Evaluación del crecimiento de alevinos de Bocachico (Prochilodus magdalenae) alimentados con Saccharomyces cerevisiae como potencial probiótico.
Autores
Alexander Torres Castro Adriana Mogollón Zarate
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACIÓN LICENCIATURA EN BIOLOGÍA Bogotá D.C. 2018 2
Evaluación del crecimiento de alevinos de Bocachico (Prochilodus magdalenae) alimentados con Saccharomyces cerevisiae como potencial probiótico.
Autores Alexander Torres C. Adriana Mogollon Z.
Trabajo de Grado en Modalidad Investigación - Innovación para optar al título de Licenciado en Biología
Directora
Carmen Helena Moreno Duran Msc. Ciencias Biológicas
Codirector Luis Gabriel Quintero Pinto Phd. Zootecnia
Laboratorio Ictiología y Peces Ornamentales Universidad Nacional de Colombia
Universidad Distrital Francisco José De Caldas Facultad De Ciencias Y Educación Licenciatura En Biología 2018
La Universidad no será responsable de las ideas expuestas por los graduandos en el Trabajo de Grado, según el artículo 117 acuerdo 029, Consejo Superior de la Universidad Distrital
Francisco José de Caldas expedido en junio de 1988.
Dedicado a Isabella Mogollon, la razón de mi vida, quien me da fuerzas para continuar pese a las adversidades y me regala su amor, sonrisas y ocurrencias con las que crecemos juntas día a día. A mi Madre quien con su amor y entrega me enseño con su ejemplo de vida a afrontar los infortunios del camino con humildad y fortaleza formando la mujer y madre que soy.
Adriana Mogollón
A mi familia razón de mi ser, por la comprensión y apoyo incondicional, porque mis victorias son de ellos y para ellos. A mi madre, padre y hermano a quienes amo. Por último, a mis abuelas que con su sabiduría y amor me acompañaron siempre.
Alexander Torres
AGRADECIMIENTOS
Expresamos nuestro más grande agradecimiento a Isabella Mogollón, quien nos acompañó e hizo parte de esta investigación. A todos nuestros amigos que crecieron a nuestro lado en estos semestres y nos dieron los mejores momentos. De la misma manera agradecemos a la
Universidad Distrital Francisco José de Caldas por formarnos en este hermosa profesión, en donde encontramos grandes profesores como el docente Alexander García , quien nos apoyó y aportó valiosas enseñanzas; de igual forma agradecemos inmensamente al decano Luis Gabriel
Quintero, que con su sabiduría y paciencia aporto a nuestros conocimientos, y a la Universidad
Nacional de Colombia por abrirnos las puertas del laboratorio de Ictiología y Peces
Ornamentales como espacio propicio para realizar esta gran investigación. A Amandita Reyes, técnica encargada del laboratorio por su calidad humana y quien se convirtió en nuestra segunda madre, además de, apoyarnos incondicionalmente en nuestro proyecto con su experiencia y consejos para la culminación de este. A nuestros compañeros de laboratorio con quienes compartimos grandes experiencias y aprendizajes. Por último y no menos importante, gratitudes por sus asesoramientos a las profesoras Judith Figueroa Ramírez, microbióloga de la
Universidad de los Andes y a Carmen Helena Moreno, Bióloga de la Universidad Nacional.
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ÍNDICE DE CONTENIDO
Pág.
ÍNDICE DE FIGURAS ...... 1
ÍNDICE DE TABLAS ...... 2
ÍNDICE DE ANEXOS ...... 3
GLOSARIO ...... 4
INTRODUCCIÓN ...... 6
1. PLANTEAMIENTO PROBLEMA ...... 10
2. OBJETIVOS ...... 14
2.1. General ...... 14
2.2. Específicos ...... 14
3. MARCO REFERENCIAL ...... 15
3.1. Conceptos ...... 15
3.1.1. Definición Probiótico...... 16
3.1.2. Mecanismos de acción de los probióticos...... 17
3.1.3. Colonización y adhesión del tracto intestinal...... 17
3.1.4. Producción de compuestos benéficos...... 18
3.1.5. Funciones en el sistema inmune...... 18
3.1.6. Incidencia en la calidad de agua...... 20
3.2. Fundamentos generales del alimento vivo ...... 21
3.2.1. Aspectos generales de la levadura...... 22
3
3.2.2. Aspectos generales del Zooplancton...... 23
3.2.3. Aspectos generales del Fitoplancton...... 24
3.3. Biología del Bocachico ...... 25
3.3.1. Clasificación taxonómica...... 25
3.3.2. Identificación morfológica...... 26
3.3.3. Parámetros ambientales...... 26
3.3.4. Requerimientos nutricionales...... 27
3.4. Antecedentes ...... 28
4. METODOLOGÍA ...... 40
4.1. Locación ...... 40
4.2. Materiales, Equipos e Insumos ...... 40
4.2.1. Materiales...... 41
4.2.2. Equipos...... 41
4.2.3. Insumos...... 42
4.3. Procedimientos ...... 43
4.3.1. Cultivos de alimento vivo...... 43
4.3.2. Cultivo de la cepa probiótica...... 45
4.3.3. Protocolo de acopio de alevinos...... 47
4.3.4. Adecuación de instalaciones...... 48
5.3.5. Incorporación del probiótico a la dieta...... 49
4.4. Alimentacion ...... 49
4.5. Muestreo y Monitoreo ...... 50
4.5.1. Mediciones del tallaje...... 50
4
4.6. Diseño experimental...... 51
4.7. Análisis estadístico ...... 52
6. RESULTADOS ...... 55
6.1 Parámetros ambientales ...... 55
6.1.1 Calidad de agua ...... 55
6.1.2 Temperaturas ...... 57
6.2 Parámetros de crecimiento y sobrevivencia ...... 58
6.2.1 Análisis de varianza para el peso promedio...... 59
6.2.2 Análisis de varianza para longitud promedio...... 60
6.2.3 Análisis descriptivo de sobrevivencia...... 62
6.2.4 Factor de condición (K) ...... 62
6.2.5 Tasas específicas de crecimiento...... 63
6.3 Prueba de comparaciones múltiples...... 65
6.4 Comportamiento animal ...... 68
6. DISCUSIÓN ...... 69
6.1. Efectividad del probiotico para la sobrevivencia...... 69
6.2. Tratamiento efectivo en el crecimiento de Alevinos ...... 69
6.3. Probiotico como efecto biorremediador ...... 70
7. CONCLUSIONES ...... 72
8. RECOMENDACIONES ...... 73
9. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA ...... 74
10. ANEXOS ...... 83
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ÍNDICE DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Prochilodus magdalenae adulto...... 7
Figura 2. Morfología externa de bocachico adulto...... 26
Figura 3. Número de publicaciones relacionadas al uso de Saccharomyces cerevisiae como potencial probiótico, de las cuales 65 están asociadas a peces, ...... 29
Figura 4. Diferencias comparadas entre los valores promedio obtenidos en Amonio (mg/l) y tratamientos los cuatro tratamientos en tres periodos...... 56
Figura 5. Diferencias comparadas entre los valores promedio obtenidos en Nitritos (mg/l) y tratamientos los cuatro tratamientos en tres periodos...... 57
Figura 6. Promedio de temperaturas registradas en las tres replicas (R) por los cuatro tratamientos evaluados en los 28 días que llevo tomo experimento...... 58
Figura 7. Ganancia en peso por tratamientos (Box-Plot)...... 60
Figura 9. Número de individuos sobrevivientes a tratamientos experimentales...... 62
Figura 10. Valores del factor de condición con porcentaje de erro 5% por tratamiento...... 62
Figura 11. Tasas específicas de crecimiento del peso por tratamiento...... 64
Figura 12. Tasas específicas de crecimiento de longitud por tratamiento...... 65
Figura 13. Interaccion Peso vs Longitud...... 67
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ÍNDICE DE TABLAS
Pág.
Tabla I. Grupos de zooplancton preferidos por el Bocachico durante su transformación de larva a alevino en estanques en tierra...... 6
Tabla II. Parámetros Físico-Químicos óptimos del agua para el cultivo de Bocachico...... 27
Tabla III. Requerimientos nutricionales para el Bocachico (Prochilodus magdalenae) en etapa de alevinaje...... 28
Tabla IV. Tratamientos experimentales en dietas para larvas de Prochiludus magdalenae...... 51
Tabla V. Promedio de los parámetros fisicoquímicos obtenidos del análisis de calidad de agua.
...... 55
Tabla VII. Análisis de varianza para el peso promedio ...... 59
Tabla VIII. Análisis de varianza para longitud...... 61
Tabla IV. Valores del cactor de condición por tratamiento ...... 63
Tabla X. Tasa especifica de crecimiento por acuario...... 63
Tabla XI. Tasa especifica de crecimiento por tratamiento...... 64
Tabla XII. ANOVA, prueba múltiple de Duncan’s para peso con MSE de 0.003 ...... 65
Tabla XIII. Comparación de medios con la misma letra sin diferencias significativas...... 66
Tabla XIV. ANOVA, prueba múltiple de Duncan’s para peso con MSE de 0.017 ...... 66
Tabla XV. Comparación de medios con la misma letra sin diferencias significativas...... 67
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ÍNDICE DE ANEXOS
Pág.
Anexo 1. Intervalos de Confianza ...... 83
Anexo 2. Análisis de supuestos de normalidad, homocedásticidad e independencia de los datos en el tiempo para peso...... 83
Anexo 3. Identificación de datos atípicos para peso ...... 86
Anexo 4. Análisis de supuestos de normalidad, homocedásticidad e independencia de los datos en el tiempo para longitud...... 87
Anexo 5. Identificación de datos atípicos para longitud ...... 89
Anexo 6. Tabla de temperaturas registradas durante la experimentación ...... 89
Anexo 7. Tablas de medición de peso inicial y final en gramos de alevinos...... 90
Anexo 8. Tablas de registro de Longitud inicial y final en centímetros de los alevinos...... 92
Anexo 9. Tablas de observación de Altura inicial y final en centímetros de los alevinos...... 94
Anexo 10.Tablas Analisis de variansas ...... 97
Anexo 11. Figuras preparación de los medios de cultivos de alimento vivo ...... 98
Anexo 12. Figuras caracterización del alimento vivo...... 99
Anexo 13. Figuras recepción de alevinos y mediciones...... 100
Anexo 14. Figuras preparatorio del alimento con el potencial probiótico...... 101
Anexo 15. Figuras equipos empleados en el análisis de calidad de agua...... 101
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GLOSARIO
Acuicultura: Conjunto de técnicas y conocimientos relativos al cultivo de especies acuáticas, vegetales y animales. Abarca todas las actividades dirigidas a la producción y comercialización
Alevino: Cría de peces que incluye la fase comprendida entre la postlarva y el juvenil que crecen en agua dulce y son utilizados para repoblar ríos, lagos o estanques.
Barbasco: Bejuco usado en la pesca artesanal utilizando el macerado de las raíces se aplica en los ríos, lagos y ciénagas para captura de los peces.
Biomasa: Cantidad total de materia viva presente en un organismo, población, comunidad o ecosistema, expresada en peso por unidad de área o de volumen.
Biorremediador: Proceso por el cual microorganismos, hongos, plantas o las enzimas son utilizados para retornar a un medio ambiente alterado por contaminantes a su condición natural.
Detrito: Es el resultado de la descomposición de una masa orgánica o inorgánica sólida en partículas.
Fitoplancton: Conjunto de los organismos acuáticos errantes constituido predominantemente por microalgas, que tienen la capacidad fotosintética y que viven dispersos en el agua.
Huésped: Organismo que alberga a otro en su interior o lo porta sobre sí, ya sea en una simbiosis de parasitismo, comensalismo o mutualismo.
Lentico: Son ecosistemas de agua cerradas que permanecen en un mismo lugar sin correr y con poco fluido.
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Lotico: Son cuerpos de agua presentes en el ecosistema de un río en el cual el movimiento del agua es predominantemente en una dirección impulsado por la fuerza de la gravedad.
Microflora: Se refiere a la comunidad de microorganismos vivos residentes en el intestino de un organismo animal.
Patógeno: Agente biológico capaz de generar una enfermedad a un huésped con el fin de replicarse así mismo dentro de otro organismo.
Postlarva: Es un estadio del ciclo biológico de algunos animales como los peces entre los estadios de prelarva y alevino.
Prebiótico: Son ingredientes alimenticios que contienen microrganismos no digeribles y que afectan benéficamente al hospedero mediante la estimulación selectiva del crecimiento.
Probiótico: Microorganismos vivos, que al ser administrados en dosis adecuadas confieren beneficios en la salud del hospedero.
Trasmallo: Arte de pesca formado por tres redes, una central más tupida, y dos exteriores superpuestas.
Sinergia: Acción de dos o más causas cuyo efecto es superior a la suma de los efectos individuales.
Sintropía: Medida del grado de organización interna de cualquier sistema formado por componentes que interactúan entre sí.
Zooplancton: Conjunto de pequeños animales pelágicos que se encuentran en suspensión en el agua del mar o en las aguas dulces.
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INTRODUCCIÓN
El bocachico es un pez detritívoro que tiene un hábito alimenticio especial, pues su dieta está compuesta básicamente de detritos orgánicos principalmente en el fondo del estanque (Cortés,
2003) los cuales están compuestos por hongos, levaduras y también organismos bentónicos, tales como larvas y huevos de insectos, moluscos, crustáceos, y otros. Entre las preferencias dietarias del bocachico, se encuentran los rotíferos y cladóceros en las primeras fases del desarrollo
(TABLA I).
Tabla I. Grupos de zooplancton preferidos por el Bocachico durante su transformación de larva a alevino en estanques en tierra.
Días de Protozoarios/ Cladóceros Copépodos Ostrácodos
alevinaje Rotíferos
5 0.59 0.29 0.07 0.03
10 0.70 0.21 0.01 0.07
15 0.91 0.07 0.01 0
20 0.39 0.16 0.08 0.30
25 0.54 0.03 0.01 0.38
30 0.64 0.11 0.03 0.17
El número corresponde al valor promedio del índice de Chesson, el cual indica preferencia cuando es mayor de 0.2 (Fuente: Prieto & Atencio, 2008).
Sin embargo, estas especies tienen baja conversión alimenticia y necesitan mucho espacio 7
para un buen crecimiento; por esta razón como propósito de cultivo solo se recomienda en sistema de policultivos y en muy bajas densidades de siembra. (Vásquez, 2004).
Este pez (Figura 1.) no se reproduce naturalmente en aguas quietas como ciénagas, represas o lagunas por lo tanto necesita realizar las migraciones (subienda, mitica y bajanza) en el río para completar su madurez sexual. El desove ocurre en la época de bajanza en los meses de abril a junio, este fenómeno coincide con las primeras lluvias cuando el río vuelve a crecer y retorna a sus zonas de inundación. En condiciones de cautiverio este pez no se reproduce, por lo tanto es necesario recurrir al proceso conocido como reproducción inducida para lograr su reproducción utilizando hormonas inyectadas en los reproductores. A los 25 días de haber nacido las postlarvas estas se transforman en alevinos, dependiendo de la temperatura (Cortés, 2003).
Figura 1. Prochilodus magdalenae adulto. (Fuente: Libro rojo de peces dulceacuícolas de Colombia, 2012)
Según Steindachner (1879) Prochilodus magdalenae, presenta dos periodos críticos de supervivencia durante su desarrollo larvario: en la primera alimentación, a los 15 días cuando se inicia el desarrollo de la curvatura del aparato digestivo (formación del estómago e inicio de la torsión del tubo digestivo), y al mes cuando ya es un alevino y empieza a alimentarse del detritus
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del estanque (De Fex, 1996).
