Az Onkohematológiai Betegségek Kezelésében

ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY

Az onkohematológiai betegségek kezelésében használt tirozinkináz-gátló imatinib és nilotinib csonthatásainak irodalmi áttekintése és a saját kutatási eredmények bemutatása

Kirschner Gyöngyi1* ■ Balla Bernadett dr.1* ■ Kósa János Pál dr.1 Horváth Péter dr.1 ■ Kövesdi Andrea1 Lakatos Gergely dr.2 ■ Takács István dr.1 ■ Nagy Zsolt dr.1 Tóbiás Bálint dr.1 ■ Árvai Kristóf1 ■ Lakatos Péter dr.1

Semmelweis Egyetem, Általános Orvostudományi Kar, 1I. Belgyógyászati Klinika, 2II. Belgyógyászati Klinika, Budapest

A tirozinkináz-gátlók bizonyos onkohematológiai betegségek kezelésében elterjedten használt gyógyszerek. Több klinikai tanulmány igazolta, hogy a BCR-ABL specifikus tirozinkináz-gátlók alkalmazása komplex és még nem egy- értelműen azonosított módon változtatja meg a csontszövet élettani folyamatait. Mivel a kezelések egyre több beteget érintenek, illetve hosszú évtizedekig vagy akár élethosszig is tarthatnak, indokolt ezen mechanizmusok moleku- láris hátterének részletesebb megismerése. A szerzők összefoglalják az imatinibbel és a nilotinibbel végzett, csontanyagcseréhez kapcsolódó alapkutatási eredményeket, humán klinikai megfigyeléseket, kiegészítvein vitro osteoblast-sejtkultúrákon végzett saját kísérleteik eredményeivel. Az összefoglalt kutatási eredmények alapján az imatinib és a nilotinib csontsejtekre gyakorolt hatása függ az alkalmazott hatóanyag-koncentrációtól, a sejtek érettségi állapotától, illetve az általuk kötött receptor-tirozinkináz útvonalak megoszlási arányától. Jelen közleményben első- ként készítettek a hazai szakirodalomban hiánypótló, átfogó irodalmi áttekintést a tirozinkináz-gátlók csontanyag cserét befolyásoló hatásaival kapcsolatban és végeztek teljes transzkriptom-analízist osteoblastokon a sejtszintű hatás- mechanizmus jobb megértését szolgálva. Orv. Hetil., 2016, 157(36), 1429–1437.

Kulcsszavak: imatinib, nilotinib, osteoblast, osteoclast

Literature review and presentation of our own research results regarding the effects on bone of tyrosine kinase inhibitors imatinib and nilotinib used in the treatment of oncohematological diseases Tyrosine kinase inhibitors are widely used for treatment of certain oncohematological diseases. Several clinical studies have confirmed that specific BCR-ABL tyrosine kinase inhibitors alter the physiological process of bone tissue in a complex and unclearly identified manner. Since these treatments are being given to more and more patients, and the therapy takes decades or lasts even lifelong, it is justifiable to obtain more detailed knowledge of the molecular back- ground of these mechanisms. In this article the authors summarize preliminary research results and human clinical observations on imatinib and nilotinib which are related to bone metabolism, and present the results of their own experiments in in vitro osteoblast cultures. Based on the presented results, the effects of imatinib and nilotinib on bone cells depend on the concentration of imatinib and nilotinib, the maturation stage of the cells and the distribu- tion ratio of receptor tyrosine kinase signaling pathways. In this study the authors firstly prepared a stop-gap, com-

*A szerzők egyenlő arányban vettek részt a kézirat megírásában.

DOI: 10.1556/650.2016.30525 1429 2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám ■ 1429–1437.

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY

prehensive review in the Hungarian literature, regarding the effects of tyrosine kinase inhibitors on bone metabolism. In addition they firstly performed whole transcriptome analysis on osteoblasts in order to obtain a better understand- ing of the cellular molecular mechanisms.

Keywords: imatinib, nilotinib, osteoblast, osteoclast

Kirschner, Gy., Balla, B., Kósa, J. P., Horváth, P., Kövesdi, A., Lakatos, G., Takács, I., Nagy, Zs., Tóbiás, B., Árvai, K., Lakatos, P. [Literature review and presentation of our own research results regarding the effects on bone of tyrosine kinase inhibitors imatinib and nilotinib used in the treatment of oncohematological diseases]. Orv. Hetil., 2016, 157(36), 1429–1437.

(Beérkezett: 2016. május 23.; elfogadva: 2016. június 23.)

