Influence of Fruit Ripening of Arbutus Xalapensis Kunth on the Germination of Seeds and Zigotyc Embryos

Home , Arbutus unedo, Arbutus xalapensis

Núm. 37, pp. 79-92, ISSN 1405-2768; México, 2014

INFLUENCIA DE LA MADURACIÓN DEL FRUTO DE ARBUTUS XALAPENSIS KUNTH SOBRE LA GERMINACIÓN DE SEMILLAS Y EMBRIONES CIGÓTICOS

INFLUENCE OF FRUIT RIPENING OF ARBUTUS XALAPENSIS KUNTH ON THE GERMINATION OF SEEDS AND ZIGOTYC EMBRYOS

Violeta Tovar-Rocha, Ma. del Carmen Rocha-Granados y Patricia Delgado-Valerio Facultad de Agrobiología “Presidente Juárez”, Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Av. Lázaro Cárdenas s/n, esq. Berlín. Col. Viveros. CP 60190. Uruapan, Mich. Correo electrónico:[email protected]

RESUMEN mayor número de semillas con embriones desarrollados y con una mayor germinación En este trabajo se determinó el efecto del (7.6 a 8.8 semillas/unidad experimental). Se estado de maduración del fruto en la ger- propone el uso de semillas provenientes de minación in vitro de semillas y embriones frutos de los estados de maduración 5 al 10 cigóticos de Arbutus xalapensis Kunt. Se para la germinación adecuada de semillas de colectaron frutos de 10 árboles en cada madroño, mientras que para los embriones uno de los dos sitios de estudio y se clasi- cigóticos es necesario realizar estudios de ﬁ caron según su tamaño y peso dentro de prueba de medios de cultivo para su ger- tres grupos caracterizados por el color del minación. fruto: 1 a 6 frutos verde oscuro (FVO), 7 y 8 frutos verde-amarillo (FVA), y 9 y 10 Palabras clave: clasificación de frutos, frutos naranja-rojizo (FNR). De cada estado embriones, germinación, madroño, micros- se seleccionaron 50 semillas y se colocaron copia, semillas. en medio MS para evaluar su germinación. El experimento se repitió dos veces y los ABSTRACT resultados obtenidos fueron sometidos a un análisis de comparación de medias de The aim of this study was to determine Tukey el cual indicó que los tres grupos the effect of fruit ripeness of in vitro ger- de frutos presentan características de peso mination of seeds and zygotic embryos fresco y diámetro diferentes (P ≤ 0.05), of Arbutus xalapensis Kunth. Fruits were con un promedio de 6.3 g y de 0.21 mm collected from 10 trees in each of the two para FVO, 9.5 g y 0.46 mm para FVA y study sites and were classified according 10.8 g y 0.70 mm para FNR. El análisis de to their size and weight in 10 states into microscopía estereoscópica demostró que three groups characterized by the color of todos los estados de maduración presentan the fruit: 1 to 6 dark green fruits (DGF), 7 semillas y embriones; los estados 1 al 4 and 8 yellow-green fruits (YGF) and 9 and presentan embriones no desarrollados, y en 10 orange-red fruits (ORF). 50 seeds of los estados 5 al 10 los frutos contienen un each state were selected and placed on MS