En cuanto al estado de aprovechamiento y de conservación del bocachico en la industria colombiana este pez representa la principal especie de pesquería artesanal por lo cual el bocachico ha venido siendo capturado en estados juveniles o preadultos que no superan los 25 cm de la talla mínima legal y estableciendo que la especie alcanza su madurez sexual entre los
20 y 25 cm, se ha venido evidenciando una disminución progresiva de su biomasa desovante
(Valderrama y Solano 2004, citados en Libro rojo de peces dulceacuícolas de Colombia, 2012).
El uso generalizado de prácticas y artes de pesca destructivos como el taponamiento de las ciénagas durante los periodos de migración de la especie, los trasmallos, los barbascos, y la dinamita además de las hidroeléctricas y minería han contribuido a su declinación. En un sentido estrictamente biológico, la pesca de subienda y bajanza minimiza el potencial reproductivo de la especie y lo categoriza como una especie vulnerable (Libro rojo, et al. 2012). Vale la pena señalar que desde el 2014 al 2016 la AUNAP ha sembrado más 22 millones de alevinos de bocachico, labor que demandó una inversión cercana a los 4.000 millones de pesos, además viene trabajando de la mano de asociaciones de pescadores campañas por el respeto a las tallas mínimas, vedas y el desarrollado de buenas prácticas pesqueras amigables, sostenibles y responsables con el medio ambiente.
Po otro lado, según Mosquera (2001), esta especie ha sido considerada como alternativa para la piscicultura extensiva y semintensiva por las ventajas que representa su régimen alimentario detritívoro. Su cultivo se realiza a densidades menores de 1 pez/m2, siendo común en policultivos con especies omnívoras. En la Estación Piscícola de Repelón de la AUNAP en el
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2013 se produjeron 7.000.000 alevinos/año (Dorado, com pers, 2014) y se avanza en el desarrollo de tecnologías que permitan duplicar esa producción para atender los compromisos de fomento y repoblamiento en el Bajo Magdalena; mientras que en Córdoba se produjeron
8.000.000 alevinos/años entre las estaciones estatales y privadas, la mayor parte de esta producción (80%) es destinada a repoblamiento en la cuenca del río Sinú (Atencio, 2015).
Sin embargo, esta industria aún se tiene desconocimiento de innumerables variables tecnológicas, lo que afecta negativamente su consolidación en el país. Para la FAO la problemática en la industria acuícola de Colombia requiere la implementación de planes de investigación en nutrición a corto y mediano plazo, y de aplicación rápida en granjas comerciales, estaciones de fomento, laboratorios de investigación y servicio (Ocampo et al.,
2010). Una de esas nuevas tecnologías poco explorada en la industria colombiana es la que tiene que ver con la utilización de probióticos como alimento suplementario en la dieta de los peces criados en estanques.
Es así que considerando que son pocos los estudios que se tienen en Colombia acerca del uso de probióticos en la alimentación de Prochilodus magdalenae, el presente trabajo pretende evaluar si la levadura, Saccharomyces cerevisiae, es funcional para promover el desempeño productivo y la sobrevivencia de los alevinos de la especie. Para dicho propósito se evaluó su influencia sobre el crecimiento, en términos de ganancia en peso y tasa de crecimiento específico, la eficiencia de utilización de proteína más su sobrevivencia. Para ello contamos con el apoyo del laboratorio de Ictiología de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia de la Universidad Nacional de Colombia, sede Bogotá.
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1. PLANTEAMIENTO PROBLEMA
Pensando en el papel ecológico del bocachico como organismo detritívoro en los diferentes sistemas acuáticos, loticos y lenticos, presentes en la cuenca del rio Magdalena , donde en numerosas ocasiones la producción heterotrófica constituye un suministro de energía mayor de lo que supone la producción primaria, debido a que frecuentemente en las cabeceras de los cauce de los ríos existe un bosque de ribera que limita la entrada de luz o en los tramos bajos, donde la turbidez del agua limita, igualmente, la producción primaria (Vidal y Suarez, 2008). La ausencia de esta especie puede llegar a causar el decremento de la materia orgánica transportada río abajo, provocando el estancamiento de la producción primaria desfavoreciendo el flujo de nutrientes hacia los otros sistemas y las oscilaciones de oxígeno y temperatura asociadas a crecimientos de productores primarios, así como lo han mostrado ya algunos estudios.
El descenso en el número de individuos recolectados en la pesca del bocachico es preocupante; se ha establecido que la sobrepesca es el principal factor que ha incidido en la drástica disminución de sus volúmenes de captura y consecuente reducción continua en las tallas medias de captura (Valderrama et al. 2011c). El uso generalizado de prácticas y artes de pesca destructivos como el taponamiento de las ciénagas durante los periodos de migración de la especie, los trasmallos, los barbascos y la dinamita han contribuido a su declinación (Mojica et al., 2012).
Otro factor que aún no se ha evaluado pero con una fuerte incidencia negativa sobre esta y 11
otras especies dependientes de los planos de inundación, es la práctica extendida por los ganaderos y agricultores de desecar las ciénagas mediante la construcción de canales y diques.
De esta manera se han transformado en pastizales y humedales, restando importantes hábitats disponibles a los peces. Igualmente la fuerte alteración de hábitat y deforestación a que ha sido sometida toda la cuenca Magdalena, ha repercutido en el colapso de las pesquerías de la cuenca
(Galvis y Mojica 2007). Esto indica una importante disminución de esta especie debido a la sobreexplotación y a la alteración de los ecosistemas donde habita el bocachico.
Si bien hace unas décadas atrás un grupo de acuicultores, la autoridad acuícola del país, centros de investigación y la alcaldía, en el departamento del Huila, Meta, Antioquia, Córdoba y
Atlántico principalmente, comenzaron a experimentar el cultivo de especies nativas de agua dulce; esfuerzo importantes se han hecho en el Bocachico (Prochilodus magdalenae), el capaz
(Pimelodus grosskopfii) y el blanquillo (Sorubim cuspicaudus) del magdalena entre otras. Sin embargo, cerca del 90% de la acuicultura continental se encuentra en la Tilapia, Trucha y
Cachama, siento la Tilapia la mayor exponente con un 63% de la producción total piscícola
(Merino et al., 2014).
Por la expansión del cultivo de bocachico, la creciente demanda de alevinos y por la ejecución de programas de repoblamiento en las principales cuencas hidrográficas del país se requiere optimizar la tecnología de producción de alevinos de esta especie, con énfasis en el manejo de la primera alimentación, la calidad del agua y los alimentos usados en esta fase como zooplancton y artemia (Prieto & Atencio, 2008). Para esto es importante la investigación e implementación de nuevas tecnología como lo son el uso de probióticos, que
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permita al acuicultor aumentar la producción y que a su vez facilite el repoblamiento de las especies ícticas colombianas.
En la mayoría de las estaciones piscícolas colombianas la producción de alevinos de bocachico se caracteriza por la siembra de las postlarvas, una vez inician la alimentación exógena, directamente en los estanques en tierra donde se transforman en alevinos. Este manejo ofrece bajas e inestables tasas de sobrevivencias finales. Pero en otras estaciones se práctica el manejo de la primera alimentación con zooplancton silvestre o con nauplios de Artemia sp recién eclosionados y luego de dos a cuatros días de alimentación las postlarvas son sembradas en los estanques de alevinaje (Atencio, 2003).
En los últimos 20 años el nivel de aprovechamiento aumentó de 41% a 63%, pasando a un estado de plena sobreexplotación entre 2006-2007. La grave situación de esta especie indica que si la tendencia no se revierte a través de la implementación de medidas urgentes de ordenación, las pesquerías del bocachico podrían colapsar en los próximos 15 años (Valderrama, et al.,
2015).
Por último cabe mencionar que en Colombia, a pesar de que actualmente se usan probióticos comerciales en el cultivo de organismos acuáticos, no se han realizado estudios en los que se evalúe a profundidad los beneficios de su aplicación, así como resolver otras preguntas cómo comparar el efecto de los probióticos vivos con las células inactivas, como lo proponen Villamil et al. (2003b) y Gatesoupe (2008), o probar otros compuestos como bacteriocinas. Cabe mencionar que los productos de probióticos que se comercializan en el país son importados, por
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lo cual la realización de proyectos encaminados a obtener una formulación de probióticos con aislados bacterianos y micóticos nativos a escala comercial que pueda ser probado con las características propias de nuestros cultivos, sería un importante avance en la prevención de las enfermedades que afectan dramáticamente el sector acuicultor (Villamil & Martinez, 2009).
Ya que en Bocachico es limitado lo que se ha realizado con probióticos debe ser de vital importancia, por su hábito alimenticio detritívoro, investigar en nuevas forma de alimentarlos con microorganismos que faciliten la degradación de la materia orgánica y aumenten su respuesta inmune reflejada en su sobrevivencia. En este sentido es necesario implementar probióticos en el cultivo de esta especie de tal manera que en los alevinos se fijen esos microorganismos en el sistema digestivo permitiéndoles un mejor desarrollo en las diversas etapas de cría.
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2. OBJETIVOS
2.1. GENERAL
Evaluar el crecimiento de alevinos de Bocachico alimentados a través de una dieta que contiene Saccharomyces cerevisiae como potencial probiótico.
2.2. ESPECÍFICOS
Estudiar la efectividad del probiótico en la sobrevivencia de los alevinos en el segundo periodo crítico del crecimiento.
Determinar cuál de los tratamientos utilizados es el más efectivo en el crecimiento y sobrevivencia de alevinos.
Analizar el posible efecto biorremediador que tiene el probiótico en la calidad del agua del cultivo de peces. 15
3. MARCO REFERENCIAL
La importancia de evaluar la implementación de probióticos en la nutrición del pez bocachico, permite establecer parámetros para la inclusión y mejoramiento en la dieta en fases de alevinaje para la sobrevivencia y un desempeño productivo de estos en su fase adulta. A continuación se presenta un marco conceptual y de antecedentes de una selección trabajos e investigaciones relacionados al uso de probióticos, con el fin de ampliar el panorama de este estudio para evidenciar sus diferentes modelos teóricos y los resultados emanados de estos.
3.1. CONCEPTOS
Los peces y en si los animales y seres humanos están expuestos constantemente a toda una gama de microorganismos presente en su medio, lo que ha suscitado diferentes debates acerca de su presencia, si son hospederos o transeúntes de la microbiota intestinal. Los estudios en el tema han facilitado el entendimiento de mecanismos acción de los probióticos en el hospedero, entre ellos por nombrar algunos, la competencia por nutrientes, la modulación de la respuesta inmunitaria no específica, la producción de compuestos antimicrobianos, la competencia por el sitio de fijación en el tracto gastrointestinal, entre otros que se han evidenciado en experimentos in vitro e in vivo.
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3.1.1. Definición Probiótico.
Los probióticos han sido modificados en su significado a través de los años. Es así como en
1968, se definió como un suplemento microbiano que se administra a animales y humanos. Para
1989 Fuller lo redefinió como un microorganismo vivo que se administra al hospedero suplementado en el alimento para beneficiar el balance microbiano intestinal. Posteriormente, el término fue usado para referirse a un adyuvante dietario microbiano administrado de tal manera que se mantenga vivo dentro del tracto gastrointestinal, y que beneficie la fisiología del hospedero modulando el sistema inmune, así como mejorando el balance microbiano mediante la prevención de la colonización de bacterias indeseables en el tracto intestinal (Gatesoupe,
1999; Naidu et al., 1999).
Verschuere et al. (2000) dieron una definición más amplia de los probióticos como microorganismos vivos que tienen efectos benéficos en el hospedero mediante la modificación de la microbiota asociada, al incremento del aprovechamiento de la comida, el mejoramiento de la respuesta a enfermedades y de la calidad del ambiente. Sin embargo, en este punto es importante señalar que las bacterias que simplemente cumplen alguno de estos roles, tales como la producción de nutrientes esenciales para el aprovechamiento de las especies cultivadas, o bacterias que solamente ejercen una función específica de bioremediación en el medio ambiente, no deben considerarse como probióticos.
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3.1.2. Mecanismos de acción de los probióticos.
Las bacterias que han sido reconocidas por la mayoría de científicos para la inclusión en la lista de probióticos son principalmente las bacterias lácticas (bifidobacterias, lactobacillus, steptococcus), que se utilizan para la fabricación de yogurt y productos lácteos fermentados y algunas levaduras tales como: Saccharomyces boulardii y Saccharomyces cerevisiae. (Gibson,
1995; Pérez, 2004)
3.1.3. Colonización y adhesión del tracto intestinal.
En acuicultura, la información disponible indica que las bacterias aisladas de animales cultivados o de su entorno tienen mayor capacidad de adhesión al mucus gastrointestinal y a los tejidos, que las de otras bacterias foráneas que suelen ser transitorias, por lo que surge la necesidad de que los probióticos sean continuamente administrados, ya sea como suplemento en el alimento o a través del agua de cultivo (Ringø y Gatesoupe, 1998; Villamil et al., 2009).
Además, se ha documentado que aislados microbianos de un organismo pueden colonizar otras especies cultivadas, indicando así la falta de especificidad para la colonización del tracto digestivo (Ringø, 1999; Villamil et al., 2009).
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3.1.4. Producción de compuestos benéficos.
Las levaduras y bacterias marinas pueden llegar a ser un recurso de proteína importante en el mejoramiento del aporte nutricional de algunas especies cultivadas, gracias a su aporte de aminoácidos que contienen (Brown et al., 1996). Por otro lado se ha demostrado la alta producción de ácidos grasos de cadena corta a partir de ciertos aislados de bacterias intestinales
(Yazawa, 1996). De igual manera, los lípidos producidos por microorganismos marinos se han descrito como de sustancias de gran importancia para la nutrición de especies acuáticas específicamente tilapia y rodaballo (Kiha y Sakata, 1997; Villamil et al., 2009).
3.1.5. Funciones en el sistema inmune.
Sólo trabajos recientes han demostrado la incidencia de los probióticos en las funciones del sistema inmune. Irianto y Austin (2002) describieron un incremento en parámetros celulares, como el número de eritrocitos, linfocitos y macrófagos y un aumento de la actividad lisozímica de Salmo salar, Oncorhynchus mykiss y Scophthalmus maximus alimentados con probióticos seleccionados, tanto Gram-positivos como Gram negativos. Villamil et al. (2002) evaluaron los efectos inmunomoduladores de varias cepas de LAB de origen terrestre, encontrando que L. lactis viable e inactivado por calor incrementa funciones inmunitarias de rodaballo (S. maximus), como quimioluminiscencia de macrófagos de riñón anterior y concentración de lisozima en suero (Villamil et al., 2009).
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Al igual que en estudio del género Saccharomyces han encontrado que contiene grandes cantidades de ß-glucanos en su pared celular, que actúan como promotores de la activación inespecífica del sistema inmune. Estos compuestos, son polímeros de glucosa con uniones beta-(1-3) que se pueden encontrar en forma de partículas o en forma soluble y tienen capacidad inmunoestimulante, mediante la estimulación de macrófagos y neutrófilos y de esta manera protegiendo al huésped de infecciones, ya que en situaciones de estrés se producen y liberan corticoides endógenos, que deprimen la respuesta inmune y se genera un desequilibrio en la flora intestinal, situación propicia para la colonización por patógenos
(Pelizon et al, 2003).