Rövidítések jellemző Philadelphia kromoszóma a 22-es és a 9-es kro- BCR-ABL = breakpoint cluster region protein-Abelson murine moszóma reciprok transzlokációjával jön létre t(9;22) leukemia viral onkogene homolog 1; BMD = csontásványi- (q34;q11). A 22-es kromoszóma hosszú karján kialakul anyag-tartalom; c-fms = kolóniastimuláló faktor-1 receptor; a BCR-ABL onkogén, amiről egy hibás BCR-ABL fúziós c-kit = őssejtfaktor-receptor; CML = krónikus myeloid leukae- fehérje íródik át. Ez a konstitutívan aktív tirozinkináz- mia; CSF1R = kolóniastimulálófaktor-receptor; CTX-1 = ként működő fehérje folyamatosan foszforilálja szubszt- C-terminális kollagén keresztkötő 1; DDR1/DDR2 = diszko- rátjait, amelyek sejtproliferációs, differenciációs kaszká- idin domén receptor 1/2; GABA = gamma-aminovajsav; GIST dokat indítanak el. Ez a kontrollálatlan sejtosztódás az, = gastrointestinalis stromatumor; M-CSF = makrofágkolónias- ami a CML-sejtek folyamatos termelődését eredményezi. timuláló-faktor; OPG = oszteoprotegerin; PDGFR = throm- Az imatinib a leukaemiás sejtek intracelluláris terébe bocytaeredetű növekedési faktor receptor; PDGFRA = throm- bocytaeredetű növekedési faktor receptor alfa; PDGFRB = speciális transzporterek segítségével jut, ezzel szemben a thrombocytaeredetű növekedési faktor receptor béta; RANKL nilotinib esetén nem azonosították a pontos transzport- = receptoraktivátor nukleáris faktor κ ligand; RT-PCR = reverz mechanizmust, feltételezik, hogy a sejtbe jutás főként transzkripció mediálta PCR-meghatározás; SCF = őssejtfaktor passzív folyamatok révén valósul meg. A tirozinkináz-inhibitorok a CML-sejtekben – ATP kompetitív vegyület- ként – a BCR-ABL fehérje inaktív konformációjához A tirozinkináz-gátlók bizonyos onkohematológiai be- kötődnek és gátolják annak aktivitását. Ezzel megakadá- tegségek kezelésében elterjedten használt gyógyszerek. lyozzák a tumorsejtek proliferációját és azokban apoptó- Az első tirozinkináz-gátló gyógyszerhatóanyag az imati- zist indukálnak. Számos klinikai vizsgálat tanulmányozta nib volt, amelyet 2001-ben engedélyezett az Amerikai a BCR-ABL specifikus tirozinkináz-gátlók biológiai ha- Gyógyszerügyi Hatóság (U.S. Food and Drug Admi- tásait, mint a farmakokinetikai és farmakodinamikai tu- nistration – FDA) a krónikus myeloid leukaemiás (CML) lajdonságok, mellékhatásspektrum, különböző recepto- betegek számára [1]. Azóta a világ egyre több orszá rokhoz való viszonyaik, illetve sejten belüli viselkedésük. gában egyre több beteg részesül imatinibterápiában. A tanulmányok közül néhány igazolta, hogy ezek a ha A CML-betegekben kimutatható BCR-ABL fúziós fe- tóanyagok komplex módon befolyásolják többek között hérje gátlására használt tirozinkináz-gátlók közül, a ha- a csontanyagcsere-folyamatokat is (1. táblázat). zai és nemzetközi szakmai irányelvek alapján, a kezelések során először imatinibet (Glivec, 2001) alkalmaznak. Ha Az imatinib és nilotinib csontsejtekre az imatinibkezeléssel nem érik el a beteg állapotának ja- gyakorolt hatását vizsgáló in vitro kísérleti vulását (nincs remisszió, rezisztencia alakul ki vagy ima- eredmények irodalmi áttekintése tinibintolerancia lép fel), akkor a hatályban lévő eljárás- rend alapján alkalmazható a nilotinib (Tasigna, 2007) Az imatinib és nilotinib csonthatása valószínűleg a csont- vagy a dazatinib (Sprycel, 2006). Azoknál a betegeknél, sejtek fiziológiás receptorain keresztül valósul meg. akiknél sem az imatinibkezelés nem javasolt, és nilotinib- Mindkét hatóanyag esetén ismertek a farmakológiai cél- re, valamint dazatinibre sem reagálnak megfelelően, al- ponttól eltérő egyéb targetek, amelyekhez különböző kalmazható a ponatinib (Iclusig, 2013) és a bozutinib affinitással képesek kapcsolódni. Ezek a PDGFRA, (Bosulif, 2013) is. PDGFRB, c-kit, c-fms, M-CSF, DDR1, DDR2, CSF1R A CML a fehérvérsejtek egy részét létrehozó csontve- és SCF, amelyek közvetítésével a direkt csonthatás érvé- lő myeloid őssejtvonalát érinti. A betegséget a BCR-ABL nyesülhet. A tapasztalt hatás függ az alkalmazott ható- génfúziót hordozó úgynevezett Philadelphia kromoszó- anyag-koncentrációtól, a sejtek érettségi állapotától, il- ma jellemzi, amelynek következtében túlzott mennyisé- letve az általa kötött receptor-tirozinkináz útvonalak gű kóros fehérvérsejt termelődik. A CML-betegségre megoszlási arányától [2–4].

2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám 1430 ORVOSI HETILAP

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY

1. táblázat A vizsgált két tirozinkináz-gátló főbb tulajdonságainak és a blast-specifikus génexpressziót, sejtaktivitást és minerali- csontanyagcserére való hatásainak összefoglalása zációt tapasztaltak [2, 5–10]. A nyilak a változások irányát jelölik. ↑: Az adott tulajdonság Az imatinib dózisfüggő módon (0,05–1 µM) indukál- vagy folyamat fokozódása, aktiválódása. ↓: Az adott tulajdonság ta a csontszövet képződését patkány-egér (MC3T3-E1) vagy folyamat csökkenése, gátlása. osteoblast-sejtvonalakon. Mindezeket alkalikusfoszfa- táz- (ALPL-), csontszialoprotein- (BSP-) és osteocalcin- Hatóanyag neve (BGLAP-) specifikus kvantitatív génexpressziós vizsgála- Imatinib Nilotinib tokkal is megerősítették. Az imatinib osteoblast- Gyógyszer (gyártó) Glivec/Gleevec Tasigna (Novartis) proliferációt gátló hatását több modellben, így humán (Novartis) osteosarcoma-sejtvonalon (SaOS-2), valamint egér ST2 Terápiás javallat Gyermek és felnőtt Felnőtt, krónikus csontvelői stromasejt-kultúráján is leírták. Az imatinib CML-betegek, fázisú CML-betegek valamint felnőtt kezelésére közvetve vagy a csontbontósejt-előalakokra hatva köz- GIST-betegek és vetlenül is képes gátolni az osteoclastogenesist. PDGFR Az imatinibhez hasonlóan a nilotinib (0,01–1 µM génátrendeződéssel koncentrációban) is gátolta az osteoblast-proliferációt. járó betegségek Azonban az osteoblast-differenciációt csökkentette vagy kezelésére nem volt rá hatással. Az osteoblastsejtek nilotinibkezelé- Alkalmazott dózis 400 mg/nap, 2 × 300 mg/nap se növelte az oszteoprotegerin (OPG) expresszióját és felnőtteknél 600 mg/nap vagy vagy 1 × 400 mg/ 2 × 400 mg/nap nap szekrécióját, valamint csökkentette a RANKL mRNS- ének átíródását [5]. Az osteoclastogenesist szintén haté- Hatóanyag, célpont BCR-ABL BCR-ABL onkoprotein, onkoprotein, konyan gátolta. tirozinkináz tirozinkináz aktivitásának gátlása aktivitásának gátlása A két tirozinkináz-gátló csontanyagcserét A célzott KIT, SCF, DDR1, PDGFR, KIT, farmakológiai DDR2, CSF1R, Efrin-receptor érintő, humán klinikai megfigyeléseinek célponttól eltérő, PDGFR, c-fms, irodalmi összegzése egyéb szubsztrátok karbonikus anhidráz II Krónikus fázisú CML-betegek aspirációs csontvelőmin- Osteoblastsejtekre Proliferáció ↓, Proliferáció ↓, táin végzett microarray-vizsgálatok alapján az imatinib gyakorolt hatás differenciáció ↑, differenciáció ↓, (400 mg/nap) a kezelés kezdeti időszakában nagymér- ↑ sejtaktivitás , OPG-expresszió és tékben befolyásolta a csontvelői haematopoeticus sejtek osteoblast-specifikus -szekréció ↑, génexpresszió ↑ RANKL-expresszió ↓ génexpressziós profilját. A bekövetkező transzkripciós Osteoclastsejtekre Csontreszorpciós Képződés ↓, változások szignifikánsan módosították a sejtciklust, a gyakorolt hatás sejtaktivitás ↓, aktivitás ↓, sejtnövekedést, a proliferációt, a DNS-replikációt és -re- osteoclast- differenciáció ↓, kombinációt, valamint a DNS-javító mechanizmusokat prekurzorok apoptózis ↑, [3]. és érett osteoclastok sejtszám ↓ Magas dózisú imatinibterápia (600 mg/nap) során a túlélése ↓, differenciáció ↓, betegek csontbiopszia-mintáinak mikrokomputer-to- aktivitás ↓, mográfiás feltárásánál igazolták, hogy osteopeniás CML- osteoclastogenesis ↓, betegeknél megnövekedett a csípőcsont szivacsos állo- sejtszám ↓ mánya [11]. Szivacsos csontállomány-növekedést 50 év Klinikai Hypophosphataemia, hypokalcaemia, feletti, osteoporoticus kezeltek esetén is tapasztaltak [9]. megfigyelések a hyperparathyreosis, csontspecifikus Ezzel szemben több, terápia alatt álló betegnél mérték a csontanyagcsere szérummarkerek változása, megnövekedett csontásványianyag-tartalom csökkenését a combnyak te- vonatkozásában csontmineralizáció, szivacsos csontállomány növekedése, a csont ásványianyag- rületén. A csontmarkerek szérumszintjének vizsgálatai tartalmának növekedése alapján a csontbontó osteoclastsejtek számának és aktivi- tásának csökkenését figyelték meg. Jelentős csökkenést Az imatinib és nilotinib csontképző osteoblast- és figyeltek meg például a szérum-CTX-1 mennyiségében, csontbontó osteoclastsejtekre gyakorolt hatását immor- ami csökkent osteoclast-aktivitásra utal [5, 11]. De ezt a talizált sejtvonalakon és rágcsálómodelleken tesztelték. csökkenést a csontépítő osteoblastsejtek aktivitása nem Az in vitro kísérletek megfigyelései alapján az imatinib követte és az erre vonatkozó klinikai megfigyelések egy- támogatja az osteoblastsejtek differenciációját [2, 5, 6], másnak ellentmondóak voltak [11–14]. A tirozinkináz- azonban gátolja proliferációjukat és túlélésüket [5–10]. gátlókkal kezelt betegeknél hypophosphataemia [5, 9, Emellett csökkenti az osteoclastogenesis és a csontre- 12, 13, 15, 16], hypocalcaemia [12, 13, 15, 16], vala- szorpció mértékét, valamint az osteoclast-prekurzorok mint hyperparathyreosis [12, 13, 15, 16] lépett fel. és az érett osteoclastok túlélését [2, 6–9]. További tanul- Kezdetben számos kutatócsoport jutott olyan ered- mányokban az imatinib hatására megnövekedett osteo ményre, hogy az onkohematológiai betegségek kezelé

