الجمهىريت العربيت الســــىريت وزارة التعليـــــم العالــــي جـــامعـــــت تشريــــــــن كليــــــت السراعــــــــــــــت قســــم وقايـــــت النبـــــاث

تأثغرػردّةػرزالتػطحضغّةػطنػاضفطرBeauveria ػ ػbassianaرضىػاألطوارػاضطختضفةػضدودةػورقػ اضقطن ػ Spodoptera littoralis

رسالت علميت أعدث لنيل درجت الماجستير في الهندست السراعيت اختصاص وقايت نباث

إعداد المهندست ضبظىػحدنػرجب ػ

7102

الجمهىريت العربيت الســــىريت وزارة التعليـــــم العالــــي جـــامعـــــت تشريــــــــن كليــــــت السراعــــــــــــــت قســــم وقايـــــت النبـــــاث

تأثغرػردّةػرزالتػطحضغّةػطنػاضفطرBeauveria ػ ػbassianaرضىػاألطوارػاضطختضفةػضدودةػورقػ اضقطن ػ Spodoptera littoralis

رسالت علميت أعدث لنيل درجت الماجستير في الهندست السراعيت اختصاص وقايت نباث

إعداد المهندست ضبظىػحدنػرجب ػ بإشراف

اضدصتورػطحطدػأحطدػػػػػػػػػػػػػػػػػػػػػػػػاضدصتورةػابتدامػززال ػ

أستاذ في قسم وقايت النباث أستاذ مساعد في قسم وقايت النباث كليت السراعت- جامعت تشرين كليت السراعت- جامعت تشرين

7102

ػ

شُدّطتػعذهػاضرداضةػادتصطاالػًضطتطضباتػظغلػدرجةػاضطاجدتغرػسيػشدمػوشاغةػ اضظباتػطنػصضغةػاضزرارةػسيػجاطعةػتذرغنػ ػ

ػ

This thesis has been submitted as a partial fulfillment of the requirement for the degree of Master in Department of Plant Protection at the Faculty of .ػ Agriculture, Tishreen University

صضطــــــــــةػذـــــــــــــــــــــصر ػ ACKNOWLEDGMENT

أتقّدم بخالص الشكر والتقدير لرئاسة جامعة تشرين ممثّمةً برئيس الجامعة األستاذ الدكتور ىاني شعبان، ونائب رئيس الجامعة لشؤون الدراسات والبحث العممي األستاذ الدكتور رضوان دنده، ولعمادة كميّة الز ارعة ممثمةً بعميد الكمّية األستاذ الدكتور جرجس م ّخول، والنائب العممي األستاذة الدكتورة سوسن ىيفا، والنائب اإلداري األستاذ الدكتور محمود عميو، وقسم وقاية النبات ممث ّالً برئيس القسم األستاذ الدكتور عمي رمضان، لتفضميم بقبول ىذا البحث ضمن الخطة العممية لقسم وقاية النبات.

مع الشكر والتقدير واالحترام لمن كان ليما الدور األكبر في إنجاز ىذا البحث، لمن أعطياني من وقتيما وجيدىما وكانا خير معي ٍن لي في مسيرتي، أتوجو بالعرفان والمحبة الخالصة لكل من األستاذ الدكتور حممد أمحد، والدكتوره ابتسام غزال لتفضميما باإلشراف عمى ىذا البحث، والعمل عمى إنجاحو واخ ارجو بأفضل صورة.

كل الشكر والتقدير إلى أعضاء لجنة الحكم األستاذ الدكتور نبيل أبو كف واألستاذة الدكتورة نوال علي الذين تفضموا بتقويم ىذا العمل وأغنوه بمالحظاتيم القّيمة.

ضبظىػحدنػرجب ػ

فهرس المحتويات

العنوان رقم الصفحة

فهرس المحتويات ...... I

فهرس الجداول ...... IV

فهرس األشكال ...... VI

جدول المصطمحات ...... IX

جدول الرموز ...... X

الممخص العربي ...... XI

الفصل األول: المقدمة ...... 1

أهمية البحث وأهدافه ...... 2

الدراسة المرجعية ...... 4

1- الفطر Beauveria bassiana ...... 4

1-1- التسمية والتصنيف ...... 4

1-2- المدى العوائمي واالنتشار الطبيعي...... 5

1-3- دورة الحياة...... 6

1-3-1- طور التطفل )اإلمراضية( ...... 6

1-3-2- الطور الرمي ...... 9

1-4- دفاعات الحشرة العائل وكيفية تجنبها من قبل الفطر...... 10

1-5- وصف الفطر ...... 11

1-6- أعراض اإلصابة بالفطر B.bassiana...... 11

1-7- تأثير عوامل البيئة في الفطر B.bassiana...... 12

1-7- 1- العوامل الحية...... 12

1-7-2- العوامل الالحية...... 13

1-8- أهمية استخدام الفطر B. bassiana في المكافحة الحيوية...... 13 2- دودة ورق القطن (Spodoptera littoralis (Boisduval, 1833...... 15

2-1- المدى العوائمي والتوزع الجغرافي...... 15 I

2-2- الضرر...... 16

2-3- دورة الحياة ...... 16

2-4- الوصف المورفولوجي...... 18

2–5- المكافحة ...... 20

2-5-1- المكافحة الكيميائية...... 20

2-5-2- المكافحة الحيوية ...... 21

الفصل الثاني: مواد البحث وطرائقه ...... 25

2-1- عزل الفطر B. bassiana من التربة...... 25

2-1-1- تربية دودة الشمع الكبرى Galleria mellonella مخبريا ً...... 25

2-1-2- جمع عينات التربة ...... 26

2-1-3- معاممة عينات التربة في المختبر ...... 26

2-1-4- تنقية وتصنيف العزالت الفطرية ...... 27

2-1-5- اختبار القدرة اإلمراضية عمى يرقات دودة الشمع الكبرى G. mellonella ...... 27

2-2- دراسة بعض الشروط المناسبة لنمو الفطر B.bassiana مخبريا ً ...... 28

2-2-1- تأثير درجات الحرارة المختمفة في نمو الفطر B.bassiana ...... 28

2-2-2- تأثير مستنبتات غذائية مختمفة في نمو الفطر B. bassiana ...... 29

2-2-3- تأثير اإلضاءة في نمو الفطر B.bassiana ...... 30

2-3- تربية دودة ورق القطن Spodoptera littoralis في المختبر ...... 30

2-4- اختيار العزلة الفطرية األكثر شراسة عمى دودة ورق القطن ...... 32

2-5- اختبار حساسية األطوار المختمفة لدودة ورق القطن لإلصابة بالفطر B.bassiana ...... 32

2-5-1- تحضير المعمق البوغي لمعزلة المستخدمة...... 32

2-5-2- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في عذارى دودة ورق القطن ...... 32

2-5-3- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في بالغات دودة ورق القطن ...... 33

2-5-4- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور البيض لدودة ورق القطن ...... 33

2-5-5- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور اليرقة لدودة ورق القطن ...... 33

2-6- مقارنة تأثير تراكيز مختمفة من العزلة الفطرية في العمر اليرقي الثالث من دودة ورق القطن...... 33

2-6-1- تحضير التراكيز المدروسة ...... 33

II

2-6-2- تنفيذ التجربة ...... 34

2-7- التحميل اإلحصائي ...... 34

الفصل الثالث: أوالً النتائج والمناقشة...... 36

3-1-عزل الفطر B. bassiana من التربة وتصنيفه ...... 36

3-1-1- نتائج العزل ...... 36

3-1-2- توصيف الفطر B.bassiana ...... 37

3-1-3- اختبار القدرة اإلمراضية عمى يرقات دودة الشمع الكبرى G. mellonella ...... 41

3-2- دراسة بعض الشروط المناسبة لنمو الفطر B.bassiana مخبرياً ...... 42

3-2-1- تأثير درجات الحرارة المختمفة في نمو الفطر B.bassiana ...... 42

3-2-2- تأثير مستنبتات غذائية مختمفة في نمو الفطر B. bassiana ...... 47

3-2-3- تأثير اإلضاءة في نمو الفطر B.bassiana ...... 51

3-3- تربية دودة ورق القطن ...... 52

3-4- اختيار العزلة الفطرية األكثر شراسة عمى دودة ورق القطن ...... 56

3-5- اختبار حساسية األطوار المختمفة لدودة ورق القطن لإلصابة بالفطر B.bassiana ...... 58

3-5-1- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في عذارى دودة ورق القطن ...... 58

3-5-2- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في بالغات دودة ورق القطن ...... 59

3-5-3- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور البيض لدودة ورق القطن ...... 66

3-5-4- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور اليرقة لدودة ورق القطن...... 61

3-6- مقارنة تأثير تراكيز مختمفة من العزلة الفطرية B4 في العمر اليرقي الثالث من دودة ورق القطن...... 66

ثانياً: االستنتاجات ...... 69

ثالثاً: التوصيات ...... 76

اربعاً: الم ارجع ...... 71

الممخص األجنبي ...... 96

III

فهرس الجداول

رقم الجدول الصفحة

1-1. أنواع الجنس Beauveria المستخدمة في المكافحة الحيوية 4

1-2. أىـ المتطفبلت والمفترسات المستخدمة في المكافحة الحيوية لدودة ورؽ القطف 23

2-1. مصادر جمع عينات التربة مف المواقع المدروسة في الساحؿ السوري 26

2-2. مكونات المستنبتات الغذائية المستخدمة الختبار تأثيرىا في نمو الفطر B.bassiana وفKreisel ؽ 29 و Schauer )1987(

2-3. العوائؿ النباتية التي وجدت عمييا حشرة S.littoralis في الساحؿ السوري في موسـ -2614 2615 31

3-1. عزالت الفطر B. bassiana حسب مصدرىا البيئي في المواقع المدروسة 36

3-2. متوسط نسب الموت التي أحدثتيا العزالت الست لمنوع B. bassiana في يرقات العمر األخير لدودة 42 الشمع الكبرى 3-3. متوسط قطر النمو لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف عند درجات 43 الحرارة المختبرة 3-4. متوسط إنتاج األبواغ لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف تحت درجات 45 الحرارة المختبرة 3-5. متوسط قطر النمو لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف عمى المستنبتات 48 المختبرة 3-6. متوسط إنتاج األبواغ )بوغ/ مؿ( لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر مف التحضيف 49 عمى المستنبتات الغذائية المختمفة 3-7. متوسط النسبة المئوية إلنبات األبواغ الكونيدية لعزلتي الفطر B.bassiana المزروعة عمى 49 المستنبتات المختمفة بعد 24 ساعة مف التحضيف 3-8. متوسط عدد مستعمرات الفطر B.bassiana )العزلة B4( المتشكمة بعد التحضيف تحت ظروؼ 52 إضاءة مستمرة وظبلـ مدة 14 يوما ً

3-9. مدة أطوار دودة ورؽ القطف S.littoralis عمى درجة حرارة وسطية 25 °س 53

3-16. تأثير عزالت الفطر B. bassiana في يرقات العمر الثالث لدودة ورؽ القطف 57

IV

3-11. أىـ مواصفات العزلة B4 مف الفطر Beauveria bassiana 58

3-12. متوسط النسب المئوية لخروج البالغات عند معاممة عذارى S.littoralis بالمعمؽ البوغي لمفطر 58 6 B.bassiana بالتركيز 16 بوغ/ مؿ

3-13. النسب المئوية لموت بالغات دودة ورؽ القطف المعاممة بالفطر B.bassiana 66

6 3-14. تأثير العزلة B4 بالتركيز 16 بوغ/ مؿ في طور البيض لدودة ورؽ القطف بعد 4 أياـ مف المعاممة 61

6 3-15. تأثير العزلة B4 بالتركيز 16 بوغ/ مؿ في العمر اليرقي األوؿ لدودة ورؽ القطف S.littoralis 61

3-16. متوسط نسب الموت )%( التي سببتيا العزلة B4 ليرقات العمر الثالث مف دودة ورؽ القطف 62

3-17. متوسط نسب الموت )%( التي سببتيا العزلة B4 ليرقات العمر السادس مف دودة ورؽ القطف 63

6 3-18. تأثير المعمؽ البوغي لمعزلة B4 بالتركيز 16 بوغ / مؿ في األعمار اليرقية المختمفة لدودة ورؽ 64 القطف S.littoralis

3-19. نسب موت يرقات دودة ورؽ القطف بالعمر الثالث عند استخداـ عدة تراكيز مف العزلة B4 67

V

فهرس األشكال

الشكل الصفحة

1-1. تطور تشكؿ البقعتيف المميزتيف لمنوع Spodoptera littoralis بدءاً مف العمر اليرقي األوؿ وحتى 19 الثالث

1-2. الصفات المورفولوجية التمييزية لمحشرة الكاممة لدودة ورؽ القطف S.littoralis 26

2-1. التربية المخبرية ليرقات دودة الشمع الكبرى .Galleria mellonella L 25

2-2. جياز عدادة المستعمرات Schuett biotec.de count 36

2-3. التربية المخبرية لدودة ورؽ القطف S.littoralis عمى أوراؽ الخروع .Ricinus communis L 31

3-1. طبيعة نمو مستعمرات الفطر B. bassiana الكثيؼ والمنتشر عمى مستنبت PDA 38

3-2. بنية مستعمرة الفطر B.bassiana عمى مستنبت الPDA ػ 38

3-3. ارتفاع مستعمرة B.bassiana عف سطح مستنبت PDA 39

3-4. مستعمرة نموذجية لمفطر B.bassiana )العزلة B1( يبلحظ وجود سرة مركزية 39

3-5. إنتاج الصبغة الحمراء Oosporein عمى المستنبت الغذائي PDA بفعؿ الفطر B.bassiana 40

3-6. األكياس الزقية لمطور الجنسي Cordyceps bassiana 40

3-7. الخمية المولدة ألبواغ الفطر B.bassiana مع التسنيف المنشاري الزكزاؾ 41

3-8. تجمع الخبليا المولدة ألبواغ الفطر B.bassiana بشكؿ سواري 41

3-9. أعراض إصابة يرقات دودة الشمع بالفطر B.bassiana 42

3-16. تأثير درجات الحرارة )15، 26، 25، 36 و35 س°( في معدؿ نمو ميسيميوـ عزلتي الفطر 43 B4( B.bassiana و B2( في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف (LSD"0.05" = 0.24)

VI

3-11. معدؿ النمو الشعاعي الخطي )مـ/ يوـ( لمعزلة B2 خبلؿ 14 يوماً مف التحضيف عمى درجات 44 الحرارة )15، 26، 25، 36 و35 س °( 3-12. معدؿ النمو الشعاعي الخطي )مـ/ يوـ( لمعزلة B4 خبلؿ 14 يوماً مف التحضيف عمى درجات 44 الحرارة )15، 26، 25، 36 و35 س °( 3-13. النسبة المئوية إلنبات األبواغ الكونيدية لعزلتي الفطر B.bassiana بعد 24 ساعة مف التحضيف 45 عمى درجات الحرارة المختمفة LSD (P<0.05)=3.67

3-14. نمو العزلة B2 عمى درجات الحرارة المدروسة في اليوـ الرابع عشر مف التحضيف 47

3-15. نمو العزلة B4 عمى المستنبتات الغذائية المدروسة في اليوـ الرابع عشر مف التحضيف 48

3-16. تحضيف العزلة B4 تحت ظروؼ إضاءة مختمفة )اليوـ الرابع عشر( 51

3-17. طورا البيضة واليرقة لدودة ورؽ القطف S. littoralis 54

3-18. طورا العذراء والبالغة لدودة ورؽ القطف S. littoralis 55

3-19. المتطفEuplectrus. sp ؿ متطفؿ خارجي تجميعي مف غشائية األجنحة فصيمة Eulophidae 55 عمى يرقات دودة ورؽ القطف S.littoralis

3-26. متطفؿ داخمي عمى يرقات دودة ورؽ القطف S.littoralis 56

3-21. عذراء متطفCharops sp. ؿ مف غشائية األجنحة فصيمة Ichneumonidae عمى يرقات 56 األعمار األولى لدودة ورؽ القطف S. littoralis

3-22. أعراض إصابة عذارى S.littoralis بالفطر B.bassiana وتشوه البالغات التي نجحت في الخروج 59

3-23. أعراض إصابة يرقات العمر األوؿ لدودة ورؽ القطف بالفطر B.bassiana 61

3-24. العبلقة بيف متوسط نسب الموت )%( التي سببتيا العزلة B4 ليرقات العمر الثالث مف دودة ورؽ 63 القطف والزمف

3-25. تحميؿ قيـ بروبيت probit لتجربة تطبيؽ الفطر عمى العمر اليرقي األوؿ 64

3-26. تحميؿ قيـ بروبيت probit لتجربة تطبيؽ الفطر عمى العمر اليرقي الثالث 64

3-27. تحميؿ قيـ بروبيت probit لتجربة تطبيؽ الفطر عمى العمر اليرقي السادس 64

VII

3-28. نسبة الموت )%( في اليوـ األخير لكؿ طور مف أطوار دودة ورؽ القطف بعد المعاممة بالفطر 66 B.bassiana

3-29. نسب موت يرقات دودة ورؽ القطف بالعمر الثالث عند استخداـ عدة تراكيز مف العزلة B4 67

VIII

أهم المصطمحات المستخدمة في البحث

المصطمح العربي المصطمح اإلنكميزي مضاد حيوي Antimicrobial مبيد حشري حيوي Bioinsecticide عوامؿ حيوية Biotic factor نمط حيوي Biotype أبواغ ببلستية )أبواغ متبرعمة( Blastospores بنية طباشرية Calcinetto صيانة Conservation أنواع مخفية Cryptic species متعايش داخؿ النبات Endophytic تعزيز Enhancement إنبات Germination تمقيح Inoculation إدخاIntroduction ؿ غمر Inundation تصبغ الميبلنيف Melanization Parasitoids أشباه طفيميات )ُمتطف بلت( ممرضات Pathogens إمراضية Pathogenicity اختراPenetration ؽ Polyandrous متع د األزواج )تتزاوج مع أكثر مف فرد خبلؿ حياتيا( Saprophytic ر م ي الجزء المظمـ مف اليوـ Scotophase غير ممقحة Unmated شراسة )ضراوة( Virulence مرض الموسكارديف األبيض White muscardine الطور الشبيو بالخمائر Yeast-like phase

IX

جدول الرموز المستخدمة في البحث

المصطمح العربي المصطمح اإلنكميزي الرمز المركز العالمي لمزراعة والعموـ The Centre for Agriculture and Bioscience CABI International الحيوية مستنبت تشابCDA Czapeck Dox Agar ؾ كربوكسي ميتيؿ السيميموز CMC Carboxymethyl Cellulose Department for Environment, Food and Rural DEFRA قسـ البيئة، الغذاء والشؤوف الريفية Affairs منظمة األمف الغذائي األوروبية EFSA European Food Safety Authority الفطور الممرضة لمحشرات EPF Entomopathogenic Fungi طريقة الجاليريا كطعـ )المصيدة( GBM Galleria Bait Method الفيروسات الحبيبية GV Granuloviruses اإلدارة المتكاممة لآلفات IPM Integrated Pest Management التركيز القاتؿ لػ 56% مف األفراد LC50 Lethal Concentration 50% أقؿ فرؽ معنوي LSD Least Significant Differences

الوقت القاتؿ لػ 56% مف األفراد LT50 Lethal Time 50% الفيروسات متعددة الوجوه النووية NPV Nucleopolyhedroviruses ديكستروز آجار البطاطا PDA Potato Dextrose Agar سكروز آجار البطاطا PSA Potato Saccharose Agar االنحراؼ المعياري SD Standard Deviation مستنبت سابورد مع الخميرة SDAY Sabouraud s Dextrose Yeast Agar األشعة فوؽ البنفسجية UVB Ultra Violet B B

X

الممخص Beauveria bassiana أُج ر ي البحث بيدؼ دراسة قدرة الفطر اإلمراضية وشراسة عزالتو عمى األطوار المختمفة لدودة ورؽ القطف Spodoptera littoralis، ودراسة بعض الشروط المناسبة لنمو الفطر B.bassiana مخبرياً. B.bassiana ُع ز ؿ الفطر مف ترب نظـ طبيعية وزراعية في الساحؿ السوري بطريقة المصيدة (Galleria Bait Method)، وتـ الحصوؿ عمى ست عزالت مختمفة بنسبة ظيور بمغت 12.24%، مع تردد أكبر في األنظمة الطبيعية )أربع عزالت مف األنظمة الطبيعية مقابؿ عزلتيف مف األنظمة الزراعية(. Galleria اخت ُبرت القدرة اإلمراضية ليذه العزالت عمى يرقات العمر األخير لدودة الشمع mellonella بطريقة الدحرجة، أبدت العزالت الست شراسة عالية وأدت إلى نسبة موت 166% بعد -3 5 أياـ مف المعاممة. B.bassiana ُد ر ست بعض الشروط الضرورية لنمو عزلتيف مف الفطر مخبرياً، فتـ اختبار تأثير عدة درجات حرارة ىي: 15، 26، 25، 36 و35 س°، في نمو الفطر وقدرتو عمى إنتاج األبواغ الكونيدية وانبات ىذه األبواغ، تبيف أف درجة الح اررة 25 س° كانت المثمى لنمو الفطر B.bassiana وتبوغو وانباتو، مع قدرتو عمى النمو والتبوغ ضمف المجاؿ الح ارري 15-36 س°، وفشمو في النمو وانتاج األبواغ عمى الدرجة 35 س°، وكاف النمو الشعاعي لممستعمرة مف اليوـ الثالث وحتى الرابع عشر مف النمط الخطي. 6 بمغ أعمى إنتاج لؤلبواغ 15.3 و 26.2 )× 16( بوغ / مؿ لمعزلتيف B4 و B2، عمى التوالي عند الدرجة 25 س°، ووصمت نسب اإلنبات عند ىذه الدرجة إلى 81.4 و 78.5% عمى التوالي، انخفض كؿ مف النمو والتبوغ واإلنبات بشكؿ ممحوظ عمى درجة الحرارة 15 س°، فبمغ متوسط إنتاج األبواغ عند ىذه 6 الدرجة 1.5 و 1.1 )× 16( بوغ / مؿ لمعزلتيف B4 و B2، عمى التوالي، وكانت نسبة اإلنبات 56.2 و48.7 % عمى التوالي. PDA B.bassiana كما ُد رس في ىذا البحث تأثير مستنبتات غذائية مختمفة في نمو الفطر ، وىي ) ، PSA، دقيؽ القمح، دقيؽ الذرة، آجار الرز ومستنبت السيميموز CMC(. بينت النتائج أف مستنبت PDA كاف األفضؿ لنمو الفطر وانتاج األبواغ تبله دقيؽ الذرة، مع مبلحظة تم كف الفطر مف النمو وانتاج األبواغ عمى جميع المستنبتات المدروسة باستثناء مستنبت السيميموز، م ما يفترض عدـ قدرة الفطر عمى االستفادة مف ىذا المستنبت والنمو. وصؿ أعمى معدؿ لنمو العزلة B2 عمى دقيؽ الذرة إلى 51.9 مـ تبله 49.1 مـ عمى PDA، بينما 6 كانت أعمى قيمة إلنتاج األبواغ عمى مستنبت PDA، بمغت 26.5 و25 )× 16( بوغ /مؿ لمعزلتيف B4 6 و B2، عمى التوالي، تبله بفارؽ معنوي 5.56 و16.2 )× 16( بوغ /مؿ عمى مستنبت دقيؽ الذرة عمى التوالي، أما أعمى إنبات بمغ 85.2 و84.5 % عمى مستنبت PDA لمعزلتيف B4 و B2 عمى التوالي. XI

B.bassiana ت مت مقارنة نمو الفطر عند تحضينو في ظبلـ كمي أو تحت ظروؼ إضاءة مستمرة مف خبلؿ عدد المستعمرات المتشكمة في كؿ طبؽ، وتبيف بأف نمو الفطر كاف أفضؿ عند تحضينو في ظروؼ الظبلـ الكمي مع متوسط عدد مستعمرات 192.2 ± 28.58 مقابؿ 32 ± 10.15 مستعمرة/ طبؽ عند تحضينو تحت ظروؼ اإلضاءة المستمرة.

ُ رب يت دودة ورؽ القطف مخبرياً، واختبرت ش ارسة العزالت الفطرية عمى يرقات العمر الثالث بطريقة الدحرجة الختيار العزلة األكثر ش ارسة لمتابعة الد ارسة عمييا، وبي نت النتائج شراسة عالية لجميع العزالت 166 75 المختبرة، تراوحت نسبة الموت في اليوـ الخامس لمتجربة بيف - %. ُح س ب الزمف القاتؿ النصفي 2.5 LT B4 LT 50 وت ـ اختيار العزلة كونيا األسرع في إحداث القتؿ حيث بمغ 50 ليا يوماً. 6 أُج ري في ىذا البحث اختبار تأثير العزلة B4 بالتركيز 16 بوغ/ مؿ في كافة أطوار دودة ورؽ القطف، وأظيرت النتائج قدرة الفطر عمى مياجمة األطوار المختبرة، وحساسية عالية ليرقات العمريف األوؿ والثالث مع نسبة موت وصمت إلى 166% في اليوـ الثالث والخامس لمتجربة عمى التوالي. أبدى طوري البيض والعذارى حساسية تجاه المعمؽ البوغي لمعزلة المختبرة مع نسب موت بمغت )83 و 58%( عمى التوالي. وكانت نسبة موت البالغات 32%، بينما أظيرت يرقات العمر السادس حساسيةً منخفضة لئلصابة الفطرية مع نسبة موت لـ تتجاوز %18. 164 166 168 B4 ت مت مقارنة تأثير ع دة تراكيز مف العزلة ) ، ، و بوغ / مؿ( في العمر اليرقي الثالث، 166 وأ دت جميع التراكيز المدروسة إلى نسبة موت % مع تف ؽ والتركيز األعمى وكاف األسرع في إحداث 8 القتؿ. تزايد الزمف القاتؿ النصفي LT50 مع انخفاض التركيز، فبينما كاف 2.27 يوماً عند التركيز 16 4 بوغ / مؿ بمغ 3.99 يوماً عند التركيز 16 بوغ / مؿ. 6 3 بمغت قيمة التركيز القاتؿ النصفي LC50 3× 16 بوغ/مؿ، في حيف بمغت قيمة LC90 12× 10 بوغ/مؿ.

الكممات المفتاحية: S.littoralis ،B.bassiana، طريقة الجاليريا كطعـ، الشراسة، اإلمراضية، الحساسية، المكافحة الحيوية.

XII

الفصؿ األوؿ

المقدمة:

ت عد الزراعة مف أىـ المصادر األساسية لمدخؿ في سكرية، كمع التضخـ السكاني كارتفاع الطمب عمى المنتجات الزراعية لبلستيبلؾ كالتصدير، تزايد االىتماـ بالتكثيؼ الزراعي كزيادة مردكد كحدة المساحة كتحسيف اإلنتاج، بالتالي أصبحت مكافحة اآلفات الياجس األساسي لممزارعيف كالباحثيف عمى السكاء. Spodoptera littoralis (Boisd.) ت مث ؿ دكدة كرؽ القطف إحدل أىـ اآلفات الحشرية متعددة العكائؿ التي يفرض كجكدىا أكلكية لمكافحتيا، حيث تش كؿ يرقاتيا آفة خطيرة ألنكاع كثيرة مف المحاصيؿ المزركعة (Abd-El-Mageed and Elgohary, 2006). تياجـ ىذه الحشرة العديد مف المحاصيؿ كالخضراكات في الحقكؿ المكشكفة كالبيكت المحمية في الساحؿ السكرم، كما تياجـ محصكؿ القطف في مناطؽ زراعتو، كتسبب ضر انر كبي انر لممحاصيؿ العائمة ككنيا تتغذل عمى األكراؽ، كقد تسبب تعرية النبات بالكامؿ في حاؿ اإلصابة الشديدة، كما تقكـ بالتغذية عمى الثمار كالبراعـ كالحفر ضمف األفرع ,EFSA) (2015، كىي مف اآلفات الخطيرة عالميان (DEFRA, 2006). S.littoralis أ دت سرعة تكاثر ، كخصكبتيا العالية، كتع دد أجياليا إلى االستخداـ المتكرر كالعشكائي لممبيدات إلبقاء مجتمعاتيا دكف مستكل الضرر االقتصادم. قاد ىذا بدكره إلى ظيكر سبلالت مقاكمة مف اآلفة لممبيدات الكيميائية بالتالي عدـ جدكل المكافحة الكيميائية في كثير مف األحياف Aydin and) .Gürkan, 2006) مع تزايد الحاجة لممكافحة كتكرار استخداـ المبيدات، أصبحت المبيدات مشكمة ن أكثر منيا ح بل ن، كأصب (Huffaker, 1975) استخداميا بالحدكد الدنيا متطم با ن أساسيان ، كذلؾ لسمي تيا العالية عمى البيئة كاألحياء غير المستيدفة بما فييا اإلنساف كاألعداء الطبيعية كالممق حات (Relyea, 2009). بسبب كؿ ما سبؽ، ظيرت حاجة مم ح ة لتطكير عناصر مكافحة حيكية آمنة بيئيان الستخداميا في إدارة ىذه اآلفة (Hosny et al., 1986). كفي ىذا المجاؿ برز مؤخ انر دكر الممرضات Pathogens مف (Lacey, 2012) فطكر كنيماتكدا كبكتريا كأكليات كفيركسات . ت عد الفطكر الممرضة لمحشرات EPF) Entomopathogenic Fungi) إحدل أىـ ىذه المجمكعات، فالفطر يصؿ إلى ىيمكلمؼ الحشرة خبلؿ الكيكتيكؿ، بينما يجب أف تمر اإلصابات البكتيرية كالفيركسية عبر الجياز اليضمي كجدار القناة اليضمية (Burges, 1981; Ortiz- Uraquiza and Keyhani, 2013). كباإلضافة لقدرتيا عمى اختراؽ جدار جسـ عكائميا، تمتمؾ الفطكر الممرضة لمحش ارت مي ازت كاضحة مقارنةن مع الممرضات الحشرية األخرل، منذ ظيرت قدرتيا عمى مياجمة كؿ مراحؿ تطكر الحشرات بما فييا طكرم البيضة كالعذراء (Ferron, 1978).

صفحة 1 مف 91

تنتشر الفطكر الممرضة لمحشرات بشكؿ كاسع في العديد مف النظـ البيئية الزراعية كالمائية كبيئة

الغابات كالمراعي كغيرىا، كتشك ؿ أعدا نء طبيعيةن لمحش ارت كاألكاركسات، كتسيـ في تنظيـ مجتمعاتيا في (Eilenberg et al., 2001) البيئة ، كيذكر أف جميع رتب الحش ارت ح ساسة لمممرضات الفطرية (Roberts, 1989). تظير الفطكر الممرضة لمحشرات في كؿ المكاطف التي تكجد فييا الحشرات (Augustyniuk-Kram, 2011). يعكد تاريخ دراسة ىذه المجمكعة مف الفطكر إلى عاـ 1831ـ حيث Agostino Bassi برىف الباحث بأف الفطكر تسب ب أم ارضان لمحش ارت، كاعت ب ر مؤسس عمـ أمراض الحشرات Insect pathology، كفي عاـ 1871ـ أثبت الباحث Metchnikoff بأف الفطكر تياجـ اآلفات الحشرية في التربة كت ستعمؿ لمكافحتيا، كبذلؾ فت الباب الستخداميا في المكافحة الحيكية كاالنتقاؿ بيا مف مرحمة المبلحظات كالتجريب إلى التطبيؽ التكنكلكجي (Lord, 2005). يكجد تقريبا ن أكثر مف 711 نكعان مف الفطكر الممرضة لمحشرات تنتمي لػ 111 جنسا ن ,Roberts) (1989، كأكثرىا استخدامان عمى نحك عالمي النكع .Beauveria bassiana (Bals.) Vuil نظ انر النتشاره الطبيعي كالجغرافي الكاسع، كمداه العكائمي الكبير، كفاعميتو العالية ضد العديد مف الرتب الحشرية .(Meyling and Eilenberg, 2007)

أىمية البحث وأىدافو:

تأتي أىمية البحث كمبرراتو مف النقاط التالية3  التكجو العالمي لتقميؿ استخداـ المبيدات الكيميائية كالحد مف تأثيراتيا الضارة في البيئة بمختمؼ مككناتيا.  فشؿ المكافحة الكيميائية في معظـ الحاالت، فاآلفة تط كر بشكؿ مستمر سبلالت مقاكمة لكثير مف المركبات الكيميائية.  نجاح الفطكر الممرضة لمحشرات في مكافحة العديد مف حشرات حرشفية األجنحة بكفاءة عالية، كتزايداالىتماـ بإدخاؿ الممرضات في برامج اإلدارة المتكاممة لآلفات IPM.  أىمية دراسة عزالت محمية مف الفطر Beauveria bassiana لكجكدىا الطبيعي محميا ن كتأقمميا مع الظركؼ البيئية السائدة.  ضركرة البحث باستمرار عف عزالت جديدة مف الفطر Beauveria bassiana نظ انر لمتنكع الكراثيالكبير لسبلالتو كاختبلؼ الشراسة فيما بينيا.  األىمية االقتصادية لدكدة كرؽ القطف كخطكرتيا عمى الخضركات المزركعة في منطقة الساحؿ السكرم كطبيعة الضرر الذم تسببو.