79 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014 medium to evaluate their germination. The Pérez, 1993; Comisión Forestal del Estado experiment was repeated two times and the de Michoacán, 2009). Arbutus xalapensis results were submitted to Tukey’s analysis pertenece a la familia Ericaceae, es un árbol of mean comparison which indicated that the de 10 a 20 metros de altura, perennifolio, three groups have different characteristics cuyo tronco y ramas poseen corteza amari- related to fresh weight and diameter (P ≤ llento-rojiza, delgada, lisa y frecuentemente 0.05), with an average of 6.3 g and 0.21 mm exfoliante, sus frutos son en forma de baya for DGF, 9.5 g and 0.46 mm for YGF and globosa con el pericarpio granular, 5-locu- 10.8 g and 0.70 mm for ORF. The stereomi- lar y tienen varias semillas (Hernández et croscopic analysis showed that all states al., 1991). Se distribuye en los estados de have seed maturation and embryos; states Chihuahua, Nuevo León, Durango, Sinaloa, one to four embryos have developed, and Jalisco, Oaxaca, Michoacán, San Luis Poto- in the states 5 to 10, fruits contain a greater sí, Guanajuato, Hidalgo, Puebla, Tlaxcala y number of seeds with embryos developed Veracruz. Forma parte del matorral xerófi lo, and higher germination (7.6 to 8.8). There- de los bosques de pino-encino o de encino fore, is proposed the use of ripening fruit sólo (González y González, 1992). Sin from stages 5 to 10 for right germination of embargo, actualmente sus poblaciones han seeds of strawberry tree, while for zygotic disminuido presentando una distribución embryos is necessary to carry out studies of restringida y fragmentada, lo cual ha sido culture media for its germination. originado por diferentes factores como son la sobreexplotación de su madera, el sobre- Key words: classifi cation of fruit, embryos, pastoreo y la presencia de plagas forestales, germination, strawberry tree, microscopy, y como consecuencia, se tiene una disminu- seeds. ción en la producción de frutos y semillas, lo cual implica una baja regeneración y con INTRODUCCIÓN ello la pérdida del material genético nativo de esta especie (INAFED, 2009). Por tanto, Michoacán es una región maderera muy re- es de una importancia inmediata realizar conocida a nivel nacional por la elaboración estudios que permitan proponer metodolo- de artesanías, la cual es una tradición que gías de propagación vegetal efi cientes para se ha practicado desde tiempos remotos y salvaguardar este recurso. que actualmente es fuente de ingresos para una gran parte de su población (Rzedowski, A pesar de que el madroño es una especie 1985). Para dicha práctica se emplean es- de importancia ecológica y económica, pecies como Alnus arguta (Schltdl.) Spach hasta el momento ha sido poco estudiada. (aile), Tilia mexicana Schlechtendal (ciri- Por ejemplo, se ha visto que en especies mo) y Platymiscium lasiocarpum Sandwith cercanamente relacionadas a madroño como (granadillo) que se aprecian y usan para la Arbutus unedo L., se presentan problemas confección de guitarras, y Arbutus xala- de germinación debido a que la pulpa del pensis Kunth (madroño) la cual presenta fruto contiene inhibidores (proteasas) que excelentes cualidades para la fabricación hacen que los frutos que caen al suelo per- de artículos torneados y/o artesanales manezcan en él por un largo periodo hasta (Guridi, 1981; Rzedowski, 1985, 2006; que se desintegran, y a menos de que las

80 Tovar-Rocha, V. et al.: Infl uencia de maduración del fruto de A. xalapensis sobre germinación de semillas y embriones semillas sean separadas de la pulpa del fruto MATERIAL Y MÉTODOS no germinan (Narbona et al., 2003). Las plántulas que logran germinar no toleran Sitios de estudio el estrés por sequía durante el verano en sitios expuestos, por lo que su estableci- Primero, se hizo una revisión bibliográfi ca miento se restringe a zonas con una densa para conocer las zonas de distribución de la vegetación (Mesleard y Lepart, 1991). Para especie. Se exploraron cuatro sitios en los A. xalapensis Kunth no existen estudios que municipios de Uruapan, Pátzcuaro, Quiroga corroboren este comportamiento, siendo y Zacapu, de los que se seleccionaron dos más estudiada a nivel de la calidad de la sitios representativos de la especie con madera y sobre el efecto de los factores un mayor número de árboles maduros, ambientales (temperatura y estrés hídrico) reproductivos y con presencia de frutos. en su adaptabilidad y evolución (Aguilar y El primer sitio está ubicado cerca de la Barajas, 2005). Sólo existen dos estudios localidad de San Miguel Charahuén, mu- muy generales sobre el efecto que tiene la nicipio de Pátzcuaro (N 19°00’19.5” y W calidad de semilla o el grado de maduración 101°51’05.2’’, altitud de 1 990 m.s.n.m.), y del fruto sobre su germinación; uno de ellos el segundo sitio en San Jerónimo, municipio es el de Nokes (1986), en donde señala que de Quiroga (N 19°41’46” y W 101°35’37.3”, esta especie se multiplica mediante semilla altitud de 2 199 m.s.n.m.) (fi g. 1). Los sitios fresca obtenida de frutos bien maduros pertenecen al bosque templado frío donde con lo cual se asegura un alto porcentaje se encuentran principalmente Pinus, Abies, de germinación. Mientras que el segundo Quercus, Cupressus, Alnus y Arbutus (Rze- estudio es sobre reproducción asexual de A. dowski, 2006). xalapensis Kunth, la cual se logra utilizando estacas juveniles colocándolas en una cáma- Material vegetativo ra humedad a una temperatura de 24 a 28ºC (Tipton, 1988). Un estudio reciente en don- La colecta se realizó durante los meses de de se hace una clasifi cación de frutos es el mayo a junio (2010 y 2011), periodo en el realizado por Kaur y colaboradores (2009), que el madroño está en su fase de fructifi - quienes analizaron frutos de Chlorophytum cación. Se colectaron racimos de frutos borivilianum (planta herbácea originaria en distintos estados de maduración de 10 de la India) agrupándolos según su color y árboles reproductivos para cada uno de los tamaño. Debido a la importancia que guarda dos sitios. Los racimos fueron colocados en el estado de desarrollo de los embriones bolsas de papel de estraza, etiquetándolas cigóticos en estudios morfogenéticos in con el sitio y fecha de colecta, los cuales vitro de plantas leñosas, el objetivo de este fueron almacenados en el laboratorio de Fi- trabajo fue determinar el estado óptimo de siología Vegetal de la Facultad de Agrobio- maduración del fruto de Arbutus xalapensis logía “Presidente Juárez” de la Universidad para la germinación in vitro de semilla y Michoacana de San Nicolás de Hidalgo para embriones cigóticos. su posterior procesamiento y análisis.