ORVOSI HETILAP 1431 2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY sében használt tirozinkináz-gátlók, mint például az ima- (Sigma) fixáltuk a sejteket, majd 100 µl 4%-os Sulforho- tinib és a nilotinib, pozitív csontanyagcsere-változásokat damine-B (SRB, Sigma) oldattal megfestettük 1%-os idézhetnek elő. A későbbi kiterjedtebb vizsgálatok azon- ecetsavas közegben. A felesleges festékoldat eltávolítása ban már nem minden esetben erősítették meg ezeket a után a sejttenyésztő lemezeket négyszer átöblítettük 1%- megfigyeléseket. Sőt arról is beszámoltak, hogy imatinib os ecetsavoldattal, ezt követően szobahőmérsékleten hatására az osteoblastok aktivitását jelző szérumoszteo- hagytuk megszáradni. A kötött SRB-t 100 µl 10 mM-os kalcin-szint [11–13, 17], valamint a BMD egyaránt Trisma-oldatban (Sigma) feloldottuk és a sejttenyésztő csökken. lemezeket 5 percig rázattuk. A méréseket Multiskan Napjainkban már elmondható, hogy a tirozinkináz- Spectrum V1.2 1500-636 készülékkel (Thermo Fisher gátlóknak nincs egyértelmű pozitív hatása a csontanyag- Scientific Inc., Waltham, MA, Amerikai Egyesült Álla- cserére. Azonban az osteoblast- és osteoclastsejtek mű- mok) 520 nm-en, 96 lyukú Thermo Cliniplateken ködésének befolyásolásán keresztül komplex módon (Thermo Fisher Scientific Inc.) végeztük. Az eredmé- változtatják meg a csontszövet élettani folyamatait. Mi- nyek alapján meghatároztuk a megfelelő inkubálási időt vel a kezelések egyre több beteget érintenek, illetve hos�- és hatóanyag-koncentrációt. A tirozinkináz-gátlókkal ke- szú évtizedekig vagy akár élethosszig is tarthatnak, indo- zelt sejteket 24 lyukú sejttenyésztő lemezen 1 µM-os ha- kolt ezen mechanizmusok molekuláris hátterének jobb tóanyag-koncentráció mellett 6 napig inkubáltuk. Min- megismerése. Ezért a saját kutatásunk célja az volt, hogy den esetben 3 párhuzamos mérést végeztünk. megvizsgáljuk az imatinib és nilotinib osteoblastsejtekre kifejtett hatásait a teljes transzkriptom szintjén, valamint, RNS-izolálás hogy feltérképezzük a kezelés hatására a sejten belül A kezelt és kezeletlen osteoblastsejtekből az RNS-izolá- megváltozott számos jelátviteli és szabályozó útvonalat. lást High Pure Total RNA Isolation System (Roche, In- dianapolis, IN, Amerikai Egyesült Államok) segítségével hajtottuk végre, a gyártó előírása szerint. Az izolált RNS Saját kutatási eredmények bemutatása

Anyagok és módszerek 2. táblázat Az imatinibkezelt sejtekben azonosított top kanonikus útvona- lak In vitro sejtkultúra Tanulmányunk során in vitro vizsgálatokat végeztünk Kanonikus -log(p-érték)a Arányb Génszimbólumok imatinibbel és nilotinibbel kezelt egérpraeosteoblast- útvonalak (logFC-érték)c sejtkultúrán. Az MC3T3-E1 sejteket az ATCC-től Reelin jelátviteli 2,61E00 7,59E-02 MAP3K9 (3,41), (American Type Culture Collection) (Rockville, MD, útvonal MAPK8IP2 Amerikai Egyesült Államok) vásároltuk. A sejteket Mini- (2,10), ITGA2 (2,35), mum Essential Medium Eagle Alpha Modification DAB1 (2,24), (α-MEM; Sigma, St. Louis, MO, Amerikai Egyesült Ál- RELN (3,71), lamok) sejttenyésztő médiumban tartottuk, kiegészítve DCX (1,86) 0,292 g/L L-glutaminnal (Sigma), 5% magzatiborjú- Zsírsavaktiváló 1,69E00 1,54E-01 ACSL6 (3,39), szérummal (FCS; Sigma), valamint 1% antibiotikummal jelátviteli útvonal ACSBG2 (2,42) (penicillin, streptomicin-szulfát és amphotericin B; GABA-receptor 1,63E00 6,35E-02 GABRQ (2,69), Sigma). A sejteket 37 ºC-on, 5% CO2 és 78% páratarta- jelátviteli útvonal GABRG3 (1,95), lom mellett tenyésztettük. A sejtek átoltása 70%-os kon GABBR2 (2,74), fluencia esetén történt. Az átoltások során 0,25% Tryp- ADCY1 (3,16) sin EDTA-oldatot (Sigma) használtunk. A kísérleteket a Szertoli–szertoli 1,52E00 4,07E-02 CLDN10 (1,94), sejtkultúrákkal 8–15 átoltás között végeztük el. sejtinterakciós MAP3K9 (3,41), jelátviteli útvonal EPB41 (2,51), CTNNA2 (2,76), In vitro kezelés imatinibbel és nilotinibbel – sejtélet- CLDN4 (2,21), képesség-mérés ITGA2 (2,35), A vizsgálatokhoz három csoportot alakítottunk ki: Gucy1b2 (2,86) imatinibbel kezelt csoportot, nilotinibbel kezelt csopor- γ-linolénsav- 1,52E00 1,25E-01 ACSL6 (3,39), tot és egy kezeletlen kontrollcsoportot. A megfelelő ke- bioszintézis ACSBG2 (2,42) zelési idő és dózis megválasztása érdekében először kü- Szerotoninreceptor 1,5E00 7,5E-02 HTR5A (2,06), lönböző imatinib (Glivec/Gleevec, STI571, CGP jelátviteli útvonal ADCY1 (1,45), 57148B; Novartis, Svájc) és nilotinib (Tasigna; Novartis, HTR1A (2,88)