صفحة 2 مف 91

أىداؼ البحث: ىدؼ البحث إلى3 1. عزؿ الفطر Beauveria bassiana مف التربة كد ارسة بعض شركط النمك المبلئمة لو مخبريان. 2. مقارنة تأثير عدة عزالت فطرية مف النكع Beauveria bassiana عمى دكدة كرؽ القطف Spodoptera littoralis كاختيار العزلة األشد إمراضية لمتابعة الدراسة عمييا. 3. اختبار تأثير العزلة المختارة عمى بعض أطكار دكدة كرؽ القطف Spodoptera littoralis لتحديد الطكر األكثر قابمية لئلصابة بالفطر. 4. اختبار عدد مف التراكيز المختمفة لمعزلة الفطرية عمى الطكر األكثر قابمية لئلصابة مف اآلفة كذلؾ لتحديد التركيز القاتؿ النصفي.

صفحة 3 مف 91

الدراسة المرجعية:

ظير االىتماـ العالمي باستخداـ الفطكر في إدارة اآلفات الحشرية كاضحا ن مف خبلؿ العدد الكبير لممستحض ارت التجارية التي تحكم األبكاغ الفطرية كمادة فع الة، كتط كرت المكافحة الحيكية باستخداـ الفطكر بسرعة مع بركز دكرىا في زيادة إنتاجية النبات كأمانيا البيئي (Butt et al., 2001).

1. الفطر Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin: 1 1 22 Beauveria 49 عرؼ نكعان ص ن فت ضمف الجنس ، منيا نكعان مستخدـ حاليا ن )الجدكؿ - (، B.bassiana أى ميا عمى اإلطبلؽ النكع ، الذم يعد كاحدان مف أكثر الفطكر الممرضة لمحش ارت التي تصادؼ عالميا ن (Vega and Blackwell, 2005).

الجدوؿ )1-1(: أنواع الجنس Beauveria المستخدمة في المكافحة الحيوية )نقالً عف Vega and Blackwell, 2005 و )Humber et al., 2011

النوع العائؿ الرئيس النوع العائؿ الرئيس Col.: Lepidoptera, Coleoptera, B.sungii B. bassiana Chrysomelidae Homoptera, Orthoptera Army worms, B.tenella Melonella mellonella B.brongniartii pepper weevil Col.: Cerambycidae Coleoptera B.velata B.amorpha Hom.: Cicadellidae Ostrinia nubilalis B.sulfurescens Coleoptera B.vermiconia Ortho: Gryllacrididae B.stephanoderi B.caledonica - Col.: Scolytidae - B.shiotae Col.: Scarabaeidae B.asiatica - B.globulifera Ortho: Acrididae B.australis - B.effusa Hom.: Delphacidae B.kipukae - B.doryphorae Col.: Cerambycidae B.malawiensis Acari: Ixodes scapularis Hym.: Vespidae - B.densa Lepido: Lymantriidae, B.pseudobassiana Tortricidae Thysano: Thripidae Acari: Varroa destructor B.alba B.varroae - Col.: Curculionidae

1-1. التسمية والتصنيؼ:

قاـ الباحث Balsamo Crivelli بتسمية الفطر رسميان باسـ Botrytis bassiana كذلؾ عاـ 1835ـ كتقدير لمباحث Agostino Bassi الذم درس ىذا الفطر ألكؿ مرة، ككاف الباحث Bassi قد

صفحة 4 مف 91

Vuillemin Botrytis paradoxa أعطى الفطر اسـ ، بعد ذلؾ كص ؼ الفطر مف قبؿ الباحث )1912ـ( كأ تب ع رسميان لمجنس Beauveria )نقبلن عف (Vega and Blackwell, 2005)(. أ طم ؽ عمى المرض الذم يتسبب عف ىذا الفطر مصطم المكسكارديف األبيض (White Muscardine)، كىك أكؿ مرض عمى الحشرات ظير أنو يتسبب بكساطة كائف حي دقيؽ، يعكد سبب استخداـ ىذا المصطم إلى المغة اإليطالية (moscardino) كالتي تعني ثمرة العنب أك الكمثرل كمثيبلتيا مف الفاكية، حيث أف (Tanada and Kaya, 1993) الفطر بعد أف يقتؿ الحشرة يغم فيا خارجيان كتبدك كالثمرة أك حب ة الممب س ، كيعتقد آخركف بأف المصطم moscardino كاف معركفا ن باإليطالية بأنو mal del segno أم عبلمة المرض كالتي تدؿ عمى البنية الطباشيرية calcinetto لجثث الحش ارت المغم فة بأبكاغ الفطر Vega and) .Blackwell, 2005) B.bassiana نظ انر لككف يتكاثر بإنتاج األبكاغ الككنيدية، كض ع ضمف تحت شعبة الفطكر الناقصة Deuteromycotina كصؼ الفطكر الييفية Hyphomycetes )رتبة Moniliales كفصيمة Barron, 1972; Ferron, 1978; Tanada and Kaya, 1993) )Moniliaceae)، كالفطر .B bassiana ىك الطكر الناقص لمفطر الزق ي Sung et al., 2007) Cordyceps bassiana) الذم (Meng et al., 2014; Dong ي عد مف الفطكر ذات األىمية الطبية كالعبلجية في العديد مف بمداف آسيا (et al., 2015. كفي الكاقع فإف Cordyceps bassiana لـ يظير حتى اآلف إال في آسيا دكف أسباب كاضحة لذلVega and Blackwell, 2005; Dong et al., 2015) ؾ). Ascomycota B.bassiana ن قؿ الفطر مؤخ انر إلى شعبة الفطكر الزق ية )تحت شعبة Pezizomycotina(، كذلؾ بعد اعتماد التصنيؼ القائـ عمى البيكلكجيا الجزيئية عاـ 2116، ككضع ضمف صSordariomycetes ؼ، رتبة Hypocreales فصيمة Humber, Cordycipitaceae) .2008; Humber, 2012)

1-2. المدى العوائمي واالنتشار الطبيعي: B. bassiana النكع فطر ممرض لمفصميات األرجؿ، ظير أيضان كفطر ر مي، كفطر متعايش مع 711 (Vega et al., 2008) endophytic النبات . س ج ؿ كعدك طبيعي ألكثر مف نكعان مف مفصميات (Hall and (Butt et al., 2001) األرجؿ تض منت حشرات عديدة ذات أىمية زراعية كطبية (Papierok, 1982. باإلضافة المتبلكو مجاال ن عكائميا ن كاسعا ن، فيك يمتمؾ مجاال ن جغرافيا ن كاسعا ن ا نكانتشار 2119 Meyling (Roberts, 1989) عالميا ن . بي ف كآخركف ) ( أنو مف األنكاع المسيطرة في أكركبا، كما ىك في آسيا، كيظير في إفريقيا كفي نصؼ الكرة الغربي (Rehner and Buckley ,2005). Fusarium B. bassiana ي ذكر بأ ف لمنكع دك انر بار انز في مكافحة ممرضات النبات الفطرية كمنيا ، Pythium ك Griffin, 2007; Ownley et al., 2008; Ownley et al., Rhizoctonia)

صفحة 5 مف 91

B. bassiana 2010) . كما ت ـ اكتشاؼ إمراضية الفطر كفعاليتو ضد نيماتكدا تعقد الجذكر Liu et al., 2008; Tranier et al., 2014) Meloidogyne)، كأنكاع أخرل مف النيماتكدا مثؿ Heterodera كZhao et al., 2013) Aphelenchoides). يكجد الفطر B. bassiana في الطبيعة بالحاالت التالية3  التربة: يظير النكع B. bassiana في التربة كما الفطكر الرمية ,Tanada and Kaya) Hypocreales 1993) ، كبيئة التربة عادةن ىي مكقع العزؿ المعركؼ كالتقميدم لفطكر رتبة الممرضة لمحشرات (Keller and Zimmerman, 1989; Hajek, 1997). كقد أشار Gottwald B. bassiana 1984 Tedders ك ) ( إلى أف النكع متكي ؼ بشكؿ جيد لمبقاء في التربة إما كامنان عمى شكؿ أبكاغ ككنيدية، أك ميسيميكـ رمي التغذية.  الحشرات: مف المحتمؿ أف أم حشرة مكجكدة في المناطؽ المعتدلة تش كؿ عائبلن طبيعيان لمنكع .B bassiana ، كتنتشر الفطكر الممرضة لمحش ارت مف خبلؿ العكائؿ الحشرية المصابة الحي ة التي تنتقؿ كتمكت في مكاف آخر غير الذم أصيبت فيو (Hajek, 1997). تحدث األكبئة الطبيعية بيذه المجمكعة مف الفطكر في المجتمعات الحقمية لمحشرات كتككف ىامة في التنظيـ الطبيعي لآلفات الحشرية Butt et) (Lymantria B. bassiana al., 2001) . كقد ع زؿ النكع مف عذارل كيرقات جادكب العذر (dispar، مف بالغات سكسة النخيؿ الحمراء (Rhynchophorus ferrugineus) كحفار الساؽ ذك القركف الطكيمة (Cerambycidae)، كمف اليرقات المشتية لدكدة ثمار التفاح (Cydia pomonella) في الساحؿ السكرم )أحمد كآخركف، 2111؛ حاج حسف، 2011(. B. bassiana  مرافؽ لمنبات: تبي ف أف الفطر لو القدرة عمى الدخكؿ في التفاعؿ فطر- نبات كلو (Ownley et al., 2010) endophytic عبلقة تعايشية مع النبات تؤ مف حماية النبات مف الحشرات كالممرضات الفطرية، حيث يقكـ الفطر باختراؽ أكراؽ النبات كالتضاعؼ داخمو كيصؿ إلى أنسجة الحزـ (Akello et al., 2007; Meyling and Eilenberg, 2007; Dara, 2016) الكعائية . كي ستخدـ حاليان مستحض ارت حبيبية كسائمة مف الفطر ت طب ؽ عمى النبات بغرض الدخكؿ في ىذه العبلقة التعايشية .(Bruck, 2001)

1-3. دورة الحياة:

تمر دكرة حياة الفطر B.bassiana بطكريف3 طكر التطف ؿ )اإلمراضية( كيمتد مف عدكل العائؿ إلى (Augustyniuk-Kram, 2011) المكت، كالطكر الر مي )بعد مكت العائؿ( . 1-3-1- طور التطف ؿ )اإلمراضية( Parasitic Phase: يمر الفطر خبلؿ ىذا الطكر بأربع مراحؿ ىي3  مرحمة اتصاؿ البكغة بالعائؿ )االلتصاؽ(

صفحة 6 مف 91

 مرحمة إنبات البكغة كتككيف تراكيب اإلصابة  مرحمة اختراؽ كيكتيكؿ الحشرة  التكاثر ضمف جسـ الحشرة، كاإلنبات الخارجي لؤلبكاغ إذا كانت الظركؼ البيئية مناسبة .(Parker et al., 2000) أ- مرحمة االلتصاؽ بالعائؿ واحداث العدوى Adhesion to the host cuticle: (Parker et al., 2000) B. bassiana ت ع د البكغة الككنيدية ىي كحدة العدكل عند الفطر . تتـ العدكل باالختراؽ المباشر لؤلبكاغ المكجكدة عمى سط النبات أك جثث الحشرات أك التربة عف طريؽ الكيكتيكؿ الخارجي (Augustyniuk-Kram, 2011)، فالبكغة الككنيدية تمتصؽ بقكة إلى سط الكيكتيكؿ، كي عتق د أ ف ىذا االلتصاؽ غير نكعي خبلفان لمفطكر األخرل الممرضة لمحش ارت، كىك أحد أسباب المدل العكائمي الكاسع ليذا الفطر (Butt et al., 2001). تمتمؾ البكغة الممتصقة عمى طبقتيا الخارجية تركيبات صكلجانية الشكؿ قصيرة (rodlets)، تقكـ ىذه التركيبات بحمايتيا في حاؿ نقص الغذاء، فيي مغطاة بطبقة مؤل فة مف بركتينات كليبكبركتينات كغميككبركتينات أك سكريات متعددة، باإلضافة إلى دكرىا األساسي في المساعدة عمى االلتصاؽ إلى كيكتيكؿ الحشرة مف خبلؿ من البكغة خاصي ة الكره لمماء، تقكـ ىذه التركيبات بربط األبكاغ الككنيدية مع كيكتيكؿ الحشرة العائؿ بركابط دىنية ككيربائية ساكنة (Ferron, 1978; Parker et al., 2000). ب- اإلنبات واالختراGermination and Penetration ؽ: يمي مرحمة االلتصاؽ إنبات البكغة كاالختراؽ، يعتمد إنبات األبكاغ عمى الكيكتيكؿ بشكؿ أساسي عمى درجة الحرارة كالرطكبة، تتراكح الحرارة المثمى لئلنبات بيف 23 ك 25 س°، كيحتاج رطكبة أكثر مف %92 (Burges, 1981)، كيعتمد بدرجة أقؿ عمى شركط اإلضاءة في البيئة. تساعد المكاد المغذية المكجكدة عمى سط التركيبات الصكلجانية المحيطة بالبكغة في عممية اإلنبات، مثؿ الغمكككز Glucose، ك N- أسيتيؿ غمكككز أميف N- Acetylglucosamine، ىذه المكاد قد تككف مكجكدة أيضان عمى سط كيكتيكؿ بعض الحش ارت، مثؿ األحماض األمينية aminoacids كغيرىا Heliothis (Helicoverpa) zea مف المكاد التي كج دت عمى سط يرقة دكدة عرانيس الذرة . كما يرتبط نجاح اإلنبات بعكامؿ أخرل متعم قة بالفطر كالعائؿ، كمنيا3 طكؿ فترة اإلنبات بغض النظر عف النسبة المئكية لئلنبات، شراسة الفطر كحساسية العائؿ. بينما يعتمد االختراؽ بشكؿ أساسي عمى خكاص الكيكتيكؿ كسماكتو كمحتكاه مف السيكميركتيف، ككجكد مكاد مضادة أك مغذية لمفطكر Tanada and) .Kaya, 1993) تسمؾ أبكاغ الفطر في إنباتيا إحدل الطرائؽ التالية3  االختراؽ المباشر كالفكرم.  نمك عشكائي لمميسيميكـ بدكف اختراؽ.

صفحة 7 مف 91

 نمك محدكد لمميسيميكـ يميو االختراؽ النيائي. كقد اقتضى التنكيو إلى ىذا السمكؾ الرتباطو المباشر بش ارسة الفطر، فالعزالت التي ت بدم نمك مشيجي ممتد قبؿ أف تقكـ باالختراؽ تككف ذات شراسة منخفضة، بينما تمؾ التي تقكـ باالختراؽ السريع فإنيا مف السبلالت الشرسة. تستطيع أنبكبة اإلنبات المتشكمة الدخكؿ مف كؿ أج ازء الحشرة تقريبان باستثناء كبسكلة الرأس فإنيا ال تستطيع اختراقيا (Bruck, 2001). يحدث االختراؽ بتكامؿ عكامؿ ميكانيكية كانزيمية؛ تتمث ؿ القكل الميكانيكية )الفيزيائية( بالضغط الذم تحدثو الق مة المستدقة لمييفا الغازية )أنبكبة اإلنبات( كالذم يساىـ في تحطيـ طبقات الكيكتيكؿ. أما العكامؿ اإلنزيمية فتتمثؿ باإلنزيمات التي ينتجيا الفطر كالتي تتكاجد في أنبكبة اإلنبات (Augustyniuk-Kram, 2011) . بي نت دراسات مخبرية أف التحميؿ اإلنزيمي لغبلؼ الحشرة يتـ بتعاقب إنتاج إنزيمات الميباز lipase، البركتياز ، protease األمينك بيبتيداز aminopeptidase كالكيتيناز .chitinase

يبدأ الميباز، كىك اإلنزيـ األكؿ ال مصن ع، بتحطيـ األلكينات طكيمة السمسمة كالدىكف الدسمة المك كنة epicuticle لطبقة الكيكتيكؿ السطحي لتصب مكاد أكلية مغذية، حالما تتحط ـ ىذه الطبقة ي نت ج الفطر كميات كبيرة مف البركتياز (Pr1) كىك اإلنزيـ األساسي المحط ـ لمكيكتيكؿ، فيقكـ بتحطيـ المكاد البركتينية procuticle المكجكدة في طبقة الكيكتيكؿ األكلي ، كي عد إنزيـ البركتياز مؤ شر عمى الشراسة كاإلمراضية لمفطر كبدكف إنتاجو ال يمكف لمعدكل أف تحدث. ثـ ي نتج األمينك ببتيداز الذم يحطـ البركتينات القابمة لمذكباف إلى أحماض أمينية aminoacides )كىي مكاد مغذية لمفطر سبؽ التنكيو ليا(، كفي المرحمة (de Carolina Sánchez-Pérez et األخيرة مف التحميؿ اإلنزيمي ي نتج الكيتيناز الذم يحطـ الكيتيف .al., 2014) كما يمكف لمفطر B.bassiana أف يدخؿ إلى تجكيؼ الحشرة عبر فتحات الجسـ الطبيعية مثؿ الفتحات التنفسية كفتحة الفـ (Ortiz- Uraquiza and Keyhani, 2013). جػ- التضاعؼ داخؿ تجويؼ الحشرة وانتاج السموـ: حالما يصؿ الفطر إلى ىيمكلمؼ الحشرة ينمك كأجساـ ىيفية، كينتج أبكاغا ن ببلستية Blastospores (Butt et al., 2001) تتكاثر بالتبرعـ داخؿ تجكيؼ الجسـ ، حيث ي س مى في ىذه المرحمة الطكر الشبيو بالخمائر Wan, 2003; Khan et al., 2012) yeast- like phase)، يتش كؿ ىذا الطكر في البيئات السائمة فقط أم في ىيمكلمؼ الحشرة كفي البيئات الصنعية السائمة، لكف Alves كآخركف )2112( تم كنكا مف إنتاجو عمى بيئة صمبة خاصة. pH يسب ب دخكؿ الفطر إلى داخؿ الحشرة تغي ا نر في الييمكلمؼ كزيادة في البركتينات التي ال تمبث أف تتناقص بعد تكق ؼ الحشرة عف التغذية (Tanada and Kaya, 1993).

صفحة 8 مف 91

B.bassiana ي نت ج الفطر بالتزامف مع النمك الييفي، نكاتج استقبلب ثانكية متعددة، أى ميا السمكـ التي (Vimala Devi and تقكـ بدكر مضادات بكتيرية كفطرية كحشرية ت حب ط دفاعات الحشرة (Duraimurugan, 2013، كمف ىذه السمكـ مجمكعتاف ىما Beauverolides ك3Cyclosporins (Boucias antimicrobial Beauvericin مف المجمكعة األكلى، تبي ف أنو يمعب دكر مضاد حيكم (et al., 1988، كبرىف Calo كآخركف )2113( بأف المركب beauvericin ساـ ليرقات العديد مف الحشرات مف رتب مختمفة، Bassianolide مف نفس المجمكعة، ساـ ليرقات حرشفية األجنحة، باإلضافة إلى سمكـ أخرل مثؿ الIsarolides ػ ك Boucias et al., 1988) Oxalic acid). Oosporein كما ي نت ج الفطر صبغات كمستقمبات ثانكية أخرل، كمنيا مركب كىك مضاد حيكم أحمر (Burges, 1981) المكف يقكـ بصبغ الجثث كيكقؼ البكتريا ، ت نت ج ىذه الصبغة الحمراء في حاالت قميمة (Vega and Blackwell, 2005) عمى المستنبتات الغذائية ، كما ي نت ج صبغتيف بمكف أصفر ىما bassianin كtenellin، ىما المسؤكلتاف عف المكف األصفر الذم يظير عند زراعة الفطر B.bassiana عمى المستنبتات الغذائية (Wat et al., 1977). يحدث مكت الحشرة المصابة نتيجة تضافر ع دة عكامؿ كىي3 استنزاؼ الغذاء، حدكث إعاقة )انسداد فيزيكلكجي( نتيجة التكاثر العددم الكبير لمفطر، السمكـ، انخفاض عدد خبليا ىيمكلمؼ الحشرة كتعفف الدـ البكتيرم الذم قد يترافؽ مع دخكؿ الفطر (Boucias et al., 1988; Butt et al., 2001). Saprophytic Phase 2 3 1 - - - الطور الرم ي : يحدد مكت العائؿ نياية المرحمة المتطفمة مف الفطر، بعد ىذه المرحمة ينمك الميسيمكـ رمي ان خبلؿ األنسجة (Burges, 1981). كعند تكفر الشركط المناسبة تنبثؽ الييفات كالحكامؿ الككنيدية مف الجثث كتتشكؿ األبكاغ الككنيدية بغزارة لتغمؼ الحشرة خارجيا ن، يظير ىذا النمك في البداية في المناطؽ الرقيقة مف جسـ العائؿ )بيف الحمقات( (Tanada and Kaya, 1993). بغياب العائؿ الحشرم تبدأ مرحمة جديدة في حياة الفطر B. bassiana في التربة بانتظار عائؿ جديد، كفي ىذه المرحمة يككف التكاثر كاالنتشار محدكداف لعدـ قدرة الفطر عمى منافسة الفطكر الرمية المكجكدة في التربة عمى مصادر الغذاء (Keller and Zimmerman,1989; Hajek, 1997)، ينمك مجتمع

الفطر معتمدا ن عمى تح رر األبكاغ مف جثث الحشرات كانتشار الميسيميكـ شعاعيان في التربة. يعتمد عدد B. bassiana األبكاغ الككنيدية المتحررة عمى كؿ مف نكع الفطر، نكع العائؿ، كحجـ العائؿ، فمثبلن يح رر أبكاغان أكثر مف (.Ascomycetes: Hypocreales) Metarhizium anisopliae (Metch) بػ 11- 21 مرة (Meyling and Eilenberg, 2007). كيمكف أف تنتقؿ األبكاغ بكساطة رذاذ المطر إلى سط النبات لتبدأ تغذية تعايشية (Bruck, 2001(.

صفحة 9 مف 91

1-4. دفاعات الحشرة العائؿ وكيفية تجنبيا مف قبؿ الفطر:

ط كرت الحشرات منظكمة ىائمة مف الدفاعات ضد الكائنات الحية الدقيقة المتكاجدة في البيئة التي تسكف فييا، تمتد ىذه الدفاعات مف الكيكتيكؿ المدعـ بمركبات كاف ار ازت مضادة لؤلحياء الدقيقة إلى التكيفات السمككية مف اختباء كرفع درجة حرارة الجسـ، إلى االنسبلخ الذم ينظؼ بشكؿ فعاؿ السط الخارجي لمحشرة، كتتمخص ىذه الدفاعات بعدة نقاط3

- تعزيز كتنبيو مركبات ليبيدات الكيكتيكؿ حيث يمكف ليذه الميبيدات أف تث طب االلتصاؽ البكغي.

- زيادة التصب غ كتر سب السيكميركتيف في الكيكتيكؿ. - زيادة سرعة التطكر )االنسبلخ(.

- تغي ارت سمككية باكتشاؼ أماكف كجكد الفطر كتجن بيا. (Ortiz- Uraquiza and - انتقاء كائنات تعايشية ت نت ج مركبات مضادة لمفطكر كتطكيعيا .Keyhani, 2013) يمث ؿ كيكتيكؿ الحشرة حكاجز ميكانيكية أماـ األبكاغ الفطرية، سكاء مف خبلؿ تك ض ع صبغة الميبلنيف melanization ضمف خبليا الكيكتيكؿ المحيطة بييفات االختراؽ، أك مف خبلؿ زيادة إنتاج البركتينات كالميبيدات المضادة لمكائنات الدقيقة (Vilcinskas and Gotz, 1999)، كما أف الحمكض الدسمة متكسطة السمسمة المكجكدة في طبقة الكيكتيكؿ الخارجي تمنع غزك الفطر لمغبلؼ أك تعيقو. ي ضاؼ إلى ذلؾ آليات الدفاع الخمكية مثؿ البمعمة كتضاعؼ خبليا الييمكلمؼ التي تحيط ببنيات الفطر بالكبسمة (Augustyniuk-Kram, 2011). كما تقكـ الحشرات بسمكؾ خاص ىك التشميس، أم

التع ض رالمباشر لئلشعاع الشمسي الذم يقكـ بقتؿ األبكاغ الفطرية الممتصقة مف جية، كيرفع درجة حرارة جسميا مف جية أخرل، كليذا كجد في العديد مف التجارب بأف درجة حرارة الحشرات المعاممة بالفطر أعمى بػ 3 درجات عمى األقؿ مف الحشرات غير المعاممة (Butt et al., 2001). بالمقابؿ يتجن ب الفطر دفاعات الحشرة مف خالؿ ما يمي: سرعة اإلنبات كاالختراؽ، زيادة المقاكمة لممركبات المضادة لمفطكر، زيادة إنتاج المستقمبات الثانكية كالتي ىدفيا ليس فقط العائؿ كلكف كذلؾ األحياء الدقيقة المنافسة ,Ortiz- Uraquiza and Keyhani) (2013، تطكير خبليا شبيية بالبركتكببلست داخؿ الحشرة، تركيبيا غير معركؼ تماما ن، ال يستطيع ىيمكلمؼ الحشرة التع رؼ عمييا كبالتالي مياجمتيا، كال بد مف اإلشارة إلى أف محاكالت خبليا ىيمكلمؼ الحشرة لبمعمة ككبسمة األبكاغ الفطرية الغازية غير فعالة عادة ن مع الفطكر العالية الشراسة مثؿ الفطر .(Pendland et al., 1993) B.bassiana

صفحة 11 مف 91

1-5. وصؼ الفطر: أ- عمى المستنبت الغذائي: مستعمرة الفطر دائرية الشكؿ، حبيبية، بيضاء عمى الكجو العمكم، كشاحبة مصفرة عمى الكجو السفمي، تظير األبكاغ الككنيدية الغزيرة عمى سط المستعمرة

بشكؿ بكدرة أك بمظير طباشيرم، كبتكبير سط مستعمرة متبكغة يظير تج مع كتكتؿ األبكاغ الككنيدية الكركية بعشراتاآلالؼ ما يعطي المستعمرة المظير الحبيبي.

ب- مجيرياً: الميسيميكـ مقس ـ متف رع أك بسيط غير متف رع، الخبليا المكل دة لؤلبكاغ الككنيدية شفافة قصيرة، قمتيا مسننة مع قاعدة كركية أك دكرقية، تتك ض ع بشكؿ عناقيد أك بشكؿ سكارم أك تككف مفردة. تتكزع األبكاغ الككنيدية عمى الحامؿ بشكؿ متعاقب مع كجكد بكغة كاحدة لكؿ امتداد مف الحامؿ، ما يعطي لمحامؿ البكغي شكؿ الػزكزاzig-zag ؾ، طكؿ البكغة ≥ 3.5μm، كىي شفافة غير مقسمة، كركية أك شبو كركية بأبعاد )2-3 × 2 -2.5( ميكركف، قد تككف متطاكلة بشكؿ قطع ناقص بأبعاد )2- 3 × 1.5-2.5( ميكركف، يبلحظ تجمع كثيؼ لمككنيديات بشكؿ كرات Humber, 1998; Humber, 2005; Vega and) ( Blackwell, 2005, Lacey, 2012. أشارTanada ك Kaya )1993( إلى أف النكع B.bassiana يتميز بكجكد أبكاغ ككنيدية بيضكية ككركية الشكؿ بنسب متساكية تقريبان. األبكاغ الببلستية رقيقة الجدر سريعة التضاعؼ، أبعادىا 5- 11ميكركف Roberts and) .Sweeney, 1982) خبلؿ محاكالت التصنيؼ المكرفكلكجي ألنكاع الجنس Beauveria تبيف كجكد عدة أنكاع مشابية B. B. densa B.bassiana مكرفكلكجيان لمنكع ، لذلؾ كضع ت سبعة أنكاع كمرادفات لو، كىي3 ، B. stephanoderis ، B. shiotae، B. globulifera، B. effusa،doryphorae ، ك .B Vega and Blackwell, 2005) sulfurescens)، كقد أشار Fargues )1972( إلى كجكد سبعة B.bassiana biotypes أنماط حيكية ليذا الفطر، كبيف بأف سبلالت النكع ت ظ ري اختبلفات معنكية ت ؤخذ بالحسباف في اإلمراضية كالشراسة تجاه العكائؿ المختمفة. 1-6. أعراض اإلصابة بالفطر B.bassiana:

ي عد كجكد ميسيميكـ الفطر ضمف الحشرة المصابة أك عمييا أكثر ع ضر ممفت لبلنتباه، فعند كجكد رطكبة كافية ينبثؽ الميسيميكـ الفطرم عبر الجدار الخارجي لجسـ العائؿ ليش كؿ غطاءان أبيضان كثيفان عمى السط ، أما في المراحؿ المبكرة لئلصابة فتبدم الحشرة مظاىر عامة مثؿ انخفاض الشيية، الضعؼ، فقداف التكجو، كتصب الحشرة المريضة ضجرة كقمقة كأقؿ نشاطا ن، كما يمكف أف يظير بقع داكنة متماكتة عمى الكيكتيكؿ في أماكف االختراؽ الفطرم، تتم كف الحشرة بمكف مميز قبؿ المكت بقميؿ، تحافظ الحشرة الميتة عمى شكميا كقكاميا (Poinar and Thomas, 1984; Tanada and Kaya, 1993).

صفحة 11 مف 91

1-7. تأثير عوامؿ البيئة في الفطر B.bassiana: B.bassiana تؤث ر عكامؿ البيئة الحي ة كالبلحي ة في نمك الفطر كتط ك ره، كفي انتشاره كالعبلقة بينو كبيف عائمو الحشرم (Butt et al., 2001). Biotic factors 1 7 1 - - . العوامؿ الحي ة : Pathogens Parasitoids أ-الطفيميات والممرضات : كىي مف العكامؿ المي مة المؤث رة في الفطكر الممرضة لمحشرات، ككنيا تتكاجد في بيئة الحش ارت غالبا ن، كتؤثر بشكؿ مباشر مف خبلؿ التأثير عمى عائميا الحشرم، أك بشكؿ غير مباشر فالفطر كالطفيؿ يتطكراف في الكقت نفسو داخؿ العائؿ الحشرم كيتنافساف عمى مصادر الغذاء، كغالبان ما يككف الفطر ىك األسرع كيسيطر عمى العائؿ عمى حساب الطفيؿ. بينما كبعكس العبلقة التضادية بيف الفطر كالطفيميات، فإف العبلقة بيف الفطر كالممرضات األخرل ضمف العائؿ نفسو تزيد كفاءة كمييما، كىك ما يسمى ظاىرة التعايش Coexistence كىي كجكد عدة ممرضات في نفس العائؿ، كما ىك الحاؿ عند استخداـ الفطر B.bassiana مع البكتريا Bacillus thuringiensis كمع البكتريا .Pseudomonas spp ك ؿ عمى حده ,Augustyniuk-Kram) .2011) ب-النبات العائؿ لمحشرة: تتعم ؽ حساسية الحشرات لمفطكر الممرضة بدرجة معينة بنكع النبات الذم تغ ذت عميو الحشرة، كما في نسبة مكت ذبابة القطف البيضاء Bemisia tabaci بالفطر B.bassiana التي اختمفت باختبلؼ العائؿ النباتي الذم تغ ذت عميو الحكري ات، ككانت ذبابة البيكت الببلستيكية البيضاء Trialeurodes vaporariorum أكثر حساسية ن لمفطرPaecilomyces fumosoroseus عند تغذيتيا عمى الخيار مقارنة ن مع البندكرة، فيك كثير مف األحياف ال يككف تأثير العائؿ كاضحا ن، كيتجم ى عادةن بإف ارز مكاد تؤثر عمى الفطر بشكؿ مباشر مف خبلؿ تثبيط عمميتي النمك كاإلنبات بالتالي تخفيض قدرتو عمى Santiago-Alvarez et al., إحداث العدكل، أك بكجكد كائنات حي ة دقيقة عمى سط النبات تثب ط نمكه .)2006) جػ-العائؿ الحشري نفسو: يؤثر مف خبلؿ كثافة المجتمع الحشرم، العمر، السمكؾ، التغذية، األصؿ الك ارثي، التع رض لمضرر الميكانيكي أك الكيميائي. فمثبلن تزيد التغذية غير الكافية لمحشرة حساسيتيا لمممرضات الفطرية، كيمعب عمر الحشرة أك المرحمة الحياتية دك انر ا نكبير كأساسيان في تحديد الحساسية تجاه الفطكر الممرضة، فحساسية األطكار كاألعمار المختمفة تتبايف مف حشرة ألخرل كمف فطر آلخر (Butt et al., 2001).