Tambien en el trabajo experimental “Evaluación del crecimiento de un cultivo de Daphnia magna alimentado con Saccharomyces cereviseae y un enriquecimiento con avena soya” realizado por Ocampo y colaboradores en el 2010, emplearon una dieta de Saccharomyces cereviseae y un medio de enriquecimiento con ácidos grasos (n-6) proveniente de harina avena- soya, donde hallaron diferencias altamente significativas (p<0.01) para el efecto del tratamiento con una concentración de 25 ppm Saccharomyces cereviseae + harina de avenasoya a una concentración de 25 ppm. De igual forma observaron una diferencia significativa (p<0.05) en el tratamiento con Saccharomyces cereviseae a 12.5 ppm + harina de avena-soya 25 ppm sobre el crecimiento poblacional de los cladóceros. En el resto de los tratamientos no se observaron diferencias significativas (p>0.05). Se evidenció que la combinación de estos componentes en sus concentraciones más altas potenció el crecimiento de la Daphnia magna, alcanzando un número de microcrustáceos de 826ª Daphnias/L ± 9.57. Se puede concluir que los cladóceros por
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sus características de crecimiento en cultivo, presentan adaptación inmunológica favorable a las condiciones de manejo para la producción de biomasa útil como alimento vivo en acuicultura.
3.1.6. Incidencia en la calidad de agua.
Resientes estudios asociados al uso de probióticos han venido mostrado como estos inciden en el mejoramiento de la calidad de las aguas tratadas en la industria acuícola. En el estudio realizado por Melgar y otros (2012), llamado “Efecto de microorganismos con potencial probiótico en la calidad del agua y el crecimiento de camarón Litopenaeus vannamei en cultivo intensivo”, analizaron el efecto de una mezcla comercial de microorganismos con potencial probiótico (Rhodopseudomonas palustris, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus caseicon y
Saccharomyces cerevisiae), en la calidad del agua y sedimento, así como en el crecimiento de postlarvas de L. vannamei en un sistema de cultivo intensivo. Tratamiento 1 (C), estaques sin dosificación del producto (control), tratamiento 2 (EM1), estanques adicionados con una dosis de 4L/ha, y tratamiento 3 (EM2), estanques adicionados con dosis de 10L/ha. Los resultados arrojaron una diferencia significativa en las mediciones ambientales de calidad de agua entre el tratamiento control y los tratamientos dosificados con la mezcla probiótica. Los tratamientos EM1 y EM2 mantuvieron significativamente regulados los valores del pH
(EM1, 8.03±0.33; EM2, 7.77±0.22) y redujeron las concentraciones de nitrato (EM1,
0.64±0.25mg/L; EM2, 0.39±0.26mg/L). El tratamiento EM2 presentó la mayor remoción de materia orgánica (1.77±0.45%). El tratamiento EM1 mejoró la TCE (2.69±0.35%/d) y FCA
(1.46±0.20). Los tratamientos EM1 y EM2 presentaron mayor supervivencia con 61±8.76% y
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60±10.5%, respectivamente.
Se ha propuesto que las bacterias del género Bacillus seleccionadas como probióticos pueden convertir la materia orgánica en CO2, en contraste con las bacterias Gram-negativas que se caracterizan por convertir materia orgánica en biomasa bacteriana o limo (Dalmin et al., 2001).
Laloo et al. (2007) comprobaron la capacidad de tres aislados del genero Bacillus para disminuir las concentraciones de nitritos, nitratos y amonios en el agua de cultivo de peces ornamentales.
Este mismo fenómeno también fue observado por Kim et al. (2005) en B. subtilus, B. cereus y
B. licheniformis, quienes atribuyen estos efectos a mecanismos tales como bioacumulación, bio- asimilación y nitrificación (Villamil et al., 2009).
3.2. FUNDAMENTOS GENERALES DEL ALIMENTO VIVO
Varias investigaciones de especies neotropicales de agua dulce han demostrado la necesidad de uso de alimento vivo. La composición bioquímica del zooplancton para los peces es importante, siendo considerado el alimento que contiene la mayoría de las sustancias nutritivas y que sirve como base para las dietas experimentales. Principalmente, el valor nutritivo se basa en el contenido de aminoácidos y ácidos grasos esenciales, entre otros elementos que favorecen el crecimiento y la sobrevivencia de las postlarvas (Prieto & Atencio,
2008).
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Un ejemplo de ello es el trabajo presentado por Romo (2014), denominado “Efecto del alimento vivo daphnia magna y enchytraeus buchholzi en juveniles de apistogramma cacatuoides en condiciones de cautiverio, en la ciudad de palmira, valle del cauca”. Cuyos resultados mostraron que el tratamiento con el gusano grindal (T2) fue estadísticamente superior a los otros tratamientos, donde la tasa de crecimiento simple fue del 2.25%, seguido de la dieta con pulga de agua (T1) con 2.17% y finalmente el alimento balanceado (T0) con 1.86%, en el cual el incremento de talla y sobrevivencia fue mayor en los tratamientos con alimento vivo.
3.2.1. Aspectos generales de la levadura.
La Saccharomyces cerevisiae, es un hongo cuya pared celular contiene de 6 a 8 % de proteína, un promedio de 8.5 - 13.5 % de lípidos y un gran porcentaje de vitamina B (tiamina, riboflavina, ácido fólico, etc.), empleado como dieta en tilapia nilotica (Oreochromis niloticus
(L.)), por su capacidad de potenciar la respuesta inmune y el crecimiento, debido a que posee inmunoestimulantes como: los β-glucanos y manano oligosacáridos (MOS) (Abdel-Tawwab et al., 2008; Ocampo et al., 2010), Además S. cerevisiae es una microorganismo anaerobio facultativo: transformando azúcar a la misma velocidad, la levadura aeróbica produce dióxido de carbono, agua y una producción relativamente alta de nueva levadura, mientras que crecida anaeróbicamente tiene una velocidad relativamente lenta de crecimiento, que se acopla a una alta conversión de azúcar en alcohol y dióxido de carbono. Dentro de sus requerimientos nutricionales se encuentra el carbono, como el mayor compuesto encontrado en la célula, utilizando para su metabolismo glúcidos como hexosas, disacáridos y trisacáridos. El nitrógeno,
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es utilizado en forma de ión amonio y es utilizado en aminoácidos, vitaminas y nucleótidos.
Otros elementos como fósforo, azufre, potasio, magnesio, calcio, zinc y manganeso son importantes dentro de su metabolismo (Bouix, 2000).
Al encontrarse activa o viable con un conteo de 10 mil a 20 mil millones de células vivas por gramo, esta levadura se utiliza principalmente como probiótico, algunas de sus funciones reportas por Agarwal et al (2000), son:
Promotor de crecimiento
Aumenta la producción de vitamina B.
Mayor ganancia de peso.
Rápida digestión de algunos alimentos.
Acción estimulante de la inmunidad.
Mejora la asimilación de nutrientes.
Corrige el balance de la población microbiana
3.2.2. Aspectos generales del Zooplancton.
EL rotífero Philodina sp. es un género filtrador de partículas orgánicas en suspensión
(bacterias, detritus, algas, levaduras, protozoos), tiene una longevidad de 48 días promedio, la hembra pone 45 huevos y el intervalo de una generación a otra es de cuatro días. La composición nutricional varia de 6.0% a 7.9% de proteína cruda, 1.4% a 3.7% de lípidos,
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0.16mg/g de calcio y 1.1 a 1.5gm/g de fosforo (Watanabe et al., 1983; Corral et al. 2000). Su tamaño varía entre 320-540µm.
El perfil de aminoácidos reportado para Daphnia sp. es tirosina (4.27%), triptófano (3.62%), arginina (10.92%), histidina (2.69%), cistina (1.17%), metionina (3.45%) (Torrentera y Tacón,
1989; Ocampo, Botero & Restrepo, 2010). Su valor nutricional en cuanto a proteína y grase en base seca es de 70% de proteína y 13% de grasa (Díaz, et al,. 1996; Ocampo et al. 2010). Su tamaño varía según su sexo entre las 2000µm y 6000µm.
3.2.3. Aspectos generales del Fitoplancton.
La Chlorella sp. es una microalga redonda, con membrana muy fina y cloroplastos acampanados, gran vacuola excéntrica. Su tamaño esta entre 5 y 10µm. El valor nutricional representa 42-58% de proteína de su biomasa. En condiciones óptimas de crecimiento, esta puede alcanzar 5-40% lípidos por peso seco de biomasa y de carbohidratos oscila entre 12-55%
(Safi., et al, 2014).
El Chlorogonium sp. se caracteriza por tener dos vacuolas contractiles en forma de halterios y dos flagelos de la misma proporción, su tamaño oscila entre 20µm y 45µm. se reporta un valor nutricional de 52-60% de proteína peso seco de la biomasa, el contenido de ácidos grasos representa el 3.5-5% del peso y de carbohidratos oscila entre 10.4-25% (Kreuzberg., et al, 1990).
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3.3. BIOLOGÍA DEL BOCACHICO
El bocachico es un pez detritívoro endémico de Colombia. Habita en toda las zonas bajas de los sistemas del Magdalena, Sinú y Atrato, hasta aproximadamente los 1000 m s.n.m. Por el río
Cauca alcanza a remontar a la cuenca alta hasta los 1500 m s.n.m. debido a la pendiente suave
(Mojica, et al. 2012).
3.3.1. Clasificación taxonómica.
La clasificación taxonómica del Bocachico del rio magdalena fue descrita por el especialista
Steindachner (1879). La posición taxonómica del pez se define como:
Filo: Chordata Clase: Actinopterygii Subclase: Neopterygii Infraclase: Teleostei Superorden: Ostariophysi Orden: Characiformes Familia: Prochilodontidae Género: Prochilodus Especie: P. magdalenae
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Figura 2. Morfología externa de bocachico adulto.
3.3.2. Identificación morfológica.
Así como se muestra en la (Figura 2.) el pez es de cuerpo alargado, grueso, boca muy pequeña subterminal en forma de embudo con dientes viliformes en los labios, ojos grandes, presentan escamas grandes y ásperas, con una espina eréctil delante de la aleta dorsal. El dorso es grisáceo oscuro, los lados plateados y el vientre rosado; la cola es oscura en la mitad y rojiza en los extremos, los extremos de las aletas pectorales, pélvica y anal también son rojizos; la aleta dorsal tiene pequeñas manchas (Cortez, 2003).
3.3.3. Parámetros ambientales.
Las características fisicoquímicas ideales del medio natural en el que suele habitar el bocachico y que debe presentar el agua según Cortés (2003) son:
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Tabla II. Parámetros Físico-Químicos óptimos del agua para el cultivo de Bocachico.
Parámetros Rangos Óptimos
pH 6.5 a 8.5
Alcalinidad 30ppm a 50ppm
Oxígeno Disuelto 2ppm a 4 ppm
Amoniaco 1ppm a 2 ppm
Temperatura 28 a 30 °C
Dureza 20ppm a 40ppm
3.3.4. Requerimientos nutricionales.
Esta especie tiene baja conversión alimenticia y necesitan de mucho espacio para un buen crecimiento. Por ello los laboratorios de investigación han elaborado dietas que sirven como base para el desarrollo y prueba de nuevos alimentos, los cuales se basan en ingredientes comunes disponibles y que han presentado buenos resultados bajo condiciones de laboratorio y de producción (Gonzales y Wills, 2003). Uno de esos trabajos realizados en condiciones en laboratorio se presenta a continuación en la tabla 2 como una composición calculada de nutrientes de la dieta utilizada para alimentar a los alevines de bocachico.
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Tabla III. Requerimientos nutricionales para el Bocachico (Prochilodus magdalenae) en etapa de alevinaje.
Dieta convencional Dieta semipurificada NUTRIENTES (%) (%) Proteína 36 36 Energía 3100 3100 Lisina 2.46 2.50 Metionina 1.37 1 Cistina 1.37 1 Treonina 1.50 1.36 Triptófano 0.40 0.40 Arginina 2.23 1.64 Isoleucina 1.61 1.71 Leucina 2.55 2.92 Fenilalanina 1.45 1.60 Vitamina 1.78 2.31 Calcio 2.1 2.1 Fosforo disponible 1 1 Sodio 0.36 0.36 Determinados por Gonzales y Wills (2003)
3.4. ANTECEDENTES
Las publicaciones e investigaciones que se han realizado en el manejo de probióticos han sido múltiples los estudios es animales (Figura 3.), confirmando la necesidad estudiar microorganismos que puedan favorecer su crecimiento, además de las ventajas que traen estos
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sobre la calidad del agua de los sistemas empleados en el cultivo de peces, especialmente en los estanques en la industria acuícola (Balcazar et al., 2006).
Figura 3. Número de publicaciones relacionadas al uso de Saccharomyces cerevisiae como potencial probiótico, de las cuales 65 están asociadas a peces, realizadas entre los años 2004 y 2017 (Fuente: Web of Science, 2018)
Cabe resaltar varias de estas investigaciones, por ejemplo, Villamil y Martínez (2009) reseñan en su trabajo llamado “Probióticos como herramienta biotecnológica en el cultivo de camarón” las publicaciones más destacadas en el uso de probióticos en acuicultura, enfocándose en el cultivo de camarón, ya que se perfila como una de las alternativas con mejores perspectivas al uso indiscriminado de antibióticos que causan diversos problemas tales como la aparición de cepas bacterianas multiresistentes que pueden alterar los ecosistemas próximos al cultivo e incluso afectar la salud del consumidor y destacan su contribución al establecimiento de la microbiota intestinal, incremento en el peso por la mejora en la asimilación del alimento efecto benéfico el incremento de la conversión alimentaria, aumenta la supervivencia, la resistencia a
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infecciones y la respuesta inmune de los organismos cultivados, así como la mejora de la calidad de agua.
En el proyecto experimental “Efecto de la inclusión de probióticos y prebióticos sobre el desempeño productivo y la sobrevivencia de alevinos de tilapia nilotica (Oreochromis nilocticus) variedad chitralada” que Mahecha realizaría en el 2006 bajo la dirección del profesor
Miguel Landines Ph.D., se utilizaron 240 alevinos, distribuidos aleatoriamente en 24 acuarios, asignados al azar para 6 tratamientos. Se alimentaron con un concentrado comercial con 24% de proteína cruda, más una dieta comercial de probióticos y prebióticos e la siguiente manera; Para el T1: Dieta comercial + mezcla comercial de probióticos (Streptococcus thermophilus,
Bifidobacterium bifidus y Saccharomyces cerevisiae), T2: Dieta comercial + levadura
(Saccharomyces boulardi), T3: Dieta comercial + bacterias ácido lácticas (Lactobacillus acidophilus y Bifidobacterium bifidus), T4: Dieta comercial + mezcla de levadura y bacterias
ácido lácticas. T5: Dieta comercial + prebióticos (lactosa y glucosa). T6: (Control). Se encontró diferencia significativa (p<0,05) entre el tratamiento 5 (prebióticos) y el tratamiento
6 (control), siendo evidente una superioridad en el primero; por otro lado, no se observaron diferencias significativas (p>0,05) entre los demás tratamientos analizados, situación que se repitió en todos los tratamientos para el tercer muestreo (42 días). Por
último, a los 56 días, se observaron diferencias significativas (p<0,05) entre los tratamientos 5, donde se obtuvo la mejor ganancia, y el tratamiento 3 (bacterias lácticas), en el cual se encontró la menor de los tratamientos con probióticos, entre los cuales, la dieta 4
(mezcla de bacterias lácticas y levadura), superó a la 2 (levadura). Por otro lado, no se encontraron diferencias significativas (P>0,05) entre los tratamientos 1 (mezcla comercial
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de probióticos) y 6 (control).