Svájc) koncentrációt (30 nM–20 µM) alkalmazva vizs- aA -log(p-érték) számításához Fisher egzakt tesztet használtunk. gáltuk a sejtek túlélését. A kísérletek során igyekeztünk bAz arány kiszámításakor a saját kísérleti eredményeink alapján az adott útvonal- az in vitro kultúrák esetén elérhető leghosszabb kezelést hoz hozzárendelhető gének számát elosztottuk az IPA adatbázisa alapján az út- vonalhoz tartozó összes génnel. alkalmazni (1–6 nap). A sejtéletképesség méréséhez a cAz adott útvonalakhoz rendelt, a kezelés hatására szignifikáns expressziós elté- tápoldat eltávolítása után 100 µl/lyuk triklór-ecetsavval rést mutató gének és azok logFC-értékei.

2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám 1432 ORVOSI HETILAP

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY minőségét Bioanalyzeren (Agilent Technologies, Santa 3. táblázat A nilotinibkezelt sejtekben azonosított top kanonikus útvonalak Clara, CA, Amerikai Egyesült Államok), mennyiségét Qubit fluorométeren (Life Technologies, Carlsbad, CA, Kanonikus útvonalak -log(p-érték)a Arányb Génszimbólumok c Amerikai Egyesült Államok) ellenőriztük. Ezt követően (logFC-érték) a párhuzamos biológiai minták poolozása után a teljes EIF2 jelátviteli 5,27E00 2,37E-02 RPL17 (2,41), transzkriptómaanalízis kivitelezését Applied Biosystems útvonal RPL39 (1,99), RPS23 (3,45) SOLiD™ V4 készüléken (Life Technologies) végeztük el. Embrionális 2,14E00 1E-01 NANOG (2,06) őssejt-differenciáció szívsejtvonal irányba SOLiD új generációs RNS-szekvenálás Az embrionális 1,56E00 2,63E-02 NANOG (2,06) A tisztított, DNS-mentesített totál RNS-molekulák őssejtek (>5 mg/minta, RIN>8,0, cc>400 ng/ml) teljes transz- transzkripciót kriptomanalízisét új generációs 50 + 20 bp reads paired- szabályozó hálózata end technológiával a SeqOmics Biotechnológiai Kft. Oct4 szerepe az 1,49E00 2,22E-02 NANOG (2,06) (SeqOmics Biotechnológiai Kft., Szeged, Magyarország; emlős embrionális http://www.seqomics.hu/) végezte. őssejt pluripotenciában Statisztikai analízis GABA-receptor 1,34E00 1,59E-02 GABRB1 (2,83) Mindkét hatóanyag esetében az expresszálódott gének jelátviteli útvonal logFC (fold-change: az expressziós változás mértéke a aA -log(p-érték) számításához Fisher egzakt tesztet használtunk. kezelt csoportban a kontrollcsoporthoz viszonyítva) ér- bAz arány kiszámításakor a saját kísérleti eredményeink alapján az adott útvonal- tékei alapján meghatároztuk a szignifikáns változást mu- hoz hozzárendelhető gének számát elosztottuk az IPA adatbázisa alapján az út- tató géneket Benjamini and Hochberg False Discovery vonalhoz tartozó összes génnel. cAz adott útvonalakhoz rendelt, a kezelés hatására szignifikáns expressziós eltérést Rate számítás segítségével. A szignifikanciaszint 0,05 mutató gének és azok logFC-értékei. volt. A kiválasztott szignifikáns géneket Ingenuity Path- way Analysis (IPA) (QIAGEN, Redwood City, CA, Amerikai Egyesült Államok; www.ingenuity.com) szoftver segítségével értékeltük ki. Kiemelt figyelmet fordítot- amely mindkét hatóanyag esetén a top kanonikus útvo- tunk a kísérletbe bevont hatóanyagok csontanyagcserére nalak között szerepelt. Eredményeinkben három ioncsa- gyakorolt hatásának vizsgálatára. torna (GABRQ, GABRB1 és GABRG3), egy G-protein- kapcsolt receptor B (GABBR2) és az 1-es típusú adenilát-ciklázt kódoló gén (ADCY1) kapcsolódott eh- Eredmények hez az útvonalhoz. Szignifikáns gének azonosítása Az imatinibkezelés hatására az osteoblastsejtekben a Az imatinibbel kezelt osteoblastsejtekben 16,383, a nilo- legmarkánsabb változást a reelin jelátviteli útvonal érte tinibbel kezelt csoportban 16,951, a kezeletlen, kont- el, amely a kaszkádhoz rendelhető összesen 6 génnel rollsejtekben pedig 17,290-féle annotált RNS-t azonosí- képviseli magát. A lipidmetabolizmusban szerepet játszó tottunk. két útvonal (zsírsav-aktivációs hálózat és γ-linolénsav- Az imatinib esetén 358, míg a nilotinibkezelést köve- bioszintézis) is jelentős különbséget mutatott. A szertoli– tően 21 szignifikánsan eltérő expressziós mintázatot mu- szertoli sejtinterakciós jelátviteli útvonal szerepét elsősor- tató gént találtunk a kontrollsejtekhez képest. A két ke- ban a here sejtjeinek növekedésében, proliferációjában és zelt csoport között három gén (AI593442, Gm11225, fejlődésében írták le. Kísérleteinkben az útvonalhoz ZFP184) egyezett meg, közel azonos expressziós aktivi- 7 szignifikánsan upregulálódott gén csoportosítható. tással. Az azonosított szignifikáns gének imatinib esetén A szerotoninreceptor jelátviteli útvonalról igazolták, hogy mind upregulálódtak, nilotinib esetén egy kivételével erős pozitív hatása van a csonttömegre. A vizsgálatunk- szintén mind overexpresszálódtak a logFC-értékek alap- ban ez az útvonal 3 génnel képviselteti magát. Annak ján. ellenére, hogy az azonosított kanonikus útvonalakhoz tartozó p-értékek jelentősen meghaladják a szignifikan- Azonosított jelátviteli útvonalak cia küszöbértékét (p≤0,05), a szoftver nem tudta megjó- Mindkét hatóanyag esetén a szignifikáns expressziós kü- solni az útvonalak aktivitási mintázatát. lönbséget mutató géneket jelátviteli útvonalakba rendez- A nilotinibbel kezelt sejtek teljes transzkriptomanalízi- tük Ingenuity Pathway Analysis segítségével. Az azono- se során azonosított öt top kanonikus útvonal közül az sított top jelátviteli útvonalak többsége különbözik a két EIF2 jelátviteli útvonal volt a legszignifikánsabb, 3 hoz- hatóanyagnál. Az imatinibbel végzett kísérletek alapján zá kapcsolható génnel. Az EIF2 (eukaryotainiciációs 6, a nilotinib esetén pedig 5 top jelátviteli útvonalat azo- faktor 2) -komplexnek fontos szerepe van a transzláció nosítottunk (2. és 3. táblázat). A GABA- (gamma-ami- folyamatának elindításában. A további szabályozási útvo- novajsav-) receptor jelátviteli útvonal volt az egyedüli, nalakat egy kritikus homeobox gén képviseli, a NANOG,

