DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE DIROFILARIOSIS
Elena Carretón, José Alberto Montoya-Alonso Medicina interna, Facultad de Veterinaria, Universidad de las Palmas de Gran Canaria DIROFILARIOSIS
Dirofilaria immitis
Perros, gatos y hurones DIROFILARIOSIS CANINA
Arterias pulmonares
Ventrículo derecho
Wolbachia pipientis DIROFILARIOSIS CANINA
Enfermedad cosmopolita
Distribución mundial
↑Temperatura y humedad DIROFILARIOSIS CANINA
Transmisión anual
Transmisión estacional DIROFILARIOSIS CANINA
España: condiciones óptimas
Prevalencia que presente cada zona condiciones medioambientales Montoya et al, 2007 hábitos de la población canina DIROFILARIOSIS CANINA
Prevalencias más elevadas: Islas Canarias
Gran Canaria: 67% - 19%
Prevalencia 80
60
40
20
0 1994 1995 1996 2000 2002 2007 2010 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Técnicas de ELISA o inmunocromatografía
Proteínas parásitos adultos hembras 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Elevada ESPECIFICIDAD Falsos Positivos
Elevada SENSIBILIDAD Falsos Negativos Snap 3Dx®, Snap Filaria® (Idexx)
idexx Sensibilidad 98.7 % Especificidad 100 % Speed Diro® (Virbac)
Sensibilidad 95.2 % Especificidad 99 % Anigen HW Ag 2.0 ® (Bionote)
anigen Sensibilidad 94.4 % Especificidad 100 % CHW Ag ® (Quicking Biotech)
quicking Sensibilidad 91.3 % Especificidad 100 % Uranotest Dirofilaria® (Uranovet)
Sensibilidad 94.4 % Especificidad 100 % Witness ® (Synbiotics - Pfizer)
Sensibilidad 97.5 % Especificidad 100 % FasTest HW Antigen® (Megacor)
Sensibilidad 98.6 % Especificidad 99.1 % DFV test dirofilaria® (Divasa)
Sensibilidad 94.4% Especificidad 100 % SensPERT CHW ® (SensPert)
Sensibilidad ??% Especificidad ?? % Tests de Antígenos de pocillos
Petchek Filaria PF (Idexx) Filarchek (Ingenasa)
Dirochek (Pfizer) 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Una sola hembra adulta
Factores pueden afectar la sensibilidad edad del parásito tamaño del perro 1. TESTS DE ANTÍGENOS
No carga antigénica suficiente < 6 meses 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Cantidad de antígenos: nº hembras adultas?? ↑muerte reciente ↓hembras jóvenes ↓filarias machos 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Falsos positivos: errores técnicos retrasar la lectura del resultado 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Falsos negativos: Fallos técnicos Baja sensibilidad Carga parasitaria muy ligera Sólo por filarias macho Dirofilarias <6 meses 1. TESTS DE ANTÍGENOS
Si se duda (positivo muy débil) repetir la prueba repetir en otra marca 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
OBSERVACIÓN DIRECTA
objetivo de x10 aumentos 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
El nº no guarda relación con el nº adultos ni gravedad
No identifica tipo de microfilarias Dirofilaria immitis ● Arterias pulmonares ● Ventrículo derecho
Dirofilaria repens ● Tejido subcutáneo
Acanthocheilonema (Dipetalonema) ● Peritoneo y cavidad reconditum abdominal
Acanthocheilonema (Dipetalonema) ● Cavidad peritoneal dracunculoides 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
Dirofilaria immitis Dipetalonema más móviles reconditum
movimiento ondulante y no movimiento rectilíneo y progresivo progresivo 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
TEST DE WOO
Tubo de hematocrito: capa flogística 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
MÉTODO DE FILTRACIÓN:
1 ml de sangre + 9 ml de carbonato sódico 0.1%
Filtro (3 µm diámetro)
Azul de metileno 0.1% 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
TEST DE KNOTT :
1 ml sangre + 9 ml formalina 2%
5’ a 1100 rpm
Sedimento + azul de metileno 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
MÉTODO HISTOQUÍMICO :
Extensiones de sangre
Se cubren con la fosfatasa ácida 2 horas a TA
Contrateñir verde metilo al 1% 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
D.immitis D.repens D.reconditum D.dracunculoides : ● Poro anal ● Poro anal ● Todo el ● Poro anal parásito ● Poro excretor ● Poro excretor ● Cuerpo interno
Canine and feline heartworm disease; diagnosis and therapy. ● Espacio cefálico Schrey & Trautvetter. 1998 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
20-30% amicrofilarémicos Localización ectópica de adultos Parásitos de un solo sexo Periodo de prepatencia (7 meses) Respuesta inmune frente MF 2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
Porcentaje se eleva: tratamiento preventivo intermitente MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
Falso Negativo Fallo técnico Bajo nº hembras
Anticuerpos que enmascare antígenos MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
Microfilarias no son D.immitis : D.reconditum D.repens D.dracunculoides
Estudio histoquímico
Estudio morfológico MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
D.immitis y D.repens mayor anchura y longitud
D.reconditum y D.dracunculoides más estrechas y cortas