صفحة 12 مف 91

Abiotic factors 2 7 1 - - . العوامؿ الالحي ة : B.bassiana تتأث ر فعالية الفطر بعدد مف العكامؿ البلحي ة كمنيا اإلشعاع الشمسي، درجة الحرارة، الرطكبة، مع دؿ سقكط المطر، كبشكؿ أقؿ بشركط اإلضاءة كحركة اليكاء في البيئة. تتخ رب األج ازء التكاثرية لمفطر عند التع ض رلئلشعاع الشمسي السيما األشعة فكؽ البنفسجية كخاصةن UVB )285- 315 نانكمتر(، كيمعب المسط الكرقي لمنبات دك انر في تخفيض تأثير اإلشعاع. 91 B.bassiana ت عد الرطكبة العامؿ الحاسـ لنمك الفطر ، فرطكبة مرتفعة أكثر مف % مطمكبة إلنتاج األبكاغ كانباتيا، في حيف يتـ تثبيط ىاتيف العمميتيف إذا كانت الظركؼ جافة لفترة طكيمة، إال أف 51 تح رر أبكاغ الفطر مف حكامميا ي ست ح ث برطكبة منخفضة )أقؿ مف %( كبكجكد ظبلـ كاىتزاز. بالرغـ مف أف معظـ الفطكر الممرضة لمحش ارت متح ممة لمجاؿ كاسع مف درجات الحرارة إال أف المجاؿ المطمكب إلحداث اإلصابة كالنمك كالتبكغ يككف ضيؽ إلى ح د بعيد، كتقع درجات الحرارة المثالية المناسبة لمعظـ الفطكر الييفية بيف 21- 25 س° كتحدث العدكل بيف 15- 31 س°.

كما يظير دكر الحرارة مف خبلؿ تأثيرىا عمى الحشرة، فالحرارة المرتفعة ت س رع تطكر الحشرات، كتقمؿ الكقت بيف االنسبلخات، بالتالي تخفض فيما بعد انتشار اإلصابة كالعدكل بسبب فقداف المقاح الفطرم مع بقايا االنسبلخ ,Ferron, 1978; Gottwald and Tedders, 1984; Roberts) .1989; Butt et al., 2001; Lacey, 2012)

1-8. أىمية استخداـ الفطر B. bassiana في المكافحة الحيوية: B. bassiana يتمي ز الفطر بصفات عديدة كضعتو كأحد الكائنات الرئيسة المستخدمة كممرضات لمحشرات كمف ىذه الصفات3  انتشاره العالمي كظيكره المتكرر في الطبيعة.  المدل العكائمي الكاسع جدان لو، كاالختبلؼ الكبير في شراستو تجاه العكائؿ المتنكعة، ما جعمو كاحدان مف أكثر الفطكر الممرضة المرشحة لبلستعماالت المتعددة في المكافحة الحيكية لمحش ارت. B. bassiana  ي عد مف الكائنات السيؿ التعامؿ معيا، سكاء مف ناحية عزلو مف جثث عكائمو كمف التربة، أك مف ناحية تنميتو بسيكلة عمى المستنبتات الغذائية البسيطة، باإلضافة إلى إمكانية تصنيعو ضمف مستحضرات تجارية (Vega and Blackwell, 2005). بينما تككف بعض الفطكر الممرضة األخرل ممرضات إجبارية مثEntomophthora spp. ؿ كدكرة حياتيا بالكامؿ ضمف الحشرات الحية، كيحتاج البعض اآلخر لمستنبتات خاصة لتنميتو (Ferron, 1978). تجدر اإلشارة إلى أف تأثير الممرضات الحشرية عمى الكائنات غير المستيدفة عامؿ ميـ في استخداـ ىذه الكائنات كعكامؿ مكافحة حيكية، كبالرغـ مف أف النكع B. bassiana أكؿ ما اكتشؼ كمسبب

صفحة 13 مف 91

لمرض المكسكارديف األبيض عمى دكدة الحرير األكركبية (Vega and Blackwell, 2005)، إال أنو ال تكجد محاذير مف استخدامو بيئيان، كقد برىنت د ارسة أجريت في األردف مف قبAlmazra`awi ؿ B. bassiana 2007 ) ( بأف الفطر يمكف أف ي ستخدـ بأماف لمكافحة اآلفات في الحقكؿ التي ي ستخدـ 2111 Butt فييا نحؿ العسؿ لمتمقي ، كما بي ف كآخركف ) ( بأف معظـ الفطكر الممرضة لمحشرات فشمت في قتؿ نحؿ العسؿ بسبب الح اررة المرتفعة جدان في خمية النحؿ، كبي نت دراسة أ جريت في النمسا بأف النكع B. brongniartii يمكف أف ي ستخدـ تحت الظركؼ الحقمية دكف أف يسب ب أ ية تأثيرات ذات أىمية عمى المفترسات مف غمدية األجنحة (Traugott et al., 2005). B.bassiana ي طب ؽ الفطر في المكافحة الحيكية مف خبلؿ ع دة تقنيات كىي3 أ. التعزيز والصيانة Enhancement and Conservation: تتضمف تعزيز الظيكر الطبيعي لمفطر كزيادتو في البيئة، مف خبلؿ تعديؿ الممارسات الزراعية المتبعة manipulation لمحفاظ عمى بقاء الفطر، كفي ىذا المجاؿ تبيف بأف استخداـ مبيدات الفطكر ضمف برامج اإلدارة المتكاممة لآلفات يمكف أف يككف ضا انر بنمك الفطكر الممرضة لمحشرات، بينما يمكف إدخاؿ بعض مبيدات الحشرات كاألعشاب دكف تأثير كاض عمى الفطكر. كأشار Meyling كEilenberg )2117( إلى أىمية كجكد مكاطف شبو طبيعية بجكار الحقكؿ مثؿ األسيجة حيث يعتمد B.bassiana عمى مفصميات األرجؿ المكجكدة ىناؾ لمبقاء. تتـ أحيانان عممية التعزيز بشكؿ معاكس مف خبلؿ زيادة قدرة الفطر عمى تحمؿ الظركؼ غير المناسبة، مثؿ إجراء التعديؿ الكراثي لمصفات باستخداـ تقانة البيكلكجيا الجزيئية، فقد ط ب قت عمى إحدل عزالت Metarhizium الفطر فن ق ؿ إلييا الجيف المسؤكؿ عف المقاكمة لمركب البينكميؿ )مبيد فطرم( مف فطر آخر كىك Roberts, 1989( Aspergillus nidulans(. Introduction ب. اإلدخاؿ : حيث ي د خؿ عامؿ المكافحة إلى مجتمعات اآلفة، يتضاعؼ كينتشر تمقائيا ن، كمف الممكف إعادة اإلدخاؿ كؿ فترة كىذا ما يعرؼ بالمكافحة الحيكية التقميدية )الكبلسيكية(. تكجد بعض األمثمة عف نجاح استخداـ الممرضات الفطرية مف أجؿ المكافحة الحيكية الكبلسيكية، كأىـ مثاؿ حكؿ ىذه الطريقة إدخاؿ الفطر Entomophthorales) Entomophaga maimaiga) 1911 Lymantria dispar المتخ ص ص عمى يرقات فراشة الغجر مف الياباف عاـ إلى شماؿ أمريكا لكنو احتاج حكالي 81 سنة حتى يستكطف كيسبب نسبة مكت عالية ليرقات تمؾ اآلفة الخطيرة، كىك (Hajek, 2004) 1989 يحدث منذ عاـ أكبئة ىامة لمجتمعات فراشة الغجر . جػ. الغمر والتمقيح )التطعيـ( Inundation and Inoculation: كىك استخداـ الفطر كمبيد حيكم لمحشرات Bioinsecticides بشكؿ مشابو لممبيدات الكيميائية، كتحتاج ىذه التقنية إلى إنتاج الفطر بكميات كبيرة، كيجب أف يحافظ المنتج الناتج عمى قابمية التطبيؽ كالقدرة اإلمراضية خبلؿ فترة تخزيف طكيمة كبعد إدخالو إلى مكطف الحشرة )Shahid et al., 2012(، كيكجد حاليان العديد مف المنتجات

صفحة 14 مف 91

التجارية لمفطر Ritu et al., 2012) B.bassiana). كحسب Meyling كEilenberg )2117( فإف استراتيجيتي الغمر كالتمقي بيذه الطريقة ال تستثمر مخزكف الفطكر المكجكدة بشكؿ طبيعي في نظاـ المحاصيؿ البيئي. كأخي انر البد مف اإلشارة إلى أف استخداـ الفطر B.bassiana كعامؿ مكافحة ليس جديدا ن، فقد أ دخؿ في برامج المكافحة منذ 1888ـ، حيث كاف يتـ إنتاجو في جامعة كنساس في أميركا كتكزيعو عمى المزارعيف (Lord, 2005) عمى ىيئة أبكاغ لبلستخداـ الحقمي المباشر . بي نت الدراسات العديدة نجاح ىذا الفطر في مكافحة غمدية كنصفية كمستقيمة كمتساكية كثنائية كمتجانسة كحرشفية األجنحة كاألكاركسات، كمف أىـ فصائؿ حرشفية األجنحة التي ثبت إمكانية مكافحتيا بيذا الفطر Plutellidae كNoctuidae (Safavi et Pyralidae ،(Sabbour and Sahab, 2005; Wraight et al., 2010; Asi, 2012) (Gelechiidae ،al., 2010; Wraight et al., 2010 )عزيز كآخركف، Pieridae ،)2012 (Alves et al., 2002) Crambidae ،(Wraight et al., 2010).

2. دودة ورؽ القطف (Spodoptera littoralis (Boisduval, 1833:

ينتمي الجنس Spodoptera إلى فصيمة الفراشات الميمية Noctuidae )تحت فصيمة3 Noctuinae، كقبيمةProdeniini 3(، كرتبة حرشفية األجنحة Lepidoptera، كىك جنس عالمي مع أنكاع تنتشر عبر كؿ البمداف، يضـ نسبة عالية مف اآلفات الز ارعية التي تتغ ذل عمى مجاؿ كاسع مف 25 (Lafontaine and Schmidt, 2010) المحاصيؿ اليامة اقتصاديان ، عرؼ منو حكالي نكعان، تضـ بعضان مف أكثر اآلفات الحشرية أىميةن اقتصاديةن عمى المحاصيؿ المزركعة، كمف أخطر ىذه األنكاع كأكثرىا انتشا انر كضر انر النكع (.Ellis, 2005) S. littoralis (Boisd). 2-1. المدى العوائمي والتوزع الجغرافي:

ت ع د دكدة كرؽ القطف حشرة متعددة العكائؿ بشكؿ كبير، كىي آفة مدمرة لعدد كبير جدان مف الخضركات كالمحاصيؿ الحقمية كنباتات الزينة في الزراعات المدارية كشبو المدارية، تياجـ نباتات تنتمي لػ 44 فصيمة نباتية مختمفة، منيا الباذنجانيات كالصميبيات كالبقكليات كاألعشاب كأشجار الفاكية المتساقطة، يختمؼ العائؿ الرئيس باختبلؼ المنطقة، تف ض ؿ الخضركات في شماؿ إفريقيا، في مصر تياجـ القطف، كفي جنكب أكركبا تياجـ نباتات األزىار في البيكت المحمية كالخضركات كمحاصيؿ العمؼ. س ج ؿ الضرر في فرنسا ألكؿ مرة عاـ 2117 عمى نباتات البيغكنيا .Begonia sp في الزراعات المحمية -Lopez) (Vaamonde, 2006. يمكف أف يصؿ عدد عكائميا ألكثر مف 125 عائبلن نباتيان مزركعان كبريان حسب CABI )2114(. تنتشر ىذه الحشرة في إفريقيا كاألج ازء الجنكبية مف أكركبا حيث الشتاء ليس باردان جدان، كغرب آسيا كأقصى الشرؽ مف إي ارف (EFSA, 2015)، بينما تغيب بشكؿ كامؿ في المناطؽ (EPPO, 2015) شديدة البركدة مثؿ ركسيا . ك كثؽ كجكد ىذه اآلفة في سكرية في العديد مف صفحة 15 مف 91

(EPPO, 1997; CABI, 2014) اإلحصائيات . كقد ح ددت الدكؿ التي كجدت فييا دكدة كرؽ القطف في آسيا كفEPPO ؽ )1997( بأنيا3 البحريف، قبرص، إيراف، العراؽ، فمسطيف، تركيا، سكرية، السعكدية، لبناف، األردف، سمطنة عماف، اليمف، كاإلمارات العربية المتحدة.

2-2. الضرر:

تتفاكت كثافة مجتمع الحشرة كالضرر إلى حد كبير مف سنة إلى أخرل (EFSA, 2015)، كنتيجة المتبلكيا القدرة عمى اليجرة لمسافات بعيدة جدان فإنيا تشكؿ مصدر خطر محتمؿ لمعديد مف الزراعات (Hill, 2008(. ينتج الضرر عف تغذية اليرقات، حيث تبدأ اليرقات حديثة الفقس في التغذية عمى بشرة الكرقة كاألكراؽ المجاكرة لمكاف الفقس، كتف ض ؿ األكراؽ الفتية التي تصب ىياكؿ بفعؿ عممية االلتياـ، تقرض اليرقات األك ارؽ مسببةن أع ارضان عمى شكؿ نافذة ثـ ت نح د ث ثقكبان غير منتظمة. نجد األعمار اليرقية األكلى عمى األك ارؽ نيا ا نر، بينما اعتبا انر مف العمر ال اربع تختفي في التربة كأسفؿ الحشائش خبلؿ النيار كتظير ليبل ن. تصب األعمار األخيرة شرىة جدان في تغذيتيا عمى األكراؽ كاألزىار، (DEFRA, 2006; Hill, 2008; كيمكنيا أف تع مر النبات مف األكراؽ بالكامؿ إذا كجدت بأعداد كبيرة EFSA, 2015) . ت عد يرقات ىذه الحشرة متغذيات خارجية في معظـ الحاالت، لكف في بعض األحياف تحفر داخؿ أجزاء النبات كالثمار كتممؤىا بالمخمفات (OEPP/EPPO, 2015)، فتثقب الثمار كتجعميا غير مناسبة لبلستيبلؾ، كيمكف أف تحفر في الساؽ كأف تتغذل أيضان عمى الب ارعـ كاألزىار، كيحدث نتيجة المضغ ثقكبان كبيرة. عندما تتكاجد عمى نباتات القطف فإنيا تياجـ جك ازت القطف كب ارعـ األزىار كالسكؽ أحيانان (EPPO, 1997). كلمداللة عمى الضرر الكبير الناتج عف ىذه اآلفة حددت عتبة الضرر االقتصادم ليا في حقكؿ القطف في مصر بػ 1.36، 1.46 ك 1.11 يرقة / نبات بالنسبة لؤلجياؿ األكؿ كالثاني كالثالث )كىي األجياؿ الرئيسة لمحشرة في مصر تكافؽ أشير3 حزيراف تمكز كآب(، كأف كؿ نقص قدره 1% في مساحة المسط الكرقي يؤدم إلى نقص المحصكؿ بمقدار 7.7، 11.4 ك 5.7 كغ/ فداف 1991a 1991b عمى التكالي )الشريؼ كآخركف، (. كبي ف الشريؼ كآخركف ) ( أنو ي س م بكثافة يرقية مقدارىا 1.23 يرقة/ نبات دكف الحاجة لمكافحتيا. اختمؼ الحد القتصادم الحرج عمى نبات القطف بحسب المرحمة الحياتية لمنبات كبحسب المنطقة، فتفاكت بيف 1.38 يرقة/ نبات بالنسبة لمنمك الخضرم إلى 1.42 لئلزىار ك 1.35 بعد تماـ اإلثمار. بينما في منطقة أخرل بمغت ىذه القيـ 1.15، 1.38، 1.56 عمى التكالي )الشريؼ كمصباح، 1992(. )كؿ فداف = 4211 متر مربع(.

2-3. دورة الحياة:

دكدة كرؽ القطف مف الحشرات المياجرة، يمكف لمبالغات أف تقطع مسافة 1.5 كـ خبلؿ أربع ساعات، كىي ليمية النشاط (DEFRA, 2006)، يبدأ نشاط اإلناث كالذككر منذ الساعة الثامنة مساءان كيستمر صفحة 16 مف 91

حتى السادسة صباحان خبلؿ ما يسمى scotophase حيث يككف الطيراف في أكجو في بداية كمنتصؼ ىذه المرحمة، تقكـ اإلناث بإفراز فرمكنات جنسية تجذب الذككر إلييا لبدء عممية التزاكج، كيزيد إطبلؽ Saveer, 2012) scotophase ىذه الفرمكنات في منتصؼ بعد ذلؾ ينخفض اإلطبلؽ بشدة (. ي ظ ير الفرمكف الجنسي األنثكم تنكعان كبي انر جدي انر بالذكر عبر المناطؽ الجغ ارفية (Munoz et al., 2008). polyandrous 2112 Saveer بي ف ) ( بأف كبلن مف إناث كذككر دكدة كرؽ القطف متعددك األزكاج . يبدأ التزاكج بيف الجنسيف كالذم يؤدم إلى تغيرات فيزيكلكجية كسمككية جذرية عند كمييما، فتتغير طبيعة انجذاب اإلناث، مف االنجذاب إلى أماكف الغذاء حيث األزىار كالرحيؽ، إلى االنجذاب إلى أماكف كضع البيض حيث األكراؽ التي تناسب تغذية اليرقات الفاقسة، أما التغيرات عند الذكر فتككف بعد التزاكج بكقت قصير جدا ن، في مغى االنجذاب نحك الفرمكنات الجنسية األنثكية كأماكف االلتقاء تمامان، كذلؾ لفترة محددة تحتاجيا الذككر مف أجؿ إعادة تعبئة الغدد التكاثرية (Kromann, 2012; Saveer, 2012)، بينما يبقى االنجذاب لمصادر الغذاء مستم ا نر، كال تتأثر االستجابة السمككية كالعصبية تجاه األزىار الغنية (Wenninger and بالرحيؽ، فالرحيؽ مصدر متي سر لمحشرة يزكدىا بالطاقة كيزيد م دة الحياة unmated Landolt, 2011) ، كىذا يف سر اختبلؼ مدة حياة اإلناث الممق حة عف غير الممق حة ، التي يبقى انجذابيا نحك الرحيؽ طبيعيان كتبمغ 12- 14 يكمان )Saveer, 2012(، بينما تتراكح بيف 5-11 أياـ عند اإلناث الممق حة )EFSA, 2015(. تبدأ اإلناث بكضع البيض بعد التزاكج بػ 2- 3 ساعات إلى 24 ساعة (Saveer, 2012) كذلؾ خبلؿ 2- 5 أياـ بعد خركجيا، تضع األنثى الكاحدة خبلؿ حياتيا 1111- 2111 بيضة -Lopez) (Vaamonde, 2006; Hill, 2008، بينما ذكر EFSA )2115( أف خصكبة أنثى دكدة كرؽ القطف 3111 أكثر مف بيضة خبلؿ حياتيا. تف ضؿ اإلناث الكجو السفمي لؤلكراؽ لكضع البيض، كما يمكف أف يكضع البيض عمى سطكح أخرل مثؿ تركيبات البيت الببلستيكي -DEFRA, 2006; Lopez) (Vaamonde, 2006. عمكمان يمكف أف يكجد البيض عمى كؿ أجزاء النبات فكؽ سط التربة .(OEPP/EPPO, 2015) يكضع البيض بشكؿ لطع )مجمكعات( تتراكح مف 7-8 لطع لكؿ أنثى (Saveer, 2012)، كفي كؿ 351 21 لطعة - بيضة، يكضع عادة ن في طبقة كاحدة، لكف لكحظ في بعض األحياف كضعو في طبقتيف أك أكثر، ي غط ى البيض بشعيرات مف بطف األنثى لحمايتو مف العكامؿ الخارجية الحية كالبلحية، تكسبو مظير الشعر المتمب د كتككف بمكف أبيض كريمي كأحيانان بمكف بني غامؽ، كىي غالبان مبلحظة بالعيف (Lopez- Vaamonde, 2006; المجردة لكنيا أحيانان ت شاىد بكميات قميمة جدان عمى المطع .OEPP/EPPO, 2015) يفقس البيض بعد مدة حضانة حكالي 2-6 أياـ، كيستغرؽ 26 يكمان في المناطؽ الباردة ,Hill) (2008، تبقى اليرقات حديثة الفقس في مكانيا مدة بسيطة ثـ تبدأ بالتغذية. لميرقة ستة أعمار يرقية مدتيا

صفحة 17 مف 91

4 2 مف إلى أسابيع. تميؿ اليرقات الفتية ألف تبقى عمى النبات خبلؿ النيار كتككف متج معة، بينما تتفرؽ األعمار المتقدمة كتغادر النبات خبلؿ النيار كتعكد إليو ليبلن لمتغذية ,CABI, 2014; EFSA) (2015. إذا خرجت اليرقات مف البيض المكضكع عمى تركيبات البيت الببلستيكي فإف ىذه اليرقات تصؿ إلى النباتات في األسفؿ باليبكط عمى خيكط حريرية (Lopez- Vaamonde, 2006). تنتشر ظاىرة االفتراس الذاتي بيف اليرقات المتقدمة بالعمر، حيث تقكـ في حاؿ نقص الغذاء بافتراس اليرقات األخرل كالعذارل، ىذه الظاىرة منتشرة عند أنكاع الجنس Spodoptera بشكؿ عاـ Ang et) .al., 2010) 5 3 يتـ التع ذر ضمف خمي ة ترابية تحت سط التربة مباشرةن عمى عمؽ حكالي - سـ، م دة طكر العذراء مف 6- 11 يكمان (Hill, 2008)، يمكف أف تكجد العذراء بدكف تربة إذا اكتمؿ نمك اليرقات بعيدان عف التربة كتربيتيا مخبريان مثبلن )OEPP/EPPO, 2015). تستغرؽ دكرة الحياة 19- 144 يكمان بحسب درجات الحرارة، كتعطي الحشرة في الظركؼ المدارية الرطبة 8 أجياؿ في العاـ (Ellis, 2005)، بينما في المناطؽ األبرد مثؿ جنكب أكركبا يظير جيبلف في العاـ، مع احتماؿ ظيكر أجياؿ إضافية في (EFSA, 2015) الزراعات المحمية، كلـ ي س ج ؿ ليذه الحشرة طكر سككف . 2-4. الوصؼ المورفولوجي:

البيضة: كركية قطرىا حكالي 1.3 ممـ، بمكف أخضر خفيؼ أك كريمي كذلؾ إلى ما قبؿ فقس اليرقات حيث يتحكؿ إلى األسكد، مضم عة تتككف مف 37- 65 ضمعا ن، عرضيا أكبر مف ارتفاعيا )1.45×1.35( ممـ )OEPP/EPPO, 2015). اليرقة: اليرقات حديثة الفقس بطكؿ 1- 2.5 ممـ مع أجساـ بيضاء تصب بمكف أخضر باىت كرؤكس سكداء (DEFRA, 2006)، كتكجد شعي ارت قصيرة عمى الجسـ، بدءان مف العمر الثالث تصب اليرقات صمعاء بدكف شعيرات (EFSA, 2015). يتفاكت لكف اليرقات في المراحؿ البلحقة مف البني الخفيؼ إلى البني الغامؽ كمف البني الشكككالتي إلى الرمادم الفكالذم، تظير نقاط بيضاء صغيرة جدان بجانب 4.5 الفتحات التنفسية البطنية عمى طكؿ الجسـ، كتنمك اليرقة إلى طكؿ سـ كسطيان. يتفاكت التم كف عند يرقات S. littoralis بحسب المنطقة كالسبللة كالعائPassoa, 2014) ؿ). الصفة المميزة ليرقات ىذه الحشرة ىي كجكد بقعتيف بمكف أسكد عمى جانبي الجسـ، يبدأ ظيكر ىذه البقع عند يرقات العمر األكؿ قبيؿ االنسبلخ بكقت قصير عمى ىيئة بقع كيرمانية بنية عمى الحمقة البطنية األكلى، تتطكر ىذه البقع الحقان إلى بقع كبيرة قاتمة عمى جانبي البطف، كىي غائبة عند األنكاع األخرل مف الجنس Spodoptera، تزداد بالحجـ كدرجة قتامة المكف مع زيادة العمر اليرقي، كتتحكؿ إلى المكف األسكد مع بداية العمر الثاني، كتصب أكثر برك ا نز خبلؿ التطكر إلى يرقات العمر الثالث )الشكؿ 1-1(. كبدءان مف العمر الثالث تتطكر كذلؾ بقع داكنة عمى الحمقة الصدرية الثانية كالثالثة كالحمقة البطنية الثامنة. يرقات

صفحة 18 مف 91

العمر الثاني بطكؿ حكالي 2.5- 8 ممـ، بينما يرقات العمر الثالث بطكؿ حكالي 9-21 ممـ .(OEPP/EPPO, 2015)

L3 L1

L2

Spodoptera littoralis 1 1 الشكؿ ) - (: تط ور تش كؿ البقعتيف المميزتيف لمنوع بدءاً مف العمر اليرقي األوؿ وحتى الثالث (OEPP/EPPO, 2015) 2 العذراء: طكليا حكالي سـ، لكنيا بني مح مر إلى أحمر قاتـ، تككف حديثة التشك ؿ منيا بمكف مخ ض ر ضارب لمصفرة، ثـ يزداد تركيز الميبلنيف تدريجيان كيت اركـ لتأخذ المكف النيائي بعد حكالي 6 ساعات مف التعذر (Liu et al., 2015). الحشرة الكاممة: تتميز الحشرة الكاممة بجسـ ضارب لمبياض مع آثار خفيفة لمكف األحمر، طكليا أكثر مف 2 سـ، يصؿ عرض األجنحة عند امتدادىا إلى 4 سـ، األجنحة األمامية بمكف بني مصفر مع عدد كبير مف األشرطة كالخطكط بمكف أبيض كريمي، األجنحة الخمفية ضاربة لمبياض كنصؼ شفافة، تتميز Spodoptera S. littoralis الحشرة الكاممة لػ عف باقي أنكاع الجنس بع دة سمات أساسية لمجناح األمامي3  بقعة شبو كمكية عمى الجناح تأخذ شكؿ حرA ؼ مائؿ أبيض مع لكف بني خفيؼ.  خطاف متكازياف عمى الحافة الخارجية لمجناح بينيما صؼ مف العبلمات الشبيية بزجاجات الساعة بمكف بني داكف أك أسكد عمى طكؿ الحافة الخارجية لمجناح.  خطكط بيضاء عمى شكؿ شككة في المنطقة الكسطى مف الجناح تمثؿ بعض العركؽ األساسية. تتميز الذككر عف اإلناث بكجكد بقعة مصفرة كبيرة في المنطقة الكسطى بجانب الحافة الداخمية لمجناح تككف مكجكدة عند الذككر كغائبة عند اإلناث )الشكBrambila, 2013) )2-1 ؿ).

صفحة 19 مف 91

الشكؿ )1-2(: الصفات المورفولوجية التمييزية لمحشرة الكاممة لدودة ورؽ القطف OEPP/EPPO, S.littoralis) 2015)

2-5. المكافحة: (Hosny et al., ات بعت ع دة أساليب في مكافحة ىذه اآلفة بدءان مف جمع لطع البيض باليد كحرقيا (1986، استخداـ مصائد ضكئية ككف الفراشة ليمية النشاط (DEFRA, 2006)، استخداـ مصائد جاذبة ® فرمكنية لتشكيش جذب الذككر مثؿ الفرمكف Ecodian الذم أبدل معدؿ تشكيش يتراكح بيف -94.6 Lanzoni et al., 2012) %98.9)، استخداـ مستخمصات نباتية كمف أىميا مستخمص األزدرختيف (Martinez and van Emden, 1999; Martinez and van Emden, 2001) كمستخمص نبات كردة تشريف Haouas et al., 2008) Chrysanthemum). لكف االعتماد األساسي كالمنتشر عمى نطاؽ كاسع ىك المكافحة الكيميائية كالمكافحة الحيكية.

2-5-1- المكافحة الكيميائية:

يتـ االعتماد عمى المكافحة الكيميائية كأساس لممكافحة في أغمب المناطؽ، بالرغـ مف فشميا في

العديد مف الحاالت بسبب ظيكر سبلالت مقاكمة مع تكرار استخداميا، فقد تبي ف بأف ىذه اآلفة ط كرت مقاكمة عالية تجاه مبيدات مف المجمكعة الفكسفكرية العضكية )مثؿ ككينالفكس(، كمقاكمة معتدلة تجاه

مبيدات أخرل مف نفس المجمكعة )مثؿ مكنككركتكفكس(، كما ط كرت مقاكمة معتدلة تجاه مركبات مف البيرثركئيدات )مثؿ سايبرمثريف كفينفاليرات(، كمقاكمة منخفضة تجاه مركبات أخرل مثؿ إندكسمفاف )مجمكعة سايكمكديف( (Kranthi, 2005)، كأظيرت دراسة أخرل تطكير اآلفة سبلالت مقاكمة تجاه مركب Jia et al., 2009( tebufenozide(. صفحة 21 مف 91

(Aydin and Gürkan, ت عد ىذه المقاكمة حاليان مشكمة ج دية عمى نطاؽ كاسع في اإلنتاج الزراعي (2006، كتنتج مف خبلؿ تعزيز سمكؾ إزالة السمية عند الحشرة كالمعتمد عمى كجكد إنزيمات متخصصة Esterases Glutathion S- transferase بذلؾ، أىميا كمجمكعة إنزيمات الػ ، ت ف رز ىذه اإلنزيمات عمكمان كدفاعات إنزيمية تجاه المركبات الغريبة، كتمعب دك انر معنكيان في إبقاء الكظائؼ الفيزيكلكجية لمحشرة (Abd El- Aziz, 2015) طبيعية . ت ستخ دـ حاليان مبيدات مف الجيؿ الثالث )منظمات نمك( كأىميا معيقات تصنيع الكيتيف عند الحشرة )مانعات اإلنسبلخ( Hamadah et al., 2016; Ghoneim et) (al., 2015، كالجدير بالذكر أنو بالرغـ مف السمبيات العديدة كالمشاكؿ الخطيرة لممبيدات الكيميائية إال أنو لـ يتـ التكصؿ إلى االستغناء عنيا بشكؿ كامHuffaker, 1975) ؿ؛ الزبيدم كآخركف، 2117(.