ORVOSI HETILAP 1433 2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY amely a sejtek önmegújulási és dedifferenciálódási folya- 4. táblázat Az imatinibkezelt sejtekben azonosított upstream regulátorok mataiban szerepet játszó transzkripciós faktort kódol. Génszimbólum és -név Általános biológiai funkció és a csontanyagcsere Azonosított top upstream regulátorok szabályozásában betöltött szerep Öt-öt úgynevezett top upstream regulátort azonosítot- FREM2 Extracelluláris mátrixprotein, szükséges a tunk, mind az imatinibbel, mind a nilotinibbel kezelt FRAS1-related hám integritásának fenntartásához és az extracellular matrix epidermalis adhézióhoz. osteoblastok teljes mRNS-szekvenálása során. Az elem- protein 2 Közvetett módon részt vehet a csont élettani zésben statisztikailag szignifikánsnak a p<0,01 értéket folyamatainak regulálásában. Mivel tekintettük, Fisher egzakt tesztet alkalmazva. Ezek a fel- kapcsolatban áll olyan molekulákkal, sőbb szintű transzkripciós szabályozóelemek magyaráza- amelyek például az oszteokalcin- tot adhatnak a megfigyelt génexpressziós változásokra. génexpresszió szabályozásában vesznek részt (MDM2) [18], a csonttörés gyógyulását Az imatinib esetén ezek a következők voltak: GLDN, támogatják (EGFL6) [19], az osteoblast- FREM2, NRCAM, GRIP1 és VLDLR. A nilotinibcso- differenciációt serkentik (NPNT) [20]. portban: FAAH, MARCH7, ACVR1B, RAD23B és GLDN Ranvier-befűződések kialakulásában vesz ACVR1C. Az azonosított upstream regulátorok közül Gliomedin részt a myelinhüvelyes axon mentén. több esetében is ismertek adatok a csontanyagcserével GRIP1 Az általa kódolt protein elsősorban az összefüggésben. A megtalált upstream szabályozóeleme- Glutamate receptor idegsejtekben transzportfolyamatokban vesz ket kódoló gének összefoglalása és azok csontanyagcse- interacting protein 1 részt. Jelet közvetít a citoszkeletális és réhez köthető biológiai funkcióinak áttekintése megta- membránfehérjék között. lálható a 4. és 5. táblázatban [18–25]. Interakcióba lép számos, a csonttömeg növekedését befolyásoló molekulával (NR1I3, MEF2C, ESR1) [21–23], valamint Megbeszélés az osteoblastok differenciációját befolyásoló ösztrogénszerű receptor-alfával is (ESRRA, Munkánkban megvizsgáltuk az onkohematológiai be- estrogen related receptor alpha). tegségek terápiájában használt tirozinkináz-gátló imati- NRCAM Az immunoglobulin-szupercsalád tagja. nib és a nilotinib vegyületek hatását a teljes transzkrip- Neuronal cell A gén által kódolt Ankyrin-kötő fehérje részt adhesion molecule vesz a neuron–neuron sejtadhézióban, tom szintjén in vitro egérosteoblast-sejtkultúrában. Ez továbbá a Ranvier-befűződések volt az első olyan vizsgálat, ahol a csontképzésben szere- kialakulásának molekuláris folyamataiban. pet játszó osteoblastok teljes mRNS-készletét és annak a VLDLR Lipoproteinreceptor, amelynek szubsztrátja kezelés hatására bekövetkezett expressziós változását Very low density a nagyon alacsony denzitású analizálták. Korábbi tanulmányokban már megjelentek lipoprotein receptor lipoproteinmolekula. Hozzákapcsolódva, adatok tirozinkináz-inhibitorok alkalmazását követően, endocitózissal a sejt belsejébe juttatja azt. a csontszövet legjellemzőbb markereinek génkifejeződé- Szerepet játszik a VLDL–triglicerid metabolizmusban és a reelin jelátviteli sére fókuszálva. Azonban komplex, sejtszintű transzkrip- útvonalban is. ciós mintázatbeli elemzés a csontanyagcsere vonatkozá- A koleszterinszint szabályozásán keresztül sában ez idáig nem történt. Mindkét hatóanyag esetében hathat a BMD-re és a csontok megfelelő meghatároztuk a szignifikáns expressziós különbségeket mechanikai tulajdonságainak megtartására. mutató géneket, azonosítottuk a top jelátviteli rendsze- Az osteoblast-proliferációt serkenti. reket és az upstream regulátor géneket, útvonal-analí A gének neveit és általános biológiai szerepük leírását a GeneCards (http:// zisek segítségével. Kiemelt figyelmet fordítottunk a ha www.genecards.org), NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene) és az IPA tóanyagok feltételezett csontanyagcsere-modifikáló (https://reports.ingenuity.com) adatbázisaiból gyűjtöttük. Az upstream regulá- torok által szabályozott elemek listáját az IPA-elemzés eredményei adták. hatásainak értelmezésére és magyarázatára. Mivel a tiro- A csontanyagcseréhez köthető biológiai szerepüket a felsorolt adatbázisokból és zinkináz-gátlókkal végzett terápia általában évtizedekig a szakirodalomból gyűjtöttük. vagy akár élethosszig is tarthat, ezért az imatinib- és ni- lotinibkezelések (6 napos inkubációs idő) hosszabb távú hatását igyekeztünk vizsgálni in vitro sejtes rendszerben. Így a bemutatott eredmények elsősorban nem a gyors, hogy a két inhibitor eltérő módon hat az osteoblastsejtek hanem a lassabban kialakuló másodlagos génaktivitások- génkifejeződési mintázatára. Ismert, hogy az imatinib a ban bekövetkező változásokat tükrözik. BCR-ABL célmolekulája mellett több sejtfelszíni tiro- Több klinikai tanulmány is igazolta, hogy ezek a tiro- zinkináz-receptorhoz is képes kapcsolódni, míg a niloti- zinkináz-gátló vegyületek alkalmazásuk során komplex nib jóval specifikusabb, a tirozinkináz-receptorok több- módon változtatják meg a csont homeosztatikus folya- ségével nem kötődik. A statisztikailag szignifikáns matait. A publikált eredmények sokszor egymásnak el- különbséget mutató gének között csak 3 közös volt lentmondóak, amit magyarázhat a vizsgált sejtek eltérő (ZFP184, Gm11225, AI593442) a két kezelt csoportban. érettségi állapota [2], az alkalmazott hatóanyagok kon- A ZFP184 (Zinc finger protein 184), amely transzkrip centrációja [2, 5], azok kémiai tulajdonságai, illetve ki- ciót szabályozó folyamatokban vesz részt, és a CLIC1 náztarget-spektruma. Saját eredményeink is bizonyítják, (chloride intracellular channel 1) kapcsolatán keresztül