81 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014 : 1. San Miguel Charahuén municipio de Pátzcuaro, Arbutus xalapensis y 2. San Jerónimo municipio de Quiroga, Michoacán. ca de los sitios colecta ﬁ Ubicación geográ Fig. 1.

82 Tovar-Rocha, V. et al.: Inﬂ uencia de maduración del fruto de A. xalapensis sobre germinación de semillas y embriones

Desinfección de la semilla semillas y embriones y poder observarlos en un microscopio compuesto (Leica DM Para la desinfección de las semillas se hicie- 1000) a aumentos de 20X y 40X, esto con ron lavados de los frutos con jabón líquido la fi nalidad de corroborar el grado de desa- y agua corriente, enseguida se colocaron en rrollo de las semillas y de sus respectivos una solución con jabón en polvo más 1 g L-1 embriones para cada uno de los 10 estados de Agrimicin® por espacio de 30 min en agi- establecidos anteriormente. tación, se enjuagaron con agua corriente y se procedió a su desinfección en una campana Germinación de fl ujo laminar. Los frutos fueron colocados en etanol al 70% v/v por 45 segundos y pos- Los experimentos de germinación se hi- teriormente en una solución desinfectante de cieron con 50 semillas de los estados de hipoclorito de sodio (Cloralex®) al 40% por maduración del 5 al 10, correspondiendo a 30 min adicionado con Tween 20 al 0.1%. los frutos de los tres grupos de maduración: Finalmente, se enjuagaron de tres a cinco frutos inmaduros estados 5 y 6 (FVO), frutos veces con agua destilada estéril, condiciones intermedios estados 7 y 8 (FVA) y frutos en las cuales se pudo obtener un 95% de maduros estados 9 y 10 (FNR), mientras semillas estériles, encontrándose que a me- que para las pruebas de germinación de nor concentración del desinfectante o menor embriones cigóticos se utilizaron 50 embrio- tiempo de desinfección de los frutos prove- nes provenientes de los frutos intermedios nientes del campo, las semillas presentaron (estados 7 y 8). En campana de fl ujo laminar, contaminación por hongos o bacterias en los se procedió a sembrar en caja Petri (60 x 15 cultivos (datos no mostrados). Debido a que mm) 10 semillas y 10 embriones cigóticos las semillas de madroño presentan una testa por unidad experimental con cinco repeti- o cubierta dura, una vez desinfectados los ciones en dos experimentos independientes, frutos, fue necesario dejarlos en agua desti- colocándolos en el medio MS a la mitad de lada estéril durante 24 h en refrigeración a su concentración de sales minerales, sacaro- 8ºC, lo cual permitió una mejor extracción sa y vitaminas MS, y gelifi cado con 8 g L-1 de los embriones cigóticos a partir de las de agar plant TC (PhytoTechnology). Una semillas, para ser sembrados en el medio vez sembrados se colocaron en un cuarto MS (Murashige y Skoog, 1962). de crecimiento a una temperatura de 24ºC ± 1ºC y un fotoperiodo de 16 h luz y 8 h Clasifi cación de los frutos oscuridad, evaluando el número de semillas y embriones cigóticos germinados después Como no existía una escala de clasifi cación de 30 días. de frutos para madroño, primeramente se realizó un análisis del peso (g), tamaño Análisis estadístico (mm) y color de 60 frutos de cada árbol, y de esta manera nos permitió obtener un Los valores obtenidos de tamaño y peso para sistema de clasifi cación en 10 estados de cada uno de los diez estados de maduración maduración de frutos. Posteriormente, los de los frutos fueron promediados para ob- frutos de cada estado fueron seccionados tener sus medias y desviaciones estándar. de manera longitudinal para exponer las Para el resto de los experimentos se utilizó