2-5-2- المكافحة الحيوية:

ت عد المكافحة الحيكية بعناصرىا المختمفة بديؿ ناج كفعاؿ في مكافحة دكدة كرؽ القطف، بدءان بالعديد Depalo مف الحشرات المفترسة كالمتطفمة عمى ىذه اآلفة، كانتيا نء بالممرضات. كقد أشار كآخركف )2010( في دراسة أجريت في إيطاليا إلى أف المتط فDiptera: Exorista larvarum (L.) ؿ) Tachinidae) مف أىـ المرشحيف لممكافحة الحيكية لدكدة كرؽ القطف، كبي نت دراسة في العراؽ مف قبؿ منجي كآخركف )2012( أف نسبة تطف Hymenoptera: Trichogramma principium ؿ) (Trichogrammatidae بمغت 54.68% عمى البيض الحي ليا. كيكجد العديد مف المتطفبلت األخرل كالمفترسات المرافقة لدكدة كرؽ القطف في الطبيعة )الجدكؿ 1-2(. كمف خبلؿ متابعة الدراسات التي

ت ج رل باستمرار، تبي ف أف التركيز األساسي في المكافحة الحيكية المتبعة كاف عمى استخداـ الممرضات (NPV) الحشرية كخاصة الفيركسية منيا كالبكتيرية مذ تبي ف تأثير الفيركسات النككية متعددة الكجكه في يرقات دكدة كرؽ القطف (Kikhno et al., 2002; Masetti et al., 2008; Gasmi, 2015)، كمف أىميا Alphabaculovirus، كالفيركسات الحبيبية (GV)، كمنيا Rivkin et Betabaculovirus) (al., 2006; Cuartas et al., 2015، باإلضافة لمممرضات البكتيرية كخاصة ن Bacillus Ibrahim, 2006; CABI, 2014) thuringiensis)، كTunaz and Küsek, Serratia) (2015. كلكف بعد فترة مف استخداميا بدأت تظير مشاكؿ عديدة ليا، فالتخصص العالي جدان لمممرضات الفيركسية يصب غير مرغكبان عند تكاجد عدة آفات تنتمي لرتب حشرية مختمفة عمى نفس العائؿ النباتي، Betabaculovirus Alphabaculovirus فمثبل ن الجنساف الفيركسياف ك متخ ص صاف بحرشفية األجنحة، Gammabaculovirus Deltabaculovirus بينما متخ ص بثنائية األجنحة، ك متخ ص ص بغشائية األجنحة (Rivkin et al., 2006)، كمف ناحية أخرل فإف الممرضات الفيركسية كالبكتيرية ال تستطيع 1989 Roberts الكصكؿ إلى الحشرات التابعة لنصفية كمتجانسة األجنحة كما أشار إلى ذلؾ ) (، كعادة ن ما تتكاجد دكدة كرؽ القطف مت ارفقة ن مع آفات ثاقبة ماصة مف ىذه الرتب. المشكمة األكبر التي اعترضت

صفحة 21 مف 91

تطبيؽ ىذه الممرضات ىي أف دكدة كرؽ القطف ط رتك سبلالت مقاكمة لممبيدات الحيكية الحاكية عمى البكتريا B.thuringiensis، حيث يتـ ىضـ السمكـ المتحررة مف البمكرات السامة ليذه البكتريا - Endotoxin بكاسطة إنزيمات البركتياز (Keller et al., 1996; EFSA, 2015). Steinernema S.littoralis است خ د مت بعض الممرضات النيماتكدية لمكافحة كمنيا النكعاف carpocapsae ك EFSA, 2015) S. feltiae)، كما استخدـ النكعاف Heterorhabditis heliothidis وCABI, 2014; Vashisth, 2014) H. indicus). Beauveria bassiana (EPF) ت عد الفطكر الممرضة لمحشرات كفي مقدمتيا النكع مف أنج العكامؿ المستخدمة لمكافحة دكدة كرؽ القطف (Khan and Ahmad, 2015). أجريت دراسات عديدة B. bassiana في كؿ مف مصر كالع ارؽ بي نت بأف الفطر مر ش ميـ كعامؿ مكافحة حيكية ضد ىذه اآلفة )العبيدم كآخركف، 2118؛ العبيدم كسمير، 2111؛ Ahmed and El Katatny, 2007)، كاستخدـ El- Hawary كAbd El- Salam )2009( مستحضرات تجارية لكؿ مف الفطكر الممرضة Paecilomyces fumosoroseus Lecanicillium lecanii B. bassiana التالية ك ك ض د يرقات العمر الثالث مف دكدة كرؽ القطف، كأكضحت النتائج بأف النكع B. bassiana كاف األكثر فعالية ن. كبناءان عمى كؿ ماسبؽ، تتض أىمية تطكير عناصر مكافحة حيكية محم ية إلدارة ىذه اآلفة، لئلستفادة مف التنكع الحيكم المكجكد طبيعيان في البيئة، باستخداـ الفطكر الممرضة لمحش ارت لخفض مجتمعات دكدة كرؽ القطف، كتج نب أض اررىا كالخسائر االقتصادية الناتجة عنيا.

صفحة 22 مف 91

الجدوؿ )1-2(: أىـ المتطف الت والمفترسات المستخدمة في المكافحة الحيوية لدودة ورؽ القطف )وفCABI, 2014 ؽ(

االسـ العممي النوع التصنيؼ Andrallus spinidens مفترس (Hem.: Pentatomidae) Apanteles colemani متط فؿ عمى اليرقات (Hym.: Braconidae) Bessa remota متط فؿ عمى اليرقات (Dip.: Tachinidae) Blaptostethus piceus مفترس (Hem.: Anthocoridae) Bracon brevicornis متط فؿ عمى اليرقات (Hym.: Braconidae) Calosoma blaptoides مفترس لميرقات (Col.: Carabidae) Campoletis chlorideae متط فؿ عمى اليرقات (Hym.: Ichneumonidae) Cantheconidia furcellata مفترس لميرقات (Hem.: Pentatomidae) Charops obtusus متط فHym.: Ichneumonidae) ؿ) Cheiracanthium mildei مفترس (Araneae: Miturgidae) Chelonus aegyptia متط فؿ عمى اليرقات (Hym.: Braconidae) Chelonus inanitus متط فؿ عمى البيض كاليرقات (Hym.: Braconidae) Coccinella undecimpunctata مفترس (Col.: Coccinellidae) Compsilura concinnata متط فؿ عمى اليرقات (Dip.: Tachinidae) Cotesia marginiventris متط فؿ عمى اليرقات (Hym.: Braconidae) Cybocephalus micans مفترس (Col.: Cybocephalidae) Damaster blaptoides مفترس لميرقات (Col.: Carabidae) Drino imberbis متط فؿ عمى اليرقات (Dip.: Tachinidae) Hyposoter exiguae متط فؿ عمى اليرقات (Hym.: Ichneumonidae) Orius laevigatus مفترس (Hem.: Anthocoridae) Podisus sagitta مفترس (Hem.: Pentatomidae) Spodophagus lepidopterae متط فHym.: Pteromalidae) ؿ) Telenomus spodopterae متط فؿ عمى البيض (Hym.: Platygastridae) Trichogramma evanescens متط فؿ عمى البيض (Hym.: Trichogrammatidae)

صفحة 23 مف 91

الفصل الثاني

مواد البحث وطرائقه

صفحة 24 مف 91

مواد البحث وطرائقو: 2114 ن ف ذ البحث في مختبرات كميتي الزراعة كالعمكـ بجامعة تشريف خبلؿ الفترة الممتدة بيف العاميف ك2116 ـ.

2-1- عزؿ الفطر B. bassiana مف التربة: "Galleria Bait B.bassiana عزؿ الفطر مف التربة باتباع طريقة الجاليريا كطعـ )المصيدة( "Method المكصكفة مف قبZimmermann ؿ )1986( كMeyling )2117( كفؽ الخطكات التالية3

2-1-1- تربية دودة الشمع الكبرى Galleria mellonella مخبرياً: (Lepidoptera: Pyralidae) Galleria mellonella L. ج معت يرقات دكدة الشمع الكبرل مف 1.2 1.4 المناحؿ، ك رب يت مخبريان عمى بيئة الدقيؽ المككنة مف3 كغ دقيؽ الذرة، كغ لكؿ مف دقيؽ القم كنخالة القم كالحميب المجفؼ كمككنات جافة، ك1.5 كغ لكؿ مف العسؿ كالجميسيركؿ كمككنات رطبة، باإلضافة إلى الخميرة 111 غ/كغ مف الكزف الجاؼ، كذلؾ لمحصكؿ عمى األطكار المختمفة مف دكدة الشمع الكبرل بأعداد مناسبة لمتجارب )الشكBhatnagar and Bareth, 2004) )1-2 ؿ).

الشكؿ )2-1(: التربية المخبرية ليرقات دودة الشمع الكبرى .Galleria mellonella L

صفحة 25 مف 91

2-1-2- جمع عينات التربة: 1 2 49 ج معت عي نة تربة مف نظـ طبيعية كزراعية مختمفة في الساحؿ السكرم )جدكؿ - ( خبلؿ 1 2115 2114 مكسمي - . أ خذ حكالي كغ تربة لكؿ عي نة بسيطة بكاسطة مجرفة معق مة بييبككمكريد الصكديكـ 5%، عمى عمؽ 11 – 15 سـ مف سط التربة، كضعت كؿ عينة في كيس مف البكلي إيتيميف مرفقة ببطاقة معمكمات عف مكاف كتاريخ الجمع كمصدر التربة. أ خذ لكؿ مكقع حكالي 4 – 5 عينات بسيطة حسب مساحة كشكؿ المكقع، ك خ مطت لمحصكؿ عمى عي نة مر كبة، كمف ثـ ن خ مت كن ق يت لمتخمص مف الحصى كالشكائب األخرل (Meyling, 2007).

الجدوؿ )2-1(: مصادر جمع عينات التربة مف المواقع المدروسة في الساحؿ السوري

مصدر العينة عدد المواقع No. of the locations Sample source تربة زيتكف 7 تربة بطاطا 4 تربة بقدكنس 1 نظـ بيئية زراعية Agricultural تربة باذنجاف 2 ecosystems تربة حمضيات 3 تربة لكزيات 4 تربة فميفمة )بيت ببلستيكي( 2 تربة بمكط 4 تربة ازدرخت 2 تربة أككاليبتكس 3 تربة سرك 2 نظـ بيئية طبيعية تربة بندؽ 1 Natural 3 Ecosystems تربة بكر ضفة نير 2 تربة سندياف 3 جانب طريؽ 3 مسط أخضر 3 المجموع Total 49

2-1-3- معاممة عينات التربة في المختبر: 48 B.bassiana ت ـ الكشؼ مخبريان عف كجكد الفطر في عينات التربة المجمكعة خبلؿ ساعة مف 3 2 511 251 جمعيا، حيث كضع حكالي غ تربة مف كؿ عي نة بعمب ببلستيكية صغيرة سعة غ، بكاقع -

صفحة 26 مف 91

G. مكر ارت لكؿ مكقع، ثـ ن قؿ إلى كؿ عمبة سبع يرقات بالعمر األخير مف دكدة الشمع الكبرل 26 mellonella المرب اة مخبريان، غط يت العمب ك كضعت في الحاضنة بشكؿ مقمكب عمى درجة الحرارة 81 1 ± س°، كرطكبة أكثر مف %، مع تقميب العمب بشكؿ يكمي لمتأكد مف تع ض ر اليرقات ألبكاغ الفطر في حاؿ كجكدىا. ت ـ الكشؼ عف اليرقات بشكؿ دكرم إلزالة اليرقات الميتة كالتعرؼ عمى سبب مكتيا. 3 5 أ خذت اليرقات الميتة عند كؿ ق ارءة، عق مت سطحيان بمحمكؿ ىيبككمكريد الصكديكـ % لمدة دقائؽ، ثـ 9 3 غسمت بالماء المقطر المعقـ م ارت كت ركت لتجؼ ىكائيان. ن قمت كؿ يرقة إلى طبؽ بترم سـ يحكم مستنبت PDA مع مضاد حيكم كاسع الطيAmoxicillin( ؼ(، كأ حكـ إغبلؽ األطباؽ بالبارافيمـ، ثـ B. bassiana 1 26 ح ض نت عمى الدرجة ± س° مع الكشؼ عنيا يكميان لمتأكد مف كجكد الفطر .(Zimmermann, 1986; Meyling, 2007)

2-1-4- تنقية وتصنيؼ العزالت الفطرية: G. mellonella ت ـ تعريؼ النكع بناءان عمى مظير اإلصابة عمى يرقات ، كعمى الشكؿ المكرفكلكجي لممستعمرات الفطرية عمى مستنبت Poinar and Thomas, 1984; Rehner et al., PDA) (2011. كذلؾ بالد ارسة المجيرية اعتمادان عمى شكؿ كحجـ كأبعاد األبكاغ الككنيدية كالخبليا المكلدة لؤلبكاغ، كذلؾ اعتمادا ن عمى بعض المفاتي التصنيفية Barron, 1972; Von Arx, 1981; Poinar) .and Thomas, 1984; Botton et al., 1990; Humber, 1997) PDA ن ق يت العزالت الناتجة عمى مستنبت ، كذلؾ بأخذ جزء مف مستعمرة الفطر بإبرة معقمة كاعادة زراعتيا في أطباؽ جديدة حتى الكصكؿ إلى مستعمرات نقية بالكامؿ، ك ج ددت باستم ارر، ك ح فظت عند الدرجة 4 °س لحيف االستخداـ.

2-1-5- اختبار القدرة اإلمراضية عمى يرقات دودة الشمع الكبرى G. mellonella:

دحرجت يرقات دكدة الشمع الكبرل بالعمر األخير لعدة دقائؽ عمى المستعمرات الفطرية، كذلؾ بعد 14 PDA تنمية العزالت الفطرية عمى مستنبت ككصكليا إلى مرحمة التب كغ )بعمر يكمان(، ن قمت اليرقات بعد ذلؾ إلى أطباؽ بترم تحكم أك ارؽ ترشي )مضافان إلييا 1 مؿ ماء مقطر معقـ( لتكفير الرطكبة المناسبة لنمك الفطر، بينما ن قمت اليرقات في مكررات الشاىد بعد دحرجتيا عمى المستنبت الغذائي بدكف المستعمرات الفطرية (Poinar and Thomas, 1984)، كذلؾ بكاقع 3 مكررات لكؿ عزلة ك5 يرقات 1 26 لكؿ مكرر. ح ض نت األطباؽ عمى الدرجة ± س°، كف ح ص ت بشكؿ يكمي كس ج ؿ عدد اليرقات الميتة، 1925 Abbott ح سبت النسب المئكية لممكت ك ص ححت كفؽ معادلة ) (3 نسبة المكت المصححة )%( = [)متكسط عدد األفراد الحية في الشاىد- متكسط عدد األفراد الحية في المعاممة(/ متكسط عدد األفراد الحية في الشاىد] × 111.

صفحة 27 مف 91

كت عد ىذه الخطكة ضركرية لمتأكد مف القدرة اإلمراضية لمعزالت الفطرية التي تـ الحصكؿ عمييا، كأف ىذه العزالت ىي السبب الفعمي لمكت يرقات دكدة الشمع أثناء عممية العزؿ.

2-2- دراسة بعض الشروط المناسبة لنمو الفطر B.bassiana مخبرياً: B.bassiana درس تأثير درجات الحرارة كالمستنبتات الغذائية الصنعية في نمك الفطر في المختبر، B4 B4 B2 كاست خدـ في ىذه التجارب العزلتاف ك ، كما درس تأثير اإلضاءة في نمك العزلة . 2-2-1- تأثير درجات الحرارة المختمفة في نمو الفطر B.bassiana:

ل ق حت أطباؽ بترم )9 سـ( تحكم عمى كمية كافية مف المستنبت الغذائي PDA مركزيان بقطعة )بقطر B4 B2 4 مـ( مأخكذة مف مستعمرة فطرية نشطة غير متب كغة )بعمر أربعة أياـ( لكؿ مف العزلتيف ك ، 1 35 31 25 21 15 ك ح ض نت في الظبلـ في حاضنات مستقمة عند درجات حرارة مختمفة ) ، ، ، ك ( ± س° 4 14 لم دة يكمان. است خدـ مكررات لكؿ معاممة )عزلة- درجة ح اررة(، كاعت مدت المعايير التالية لتقكيـ (Inglis et al., 2012) تأثير درجة الح اررة )مع دؿ النمك، إنتاج األبكاغ، كانبات األبكاغ( . Growth Rate أ- مع دؿ النمو : س ج ؿ النمك الشعاعي السطحي بشكؿ يكمي باستخداـ قطريف متعامديف مرسكميف مسبقان في مركز كؿ طبؽ بترم لقياس مع دؿ النمك. ح سب قطر النمك في

اليكـ األخير لمتجربة عند درجات الح اررة المختمفة، ك ح سبت سرعة النمك )مـ/ يكـ( مف معام ؿ االنحدار لقطر المستعمرة مقابؿ الزمف خبلؿ طكر النمك الخطي، حيث أف قياسات النمك مف اليكـ الثالث إلى اليكـ الرابع عشر تتناسب مع النمكذج الخطي مف النمط (y = v×t +b) حيث v: سرعة النمك الشعاعي )مـ/ يكـ(، 3y قطر المستعمرة، 3t الزمف، 3b ميؿ الخط المستقيـ (Fargues et al., 1992; Inglis, et al., 2012). Conidia Production ب- إنتاج األبواغ : ج معت األبكاغ الككنيدية مف كؿ طبؽ في اليكـ األخير لمتجربة )اليكـ الرابع عشر مف التحضيف( باستخداـ 11 مؿ ماء مقطر معقـ مضافان إليو 1.15% محمكؿ تكيف Tween 80] 81] )ماء تكيف(. كشط سط المستعمرة باستخداـ

إبرة معقمة لمحصكؿ عمى أكبر كمية ممكنة مف األبكاغ، رش المعمؽ الناتج باستخداـ طبقتيف مف الشاش إل ازلة قطع الميسيميكـ كالبيئة العالقة، ثـ كضع المعم ؽ النيائي عمى ر ج اج كيربائي Malassez 11 لمدة دقائؽ لضماف تكزع متجانس لؤلبكاغ. است خدمت شريحة ماالسييو Counting Chamber لحساب عدد األبكاغ باستخداـ المجير العادم التكبير 40x .(Lacey, 2012) Conidia Germination جػ- إنبات األبواغ : اخت برت حيكية األبكاغ مف خبلؿ اختبار قدرتيا 111 عمى اإلنبات، است خدمت ماصة ميكركلترية كأ ضيؼ ميكركلتر مف المعم ؽ البكغي الذم

صفحة 28 مف 91

15 PDA حصمنا عميو في الفقرة السابقة إلى مستنبت ك ح ض نت األطباؽ عمى درجات الحرارة ) - 21- 25- 31 ك 35( ±1°س لمدة 24 ساعة.

مز ج ت األبكاغ الككنيدية بعد التحضيف مع قطرة مف الكتكفينكؿ أزرؽ القطف، ك ح سبت النسبة المئكية لئلنبات بالعد العشكائي لما ال يقؿ عف 311 بكغة لكؿ ساحة رؤية تحت المجير، ك3

ساحات رؤية لكؿ معم ؽ. كاعت برت البكغة منبتة في حاؿ كاف طكؿ أنبكبة اإلنبات أكثر مف نصؼ طكؿ البكغة (Yeo et al., 2003; Inglis et al., 2012).

2-2-2- تأثير مستنبتات غذائية مختمفة في نمو الفطر B. bassiana: B.bassiana درس تأثير عدة مستنبتات غذائية في نمك الفطر كىي3 "ديكستركز آغار البطاطا (PDA (Potato Dextrose Agar، سكركز آغار البطاطا (PSA (Potato Saccharose Agar، دقيؽ القم (Wheat meal)، دقيؽ الذرة (Maize meal)، مستنبت آغار الرز (Rice Agar)، PSA PDA CMC (Carboxymethyl Cellulose) كمستنبت السيميمكز ". ح ض ر مستنبتا الػ كالػ كفؽ الكميات كالتعميمات المنصكح بيا عمى العبكات التجارية لممستنبتيف، ك ح ض ر مستنبت السيميمكز 1997 St Leger CMC كفؽ كآخركف ) (، بينما ح ض رت بقية المستنبتات كما ىك مكصكؼ مف قبؿ Kreisel ك Schauer )1987( )الجدكؿ 2-2(. بعد تحضير المستنبتات كتعقيميا باألكتكغبلؼ، أ ضيؼ إلى ك ؿ منيا مضاد حيكم كاسع الطيؼ 511 11 Amoxicillin ) ( لتثبيط نمك البكتريا بمعدؿ ممغ لكؿ مؿ مستنبت، ثـ ص ب ت في أطباؽ بترم )9 سـ(، ل ق مركز ك ؿ منيا بقطعة بقطر 4 مـ مف مستعمرة غير متبكغة لمفطر المدركس )بعمر 4 أياـ( 1 26 B2 B4 لكؿ مف العزلتيف ك ، ثـ ح ض نت األطباؽ عند الدرجة ± س° في الظبلـ. أ ع دت أربعة مكررات لكؿ معاممة )عزلة – مستنبت( كأ خذت الق ارءات بشكؿ دكرم لحساب ك ؿ مف مع دؿ النمك كانتاج األبكاغ كانبات األبكاغ كما في الفقرة )1-2-2(. Kreisel B.bassiana 2 2 جدوؿ ) - (: مكونات المستنبتات الغذائية المستخدمة الختبار تأثيرىا في نمو الفطر وفؽ و )1987( Schauer الوستنبت انمكونات )نكم 1 ل ماء مقطر معقم( طريقة انتحضير 03 غ دقيق القمح دقيق القمح تغسل الحبوب وتجفف، ثم تطحن 51غ آغار الكمية المطلوبة بعد الوزن وتوضع في 03 غ دقيق الذرة ماء مقطر وتسخن حتى الغليان، ترشح دقيق الذرة 51غ آغار للحصول على الخالصة، ويعاد غليها 03 غ دقيق الرز مع اآلغار حتى تمام ذوبانه وتعقم آغار الرز 51غ آغار باألوتوغالف

صفحة 29 مف 91

2-2-3- تأثير اإلضاءة في نمو الفطر B.bassiana: B4 B.bassiana أ جريت ىذه التجربة لمعرفة تأثير اإلضاءة المستمرة في نمك الفطر ، است خدمت العزلة . 5 حيث ت مت الزراعة عمى رؤكس مثمث بكاقع مكررات لكؿ معاممة، ح ض نت أطباؽ المعاممة األكلى تحت ظركؼ اإلضاءة المستمرة، كأطباؽ المعاممة الثانية في الظبلـ في حاضنتيف مستقمتيف عند درجة حرارة 14 1 26 ± س° لمدة يكما ن، كفي اليكـ األخير لمتجربة ت ـ ع د المستعم ارت المتش كمة في كؿ طبؽ (Inglis et al., 2012) 2 2 Schuett biotec.de Count باالستعانة بجياز الع دادة )الشكؿ - ( .

الشكؿ )2-2(: جياز ع دادة المستعمرات Schuett biotec.de count

2-3- تربية دودة ورؽ القطف Spodoptera littoralis في المختبر:

ج معت يرقات دكدة كرؽ القطف مف خبلؿ القياـ بجكالت حقمية. ظيرت الحشرة بكثافات عالية خبلؿ مكسـ 2114-2115 عمى العديد مف المحاصيؿ المزركعة كالنباتات البرية في ظركؼ الساحؿ السكرم، 3 2 كيكض الجدكؿ ) - ( أىـ النباتات التي كجدت عمييا الحشرة بمختمؼ أطكارىا، كمدل تن كع عكائميا ضمف الفصائؿ النباتية، ج معت يرقات الحشرة مف النباتات المصابة كمف التربة المكجكدة حكليا كعمى عمؽ 2 سـ تحت سط التربة. لكحظ إصابتيا لكافة أطكار النبات مف البادرة كحتى مرحمة الثمار.

است بعدت األفراد المريضة كتمؾ التي ترافقت بكجكد متطف بلت خارجية ظاىرة لمعيف. كقد مي زت األفراد المريضة مف خبلؿ انخفاض النشاط كالشيية، كتم يز بعضيا بانخماص دائرم في حمقات البطف األكلى Ricinus communis L. مع لكف رمادم. بينما ت ـ إكثار األف ارد األخرل مخبريان عمى أك ارؽ الخركع )الشكؿ 2-3( قبؿ استخداميا في التجارب، لمتأكد مف سبلمتيا كخمكىا مف المتطفبلت الداخمية صفحة 31 مف 91

كالممرضات مف جية، كلمكصكؿ إلى أعداد كافية بالطكر المناسب إلجراء التجارب عمييا مف جية أخرل.

كما ت ـ تسجيؿ بعض المعمكمات التي تتعمؽ بسمكؾ الحشرة كدكرة حياتيا، كبعض المتطفبلت التي كجدت Bennett 1993 Huber Goulet مترافقة مع دكدة كرؽ القطف في الحقؿ، كالتي ص ن فت كفؽ ك ) ( ك )2118( ك CABI )2114(. 2115 2114 S.littoralis 3 2 الجدوؿ ) - (: العوائؿ النباتية التي وجدت عمييا حشرة في الساحؿ السوري في موسـ - االسـ العربي االسـ العممي الفصيمة الممفوBrassicaceae Brassica oleracea L. ؼ الخيار .Cucurbitaceae Cucumis sativus L الفستؽ السوداني .Fabaceae Arachis hypogaea L الموبياء .Fabaceae Vigna unguiculata L الفاصولياء .Fabaceae Phaseolus vulgaris L المموخية .Tiliaceae Corchorus olitorius L البقدونس .Apiaceae Petroselinum crispum Mill البقمة .Portulacaceae Portulaca oleracea L القطيفة .Amaranthaceae Amaranthus sp النعناع .Lamiaceae Mentha varidis L البندورة .Solanaceae Lycopersicum esculentum Mill البامياء .Malvaceae Abelmoschus esculentus L نجيميات برية - Poaceae

الشكؿ )2-3(: التربية المخبرية لدودة ورؽ القطف S.littoralis عمى أوراؽ الخروع Ricinus communis L.

صفحة 31 مف 91

2-4- اختيار العزلة الفطرية األكثر شراسة عمى دودة ورؽ القطف: PDA است خدمت يرقات العمر الثالث كعمر كسيط في ىذه التجربة، زرع الفطر عمى مستنبت ، ثـ دحرجت يرقات دكدة كرؽ القطف بالعمر الثالث حديثة االنسبلخ عمى مستعمرة فطرية متبكغة لع دة دقائؽ، ن قمت بعد ذلؾ إلى أطباؽ بترم تحكم أك ارؽ خركع نظيفة مع كجكد كرؽ ترشي مرطب، بينما ن قمت اليرقات في مكررات الشاىد بعد دحرجتيا عمى المستنبت الغذائي بدكف المستعمرات الفطرية Poinar) 11 3 and Thomas, 1984) ، كذلؾ بكاقع مكررات لكؿ عزلة، ك يرقات لكؿ مكرر. س ج مت القراءات Abbott بشكؿ يكمي، ح سبت النسب المئكية لممكت ك ص ح حت كفؽ معادلة المذككرة سابقان. 2-5- اختبار حساسية األطوار المختمفة لدودة ورؽ القطف لإلصابة بالفطر :B.bassiana

أجريت ىذه االختبارات لتحديد طكر الحشرة األكثر قابمية ن لئلصابة بالفطر B.bassiana )األكثر 4 2 حساسيةن(، اس تخدمت فييا العزلة التي اختيرت بنتيجة االختبار الذم أ جرم في الفقرة ) - ( عمى شكؿ 6 معم ؽ بكغي تركيزه 11 بكغ/ مؿ. 2-5-1- تحضير المعمؽ البوغي لمعزلة المستخدمة: 1 2 2 ح ض ر المعم ؽ البكغي لكؿ اختبار عمى حده كما ذكر في الفقرة - - - ب، ثـ عدؿ بإضافة ماء 6 تكيف لمكصكؿ إلى التركيز المطمكب ) 11 بكغ/ مؿ( كفؽ المعادلة3 نسبة التخفيؼ= النسبة المحسكبة/ النسبة المطمكبة (Lacey, 2012(.

2-5-2- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في عذارى دودة ورؽ القطف: 5 11 ن ف ذت التجربة باستخداـ عذارل لك ؿ مكرر ك مكررات لكؿ معاممة، اختيرت العذارل حديثة 116 5 24 التش كؿ بعمر مف ساعة كحتى ساعة، ر شت بػ مؿ مف المعمؽ البكغي لمعزلة الفطرية بالتركيز 5.5 11 بكغ/ مؿ، ت ركت حتى تجؼ ىكائيا ن، ك كضعت كؿ عذارل في عمبة ببلستيكية ارتفاعيا حكالي سـ لمسماح بحركة البالغات في حاؿ خركجيا، مع كرؽ ترشي مرط ب، ك غط يت العمب بشاش لمتيكية، بينما 7 1 26 ر شت مكر ارت الشاىد بماء تكيف فقط، ك ح ض نت العمب عمى الدرجة ± س°، أ خذت القراءات بعد ك 24 11 14 يكمان مف التحضيف. ت ـ تحضيف مؿ مف المعمؽ البكغي المستخدـ لمدة ساعة لمعرفة نسبة 111 إنبات األبكاغ الفطرية مف خبلؿ عد بكغة ككنيدية عمى األقؿ، ك ع دت البكغة منبتة في حاؿ كاف طكؿ أنبكبة اإلنبات أكثر مف نصؼ طكؿ البكغة، كىذه الخطكة ميمة لمتأكد مف حيكية األبكاغ في المعمؽ، كقدرتيا عمى إحداث العدكل لمعائؿ الحشرم )Lacey, 2012(.

صفحة 32 مف 91

2-5-3- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في بالغات دودة ورؽ القطف: 11 ن ف ذت التجربة باستخداـ بالغات لكؿ مكرر دكف األخذ بالحسباف ككف ىذه البالغات ا نذككر أـ إناثا ن، 116 5 5 ك مكر ارت لكؿ معاممة، ر شت البالغات بػ مؿ مف المعمؽ البكغي لمعزلة الفطرية بالتركيز بكغ/ 511 مؿ، كضعت البالغات بعد ر شيا في عمب ببلستيكية سعة مؿ مغطاة بشاش كمكضكع داخميا قطع 11 كرتكنية صغيرة لكضع البيض كعبكات صغيرة مممكءة بمحمكؿ سكرم لمتغذية تركيز %، بينما ر شت 1 26 مكر ارت الشاىد بماء تكيف فقط، ك ح ض نت العمب عمى الدرجة ± س°، أ خذت القراءات بشكؿ يكمي )العبيدم كسمير، 2111(.

2-5-4- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور البيض لدودة ورؽ القطف: 24 12 ج معت لطع البيض بعمر مف – ساعة مف أكعية التربية مع القصاصات الكرقية التي كضعت 21 عمييا، ت رؾ عمى كؿ قصاصة لطعة كاحدة، كفي كؿ لطعة ت رؾ بيضة، كأ زيؿ البيض الباقي كاعت برت 5 مك رر، ح ض ر مكررات لكؿ معاممة، غمست كؿ قصاصة مع البيض في المعم ؽ البكغي لمعزلة الفطرية 116 )تركيز بكغ / مؿ( لمدة دقيقة كاحدة، بينما غمست مكر ارت الشاىد في ماء تكيف، ت ركت لتجؼ 9 ىكائيان، ثـ ن قمت كؿ قصاصة إلى طبؽ بترم ) سـ( مز كد بكرؽ ترشي مرطب، ك ح ض نت عمى الدرجة 2111 4 2 1 26 ± س°. س ج مت النسب المئكية لمفقس بعد ك أياـ مف المعاممة )العبيدم كسمير، (. 2-5-5- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور اليرقة لدودة ورؽ القطف:

أ جريت ىذه التجربة عمى ع دة أعمار يرقية )األكؿ، الثالث كالسادس )األخير(( بشكؿ مستقؿ، 5 11 است خدمت يرقات لكؿ مكرر ك مكر ارت لكؿ معاممة، ر شت اليرقات بالمعمؽ البكغي لمعزلة الفطرية 9 ك ر شت مكر ارت الشاىد بماء تكيف فقط، ت ركت اليرقات لتجؼ ىكائيان كن قمت إلى أطباؽ بترم سـ تحكم أكراؽ خركع نظيفة، ماعدا العمر األخير است خدمت عبكات كبيرة لمحاكلة تجنب االفتراس الذاتي كالسماح 1 26 5 بحركة اليرقات ككنيا بطكؿ حكالي سـ، ح ض نت عمى الدرجة ± س° كس ج مت القراءات بشكؿ يكمي مع استبداؿ أكراؽ الخركع عند الحاجة )العبيدم كسمير، 2111(.

2-6- مقارنة تأثير تراكيز مختمفة مف العزلة الفطرية في العمر اليرقي الثالث مف دودة ورؽ القطف:

2-6-1- تحضير التراكيز المدروسة: 1 5 2 114 116 118 ط ب قت التراكيز ، ك بكغ/مؿ، ح ض رت ىذه التراكيز كما في الفقرة ) - - (.

صفحة 33 مف 91

2-6-2- تنفيذ التجربة: 11 5 است خدمت مكررات لكؿ معاممة ك يرقات لكؿ مكرر، ر شت يرقات كؿ معاممة بالتركيز الخاص 5 بيا، بينما ر شت يرقات الشاىد بماء تكيف فقط باستخداـ مرش يدكم سعة مؿ، ت ركت لتجؼ ىكائيان 9 كن قمت إلى أكراؽ خركع نظيفة مكضكعة عمى كرؽ ترشي مرطب ضمف أطباؽ بترم سعة سـ، كأ غمقت 1 26 األطباؽ بقطعة شاش لمسماح بتيكية اليرقات، كضعت األطباؽ في حاضنة عمى درجة حرارة ± س°، ت مت مراقبة اليرقات يكميا ن ك س ج مت النتائج كالمبلحظات. ح سبت النسبة المئكية المصححة لمكت اليرقات كما في السابؽ. Lacey Probit Analysis LC ح سب التركيز القاتؿ النصفي 50 كفؽ طريقة كما ذكرت عند )2112( باتباع الخطكات التالية3 أ خذ عدد اليرقات الحية كالميتة لكؿ مكرر بكؿ معاممة في اليكـ األخير لمتجربة، ثـ ح سبت نسبة Abbott المكت التي سب بيا التركيز المدركس مف الفطر، ك ص ح حت ىذه النسبة كفؽ معادلة المذككرة سابقان. LC بعد ذلؾ ح سب التركيز القاتؿ النصفي 50 مف خبلؿ حساب المكغاريتـ العشرم لمتراكيز المستخدمة كايجاد قيـ probit مف الجدكؿ الخاص بيا، حيث أف كؿ قيمة لنسبة المكت المصححة تقابؿ قيمة محددة LC probit مف ، ثـ رسـ المنحني البياني المكافؽ كاست خرجت قيمة 50 مف معادلة االرتباط الخطي المكافقة. LC 91 كبنفس الطريقة ح سب كؿ مف التركيز القاتؿ لػ % مف مجتمع الحشرة 90 كالزمف القاتؿ النصفي .LT50

2-7- التحميؿ اإلحصائي: CoStat ح م مت النتائج باستخداـ البرنامج اإلحصائي لحساب الفركؽ المعنكية بيف العكامؿ المدركسة المختمفة باستخداـ اختبار التبايف One Way ANOVA عند أقؿ فرؽ معنكم LSD عند االحتماؿ 5%. بينما استخدـ البرنامج SPSS V.15 لحساب كؿ مف LC90 ،LC50 ك LT50.