2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám 1434 ORVOSI HETILAP

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY

5. táblázat A nilotinibkezelt sejtekben azonosított upstream regulátorok expresszióját detektáltuk. Funkcionális GABA-receptorok konstitutívan jelen vannak az osteoblastokon és a Génszimbólum és -név Általános biológiai funkció és a csontanyagcsere mesenchymalis sejteken, amelyeknek szerepük lehet a szabályozásában betöltött szerep remodeling során a sejtproliferációban és -differenciáció- ACVR1B Transzmembránreceptor. Az 1-es típusú ban [27–29]. A GABA-receptorok közvetítésével az os- Activin receptor aktivinreceptor komplexet képez a 2-es teoblastok kulcsfontosságú differenciációs markerei, type-1B típussal, és az így kialakuló komplex szabályozza például az idegsejt- mint a csont morfogenetikus protein 2 (BMP2) és az differenciációt és -túlélést, oszteokalcin, egyaránt fokozott aktivációt mutat. Azon- szőrtüszőfejlődést, FSH-termelést, ban az azonosított GABBR2 gátolja az alkalikusfoszfa- sérülésgyógyulást, extracelluláris mátrix táz-aktivitást és a kalciumakkumulációt stromasejtekben termelődését, immunszuppressziót és [30]. A GABRB1 pedig pozitívan szabályozza a kondro- karcinogenezist. Az ACVR1B az aktivinútvonal részeként genezist. A bemutatott eredmények alapján is látszik, szerepet játszik a csontvázrendszer hogy a GABA-jelátvitel milyen sok kapcsolódási ponton fejlődésében. Aktivinrendszer szabályozza érinti a csontsejtek működését, amely útvonalat mindkét a csontsejt-differenciációt és -proliferációt szer szignifikánsan befolyásolta. [24]. Az imatinibbel kezelt sejtekben a legjelentősebben ACVR1C Az aktivin AB, aktivin B és a NODAL (-logp = 2,61E00) a reelin jelátviteli útvonal elemeinek Activin receptor receptora. Részt vesz a sejtdifferenciációban, génexpressziója változott meg. Ez elsősorban a szinap- type-1C növekedésgátlásban és az apoptózisban. A csontfejlődésben és a remodeling során szisok képződésében és a neurodegenerációban vesz fontos molekulákat szabályoz részt. Genomszintű asszociációs vizsgálatok során (például: ephrinB2, CASP3, SMAD3). (GWAS) igazolták, hogy a reelint kódoló RELN gén va- FAAH Az általa kódolt integrális membránfehérje riánsa összefügg egy csontbetegség, az otosclerosis kiala- Fatty acid amide a zsírsavamidok hidrolíziséért felelős. kulásával [31]. A Reelin képes a nagyon kis denzitású li- hydrolase A működése során keletkező zsírsavamidok poprotein receptorához kapcsolódni (VLDLR), amely hatással vannak az osteoblastokra és az kísérletünkben a top upstream regulátorok között szere- osteoclastokra, stimulálják a csontépítést és pel. Így létrehoz egy szignalizációs komplexet (Reelin/ gátolják a reszorpciót [25]. VLDLR/ApoER2/Dab1), amelynek funkciója a MARCH7 E3 ubiquitinligázok ring finger típusa. csontanyagcsere vonatkozásában még nem tisztázott. Membrane-associated Ideiglenesen megköti a célfehérjét és Azonban az egyes molekulakomponenseit kódoló gének ring finger (C3HC4) ubiquitint kapcsol hozzá. Az ubiquitinnel 7, E3 ubiquitin jelölt fehérje ezután lebontásra kerül. szignifikánsan megnövekedett kifejeződését tapasztaltuk protein ligase Ez a folyamat biztosítja a fehérjék dinamikus imatinibkezelést követően. egyensúlyát a sejten belül. Az imatinibadagolás szignifikáns változást okozott a szerotoninreceptor jelátviteli útvonalhoz tartozó gének RAD23B Az ubiquitinfüggő fehérje degradációja mRNS-expressziójában. A szerotonin (5-hidroxitripta- RAD23 homolog B során, a poliubiquitinált fehérjék min, 5-HT) receptorok számos típusa megtalálható a (S. cerevisiae) proteaszómához történő szállításában csontsejteken, mint az 5-HT1 és 5-HT2 receptorok vesznek részt. [32–35]. Vizsgálatunkban azonban a szerotoninrecepto- A különböző proteoszómákon (PSMC2 és PSMC1) keresztül közvetett hatása lehet az rok ettől eltérő, 5-ös csoportjába tartozó 5-HT5A re- osteoblast-differenciációra és a kanonikus ceptort kódoló HTR5A gén upregulálódását mértük. Wnt jelátvitelre. Irodalmi adatok alapján a szerotonin szabályozó szerepet tölt be a csontrendszerben. Ha szintézise a periférián A gének neveit és általános biológiai szerepük leírását a GeneCards (http:// történik, akkor hormonként viselkedik és gátolja a csont www.genecards.org), NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene) és az IPA (https://reports.ingenuity.com) adatbázisaiból gyűjtöttük. Az upstream regulá- építést. Ezzel szemben, ha a központi idegrendszerben torok által szabályozott elemek listáját az IPA-elemzés eredményei adták. szintetizálódik, akkor neurotranszmitterként viselkedve A csontanyagcseréhez köthető biológiai szerepüket a felsorolt adatbázisokból és erős pozitív hatást fejt ki a csonttömegre, elősegíti a a szakirodalomból gyűjtöttük. csontépítést és visszaszorítja a reszorpciót. A szerotonerg hatás pontos direkt vagy indirekt mechanizmusa a csont metabolikus folyamataiban napjainkig még részleteiben [26] szerepe lehet az osteoblast-differenciációban. A nem felderített. Gm11225 (3-hydroxyisobutyrate dehydrogenase pseu- Nilotinib hatására a legerőteljesebb változást (-logp = dogene) és AI593442 (C11orf87, chromosome 11 open 5,27E00) az EIF2 jelátviteli útvonal mutatta. Az EIF2 reading frame 87) biológiai szerepe a csontanyagcseré- (eukaryotainiciációs faktor 2) GTP-kötő fehérjeként sza- ben nem ismert. bályozza, illetve elindítja a transzlációt. Nem megfelelő A top kanonikus útvonalak között a két szer esetén működése megváltoztathatja a sejt fehérjekészletének közös volt a GABA-receptor jelátviteli útvonal. A vizsgá- szintézisét és a sejtek túlélését (https://reports.ingenu- latok során a receptorcsalád 4 tagjának (GABRQ, ity.com). Emellett elősegíti az előalakokból történő oste- GABRB1, GABRG3 és GABBR2) megnövekedett gén- oblast-differenciációt irányító, aktiváló transzkripciós