83 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014 un diseño experimental completamente al notoria en muchas frutas durante su madura- azar, con tres tratamientos y cinco repeticio- ción, y por ello se utiliza como criterio para nes, para efecto de la maduración de frutos defi nir la madurez de una fruta (Wills et al., sobre la germinación de semillas, y dos 1998; Reid, 2002; Yommi y Godoy, 2002). tratamientos con cinco repeticiones para la La transformación más importante es la comparación de la germinación de semillas degradación del color verde, la cual está aso- y embriones en donde la unidad experimen- ciada con la síntesis o desenmascaramiento tal en cada caso consistió en una caja Petri de pigmentos cuyos colores oscilan entre con 10 semillas y 10 embriones cigóticos, el amarillo (carotenoides) y el rojo-morado respectivamente. Los resultados obtenidos (antocianinas) (Kays, 2004). se sometieron a un análisis de varianza y prueba de comparación de medias (Tukey, En cuanto al análisis de las variables peso y P ≤ 0.05) utilizando el paquete estadístico tamaño de los tres grupos de frutos clasifi - Java Memory Profi ler (JMP, versión 7, año cados según su grado de maduración: frutos 2008 ). inmaduros (FVO), 2) frutos intermedios (FVA), y 3) frutos maduros (FNR), se obser- RESULTADOS Y DISCUSIÓN varon diferencias signifi cativas, siendo los frutos inmaduros completamente diferentes Clasifi cación del fruto a los frutos intermedios y maduros, no ha- biendo diferencias signifi cativas entre estos Se encontró que los estados 1-6 muestran un dos últimos grupos (cuadro 2). Un estudio crecimiento más lento con un intervalo de similar a la clasifi cación aquí propuesta es 0.00 a 0.37 mm con una diferencia media el realizado por Pinzón et al. (2007) quienes aproximada de 0.40 g y de 0.05 mm entre determinaron, según el color de la cáscara, estados. Una vez que comienza el proceso de seis estados de madurez de la gulupa (Pas- maduración y éstos pasan de un color verde sifl ora edulis Sims.) desde totalmente verde oscuro a un verde-amarillo y naranja-rojizo (estado 0) hasta sobremaduro (color púrpura se observa un aumento en peso y tamaño de intenso, estado 6) para facilitar el reconoci- los frutos teniendo una diferencia en peso y miento del momento óptimo de cosecha. tamaño de hasta 1 g y 0.10 mm, respectivamente (fi g. 2, cuadros 1 y 2). Con base en Análisis de microscopía estos resultados se propone la agrupación de los frutos en tres grupos o escalas de Este análisis demostró que todos los estados maduración: a) frutos inmaduros (FVO), de madurez de los frutos presentan semilla y del estado 1-6; b) frutos intermedios (FVA), embriones cigóticos desde el más inmaduro estados 7 y 8; y c) frutos maduros (FNR), (fruto núm. 1) hasta el más maduro (fruto estados 9 y 10; los cuales fueron diferentes núm. 10) (fi gs. 3b, c y d). También se pudo estadísticamente (P ≤ 0.05). Esto indica determinar la medida que éstos presentan que el peso de los frutos es importante para observándose que las semillas suelen tener determinar el grado de maduración de los una longitud de 2.8 mm, mientras que los frutos, mientras que visualmente, el color es embriones tan sólo son de 1.7 mm (fi gs. un factor fundamental para dicho parámetro. 3c y d). Asimismo, se detectó que el grado El cambio de color es la característica más de desarrollo de éstas varía de un estado a

84 Tovar-Rocha, V. et al.: Inﬂ uencia de maduración del fruto de A. xalapensis sobre germinación de semillas y embriones

Fig. 2. Clasiﬁ cación de los estados de maduración de los frutos de madroño según su coloración. 1 al 6: frutos verde oscuro (FVO) o frutos inmaduros, 7 y 8: frutos verde-amarillo (FVA) o frutos intermedios, y 9 y 10: frutos naranja-rojizo (FNR) o frutos maduros.

Cuadro 1. Estados de desarrollo de los frutos de Arbutus xalapensis Kunth según su tamaño (mm) y peso (g).

estado de maduración diámetro peso del fruto (mm)* (g)* 1 4.60±0.47 0.07± 0.00 2 5.00±0.00 0.10±0.00 3 5.60±0.47 0.17±0.03 4 6.60±0.47 0.23±0.01 5 8.00±0.00 0.35±0.02 6 8.00±0.00 0.38±0.03 7 9.00±0.00 0.42±0.00 8 10.00±0.00 0.53±0.01 9 10.30±2.06 0.64±0.13 10 11.30±0.43 0.76±0.06

*Medias y DS correspondientes a seis muestras de cada uno de los estados de maduración de los frutos.