صفحة 34 مف 91

الفصل الثالث

النتائج والمناقشة

صفحة 35 مف 91

أوال ً- النتائج والمناقشة 3-1-عزؿ الفطر B. bassiana مف التربة وتصنيفو:

3-1-1- نتائج العزؿ: B. bassiana ت ـ الحصكؿ عمى ست عزالت مختمفة مف النكع مف ترب متنكعة بعد معاممة عينات 6 12.24 1 3 التربة التي ج معت في ىذا البحث الجدكؿ ) - (، ككانت نسبة التردد )الظيكر( % )أم عزالت مف أصؿ 49 عينة(.

جدوؿ )3-1(: عزالت الفطر B. bassiana حسب مصدرىا البيئي في المواقع المدروسة

رقـ العزلة رمز العزلة مصدر التربة المنطقة B1 1 بكر تمسنكف/ سيؿ عكار B2 2 لكزيات ضير صفرا/ بانياس B3 3 بمكط كرتك/ سيؿ عكار B4 4 بقدكنس فارش كعبية/ بانياس B5 5 سندياف أكبيف/ بانياس B6 6 أككاليبتكس حديقة البطرني/ البلذقية B.bassiana بي نت النتائج كجكد الفطر في كبل النظاميف البيئييف )الطبيعي كالزراعي( مع تردد أكبر في األنظمة الطبيعية التي ع زؿ منيا أربع عزالت مقابؿ عزلتيف مف األنظمة الزراعية، كيعكد ذلؾ إلى تد خؿ اإلنساف في األنظمة الزراعية مف خبلؿ عمميات الحراثة كتقميب التربة كالتي ت ع ضر األبكاغ الفطرية لؤلشعة فكؽ البنفسجية المكجكدة في اإلشعاع الشمسي كتؤدم بالنتيجة لقتميا، أك مف خبلؿ استخداـ

المبيدات الكيميائية الفطرية كالتي تؤثر في معظـ الحاالت بشكؿ مثب ط كقاتؿ لمك كنات الفطر. ذكر كؿ مف Klingen ك Haukeland )2116( كSabbour كآخركف )2111( التأثير المثبط لممبيدات الفطرية في نمك الفطكر الممرضة لمحشرات المكجكدة في التربة، كبيف األخير الدكر السمبي لبعض المبيدات Asi Pyrithrum Thymol B. bassiana الحشرية أيضان في نمك الفطر كمنيا ك ، بينما تك ص ؿ )2112( إلى أف المبيدات الحشرية الحاكية عمى الكمكربيرفكس chlorpyriphos، كالميثكميؿ B. bassiana thiodicarb methomyl ، كالثيكديكارب ثب طت نمك كانتاج أبكاغ الفطر ، كما أ كد Thakur كSandhu )2111( عمى أف جمع العينات لعزؿ الفطكر الممرضة لمحشرات يجب أف يككف في حقكؿ غير معاممة بالمبيدات الفطرية كالحشرية. تت فؽ نتيجة البحث مع ما ذكره كؿ مف Chandler كآخركف )1997( كأحمد كآخركف )2111( بأف النكع B. bassiana ينتشر في األ ارضي غير المزركعة كخاصة ن الغابات، بشكؿ أكبر مف انتشاره في األراضي المزركعة، كمع Sun كLiu )2118( المذاف ذكرا أف النكع B. bassiana كاف مف األنكاع

صفحة 36 مف 91

األكثر ترددان التي تـ عزليا مف الترب الطبيعية لمغابات في الصيف، كذلؾ كجد مت ارفقان بشكؿ طبيعي مع العديد مف الحشرات كمنيا حشرة S. litura في اليند بنسبة ظيكر Thakur and Sandhu, %71.14) 2116 Mora 2010) . كقد أثبت ك آخركف ) ( بأ ف طريقة العزؿ تؤث ر في نسبة ظيكر الفطر، كبأف طريقة الجاليريا كطعـ كانت األفضؿ لعزؿ النكع B.bassiana، كىذا ما أ كده أيضا ن Meyling كEilenberg 2116 ) ( كما ن كىا إلى ضركرة تقارب المسافة بيف عينات التربة التي يتـ جمعيا ضمف نفس المكقع لمحصكؿ عمى نتائج أفضؿ. كيبدك أف النكع B.bassiana يتأث ر بشكؿ كبير بالتعديبلت البيئية، فقد لكحظ أنو عدا عف كجكده بشكؿ أكبر في األنظمة الطبيعية، فإنو حتى ضمف األنظمة الزراعية يتكاجد في

ترب البساتيف كأشجار الفاكية، التي ربما تتطم ب عمميات خدمة أقؿ كتؤ مف ظؿ أكبر كحماية لؤلجزاء التكاثرية لمفطر مف اإلشعاع الشمسي مقارنة ن بترب المحاصيؿ الحقمية التي تتطمب عمميات خدمة أكثر، كقد أشار إلى ىذه النقطة ك ؿ مف Sun كآخركف )2118( كKhudhair كآخركف )2114(. 14 سبؽ تسجيؿ ىذا النكع في الترب السكرية، فقد س ج مت عزلة منو في المنطقتيف الشمالية كالشرقية (Humber et al., 2011) 1998 خبلؿ عاـ ، كما س ج ؿ في محافظة البلذقية مف قبؿ أحمد كآخركف )2111( مف عينات ترب مأخكذة مف نظاميف بيئييف مختمفيف )طبيعي كزراعي(، ككانت عزالت أنكاع الجنس Beauveria األكثر ترددان بيف الفطكر المعزكلة الممرضة لمحشرات، كبمغت نسبة ترددىا مف Almanoufi 45 المجمكع الكمي لمعزالت %. كما س ج ؿ الفطر في المنطقة الجنكبية مف سكرية مف قبؿ كآخركف )2012) في ترب حقكؿ كبساتيف فاكية مختمفة، كبمغت نسبة ظيكر الفطكر الممرضة لمحشرات 16.56%، بينما بمغت نسبة ظيكر الجنس Beauveria 13.33% مف إجمالي ىذه الفطكر.

3-1-2- توصيؼ الفطر B.bassiana: (Barron, 1972; B.bassiana تـ التع رؼ عمى النكع باالعتماد عمى المفاتي التصنيفية التالية Von Arx, 1981; Poinar and Thomas, 1984; Botton et al., 1990; Humber, 1997; Rehner et al., 2011) ، ك ح ددت أىـ مكاصفات العزالت الفطرية الناتجة. تشابيت المكاصفات المكرفكلكجية بالنسبة لمعزالت الست مف حيث طبيعة نمك المستعمرة كبنيتيا، كأىـ المعايير التي اعت مدت في التصنيؼ ىي3 أ. طبيعة النمو عمى مستنبت PDA: شكؿ المستعمرة دائرم تقريبان مع لكف أبيض لمكجو العمكم كأبيض مائؿ لمصفرة لمكجو السفمي، تك زعت المستعمرات بشكؿ كثيؼ كمنتشر عمى المستنبت الغذائي بسبب سيكلة انفصاؿ األبكاغ الككنيدية عف حكامميا، كانتشارىا عمى سط المستنبت لتعطي مستعمرات عديدة )الشكؿ 3-1(، المستعمرة بطيئة النمك نسبيان فقد استغرقت حكالي 14 يكمان ليصؿ قطر المستعمرة إلى حكالي 51 ممـ، كىذا يتكافؽ مع ما تكصؿ إليو Rehner كآخركف )2111( حيث تراكح قطر مستعمرات النكع B.bassiana في اليكـ العاشر مف التحضيف بيف 15- 42 ممـ.

صفحة 37 مف 91

أ ب

الشكؿ )3-1(: طبيعة نمو مستعمرات الفطر B. bassiana الكثيؼ والمنتشر عمى مستنبت PDA أ. الوجو السفمي لممستعمرة، ب. الوجو العموي لممستعمرة.

بنية المستعمرة3 قطنية، أك مسحكقية )عمى شكؿ بكدرة(، ظيرت تحت المكبرة حبيبية بسبب تجمع آالؼ األبكاغ الككنيدية عمى سط المستعمرة )الشكؿ 3-2(، كالمستعمرة إما مرتفعة قميبلن عف سط المستنبت، أك مسطحة تمامان، كفي حاالت قميمة ش كمت أعمدة دقيقية بيضاء مرتفعة بشكؿ كاض )الشكؿ B1 3 3 - (، لكحظ بالنسبة لمعزلة كجكد س رة مركزية )انخفاض( في مركز كؿ مستعمرة كىك الشكؿ 4 3 B.bassiana النمكذجي لمستعمرات النكع )الشكؿ - (، كما س ج ؿ عند تجديد العزالت عمى مستنبت الػ Oosporein PDA تش كؿ صبغة حمراء المكف عمى المستنبت، التي ي نتجيا الفطر كمستقمبات ثانكية كتمعب دكر مضاد حيكم )الشكؿ 3-5(. باإلضافة إلى تش كؿ بنيات فطرية مترافقة مع مستعمرة الفطر Cordyceps B.bassiana تبي ف بأنيا أكياس أسكية )زقية( لمطكر الجنسي كذلؾ بعد مقارنتيا مع Srivilai كآخركف )2113( كSung كآخركف )2116( ك Sung كآخركف )2117( )الشكؿ 6-3(.

الشكؿ )3-2(: بنية مستعمرة الفطر B.bassiana عمى مستنبت الPDA ػ: أ. البنية القطنية، ب. المظير الحبيبي تحت المكبرة، جػ. البنية الدقيقية )المسحوقية(

صفحة 38 مف 91

الشكؿ )3-3(: ارتفاع مستعمرة B.bassiana عف سطح مستنبت PDA، أ. مسطحة، ب. مرتفعة قميالً، جػ، د. تشكؿ أعمدة دقيقية مرتفعة Synnema عف سطح المستنبت

الشكؿ )3-4(: مستعمرة نموذجية لمفطر B.bassiana )العزلة B1 ( ي الحظ وجود سرة مركزية

صفحة 39 مف 91

الشكؿ )3-5(: إنتاج الصبغة الحمراء Oosporein عمى المستنبت الغذائي PDA بفعؿ الفطر B.bassiana

Cordyceps bassiana 6 3 الشكؿ ) - (: األكياس الزق ية لمطور الجنسي B.bassiana أ- تش كؿ األكياس الزق ية بجانب مستعمرات ب-تش كؿ األبكاغ الككنيدية عمى الميسيميكـ الناتج عف إنبات األبكاغ الزق ية

ب. المواصفات المجيرية: تتج مع الخبليا المكل دة لؤلبكاغ )الفياليدات( بشكؿ سكارم في عناقيد كثيفة، شف افة، ذات شكؿ قاركرم، كعنؽ صغير )الشكؿ 3-8(، األبكاغ الككنيدية شف افة كركية أبعادىا بيف -1 2.5 ميكركف، غير مقسمة، تتش كؿ عمى محكر كاذب كتش كؿ مايشبو الزكزاؾ بدءان مف قمة االتصاؿ 7 3 الككنيدم إلى الخمية المكل دة لؤلبكاغ كيك ض ذلؾ في الشكؿ ) - (. تكافقت ىذه المكاصفات المكرفكلكجية المجيرية كمكاصفات المستعمرة عمى المستنبت الصنعي مع ما ذكره Kulu كآخركف )2115( ك Rehner كآخركف )2111(.

صفحة 41 مف 91

)Rehner et al., 2011)

الشكؿ )3-7(: الخمية المول دة ألبواغ الفطر B.bassiana مع التسنيف المنشاري الزكزاؾ )بالمقارنة مع صورة مرجعية(.

B.bassiana 8 3 الشكؿ ) - (: تج مع الخاليا المولدة ألبواغ الفطر بشكؿ سواري.

3-1-3- اختبار القدرة اإلمراضية عمى يرقات دودة الشمع الكبرى G. mellonella:

بي نت النتائج بدء المكت في بعض العزالت في اليكـ الثاني لمتجربة، كأظيرت العزالت الست شراسة عالية كسرعة في إحداث المكت، بمغت نسب المكت 111% لجميع العزالت بعد 3- 5 أياـ مف المعاممة 2 3 )الجدكؿ - (. بالتالي أكد ت ىذه التجربة بأف العزالت الست التي ت ـ الحصكؿ عمييا ممرضة لمحشرات، كتعكد نسب المكت العالية الناتجة، لحساسية دكدة الشمع لمممرضات الفطرية مف جية، كلشراسة العزالت الفطرية المستخدمة مف جية أخرل )الشكؿ 9-3(.

صفحة 41 مف 91

جدوؿ )3-2(: متوسط نسب الموت التي أحدثتيا العزالت الست لمنوع B. bassiana في يرقات العمر األخير لدودة الشمع الكبرى )n=15(

المعاممة متوسط نسب الموت )%( الزمف مف بدء العدوى )يوـ( الشاىد 1 5 5 111 B1 5 111 B2 3 111 B3 3 111 B4 5 111 B5 5 111 B6

أ ب

B.bassiana 9 3 الشكؿ ) - (: أعراض إصابة يرقات دودة الشمع بالفطر أ. بعد الموت مباشرة ) تغي ر الموف(، ب. نموات الفطر تغم ؼ جثث اليرقات خارجيا ً بعد أسبوع مف الموت

3-2- دراسة بعض الشروط المناسبة لنمو الفطر B.bassiana مخبرياً: 3-2-1- تأثير درجات الحرارة المختمفة في نمو الفطر B.bassiana:

أ. معدؿ النمو Growth Rate: 31 15 B.bassiana بي نت النتائج بأف الفطر كاف قاد انر عمى النمك عمى درجات الح اررة بيف ك س°. بمغت درجة الحرارة المثمى لنمك الميسيميكـ 25 س° كتناقص النمك بشكؿ ممحكظ عمى الدرجة 15 س°، فشمت كؿ األطباؽ في النمك عمى درجة الحرارة 35 س° )الشكؿ 3-14(. لـ تكجد أم فركؽ معنكية بيف 3 3 العزلتيف المدركستيف في ىذا المجاؿ، كي ظ ير الجدكؿ ) - ( قطر النمك في اليكـ الرابع عشر مف B.bassiana التحضيف عند درجات الح اررة المختبرة. ح س ب معدؿ النمك الشعاعي )مـ/ يكـ( لعزلتي عند درجات الحرارة المختبرة كبمغ 1 مـ/ يكـ عند درجة الحرارة 35 س° لكمتا العزلتيف، بينما كصؿ إلى 1.7 ك 1.8 مـ/ يكـ لمعزلتيف B4 كB2 عمى التكالي عند درجة الحرارة 25 س°، ك1.8 ك1.9 مـ/ يكـ

صفحة 42 مف 91

11 3 15 عند الدرجة س° )الشكؿ - (. كما درست العبلقة بيف مع دؿ النمك كالزمف خبلؿ أياـ االختبار، كبي نت النتائج بأف قطر نمك المستعمرة تزايد خطيان بيف اليكـ الثالث كال اربع عشر مف التحضيف كيظير R2 ذلؾ كاضحان مف خبلؿ قيـ معامؿ التحديد التي ت بيف عبلقة ارتباط خطي قكم جدان بيف مع دؿ نمك المستعمرة كالزمف لدرجات الحرارة المدركسة )شكؿ 3-11 ك 12-3(.

الجدوؿ )3-3( متوسط قطر النمو لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف عند درجات الحرارة المختبرة

متوسط قطر النمو )مـ ± SD( درجة الحرارة Temperature العزلة LSD (P<0.05) Isolate (°C) B2 B4

3.27 +A**c1.2±*12.6 Ab3.1 ±10.8 15 2.55 Aab0.9 ±23.3 Aa1.9 ±22.8 20 5.72 Aa3.4 ±25.5 Aa4. 2 ±24.3 25 3.24 Ab0.4 ± 22.5 Aa0.8 ± 21.5 30 d 0±0 c 0±0 35 2.51 3.79 LSD (p<0.05)

*بيانات قطر النمك ىي عبارة عف متكسط أربعة مكررات، ** المتكسطات التي يمييا أحرؼ صغيرة مختمفة في كؿ عمكد )درجة + ح اررة( تختمؼ معنكيان، المتكسطات التي يمييا أحرؼ كبيرة مختمفة في السطر الكاحد )عزلة( تختمؼ معنكيان.

1.8 1.7 1.7 1.8 1.6 1.6 1.5 1.6 1.4 1.2 0.9 1 0.8

0.8 B4 الشعاعي النمو معدل النمو الشعاعي

( 0.6 B2 مم

/ 0.4 يوم

) 0.2 0 0

0 15 20 25 30 35 درجة الحرارة )س°(

الشكؿ )3-11(: تأثير درجات الحرارة )15، 21، 25، 31 و 35 س°( في مع دؿ نمو ميسيميوـ عزلتي الفطر B4( B.bassiana وB2( في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف (LSD"0.05" = 0.24)

صفحة 43 مف 91

25°C: y= 2.992x+0.832 20°C: y= 2.592x+2.782 °C: R2= 0.961 15 y = 1.586x + 0.246 R2= 0.986 30 R² = 0.995 25 30°C: y= 2.931x-0.664 R2= 0.982 20 15

10 النمو الشعاعي

(

مم )

5 0 3 5 6 7 9 10 13 14

C 25°C 20°C 15°C 35°C°30 الزمن )اليوم(

الشكؿ )3-11(: مع دؿ النمو الشعاعي الخطي )مـ/ يوـ( لمعزلة B2 خالؿ 14 يوماً مف التحضيف عمى درجات الح اررة )15، 21، 25، 31 و35 س°(.

30 15°C: y= 1.288x+0.653 20°C: y= 2.55x+2.725 R2= 0.978 R2= 0.980 25 30°C: y= 2.610x+0.289 25°C: y= 2.551x+3.957 R2= 0.958 R2= 0.980 20

15

النمو الشعاعي (

10 مم

)

5

0 3 5 6 7 9 10 13 14 الزمن )اليوم( 30°C 25°C 20°C 15°C 35°C

الشكؿ )3-12(: معدؿ النمو الشعاعي الخطي )مـ/ يوـ( لمعزلة B4 خالؿ 14 يوماً مف التحضيف عمى درجات الح اررة )15، 21، 25، 31 و35 س°(.

ب. إنتاج األبواغ Conidia production: أبدت كؿ المكررات قدرة عمى إنتاج األبكاغ عمى درجات 116 15.3 25 31 15 الحرارة بيف - س°. أ دت درجة الحرارة س° إلى أعمى تبكغ، كصؿ إلى × 6 ك21.2 × 11 بكغ/ مؿ لمعزلتيف B4 كB2 عمى التكالي، كانخفض إنتاج األبكاغ إلى )1.5 ك 6 1.1( × 11 بكغ/ مؿ عمى التكالي، عند درجة الحرارة 15 س°، بينما تكقؼ إنتاج األبكاغ بشكؿ B2 B4 35 كم ي عند درجة الحرارة س°، لـ ت بلحظ فركؽ معنكية بيف العزلتيف المختبرتيف ك )الجدكؿ 4-3(.

صفحة 44 مف 91

الجدوؿ )3-4(: متوسط إنتاج األبواغ لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف تحت درجات الح اررة المختب رة 116 SD درجة الحرارة متوسط إنتاج األبواغ )بوغ/ مؿ( ± )× ( LSD (P<0.05) Temperature العزلة Isolates B2 B4 (°C) + ** * 0.69 A c0.3 ± 1.1 Acd0.5 ± 1.5 15 5.43 Ab1.9 ± 7.6 Ab3.9 ± 10.3 20 5.91 Aa4.2 ± 20.2 Aa2.4 ± 15.3 25 4.03 Ab2.3 ± 8.6 Bc2.4 ± 3.7 30 c 0±0 d 0±0 35 3.48 3.54 LSD (p<0.05) 3* ىذه القيـ متكسط ألربعة مكررات، **3 المتكسطات المتبكعة بأحرؼ صغيرة مختمفة في كؿ عمكد )درجة حرارة( تختمؼ + معنكيان، 3 المتكسطات المتبكعة بأحرؼ كبيرة مختمفة بنفس السطر )عزلة( تختمؼ معنكيان. جػ. إنبات األبواغ 3Conidia Germination أ جريت ىذه التجربة لمعرفة درجة الحرارة المثمى B.bassiana المطمكبة إلنبات أبكاغ عزلتي الفطر المدركستيف. أظيرت مك ررات العزلتيف قدرة جيدة عمى اإلنبات ضمف المجاؿ الحرارم 15- 31 س°، مع إنبات أمثؿ ضمف المجاؿ 25- 31 س°. كصمت نسب اإلنبات إلى 81.4 ك78.5 % عند درجة الحرارة 25 س° لمعزلتيف B4 كB2 عمى 15 51 التكالي، بينما لـ تتجاكز % لكمتا العزلتيف عند الدرجة س°، كلـ ي بلحظ كجكد فركؽ معنكية بيف 35 العزلتيف. في ىذه التجربة لـ ي ختب ر تأثير درجة الحرارة س° بسبب فشؿ الفطر أساسان في النمك 13 3 كالتب كغ عند ىذه الدرجة )الشكؿ - (.

81.4 90 72.5 78.5 76.2 70.7 74.2 80 70 50.2 60 48.7 50 B4

40 اإلنبات % 30 B2 20 10 0 15 20 25 30 درجة الحرارة )س°(

الشكؿ )3-13(: النسبة المئوية إلنبات األبواغ الكونيدية لعزلتي الفطر B.bassiana بعد 24 ساعة مف التحضيف عمى درجات الحرارة المختمفة LSD (P<0.05)=3.67 31 15 B.bassiana بي نت النتائج قدرة الفطر عمى النمك كالتبكغ كاإلنبات عمى درجات الحرارة بيف ك 35 21 س° مع مجاؿ أمثؿ فكؽ س°، لكف نمك الفطر كتبكغو تكق فا تمامان عند درجة ح اررة س°، كي عتقد

صفحة 45 مف 91

بأف سمكؾ النمك ىذا ربما يتعم ؽ بالمناخ المعتدؿ لممنطقة التي ع زؿ منيا الفطر حيث درجة الحرارة أقؿ B.bassiana 31 مف س° عمى مدار السنة تقريبان. عمكما ن يعتمد تح مؿ الفطر لدرجات الح اررة المتط رفة (Meyling and Eilenberg, 2007) أكالن عمى السبللة، فيك يمتمؾ تن كع كراثي كبير في مجتمعاتو (Rehner et al., 2006) cryptic species كالعديد مف األنكاع المخفية ، كثانيان عمى البيئة التي عزؿ منيا الفطر، فإذا كانت العزلة مف منطقة دافئة ستككف متح ممة لدرجات الحرارة العميا، كالعكس إذا عزلت مف منطقة باردة فستككف أفضؿ عند درجات الحرارة المنخفضة (Inglis et al., 2001) لذلؾ نجد تباينات بيف األبحاث المختمفة لتحديد مجاؿ الحرارة الذم ينمك عميو الفطر B.bassiana. أظير Walstad كآخركف )1971( بأف الفطر B.bassiana يتطم ب درجات حرارة مف 15-35 °س Magan Hallsworth 31 25 لينمك، أما درجات الحرارة المثالية فتقع بيف - س°، بينما بي ف ك )1999( بأف مجاؿ الحرارة لنمك ميسيميكـ الفطر كاف بيف 5 ك 31 س°، كدرجة الحرارة المثمى 25 س°. B.bassiana 2113 Yeo كما أظير كآخركف ) ( بأف مع دؿ نمك مستعمرات كاف أسرع عند درجات الحرارة 21 ك25 س° مقارنة ن بػدرجات الحرارة األدنى 11 ك15 س°. بينما أشار Quesada- Moraga كآخركف )2116( إلى أف الحرارة العظمى لنمك B.bassiana تراكحت بيف 31.8 ك 36.6 س°، في حيف (Kessler et al., 2003; 31 27 ذكر آخركف بأف الحرارة فكؽ - س° تثب ط نمك الميسيميكـ كتقتؿ األبكاغ 32 25 1998 James Cheong, 2015) . كح دد كآخركف ) ( المجاؿ األمثؿ لنمك الفطر بيف - س°. عدا عف ارتباط نمك الميسيميكـ بدرجات الحرارة، كذلؾ يتعمؽ إنتاج األبكاغ كاإلنبات بيا إلى ح د كبير. 25 بي نت نتائج البحث أف درجات الحرارة المثمى لمتبكغ كاإلنبات بمغت س°. تناقصت النسبة المئكية Burges 15 لئلنبات بشكؿ ممحكظ عندما ح ض ف الفطر عمى س°. تكافقت ىذه النتائج مع كؿ مف (1981) كYeo كآخركف )2113( ك Ortiz- Catón كآخركف )2111( كNussenbaum كآخركف B.bassiana 2112 Qazzaz 2113 ) (. بي ف ) ( بأف إنبات األبكاغ الككنيدية لمفطر كاف أكثر حساسية ن لدرجات الحرارة مف نمك الميسيميكـ، فبينما نما الفطر في المجاؿ الحرارم بيف 11 ك 31 س°، فشمت األبكاغ الككنيدية في اإلنبات عمى درجة حرارة أقؿ مف 15 س° الدرجة التي لـ يختبر في دراستنا درجات حرارة أقؿ منيا، كتكافؽ مف نتائج البحث المذككر مع نتائجنا فشؿ الفطر في النمك عمى درجة 35 س°. B.bassiana يستطيع تح مؿ التع رض لمحرارة المرتفعة إذا كاف كقت التع رض قصير، فقد كصمت (Hsia 15 35 44.9 نسبة إنبات األبكاغ الككنيدية لو إلى % عندما ح ض ف عمى الدرجة س° لمدة دقيقة 2113 Nussenbaum et al., 2014) . كبالمقارنة مع فطكر أخرل ممرضة لمحشرات بي ف كآخركف ) ( B.bassiana Metarhizium anisopliae بأف أكثر تح مبلن لمحرارة العالية مف ، حيث تنبت عزالت M. anisopliae عمى 35 س° مع نسبة إنبات 96.4% مقابؿ 1% لB.bassiana ػ عمى درجة الحرارة

نفسيا. ي عد التح مؿ الحرارم عند الفطكر الممرضة لمحشرات مف العكامؿ الرئيسة في تصنيعيا تجاريان ألف استخداميا سيككف في بمداف كبيئات مختمفة. كمؤخ انر ب ذلت جيكد لمحصكؿ عمى مستعم ارت متح ممة ح ارريان

صفحة 46 مف 91

مف النكع B.bassiana، كذلؾ باقتراف مستعمرتيف تابعتيف لعزلتيف مأخكذتيف مف مناطؽ جغرافية مختمفة المناخ، كتسييؿ حدكث اندماج كالتحاـ ىيفي عمى المستنبت الصناعي، كذلؾ لمحصكؿ عمى مستعمرة (Kim et al., 2011) جديدة تمتمؾ صفات المستعمرتيف السابقتيف كتككف أكثر تح مبلن لمحرارة . يجب اإلشارة أيضان إلى أف العديد مف العزالت التي ت ظ ير فعالية عالية في المختبر، قد تككف أقؿ فعالية في الحقButt et al., 2001) ؿ)، كالنتائج المحق قة في المختبر ال تعكس بالضركرة الفعؿ الحقيقي لمفطر، فالتجارب المتحكـ بيا قد تفشؿ في أف تأخذ بالحسباف تأثير سمكؾ الحشرة نفسيا عمى فعالية الفطر .(Goettel et al., 2000)

15°س 21°س 25°س

31°س 35°س

الشكؿ )3-14(: نمو العزلة B2 عمى درجات الحرارة المدروسة في اليوـ الرابع عشر مف التحضيف

3-2-2- تأثير مستنبتات غذائية مختمفة في نمو الفطر B. bassiana: (B2, B4) B.bassiana أ. مع دؿ النمو: أبدت عزلتا الفطر قدرة عمى النمك عمى المستنبتات CMC المختمفة التي ت ـ استخداميا باستثناء مستنبت السيميمكز ، مع كجكد فركؽ معنكية في النمك PDA عمى المستنبتات كعدـ كجكد فركؽ معنكية بيف العزلتيف، تف كؽ مستنبتا دقيؽ الذرة كالػ ، فكاف مع دؿ النمك أسرع عمييما مقارنة ن بالمستنبتات األخرل، بينما لـ يختمؼ النمك معنكيان عمى مستنبتات الPSA ػ كدقيؽ القم كآغار الرز )جدكؿ 3-5( )الشكؿ 15-3(.

صفحة 47 مف 91

الجدوؿ )3-5(: متوسط قطر النمو لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر بعد التحضيف عمى المستنبتات المختبرة

متوسط قطر النمو )هلن ± SD) المستنبتات LSD (p<0.05) Isolate Media العزلة B2 B4 3.13 #A**a2.4±*49.1 B b1±28 PDA 10.64 Ab0.8 ±28 Ab8.7 ±31.8 PSA 17.83 دقيؽ الذرة Aa14.2 ±51.9 Aa3.5 ±46.5 14.92 آغار الرز Ab9.6 ±33.4 Ab7.5 ±30.9 2.25 دقيؽ القم Ab1.3 ±28 Bb1.3 ±24.4 c 0±0 c 0±0 CMC 11.69 8.14 LSD (p<0.05) *3 بيانات قطر النمك ىي متكسط ألربعة مكررات، **3 المتكسطات المتبكعة بأحرؼ صغيرة مختمفة في كؿ عمكد )مستنبت( تختمؼ # معنكيان، 3 المتكسطات المتبكعة باحرؼ كبيرة مختمفة في كؿ سطر )عزلة( تختمؼ معنكيان.

PSA دقيؽ الرز دقيؽ القمح

PDA دقيؽ الذرة

الشكؿ )3-15(: نمو العزلة B4 عمى المستنبتات الغذائية المدروسة في اليوـ الرابع عشر مف التحضيف

ب. إنتاج األبواغ: أظيرت النتائج قدرة الفطر B.bassiana عمى إنتاج األبكاغ عمى كؿ المستنبتات المدركسة مع فركؽ معنكية بيف العزلتيف كبيف المستنبتات، عمكمان PDA كاف األفضؿ مع 25-21 ×

صفحة 48 مف 91

6 11 بكغ/ مؿ )جدكؿ 3-6(. في ىذه التجربة لـ يستخدـ مستنبت السيميمكز لعدـ تم كف الفطر مف النمك عميو.

الجدوؿ )3-6(: متوسط إنتاج األبواغ )بوغ/ مؿ( لعزلتي الفطر B.bassiana في اليوـ الرابع عشر مف التحضيف عمى المستنبتات الغذائية المختمفة

6 متكسط عدد األبكاغ ± SD )× 11( المستنبت الغذائي LSD العزلة 5% سكركز آغار ديكستركز آغار دقيؽ القم آغار الرز دقيؽ الذرة البطاطا البطاطا 2.53 +A**a 3.3 ±20.5 Abc0.8 ±3.9 Bb0.8 ±5.56 Bc1.2 ±2.6 Abc0.8 ±3.7 B4 6.82 Aa5.2 ±25 Bb3.9 ±11 A b6.6 ±16.2 Ab4 ±17.3 Ca0.9 ±3.6 B2 LSD 7.54 4.88 8.07 5.13 1.5 5% + ** 3 المتكسطات المتبكعة بأحرؼ صغيرة مختمفة في كؿ سطر )مستنبت( تختمؼ معنكيان، 3 المتكسطات المتبكعة بأحرؼ كبيرة مختمفة بنفس العمكد )عزلة( تختمؼ معنكيان.

جػ. إنبات األبواغ: تحق ؽ أعمى معدؿ إنبات عمى مستنبتي PDA ك PSA، كتراكح بيف 81- 85% بينما 7 3 49 كاف مع ؿد اإلنبات األقؿ عمى مستنبت آغار الرز حكالي % )جدكؿ - (. الجدوؿ )3-7(: متوسط النسبة المئوية إلنبات األبواغ الكونيدية لعزلتي الفطر B.bassiana المزروعة عمى المستنبتات المختمفة بعد 24 ساعة مف التحضيف.