En otro trabajo se reconoce la capacidad sinérgica, sintrópica y metabiotica que tienen las bacterias y levaduras para disminuir de la capacidad contaminante de las aguas servidas en donde los microorganismos pueden servir de alimento a los peces y disminuir tanto los vertimientos a los cuerpos de agua como el consumo de alimento concentrado. Este trabajo fue realizado por Ladino y Rodriguez (2008) nombrado, “Efecto de Lactobacillus casei,
Saccharomyces cerevisiae, Rhodopseudomona palustris (microorganismos eficientes em) y melaza en la ganancia de peso de tilapias (Oreochromis sp) en condiciones de laboratorio”.
Donde, se evalúo el efecto de un cultivo comercial de EM en la ganancia de peso de alevinos de tilapia Oreochromis sp. Alevinos (n=10) con un peso promedio de 0,604 ± 0,059 g, fueron ubicados durante un periodo de 2 semanas en 10 contenedores plásticos de 25 litros, en condiciones de laboratorio. Se utilizaron cinco contenedores como control (T1), los cinco restantes (T2) recibieron 2ml diarios de un producto comercial compuesto por Lactobacillus casei; Saccharomyces cerevisiae, Rhodopseudomona palustris, cada uno con 106 unidades formadoras de colonias suspendidas en una mezcla de melaza y agua. El alimento proporcionado consistió en un producto comercial con 40% de proteína, la ración alimenticia fue igual al 6% del peso inicial de los peces. El pH de los contenedores, se mantuvo estable en 6,7, la temperatura en 27 grados y el oxígeno en 7 ppm. La ganancia de peso con T1 mostró una ganancia de peso de 0.7321g ± 0.2126 con un coeficiente de variación de 29.05. Para T2 se evidenció una ganancia de peso de 0.8034gm ± 0.095 con un coeficiente de variación de 11.87.
No hubo diferencia estadística significativa (P>0.05).
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Por otro lado Díaz y colaboradores (2014) en su investigación “Efecto de un suplemento líquido a base de Saccharomyces cerevisiae y Lactobacillus casei para la alimentación de mojarra roja (Oreochromis sp) en etapa de alevinaje y precria”, en el que se obtuvieron fermentativamente los probióticos determinando así su composición bromatológica, y donde se evaluó la ganancia de peso, supervivencia y talla de las especies en las etapas de alevinaje y precría durante 7 semanas de suministro, respecto al tratamiento control. Los resultados mostraron que el mejor peso promedio y talla se alcanzó con el tratamiento T2 (50% suplemento proteico liquido), seguido por el tratamiento con 75% de suplemento (T3), siendo éste estadísticamente similar al tratamiento con 100% de suplemento proteico (T4), quedando rezagados los tratamientos T0 y T1 correspondientes al alimento comercial (control) y 25% de suplemento, respectivamente. Se consiguió una reducción del tiempo para pasar de la etapa de alevinaje a precría en 10 días (de 45 a 35 días), lo que se traduce en mayores ganancias para el piscicultor.
También los probióticos pueden ser considerados como una opción viable para sustituir a los antibióticos como promotores de crecimiento. Tal como lo proponen Flores y colaboradores
(2002) en su trabajo titulado “Nivel óptimo de inclusión de una levadura probiótica
(Saccharomyces cerevisiae, sc 47) como promotor de crecimiento para tilapia nilótica
(Oreochromis niloticus)”. En el que probaron cinco concentraciones de levadura
(Saccharomyces cerevisiae): 0.03% (3x107 Unidades Formadoras de Colonias, UFC g –1 alimento), 0.07% (7 x107 UFC g-1), 0.1% (1 x108 UFC g-1), 0.15% (1.5 x 108 UFC g-1) y 0.2%
(2 x 108 UFC g-1). Para cada concentración se incluyeron dietas con levadura activada (LA) por treinta minutos en agua destilada y levadura no activada (LNA), teniendo, por lo tanto, un total
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de 10 dietas experimentales y un control sin levadura (11 tratamientos). A todas las dietas se les agregó el 0.5% de óxido de cromo como marcador para determinar los niveles de digestibilidad del alimento y de la proteína. En cada una de las 44 tinas se sembraron 20 tilapias con un peso promedio de 900 mg ±10mg y se acondicionaron al sistema experimental por un periodo de siete días durante el cual se les suministró alimento balanceado con 40% de proteína. Después de este lapso, se les asignó de manera aleatoria el tratamiento correspondiente con cuatro réplicas para cada uno. El alimento se proporcionó manualmente a razón del 8% de la biomasa total, dividido en tres raciones durante el día. El peso final de los organismos fue estadísticamente semejante entre los tratamientos (p>0.05), sin embargo, las dietas LNA07 y LNA1.5 dieron lugar a mejores resultados con respecto al control. Los peces que recibieron las dietas LA03 y LA07 presentaron el menor peso final con respecto a todos los tratamientos. Esta tendencia se observó en los cálculos de peso ganado en porcentaje y en la tasa específica de crecimiento con resultados estadísticamente iguales (p>0.05). Aun cuando los resultados en las dietas con levadura no activada fueron mayores, no hubo diferencias estadísticas entre el tipo de levadura. Los resultados de peso ganado individual (mg/día) fueron estadísticamente semejantes (p>0.05) entre los diferentes tratamientos, pero las dietas que contenían, 0.07% (LNA07), 0.1% (LNA1), 0.15%
(LNA1.5) de levadura no activada y 0.15% (dieta LA1.5) de levadura activada, dieron lugar a valores más elevados que el control. El aprovechamiento del alimento fue mejor en las dietas que contenían levadura, lo que indica que los peces tienen mayor disponibilidad de nutrientes para el crecimiento y para la obtención de energía. Esto a largo plazo se refleja en lograr animales más sanos y con tallas más adecuadas para la comercialización en un menor tiempo.
Al igual que el trabajo anterior donde se muestra una favorabilidad en el uso de levadura en la
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ganancia de talla en los peces Rodríguez (2013) en su investigación denominada “Efecto de la inclusión de la levadura de cerveza (Saccharomyces cerevisiae) en el alimento, sobre la respuesta biológica de la gamitana (Colossoma macropomum, Cuvier 1816) en la fase de crecimiento”. Donde se usó 300 peces con peso promedio inicial de 70.8 ± 2.3 g y 15.3 ± 0.18 cm de talla; en un diseño completamente al azar, con 2 tratamientos (T1: sin Saccharomyces cerevisiae y T2: dieta con 1% de Saccharomyces cerevisiae) y 1O repeticiones cada uno. Estos se cultivaron en un estanque de tierra, con densidad de siembra de 30 peces/m3, la tasa de alimentación fue de 5,3 y 2.5% para el primer, segundo y tercer mes de evaluación respectivamente, con una frecuencia alimentaria de 3 veces al día, a las 9, 13 y 17 horas. Se registró el peso y talla cada 15 días, al final del ensayo se calculó la ganancia de peso (GP), ganancia de talla (GT), conversión alimenticia aparente (CAA), factor de condición (K), consumo de alimento (CA), sobrevivencia (S) y rendimiento productivo (Rp); también, se hizo el recuento de unidades formadoras de colonia (UFC) de Saccharomyces cerevisiae en las dietas e intestinos. Se demostró y se encontró diferencia estadística (P<0.05) para GP, GT, CAA y K, a excepción del CA, S y Rp (P>0.05). La colonización en las dietas fueron diferentes estadísticamente (P<0.05), pero en el intestino de gamitanas no se registró diferencias (P>0.05) al igual que en los índices económicos. La adición de 1% de Saccharomyces cerevisiae en la ración mejoró la GP, GT y CAA; además, sólo incrementó la colonización de Saccharomyces cerevisiae en la ración del T2.
En otro proyecto investigativo llamado “Efecto de inclusión de dos probióticos y un prebiótico en la dietas para alimentación de alevinos de cachama blanca (Piaractus brachypomus)”, Pérez (2004) determino el efecto de la inclusión de dos probióticos (Probiótico
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A: Lactobasillus acidophyllus 108 UFC/g, Bacillus subtilis 108 UFC/g y Saccharomyces cerevisiae 106 UFC/g – Probiótico B: Lactobacillus casei 108 UFC/g, Bacillus cuagulans 108
UFC/g, y Rodotorula sp. 106 UFC/g), un prebiótico (paredes fosforilada de levadura
Saccharomyces cerevisiae) y un tratamiento control en una dieta basal (3650Kcal ED y 45% PC con una relación energía proteína de 8.11). se alimentaron 80 alevines de cachama blanca
(Piaractus brachypomus) con un peso inicial de 0.81g distribuidos en 16 acuarios (cuatro repeticiones por tratamiento) en ambiente controlado. No se observó efecto significativo de ninguno de los tratamientos aplicados en los animales experimentales, sin embargo, los individuos alimentados con la dieta base y suplementados con el prebiótico presentaron los mejores rendimientos (P<0.05) para las variables evaluadas: Guanacia de peso (41.22g), peso final (43.03g), tasa especifica de crecimiento (8.96) y conversión alimenticia (0.72). La variable sobrevivencia fue del 100% en todos los tratamientos.
Por otro lado Hualinga (2013) no presenta un resultado significativamente favorable para crecimiento de los peces, en su estudio “Efecto del probiótico EM® agua en el crecimiento y composición corporal de alevinos de Piaractus brachypomus “paco” (Cuvier, 1818) (pisces, serrasalmidae), cultivados en corrales”. La población experimental fue de 1224 alevinos de paco de 13.29 ± 1.29 de peso promedio inicial y 8.66±0.77 de longitud promedio inicial, distribuidos en 12 unidades experimentales de 51 m2 cada unidad; a razón de 2 peces/m2. El experimento se realizó con un Diseño Completamente al Azar con cuatro tratamientos y tres réplicas por tratamiento. Los tratamientos fueron los niveles de dosificación del probiótico EM – Agua en el alimento balanceado T1 (6ml/kg), T2 (10ml/kg), T3 (14ml/kg) y T4 (0ml/kg).
La alimentación de los alevinos fue con piensos de marca comercial Nicovita 28%PB
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durante 120 días, la frecuencia de alimentación fue de 2 veces al día (08:30 y 17:00 hrs.) a razón de 5% de la biomasa. El estudio evaluó el crecimiento de los peces mediante indicadores de crecimiento cada 20 días. Para el análisis de datos se utilizó el programa ANOVA (P<0.05). Los resultados muestran que estadísticamente todos los tratamientos son iguales no existiendo diferencias significativas; pero el T1 dio a lugar a valores más alentadores con un peso y longitud final de 304,33 ± 43,85 g y 23,10 ± 1,38 cm; ganancia de peso de 290,5 ± 43,9; en cuanto al ICAA fue de 1,5 ± 0,2; TCE Fue de 2,6 ± 0,2 y la sobrevivencia de 100 ± 0,0.
En bocachico el estudio del uso de probióticos es escaso, sin embargo, Atencio y colaboradores en 2015 en su investigación “Evaluación del desempeño de la larvicultura de bocachico Prochilodus magdalenae utilizando macroagregados de floc como primera alimentación”, lograron mejorar la sobrevivencia de alevines y la calidad de agua tratada. Para ello se evaluó el desempeño en la larvicultura de bocachico utilizando macroagregados de floc para el manejo de primera alimentación de larvas de bocachico. Larvas de bocachico fueron obtenidas por reproducción artificial, a inicio de la alimentación exógena, se instalaron en unidades experimentales con aireación, volumen útil de 30L, a densidad de 25 larvas/L. Se preparó y estabilizó el inóculo inicial de bacterias nitrificantes (BN) a partir de una muestra del fondo de un estanque de la EPR; luego de 14 días de maduración se realizó la caracterización de los macroagregados y se determinó la abundancia de organismos. La ganancia en longitud y peso, sobrevivencia y resistencia al estrés fueron evaluados como respuesta de desempeño frente a cuatro tratamientos basados en diferentes concentraciones de macroagregados: 1ml/L (T1), 2.5ml/L (T2); 5 ml/L (T3),5 nauplios de artemia/ml T4
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(control). Se caracterizó la calidad de agua midiendo parámetros como dureza, alcalinidad, pH, temperatura, oxígeno disuelto; la cual resultó con valores adecuados para la larvicultura de bocachico. Los resultados fueron analizados mediante análisis de varianza, seguida de una prueba de rango múltiple a los datos registrados con una significancia de P>0.05. El mayor crecimiento se registró en el grupo de larvas alimentadas con naúplios de artemia (T4); mientras que la mejor sobrevivencia (74.2±13.4%) se obtuvo cuando se alimentó a 5 ml de macroagregados/L (T3).
Al igual que el estudio anterior demostró los beneficios que tiene el uso de probióticos en la producción de alevinaje Prochilodus magdalenae en la “Evaluación de la aplicabilidad de probiótico en las fases larvarias de Bocachico y Tilapia para optimizar rendimiento productivo” hecho por Hernández (2015), se utilizó el probiótico Ecobacter AQ, el cual se comercializa para ser usado en la biorremediación de aguas. Se realizó un diseño experimental de cuatro tratamientos con tres replicas cada uno (4*3), que tuvo una duración de 15 días, utilizando larvas que acaban de absorber el saco vitelino, en donde el tratamiento (T)1 fue alimento concentrado con probiótico Ecobacter AQ al 10%, el tratamiento (T)2 fue alimento concentrado sin probiótico, el tratamiento (T)3 fue alimento vivo con probiótico Ecobacter AQ al 10% y el tratamiento (T)4 fue alimento vivo sin probiótico. Para el caso de la Tilapia en donde se utilizaron para los bioensayos larvas de 0,010 gramos y 8 mm en promedio, encontrando que efectivamente hubieron diferencias significativas entre los tratamientos y los valores más favorables en cuanto al peso fueron para el tratamiento de alimento concentrado + probiótico con un valor promedio de 0.056 gramos/larva y de 14,76mm/larva. En cuanto al Bocachico en donde se utilizaron para los bioensayos larvas de 0,009gramos y 5.8mm en promedio, se registró
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que efectivamente hubieron diferencias significativas entre los tratamientos y los valores más favorables en cuanto al peso fueron para el tratamiento de alimento vivo+ probiótico con un valor promedio de 0,11 gramos/larva; y de 18.2mm/larva, demostrado un resultado favorable parara la tilapia y el bocachico.
Adicional a los resultados citados con anterioridad encontramos que estudios con levaduras, concretamente Saccharomyces cerevisiae, los resultados obtenidos por Muhsen et al. (2008), entre otros trabajos, vienen indicando que el suplemento de levadura de panadería es prometedor como un método alternativo a los antibióticos, la prevención de enfermedades en la acuicultura, la ganancia de peso y sobrevivencia. El trabajo al que hacemos referencia es “Evaluación de la levadura comercial de panadería, Saccharomyces cerevisiae como promotor de crecimiento e inmunidad para la tilapia del Nilo, Oreochromis niloticus (L.) desafiada in situ con Aeromonas hydrophila”. En este estudio se evaluó el uso de levadura comercial de panadería. Los peces
(0,33 g) se distribuyeron aleatoriamente 25 peces por acuario de 140L y se alimentaron con una dieta que contenía 0.0, 0.25, 0.50, 1.0, 2.0 y 5.0g de levadura/kg durante 12 semanas. Después del período experimental, los peces de cada tratamiento fueron desafiados por Aeromonas hydrophila patógena, que se administró por inyección interperitoneal (IP) y se mantuvo en observación durante 10 días para registrar los signos clínicos y la tasa de mortalidad diaria. Las influencias promotoras del crecimiento de la levadura de panadería se observaron con los peces y el crecimiento óptimo, la utilización de alimento y el cambio de proteína se obtuvieron con
1.0-5.0 g de levadura/kg de dieta. Además, la suplementación con levadura aumentó la deposición de proteínas en el cuerpo de los peces. Los parámetros bioquímicos se mejoraron en los peces alimentados con levadura hasta 1,0g/kg de dieta. La mortalidad total de peces 10 días
39
después de la inyección de IP con A. hydrophila y su recuento después de la incubación con suero de pescado disminuyó con el aumento del nivel de levadura en las dietas de peces. Sin embargo, la mortalidad más baja de peces y los recuentos bacterianos se obtuvieron en peces alimentados con 5,0g de levadura/kg. El nivel óptimo de levadura de panadería viva fue de aproximadamente 1,0 g por kg de dieta.