85 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014

Cuadro 2. Comparación de medias para relacionar los tres grupos de madurez: inmaduros (FVO), intermedios (FVA) y maduros (FNR), para tamaño (mm) y peso (g) del fruto de Arbutus xalapensis Kunth.

Nivel Tamaño Peso (mm)* (g)* FNR 10.8 a 0.70 a

FVA 9.5 a 0.46 ab

FVO 6.3 b 0.21 b

*Valores promedios de tres repeticiones de 10 frutos por cada estado de madurez. Valores con la misma letra no son signiﬁ cativamente distintos (P ≤ 0.05).

Fig. 3. Estados de maduración de frutos de madroño y observaciones microscópicas de frutos, semillas y embriones. (A) estados de madurez de frutos del 1 al 10, (B) observa- ción microscópica de los frutos en los estados 1 al 5 (4X) y 6 al 10 (1X), (C) semilla en los estados 1 al 5 (40X) y estados 6 al 10 (20X), y (D) embriones, estados del 1 al 10 (40X).

86 Tovar-Rocha, V. et al.: Infl uencia de maduración del fruto de A. xalapensis sobre germinación de semillas y embriones otro observándose menor desarrollo de se- humedad e inhibición de su metabolismo, así millas en los estados del 1 al 6, y un mayor como producción de inhibidores químicos desarrollo de ésta a partir del estado 7 (fi g. (α-amilasas) que les permite permanecer 3d). La extracción de la semilla sólo fue en climas con periodos de sequía y frío posible a partir del estado 5, lo cual dio la prolongados (Rodríguez y Vázquez, 1992). pauta para elegir los frutos de los estadíos Algunos estudios realizados con semillas de 5 al 10 para realizar los estudios de germi- varias especies de Arbutus han demostrado nación. Las observaciones microscópicas que algunas pierden su poder germinativo de las semillas, y sus embriones, mostraron en cortos periodos (A. texan y A. unedo), claramente que el desarrollo de la semilla mientras que otras requieren temperaturas va acompañado de la maduración de los frías por encima del punto de congelación frutos, suceso que se da en la mayoría de las para poder germinar (A. menziessi Pursh) plantas angiospermas (Willan, 1987). Estos (McDonald, 1978; Nokes, 1986). Narbona resultados concuerdan con los obtenidos por et al. (2003) encontraron que la germina- Buzeta (1997), quien determinó que existe ción de Arbutus unedo L., una especie de una relación entre el contenido de semillas madroño que crece en el mediterráneo, es en el fruto y el tamaño de éste. afectada por la pulpa que contienen sus frutos concluyendo que ésta debe de pre- Germinación de semilla y embriones sentar algún tipo de inhibidores químicos cigóticos sin tener la posibilidad de germinar mientras permanezcan adheridas a la pulpa. Los resultados obtenidos del análisis Para Arbutus xalapensis H.B.K., se conoce estadístico referente a la germinación de poco sobre su reproducción y se considera semillas mostró diferencias signifi cativas, que presenta una baja tasa de reproducción observándose una mayor germinación en (Stager et al., 1973). Aunque la semillas se las semillas provenientes de frutos interme- producen en abundancia (Vines, 1960), se dios (8.8 semillas/unidad experimental) en ha observado en condiciones de laboratorio comparación con las semillas de fruto inma- que su germinación puede variar entre el 20 duros (8.4 semillas/unidad experimental) y al 90%, dependiendo del grado de humedad maduros (7.6 semillas/unidad experimental), (Wiedenfeld, 1975). Comportamiento que siendo las semillas de los frutos maduros es semejante a las semillas recalcitrantes las que mostraron la menor respuesta ger- pues pierden rápidamente su capacidad de minativa (fi g. 4), lo que indica que el estado germinar al quedar expuestas a condiciones de madurez del fruto tiene infl uencia sobre de baja humedad (Kermode y Finch-Savage, la misma. Los resultados obtenidos en este 2002). Sin duda alguna, la efi ciencia de experimento muestran que la germinación germinación y desarrollo de las semillas está de las semillas in vitro en esta especie (A. muy correlacionado con el grado de madura- xalapensis) es afectada por el grado de ma- ción de los frutos, pues se ha observado que durez del fruto, en donde a mayor madurez semillas de berenjena provenientes de frutos menor poder de germinación, condición que inmaduros son defi cientes en germinación, puede deberse a los mecanismos intrínsecos mientras que aquellas que provienen de fru- de las semillas en donde antes de entrar en tos maduros, además de tener mayor tamaño, un periodo de latencia hay una pérdida de aumentan su porcentaje de germinación

87 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014

Fig. 4. Inﬂ uencia del estado de madurez del fruto: frutos verde obscuro (FVO), frutos verde-amarillo (FVA) y frutos naranja-rojo (FNR), sobre la germinación de semillas de Arbutus xalapensis Kunth a los 30 días de su establecimiento en medio MS básico.