D.immitis D.repens D.reconditum D.dracunculoides Longitud µm 260 340 274 362 241 287 190 211 Anchura µm 4 6.5 5.8 7.3 3.8 5 4.8 5.8 Dirofilaria immitis ● Extremo cefálico afilado ● Cola recta y afilada
Dirofilaria repens ● Extremo cefálico romo ● Cola afilada y filiforme (mango de paragüas)
Acanthocheilonema (Dipetalonema) ● Extremo cefálico romo con gancho prominente reconditum ● Cola chata y en gancho
Acanthocheilonema (Dipetalonema) ● Extremo cefálico romo dracunculoides ● Cola larga y afilada MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
Muerte de adultos: circunstancias naturales tratamiento adulticida
MF sobreviven 2 años MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
Transfusión: de un perro microfilarémico MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
Vía transplacentaria: madre con microfilaremia
Microfilarias no se desarrollarán en adultos HEMATOLOGÍA
Anemia: 10-60% Normocítica normocrómica Hemólisis (síndrome vena cava)
Leucocitosis: 20% Neutrofilia, monocitosis Eosinofilia : 85-95% Basofilia: 35-40% HEMATOLOGÍA
Perfil de coagulación Trombocitopenia Hipofibrinogenemia Tiempo de protrombinoplastina parcial y tiempo de coagulación activada prolongados Altas concentraciones de PDFs
●Tromboembolismo ●CID BIOQUíMICA
Alteración hepática: FA, ALT, AST: 5 10%
Alteración renal: Azotemia: <5% Hipoalbúminemia URIANÁLISIS
Glomerulonefropatía
Depósito de complejos autoinmunes
MF circulantes
Ag de Wolbachia URIANÁLISIS
Proteinuria (U P/C >0.5): 10 45%
Group A (WSP POSITIVE) Group B (WSP POSITIVE) 0.72+0.81 0.27+0.33
Group A (WSP POSITIVE) Group B (WSP NEGATIVE)
81.5+78.8 mg/dl 28.1+24.4 mg/dl MARCADORES CARDIOPULMONARES
Veterinaria: Enf CP tempranas o asintomáticas Casos dudosos Pronóstico MARCADORES CARDIOPULMONARES
Hipertensión pulmonar: Adultos Pérdida de elasticidad
ICC derecha MARCADORES CARDIOPULMONARES
Tromboembolización: Endoarteritis: oclusión de arteriolas Desprendimiento íntima lesionada Muerte de parásitos MARCADORES CARDIOPULMONARES
Valorar las lesiones producidas
Grado de severidad
Pronóstico Integridad Miocárdica
Troponinas T e I:
Proteínas musculares estructurales
Isoformas cardiacas específicas
Necrosis: pérdida de integridad de la membrana Troponinas T e I en dirofilariosis
Troponina T: valores normales
Troponina I: valores ligeramente aumentados Troponina I es un marcador más sensible que la troponina T Integridad Miocárdica
Mioglobina:
Proteína de bajo peso molecular
Función: fijar el oxígeno en las células musculares
Músculo cardíaco y esquelético Mioglobina en dirofilariosis
Traumatismo torácico
Dilatación vólvulo-torsión
Dirofilariosis canina: 18.8% de perros amicrofilarémicos 23.9% de perros microfilarémicos Marcadores de tromboembolismo pulmonar
Dímero-D:
Evalúa presencia de procesos tromboembólicos
Producto final de la degradación de un trombo Dímero D
FIBRINóGENO Elevadas concentraciones:
TROMBINA Mayor formación y degradación de fibrina FACTOR XIII FIBRINA
PLASMINA
DÍMERO-D Dímero-D en dirofilariosis
47% presentan valores patológicos
Especialmente perros microfilarémicos incrementa la tendencia al desarrollo de trombos y CID * DIROFILARIOSIS FELINA
Los gatos también pueden verse infectados gatos de exterior y de interior
Prevalencia: 5-10% de perros ?? SUB -DIAGNOSTICADA!!
Gran Canaria: 34 % DIAGNÓSTICO
Más complicado
Fácil pasarla por alto
Bajo número de parásitos
Combinar varias técnicas Serología Radiología torácica Ecocardiografía Tests comerciales
Antígenos de hembras adultas
Resultado negativo:
Parásitos machos Parásitos inmaduros o juveniles Antigenemia: > 6-8 meses Detección de anticuerpos
Ac filarias desde los 2 meses post-infección
Falsos positivos: contacto con el parásito
Falsos negativos: 14-20% en gatos infectados Detección de anticuerpos
Ray Dillon and Byron Blagburn, 2007 Detección de anticuerpos
Anticuerpos anti-WSP
Proteína de superficie de Wolbachia (WSP) Microfilaremia
Muy poco probable
< 20% Radiología torácica
Principales hallazgos radiológicos: Arterias lobares y pulmonares: aumento y mayor tortuosidad Proyección DV y LL Radiología torácica
Silueta cardíaca no suele modificarse Patrón pulmonar broncointersticial focal o multifocal Suele desaparecer espontáneamente en unos meses
La mitad de los gatos presentan alguna alteración radiográfica Ecocardiografía
Test antígenos negativo, pero sospechamos
DÓNDE BUSCAR: Arterias pulmonares principal y lobar derecha Observar todas las localizaciones posibles
Detecta parásitos en un 40- 78% Consultations in Feline Internal Medicine (Fifth Edition) Cuadro diagnóstico
NEGATIVO: Bajo índice sospecha ANTICUERPOS POSITIVO: Alto índice sospecha
NEGATIVO: Bajo índice sospecha ANTÍGENOS POSITIVO: DIAGNÓSTICO
NORMAL: Bajo índice sospecha RADIOGRAFÍA TÓRAX ALTERACIONES: Alto índice sospecha
NO PARÁSITOS: No influye índice sospecha ECOCARDIOGRAFÍA SÍ PARÁSITOS: DIAGNÓSTICO [email protected]