando alegrias e angústias, sempre com uma palavra de estímulo. Si e Edlus obrigado pela confiança e pela moradia durante boa parte deste Doutorado. Ao Claiton, meu amigo de sempre, pelo companheirismo, amizade, apoio e incentivo. Às minhas pupilas, Anna Carolina e Fernanda, pelo incansável auxílio, pela amizade, alegria, dedicação e paciência. Aos colegas e ex-colegas do laboratório de Fitoquímica, em especial Everton, Gisele, Gustavo, Luciana, Andressa, Franciele, Letícia, Luana, Manuela e Mariana Cardoso, pela colaboração, amizade e bons momentos. À Carla, por termos dividido expectativas, angústias e alegrias no início deste trabalho, durante a iniciação científica. À Joséli, minha grande amiga, obrigado pela paciência em me ensinar tudo no laboratório de Fisiologia Vegetal, pelo carinho, companheirismo e sincera amizade. À Professora Janete Palma Fett e aos colegas do laboratório de Fisiologia Vegetal, em especial Carol, Daniel, Denílson, Denise, Diogo, Felipe, Guilherme, Kelly, Luciano, Márcia, Marta, Naíla, Paloma, Raul, Ricardo, Tati Boff e Vari, por terem me recebido de braços abertos, tornando-me parte do grupo. Obrigado por estarem sempre prontos para me ajudar e ensinar. Vari, Dani, Denílson e Diogo obrigado pelo incansável auxílio nas coletas. Joséli, Carol e Márcia obrigado pela imensa ajuda nos experimentos. À Professora Dr. Teresa Dalla Costa e ao seu grupo de pesquisa pelo empréstimo do equipamento de CLAE e da centrífuga de Eppendorf®, sem os quais não seria possível realizar este estudo. Ao Professor Dr. Gilson Moreira por permitir os dois anos de coleta em sua propriedade, pela identificação botânica e pela atenção e amabilidade com as quais sempre nos recebeu. À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pelo apoio financeiro. Ao seu Nelson e à dona Sônia por sempre me estimularem e apoiarem, vocês são como pais para mim. Aos meus pais, Liane e Moacir, pelo amor, carinho, apoio e estímulo em todos os momentos. Mãe e pai, obrigado por tudo o que fizeram e ainda fazem por mim. Ao Xandi, pelo amor, carinho, dedicação, apoio e incentivo em todos os momentos. Por estar sempre ao meu lado, por me compreender, enfim obrigado por tudo. vi SUMÁRIO LISTA DE TABELAS ....................................................................................................xi LISTA DE FIGURAS .....................................................................................................xiii LISTA DE ABREVIATURAS.........................................................................................xvii RESUMO.......................................................................................................................xix ABSTRACT...................................................................................................................xxi CAPÍTULO I. INTRODUÇÃO GERAL ..........................................................................01 1. INTRODUÇÃO ..........................................................................................................03 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA ......................................................................................06 2.1 Quillaja brasiliensis..................................................................................................06 2.1.1 Aspectos botânicos de Q. brasiliensis ..................................................................06 2.1.2 Constituição Química de Q. brasiliensis ...............................................................07 2.1.3 Ensaios Biológicos com Q.brasiliensis .................................................................08 2.2 Quillaja saponaria....................................................................................................08 2.2.1 Constituição Química de Q.saponaria ..................................................................08 2.2.2 Atividades Farmacológicas de Q. saponaria ........................................................11 2.2.2.1 Quil-A®...............................................................................................................12 2.2.2.2 QS-21 ................................................................................................................13 2.2.2.3 ISCOM...............................................................................................................15 2.2.2.4 Mecanismo de Ação ..........................................................................................16 2.2.2.5 Estudos de Relação Estrutura-Atividade ...........................................................17 2.2.2.6 Vacinas Comerciais Contendo ISCOMs............................................................19 2.3 REFERÊNCIAS .......................................................................................................20 3. OBJETIVOS ..............................................................................................................27 4. CONTEÚDOS ABORDADOS....................................................................................28 CAPÍTULO II. ESTUDO QUÍMICO DE QUILLAJA BRASILIENSIS.............................29 1. INTRODUÇÃO ..........................................................................................................31 2. MATERIAIS E MÉTODOS.........................................................................................34 2.1 Procedimentos Gerais .............................................................................................34 2.2 Material Vegetal.......................................................................................................34 2.3 Obtenção do Extrato Aquoso e da Fração Purificada..............................................35 2.4 Análise Cromatográfica do Extrato Bruto e da Fração QB-90 .................................35 2.5 Obtenção do Extrato Aquoso para Análises por CLAE ...........................................36 2.6 Desenvolvimento do Método de Análise Quantitativa da Fração QB-90 por CLAE.36 2.6.1 Condições Cromatográficas .................................................................................36 2.6.2 Validação..............................................................................................................36