(Passam et al., 2010), fenómeno que es ob- fundamental en las repuestas morfogenéti- servado también en jitomate, pues Heidary cas in vitro de los embriones. Por ejemplo, y Dastjerdi (2012) reportan que la semilla los embriones cigóticos de varias especies proveniente de frutos de color rojo presentan de pinos requieren de medios suplementa- mayor efi ciencia de germinación que los dos con maltosa, nitrato de plata, nitrato provenientes de frutos verdes, resultados de magnesio y casa aminoácidos para su que difi eren de lo obtenido en este estudio, germinación, formación de callo o bien pues a mayor coloración y maduración de para la formación de embriones somáticos los frutos, menor efi ciencia sobre la germi- (Ramarosandratana et al., 2001a; Pullman et nación de las semillas de madroño. al., 2003; Miguel et al., 2004; Niskane et al., 2004; Lelu-Walter y Bernier-Cardou, 2006). De manera opuesta a lo observado con la En casos específi cos como el reportado por semilla, se encontró que la germinación Pulman et al. (2003) en Pinus tadea L, para de los embriones cigóticos, extraídos de que los embriones cigóticos puedan estable- las semillas y sembrados en un medio MS, cerse se requiere de un medio suplementado disminuye de manera considerable (0.4 con mio inositol, ácido abscísico y nitrato embriones/unidad experimental) (fi g. 5), de plata, donde además consideran que el por lo que es muy probable que el medio estado de maduración de éstos es funda- de cultivo infl uya más en su germinación mental para la iniciación de los cultivos, que el estado de desarrollo del embrión. El ya que los embriones inmaduros producen madroño es una especie leñosa para las que mayor cantidad de callos embriogénicos, se ha observado que el medio de cultivo es condición que también se ha observado por

88 Tovar-Rocha, V. et al.: Inﬂ uencia de maduración del fruto de A. xalapensis sobre germinación de semillas y embriones

Fig. 5. Germinación de semilla y embriones cigóticos provenientes de frutos de los estados 7 y 8 de Arbutus xalapensis Kunth a los 30 días de su establecimiento en medio básico MS.

Lelu-Walter y Bernier-Cardou, (2006), en o intermedios (7 y 8), y frutos naranja rojo Pinus pinaster Ait. Una especie no leñosa (FNR) o maduros (9 y 10). para la que se ha observado la importancia del estado de desarrollo de los embriones es Las observaciones microscópicas corrobo- Glycine max (L.) Merrill. Para esta especie raron que en los 10 estados de los frutos se se encontró que la germinación es mayor presentan semillas y embriones, sin embargo en los embriones cigóticos provenientes los estados del 5 al 10 contienen un mejor de semillas más maduras (90%) que en los desarrollo de éstos. provenientes de semillas inmaduras (43%), condición que se mantiene siempre y cuando El estado de madurez del fruto infl uye sobre los embriones sean cultivados en un medio la germinación de las semillas, observán- B5 (Gamborg) conteniendo 1% de sacarosa dose que a mayor madurez de frutos menor (Tekrony et al., 1996). cantidad de semillas germinadas, mientras que los resultados de efi ciencia de germi- CONCLUSIONES nación de embriones cigóticos mostraron una drástica defi ciencia en su germinación. Los resultados generados en este estudio Esto indica que probablemente lo que más permitieron establecer una escala de clasi- infl uye en la germinación de los embrio- fi cación de frutos basada en su tamaño y co- nes sea el medio de cultivo. Por tanto, se lor: frutos verde obscuro (FVO) o inmaduro sugiere realizar pruebas de germinación de (estado 1 al 6), frutos verde amarillo (FVA) embriones en diferentes medios de cultivo,

89 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014 así como estudios de morfogénesis in vitro Hardesty, W.D., y D.C. Whitenberg, 1976. con semillas provenientes de frutos de los Texas madrone. Texas Parks and Wil- estados 5 al 10. dlife. 34: 24-26.