ORVOSI HETILAP 1435 2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY faktor 4 (AFT4) átíródását [36–38]. A foszforilált eIF2α early but not late osteoblast differentiation in vitro. J. Bone Min- és downstream regulátorai részt vesznek az osteoblastok er. Metab., 2012, 30(1), 119–123. vírusfertőzés vagy tápanyaghiány miatt kialakuló endo [3] Benito, R., Lumbreras, E., Abáigar, M., et al.: Imatinib therapy of chronic myeloid leukemia restores the expression levels of key plazmás reticulum stresszválaszában, amelyek módosít- genes for DNA damage and cell-cycle progression. Pharmaco- ják a csontátépülés aktivitását [36–38]. genet. Genomics, 2012, 22(5), 381–388. A nilotinib hatására megváltozó NANOG homeobox [4] Vandyke, K., Fitter, S., Dewar, A. L., et al.: Dysregulation of bone gén az IPA szoftveres analízis alapján több szabályozási remodeling by imatinib mesylate. Blood, 2010, 115(4), 766– útvonal kulcseleme (Embrionális őssejt-differenciáció 774. [5] O’Sullivan, S., Lin, J. M., Watson, M., et al.: The skeletal effects szívsejtvonal irányba, Az embrionális őssejtek transzkripci- of the tyrosine kinase inhibitor nilotinib. Bone, 2011, 49(2), ót szabályozó hálózata, Oct4 szerepe az emlős embrionális 281–289. őssejt pluripotenciában). A gén a primer csontvelői me- [6] O’Sullivan, S., Naot, D., Callon, K., et al.: Imatinib promotes senchymalis őssejtek csontsejt irányú elköteleződését és a osteoblast differentiation by inhibiting PDGFR signaling and in- csontszöveti regenerációt vezérli. Továbbá összekötte- hibits osteoclastogenesis by both direct and stromal cell-depend- ent mechanisms. J. Bone Miner. Res., 2007, 22(11), 1679–1689. tést biztosít a csont morfogenetikus protein (BMP) [7] Wihlidal, P., Karlic, H., Pfeilstöcker, M., et al.: Imatinib mesylate kaszkáddal. (IM)-induced growth inhibition is associated with production of Előzetes alapkutatási eredményeink limitációja, hogy spliced osteocalcin – mRNA in cell lines. Leuk. Res., 2008, csak egy sejtkultúrán végeztük el a tirozinkináz-gátló ke- 32(3), 437–443. zeléseket. További vizsgálatok szükségesek a bemutatott [8] Tibullo, D., Giallongo, C., La Cava, P., et al.: Effects of imatinib génexpressziós eredmények és útvonal-analízisek meg- mesylate in osteoblastogenesis. Exp. Hematol., 2009, 37(4), 461–468. erősítéséhez, valós idejű RT-PCR alapú validálásához és [9] Fitter, S., Dewar, A. L., Kostakis, P., et al.: Long-term imatinib funkcionális teszteléséhez. A biológiailag is jelentős cél- therapy promotes bone formation in CML patients. Blood, molekulák sejtszintű szabályozómechanizmusainak mé- 2008, 111(5), 2538–2547. lyebb feltérképezéséhez pedig további sejtvonalakon [10] Fierro, F., Illmer, T., Jing, D., et al.: Inhibition of platelet-derived végzett vizsgálatok megvalósítását tervezzük. growth factor receptor beta by imatinib mesylate suppresses proliferation and alters differentiation of human mesenchymal stem Összefoglalásként elmondhatjuk, hogy elsőként készí- cells in vitro. Cell Prolif., 2007, 40(3), 355–366. tettünk a hazai szakirodalomban hiánypótló, átfogó iro- [11] Vandyke, K., Fitter, S., Drew, J., et al.: Prospective histomorpho- dalmi áttekintést a tirozinkináz-gátlók csontanyagcserét metric and DXA evaluation of bone remodeling in imatinib- befolyásoló hatásaival kapcsolatban, és végeztünk teljes treated CML patients: Evidence for site-specific skeletal effects. transztkriptomanalízist osteoblast-kultúrán a sejtszintű J. Clin. Endocrinol. Metab., 2013, 98(1), 67–76. hatásmechanizmus jobb megértését szolgálva. Az imati- [12] Berman, E., Girotra, M., Cheng, C., et al.: Effect of long term imatinib on bone in adults with chronic myelogenous leukemia nib- és nilotinibkezelések hatására az osteoblast-sejtvo- and gastrointestinal stromal tumors. Leuk. Res., 2013, 37(7), nalon tapasztalt génexpressziós mintázatbeli változások 790–794. alátámaszthatják a korábbi in vivo csontanyagcserét érin- [13] Berman, E., Nicolaides, M., Maki, R. G., et al.: Altered bone and tő klinikai megfigyeléseket. mineral metabolism in patients receiving imatinib mesylate. N. Engl. J. Med., 2006, 354(19), 2006–2013. [14] Tibullo, D., Barbagallo, I., Giallongo, C., et al.: Effects of second- generation tyrosine kinase inhibitors towards osteogenic differ- Anyagi támogatás: A közlemény megírása, illetve a kuta- entiation of human mesenchymal cells of healthy donors. Hema- tómunka anyagi támogatásban nem részesült. tol. Oncol., 2012, 30(1), 27–33. [15] Jönsson, S., Olsson, B., Ohlsson, C., et al.: Increased cortical bone Szerzői munkamegosztás: L. P., T. I., K. J. P., N. Zs.: mineralization in imatinib treated patients with chronic myelog- A tanulmány alapjául szolgáló kísérletek megtervezése és enous leukemia. Haematologica, 2008, 93(7), 1101–1103. [16] O’Sullivan, S., Horne, A., Wattie, D., et al.: Decreased bone turn- koordinálása. L. G., H. P., Á. K., T. B., K. A., K. Gy.: over despite persistent secondary hyperparathyroidism during A kísérletekben való részvétel és adatelemzés. K. Gy.: prolonged treatment with imatinib. J. Clin. Endocrinol. Metab., Szakirodalom kutatása, feldolgozása, a kézirat megfogal- 2009, 94(4), 1131–1136. mazása. L. P., B. B.: A kézirat tartalmának átvizsgálása. [17] Lawrence, L.: Long-term treatment with imatinib affected bone A cikk végeleges változatát valamennyi szerző elolvasta mineral density. Cancer Network, 2013. és jóváhagyta. [18] Chen, H., Kolman, K., Lanciloti, N., et al.: P53 and MDM2 are involved in the regulation of osteocalcin gene expression. Exp. Érdekeltségek: A szerzőknek nincsenek érdekeltségeik. Cell Res., 2012, 318(8), 867–876. [19] Chim, S. M., Qin, A., Tickner, J., et al.: EGFL6 promotes en- dothelial cell migration and angiogenesis through the activation Irodalom of extracellular signal-regulated kinase. J. Biol. Chem., 2011, 286(25), 22035–22046. [1] Cohen, M. H., Moses, M. L., Pazdur, R.: Gleevec™ for the treat- [20] Green, J., Nusse, R., van Amerongen, R.: The role of Ryk and Ror ment of chronic myelogenous leukemia: U.S. Food and Drug receptor tyrosine kinases in Wnt signal transduction. Cold Spring Administration regulatory mechanisms, accelerated approval, Harb. Perspect. Biol., 2014, 6(2), a009175. and orphan drug status. Oncologist, 2002, 7(5), 390–392. [21] Cho, H. Y., Jung, J. Y., Park, H., et al.: In vivo deletion of CAR [2] Jönsson, S., Hjorth-Hansen, H., Olsson, B., et al.: Imatinib inhibits resulted in high bone mass phenotypes in male mice. J. Cell. proliferation of human mesenchymal stem cells and promotes Physiol., 2014, 229(5), 561–571.

