UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA “JÚLIO DE MESQUITA FILHO” INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS - RIO CLARO Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas Biologia Celular e Molecular Constituição cariotípica em leptodactilídeos do gênero Leptodactylus e em espécies de famílias relacionadas à Leptodactylidae (Amphibia: Anura) Tese de Doutorado apresentada ao Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Rio Claro, para a obtenção do título de Doutor em Ciências Biológicas (Área de Concentração: Biologia Celular e Molecular) João Reinaldo da Cruz de Campos Maio 2010 Livros Grátis http://www.livrosgratis.com.br Milhares de livros grátis para download. João Reinaldo da Cruz de Campos Constituição cariotípica em leptodactilídeos do gênero Leptodactylus e em espécies de famílias relacionadas à Leptodactylidae (Amphibia: Anura) Tese de Doutorado apresentada ao Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Rio Claro, para a obtenção do título de Doutor em Ciências Biológicas (Área de Concentração: Biologia Celular e Molecular) Orientador: Dra. Sanae Kasahara Rio Claro Estado de São Paulo – Brasil 2010 ii João Reinaldo da Cruz de Campos Constituição cariotípica em leptodactilídeos do gênero Leptodactylus e em espécies de famílias relacionadas à Leptodactylidae (Amphibia: Anura) Tese de Doutorado apresentada ao Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Campus de Rio Claro, para a obtenção do título de Doutor em Ciências Biológicas (Área de Concentração: Biologia Celular e Molecular) Rio Claro, maio de 2010 597.8 Campos, João Reinaldo Cruz C198c Constituição cariotípica em leptodactilídeos do gênero Leptodactylus e em espécies de famílias relacionadas à Leptodactylidae / João Reinaldo Cruz Campos. - Rio Claro : [s.n.], 2010 168 f. : il., figs., tabs., mapas Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências de Rio Claro Orientador: Sanae Kasahara 1. Anuro. 2. Citogenética. 3. Cromossomos. 4. Anfíbios. 5. FISH. I. Título. Ficha Catalográfica elaborada pela STATI - Biblioteca da UNESP Campus de Rio Claro/SP iii Ao meu pai João de Campos (in memorian) Sei que esteve sempre ao meu lado torcendo por mim, o tempo todo sentia isso. Ainda que não esteja fisicamente aqui, tuas idéias e teus ensinamentos sempre me acompanham. Obrigado por todo o exemplo de dignidade e honestidade que você nos deu. Inquestionavelmente, você foi um herói. Te amo muito. “Quando penso em você, fecho os olhos de saudade” (Cecília Meireles) À minha mãe Maria Ap. B. Campos Meu eterno porto-seguro. Amor incondicional. Você tem um papel muito importante na minha formação pessoal e profissional. Você me ensinou a ser justo, bom e estar sempre de bem com a vida e as pessoas. Obrigado por todo o apoio e compreensão que sempre dedicou a mim. Obrigado pela torcida e pela presença em toda a minha vida. Este trabalho é uma vitória nossa, pois se não estivesse do meu lado não o teria realizado. Te amo sempre. “Estou sempre alegre, essa é a melhor maneira de vencer os obstáculos da vida” (Charlie Chaplin) iv Agradecimentos À minha orientadora Dra. Sanae Kasahara, meus sinceros agradecimentos por tudo o que me ensinou durante esses anos em que passamos juntos, por toda a paciência, insistência, ética, bom senso, dignidade e honestidade que mostrou. Espero que esta Tese represente apenas o final de uma fase, e não o de uma amizade pessoal e profissional; À Universidade Estadual Paulista (UNESP - Rio Claro) por me receber e permitir que fizesse parte deste Programa de Pós-Graduação; À Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) pelo apoio financeiro concedido, Processo No. 06/56193-8; Ao Departamento de Biologia por facilitar o desenvolvimento deste trabalho no Laboratório de Citogenética Animal; Ao Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA) pelas licenças de coleta concedidas (14434-1e 16681-1); Ao Prof. Dr. Célio F. B. Haddad e equipe, pelos animais fornecidos e pela identificação dos exemplares coletados; Aos Doutores Fernando Ananias, Julián Faivovich, Itamar A. Martins e Cínthia A. Brasileiro, e aos Biólogos Marcos Yamamoto e Hideki Narimatsu, pelos animais coletados; Ao Departamento de Morfologia (UNESP-Botucatu) em especial ao Prof. Dr. Fausto Foresti e a Dra. Cristiane Dias, pelo auxílio na técnica de FISH com sonda telomérica e nos testes com microdissecção de cromossomos inteiros; Ao Departamento de Biologia Celular (UNICAMP-Campinas) em especial a Prof. Dra. Luciana Lourenço Bolsoni e a pós-graduanda Juliana Nascimento pela assistência na realização da técnica de FISH com sonda ribossômica; Aos Professores do Departamento de Biologia do Instituto de Biociências (UNESP-RC), por todo carinho e amizade, em