AGRADECIMIENTOS Heidary, M., y A.M.A. “Dastjerdi. Effect of fruit maturity on seed germination of Este trabajo fue fi nanciado por el Consejo tomato (Lycopersicon licopersicon)”. Nacional de Ciencia y Tecnología (CONA- www.science.alzahra.ac.ir/Portals/0/ CYT) con una beca de maestría núm. 239177 Majlat (accesada en abril de 2012). de Violeta Tobar Rocha, por el Programa de Mejoramiento del Profesor (PROMEP-SEP) Hernández, S.L., C. Romo, y F. González y por la Coordinación de la Investigación M., 1991. “Plantas útiles de Tamauli- Científi ca (CIC) de la Universidad Michoa- pas”, Anales, Serie Botánica. Instituto cana de San Nicolás de Hidalgo a través de de Biología, UNAM, 2(1): 1-38. los proyectos PTC-292, y CIC-2011 de Ma. del Carmen Rocha Granados. INAFED (Instituto Nacional para el Fede- ralismo y el Desarrollo Municipal), LITERATURA CITADA 2009. Enciclopedia de los Estados de México: Michocán, Medio Físico. Aguilar, R.S., y J. Barajas M., 2005. “Anato- Gobierno del Estado de Michoacán. mía de la madera de especies arbóreas http://www.e-local.gob.mx/work/tem- de un bosque mesófi lo de montaña: un plates/enciclo/michoacan (accesada en enfoque ecológico-Evolutivo”. Boletín marzo de 2010). de la Sociedad botánica de México, diciembre, núm. 077. Sociedad botá- Kaur, R.; S. Arora, y A.K. Thukral, 2009. nica de México, A.C., Distrito Federal, “Enhancing seed germination of Chlo- México. pp. 51-58. rophytum borivilianum Sant. et Fer- nand. with PGRs, steroidal hormones Buzeta, A., 1997. Chile: Berries para el año and zinc”. Research Journal of Seed 2000. Departamento Agroindustrial, Science, 2: 32-39. Fundación Chile. Santiago, Chile. 135 pp. Kays, S., 2004. Postharvest biology. Exon Press, Athens, Georgia. 568 pp. Comisión Forestal del Estado de Michoacán, enero de 2009. Boletín informativo Kermode, H.R., y W.E. Finch-Savage, 2002. núm. 2. “Desiccation sensitivity in orthodox and recalcitrant seeds in relation to Guridi, L.C., 1981. “La Madera en las development”. In: Black, M. y H.W. artesanías del estado de Michoacán”. Prichard, editors. Desiccation and sur- Boletín divulgativo núm. 50 Subsecre- vival in plants. Drying without dying. taría Forestal y de la Fauna, Instituto CABI Publishing. pp. 149-184. Nacional de Investigaciones Foresta- les. SARH. Diciembre 1980.

90 Tovar-Rocha, V. et al.: Inﬂ uencia de maduración del fruto de A. xalapensis sobre germinación de semillas y embriones

Lelu, M.A.; M. Bernier., y K. Klimaszew- Nokes, J., 1986. How to grow native plants ska, 2006. “Simpliﬁ ed and improved of Texas and the southwest. Texas somatic embryogenesis for clonal Monthly Press, Austin, Texas. USA. propagation of Pinus pinaster (Ait.)”. Plant Cell Reports, 25:767-776. Passam, M.C.; D. Makrogianni., F. Gregriou., y I.C. Karapanos, 2010. “The size and McDonald, P.M., 1978. Silviculture-ecology germination of eggplant seed is relation of three native California hardwoods to fruit maturity at harvest, after-ripe- on high sites in north-central Cali- ning and ethylene application”. Analele fornia. [PhD Dissertation]. Oregon Universitǎţii-Fascicula Biologie. Tom State University. Department of Forest XVII, Issue 2. pp: 225-229. Science. 309 pp. Pérez, O.C.P., 1993. “Anatomía de la Mesleard, F., y J. Lepart, 1991. “Germina- madera de ocho especies con impor- tion in seedling dynamics of Arbutus tancia en las artesanías del Estado de unedo and Erica arborea on Corsica”. Michoacán”. Acta Botánica Mexicana Journal of Vegetation Science, 2: núm. 23. Instituto de Ecología, A.C. 155-164. Pátzcuaro, México. pp. 103-136.