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4. METODOLOGÍA
4.1. LOCACIÓN
El presente trabajo se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Ictiología y Peces
Ornamentales de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia en la Universidad Nacional de Colombia, sede Bogotá. También se contó con el apoyo del Laboratorio de Microbiología
Veterinaria, donde se llevó acabo el cultivo de la cepa probiótica. La temperatura promedio del laboratorio de ictiología fue de 24 °C con una humedad relativa de 85%.
4.2. MATERIALES, EQUIPOS E INSUMOS
A continuación se presentara una lista de los elementos empleados para la ejecución del experimento.
41
4.2.1. Materiales.
Acuarios de 70 L Tanque de 1000L Manguera de aireación Piedras difusoras Nasas Papel Plástico Baldes plásticos 10L Recipientes de almacenamiento. Vidriería Atomizador Sifoneador Tamices Tubos falcon 15ml
4.2.2. Equipos.
Balanza digital Balanza analítica Termómetro digital Termostatos Cabina de flujo laminar Microscopio electrónico Camara Neubauer
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Blower Incubadora Horno de secado Autoclave Computador portátil Cámara fotográfica digital Multiparametro portátil
4.2.3. Insumos.
Concentrado 36% de proteína Sal marina Fertilizante triple 15 Urea Alcohol 90% Probiótico (Saccharomyces cerevisiae) Agua declorada Agua desionizada Agua destilada Eugenol Agar Sabouraud Formol 10%
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4.3. PROCEDIMIENTOS
Los siguientes procedimientos se desarrollaron el laboratorio de Ictiología y Peces
Ornamentales y el Laboratorio de Microbiología Veterinaria para ello contamos con asistencia profesional.
4.3.1. Cultivos de alimento vivo.
En esta fase del proyecto se siguieron protocolos propios del laboratorio donde se utilizó dos cepas de microalgas (Chlorella sp. y Chorogonium sp.) obtenidas por el Laboratorio de Cultivo de Algas del Departamento de Biología de la Universidad Nacional. Este medios nos sirvió como base alimenticia para los cultivos de zooplancton; la primera para alimentar el cultivo de
Daphnias sp. y la segunda para alimentar el cultivo de Phillodinia Sp. La obtención de las cepas de estos animales fue suministrada por el Laboratorio de Ictiología. El zooplancton cultivado en el laboratorio se empleó en la dieta de los alevinos de Bocachico a un volumen del 10% para cada tratamiento.
4.3.1.1. Protocolo del fitoplancton.
El cultivo de microalgas se realizó en cuatro recipientes de vidrio (4L); dos para el cultivo de
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Chlorella sp y dos para el cultivo de Chorogonium sp. En cada uno de estos recipientes se adiciono 3L de agua desionizada con un pH de 7 y una temperatura de 23 °C, adicionalmente a ello se agregó una piedra difusora con el propósito de mantener el medio en constante recirculación para obtener la mayor absorción de luz natural evitando la sedimentación, luego se sembró en cada frasco 500ml de las cepas.
Para los cultivo se empleó una dieta de urea (20ml/L) y un fertilizante foliar comercial
(20ml/L). Una vez establecidos los cultivos se esperó una semana a que la tasa poblacional aumentara. En el mantenimiento de los cultivos de microalgas, se renovaba el 70% del agua cada dos semanas y se alimentaba con las mismas concentraciones empleadas en la dieta en las mismas condiciones ambientales.
4.3.1.2. Protocolos del zooplancton.
Para el cultivo de Daphnias sp. se sembró a razón de 10 individuos por cada 3L de agua de acuario en 5 frascos de vidrio (4L), con una temperatura de 22 °C y con un pH de 6,7. En cada recipiente se adiciono una piedra difusora con el propósito de mantener el medio oxigenado.
Posteriormente se agregó 10ml del cultivo con Chlorella sp. cada 3 días durante dos semanas y, donde se realizó un recambio de agua del 50% en una semana.
Pasada las dos semanas de siembra se trasladaron todos los individuos, (dejando solo 10 individuos por frasco y realizando un recambio de agua del 100%) a un acuario con 120L, bajo condición ideales para su reproducción por partenogénesis (temperatura 28 °C; pH de 6,7),
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además de la piedra difusora, se alimentan cada tres días. El mantenimiento se realizó cada 15 días, en el que, se vuelve a transferir al acuario los individuos de los frascos.
En el cultivo de Philodinia Sp. se sembró a razón de 10 individuos/ml por cada 3L de agua desionizada en 5 recipientes de vidrio (4L) a una temperatura de 22 °C y un pH de 7. Después se adiciono inicialmente a la dieta del rotífero 20ml del medio que contiene Chorogonium sp. En estos medios el uso de piedra difusora no fue necesario ya que el rotífero suele crecer mejor en el sedimento. El suministro de la alimentación fue cada semana con 10ml del cultivo de
Chorogonium sp. El mantenimiento de este medio se realizó cada dos semanas donde se hizo un recambio de agua del 50% sin deshacerse del sedimento ya establecido en los recipientes.
4.3.2. Cultivo de la cepa probiótica.
La levadura utilizada fue obtenida en DISTRINES Distribuidores en Colombia de insumos para cerveza artesanal. La cepa se caracteriza por su rápida capacidad fermentativa en una temperatura de fermentación entre los 12-25°C, condiciones idóneas que nos permitió mantenerla en el laboratorio dispuesta para este experimento.
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4.3.2.1. Activación.
En 5ml de agua destilada a una temperatura de 27+3 °C se rehidrato 1g de la levadura seca en un Beaker 50ml, una vez que la levadura se constituyó en forma de crema se mantuvo en agitación por alrededor de 15 min.
4.3.2.2. Inoculación.
Para la inoculación se preparó un cultivo sólido. Se tomó 19.5gr de polvo Sabouraud y se diluyo en 300ml de agua destilada calentándolo y agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para homogeneizar la mezcla. Luego se esterilizado en autoclave a
121° C durante 15 minutos. Posteriormente se le adiciono a 15 cajas de Petri (25ml).
El método de siembra utilizado fue en estrías cruzadas por superficie en el medio de cultivo solido con agar Sabouraud. Este procedimiento se llevó a cabo en una cámara de flujo, con la ayuda de una asa bacteriológica en L previamente esterilizada una muestra del inoculo.
4.3.2.3. Incubación.
La levadura viable se mantuvo en una incubadora a una temperatura de 22°C, 24 horas con
47
el fin de obtener colonias para suministrarlas a las dientas con sus respectivas concentraciones.
4.3.2.4. Unidades formadoras de colonias.
Finalizado el tiempo de incubación se realizó el conteo de las Unidades Formadoras de
Colonia (UFC), con la técnica de la Cámara de Neubauer. Se basó en contar las “unidades formadoras de colonias” o UFC presentes en un gramo (probiótico activado) de una muestra. El recuento se realizó bajo un microscopio electrónico con el objetivo de menor aumento hasta posteriormente pasar a uno de más. Se calculó la media de levaduras contenidas en los grupos de
16 cuadros. El recuento luego de haber aplicado la formula genérica reporto 6x109 UFC/g de
Saccharomyces cerevisiae.
4.3.3. Protocolo de acopio de alevinos.
Los alevinos fueron despachados y recibidos provenientes de la finca ASYA Asesoría y
Acuicultura; Villavicencio – Meta, después de un control de calidad realizado por la misma empresa. Fueron empacados en dos cajas de cartón que contenían dos bolsas con 1000 alevinos con 1/3 de agua tratada y 2/3 de oxígeno puro, envió terrestre.
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4.3.3.1. Animales experimentales.
Se utilizaron 132 alevinos de Bocachico (Prochilodus magdalenae) obtenidos con reproducción artificial en cautiverio, con un peso promedio inicial de 0.23g±0.03 con edades entre 35 y 45 días de vida y una talla comercial de 25mm a 35mm.
4.3.3.2. Cuarentena.
En un tanque negro de 1000 L de agua declorada, por una semana, se mantuvieron en cuarentena 1000 alevinos de bocachico en condiciones ambientales similares al agua del que provenían con una temperatura promedio de 28.9 °C, pH 7.3, Dureza 34.2ppm, se adiciono un tratamiento profiláctico de 1g/L de sal marina. Durante ese tiempo se alimentaron al 10% de la biomasa animal con un concentrado comercial de 38% de proteína.
4.3.4. Adecuación de instalaciones.
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Los acuarios se sometieron a una desinfección y una maduración del agua, que consiste en establecer el hábitat con diferentes accesorios (termostatos y piedras difusoras) y dejarlos por 15 días para que se presente un equilibrio del medio. Se cubrieron todos los lados de los acuarios con papel plástico y solo el frente se dejó descubierto el 50% con la finalidad de reducir el estrés de los animales, también se regulo los parámetros requeridos, tales como, la temperatura y el oxígeno disuelto. Pasado este tiempo se procedió a la siembra de ejemplares.
5.3.5. Incorporación del probiótico a la dieta.
Para la preparación primero se realizó una molienda del concentrado comercial de 36% de proteína y se tamizó para obtener el tamaño de partículas apropiado para los alevinos. Listo el concentrado, se disolvieron las distintas concentraciones del potencial probiótico en 1ml de agua destilada en 3 tubos falcon (15ml) y se agregó al concentrado con aspersor la cepa viable de
Saccharomyces cerevisiae, de forma homogénea a distintas concentraciones. Posteriormente se puso a secar en un horno de secado a una temperatura constante de 34 °C por 12 horas y finalmente se pulverizó nuevamente de forma manual y se almacenó en recipientes de plástico.
4.4. Alimentación
50
Los alevinos se alimentaron al 10% de su peso vivo con un concentrado comercial que contenía 36% de proteína seca y con un alimento vivo de Philodinia Sp y DaphniaSp. se extraía
1ml con una pipeta de 3ml de volumen, este en promedio representó el 10% de la alimentación.
Adicionalmente a este se suministraron distintas concentraciones del potencial probiótico
(Saccharomyces cerevisiae). Sembrados los animales en los acuarios, estos tuvieron una fase de adaptación alimenticia por una semana. El alimento fue ofrecido en cuatro raciones diarias, cada tres horas.
4.5. MUESTREO Y MONITOREO
Para el monitoreo de la sobrevivencia se tomaron registro de los siguientes aspectos en un tabla como el movimiento, coloración, peso y longitud. Este se hizo una vez a la semana por los
28 días que duraro el experimento.
4.5.1. Mediciones del tallaje.
Realizado la siembra de los alevinos se tomó una muestra fotográfica sobre papel milimetrado de los peces para calcular su longitud para esta se utilizó un analizador de
51
imágenes (KLONK Image Measurement) y en la estimación del peso se empleó una balanza analítica donde se pesaron cada una de las unidades del tratamiento. En este procedimiento se utilizó 1ml. Luego en 5L de agua declorada con el objetivo de anestesiar los animal y poder tomar un mejor registro de las mediciones. A los 28 días, culminada la fase experimental se volvió a tomar las mismas mediciones con el mismo procedimiento.
4.6. DISEÑO EXPERIMENTAL.
Los peces fueron pesados en una balanza analítica y dispuestos aleatoriamente en 12 acuarios de 70L de capacidad, llenados a un volumen de 60L, a razón de 11 alevinos por acuario. Se implementaron 4 tratamientos, cada uno con 3 réplicas.
Tabla IV. Tratamientos experimentales en dietas para larvas de Prochiludus magdalenae.
Tratamientos Probióticos (Proteína + Zooplancton +Levadura)
T1. Concentrado (36%) + Daphnia/Philodina + 5% S. cerevisiae.
T2. Concentrado (36%) + Daphnia/Philodina + 10% S. cerevisiae.
T3. Concentrado (36%) + Daphnia/Philodina + 15% S cerevisiae.
T4. Concentrado (36%) + Daphnia/Philodina + 0% S. cerevisiae. (control)
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4.7. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
En el análisis estadístico se tomaron aleatoriamente donde se aplicó la prueba ANOVA para expresar diferencias estadísticas, en todos los casos P<0.05 será utilizando como criterio estadístico para establecer las diferencia significativa. También se aplicó la prueba de comparaciones múltiples de Duncan con el objetivo establecer ciertos datos estadísticos de rasgos múltiples (media, desviación estándar y coeficiente de variación). El modelo matemático que representa el diseño experimental es:
Modelo para el peso
Yij = µ + Pi + Eij
Donde i=1,2,3,4 y j =1,2,…,12 . Donde y Yij es el cambio promedio en el peso de los alevinos con tratamiento i que están en el acuario j, µ es la media general, Pi es el efecto del i-ésimo tratamiento sobre la diferencia promedio en el peso de los alevinos, y Eij es el factor que aleatorio asociado al error donde Eij ~ N(0, σₑ²), de forma idéntica e independiente.
Modelo para la longitud
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Zij = µ + Li + Eij
Donde i=1,2,3,4 y j =1,2,…,12 . Donde Zij es el cambio promedio en la longitud de los alevinos con tratamiento i que estan en el acuario j, µ es la media general, Li es el efecto del i-
ésimo tratamiento sobre la diferencia promedio en la longitud de los alevinos, y Eij es el factor que aleatorio asociado al error donde Eij ~ N(0, σₑ²), de forma idéntica e independiente.
Con los pesos y longitudes totales promedios de cada unidad experimental se calcula el valor promedio para cada tratamiento de:
· Ganancia en peso (GP)
GP = Peso final – Peso inicial
· Ganancia en longitud (GL)
GL = Longitud total final – Longitud total inicial
· Tasa de crecimiento específico (G)
G = (Ln Pmf – Ln Pmi)/t x 100)
Donde Pmi, peso promedio inicial de los alevinos (mg); Pmf, peso promedio final de los alevinos (mg); t, tiempo de cultivo (días) y Ln, logaritmo neperiano.
· Sobrevivencia final (S)
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S(%) = Nf/Ni x 100
Donde Nf, número de individuos sobrevivientes al finalizar el experimento; Ni, número inicial de individuos con que se experimentó.
Factor de condición (K)
K= PT/L3 x 100
Donde PT es peso total en gramos y L es la longitud total en cm. Esta prueba manifiesta el grado de condición somática de la especie en relación al medio donde vive.
55
6. RESULTADOS
6.1 PARÁMETROS AMBIENTALES
6.1.1 Calidad de agua
Para el monitoreo de los parámetros fisicoquímicos del agua se contó con la ayuda del equipo multiparametro DR 900. Las muestras se tomaron aleatoriamente por tratamiento. Los cuatro parámetros se midieron al inicio, intermedio y al finalizar el experimento.
Tabla V. Promedio de los parámetros fisicoquímicos obtenidos del análisis de calidad de agua.