2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám 1436 ORVOSI HETILAP

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC ÖSSZEFOGLALÓ KÖZLEMÉNY

[22] Li, W. F., Hou, S. X., Yu, B., et al.: Genetics of osteoporosis: per- ated with otosclerosis. Am. J. Hum. Genet., 2009, 84(3), 328– spectives for personalized medicine. Per. Med., 2010, 7(6), 655– 338. 668. [32] Westbroek, I., van der Plas, A., de Rooij, K. E., et al.: Expression of [23] Deleting Mef2c in mice increases bone mass. Bonekey Rep., serotonin receptors in bone. J. Biol. Chem., 2001, 276(31), 2012, 1, 61. 28961–28968. [24] Lotinun, S., Pearsall, R. S., Horne, W. C., et al.: Activin receptor [33] Bliziotes, M. M., Eshleman, A. J., Zhang, X. W., et al.: Neurotrans- signaling: A potential therapeutic target for osteoporosis. Curr. mitter action in osteoblasts: expression of a functional system for Mol. Pharmacol., 2012, 5(2), 195–204. serotonin receptor activation and reuptake. Bone, 2001, 29(5), [25] Bab, I., Smoum, R., Bradshaw, H., et al.: Skeletal lipidomics: reg- 477–486. ulation of bone metabolism by fatty acid amide family. Br. J. [34] Dai, S. Q., Yu, L. P., Shi, X., et al.: Serotonin regulates osteoblast Pharmacol., 2011, 163(7), 1441–1446. proliferation and function in vitro. Braz. J. Med. Biol. Res., [26] Yang, J. Y., Jung, J. Y., Cho, S. W., et al.: Chloride intracellular 2014, 47(9), 759–765. channel 1 regulates osteoblast differentiation. Bone, 2009, [35] Yadav, V. K., Ducy, P., Karsenty, G.: Serotonin: a new player in 45(6), 1175–1185. the regulation of bone remodeling. Medicographia, 2010, 32(4), [27] Muhammad, S. I., Maznah, I., Mahmud, R., et al.: Upregulation 357–363. of genes related to bone formation by gamma-amino butyric acid [36] Saito, A., Ochiai, K., Kondo, S., et al.: Endoplasmic reticulum and gamma-oryzanol in germinated brown rice is via the activa- stress response mediated by the PERK-eIF2 alpha-ATF4 path- tion of GABA(B)-receptors and reduction of serum IL-6 in rats. way is involved in osteoblast differentiation induced by BMP2. J. Clin. Interv. Aging, 2013, 8, 1259–1271. Biol. Chem., 2011, 286(6), 4809–4818. [28] Fujimori, S., Hinoi, E., Yoneda, Y.: Functional GABA(B) recep- [37] Hamamura, K., Yokota, H.: Stress to endoplasmic reticulum of tors expressed in cultured calvarial osteoblasts. Biochem. Bio- mouse osteoblasts induces apoptosis and transcriptional activa- phys. Res. Commun., 2002, 293(5), 1445–1452. tion for bone remodeling. FEBS Lett., 2007, 581(9), 1769– [29] Takahata, Y., Takarada, T., Hinoi, E., et al.: Osteoblastic 1774. γ-aminobutyric acid, type B receptors negatively regulate osteo- [38] Hirasawa, H., Jiang, C., Zhang, P., et al.: Mechanical stimulation blastogenesis toward disturbance of osteoclastogenesis mediated suppresses phosphorylation of eIF2 alpha and PERK-mediated by receptor activator of nuclear factor κB ligand in mouse bone. responses to stress to the endoplasmic reticulum. FEBS Lett., J. Biol. Chem., 2011, 286(38), 32906–32917. 2010, 584(4), 745–752. [30] Mentink, A., Hulsman, M., Groen, N., et al.: Predicting the therapeutic efficacy of MSC in bone tissue engineering using the molecular marker CADM1. Biomaterials, 2013, 34(19), 4592– 4601. (Kirschner Gyöngyi, [31] Schrauwen, I., Ealy, M., Huentelman, M. J., et al.: A Genome- Budapest, Korányi S. u. 2/A, 1083 wide analysis identifies genetic variants in the RELN gene associ- e-mail: [email protected])

A rendezvények és kongresszusok híranyagának leadása a lap megjelenése előtt legalább 40 nappal lehetséges, a 6 hetes nyomdai átfutás miatt. Kérjük megrendelőink szíves megértését.

A híranyagokat a következő címre kérjük: Orvosi Hetilap titkársága: [email protected] Akadémiai Kiadó Zrt.

ORVOSI HETILAP 1437 2016 ■ 157. évfolyam, 36. szám

Unauthenticated | Downloaded 10/02/21 02:09 PM UTC