Miguel, C.; S. Gonçalves., S. Tereso., L. Pinzón, I.M.P.; G. Fischer, y G. Corredor, Marum., y M.M. Oliveira, 2004. 2007. “Determinación de los estados “Somatic embryogenesis from 20 de madurez del fruto de la gulupa open-pollinated seed families of Por- (Passiﬂ ora edulis Sims.)”. Agronomía tuguese plus tree of maritime pine”. Colombiana, 25(1): 83-95. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 76: 121-130. Pullman, G.S.; S. Johnson., G. Peter., J. Cairney, y N. Xu, 2003a. “Improving Murashige, T., y F. Skoog, 1962. “A revised loblolly pine somatic maturation: medium for rapid growth and bioa- comparison of somatic and zygotic ssays with tobacco tissue cultures”. embryo morphology, germination, and Plant Physiology, 15: 473-479. gene expression”. Plant Cell Reports, 21: 747-758. Narbona, E.; M. Arista, y P. L. Ortiz, 2003. “Germinación de las semillas de ma- Pullman, G.S.; K. Namjoshi, y Y. Zhang, droño (Arbutus unedo L. Ericaceae)”. 2003b. “Somatic embryogenesis in Acta Botánica Malacitana, 28: 73-78. loblolly pine (Pinus taeda L.): improving culture initiation with abscisic Niskane, A-M.; J. Lu., S. Seitz., K. Keino- acid and silver nitrate”. Plant Cell nen, K. von Weissenberg, y A. Pappi- Reports, 22: 85-95. nen, 2004. “Effect of parent genotype on somatic embryogenesis in Scots Ramarosandratana, A.; L. Harvengt, A. pine (Pinus sylvestris)”. Tree Physio- Bouver, R. Calvayrac, y M. Pâques, logy, 24: 1259-1265. 2001a. “Effects of carbohydrate

91 Núm. 37: 79-92 Febrero 2014

source, polyethylene glicol and gellan Thagana, W.P.; C.M. Ndirangu., E.O. Omo- gum concentration on embryonal- lo., T.C. Riungu., M.G. Kinyua., N.W. suspensor mass (ESM) proliferation Ndembei, and W.K. Koskey, 2005. “In and maturation of maritime pine vitro embryo culture and immature somatic embryos”. In vitro Cellular seed germination techniques for rapid and Developmental Biology-Plant, generation advance in soyabean [Gly- 37: 29-34. cine max (L.) Merrill]”. Proceedings of the African Crop Science Conference, Reid, M.S., 2002. “Maturation and maturity Kampala, Uganda, 5-9th December. indices”. En: Kader, A. A. (Ed.) Post- pp. 269-272. harvest technology of horticultural crops. 3th ed. University of California, Tipton, J.L., 1988. “Asexual propagation of Agricultural and Natural. pp. 55-62. juvenile Arbutus xalapensis in a high humidity chamber”. Plant Propagator, Rodríguez, C., y C. Vázquez Y., 1992. “La 27: 11-12. conservación de las plantas en peligro de extinción a través del almacena- Vines, R.A., 1960. Trees, shrubs, and woody miento a largo plazo de semillas”. vines of the Southwest. Austin, TX: Interciencia, 17: 293-297. University of Texas Press. 1104 pp.

Rzedowski, J., y G. Calderón R., 1985. Flo- Wiedenfeld, C.C., 1975. “The Texas madrone”. ra fanerogámica del valle de México. Texas Horticulturist, 2(1): 14-16. Instituto Nacional de Ciencias Biológi- cas. Instituto de Ecología. México, DF. Willan, R.L., 1987. A guide to forest seed handling. Chapter 2: “Seed and fruit Rzedowski, J., 2006. Bosque de coníferas. development germination, dormancy”. En: Vegetación de México. Primera Food and Agriculture Organization edición digital. Comisión Nacional of the United Nations. Rome. M-13 para el Conocimiento y Uso de la ISBN 92-5-102291. Biodiversidad. México. Wills, R.; B. McGlasson, D. Graham, y D. Steger, R.; E. Beck., y F. Reldon, 1973. Joyce, 1998. Postharvest: an introduc- “Range plants as ornamentals”. Jour- tion to the physiology and handling of nal of Range Management, 26: 72-74. fruit, vegetables and ornamentals. CAB International, Nueva York. 262 pp. Tekrony, D.M.; L.J. Grabau., M. Delary, and M. Kane, 1996. “Early planting Yommi, A., y C. Godoy, 2002. Arándanos: of early maturing soyabean:effects Fisiología y Tecnologías de Postco- on seed germination and phomopsis secha. http://www.elsitioagricola. infection”. Agronomy Journal, 88(3): com/gacetillas/balcarce/bl20021029/ 428-433. arandanos.asp (accesada en agosto de 2012). Recibido: 20 febrero 2013. Aceptado: 5 julio 2013.