Fecha Parámetros T1 T2 T3 T4
Día 01 pH [H]+ 7.5 7.5 7.5 7.5
Dureza (ppm) 34.2 34.2 34.2 34.2
Amonio (mg/l) 0 0 0 0
Nitritos (mg/l) 0.01 0.01 0.01 0.01
Día 14 pH [H]+ 7.5 7.5 7.4 7.5
Dureza (ppm) 34.2 34.2 34.2 34.2
Amonio (mg/l) 0,22 0,4 0,26 0,33
Nitritos (mg/l) 0,017 0,07 0,024 0,38 56
Día 28 pH [H]+ 7.5 7.5 7.4 7.4
Dureza (ppm) 34.2 34.2 34.2 34.2
Amonio (mg/l) 0,31 0,32 0,41 0,35
Nitritos (mg/l) 0,02 0,091 0,034 0,25
Durante el experimento se tomó registro de las siguientes variables fisicoquímicas de calidad de agua, El pH de7.4 paso a 7.5 manteniéndose en este valor hasta el final, mientras que la dureza se mantuvo en 34.2, para nitritos. La tabla permite visualizar que no hay diferencias significativas (P>0.05) entre los 4 tratamientos. Sin embargo, existe diferencias en los valores obtenidos de Amonio y Nitrito, especialmente en el tratamiento 3 (Grafica 2) que presenta los valores más altos de amonio en conjunto, es notable también como se refleja una disminución en la cantidad de nitritos entre el tratamiento 1,2 y 3, lo cual sugiere que a menor concentración del probiótico es más alta la cantidad de nitritos (Grafica 3).
0,45 0,4 0,35 0,3
Día 01 0,25 Día 14 mg/L 0,2 Día 28 0,15 0,1 0,05 0 T1 T2 T3 T4
Figura 4. Diferencias comparadas entre los valores promedio obtenidos en Amonio (mg/l) y
57
tratamientos los cuatro tratamientos en tres periodos.
0,4
0,35
0,3
0,25 Día 01
0,2 Día 14 mg/L 0,15 Día 28
0,1
0,05
0 T1 T2 T3 T4
Figura 5. Diferencias comparadas entre los valores promedio obtenidos en Nitritos (mg/l) y tratamientos los cuatro tratamientos en tres periodos.
6.1.2 Temperaturas
Las temperaturas tuvieron un comportamiento constante dentro de los parámetros óptimos para los alevinos. Las fluctuaciones de temperatura durante las 24 horas, no afectaron negativamente las variables de crecimiento de los animales. Los datos se registraron diariamente con un termómetro digital para garantizar la temperatura ideal del medio.
58
30,5
30
C) 29,5 ° R1 29 R2 R3
Tempertura ( Tempertura 28,5
28
27,5 T1 T2 T3 T4
Figura 6. Promedio de temperaturas registradas en las tres replicas (R) por los cuatro tratamientos evaluados en los 28 días que tomo el experimento.
6.2 PARÁMETROS DE CRECIMIENTO Y SOBREVIVENCIA
En relación a las variaciones obtenidas en el peso y longitud de los alevinos en el periodo de evaluación se tomó el peso promedio de alevinos dentro de cada uno de los 12 acuarios y se restó con el peso promedio inicial para establecer el cambio promedio en peso durante el periodo del experimento (Tabla 6). Análogamente se hicieron las mediciones para la longitud promedio de los alevinos. A continuación se muestran los datos obtenidos para dichas diferencias.
Tabla 6. Cambio promedio de longitud y peso de los alevinos por acuario.
Tratamiento Acuario Longitud Peso
1 09 0.778946 0.3509091
59
10 0.473809 0.3990909
12 0.898373 0.4072727
2 02 0.798373 0.3436363
04 0.863436 0.4161818
11 0.773354 0.3681818
3 01 0.791809 0.3981819
03 0.811473 0.3700000
07 0.662664 0.3290909
4 05 0.641645 0.2945455
06 0.721555 0.3672727
08 0.867491 0.4818182
El experimento se desarrolló en las condiciones más homogéneas posibles con el fin de garantizar que los efectos fueran debidos únicamente al tratamiento, se tuvieron en cuenta factores como el tiempo de estudio, tamaño del acuario, tipo de pez, entre otros.
6.2.1 Análisis de varianza para el peso promedio.
Tabla VII. Análisis de varianza para el peso promedio
De la tabla de análisis de varianza se concluye que no se rechaza H0 con un nivel de significancia del 5%, pues el p-valor asociado es mayor a 0.05, de manera que no existe un efecto estadísticamente significativo del tratamiento sobre el peso promedio de los alevinos
60
dentro de cada acuario. Se realizó una prueba de test de Shapiro-Wilk, se puede concluir que no se rechaza la hipótesis nula de normalidad con una significancia del 5%.
Figura 7. Ganancia en peso por tratamientos (Box-Plot).
El box-plot obtenido para las ganancias en peso muestra que la mediana del tratamiento 1 es un poco más alta comparada con las medianas de los otros tratamientos, lo cual sugiere que pueden existir diferencias en la ganancia de peso del tratamiento 1 comparadas con el resto, adicionalmente el tratamiento 4 parece presentar una mayor variabilidad, es decir que las ganancias obtenidas para este tratamiento fueron más dispersas entre si de lo normal. Para verificar dichas suposiciones se ejecutó el análisis de varianza.
6.2.2 Análisis de varianza para longitud promedio.
61
Tabla VIII. Análisis de varianza para longitud.
De la tabla de análisis de varianza se concluye que no se rechaza H0 con un nivel de significancia del 5%, pues el p-valor asociado es mayor a 0.05, de manera que no existe un efecto estadísticamente significativo del tratamiento sobre el peso promedio de los alevinos dentro de cada acuario. Del valor P que se obtiene del test de Shapiro-Wilk, se puede concluir que no se rechaza la hipótesis nula de normalidad con una significancia del 5%.
Figura 8. Ganancia en longitud por tratamiento (Box-Plot).
El box-plot obtenido para la ganancia de longitud permite evidenciar que las 4 medianas de los tratamientos están muy cercanas entre sí, lo cual sugiere que al realizar un análisis de varianza posiblemente no se obtendrán diferencias significativas en las medias de los tratamientos, también existe una leve suposición de que la variabilidad del tratamiento 1 es más alta comparada con el resto de tratamiento. Dichas suposiciones se verificaron adecuadamente
62
con un análisis de varianza.
6.2.3 Análisis descriptivo de sobrevivencia.
33,5
33
32,5
32
31,5 Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3 Tratamiento 4
Figura 9. Número de individuos sobrevivientes a tratamientos experimentales.
El gráfico de barras permite apreciar que la sobrevivencia final (S) en los 4 tratamientos fue alta (99.24%), pues de 33 peces manejados por tratamiento únicamente murió un individuo del tratamiento 2, de manera que el supuesto de que haya mayor sobrevivencia para algún tratamiento en específico se puede negar pues en los 4 casos la sobrevivencia fue alta.
6.2.4 Factor de condición (K)
Figura 10. Valores del factor de condición con porcentaje de error 5% por tratamiento.
63
Tabla IV. Valores del factor de condición por tratamiento
Tratamientos Peso Total Long Total K
T1 0,6161 3,0221 2,2322
T2 0,6066 3,1450 1,9499
T3 0,5991 3,0955 2,0199
T4 0,6088 3,0461 2,1543
Los valores obtenidos del factor de condición revelan que el tratamiento T1 mostro un mejor desempeño o condición ambiental en la alometría de los alevinos comparado con los valores de
K conseguidos en los demás tratamientos.
6.2.5 Tasas específicas de crecimiento.
Se calcularon las tasas específicas de crecimiento agrupando por tratamiento y agrupando por acuario, a continuación se muestran las dos tablas.
Tabla X. Tasa especifica de crecimiento por acuario.
Acuario Tratamiento Longitud Peso
1 T3 2.3123 0.6625
2 T2 2.1099 0.6767
3 T3 2.1305 0.6797
4 T2 2.3641 0.6558
64
5 T4 1.8839 0.5586
6 T4 2.2373 0.6177
7 T3 1.9824 0.5638
8 T4 2.5316 0.7284
9 T1 2.1011 0.5262
10 T1 2.2982 0.8205
11 T2 2.1184 0.6915
12 T1 2.3047 0.5842
Tabla XI. Tasa especifica de crecimiento por tratamiento.
Tratamiento Peso Longitud 1 0.6456456 2.236249 2 0.6753976 2.194683 3 0.6357635 2.143058 4 0.6359523 2.236333
0,68 0,67 0,66 0,65 0,64 0,63 0,62 0,61 T1 T2 T3 T4
Figura 11. Tasas específicas de crecimiento del peso por tratamiento.
65
2,26 2,24 2,22 2,2 2,18 2,16 2,14 2,12 2,1 2,08 T1 T2 T3 T4
Figura 12. Tasas específicas de crecimiento de longitud por tratamiento.
El segundo tratamiento (T2) reveló una tasa de crecimiento específico para el peso mayor (0.67) en relación a los demás tratamientos (T1-0.64; T3-0.63; T4-0.63), mientras que en longitud el primer tratamiento (T1- 2.23) y cuarto tratamiento (T4- 2.23) mostraron una mejor tasa de crecimiento específico respecto al T2 (2.19) y T3 (2.14). En ninguno de los casos se encontró diferencias estadísticas (P>0.05).
6.3 PRUEBA DE COMPARACIONES MÚLTIPLES
Finalmente, para identificar el o los mejores tratamientos en función del cambio de peso y longitud se usa la prueba de comparaciones múltiples de Duncan’s.
Prueba de Duncan’s para peso
Tabla XII. ANOVA, prueba múltiple de Duncan’s para peso con MSE de 0.003
T Peso std r Min Min 1 0.3857576 0.03045566 3 0.3509091 0.4072727 2 0.3760000 0.03689926 3 0.3436363 0.4161818
66
3 0.3657576 0.03474032 3 0.3290909 0.3981819 4 0.3812121 0.09441132 3 0.2945455 0.4818182
Tabla XIII. Comparación de medios con la misma letra sin diferencias significativas.
T Peso groups 1 0.3857576 a 4 0.3812121 a 2 0.3760000 a 3 0.3657576 a
Acorde a lo obtenido en principio se tiene que todos los tratamientos pertenecen al mismo grupo (a), pues se había obtenido con el análisis de varianza que no existen diferencias significativas entre los grupos.
Prueba de Duncan’s para Longitud
Tabla XIV. ANOVA, prueba múltiple de Duncan’s para peso con MSE de 0.017
T Longitud std r Min Min 1 0.7170427 0.21894672 3 0.473809 0.898373 2 0.8117210 0.04650074 3 0.773354 0.863436 3 0.7553153 0.08083855 3 0.662664 0.811473 4 0.7435637 0.11452026 3 0.641645 0.867491
67
Tabla XV. Comparación de medios con la misma letra sin diferencias significativas.
T Longitud groups 2 0.8117210 a 3 0.7553153 a 4 0.7435637 a 1 0.7170427 a
Acorde a lo obtenido en principio se tiene que todos los tratamientos pertenecen al mismo grupo (a), pues se había obtenido pues se había obtenido con el análisis de varianza que no existen diferencias significativas (P> 0.05) entre los grupos.
Figura 13. Interaccion Peso vs Longitud.
68
En el gráfico de Peso vs Longitud se puede ver que no existen claros patrones que rigen el comportamiento de los tratamientos, puesto que si se presentaran indicios de diferencias entre los tratamientos los puntos de mismos colores se encontrarían cercanos entre ellos y lejanos entre puntos de otros colores, de manera que visualmente no hay sugerencias que indiquen que los tratamientos tienen un efecto sobre el Peso y la Longitud de forma conjunta.
6.4 COMPORTAMIENTO ANIMAL
Durante el experimento se evaluó el comportamiento gregario de los peces y pudimos observar que estos en condiciones de laboratorio poseen un comportamiento jerarquizado. En éste caso, cada acuario presento un individuo dominante que solía alimentarse primero evitando que los demás se acercaran al alimento. Esto influyo directamente en la ganancia de crecimientos de los demás ejemplares ya que obtuvimos en algunas de las réplicas de todos los tratamientos, individuos significativamente más pequeños que la media en el acuario y otros que sobrepasaban aquella media. Sin embargo, el pez dominante no alcanzo a pertenecer a ninguno de los extremos en tallaje ya que suponemos que el gasto de energía que gastaba tratando de alejar a los otros peces del alimento, evito que este tuviera un mejor crecimiento. Lo que produjo en algunas replicas un muestreo heterogéneo.
69
6. DISCUSIÓN
6.1. EFECTIVIDAD DEL PROBIOTICO PARA LA SOBREVIVENCIA
Para estudiar la efectividad del probiotico (Saccharomyces cerevisiae) en la sobrevivencia de alevinos se obtuvo 99.24% (S) lo cual concuerda con los resultados de Mahecha (2006) quien reportó 98,67 y que estadísticamente no encontró diferencias significativas (P>0.05) entre tratamientos, significancia que tampoco se evidenció para este estudio.
En cambio Perez (2004) registró una sobrevivencia del 100% para todos sus tratamientos, indicando que las dietas suplementados con las paredes fosforilada de levadura (Saccharomyces cerevisiae) presentaron los mejores rendimientos demostrando la cercanía de los valores y la eficiencia de este microorganismo en la alimentación de peces.
6.2. TRATAMIENTO EFECTIVO EN EL CRECIMIENTO DE ALEVINOS
No se reportaron diferencias significativas entre los tratamientos en este experimento, lo cual se asemeja a lo encontrado por Mahecha (2006) quien sostiene que no hubo diferencias
(P<0.05) entre tratamientos a los 14 dias y Ladino y Rodriguez (2008) quienes reportaron ganancia d epeso para el T1 Y T2 pero no hubo diferencia estadística significativa (P<0.05) 70
entre tratamientos. Sin embargo, para este experimento se puede resaltar que para una producción de peces es importante evaluar que este nivel de significancia está cercano al 0.10 y en relación a la ganancia de peso (GP) como se evidencia en la gráfica 5. La mediana del tratamiento 1 es un poco más alta comparada con las medianas de los otros tratamientos lo que se traduce en mayores ganancia para el piscicultor como lo afirman Rodríguez (2013) en donde
La adición de 1% de Saccharomyces cerevisiae en la ración mejoró la GP.
6.3. PROBIOTICO COMO EFECTO BIORREMEDIADOR
Los resultados encontrados en este trabajo en cuanto a calidad de agua Tabla 5 concuerdan con los resultados obtenidos por Ladino y Rodríguez (2008) en su trabajo donde los valores de pH de los contenedores, se mantuvo estable en 6,7, la temperatura en 27 grados y el oxígeno en
7 ppm.
En cuanto a los datos obtenidos para Nitritos (Tabla 5) el tratamiento 4 (Dieta Control) reportó 0,25 mg/l valor que aumenta los efectos tóxicos en el medio mientras que T1, T2 y T3 se mantuvieron dentro del rangos de tolerancia (menores a 0.1 mg/L), la misma relación se dio en cuanto a los resultados de Amonio puesto que el tratamiento control T4 registro 0,33 mg/l superando los valores mínimos mientras que los demás tratamientos se ubicaron cercanos a los valores optimos; lo que nos sugiere que a mayor concentración del probiótico es menor la cantidad de nitritos, permitiendo el mantenimiento de la calidad del agua dentro de los rangos
óptimos para el desarrollo de especie, resultados que concuerdan con García y
71
colaboradores(2015) quienes reportaron rangos menores a 0.1 mg/L para nitritos (NO2 - ) confirmando el manejo de macroagregados del mantenimiento del medio.
72
7. CONCLUSIONES
Se estableció que no hay diferencia significativa de los diferentes tratamientos sobre la sobrevivencia calculada del 99.24%, valor adecuado para evaluar el crecimiento de alevinos pero no la posible influencia del probiotico sobre la variable (s).
Se determinó que el efecto del potencial probiotico con Saccharomyces cerevisiae, a pesar de no representar una diferencia estadística del 5% en el crecimiento, peso y longitud. Si alcanza a significar en términos productivos de biomasa una diferencia estadística cercana al 7%.