especial às Professoras Doutoras Ana Maria Costa Leonardo, Maria Izabel S. Camargo, Carmem S. Fontanetti Christofoletti e Maria A. Marin-Morales, pelas longas e interessantes conversas sobre vida pessoal e profissional, Doralice Maria Cella e Marielle Cristina Schneider por todo o carinho demonstrado e pelas aulas de ikebanas que muitas satisfações me deram, e Patrícia P. P. Maltempi pela pessoa maravilhosa que é, e por toda a ajuda nas técnicas de citogenética molecular; v Aos funcionários do Departamento de Biologia, em especial ao Gerson de Souza Melo, Lucila Segala, Mônika Iamonte, Maria da Graça, Neusa Perinotto e Sandra Veloso, pelos inúmeros momentos de descontração na hora do lanche, e principalmente pelo carinho e prontidão com que sempre me atenderam; À ex-técnica de laboratório Rogilene A. do Prado, pela amizade e pelo exemplo de força e determinação; À Profa. Dra. Cleusa Nagamachi da Universidade Ferderal do Pará (UFPA), pela simpatia que sempre demonstrou e pelas dicas na elaboração do Projeto de Pesquisa; Ao parecerista FAPESP, que analisou meus relatórios e deu importantes sugestões sobre os meus trabalhos; Aos amigos de laboratório do Departamento de Biologia, com os quais convivi um período muito intenso da minha vida. Tudo teria sido muito difícil sem a amizade de vocês. Quero registrar um agradecimento especial à Bárbara C. Manzano, Cintya Ap. Christofoletti, Dânia E. C. Mazeo, Daniela Morais Leme, Edson Lourenço Silva, Frederico G. C. Arnoldi, Janaína Pedro, Jaqueline Bianchi, Márcia M. Hoshina, Maria Eduarda Marreta, Matheus M. Roberto, Milena de Júlio, Renata Carita, Tamaris Gimenez Pinheiro, Tatiana da Silva Souza e Thaís C. Casimiro Fernandes; Aos amigos de laboratório do Departamento de Morfologia da UNESP de Botucatu, em especial à Cristiane Dias, Daniela Figueiredo, Márcio Chiachio, Kelly T. Abe e Adriana K. Takako, por toda atenção, amizade e carinho de sempre; À Glaucilene Ferreira Catroli e Simone Lilian Gruber: trabalhar com vocês, ainda que em períodos diferentes, foi um grande privilégio que levarei comigo para sempre. Gosto muito de vocês e não quero me distanciar nunca; À Cristiane Márcia Miléo, um presente que a vida me deu. Estar contigo durante este tempo foi algo mágico, como tudo o que passamos juntos. Onde quer que estejamos tenho certeza que essa magia não irá acabar. Obrigado pela pessoa maravilhosa que você é e por poder participar da tua vida de uma maneira tão intensa; Ao Thiago Gazoni, pela paciência que teve e que me ensinou a ter. Obrigado por ter sido tão atencioso todo este tempo, pois sempre que precisei você esteve presente. Que teu caminho seja sempre iluminado, cheio de felicidades e que continue com o mesmo enorme coração. Sucesso amigo; vi Ao André Luis Bombeiro, um agradecimento muito especial por toda a atenção, paciência e compreensão. A você que esteve sempre presente, é pouco dizer obrigado por tudo, é preciso muito mais, pois foram vários os períodos difíceis em que esteve comigo, me apoiando e me fazendo entender muitas coisas que aconteciam. Sei que estaremos sempre unidos e que alcançaremos todos os nossos objetivos. Você teve um papel extremamente importante nesta jornada. Seja sempre feliz, e conte comigo em todos os momentos da sua vida; À família Bombeiro, em especial ao Flamarion R. Bombeiro e Elizete I. F. P. Bombeiro, por todo o carinho e pelos exemplos de determinação e coragem; À minha família, por compreender a minha ausência durante esses últimos anos e por sempre me receber de braços e coração abertos; E finalmente, a Deus, por permitir que tantas pessoas especiais façam parte da minha vida. vii Índice Resumo....................................................................................................................................01 Abstract....................................................................................................................................03 Introdução Geral.......................................................................................................................05 Objetivos..................................................................................................................................17 Material....................................................................................................................................18 Métodos e Técnicas.................................................................................................................21 Análise Cromossômica............................................................................................................28 Referências Bibliográficas.......................................................................................................30