SD النسبة المئكية لئلنبات ± )LSD العزلة المستنبت الغذائي p<0.0 5) Isolate دقيؽ القم آغار الرز دقيؽ الذرة PDA PSA * 14.85 Aa 2.8 ±85.2 Aa6.9 ±80.9 Ba19.2 ±58.2 Ab3.5±48.2 Aa6.9±74.5 B4 8.84 Aa6.4 ±84.5 Aa6.1 ±80.5 Aa6.7± 81.7 Ac6.3±49.6 Bb2.9± 61 B2 LSD - 8.55 11.24 24.91 8.87 9.25 (p<0.0 5) * : المتكسطات المتبكعة بأحرؼ صغيرة مختمفة في كؿ سطر )مستنبت( تختمؼ معنكيان، بينما المتبكعة بأحرؼ كبيرة مختمفة في كؿ عمكد )عزلة( تختمؼ معنكيان.

المستنبتات المستخدمة في ىذه الدراسة بسيطة التحضير، كمككناتيا رخيصة نسبيان كمتاحة بسيكلة، لـ ت ستخدـ أية مستنبتات سائمة، ألف المستنبتات السائمة تف ض ؿ عادة ن إلنتاج األبكاغ الببلستية كالرشاحات الفطرية بينما الصمبة ال تتش كؿ فييا سكل األبكاغ الككنيدية، كحدكث العدكل كما أ كد Soper كWard )1981( مرتبط بكجكد األبكاغ الككنيدية بسبب ثباتيا تحت الظركؼ الجافة مدة أطكؿ مقارنة ن بالببلستية. كصؿ متكسط معدؿ النمك في اليكـ األخير لمتجربة إلى 51.9± 14.2 ك 49.1± 2.4 )مـ ±SD( عمى مستنبتي دقيؽ الذرة ك PDA عمى التكالي لمعزلة P<0.05( B2(. كتكافقت ىذه النتيجة مع صفحة 49 مف 91

Sabbour كآخركف )2111( حيث كصؿ معدؿ النمك الشعاعي األعظمي عمى مستنبت PDA إلى .88.2 مـ، بينما في دراسة Petlamul كPrasertsan )2112( لـ يتجاكز قطر النمك عمى مستنبت تشابCDA) Czapeck Dox agar ؾ) 37.11 مـ. مف المبلحظ بأف إنتاج كانبات األبكاغ الككنيدية ال يرتبط بشكؿ مطمؽ بنمك المستعمرة، بمعنى أنو ليس مف الضركرم أف يككف اإلنتاج األعمى مف األبكاغ مكافؽ لقطر النمك األكبر، فمثبلن بالنسبة لمعزلة B4 46.5 بمغ قطر النمك في اليكـ األخير لمتجربة عمى مستنبت الذرة مـ كتف كؽ بذلؾ معنكيان عمى قطر النمك عمى مستنبت PDA الذم كصؿ إلى 28 مـ )الجدكؿ 3-5(، بينما كجدنا أف إنتاج األبكاغ كاإلنبات عمى 6 مستنبت الPDA ػ في اليكـ األخير مف التجربة بمغ 21.5 × 11 بكغ /مؿ ك 85.2% عمى التكالي، 6 كتفكؽ بذلؾ عمى مستنبت الذرة حيث بمغت القيـ عمى التكالي 5.56 × 11 بكغ /مؿ ك%58.2 )الجدكليف 3-6 ك 3-7(، كىذا يتفؽ مع ما تكصؿ إليو Safavi كآخركف )2117( مف عدـ االرتباط المطمؽ بيف قطر النمك كانتاج األبكاغ. PDA بي نت نتائج الدراسة الحالية بأف مستنبت كاف األفضؿ إلنتاج األبكاغ كاإلنبات مع فركؽ معنكية بيف العزلتيف عمى المستنبتات المختمفة، كتكافقت النتائج مع كؿ مف Sabbour كآخركف )2111( ك Burges )1981(، بينما اختمفت نتائج البحث مع نتائج الجبكرم كآخركف )2116( الذيف تكصمكا إلى أف مستنبت بذكر الرز ىك األكثر إنتاجان ألبكاغ النكع B.bassiana مف بيف المستنبتات التي قامكا بدراستيا، 8 كبمغ إنتاج األبكاغ عمى ىذا المستنبت 3.2 × 11 بكغ/ مؿ، بينما بمغ إنتاج األبكاغ عمى مستنبت الرز 6 6 في ىذا البحث 2.6 × 11 ك 17.3 × 11 بكغ/ مؿ لمعزلتيف B4 ك B2، عمى التكالي. كذلؾ تكصؿ Nelson كآخركف )1996( إلى أف مستنبت الرز كاف أفضؿ لنمك B.bassiana مقارنة ن بالقم كالشعير. بمغ أعمى معدؿ إنبات 85.2 ك 84.5% عمى مستنبت PDA لمعزلتيف B2 كB4 عمى التكالي، تبلىما 81.9 ك 81.5 % عمى PSA، كبالرغـ مف نسب اإلنبات العالية التي تـ الحصكؿ عمييا فإف اإلنبات الفعمي عمى غبلؼ الحشرة قد يككف بطيئا ن كذلؾ تبعان لمرطكبة المتكفرة (Ugine et al., 2005). B.bassiana 2116 El- Damir كجد ) ( بأف األبكاغ الككنيدية لمفطر ت نت ج بأعداد كبيرة عمى الذرة، القم كالدخف كمكاد نمك، كىذا ما ذكره Fogal كآخركف )1986(، كما أشاركا إلى أف المستنبتات الصنعية المستخدمة لتحفيز التبكغ عند النكع B.bassiana يجب أف تحتكم عمى نتركجيف عضكم أك ال

عضكم كبأف الفطر ينمك كيتب كغ بغزارة عمى مكاد طبيعية منيا البطاطا كالذرة كالنخالة كغيرىا. B.bassiana 2111 Rehner 1989 Roberts بي ف كؿ مف ) ( ك كآخركف ) ( أف الفطر ينمك بشكؿ جيد عمى مستنبت سابكرد المضاؼ إليو الخميرة SDAY) Sabouraud's dextrose yeast agar) كبمغ قطر النمك عميو في دراسة األخير 15- 32 مـ مقارنة ن مع 15- 42 مـ عمى مستنبت PDA. بينما تك ص مت نتائج البحث إلى أف الفطر غير قادر عمى االستفادة مف السيميمكز كمادة لمنمك فقد بي ف Sabbour كزمبلؤه )2111( أف الفطر كاف ا نقادر عمى استخداـ أية كربكىيدرات تضاؼ إلى المستنبت،

صفحة 51 مف 91

ككاف السكركز المادة األفضؿ لمنمك )87.25 مـ( يميو الغمكككز )56.25 مـ(، كتعكد عدـ قدرة الفطر عمى النمك نيائيان عمى مستنبت السيميمكز إلى عدـ إنتاج الفطر لئلنزيـ المحمؿ لمسيمميمكز Cellulase، كتكافقت ىذه النتيجة مع ما تكصؿ إليو St Leger كآخركف )1997( كFernandes كآخركف )2112( B.bassiana بأف الفطر لـ ي ظي ر أم نشاط كاض إلنزيـ السيمكالز كلـ ين ـ عمى مستنبت السيمميمكز، بينما كجد Leopold ك Sams ìn àkovà )1971( بأف ميسيميكـ B.bassiana ينتج ىذا اإلنزيـ بكميات قميمة اكأشار إلى أف النشاط األعمى لو يككف في ميسيميكـ بعمر 4 – 5 أياـ مف التحضيف.

3-2-3- تأثير اإلضاءة في نمو الفطر B.bassiana:

بي نت النتائج الدكر السمبي الكاض لتحضيف الفطر تحت ظركؼ إضاءة مستمرة مقارنة ن مع تحضينو 16 3 8 3 في الظبلـ، كيك ض الجدكؿ ) - ( متكسط عدد المستعم ارت المتش كمة في األطباؽ )الشكؿ - (، حيث بمغ متكسط عدد المستعمرات ضمف الطبؽ الكاحد 192 مستعمرة / طبؽ عند التحضيف في ظبلـ، Zhang 35 بينما لـ يتجاكز مستعمرة لمطبؽ عند تحضينو تحت ظركؼ إضاءة مستمرة. كب يف كآخركف B.bassiana 2119 ) ( أ ف التحضيف في ظبلـ مستمر يعطي نمكا ن جيدا ن لمفطر ، لكف تعريض الفطر لئلضاءة مدة محددة ي ح ضر تشكيؿ األبكاغ بكثافة أكبر، كأظير الباحثكف أ ف التع ضر لمضكء األزرؽ 3 لمدة دقائؽ يحفز تشكيؿ األبكاغ، كزيادة المدة عف ذلؾ تخف ض التبكغ، كتك ص مكا أف تحفيز التبكغ بالضكء ال يجب أف يحدث إال بعد التحضيف في الظبلـ لمدة ال تقؿ عف 96 ساعة، ىذا كقد ذكر Beauveria 1998 Jenkins كآخركف ) ( أف الجنس ي ح ضف في الظبلـ كينمك بشكؿ جيد، كلكف Butt العزالت التي ع رضت لئلضاءة أبدت شراسة أعمى مف تمؾ التي ح ض نت في ظبلـ كم ي. كقد أشار 2111 كآخركف ) ( إلى حاجة أبكاغ الفطر لمظبلـ لكي تتح رر مف حكامميا الككنيدية.

بدكف إضاءة إضاءة مستمرة

الشكؿ )3-16(: تحضيف العزلة B4 تحت ظروؼ إضاءة مختمفة )اليوـ الرابع عشر(

صفحة 51 مف 91

الجدوؿ )3-8(: متوسط عدد مستعمرات الفطر B.bassiana )العزلة B4( المتش كمة بعد التحضيف تحت ظروؼ إضاءة مستمرة وظالـ م دة 14 يوما ً المعاممة متوسط عدد المستعمرات في الطبؽ الواحد ±SD بدوف إضاءة a 28.58 ±192.2 إضاءة مستمرة b 10.15±32 31.27 LSD (P<0.05)

3-3- تربية دودة ورؽ القطف:

رب يت دكدة كرؽ القطف في المختبر عمى درجة حرارة الغرفة عمى أكراؽ خركع، كت ـ الحصكؿ عمى 18 3 17 3 األطكار المختمفة لمحشرة بأعداد كافية إلجراء التجارب )الشكؿ - ، - (. س ج مت العديد مف المتطفبلت كج دت مت ارفقة ن مع الحشرة في الطبيعة، منيا ما ىك تجميعي خارجي مثؿ المتطفؿ .Hymenoptera: Eulophidae) Euplectrus sp)، كمنيا ما ىك إفرادم داخمي ذك تعذر خارجي مثؿ المتطفHym.: Ichneumonidae) Charops sp. ؿ) )الشكؿ 19-3، 21-3، 21-3(. تب يف أثناء تربية دكدة كرؽ القطف في المختبر بدء تغذية اليرقات حديثة الفقس في أماكف فقسيا عمى شكؿ كشط بسيط كنافذة )الشكؿ 3-17- جػ(، كانتقاليا إلى التثقيب بدءان مف العمر اليرقي ال اربع. امتمكت يرقات العمريف األكؿ كالثاني أشعا انر عمى جسميا، كما امتمكت القدرة عمى إنتاج خيكط تستخدميا لبلنتقاؿ بيف األكراؽ لمتغذية، أك لبلنتقاؿ مف مكاف فقس البيض في حاؿ كاف عمى جدراف كعاء التربية إلى األك ارؽ، كبدءان مف العمر الثالث فقدت ىذه األشعار كلـ تعد تش كؿ ىذه الخيكط. ككاف جدي انر بالذكر االختبلؼ الشديد في ألكاف كتزيينات أجساـ اليرقات الناتجة عف لطعة البيض نفسيا، كخاصةن في األعمار األخيرة، فمنيا ما نجده بمكف بني أك ت اربي، كمنيا ما نجده بمكف رمادم مسكد، كمنيا ما ىك مز يف بخط أصفر عمى طكؿ الجسـ مف الناحية البطنية كمر بعات سكداء كأخرل فقيرة بالتزيينات )الشكؿ 3-17- ك(، أما بالنسبة لمبقعتيف السكداكيف المميزتيف ليرقات النكع S.littoralis فقد تكاجدتا دائمان، كانتشرت ظاىرة االفتراس الذاتي بيف يرقات العمر األخير )الشكؿ 3-17- ق( كقد يعكد ذلؾ لمتكاصؿ البصرم بيف اليرقات كصغر حجـ أكعية التربية كشراىة اليرقات بيذا العمر. تب يف انخفاض نسبي في خصكبة اإلناث في التربية المخبرية مقارنةن مع تمؾ التي جمعت يرقاتيا مف الحقؿ، فمع ك ؿ جيؿ جديد في المختبر كاف يق ؿ عدد البيض الذم تضعو األنثى الكاحدة خبلؿ حياتيا مقارنةن مع عدد البيض الذم كضع مف إناث الجيؿ األكؿ التي جمعت مف الطبيعة، كقد يعكد ذلؾ لصغر أكعية التربية، عدـ تأقمـ البالغات عمى الحركة داخميا، كعمى التغذية السكرية البديمة عف رحيؽ األزىار الطبيعي، ككنا نمجأ إلى إعادة جمعيا مف الحقكؿ. ففي المختبر اختمؼ عدد البيض في كؿ لطعة حسب 21.12±65 111 31 عدد الطبقات التي كضع فييا، فت اركح بيف - بيضة ) ( عند كضعو في طبقة كاحدة،

صفحة 52 مف 91

كبيف 111- 511 )311±42.12( عند كضعو في أكثر مف طبقة )الشكؿ 3-17- أ، ب(، بينما في 2111 1111 الحقؿ ت ق در خصكبة األنثى بيف - بيضة خبلؿ حياتيا. 8 كما ظير كاضحا ن االرتباط الشديد بيف م دة كؿ طكر كدرجة الحرارة، فتراكحت مدة العذراء مف أياـ في شير آب إلى 15 يكمان عمى درجة الح اررة 23 – 24 س°، ككصمت إلى حكالي الشير عندما كانت 25 9 3 11 الح اررة تنخفض ليبلن إلى ما تحت س°. كي ظير الجدكؿ ) - ( م دة كؿ طكر عمى درجة الحرارة 2115 EFSA 51 س° كقراءات لػ فردا ن مف ك ؿ طكر. بي ف ) ( ىذا االرتباط بيف دكرة حياة دكدة كرؽ القطف كدرجات الحرارة، فعمى الدرجة 1 س° يستغرؽ كؿ مف طكر البيضة، اليرقات كالعذارل 9 ك 34 ك 27 يكما ن، عمى التكالي، بينما عمى الدرجة 36 س° تستغرؽ فقط 2 ك 11 ك 8 أياـ، عمى التكالي.

الجدوؿ )3-9(: م دة أطوار دودة ورؽ القطف S.littoralis عمى درجة حرارة وسطية 25 س° (n = 50(

الطور المدة )اليوـ( المتوسط ± SD 1.11±1.75 قبؿ العذراء 2-1.5 1.12±14 العذراء 15-13 1.24±8.5 البالغة 11-7 1.11±3.5 البيض 4-3 1.12±2.5 عمر أكؿ 3-2 1.11±3 عمر ثاني 3 1.11±3.5 عمر ثالث 4-3 اليرقة 1.11±3.5 عمر رابع 4-3 1.1±3.5 عمر خامس 4-3 1.12±5.5 عمر سادس 6-5

صفحة 53 مف 91

أ. لطعة بيض كضع في طبقتيف ب. لطعة بيض قبيؿ الفقس جػ. يرقات عمر أوؿ

د. يرقات عمر ثالث كرابع ق. ظاىرة االفتراس الذاتي

ك. التبايف في ألكاف كتزيينات يرقات العمر السادس

الشكؿ )3-17(: اطور البيضة واليرقة لدودة ورؽ القطف S. littoralis

صفحة 54 مف 91

طكر ما قبؿ العذراء طكر العذراء

عذراء حديثة التشكؿ طكر البالغة

الشكؿ )3-18(: اطور العذراء والبالغة لدودة ورؽ القطف S.littoralis

الشكؿ )3-19(: المتطفEuplectrus sp. ؿ متطفؿ خارجي تجميعي مف غشائية األجنحة فصيمة Eulophidae عمى يرقات دودة ورؽ القطف S.littoralis

صفحة 55 مف 91

الشكؿ )3-21(: متطفؿ داخمي عمى يرقات دودة ورؽ القطف S.littoralis

الشكؿ )3-21(: عذراء متطفCharops sp. ؿ مف غشائية األجنحة فصيمة Ichneumonidae عمى يرقات األعمار األولى لدودة ورؽ القطف S. littoralis

3-4- اختيار العزلة الفطرية األكثر شراسة عمى دودة ورؽ القطف:

است ع ممت يرقات العمر الثالث في ىذا االختبار كلكحظ بدء المكت في اليكـ الثاني لمتجربة عند كؿ العزالت تقريبا ن، ككصمت نسبتو إلى 111% عند معظـ العزالت في اليكـ الخامس لمتجربة )الجدكؿ -3 .)11

صفحة 56 مف 91

جدوؿ(3-11(: تأثير عزالت الفطر B. bassiana في يرقات العمر الثالث لدودة ورؽ القطف (n=30) متوسظ نسب انموت انمصححة )%( اليوم انمتوسظ ± LT50 SD العزلة اليوم األول اليوم الثاني الرابع الخامس )يوم( الثالث للتجربة 3.7 c14.16 ±34.14 5..1 62.4 45.2 6.6 3 B1 2.8 ab35.45 ±51.60 533 .1.6 0..4 46.6 6.6 B2 3.3 bc41.68 ±24..2 .4.. .4.4 01.5 0.0 3 B3 2.5 a30.23 ±65.84 533 533 ...0 56.6 0.0 B4 2.9 ab33.32 ±52.08 533 ...0 65.. 0.0 3 B5 3.2 bc23.58±22.5. .4.4 55.2 63.5 6.6 3 B6 الشاهد d0.3±0.96 6.6 6.6 6.6 3 3 - - 56.61 LSD 5%

5 LSD بي ف اختبار الفركؽ المعنكية عند مستكل االحتماؿ % كجكد فركؽ معنكية بيف كؿ العزالت B6 B3 B1 B4 مف جية كبيف معاممة الشاىد مف جية أخرل، كما لكحظ تف كؽ العزلة عمى العزالت ، ك ، كعدـ كجكد فركؽ معنكية بيف العزالت B5 ،B3 ،B2 كB6، باإلضافة إلى الفركؽ المعنكية بيف العزالت LT اعت م د معيار قيمة 50 )الزمف القاتؿ النصفي(، أم العزلة األسرع في إحداث المكت كالتي كانت متقاربة لكؿ العزالت كبمغت أقؿ قيمة ليا 2.5 يكـ لمعزلة B4، كنتيجة ن ليذه المعطيات اختيرت العزلة B4 لمتابعة التجارب عمييا )الجدكؿ 3-11(. كبالرغـ مف أنو سبؽ تجريب العزالت الست عمى يرقات دكدة الشمع، إال أف ىذه الخطكة كانت ضركرية لتحديد العزلة األكثر شراسة عمى دكدة كرؽ القطف، فالعزالت الفطرية لنفس النكع تختمؼ بمداىا العكائمي كسبلالت مف نفس النكع تبدم اختبلفات في اإلمراضية كالشراسة تجاه الحشرات العائمة (Todorova, 2000; Petlamul and Prasertsan, 2012)، كظير B.bassiana 2117 El- Katatny Ahmed ىذا كاضحان في د ارسة ك ) ( حيث سب بت إحدل عزالت 5 91 نسبة مكت % ليرقات العمر الخامس بعد أياـ مف المعاممة، بينما أ دت عزلة أخرل مف نفس النكع إلى نسبة مكت 1% ليرقات العمر الخامس بعد نفس المدة.

كبالنسبة لمعزالت األخرل التي تـ استبعادىا مف استكماؿ التجارب م ررت باستمرار )كؿ شيريف أك ثبلثة أشير( عمى يرقات دكدة الشمع G.mellonella كي ال تفقد شراستيا، كىذا ما أشار إليو Parker كآخركف )2111( عندما ذكركا بأف الممرضات الفطرية يمكف أف تفقد شراستيا بعد نمكىا كتكاثرىا لعدة أجياؿ عمى أكساط صنعية دكف التعرض لمعكائؿ بسبب ر دات فعؿ كراثية كاستقبلبية، كيمكف الحفاظ عمى الشراسة مف خبلؿ إمرار الفطر عمى الحشرات العائمة )إحداث عدكل لمعائؿ بشكؿ متكرر( كاعادة عزلو منيا.

صفحة 57 مف 91

الجدوؿ )3-11(: أىـ مواصفات العزلة B4 مف الفطر Beauveria bassiana

المواصفات المالحظات لوف المستعمرة أبيض لمكجو العمكم، أبيض مائؿ لمصفرة لمكجو السفمي شكؿ وبنية المستعمرة دائرية تقريبان، البنية مسحكقية )دقيقية( ارتفاع المستعمرة عف سطح المستنبت مرتفعة قميبلن، تظير أحيانان سرة مركزية األبواغ الكونيدية كركية أك بيضاكية أبعادىا 1.1-2 ميكركف أك 1.1-2.5 ميكركف الخاليا المولدة لألبواغ شفافة قاركرية الشكؿ سرعة النمو 1.7 مـ/يكـ عند درجة حرارة 25 س° طرطكس- بانياس- فارش كعبية- تربة مزركعة بقدكنس، ارتفاع مكاف العزؿ المنطقة 211 ـ عف سط البحر، عمؽ أخذ العينة 11- 15 سـ

3-5- اختبار حساسية األطوار المختمفة لدودة ورؽ القطف لإلصابة بالفطر :B.bassiana

3-5-1- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في عذارى دودة ورؽ القطف:

بمغت نسبة إنبات األبكاغ الككنيدية 72.1% كىذا يدؿ عمى حيكية األبكاغ في المعم ؽ البكغي، كقدرتيا 12 3 عمى إحداث العدكل عمى العائؿ الحشرم، يك ض الجدكؿ ) - ( النسب المئكية لخركج البالغات كنتيجة 6 لمعاممة العذارل بالتركيز 11 بكغ/ مؿ مف العزلة B4.

جدوؿ )3-12(: متوسط النسب المئوية لخروج البالغات عند معاممة عذارى S.littoralis بالمعم ؽ البوغي لمفطر 6 B.bassiana بالتركيز 11 بوغ/ مn=50) ؿ)

متوسط خروج البالغات )%( ± SD المعاممة Treatment بعد 9 يكـ مف المعاممة بعد 15 يكـ مف المعاممة

العزلة b8.36±42 b7.07±10 B4

الشاىد a0±100 a10±30 8.62 12.63 LSD 5%

5 LSD بي ف اختبار الفركؽ المعنكية عند مستكل االحتماؿ % كجكد فركؽ معنكية بيف معاممة العذارل بالفطر المدركس كمعاممة الشاىد، بمغت نسبة خركج البالغات 42% عند المعاممة بالعزلة B4 مقابؿ 111 % لمشاىد، ما يدؿ عمى كفاءة العزلة المستخدمة في مكافحة طكر العذراء، كتجم ت أعراض

صفحة 58 مف 91

اإلصابة بعد مكت العذارل بتغي ر المكف كخركج نمكات الفطر مف بيف حمقات الجسـ، كبمتابعة األفراد التي نجحت في الكصكؿ إلى طكر البالغة في معاممة الفطر، تبي ف أنيا مش كىة الشكؿ أك غير مكتممة النمك، كلـ تستطع إكماؿ دكرة حياتيا فمـ يحدث تزاكج ككضع بيض )الشكؿ 3-22(، كيعكد ذلؾ لتأثير الفطر كغزكه ألعضائيا الداخمية، بعكس البالغات المنبثقة مف معاممة الشاىد التي كانت طبيعية كحدث تزاكج ككضع بيض. تتفؽ نتائج ىذا البحث مع نتائج العبيدم كسمير )2111( حيث بمغت نسبة خركج البالغات 51% بعد 15 يكمان مف معاممة العذارل بالفطر B. bassiana، ككجد Vijayavani كآخركف )2119( أف عذارل Spodoptera litura أبدت حساسية مرتفعة لمفطر B.bassiana مع نسبة مكت 111% كLT50 بمغ 5.1 يكمان. Abou- Bakr كيبدك أف طكر العذراء لدكدة كرؽ القطف ح ساس لمممرضات الفطرية األخرل، فقد كجد )1997( أف نسبة مكت عذارل ىذه الحشرة بالفطر M. anisopliae بمغت 44.68% بعد 4 أسابيع مف M. anisopliae 2119 Anand المعاممة، كتك ص ؿ كآخركف ) ( إلى أنو عند استخداـ الفطر ضد عذارل 8 S.litura بمغت نسبة المكت 85.5% عند التركيز 11 بكغ / مؿ، بينما مع النكع Cordyceps cardinalis بمغت 57.3%. كما كجد El- Katatny )2111( أف الفطر Aspergillus flavus أدل 2114 Shoulkamy 111 إلى مكت عذارل دكدة كرؽ القطف بنسبة %، كتك ص ؿ أيضا ن كآخركف ) ( إلى Penicillium falicum النتيجة نفسيا، كذلؾ بي نكا قدرة الفطر عمى قتؿ عذارل ىذه الحشرة إذا ما است خدـ بتراكيز عالية.

B.bassiana S.littoralis 22 3 الشكؿ ) - (: أعراض إصابة عذارى بالفطر وتش وه البالغات التي نجحت في الخروج

3-5-2- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في بالغات دودة ورؽ القطف: S.littoralis B.bassiana تبي ف مف النتائج قدرة الفطر في التأثير بطكر البالغات لدكدة كرؽ القطف بفرؽ معنكم عف الشاىد، فكانت البالغات في مكررات الشاىد نشطة الحركة كتقكـ بالتزاكج ككضع بيض، B4 بينما لكحظ بأف البالغات التي ر شت بالمعم ؽ البكغي لمعزلة كانت قميمة النشاط كمعد الت التزاكج

صفحة 59 مف 91

ككضع البيض أقؿ بدرجة كبيرة، كتبي ف الحقان أ ف معظـ البيض الذم كضع لـ يفقس، بالتالي أث ر الفطر عمى العمميات الحيكية لمبالغات. بدأ مكت البالغات بعد 3 أياـ مف بدء التجربة كبمغ 21%، كفي اليكـ الخامس كصؿ إلى 32 % مقارنة ن مع 1% في مكررات الشاىد )الجدكؿ 3-13(، لـ تتكافؽ نسب المكت ىذه مع نسب المكت في تجربة العبيدم كسمير )2111( التي كصمت إلى 83% في اليكـ الخامس، كبالرغـ مف أف نسب مكت البالغات لـ تكف مرتفعة نسبيا ن، إال أننا نعتقد بأف تأثير الفطر كاف معنكيان في ىذا الطكر، ككف اليدؼ مف أم مكافحة يككف تخفيؼ الضرر الناتج عف اآلفة قدر اإلمكاف كليس المكت بحد ذاتو، كىذا اليدؼ محقؽ مف خبلؿ تأثير الفطر B.bassiana عمى العمميات األساسية التي تستيدؼ البالغات ألجميا كىي كضع البيض الممق ، كىك كاض مف خبلؿ متابعة البيض الذم كضع في ىذه التجربة كمراقبتو لمدة بعد انتياء التجربة تبيف بأف معظمو لـ يفقس كبالتالي انخفض مجتمع الحشرة لمجيؿ القادـ بشكؿ ممحكظ.

الجدوؿ )3-13(: النسب المئوية لموت بالغات دودة ورؽ القطف المعاممة بالفطر B.bassiana

اليوم بعد الوعاهلة الوعاهلة Treatment اليكـ الثالث اليكـ الخامس

الشاهد b0±0 b0±0

a5.0 ±32 a2.3 ±20 B4

10.23 12.63 LSD 5%

3-5-3- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور البيض لدودة ورؽ القطف:

تبي ف مف التجربة بدء فقس البيض في مكررات الشاىد منذ اليكـ الثالث مف بدء التجربة، ككصمت نسبة 6 الفقس في اليكـ الرابع إلى 94% مقابؿ 17 % عند المعاممة بالمعمؽ البكغي ذك التركيز 11 بكغ/ مؿ لمعزلة B4 )الجدكؿ 3-14(، تتفؽ ىذه النتيجة مع نتائج العبيدم كسمير )2111( حيث انخفضت نسبة 4 3 2 1 8.7 9.4 B.bassiana فقس البيض المعا م ؿ بالفطر إلى ك % بالنسبة لمبيض بعمر - ك - يكمان عمى التكالي، كبمغت نسب فقس البيض 11، 22 ك35% عند المعاممة بالفطكر الممرضة التالية Aspergillus parasiticus ،A.flavus كPenicillium falicum عمى التكالي Shoulkamy et) (al., 2014، كما برىف Al- Kherb )2114( قدرة كؿ مف B.bassiana ك M.anisopliae عمى قتؿ بيض S.exigua بنسب مكت كصمت إلى 51 ك 37.6% عمى التكالي.

صفحة 61 مف 91

6 الجدوؿ )3-14(: تأثير العزلة B4 بالتركيز 11 بوغ/ مؿ في طور البيض لدودة ورؽ القطف بعد 4 أياـ مف المعاممة n=20 المعاممة نسبة الفقس )%( ± SD نسبة الموت )%( * الشاىد b6 a8.2±94 العزلة a83 b13.5 ±17 B4 16.3 LSD (p<0.05) * 3 المتكسطات المتبكعة بأحرؼ مختمفة في العمكد تختمؼ معنكيان. 3-5-4- اختبار تأثير الفطر B.bassiana في طور اليرقة لدودة ورؽ القطف:

أ. يرقات العمر األوؿ: B.bassiana بي نت النتائج فعالية عالية لمفطر عمى يرقات العمر األكؿ، كشراسة عالية لمعزلة المستخدمة B4، كبمغت نسبة المكت 111% في اليكـ الثالث لممعاممة )جدكؿ 3-15(. كيبدك أف يرقات العمر األكؿ ح ساسة لئلصابة الفطرية، كلـ تتش كؿ لدييا بعد آليات المقاكمة الكافية لصد اليجكـ

الفطرم، ككيكتيكميا غير متصمب بشكؿ كاؼ ، السيما أ ف المعاممة ت مت كىي حديثة الخركج مف البيضة )الشكؿ 3-23(، أبدل الفطر B.bassiana الفعالية نفسيا بنسبة مكت 111 % ليرقات العمر األكؿ لمنكع Al- Kherb, 2014) S.exigua).

6 الجدوؿ )3-15(: تأثير العزلة B4 بالتركيز 11 بوغ/ مؿ في العمر اليرقي األوؿ لدودة ورؽ القطف S.littoralis متوسط نسب الموت )%( ± SD المعاممة اليكـ األكؿ بعد المعاممة اليكـ الثاني الثالث a0.00 ±100 a8.37 ±72 a8.37 ±38 B4 الشاىد b4.47 ±8 b5.47±4 b0.00±0 21.23 14.52 8.62 LSD (p<0.05)

الشكؿ )3-23(: أعراض إصابة يرقات العمر األوؿ لدودة ورؽ القطف بالفطر B.bassiana

صفحة 61 مف 91

ب. يرقات العمر الثالث: S.littoralis B4 أ دل استخداـ العزلة إلى مكت يرقات العمر الثالث لدكدة كرؽ القطف بنسبة كصمت إلى 111% في اليكـ الخامس بعد المعاممة )الجدكؿ 3-16(، كلكحظ ارتباط نسبة المكت 2 بالزمف فازدادت نسبة المكت بشكؿ خطي مع مركر الكقت، كيظير ذلؾ مف قيمة معامؿ التحديد R الذم بمغ 1.977 )الشكؿ 24-3(.

جػ. يرقات العمر السادس:

أظيرت النتائج كجكد تأثير بسيط لمفطر B.bassiana في يرقات العمر السادس لدكدة كرؽ القطف بالمقارنة مع تأثيره في األعمار األخرل المدركسة )األكؿ كالثالث( )الجدكؿ 3- 18( بالرغـ مف كجكد فرؽ معنكم مع الشاىد، كبمغت نسبة المكت 18% فقط في اليكـ السادس كاألخير مف المعاممة، كأ نييت التجربة في ىذا اليكـ بسبب نجاح األفراد األخرل في الكصكؿ إلى طكر ما قبؿ العذراء، 17 3 كبمتابعة ىذه األف ارد الحقان تب يف أنيا استطاعت إكماؿ دكرة حياتيا كاعطاء جيؿ تا ؿ )الجدكؿ - (. يعكد السبب في ضعؼ تأثير الفطر في ىذا العمر اليرقي إلى تصم ب جدار الجسـ بشكؿ كبير كاكتماؿ دفاعات الحشرة ضد الفطر بالتالي قدرة الحشرة بيذا العمر عمى مقاكمة الفطر الغازم.