Los parámetros fisicoquímicos del agua en general se mantuvieron estables y fueron adecuados para la sobrevivencia de los alevinos de Bocachico, sin embargo, los niveles de nitritos en el tratamiento control fueron más altos que el resto de tratamientos que si contenían el potencial probiótico.
73
8. RECOMENDACIONES
Promover la investigación etológica de Prochilodus magdalenae, sobre alimentación, jerarquización y mantenimiento de la especie en condiciones de laboratorio, en todas sus fases productivas.
Se debe hacer más controles periódicos entre el tiempo que se evalúa la experimentación en relación a calidad de agua y de tallaje de los animales con el fin de obtener más datos que soporten la actividad del potencial probiótico en estos.
Se Recomienda realizar más ensayos en la especie Prochilodus magdalenae con otro tipo de probióticos que permita aumentar la sobrevivencia e inmunoresistencia que ayude a la conservación y preservación.
74
9. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
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83
10. ANEXOS
Anexo 1. Intervalos de Confianza
Al revisar los intervalos de confianza obtenidos agrupando por tratamiento, es posible apreciar que tanto para la ganancia de Peso como la ganancia de Longitud, dichos intervalos tienen valores muy cercanos entre si, esto concuerda con lo concluido previamente pues si no existen diferencias significativas en ninguno de los dos casos es de esperar que los valores de sus medias sean muy cercanos entre ellos, y por ende sus intervalos.
Anexo 2. Análisis de supuestos de normalidad, homocedásticidad e independencia de los datos en el tiempo para peso.
84
El gráfico normal de los residuales sugiere que pueden existir discrepancias con este supuesto, ya que hay algunos puntos que se encuentran ligeramente alejados de la recta, para verificar esto se emplean las pruebas antes mencionadas.
Para probar la hipótesis de normalidad de los residuales, se utilizaron los test de Shapiro-Wilk y Jarque-Bera: Del valor P que se obtiene del test de Shapiro-Wilk, se puede concluir que no se rechaza la hipótesis nula de normalidad donde los residuales provienen de una distribución normal con una significancia del 5% y con el test de Jarque-Bera se tiene la misma conclusión sobre la normalidad con una significancia del 5%.
85
Del gráfico de los tratamientos contra los residuales se concluye que no hay indicios de heterocedásticidad de las observaciones entre los tratamientos, para verificar esto con más rigurosidad de implementan los test mencionados.
Para probar homocedasticidad en los residuales, se utilizaron dos test, agrupándose por tratamiento, aparte de algunas gráficas de diagnóstico: Del valor p que se obtiene con el test de
Barlett se concluye que no se rechaza la hipótesis de homocedasticidad con una significancia del
5%. Nuevamente, con el test de Levene se concluye que no se rechaza la hipótesis de homocedasticidad con una significancia del 5%.
86
Anexo 3. Identificación de datos atípicos para peso
Debido a que el gráfico de residuos estandarizados muestra que ninguna de las observaciones es mayor en valor absoluto a 3 se concluye que ninguna observación es atípica, es decir que todas las medidas tomadas poseen un comportamiento razonable (Ninguna es distinta debido a posibles factores externos).
87
Anexo 4. Análisis de supuestos de normalidad, homocedásticidad e independencia de los datos en el tiempo para longitud.
Nuevamente el gráfico de normalidad no es muy claro para definir si el supuesto de normalidad se está cumpliendo, por ello se aplican los test de Shapiro-Wilk y Jarque-Bera.
Del valor P que se obtiene del test de Shapiro-Wilk, se puede concluir que no se rechaza la hipótesis nula de normalidad con una significancia del 5%. Con el test de Jarque-Bera se tiene la misma conclusión sobre la normalidad con una significancia del 5%.
88
Del gráfico de los tratamientos contra los residuales se concluye una vez más que no hay indicios de heterocedásticidad (Varianzas distintas) de las observaciones entre los tratamientos, para verificar esto con más rigurosidad de implementan los test mencionados.
Para probar homocedasticidad en los residuales, se utilizaron dos test, agrupándose por tratamiento, aparte de algunas gráficas de diagnóstico: Del valor p que se obtiene con el test de
Barlett se concluye que no se rechaza la hipótesis de homocedasticidad con una significancia del
5%. Nuevamente, con el test de Levene se concluye que no se rechaza la hipótesis de homocedasticidad con una significancia del 5%.
89
Anexo 5. Identificación de datos atípicos para longitud
Ninguno de los residuos estandarizados es mayor a 3 en valor absoluto, así que en este caso no se tuvo observaciones atípicas.
Anexo 6. Tabla de temperaturas registradas durante la experimentación HOR Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. Acu. A 01 T3 02 T2 03 T3 04 T2 05 T4 06 T4 07 T3 08 T4 09 T1 10 T1 11 T2 12 T1 AM 27,7 30,4 30,3 30,1 30,5 30,8 28,9 30 29,3 29,9 30,2 29,8 PM 29,9 30,6 30,2 30,3 30,7 31 29,1 30,2 29,5 30,1 30,3 30 AM 28,8 29,8 29,1 28,8 29,7 30,1 28,1 28,1 28 28,2 29 28,4 PM 29 30 29,3 29,1 29,9 30,3 28,4 28,3 28,3 28,5 29,2 28,7 AM 28,9 29,8 29,2 28,9 29,9 30,3 28,1 28,5 28,4 28,4 29,1 28,5 PM 29,9 30,6 30,1 30,7 30,6 31,1 29,1 29,2 29,2 29,3 29,9 29,4 AM 29,3 30,2 29,6 29,3 30,3 30,7 28,5 28,8 28,8 28,8 29,4 28,9 PM 30,5 31,1 30,7 30,4 31,3 31,9 29,6 29,6 29,7 29,9 30,4 30,1 AM 29,6 30,4 29,6 29,4 30,4 30,8 28,9 29 28,8 28,9 29,6 29 PM 29,9 30,7 29,9 29,7 30,6 31,1 29,2 29,4 29,1 29,2 29,9 29,4 AM 28,8 29,7 29 28,8 29,9 30,2 28,3 28,4 28,3 28,3 29 28,4 PM 29,1 29,8 29,3 29 30 30,1 28,5 28,6 28,5 28,6 29,2 28,8
90
AM 28,4 29,3 28,7 28,3 29,1 28,7 27,3 27,9 27,7 27,7 28,6 28,1 PM 29,7 30,3 29,9 29,6 29,5 29,9 29 28,9 28,9 28,9 29,8 29,4 AM 28.8 29,9 29,1 28,1 29,4 28,9 28,1 29,6 29,6 27,9 29,2 28,6 PM 29,6 30,4 29,7 29,2 29,9 29,6 28,9 30,6 30,5 28,7 29,7 29,3 AM 28,8 28,1 29 28,7 29,7 29,3 28,2 28,7 28,6 28,6 29,3 28,7 PM 29 30 29,1 28,9 29,8 29,5 28,4 29 28,8 28,7 29,5 28,8 AM 28,7 29,7 28,8 28,6 29,2 28,8 27,9 28,1 28 28 29 28,4 PM 29,6 30,4 29,6 29,4 30 29,6 28,7 28,9 28,9 29 29,7 29,2 AM 29,3 30,2 29,4 29,1 29,8 29,3 28,4 28,7 28,6 28,7 29,5 28,9 PM 29,6 30,4 29,7 29,4 30 29,4 28,6 28,8 28,8 29 29,7 29,3 AM 29 30 29 28,7 29,4 29 28 28,3 28,4 28,4 29,1 28,4 PM 29 30 29,1 29,2 29,5 29,3 28,5 28,6 28,6 28,8 29,4 28,9 AM 29,2 29,8 29,9 28,9 29,7 29 28,1 28,6 28,5 28,5 29,4 29,6 PM 29,7 30,5 30 29,6 30 29,6 28,7 29 29 29,2 30 29,4 AM 21,3 22,1 21,7 21,4 21,2 22,7 20,6 20,6 20,5 21,8 22,1 21,5 PM 28,6 29,3 28,8 28,6 29 28,9 28 28 28 28,4 28,9 28,3 AM 29 30 29,1 28,8 29,6 29 28,3 28,3 28,1 28,4 28 28,3 PM 29,7 30,6 30,1 29,9 30,3 30 29,4 29,1 29 29,4 30 29,4 AM 29,5 30,4 29,6 29,2 29,9 29,5 28,7 28,6 28,6 28,7 29,5 28,9 PM 29,7 30,6 30 29,6 30,1 29,8 29 29 28,8 29 29,8 29,1 AM 27,5 30,8 30 29,5 30,1 29,6 28,8 28,9 28,8 28,9 29,6 29 PM 30,3 31,1 30,8 30,4 30,8 30,5 29,8 29,7 29,7 29,9 30,5 30 AM 29,3 30,5 29,7 29,1 29,9 29,3 28,5 28,6 28,4 28,4 29,3 28,6 PM 29,5 30,6 30,1 29,6 30 29,9 29,1 29 28,9 29 29,6 29,3 AM 29,4 30,3 29,6 29,5 29,7 29,6 28,7 28,9 28,4 28,5 29,4 28,9 PM 30 31 30,6 30 30,6 30,5 29,7 29,6 29,3 29,4 30,1 29,8 AM 29 30 29,6 28,7 29,4 29,3 28,3 28,5 28,6 28 29 28,6 PM 29,3 30,4 29,9 29 29,7 29,6 29,6 28,8 28,9 28,3 29,3 28,9 AM 28 29 28,6 28 28,6 28,4 27,6 28 27,4 27,5 28,4 27,9 PM 29,2 30,1 29,6 28,8 29,5 29,4 28,4 28,7 28 28,3 29,4 28,8 AM 29,3 30,3 29,6 29,1 29,7 29 28,2 28,8 28,6 28,6 29,7 29,1 PM 29,6 30,6 29,9 29,4 30 29,3 28,6 29 28,9 29 30 29,4 AM 29,4 30,7 30 29,4 30 29,4 28,6 29 29 29 29,9 29,3 PM 29 30,5 30,2 29,6 30 29,7 28,7 29 29 29 29,9 29,5 AM 29,3 30,5 29,7 29,4 29,9 29,3 28,5 28,6 29 28,6 29,4 29 PM 29,6 30,8 30,2 29,8 30,2 29,6 28,9 29,4 29,4 29,4 30,3 29,7 AM 28 28,9 29 28 28,7 27,8 27 27,7 27,6 27,6 28,8 28 PM 28,2 29,1 29,2 28,3 28,9 29 27,3 27,9 28 27,9 29 28,3 AM 27,7 29 28,4 27,6 28,3 27,7 27 27,6 27,2 27,5 28,6 27,9 PM 28,6 29,6 29 28,2 28,7 28,1 27,6 27,9 27,7 28 29 28,4 AM 28,1 29,4 28,6 27,4 28,6 27,9 27,3 27,8 27,5 27,7 28,8 28 PM 28,9 30 29,4 28,7 29,2 28,7 28 28,4 28,2 28,5 29,4 28,9 AM 28,3 29,6 28,7 28 28,9 28 27,4 28 27,6 27,7 28,9 28 PM 29,7 30,6 30,1 29,4 30 29,5 28,7 29 29 29,1 30 29,4 28,98 29,90 29,41 28,98 29,61 29,42 28,32 28,61 28,48 28,53 29,32 28,79 Tabla 1 Temperaturas evaluadas durante la experimentación.
Anexo 7. Tablas de medición de peso inicial y final en gramos de alevinos. Trat Acu Peso Trat Acu Peso Trat Acu Peso Trat Acu Peso 1 9 0,23 2 2 0,22 3 1 0,19 4 5 0,23 1 9 0,25 2 2 0,24 3 1 0,24 4 5 0,25 1 9 0,23 2 2 0,21 3 1 0,26 4 5 0,19 1 9 0,22 2 2 0,21 3 1 0,20 4 5 0,26 1 9 0,22 2 2 0,23 3 1 0,20 4 5 0,26 1 9 0,25 2 2 0,21 3 1 0,26 4 5 0,20
91
1 9 0,25 2 2 0,21 3 1 0,19 4 5 0,24 1 9 0,20 2 2 0,24 3 1 0,25 4 5 0,19 1 9 0,23 2 2 0,20 3 1 0,21 4 5 0,21 1 9 0,19 2 2 0,24 3 1 0,21 4 5 0,23 1 9 0,27 2 2 0,26 3 1 0,27 4 5 0,25 1 10 0,19 2 4 0,2 3 3 0,25 4 6 0,22 1 10 0,19 2 4 0,26 3 3 0,26 4 6 0,20 1 10 0,27 2 4 0,24 3 3 0,19 4 6 0,19 1 10 0,25 2 4 0,22 3 3 0,22 4 6 0,19 1 10 0,19 2 4 0,22 3 3 0,22 4 6 0,23 1 10 0,20 2 4 0,21 3 3 0,20 4 6 0,19 1 10 0,24 2 4 0,25 3 3 0,25 4 6 0,22 1 10 0,27 2 4 0,21 3 3 0,27 4 6 0,22 1 10 0,25 2 4 0,27 3 3 0,21 4 6 0,26 1 10 0,19 2 4 0,21 3 3 0,27 4 6 0,23 1 10 0,27 2 4 0,26 3 3 0,28 4 6 0,26 1 12 0,22 2 11 0,27 3 7 0,27 4 8 0,22 1 12 0,21 2 11 0,21 3 7 0,25 4 8 0,24 1 12 0,27 2 11 0,26 3 7 0,19 4 8 0,21 1 12 0,26 2 11 0,2 3 7 0,27 4 8 0,22 1 12 0,25 2 11 0,26 3 7 0,27 4 8 0,25 1 12 0,26 2 11 0,21 3 7 0,19 4 8 0,27 1 12 0,21 2 11 0,27 3 7 0,23 4 8 0,27 1 12 0,19 2 11 0,26 3 7 0,24 4 8 0,24 1 12 0,23 2 11 0,22 3 7 0,21 4 8 0,19 1 12 0,18 2 11 0,20 3 7 0,21 4 8 0,23 1 12 0,27 2 11 0,27 3 7 0,27 4 8 0,25 Tabla 2 Datos de peso inicial (g).
Trat Acu Peso Trat Acu Peso Trat Acu Peso Trat Acu Peso 1 9 0,68 2 2 0,84 3 1 0,63 4 5 0,32 1 9 0,72 2 2 0,56 3 1 0,84 4 5 0,29 1 9 0,54 2 2 0,43 3 1 0,53 4 5 0,46 1 9 0,89 2 2 0,69 3 1 0,63 4 5 1,64 1 9 0,47 2 2 0,53 3 1 0,64 4 5 0,56 1 9 0,44 2 2 0,32 3 1 0,58 4 5 0,62 1 9 0,33 2 2 0,71 3 1 0,62 4 5 0,48 1 9 0,66 2 2 0,80 3 1 0,33 4 5 0,41 1 9 0,50 2 2 0,45 3 1 0,31 4 5 0,30 1 9 0,36 2 2 0,29 3 1 1,12 4 5 0,28 1 9 0,81 2 2 0,63 3 1 0,63 4 5 0,39 1 10 0,71 2 4 1,17 3 3 1,26 4 6 1,14 1 10 0,78 2 4 0,45 3 3 0,34 4 6 1,39
92
1 10 1,14 2 4 0,45 3 3 0,57 4 6 0,50 1 10 0,64 2 4 0,70 3 3 0,35 4 6 0,66 1 10 0,78 2 4 0,74 3 3 0,80 4 6 0,48 1 10 0,62 2 4 0,43 3 3 0,68 4 6 0,36 1 10 0,48 2 4 1,18 3 3 0,66 4 6 0,28 1 10 0,46 2 4 0,39 3 3 0,67 4 6 0,55 1 10 0,46 2 4 0,45 3 3 0,44 4 6 0,41 1 10 0,34 2 4 0,52 3 3 0,50 4 6 0,44 1 10 0,49 2 4 - 3 3 0,42 4 6 0,24 1 12 0,59 2 11 0,44 3 7 0,86 4 8 0,48 1 12 0,89 2 11 1,43 3 7 0,78 4 8 2,12 1 12 0,93 2 11 0,73 3 7 0,70 4 8 0,47 1 12 0,74 2 11 0,49 3 7 0,49 4 8 0,64 1 12 0,7 2 11 0,45 3 7 0,31 4 8 0,78 1 12 0,27 2 11 0,79 3 7 0,56 4 8 1,28 1 12 1,03 2 11 0,55 3 7 0,56 4 8 0,39 1 12 0,46 2 11 0,43 3 7 0,49 4 8 0,32 1 12 0,42 2 11 0,33 3 7 0,56 4 8 0,45 1 12 0,26 2 11 0,65 3 7 0,59 4 8 0,62 1 12 0,74 2 11 0,39 3 7 0,32 4 8 0,34 Tabla 3 Datos finales de peso (g).