الجدوؿ )3-16(: متوسط نسب الموت )%( التي سببتيا العزلة B4 ليرقات العمر الثالث مف دودة ورؽ القطف

متوسط نسب الموت )%( ± SD الزمف بعد المعاممة العزلة B4 الشاىد Control اليوـ األوؿ 5.47±4 0.00±0 الثاني 11.41±34 0.00±0 الثالث 10.95±42 4.47±2 الرابع 11.40±74 4.44±2 الخامس 0.00±100 5.47±4 المتوسط b3.74±1.6 a34.87±50.8 14.10 LSD (p<0.05)

صفحة 62 مف 91

120 y = 23.2x - 18.8 100 R² = 0.9771

80

60

العزلة B4 الموت نسب الموت )%(

الشاهد Control 40

20

0 الخامس الرابع الثالث الثاني األول يوـ بعد المعاممة

الشكؿ )3-24(: العالقة بيف متوسط نسب الموت )%( التي سببتيا العزلة B4 ليرقات العمر الثالث مف دودة ورؽ القطف والزمف.

الجدوؿ )3-17(: متوسط نسب الموت )%( التي سببتيا العزلة B4 ليرقات العمر السادس مف دودة ورؽ القطف

متوسط نسب الموت )%(± SD الزمف بعد المعاممة )يوـ( B4 الشاىد األوؿ 0.00±0 0.00±0 الثاني 0.00±0 0.00±0 الثالث 0.00±0 0.00±0 الرابع 7.12±8 0.00±0 الخامس 8.36±12 0.00±0 السادس 4.47±18 0.00±0 المتوسط b0.00 ±0 a4.23 ±6.33 3.107 LSD (p<0.05)

18 3 B.bassiana كبمقارنة تأثير الفطر عمى األعمار اليرقية معان )الجدكؿ - (، تبي ف تناقص تأثير الفطر مع تقدـ العمر اليرقي بسبب زيادة صبلبة جدار الجسـ، بمغ الزمف القاتؿ النصفي LT50 1114 2 2 يكما ن (X = 1.237, Degree of Freedom= 4, P= 0.872) ك 2192 يكما ن ,X = 5.931, D.F. 4) 2 (P=. 0.204 ك 8121 يكما ن (X = 243.94, D.F. 4, P= 0.102) يكمان لؤلعمار اليرقية األكؿ كالثالث كالسادس عمى التكالي )الشكؿ 3-25، 3-26، 3-27(. كقد أشار كؿ مف Anand كآخركف )2119( كAsi )2112( سابقان إلى تناقص تأثير الفطر مع تقدـ العمر اليرقي. تتفؽ نتائج البحث مع نتائج العبيدم كسمير )2111( بالنسبة لتأثير الفطر في طكر اليرقة كالذم بمغ في دراستيـ 111% لكؿ مف األعمار اليرقية األكؿ كالثالث كالخامس بعد 14 يكمان مف المعاممة، كما

صفحة 63 مف 91

2112 Abboud تتفؽ مع كآخركف ) ( الذيف بي نكا فعالية ىذا الفطر ضد يرقات دكدة كرؽ القطف في 2118 Amer 91 الحقؿ بنسبة مكت تجاكزت %، بينما اختمفت ىذه النتائج مع كآخركف ) ( فمـ ي بد الفطر عند استخدامو بت اركيز عالية تأثي انر ممحكظان في يرقات دكدة كرؽ القطف بالعمر الثاني، كيعكد ىذا التبايف لتفاكت شراسة العزالت الفطرية فيما بينيا كتأثير البيئة التي عزؿ منيا الفطر.

6 الجدوؿ )3-18(: تأثير المعمؽ البوغي لمعزلة B4 بالتركيز 11 بوغ / مؿ في األعمار اليرقية المختمفة لدودة ورؽ القطف S.littoralis

LSD العمر نسب موت اليرقات )%( ± SD )يوماً بعد المعاممة( المتوسط LT50 (p<0.0 اليرقي األكؿ الثاني الثالث الرابع الخامس السادس (5 8.37±3 األوa85 0.00±100 0.00±100 0.00±100 0.00±100 8.37±72 ؿ 1.14 8 13.28 الثالث b59 0.00±100 0.00±100 11.40±74 10.95±42 11.41±34 5.47±4 2.92 السادس c6.33 4.47±18 8.36±12 7.12±8 0.00±0 0.00±0 0.00±0 8.21

الشكؿ )3-25(: تحميؿ قيـ بروبيت probit لتجربة تطبيؽ الشكؿ )3-26(: تحميؿ قيـ بروبيت probit لتجربة تطبيؽ الفطر عمى العمر اليرقي األوؿ الفطر عمى العمر اليرقي الثالث

الشكؿ )3-27(: تحميؿ قيـ بروبيت probit لتجربة تطبيؽ الفطر عمى العمر اليرقي السادس

صفحة 64 مف 91

B.bassiana ت ظ ير النتائج اختبلؼ أطكار دكدة كرؽ القطف في حساسيتيا تجاه الفطر ، حيث أبدت األعمار اليرقية األكلى حساسية ن أعمى لمفطر مقارنةن باألطكار األخرل، تبلىا اطكر البيضة كالعذراء، كما أظير طكر البالغات حساسيةن كاضحة تجاه ىذا الفطر، بينما كانت يرقات العمر األخير األقؿ حساسيةن لمفطر المدركس )الشكؿ 3-28(. كقد الحظ Asi )2112( عدـ تساكم أطكار S.litura كذلؾ في B.bassiana حساسيتيا لمفطر ، فكاف البيض كاليرقات ىي األكثر حساسية ن، بينما س ج مت العذارل B.bassiana 2111 Kaur حساسيةن منخفضة، كبي ف كآخركف ) ( التأثير المعنكم لمفطر في األعمار اليرقية الثاني كالثالث كالرابع كفي طكرم العذراء كالبالغة كفقس البيض لحشرة S.litura. كظير االختبلؼ الكبير في حساسية أطكار دكدة كرؽ القطف تجاه الممرضات الفطرية في دراسة Ahmed كEl- Katatny )2117( فقد تبيف التأثير القاتؿ لمفطر Trichoderma harzianum في يرقات S.littoralis بنسبة مكت بمغت 81% بعد 5 أياـ مف المعاممة، بينما لـ يكف لو أم تأثير عمى طكر العذراء 1%، كبالعكس أبدل الفطر Aspergillus flavus فعالية عالية عمى عذارل دكدة كرؽ القطف بنسبة مكت 111% مقابؿ 1% عمى طكر اليرقة. كت بي ف الد ارسات المختمفة بأف حساسية األطكار المختمفة لمحشرة لمممرضات الفطرية يختمؼ تبعان لمفطر كالحشرة، ففي بعض الحاالت تككف األطكار غير الكاممة أكثر حساسية مف الكاممة كفي حاالت أخرل نجد العكس، عمى سبيؿ المثا3ؿ اليرقات الفتية مف حف ار ساؽ الذرة األكركبي Ostrinia nubilalis أكثر حساسية ن لمفطر B.bassiana مف اليرقات األكبر عم انر، بالمقابؿ بالغات تربس األزىار الغربي Frankliniella occidentalis كانت أكثر حساسية ن لمفطر Verticillium lecanii مف الحكريات .(Butt et al., 2001) Nomuraea S.litura 2115 Bharani Namasivayam كس ج ؿ ك ) ( حساسية كؿ أطكار لمفطر LC LT rileyi كبي نا تزايد قيـ 50 ك50 مع تزايد العمر اليرقي كما ظير في الدراسة الحالية بالنسبة لمزمف القاتؿ النصفي )الجدكؿ -3 18(.

صفحة 65 مف 91

100 100 100 83 80 58 60 32 الموت نسبة 40

18 )%( 20

0 العذراء البالغة البيض يرقات عمر يرقات عمر يرقات عمر أول ثالث سادس طور الحشرة

الشكؿ )3-28(: نسبة الموت )%( في اليوـ األخير* لكؿ طور مف أطوار دودة ورؽ القطف بعد المعاممة بالفطر * B.bassiana ) لـ يؤخذ بالحسباف في ىذا المخطط أف اليكـ األخير لكؿ تجربة يختمؼ عف األخرل لعدـ تساكم مدة األطكار البيكلكجية فيما بينيا ككؿ تجربة مستقمة عمى حده(

3-6- مقارنة تأثير تراكيز مختمفة مف العزلة الفطرية B4 في العمر اليرقي الثالث مف دودة ورؽ القطف: B4 أ دت جميع التراكيز المدركسة مف العزلة عمى العمر اليرقي الثالث مف دكدة كرؽ القطف إلى نسبة 111 مكت بمغت %، مع فركؽ معنكية بيف التراكيز فيما بينيا مف حيث سرعة إحداث القتؿ، فتف كؽ 8 التركيز 11 بكغ/ مؿ الذم أدل إلى قتؿ 111 % مف مجتمع الحشرة المختبرة بعد 5 أياـ مف بدء 3 التجربة، كبمغ التركيز القاتؿ النصفي LC50 )3× 11 بكغ / مؿ(، بينما كاف التركيز القاتؿ لػ 91% مف 6 مجتمع الحشرة LC90 )12× 11 بكغ/ مؿ( )الجدكؿ 3-19( )الشكؿ 3-29(، بالتالي أبدت العزلة B4 2112 Asi LC ش ارسةن عاليةن ظيرت كاضحة مف خبلؿ القيمة المنخفضة لػ 50 . بينما تك ص ؿ ) ( إلى أف 7 7 LC50 لمعمر اليرقي الثالث 1.11× 11 بكغ/مؿ ك 2.45× 11 لطكر البيض. 2 بمغت قيـ الزمف القاتؿ النصفي 3LT50 2127 يكما ن =X =0.41, Degree of Freedom= 2, P) 2 2 (0.814، 3124 يكما ن(X =4.63, D. F.= 3, P= 0.728)، 3199 يكما ن =X =2.82, D.F.= 5, P) 4 6 8 (0.872 لمتراكيز 11، 11 ك 11 بكغ / مؿ ،عمى التكالي، كيبلحظ تزايد قيمة LT50 مع انخفاض التركيز.

صفحة 66 مف 91

الجدوؿ )3-19(: نسب موت يرقات دودة ورؽ القطف بالعمر الثالث عند استخداـ عدة تراكيز مف العزلة B4

4 6 8 التركيز )بوغ/ مؿ( 11 11 11 الشاىد الثاني 8.36±42 11.40±26 14.83±22 0.00±0 الثالث 8.36±72 11.40±36 15.16±36 0.00±0 نسبة موت الرابع 8.94±94 11.40±66 12.24±50 4.47±2 اليرقات % الخامس 0.00±100 13.03±88 19.23±62 4.47±2 )يوماً بعد السادس 0.00±100 0.00±100 15.16±76 4.47±2 المعاممة( السابع 0.00±100 0.00±100 10.95±88 4.47±2 الثامف 0.00±100 0.00±100 0.00±100 4.47±2 المتكسط d3.53 ±1.42 c29.18 ±62 b30.87 ±73.71 a21.52 ±86.85 LSD 11.28 (p<0.05) 3.99 3.24 2.27 LT50 3 LC50 3× 11 بكغ/ مؿ 6 LC90 12× 11 بكغ/ مؿ

120

100

80 10 8 60

10 6

الموت نسبة % 40 10 4 control 20

0 الثامن السابع السادس الخامس الرابع الثالث الثاني يوم بعد المعاملة

الشكؿ )3-29(: نسب موت يرقات دودة ورؽ القطف بالعمر الثالث عند استخداـ عدة تراكيز مف العزلة B4

B. bassiana ت ظ ير النتائج الشراسة العالية لمفطر ، فقد كاف قاد انر عمى إحداث القتؿ حتى مع التركيز 4 األدنى 11 بكغ / مؿ، بينما في دراسة Shoulkamy كآخركف )2114( لـ يستطع ك ؿ مف Penicillium falicum كA. terreum كA.parasiticus إحداث القتؿ ليرقات دكدة كرؽ القطف إال

صفحة 67 مف 91

6 7 8 مع التركيز األعمى المطبؽ 11 مقارنة ن مع التراكيز 11 ك 11 بكغ/ مؿ، عممان أف ىذه الفطكر المذككرة ليست متخصصة بالحشرات. S.littoralis B.bassiana بالتالي أظيرت النتائج كفاءة عالية لمفطر ض د دكدة كرؽ القطف مخبريان، كت حت ـ ىذه النتائج كجكب تطبيؽ الفطر في تجارب نصؼ حقمية كحقمية لدراسة إمكانية استخدامو الحقان في مكافحة ىذه اآلفة كاآلفات التي تنتمي لقرابة تصنيفية مف نفس الجنس.

صفحة 68 مف 91

ثانيا ً- االستنتاجات )الخالصات( Conclusions: 1. كجكد الفطر Beauveria bassiana في الترب المحمية مف المنطقة الساحمية مف سكرية، كانتشاره بنسبة أكبر في األنظمة الطبيعية مقارنةن بالز ارعية، كش ارسة عزالتو العالية عمى يرقات دكدة الشمع الكبرل Galleria mellonella. B4 B.bassiana 2 . عزؿ ست عزالت مختمفة مف الفطر ، كتف كؽ العزلة مف حيث الشراسة كسرعة إحداث المكت عمى جميع العزالت. 3. نمك الفطر B.bassiana ضمف المجاؿ الحرارم 15- 31 س°، كالدرجة المثمى لنمكه كتبكغو ىي 25 س°، كفشؿ في النمك كالتبكغ عمى الدرجة 35 س°. 4. مستنبت الPDA ػ كاف األفضؿ لنمك كتبكغ الفطر B.bassiana مع إمكانية نمك الفطر بشكؿ جيد عمى المستنبتات األخرل المدركسة )PSA، دقيؽ القم ، كآغار الرز(، بينما فشؿ الفطر في النمك عمى مستنبت السيميمكز CMC. 5. نمك الفطر B.bassiana بشكؿ جيد عند التحضيف في الظبلـ في حيف انخفض نمكه معنكيان عند التحضيف بظركؼ إضاءة مستمرة. 6. قدرة الفطر B.bassiana عمى مياجمة كافة األطكار المختبرة لدكدة كرؽ القطف، كاختبلؼ حساسية ىذه األطكار لئلصابة بالفطر B.bassiana ، حيث أبدت األعمار اليرقية األكلى حساسيةن أعمى لمفطر، تبلىا اطكر البيض كالعذارل، كما أظير طكر البالغات حساسيةن كاضحة تجاه ىذا الفطر، بينما كانت يرقات العمر األخير األقؿ حساسيةن لمفطر المدركس، كتناقص تأثير الفطر مع تقدـ اليرقات بالعمر.

7. تزايد الزمف القاتؿ النصفي LT50 مع انخفاض التركيز المستخدـ مف المعمؽ البكغي لمفطر. 3 8. بمغ التركيز القاتؿ النصفي LC50 ليرقات العمر الثالث )3 × 11 بكغ / مؿ(، بينما بمغ 6 التركيز القاتؿ لػ 91 % مف المجتمع المدركس )12 × 11 بكغ / مؿ(.

صفحة 69 مف 91

ثالثا ً- التوصيات:

1. إجراء تجارب نصؼ حقمية كحقمية لتكضي إمكانية استخداـ الفطر B.bassiana تطبيقيان في المكافحة الحيكية لدكدة كرؽ القطف Spodoptera littoralis. 2. البحث باستمرار عف عزالت جديدة مف الفطر B.bassiana تككف أكثر ش ارسة كأكثر تحمبلن لمظركؼ غير المناسبة. 3. تربية دكدة كرؽ القطف Spodoptera littoralis مخبريا ن عمى بيئة صنعية لتسييؿ التعامؿ معيا. 4. دراسة تأثير درجات حرارة منخفضة أقؿ مف 15 س° عمى نمك الفطر B.bassiana. 5. دراسة تأثير تعريض الفطر B.bassiana لعدد محدد مف ساعات اإلضاءة خبلؿ تحضينو لمعرفة دكر اإلضاءة في تحريض التبكغ.

صفحة 71 مف 91

اربعا ً- المراجع: أ. المراجع العربية:

 أحمد، محمد؛ صباح المغربي كأمؿ حاج حسف )2011(. حصر الفطكر الممرضة لمحشرات في ترب نظـ بيئية كزراعية مختمفة في محافظة البلذقية. مجمة كقاية النبات العربية، 22)2(3 -171 .171

 الجبكرم، إب ارىيـ جدكع؛ كاسماعيؿ احمد الزكبعي كسنداب سامي الدىكم )2002(. تقكيـ فاعمية عزلتيف مف الفطر .Beauveria bassiana (Bals.)Vuill في مكافحة بعض اآلفات الحشرية . كالحمـ كاختبار كفاءة بعض أكساط اإلكثار مجمة جامعة عدف لمعمكـ الطبيعية كالتطبيقية، المجمد 10 العدد 1، 2-1.

 حاج حسف، أمؿ (2011(. حصر الفطكر الممرضة لمحشرات في بيئة الساحؿ السكرم كتقييـ فاعميتيا عمى المف كالذباب األبيض، رسالة ماجستير، جامعة تشريف، 115 ص.

 الزبيدم، عايد نعمة عكيد؛ عادؿ عبدالنبي البكرم؛ كعبد الرزاؽ لعيبي الربيعي )2117(. تكافؽ بعض المبيدات الكيماكية مع منظـ النمك Match كالمبيد الجرثكمي Agerin في التأثير في حشرة دكدة كرؽ القطف (.Spodoptera littoralis (Boisd (Lepidoptera:Phalaenidae). مجمة جامعة كرببلء، المجمد .، العدد 2، -00 02.

 الشريؼ، سمير الشريؼ إب ارىيـ؛ كاب ارىيـ إب ارىيـ مصباح )1992(. الحد االقتصادم الحرج لئلصابة بدكدة كرؽ القطف :Spodoptera littoralis (Boisd.) (Lepidoptera (Noctuidae في حقكؿ القطف بجميكرية مصر العربية. 0- مستكل الضرر االقتصادم خبلؿ مراحؿ النمك المختمفة لنبات القطف. مجمة كقاية النبات العربية 11)1(: -9 17.

 الشريؼ، سمير الشريؼ إبراىيـ؛ كفاركؽ فتحي مصطفى؛ كاب ارىيـ إب ارىيـ مصباح )1991a(. الحد االقتصادم الحرج لئلصابة بدكدة كرؽ القطف (.Spodoptera littoralis (Boisd (Lepidoptera: Noctuidae) في حقكؿ القطف بجميكرية مصر العربية. 2- استخداـ قيـ االستيبلؾ الغذائي لميرقة لعمؿ تقديرات تقريبية عف الحد الحرج لئلصابة. مجمة كقاية النبات العربية 9)2(3 -111 115.

 الشريؼ، سمير الشريؼ إب ارىيـ؛ كاب ارىيـ سعيد اليكارم، كاب ارىيـ مصباح )1991b(. الحد االقتصادم الحرج لئلصابة بدكدة كرؽ القطف (.Spodoptera littoralis (Boisd

صفحة 71 مف 91

(Lepidoptera: Noctuidae) في حقكؿ القطف بجميكرية مصر العربية. 3- مستكل الضرر االقتصادم أثناء األجياؿ المختمفة. مجمة كقاية النبات العربية 9)2(3 -116 123.

 العبيدم، شيماء حميد كصال حسف سمير )2011(. كفاءة الفطر Beauveria bassiana .Bals.) Vuil) في المكافحة اإلحيائية لدكدة كرؽ القطف (.Spodoptera littoralis (Boisd. مجمة كقاية النبات العربية، 329 -77 82.

 العبيدم، شيماء حميد؛ لؤم قحطاف العاني ككفاء عمي حسيف (2008(. دراسة حقمية حكؿ تأثير الفطر .Beauveria bassiana (Bals.) Vuil في دكدة كرؽ القطف Spodoptera (.littoralis (Boisd عمى نبات البطاطا. مجمة مركز بحكث التقنيات اإلحيائية، العدد الثاني3 .32 -24

 عزيز، خضير عباس؛ صباح لطيؼ عمكاف؛ سعدم محمد ىبلؿ ك عمي عبد الحسيف كريـ )2012(. المكافحة الحيكية لعثة الطماطة األمريكية الجنكبية ,Tuta absoluta (Meyrick (Lepidoptera: Gelechiidae) 1917) مختبريا ن. مجمة الككفة لمعمكـ الزراعية /المجمد )4(/ ممحؽ العدد )1(3 -195 209.

 منجي، محمد شاكر؛ نزار نكماف حمو؛ سعدم حسيف صبر كليث عادؿ محمد )2012). قابمية انتشار متطفؿ البيض Trichogramma principium عمى نباتات الطماطة في البيت الببلستيكي ككفاءتو في التطفؿ عمى بيض دكدة كرؽ القطف. مجمة العمكـ الزراعية العراقية. .73-65 3)3(43 ب1 الوراجع األجنبية:

 ABBOTT, W.S. (1925). A method of computing the effectiveness of an insecticide. Journal of Economic Entomology, 18: 265-267.

 ABBOUD, R; MOUHANNA, A.M; CHOUEIRI, E; and EL RAHBANA, B. (2012). Assessment of the effectiveness of Beauveria bassiana fungus in controlling insects under greenhouse, field and laboratory conditions. Persian Gulf Crop Protection, 1(1): 36-44.

 ABD EL- AZIZ, N.M. (2015). Detoxification System in Spodoptera littoralis against Abamectin. International Journal of Innovative Research in Science, Engineering and Technology. 4(6): 4219- 4228.

صفحة 72 مف 91

 ABD EL-MAGEED, A.E.M., and ELGOHARY, L.R.A. (2006). Impact of spinosad on some enzymatic activities of the cotton leaf worm, Pakistan Journal of Biological Sciences. 9 (4): 713-716.

 ABOU- BAKR, H. (1997). Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin, a potential entomogenous fungus for controlling cotton leafworm, Spodoptera littoralis (Boisd.) in clover fields.Egyptian J. of Biological pest control, 7(2): 111- 114.

 AHMED. A.M. and EL- KATATNY M.H. (2007). Entomopathogenic Fungi as Biopesticides Against the Egyptian cotton leaf worm, Spodoptera littoralis: Between Biocontrol Promise and Immune- Limitation. J. Egypt. Soc. Toxicol. 37: 39-51.

 AKELLO, J; DUBOIS, T; COYNE, D; GOLD, C.S. and KYAMANYMA, S. (2007). Colonization and persistence of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana, in tissue culture of banana. African Crop Science Conference Proceedings. 8: 857-861.

 AL-KHERB, W.A. (2014). Virulence Bio-Assay Efficiency of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae for the Biological Control of Spodoptera exigua Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) Eggs and the 1st Instar Larvae. Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 8(3): 313-323.

 ALMANOUFI, A; JAMAL, M; de LILLO, E; TARASCO, E. and YASEEN, T.(2012). A Survey of the Native Entomopathogenic Nematodes and Fungi in the Soil of Southern Region of Syria. Jordan Journal of Agricultural Sciences, 8(3): 358-366.

 ALMAZRAʼAWI, M.S. (2007). Impact of the Entomopathogenic Fungus Beauveria bassiana on the Honey Bees, Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae). World J. Agri. Sci., 3(1): 07- 11.

 ALVES, S.B; ROSSI, L.S; LOPES, R. B; TAMAI, M.A. and PEREIRA, R.M. (2002). Beauveria bassiana yeast phase on agar medium and its pathogenicity against Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae) and Tetranychus urticae (Acari: Tetranychidae). Journal of Invertebrate Pathology 81: 70–77.

 AMER, M.M; EL-SAYED,T.I; BAKHEIT, H.K; MOUSTAFA, S.A; and EL-SAYED, Y. A. (2008). Pathogenicity and Genetic Variability of Five Entomopathogenic Fungi Against Spodoptera littoralis. Research Journal of Agriculture and Biological Sciences, 4 (5): 354-367.

صفحة 73 مف 91

 ANAND, R; PRASAD, B; and TIWARY, B.N; (2009). Relative susceptibility of Spodoptera litura pupae to selected entomopathogenic fungi. BioControl, 54:85–92.

 ANG, W.F; TEO, S; FRANCIS, A; LOK, S.L; SUEN, S.M. and BEATRICE, Y. Q. Ng. (2010). Late Instar Caterpillar and Metamorphosis of Spodoptera picta Guérin-Méneville (Lepidoptera: Noctuidae: Noctuinae) with notes on its Cannibalistic Behaviour. Nature in Singapore 3: 239–244.

 ASI, M.R. (2012). Bioefficacy of entomopathogenic fungi and their combinations with selective insecticides against Spodoptera litura F. (Lepidoptera: Noctuidae) on cotton. A Ph.D. thesis, University of Agriculture Faisalabad Pakistan. 130 pp.

 AUGUSTYNIUK- KRAM, A. (2011). The parasite-host system as exemplified by the interactions between entomopathogenic fungi and insects. Studia Ecologiae et Bioethicae UKSM, 9(1): 51-68.

 AYDIN, M.H., and GÜRKAN, M.O. (2006). The efficacy of spinosad on different strains of S. littoralis (Boisduval) (Lepidoptera: Noctuidae). Turk. J. Biol, 30: 5-9.

 BARRON, G. L. (1972). The Genera of Hyphomycetes from Soil. Robert E. Krieger Publishing Company, USA, 364.

 BENNETT, A.M.R. (2008). Review and keys to the ichneumonid parasitoides (Hymenoptera: Ichneumonidae) of Nearctic Choristoneura species (Lepidoptera: Torticidae).The Canadian Entomologist, 140(1): 1- 47.

 BHATNAGAR, A. AND BARETH, S. S. (2004). Development Of Low Cost, High Quality Diet For Greater Wax Moth, Galleria Mellonella (Linnnaeus).The Indian Journal of Entomology, 66(3): 251- 255.

 BOTTON, B; BRETON, A; FEVRE, M; GAUTHIER, S; GUY, PH; LARPENT, J.P; REYMOND, P; SANGLIER, J.J; VAYSSIER, Y; VEAU, P. (1990). Moisissures utiles et nuisibles importance industrielle. 2nd edition, Masson, Paris, pp289.

 BOUCIAS, D. G., PENDLAND, J. C., and LATGE, J. P. (1988). Nonspecific factors involved in attachment of entomopathogenic deuteromycetes to host insect cuticle. Appl. Environ. Microbiol. 54 (7): 1795-1805.

صفحة 74 مف 91

 BRAMBILA, J. (2013). Identification notes for Spodoptera litura and Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae) and some native Spodoptera moths. USDA-APHIS-PPQ, 12.  BRUCK, D.J. (2001). Dynamics of the fungus Beauveria bassiana. Iowa State University, Retrospective Theses and Dissertations.90pp.

 BURGES, H.D. (1981). Microbial Control of Pests and Plant Diseases 1970-1980. Academic pres INK. (London) Ltd., 949pp.

 BUTT, T.M; JACKSON, C; and MAGAN, N.(2001). Fungi as biocontrol agents progress, problems and potential. Biddles Ltd, UK, 390.

 CABI (CAB International). (2014). Datasheet on Spodoptera littoralis. Crop protection compendium. Date of report: 1 December, pp. 230.

 CALO', L; FORNELLI, F; NENNA, S; TURSI, A; CAIAFFA, M.F; and MACCHIA, L. (2003). Beauvericin cytotoxicity to the invertebrate cell line SF-9. J. Appl. Genet. 44(4): 515-520.

 CHANDLER, D; HAY, D; and REID, A.P. (1997). Sampling and occurrence of entomopathogenic fungi and nematodes in UK soils. Applied Soil Ecology 5: 133-141.

 CHEONG, P. (2015). Bioactive Metabolites of an Isolate of Entomopathogenic Fungus Beauveria bassiana.. Lincoln University. A thesis submitted in partial fulfillment of the requirements for the Degree of Doctor of Philosophy. pp 281.

 CUARTAS, P.E; BARRERA, G.P; BELAICH, M.N; BARRETO, E; GHIRINGHELLI, P.D; and VILLAMIZAR, L.F. (2015). The complete sequence of the first Spodoptera frugiperda Betabaculovirus Genome: A natural multiple recombinant virus. Viruses, 7, 394-421.

 DARA, S. K. (2016). Endophytic Beauveria bassiana negatively impacts green peach aphids on strawberries. UCCE eNewsletter Strawberries and Vegetables, 2 August. eJournal on production and pest management practices for strawberries and vegetables, pp. 1-7. available on (http://ucanr.edu/blogs/blogcore/postdetail.cfm?postnum=21711).

 DE CAROLINA SÁNCHEZ-PÉREZ, L; BARRANCO-FLORIDO, J.E; RODRÍGUEZ-NAVARRO, S; CERVANTES-MAYAGOITIA, J.F. and RAMOS-LÓPEZ, M.Á. (2014) Enzymes of Entomopathogenic Fungi, Advances and Insights. Advances in Enzyme Research, 2, 65-76.

صفحة 75 مف 91

 DEFRA, (2006). Spodoptera species. Department for Environment Food and Rural Affairs, UK. pp4. www.defra.gov.uk/planth/ph.htm.

 DEPALO, L; MARCHETTI, E.; BARONIO, P.; MARTINI, A. and DINDO, L. (2010). Location, acceptance and suitability of Spodoptera littoralis and Galleria mellonella as hosts for the parasitoid Exorista larvarum. Bulletin of Insectology 63 (1): 65-69.

 DONG, C; GUO, S; WANG, W; and LIU, X. (2015). Cordyceps industry in China. Mycology, An International Journal on Fungal Biology, 6 (2): 121–129.

 EFSA. (2015). Scientific Opinion on the pest categorisation of Spodoptera littoralis. EFSA Journal, 13(1): 39- 87.

 EILENBERG, J; HAJEK, A. and LOMER, C. (2001). Suggestions for unifying the terminology in biological control. Biocontrol, 46:387-400.

 EL- DAMIR, M. (2006). Effect of growing media and water volume on conidial production of Beauveria bassina and Metarhizuim anisopliae. Journal of biological sciences 6(2): 269- 274.

 EL-HAWARY, F.M. and ABD EL-SALAM, A.M.E. (2009). Laboratory bioassay of some entomopathogenic fungi on Spodoptera littoralis (Boisd.) and Agrotis ipsilon (Hufn.) larvae (Lepidoptera: Noctuidae). Egypt. Acad. J. biolog. Sci., 2 (2): 1- 4.

 EL-KATATNY, M.H., (2010). Virulence potential of some fungal isolates and their controlpromise against the Egyptian cotton leaf worm, Spodoptera littoralis. Archiv. Phytopathol. Plant Protec., 43(4): 332-356.

 ELLIS, S. E. (2005). New Pest Response Guidelines: Spodoptera. USDA/APHIS/PPQ/PDMP. pp. 75. http://www.aphis.usda.gov/ppq/manuals/

 EPPO. (1997). Spodoptera littoralis and Spodoptera litura. Data Sheets on Quarantine Pests. Prepared by CABI and EPPO for the EU under Contract 90/399003.pp. 7.  EPPO. (2015). New quarantine lists of Russia. EPPO Secretariat, pp. 1-3.  FARGUES, J. (1972). Etude des conditions d’infections des larves de doryphore Leptinotarsa decemlineata Say. Par Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. (Fungi imperfecti). Entomophaga 17: 319-337.

صفحة 76 مف 91

 FARGUES, J; MANIANIA, N.K; DEKMAS, J.C. and SMITHS, N. (1992). Influence de la temperature sur la croissance In vitro d´hyphomycetes entomopathogenes. Agronomie, 12: 557-564.

 FERNANDES, E. G; VALÉRIO, H. M; FELTRIN, TH; VAN DER SAND, S.T. (2012). Variability in the production of extracellular enzymes by entomopathogenic fungi grown on different substrates. Brazilian Journal of Microbiology 827-833

 FERRON, P. (1978). Biological control of insect pests by entomogenous fungi. Annual Review of Entomology, 23: 409- 442.

 FOGAL, M. M; TADDEO, A. R; and FOGEL, S. (1986). Biodegradation of chlorinated ethenes by a methane-utilizing mixed culture. Appl. Environ. Microbiol. 51:720-724.

 GASMI, L. (2015). Bracovirus-derived genes in the genome of Spodoptera exigua Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) and their role in host susceptibility to pathogens. PhD Thesis, Universitate de Valéncia, pp. 182

 GHONEIM, K; TANANI, M; HAMADAH, Kh; BASIOUNY, A. and WAHEEB, H. (2015). Effects of Novaluron, a chitin synthesis inhibitor, on the larval hemogram of Spodoptera littoralis (Boisd.)(Lepidoptera: Noctuidae). International Journal of Advanced Research, 3(1): 554-576.

 GOETTEL, M.S; INGLIS, G.D. and WRAIGHT, S.P. (2000). Fungi. In: Field Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. L. A. LACEY and H. K. KAYA, Eds. Kluwer Academic Publishers, Netherlands. pp. 255- 282.

 GOTTWALD, T.R; and TEDDERS, W.L; (1984). Colonization, transmission, and longevity of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae (Deuteromycotina, Hypomycetes) on pecan weevil larvae (Coleoptera, Curculionidae) in the soil. Environ. Entomol. 13, 557–560.

 GOULET, H; and HUBER, J.T. (1993). Hymenoptera of the world: An identification guide to families, Agriculture Canada, Ottawa, Canada, pp. 668.

 GRIFFIN, M.R. (2007). Beauveria bassiana, A Cotton Endophyte With Biocontrol Activity Against Seedling Disease. University of Tennessee, Knoxville, doctoral thesis, pp. 163.

 HAJEK, A.E. (1997). Ecology of terrestrial fungal entomopathogens. Adv. Microb. Ecol. 15, 193–249.

صفحة 77 مف 91

 HAJEK, A.E. (2004). Natural Enemies: An Introduction to Biological Control. Cambridge University Press. 378 pages.

 HALL, R. A; and PAPIEROK, B. (1982) Fungi as biological control agents of arthropods of agricultural and medical importance. Parasitology, 84, 205–240.

 HALLSWORTH, J.E. and MAGAN, N. (1999). Water and temperature relations of growth of the entomopathogenic fungi Beauvaria bassiana, Meterhizium anisopliae and Paecilomyces farinosus. J. Invertebrate Pathology, 74: 261-266.

 HAMADAH, KH; GHONEIM, K; TANANI, M; BASIOUNY, A; and WAHEEB, H. (2016). Deteriorated acid and alkaline phosphatase activities in certain tissues of Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae) by some novel chitin synthesis inhibitors. International Journal of Advanced Research. 4(2): 611-624.

 HAOUAS, D; HARZALLAH- SKHIRI, F; BEN HALIMA- KAMEL, M; and BEN HAMOUDA, M.H. (2008). Three Chrysanthemum flowerhead powders in controlling feeding and behavior of Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae) (Boisduval). The African Journal of plant science and Biotechnology. 2(1): 18-22.

 HILL, D.S. (2008). Pests of Crops in Warmer Climates and Their Control. Springer Science + Business Media, B.V. United Kingdom. pp. 704.

 HOSNY, M.M; TOPPER, C.P; MOAWASD, G.G. and EL-SAADANY, G.B. (1986). Economic damage threshold of Spodoptera littoralis (Boisd.) (Lepidoptera: Noctuidae) on cotton in Egypt. Crop Protection., 5(2): 100- 104.

 HSIA, I.C.C; ISLAM, M.T; IBRAHIM, Y; HOWAND, T.Y. and OMAR, D. (2014). Evaluation of conidial viability of entomopathogenic fungi as influenced by temperature and additive. Int. J. Agric. Biol., 16: 146‒152.

 HUFFAKER, C.B.(1975). Biological control in the management of pests. Agro-Ecosystems, 2: 15-31.

 HUMBER, R.A. (1997). Fungi: identification. Pages 153–185. In: Manual of Techniques in Insect Pathology. L.A. Lacey (ed.). Academic Press. New York, pp. 409.

 HUMBER, R.A. (1998). Entomopathogenic fungal identification. APS/ESA joint annual meeting. Las Vegas, 26pp

صفحة 78 مف 91

 HUMBER, R.A. (2005). Entomopathogenic Fungal Identification. Las Vegas, Nevada – 7 November 1998 updated November 2005. pp. 32.

 HUMBER, R.A. (2008). Evolution of entomopathogenicity in fungi. Journal of Invertebrate Pathology, 98, 262–266.

 HUMBER, R.A. (2012). Identification of entomopathogenic fungi.pp. 151- 187. In: Lacey, L.A. "Manual of Techniques in Invertebrate Pathology, second edition, USA, pp. 484.

 HUMBER, R.A; HANSEN, K.S; WHEELER, M.M. (2011). Beauveria plus Microhilum, Tritirachium, and Sporothrix. 28 July. Ithaca, New York. ARS Collection of Entomopathogenic Fungal Cultures. pp. 113.

 IBRAHIM, H. O. (2006). Biochemical studies on the effect of some pesticides on cotton leaf worm and experimental animals. Ph.D. Department of Agricultural Chemistry. Faculty of Agriculture. Benha University.

 INGLIS, G.D; ENKERLI, J. and GOETTEL, M.S. (2012). Laboratory techniques used for entomopathogenic fungi: Hypocreales. In: LACEY. L.A., (Eds.). Manual of Techniques in invertebrate pathology. Second edition. USA. Academic Press. pp 189-253.

 INGLIS, G.D; GOETTEL, M.S; BUTT, T.M. and STRASSER, H. (2001). Use of Hyphomycetous Fungi for managing insect pestes. In: BUTT. T.M; C.JACKSON and N. MAGAN, (Eds.). Fungi as biocontrol agents, Progress, problems and potential. CABI publishing, UK, PP: 23- 69.

 JAMES, R. R; CROFT, B. A; SHAFFER, B; LIGHTHART, T. B. (1998). Impact of Temperature and Humidity on Host-Pathogen Interactions Between Beauveria bassiana and a Coccinellid. Environ. Entomol. 27(6): 1.506-1.513.

 JENKINS, N.E; HEVIEFO, G; LANGEWALD, J CHERRY, A.J; and LOMER, C.J. (1998). Development of mass production technology for aerial conidia for use as mycopesticides. Review Article, Biocontrol News and Information, 19(1): 21 – 31.

 JIA, B; LIU, Y; ZHU, Y. C; LIU, X; GAO, C; and SHEN, J. (2009). Inheritance, fitness cost and mechanism of resistance to tebufenozide in Spodoptera exigua (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae). Pest Manag Sci; 65: 996–1002. Published online in www.interscience.wiley.com/journal/ps.

صفحة 79 مف 91

 KAUR, S; KAUR, H.P; KAUR, K; and KAUR, A. (2011). Effect of different concentrations of Beauveria bassiana on development and reproductive potential of Spodoptera litura (Fabricius). Journal of Biopesticides, 4 (2): 161-168.

 KELLER, M; SNEH, B; STRIZHOV, N; PRUDOVSKY, E; REGEV, A; KONCZ, C; SCHELL, J. and ZILBERSTEIN, A. (1996). Digestion of 8- Endotoxin by Gut Proteases may Explain Reduced Sensitivity of Advanced Instar Larvae of Spodoptera littoralis to CryIC. Insect Biochem. Molec. Biol. 26, (4): 365-373.

 KELLER, S. and ZIMMERMAN, G. (1989). Mycopathogens of soil insects. In: Wilding, N; N.M. Collins; P.M. Hammond and J.F. Webber, (Eds.), Insect-Fungus Interactions. Academic Press, London, UK, pp. 240-270.

 KESSLER, P; MATZKE, H. and KELLER, S. (2003). The effect of application time and soil factors on the occurrence of Beauveria brongniartii applied as a biological control agent in soil. J. Invertebr. Pathol. 84, 15–23.

 KHAN, M.A; and AHMAD, W. (2015). The Management of Spodopteran Pests Using Fungal Pathogens. Soil Biology, 43: 123-160

 KHAN, S; GUO, L; MAIMAITI, Y; MIJIT, M. and QIU, D. (2012). Entomopathogenic fungi as microbial biocontrol agent. Molecular Plant Breeding. 3(7): 63- 79.

 KHUDHAIR, M. W; ALRUBEAI, H.F; KHALAF, M.Z; SHBAR, A.K; HAMAD, B.S; and KHALAF,H.S.(2014). Occurrence and distribution of Entomopathogenic Fungi in Iraqi Agro-ecosystems. Int. J. Entomol. Res. 2 (2): 117-124.

 KIKHNO, I; GUTIÉRREZ, S; CROIZIER,L; CROIZIER, G; and FERBER, M.L. (2002). Characterization of pif, a gene required for the per os infectivity of Spodoptera littoralis nucleopolyhedrovirus. Journal of General Virology, 83, 3013–3022.

 KIM, J.S; SKINNER, M; GOULI, S. and PARKER, B.L. (2011). Generating thermotolerant colonies by pairing Beauveria bassiana isolates. FEMS Microbiol Lett 324: 165- 172.

 KLINGEN, I. and HAUKELAND, S. (2006). The soil as a reservoir for natural enemies of pest insects and mites with emphasis on fungi and nematodes. In: EILENBERG, J; HOKKANEN, H.M.T. (Eds.), An

صفحة 81 مف 91

Ecological and Societal Approach to Biological Control. Springer, Dordrecht, The Netherlands, 145–211.

 KRANTHI, K.R. (2005). Insecticide Resistance -Monitoring, Mechanisms and Management Manual. Published by CICR, Nagpur, India and ICAC, Washington,pp. 153.

 KREISEL, V.H. and SCHAUER, F. (1987). Methoden des mykologischen laboratoriums. Fisher verlag Jena, Germany, pp181.

 KROMANN, A.S.H. (2012). Modulation of Olfactory Information in the Antennal Lobe of Spodoptera littoralis. Doctoral Thesis Swedish University of Agricultural Sciences Alnarp. 52pp.

 KULU, I. P; ABADI, A. L; AFANDHI, A. and NOORAIDAWATI. (2015). Morphological and Molecular Identification of Beauveria bassiana as Entomopathogen Agent from Central Kalimantan Peatland, Indonesia. International Journal of ChemTech Research. 8, (4): 2079- 2084.

 LACEY, L.A. (2012). Manual of Techniques in invertebrate pathology. Second edition, Academic Press.USA, Pp 484

 LAFONTAINE, J.D. and SCHMIDT, B. C. (2010). Annotated check list of the Noctuoidea (Insecta, Lepidoptera) of North America north of Mexico. ZooKeys 40: 1–239

 LANZONI, A; BAZZOCCHI, G.G; REGGIORI, F; RAMA, F; SANNINO, L; MAINI, S; and BURGIO, G. (2012). Spodoptera littoralis male capture suppression in processing spinach using two kinds of synthetic sex-pheromone dispensers. Bulletin of Insectology 65 (2): 311- 318.

 LEOPOLD, J; and SAMS ˇINˇÁKOVÁ, A. (1970). Quantitative estimation of chitinase and several other enzymes in the fungus Beauveria bassiana. Journal of Invertebrate Pathology, 15(1): 34- 42.

 LIU, S; WANG, M; and LI, X. (2015). Pupal melanization associated with higher fitness in Spodoptera exigua. Sci. Rep. 5, 157- 167.

 LIU, T; WANG, LI; DUAN, Y-X; and WANG, X; (2008). Nematicidal activity of culture filtrate of Beauveria bassiana against Meloidogyne hapla. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 24(1): 113- 118.

صفحة 81 مف 91

 LOPEZ- VAAMONDE, C. (2006). Spodoptera littoralis. DAISIE. Delivering Alien Invasive Species Inventories for Europe.pp. 3.

 LORD, J. C. (2005). From MetchnikoV to Monsanto and beyond: The path of microbial control. Journal of Invertebrate Pathology, 89: 19–29.

 MARTINEZ, S.S. and VAN EMDEN, H.F.. (1999). Sublethal concentrations of azadirachtin affect food intake, conversion efficiency and feeding behaviour of Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae). Bulíetin of Entomological Research: 89, 65-71.

 MARTINEZ, S.S. and VAN EMDEN, H.F.. (2001). Growth Disruption, Abnormalities and Mortality of Spodoptera littoralis (Boisduval) (Lepidoptera: Noctuidae) Caused by Azadirachtin. Neotropical Entomology 30(1): 113-125.

 MASETTI, A; DE LUIGI, V; and BURGIO, G. (2008). Effects of nucleopolyhedrovirus based product on Spodoptera littoralis. Bulletin of Insectology 61 (2): 299-302.

 MENG, Z; WEN, T; KANG, J; LEI, B., and HYDE, K.D. (2014). Cordyceps Pruinosa Produces Cordycepin And N6-(2-Hydroxyethyl)- Adenosine In Culture.Arch. Biol. Sci., Belgrade, 66 (4), 1411-1421.

 MEYLING, N.V. (2007). Methods for isolation of Entomopathogenic fungi from the soil environment. Manual for isolation of soil borne entomopathogenic fungi p.18.

 MEYLING, N.V. and EILENBERG. J. (2006). Occurrence and distribution of soil borne entomopathogenic fungi within a single organic agroecosystem. Agriculture, Ecosystems and Environment 113: 336–341.

 MEYLING, N.V. and EILENBERG. J. (2007). Ecology of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae in temperate agroecosystems: Potential for conservation biological control. Biological Control, 43, 145–155.

 MEYLING, N.V; LU¨BECK, M; BUCKLEY, E.P; EILENBERG, J; and REHNER, S.A. (2009). Community composition, host range and genetic structure of the fungal entomopathogen Beauveria in adjoining agricultural and seminatural habitats. Mol Ecol 18:1282–1293.

 MORA, M. A.E; ROUWS, J. R. C; and FRAGA, M. E. (2016). Occurrence of entomopathogenic fungi in Atlantic forest soils. Microbiology Discovery, 4(1): 1-7.

صفحة 82 مف 91

 MUNOZ, L; ROSELL, G; QUERO, C; and GUERRERO, A. (2008). Biosynthetic pathways of the pheromone of the Egyptian armyworm Spodoptera littoralis. Physiological Entomology, 33, 275 - 290.

 NAMASIVAYAM, S.K.R; and BHARANI, A.R.S. (2015). Biocontrol potential of entomopathogenic fungi Nomuraea rileyi (f.) Samson against major groundnut defoliator Spodoptera litura (fab.) Lepidoptera; Noctuidae. Advances in Plants & Agriculture Research, 2(5): 1-5.

 NELSON, T.L; LOW, L; and GLARE, T.R. (1996). Large scale production of New Zealand strains of Beauveria and Metarhizium. 49th conference proceeding. The New Zealand plant protection: 257- 261.

 NUSSENBAUM, A.L; LEWYLLE, M. A. and LECUONA, R. E. (2013). Germination, Radial Growth and Virulence to Boll Weevil of Entomopathogenic Fungi at Different Temperatures. World Applied Sciences Journal 25 (8): 1134-1140.

 OEPP/EPPO BULLETIN. (2015). PM 7/124 (1) Spodoptera littoralis, Spodoptera litura, Spodoptera frugiperda, Spodoptera eridania. Diagnostic. 45 (3), 410–444.

 ORTIZ- CATÓN, M; ALATORRE-ROSAS, R; VALDIVIA-BERNAL, R; ORTIZ-CATÓN, A; MEDINA-TORRES, R; and ALEJO- SANTIAGO, G. (2011). Efecto de la temperatura y humedad relativa sobre el desarrollo de los hongos entomopatógenos. Revista Biociencias, 1(2): 42- 53.

 ORTIZ-URQUIZA, A. and KEYHANI, N.O. (2013). Action on the Surface: Entomopathogenic Fungi versus the Insect Cuticle. Insects, 4, 357-374.

 OWNLEY, B. H; GRIFFIN, M. R; KLINGEMAN, W.E; GWINN, K.D; MOULTON, J. K; PEREIRA, R.M; (2008). Beauveria bassiana: Endophytic colonization and plant disease control. Journal of Invertebrate Pathology, 98: 267–270.

 OWNLEY, B.H; GWINN, K.D; and VEGA, F.E. (2010). Endophytic fungal entomopathogens with activity against plant pathogens: ecology and evolution. BioControl, 55:113–128.

 PARKER, L.B; SKINNER, M; BROWNBRIDGE, M. and EL BOUHSSINI, M. (2000). Control of insect pests with entomopathogenic fungi. Arab Journal of Plant Protection, 18: 133-138.

صفحة 83 مف 91

 PASSOA, S. C. (2014). Key to recognizing Spodoptera litura/littoralis intercepted at U.S. ports of entry, 4 pp. In: GILLIGAN, T. M. and PASSOA, S. C. LepIntercept, An identification resource for intercepted Lepidoptera larvae. Identification Technology Program (ITP), USDA/APHIS/PPQ/S&T, Fort Collins, CO. [accessed at www.lepintercept.org].

 PENDLAND, J. C; HUNG, S.-Y; and BOUCIAS, D. G. (1993). Evasion of Host Defense by In Vivo-Produced Protoplast-Like Cells of the Insect Mycopathogen Beauveria bassiana. Journal of Bacteriology, 175 (18): 5962-5969.

 PETLAMUL, W. and PRASERTSAN, P. (2012). Evaluation of Strains of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana against Spodoptera litura on the Basis of Their Virulence, Germination Rate, Conidia Production, Radial Growth and Enzyme Activity. Mycobiology 40(2) : 111-116.

 POINAR, G.O. Jr and G.O. THOMAS. (1984). Laboratory guide to insect pathogens and parasites. Plenum Press, New York. pp392.

 QAZZAZ, F.O. (2012). Isolation of Beauveria bassiana from Soil and Evaluation of its Entomopathogenic and Biocontrol Efficacy Against the Mediterranean Fruit Fly (Ceratitis capitata). Hebron University College of Graduate Studies and Academic Research Master Program in Plant Protection. pp. 93.

 QUESADA- MORAGA, E; MARANHAO, E.A.A.; VALVERDE- GARCIA, P. and SANTIAGO- ALVAREZ, C. (2006). Selection of Beauveria bassiana isolates for control of the whiteflies Bemisia tabaci and Trialeurodes vaporariorum on the basis of their virulence, thermal requirements, and toxicogenic activity. Biological Control 36: 274- 287.

 REHNER, S. A; and BUCKLEY, E. (2005). A Beauveria phylogeny inferred from nuclear ITS and EF1-{alpha} sequences: evidence for cryptic diversification and links to Cordyceps teleomorphs. Mycologia 97 (1): 84–98.

 REHNER, S.A; MINNIS,A.M; SUNG, Gi-Ho; LUANGSA-ARD,J.J; DEVOTTO, L. and HUMBER, R.A. (2011). Phylogeny and systematics of the anamorphic, entomopathogenic genus Beauveria. Mycologia, The Mycological Society of America, Lawrence, 103(5), 1055–1073.

 REHNER, S.A; POSADA, F; BUCKLEY, E.P; INFANTE, F; CASTILLO, A. and VEGA, F.E. (2006). Phylogenetic origins of African

صفحة 84 مف 91

and Neotropical Beauveria bassiana s.l. pathogens of the coffee berry borer, Hypothenemus hampei. J. Invertebr. Pathol. 93, 11–21.

 RELYEA, R.A. (2009). A cocktail of contaminants: how mixtures of pesticides at low concentrations affect aquatic communities. Oecologia, 159: 363-376.

 RITU, A; ANJALI, CH; NIDHI, T; SHEETAL, P; and DEEPAK, B; (2012). Biopesticidal formulation of Beauveria bassiana effective against larvae of Helicoverpa armigera. Biofertilizers & Biopesticides, 3(3): 1-3.

 RIVKIN, H KROEMER, J.A; BRONSHTEIN, A; BELAUSOV, E; WEBB, B. A; and CHEJANOVSKY, N. (2006). Response of immunocompetent and immunosuppressed Spodoptera littoralis larvae to baculovirus infection. Journal of General Virology, 87, 2217–2225.

 ROBERTS, D.W. (1989). World picture of biological control of insects by fungi. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro,Vol. 84, Supl. III, 89- 100.

 ROBERTS, D.W. and SWEENEY, A.W. (1982). Production of fungi imperfect with vector control protection. In: Invertebrate pathology and microbial control. Proceeding 3rd International Colloquium on Invertebrate Pathology, University of Sussex, pp 409-413.

 SABBOUR, M.M; RAGEI, M. and ABD-EL RAHMAN, A. (2011). Effect of Some Ecological Factors on The Growth of Beauveria bassiana and Paecilomyces fumosoroseus Against Corn Borers. Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 5(11): 228-235.

 SABBOUR, M. M. and SAHAB, A. F. (2005). Efficacy of some microbial control agets against cabbage pests in Egypt. Pakistan Journal of Biological Sciences. 8(10): 1351- 1356.

 SAFAVI, S. A; KHARRAZI, A.; RASOULIAN, Gh. R.; and BANDANI, A. R. (2010). Virulence of Some Isolates of Entomopathogenic Fungus, Beauveria bassiana on Ostrinia nubilalis (Lepidoptera:Pyralidae) Larvae. J. Agr. Sci. Tech, 12: 13-21.

 SAFAVI, S.A; SHAH, F. A.; PAKDEL, A. K.; RASOULIAN, G. R.; BANDANI, A. R. and BUTT, T. M. (2007). Effect of nutrition on growth and virulence of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana. FEMS Microbiol Lett 270: 116–123.

 SANTIAGO-ALVAREZ, C; MARANHA, E.A; MARANHA, E; QUESADA-MORAGA, E. (2006), Host plant influences pathogenicity of صفحة 85 مف 91

Beauveria bassiana to Bemisia tabaci and its sporulation on cadavers, BioControl, 51, 519-532.

 SAVEER, A.M. (2012). Recognition and modulation of olfactory signals in the noctuid moth Spodoptera littoralis. Doctoral Thesis, Swedish University of Agricultural Sciences, Alnarp, pp. 40.

 SHAHID, A.A; RAO, A.Q; BAKHSH, A; and HUSNAIN, T. (2012). Entomopathogenic fungi as biological controllers: new insights into their virulence and pathogenicity. Arch. Biol. Sci., Belgrade, 64 (1), 21-42.

 SHOULKAMY, M.A; SALAMA, S.A; and AHMAD, S.M. (2014). Use of Entomopathogenic Fungi for Control of the Cotton Leafworm, Spodoptera litoralis. Journal of Jazan University - Applied Sciences Branch. 3(1): 1-11.

 SOPER, R. S. and WARD, M. G. (1981). Production formulation and application of fungi of insect control. In: Papaviza, G.C. (Ed.), Biological control in crop production. Allanheld and Osmun, Totowa, pp. 161- 180.

 SRIVILAI, P; SURAPRAON, S; and LOUCHANWOOT, P. (2013). First report of Cordyceps. sp. isolated from cicada in northeastern Thailand and their characterizations. Journal of Biological Sciences, 13(7): 587- 595.

 ST LEGER, R. J; JOSHI, L; and ROBERTS, D.W. (1997). Adaptation of proteases and carbohydrases of saprophytic, phytopathogenic and entomopathogenic fungi to the requirements of their ecological niches. Microbiology,143, 1 983-1 992.

 SUN, B. and LIU, X. (2008). Occurrence and diversity of insect- associated fungi in natural soils in China. Applied soil ecology 39: 100 – 108.

 SUN, B; YU, H; CHEN, A.J; and LIU, X. (2008). Insect-associated fungi in soils of field crops and orchards. Crop Protection 27: 1421–1426.

 SUNG, J-M; LEE, J-O; HUMBER, R.A; SUNG, G.H; and SHRESTHA, B. (2006). Cordyceps bassiana and Production of Stromata in vitro Showing Beauveria Anamorph in Korea. Mycobiology 34(1): 1-6.

 SUNG, G. H; HYWEL-JONES, N.L; SUNG, J.-M; LUANGSA-ARD, J. J; SHRESTHA, B. and SPATAFORA, J.W. (2007). Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi. Stud.Mycol., 57, 5-59.

صفحة 86 مف 91

 TANADA, Y., and KAYA, H. K. (1993). Insect pathology. San Diego, C.A: Academic Press, pp. 666.

 THAKUR, R; and SANDHU, S.S. (2010). Distribution, occurrence and natural invertebrate hosts of indigenous entomopathogenic fungi of Central India. Indian J Microbiol 50(1):89–96.

 TODOROVA, S. I. (2000). Pathogenicity of Beauveria bassiana isolates toward Leptinotarsa decemlineata (Coleoptera: Chrysomelidae), Myzus persicae (Homoptera: Aphididae) and their predator Coleomegilla maculata lengi (Coleoptera: Coccinellidae). Phytoprotection. 81(1): 15- 22.

 TRANIER, M.S; POGNANT-GROS, J; QUIROZ, R; GONZÀLEZ, C.N.A; MATEILLE, T; and ROUSSOS, S. (2014). Commercial Biological Control Agents Targeted Against Plant-Parasitic Root-knot Nematodes. Braz. Arch. Biol. Technol. 57(6): 831-841.

 TRAUGOTT, M; WEISSTEINER, S.; and STRASSER, H.. (2005). Effects of the entomopathogenic fungus Beauveria brongniartii on the non-target predator Poecilus versicolor (Coleoptera: Carabidae). Biological Control 33: 107–112.

 TUNAZ, H. and KÜSEK, M. (2015). Mortality effects of eicosanoid biosynthesis inhibitors on Spodoptera littoralis larvae co-injected with the bacteria, Serratia marcescens. Türk. entomol. derg, 39 (2): 121-127.

 UGINE, TA; WRAIGHT, S.P.; BROWNBRIDGE, M. and SANDERSON, J.P. (2005). Development of a novel bioassay for estimation of media lethal concentrations (LC50) and doses (LD50) of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana, against western flower thrips, Frankliniella occidentalis. J Invertebr Pathol 89: 210–218.

 VASHISTH, S. (2014). Distribution and biocontrol potential of entomopathogenic nematodes against some lepidopterous pests. Doctoral Thesis, KrishiVishvavidyalaya, India, pp. 167.

 VEGA, F.E; and BLACKWELL, M. (2005). Insect- Fungal Associations: Ecology and Evolution.. Oxford University Press, Inc. New York. pp.333.

 VEGA, F.E; POSADA, F; AIME, M.C; PAVA-RIPOLI, M; INFANTE, F; and REHNER, S.A. (2008). Entomopathogenic fungal endophytes. Biol Control 46:72–82.

صفحة 87 مف 91

 VIJAYAVANI, S; REDDY, K. R. K; and MURTHY, G.B.V.N. (2009). Pathogenicity of Beauveria bassiana (Deuteromycotina : Euteromycotina : Hyphomycetes) strains on Spodoptera litura (Fab.). Journal of Biopesticides, 2(2): 205-207.

 VILCINSKAS, A. and GOTZ, P. (1999). Parasitic fungi and their interactions with the insect immune system. Advances in Parasitology, 43: 267-3 13.

 VIMALA DEVI, P.S. and DURAIMURUGAN, P. (2013). Exploitation of Nomuraea rileyi and Beauveria bassiana for the management of lepidopteran pests. Kavaka, 41: 43- 67.

 VON ARX, J.A. (1981). The Genera of Fungi Sporulating in Pure Culture. 3rd. ed., Germany, pp424.

 WALSTAD, J.D; ANDERSON, R.F. and STAMBAUGH, W.J. (1970). Effect of environmental conditions on two species of muscardin fungi (Beauveria bassiana and Meterhizium anisopliae). J. Invertebrate Pathology, 2: 221- 226.

 WAN, H. (2003). Molecular biology of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana: Insect-cuticle degrading enzymes and Development of a new selection marker for fungal transformation. Carola University of Heidelberg, Germany, Doctor thesis of Natural Sciences. pp. 137.

 WAT, C.K; GAVIN MCINNES, A; SMITH, D.G; WRIGHT, J.L.C; and VINING, L.C. (1977). The yellow pigments of Beauveria species. Structures of tenellin and bassianin.' CAN. J. CHEM. 55, 4090- 4098.

 WENNINGER, E.J. and LANDOLT, P.J. (2011). Apple and sugar feeding in adult codling moths, Cydia pomonella: Effects on longevity, fecundity, and egg fertility. Journal of Insect Science 11, 1-11.

 WRAIGHT, S.P; RAMOS, M.E; AVERY, P.B; JARONSKI, S.T; and VANDENBERG, J.D. (2010). Comparative virulence of Beauveria bassiana isolates against lepidopteran pests of vegetable crops. Journal of Invertebrate Pathology, 103 : 186–199.

 YEO. H; PELL, J.K; ALDERSON, P.G; CLARK, S.J. and PYE, B.J. (2003). Laboratory evaluation of temperature effects on the germination and growth of entomopathogenic fungi and on their pathogenicity to two aphid species. Pest Manag Sci 59:156–165.

صفحة 88 مف 91

 ZHANG, Y; LI, Z; LUO, Z; ZHANG, J; FAN, Y; and PEI, Y. (2009). Light stimulates conidiation of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana. Biocontrol Science and Technology, 19(1): 91-101.

 ZHAO, D; LIU, B; WANG, Y; ZHU, X; DUAN, Y; and CHEN, L. (2013). Screening for nematicidal activities of Beauveria bassiana and associated fungus using culture filtrate. African Journal of Microbiology Research, 7(11): 974- 978.

 ZIMMERMANN, G. (1986). The ʻGalleria bait methodʼ for detection of entomopathogenic fungi in soil. Journal of Applied Entomology, 102: 213-215.

صفحة 89 مف 91

ABSTRACT The research was conducted to evaluate the pathogenicity and virulence of the fungus Beauveria bassiana on different stages of the cotton leaf worm Spodoptera littoralis, and to study some suitable conditions to growth of B.bassiana in the laboratory. The fungus B.bassiana was isolated from various soils in natural- and agro- ecosystems at Syrian Coastal using "Galleria Bait Method". Six isolates were obtained with frequency rate of 12.24%. The highest occurrence was in the natural ecosystem (four isolates for two isolates from agro ecosystem). The last instar larva of the greater wax worm Galleria mellonella were used to evaluate the pathogenicity of these isolates by rolling the larva on a colony of the fungus. All isolates were showed high virulence and caused 100% mortality after 3-5 days post incubation. The fungus B.bassiana was incubated under several temperatures (15, 20, 25, 30 and 35 °C) to evaluate an effect of temperature on growth and spore production of B.bassiana. The highest growth and spore production of B.bassiana were at the temperature 25 °C, with ability to grow and produce conidia at the range between 15- 30 °C. The fungus failed to grow at 35 °C. The radial growth of colonies from the third to fourteenth day was from liner type. 6 The highest production of conidia was 15.3 and 20.2 (×10 ) conidia /ml for B4 and B2 respectively, at 25 °C, where the percentage of germination was 81.4 and 78.5 %. Whereas the growth and sporulating notably decreased at 15°C. The effect of different media (PDA, PSA, wheat meal, maize meal, agar rice and CMC medium) on growth of the fungus B.bassiana was studied. Results showed that PDA was the best medium to growth and conidia production of B.bassiana, followed by maize meal medium. The fungus grew well on all studied media except CMC medium. The highest growth for B2 was 51.9 mm on maize meal followed by 49.1 mm on PDA, whereas the highest values to produce conidia for B4 and B2 were 20.5 and 25.5 (×106) conidia/ml on PDA respectively, followed by 5.56 and 16.2 (×106) conidia/ml on maize meal. The highest germination was 85.2 and 84.5% on PDA for the two isolates B4 and B2, respectively. A comparative between growth of B.bassiana in totally darkness and under continuous light was studied during a number of colonies in each plate. The best growth was obtained under conditions of total darkness with 192.2±28.58 colony/ plate for 32±10.15 colony /plate under conditions of continuous light. Spodoptera littoralis was reared in the laboratory, and a virulence of the fungal isolates was tested on third instar larva by rolling the larva on colonies of the fungus to choose the most virulence isolate. Results showed high virulence to all studied isolates and the mortality ranged between 75- 100% at صفحة 91 مف 91 the fifth day post treatment. B4 was the highest virulence because of its low lethal half time LT50 which attained of 2.5 days. The pathogenicity of B4 by concentration 116 conidia/ml was tested on all stages of S. littoralis. The fungus was able to infect all tested stages. The first and third instar larva showed high susceptible with 100% mortality at third and fifth day, respectively. Also, the egg and pupa stages showed susceptible against suspension of B4 with mortality 83 and 58%, respectively. Mortality of adults was 32%, whereas the sixth instar larva showed less susceptible to fungal infection with mortality 18%. A several concentrations (118, 116 and 114) conidia/ ml were assaied on the third instar larva, and all of these concentrations caused 100% mortality. 8 3 The concentration 11 was the faster of death action, and LT50 was 3× 10 6 conidia/ml, where LC90 was 12 × 11 conidia/ml. Key words: B.bassiana, S.littoralis, Galleria Bait Method, Virulence, Pathogenicity, Susceptibility and Biocontrol.

صفحة 91 مف 91

Syria Arab Republic Ministry of High Education Tishreen University Faculty of Agriculture Department of Plant Protection

Effect of some local isolates of the fungus Beauveria bassiana on different stages of the cotton leaf worm Spodoptera littoralis

Thesis has been prepared for the Master degree in Department of Plant Protection at the Faculty of Agriculture

by Lobna Hasan Rajab

Supervision of

Prof. Dr. Mohammad Ahmad Dr. Ibtisam Gazal Supervisor Co- advisor Depart. of plant protection Depart. of plant protection Faculty of Agriculture Faculty of Agriculture Tishreen University Tishreen University

2017

Syria Arab Republic Ministry of High Education Tishreen University Faculty of Agriculture Department of Plant Protection

Effect of some local isolates of the fungus Beauveria bassiana on different stages of the cotton leaf worm Spodoptera littoralis

Thesis has been prepared for the Master degree in Department of Plant Protection at the Faculty of Agriculture

by Lobna Hasan Rajab

2017