Anexo 8. Tablas de registro de Longitud inicial y final en centímetros de los alevinos. Trat Acu Long Trat Acu Long Trat Acu Long Trat Acu Long 1 9 2,33 2 2 2,35 3 1 2,23 4 5 2,26 1 9 2,38 2 2 2,34 3 1 2,49 4 5 2,38 1 9 2,25 2 2 2,35 3 1 2,19 4 5 2,23 1 9 2,28 2 2 2,04 3 1 2,29 4 5 2,44 1 9 2,21 2 2 2,41 3 1 2,45 4 5 2,11 1 9 2,22 2 2 2,43 3 1 2,27 4 5 2,43 1 9 2,18 2 2 2,27 3 1 2,55 4 5 2,25 1 9 2,27 2 2 2,38 3 1 2,23 4 5 2,32 1 9 2,32 2 2 2,31 3 1 2,37 4 5 2,34 1 9 2,22 2 2 2,24 3 1 2,25 4 5 2,37 1 9 2,39 2 2 2,42 3 1 2,40 4 5 2,20 1 10 2,21 2 4 2,27 3 3 2,47 4 6 2,14 1 10 2,44 2 4 2,32 3 3 2,25 4 6 2,46 1 10 2,42 2 4 2,26 3 3 2,42 4 6 2,34 1 10 2,16 2 4 2,29 3 3 2,29 4 6 2,51 1 10 2,27 2 4 2,37 3 3 2,34 4 6 2,30 1 10 2,28 2 4 2,33 3 3 2,25 4 6 2,47
93
1 10 2,22 2 4 2,39 3 3 2,25 4 6 2,34 1 10 2,21 2 4 2,26 3 3 2,52 4 6 2,28 1 10 2,37 2 4 2,41 3 3 2,37 4 6 2,27 1 10 2,24 2 4 2,48 3 3 2,26 4 6 2,11 1 10 2,18 2 4 2,21 3 3 2,18 4 6 2,19 1 12 2,43 2 11 2,67 3 7 2,48 4 8 2,30 1 12 2,36 2 11 2,32 3 7 2,43 4 8 2,29 1 12 2,27 2 11 2,14 3 7 2,44 4 8 2,26 1 12 2,40 2 11 2,23 3 7 2,49 4 8 2,50 1 12 2,30 2 11 2,27 3 7 2,30 4 8 2,23 1 12 2,40 2 11 2,32 3 7 2,43 4 8 2,47 1 12 2,19 2 11 2,39 3 7 2,26 4 8 2,15 1 12 2,37 2 11 2,66 3 7 2,18 4 8 2,26 1 12 2,24 2 11 2,35 3 7 2,20 4 8 2,23 1 12 2,41 2 11 2,25 3 7 2,23 4 8 2,31 1 12 2,63 2 11 2,29 3 7 2,45 4 8 2,25 Tabla 4 Datos de longitud inicial (cm).
Trat Acu Long Trat Acu Long Trat Acu Long Trat Acu Long 1 9 3,14 2 2 3,54 3 1 3,27 4 5 3,04 1 9 3,35 2 2 3,14 3 1 3,41 4 5 2,47 1 9 3,07 2 2 2,73 3 1 2,90 4 5 2,37 1 9 3,70 2 2 3,51 3 1 3,23 4 5 2,90 1 9 2,88 2 2 2,93 3 1 3,25 4 5 4,74 1 9 0,29 2 2 2,59 3 1 3,18 4 5 3,07 1 9 2,47 2 2 3,38 3 1 3,09 4 5 3,20 1 9 2,43 2 2 3,50 3 1 2,69 4 5 2,83 1 9 3,32 2 2 3,69 3 1 2,41 4 5 2,70 1 9 2,93 2 2 2,94 3 1 3,83 4 5 2,42 1 9 2,64 2 2 2,43 3 1 3,18 4 5 2,65 1 10 3,39 2 4 2,58 3 3 3,18 4 6 4,08 1 10 3,54 2 4 4,25 3 3 4,18 4 6 4,42 1 10 3,61 2 4 2,86 3 3 2,79 4 6 2,89 1 10 4,09 2 4 2,83 3 3 3,20 4 6 3,28 1 10 3,29 2 4 2,91 3 3 2,45 4 6 2,93 1 10 3,49 2 4 3,47 3 3 3,51 4 6 2,48 1 10 3,07 2 4 2,74 3 3 3,39 4 6 2,52 1 10 3,09 2 4 3,96 3 3 3,29 4 6 3,07 1 10 2,89 2 4 2,75 3 3 3,29 4 6 2,62 1 10 2,90 2 4 2,84 3 3 2,80 4 6 2,80 1 10 2,52 2 4 - 3 3 2,45 4 6 2,25
94
1 12 2,79 2 11 3,56 3 7 3,54 4 8 2,92 1 12 3,10 2 11 3,00 3 7 3,46 4 8 2,88 1 12 3,38 2 11 3,00 3 7 3,31 4 8 3,60 1 12 3,67 2 11 2,74 3 7 2,76 4 8 4,10 1 12 3,44 2 11 4,33 3 7 2,49 4 8 2,54 1 12 3,40 2 11 3,39 3 7 3,09 4 8 4,10 1 12 2,45 2 11 3,04 3 7 3,02 4 8 3,34 1 12 3,95 2 11 3,08 3 7 2,88 4 8 2,72 1 12 2,89 2 11 3,18 3 7 3,11 4 8 2,77 1 12 2,37 2 11 2,54 3 7 3,09 4 8 3,25 1 12 2,19 2 11 3,21 3 7 2,43 4 8 2,57 Tabla 5. Datos finales de longitud (cm).
Anexo 9. Tablas de observación de Altura inicial y final en centímetros de los alevinos. Trat Acu Alt Trat Acu Alt Trat Acu Alt Trat Acu Alt 1 9 0,70 2 2 0,73 3 1 0,65 4 5 0,73 1 9 0,70 2 2 0,70 3 1 0,80 4 5 0,76 1 9 0,72 2 2 0,67 3 1 0,69 4 5 0,72 1 9 0,73 2 2 0,66 3 1 0,71 4 5 0,73 1 9 0,74 2 2 0,76 3 1 0,78 4 5 0,69 1 9 0,74 2 2 0,71 3 1 0,66 4 5 0,75 1 9 0,71 2 2 0,75 3 1 0,79 4 5 0,69 1 9 0,71 2 2 0,73 3 1 0,70 4 5 0,68 1 9 0,72 2 2 0,72 3 1 0,71 4 5 0,71 1 9 0,75 2 2 0,70 3 1 0,72 4 5 0,72 1 9 0,73 2 2 0,81 3 1 0,73 4 5 0,66 1 10 0,68 2 4 0,69 3 3 0,76 4 6 0,71 1 10 0,73 2 4 0,72 3 3 0,71 4 6 0,80 1 10 0,76 2 4 0,70 3 3 0,71 4 6 0,76 1 10 0,66 2 4 0,70 3 3 0,68 4 6 0,75 1 10 0,67 2 4 0,81 3 3 0,80 4 6 0,71 1 10 0,69 2 4 0,70 3 3 0,68 4 6 0,77 1 10 0,66 2 4 0,74 3 3 0,67 4 6 0,72 1 10 0,70 2 4 0,72 3 3 0,74 4 6 0,73 1 10 0,70 2 4 0,72 3 3 0,80 4 6 0,71 1 10 0,69 2 4 0,75 3 3 0,70 4 6 0,70 1 10 0,69 2 4 0,75 3 3 0,67 4 6 0,72 1 12 0,72 2 11 0,77 3 7 0,74 4 8 0,71 1 12 0,74 2 11 0,71 3 7 0,72 4 8 0,72 1 12 0,72 2 11 0,69 3 7 0,77 4 8 0,69 1 12 0,71 2 11 0,68 3 7 0,78 4 8 0,76
95
1 12 0,69 2 11 0,66 3 7 0,70 4 8 0,68 1 12 0,72 2 11 0,70 3 7 0,79 4 8 0,77 1 12 0,76 2 11 0,76 3 7 0,70 4 8 0,66 1 12 0,69 2 11 0,77 3 7 0,69 4 8 0,72 1 12 0,69 2 11 0,70 3 7 0,69 4 8 0,74 1 12 0,73 2 11 0,65 3 7 0,68 4 8 0,71 1 12 0,75 2 11 0,70 3 7 0,74 4 8 0,69 Tabla 6. Datos de altura iniciales
Trat Acu Alt Trat Acu Alt Trat Acu Alt Trat Acu Alt 1 9 1,15 2 2 1,14 3 1 1,07 4 5 0,97 1 9 1,16 2 2 1,02 3 1 1,18 4 5 0,88 1 9 1,06 2 2 0,87 3 1 0,97 4 5 0,80 1 9 1,21 2 2 1,08 3 1 1,08 4 5 0,98 1 9 0,98 2 2 1,01 3 1 1,02 4 5 1,52 1 9 0,93 2 2 0,84 3 1 1,02 4 5 0,98 1 9 0,86 2 2 1,14 3 1 1,05 4 5 1,06 1 9 0,84 2 2 1,13 3 1 0,88 4 5 0,94 1 9 1,06 2 2 1,12 3 1 0,81 4 5 0,93 1 9 0,96 2 2 0,94 3 1 1,30 4 5 0,82 1 9 0,86 2 2 0,80 3 1 1,06 4 5 0,92 1 10 1,09 2 4 0,90 3 3 1,04 4 6 1,31 1 10 1,11 2 4 1,23 3 3 1,40 4 6 1,35 1 10 1,14 2 4 0,96 3 3 0,92 4 6 0,97 1 10 1,27 2 4 0,93 3 3 1,05 4 6 1,03 1 10 1,09 2 4 0,92 3 3 0,87 4 6 0,98 1 10 1,12 2 4 1,11 3 3 1,12 4 6 0,90 1 10 0,92 2 4 0,92 3 3 1,08 4 6 0,79 1 10 0,92 2 4 1,29 3 3 1,06 4 6 1,03 1 10 0,95 2 4 0,89 3 3 1,07 4 6 0,87 1 10 0,96 2 4 0,91 3 3 0,95 4 6 0,91 1 10 0,88 2 4 - 3 3 0,79 4 6 0,76 1 12 0,91 2 11 1,13 3 7 1,19 4 8 1,02 1 12 1,02 2 11 0,89 3 7 1,17 4 8 0,99 1 12 1,21 2 11 0,89 3 7 1,11 4 8 1,10 1 12 1,28 2 11 0,91 3 7 0,93 4 8 1,40 1 12 1,15 2 11 1,39 3 7 0,80 4 8 0,85 1 12 1,11 2 11 1,13 3 7 0,98 4 8 1,40 1 12 0,87 2 11 0,97 3 7 1,04 4 8 1,04 1 12 1,29 2 11 0,92 3 7 0,95 4 8 0,93 1 12 0,93 2 11 0,97 3 7 1,06 4 8 0,97
96
1 12 0,82 2 11 0,81 3 7 1,10 4 8 1,09 1 12 0,78 2 11 1,08 3 7 0,88 4 8 0,86 Tabla 7. Datos finales de altura
Tratamiento Acuario 09 2,75 0,58 1 3,02 0,62 10 3,26 0,63 12 3,06 0,64 02 3,13 0,57 2 3,15 0,61 04 3,12 0,65 11 3,19 0,61 01 3,13 0,62 3 3,10 0,60 03 3,14 0,61 07 3,02 0,57 05 2,94 0,52 4 3,05 0,61 06 3,03 0,59 08 3,16 0,72 Tabla 8. Promedios de longitud (cm) y peso (g) de los alevinos por tratamiento y acuario.
Tratamiento Acuario Total Long. Total Peso. K 9 2,75 0,58 2,78888054 1 10 3,26 0,63 1,81839299 12 3,06 0,64 2,23365294 2 3,13 0,57 1,85883929 2 4 3,12 0,65 2,14017642 11 3,19 0,61 1,87913415 1 3,13 0,62 2,02189537 3 3 3,14 0,61 1,97033871 7 3,02 0,57 2,06944566 5 2,94 0,52 2,04626253 4 6 3,03 0,59 2,12091921 8 3,16 0,72 2,28176676 Tabla 9. Factor de condición por acuario.
Anexo 10. Tablas ANOVAS
97
ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las variacionesSuma de cuadradosGrados dePromedio libertad de los cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F Entre grupos 0,00380065 3 0,00126688 0,15760883 0,92183609 4,066180551 Dentro de los grupos0,06430518 8 0,00803815
Total 0,06810583 11 Tabla 10. Análisis de varianza para la tasa de crecimiento especifico de peso
ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las variacionesSuma de cuadradosGrados dePromedio libertad de los cuadrados F ProbabilidadValor crítico para F Entre grupos 1468426,67 3 489475,556 0,11744592 0,94733012 4,06618055 Dentro de los grupos33341340 8 4167667,5
Total 34809766,7 11 Tabla 11. Análisis de varianza para la tasa de crecimiento especifico de longitud
ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las variacionesSuma de cuadradosGrados dePromedio libertad de los cuadrados F ProbabilidadValor crítico para F Entre grupos 0,18310687 3 0,06103562 0,87615175 0,4927965 4,06618055 Dentro de los grupos0,55730641 8 0,0696633
Total 0,74041327 11 Tabla 12. Análisis de varianza para el factor de condición K
Anexo 11. Figuras preparación de los medios de cultivos de alimento vivo
Figura 1. Adecuación de medios de cultivo vivo
98
Figura 2. Medio de cultivo de Daphnia sp. Figura 3. Medios de cultivo de philodina sp.
Figura 4. Medios de siembra de Chlorogonium sp. Figura 5. Medios de siembra de Chlorella sp.
Anexo 12. Figuras caracterización del alimento vivo
Figura 6. Morfología de Daphnia sp. Figura 7. Morfología de Philodina sp.
99
Figura 8. Morfología externa de Chlorogonium sp. Figura 9. Morfología externa de Chlorella sp
Anexo 13. Figuras recepción de alevinos y mediciones.
Figura 9. Profilaxis de la cuarentena de alevinos
Figura 10. Medición de peso y longitud Figura 11. Adecuación de acuarios
100
Anexo 14. Figuras preparatorio del alimento con el potencial probiótico.
Figura 12. Medición de cultivos de levadura Figura 13. Adición del probiótico
Figura 14. Secado del concentrado Figura 15. Almacenarían del alimento
101
Anexo 15. Figuras equipos empleados en el análisis de calidad de agua.
Figura 16. Equipo multiparametro DR 900 Figura 17. Instrumento analítico de agua HACH