Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» министерства здравоохранения Российской Федерации

На правах рукописи Самохина Надежда Ильдаровна

ПЕРВИЧНАЯ ОТКРЫТОУГОЛЬНАЯ ГЛАУКОМА: ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПРОТЕОМНОГО АНАЛИЗА СЛЕЗЫ И ЖИДКОСТИ ПЕРЕДНЕЙ КАМЕРЫ ГЛАЗА

14.01.07 - Глазные болезни 03.01.04 - Биохимия

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научные руководители доктор медицинских наук, профессор С.А. Кочергин, доктор биологических наук, профессор С.А. Мошковский

Москва – 2018

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 5 ВВЕДЕНИЕ 8 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 16 1.1 Методы исследования в ранней диагностике первичной открытоугольной глаукомы 18 1.2 Возможности использования протеомного анализа в исследовании биологических жидкостей 24 1.3 Современные представления о слезной жидкости 27 1.4 Современные представления о жидкости передней камеры глаза 28 1.5 Возможности протеомного анализа слезы и жидкости передней камеры глаза в диагностике офтальмопатологии 29 1.5.1 Белки, выявленные при протеомном анализе слезы, жидкости передней камеры глаза и плазмы крови 29 1.5.2 Результаты протеомного анализа при офтальмопатологии 35 1.6 Возможности протеомного анализа слезы и жидкости передней камеры глаза в диагностике первичной открытоугольной глаукомы 38 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 41 2.1 Характеристика клинического материала 41 2.2 Клинико-функциональные методы исследования 43 2.3 Методы получения биоматериалов для биохимических исследований 44 2.3.1 Забор слезной жидкости 44 2.3.2 Забор жидкости передней камеры глаза 45 2.4 Методы протеомного изучения жидкости передней камеры глаза 46 2.4.1 Методы пробоподготовки 46

2

2.4.2 Методы протеомного анализа 53 2.5 Методы биоинформационного анализа и статистическая обработка данных 55 2.5.1 Обработка данных в программе MaxQuant 55 2.5.2 Обработка данных в программе Perseus 55 2.5.3 Анализ аннотации белков жидкости передней камеры глаза элементами Gene Ontology 56 2.5.4 Статистический анализ 57 2.6 Методы изучения белков слезной жидкости 58 2.6.1 Иммуноблоттинг на сухой мембране 58 2.6.2 «Классический» Вестерн-блоттинг 59 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 61 3.1 Белки жидкости передней камеры глаза, полученные в результате протеомного анализа, и их функции 63 3.2 Состав протеома жидкости передней камеры глаза 64 3.3 Распределение белков жидкости передней камеры глаза в выделенных клинических подгруппах 67 3.4 Характеристика белков жидкости передней камеры глаза, выделенных только в подгруппе «катаракта + первичная открытоугольная глаукома» 83 3.5 Характеристика белков жидкости передней камеры глаза, выделенных в подгруппах «катаракта» и «катаракта + псевдоэксфолиативный синдром» 87 3.6 Аполипопротеин D – потенциальный биомаркер псевдоэксфолиативного синдрома 88 3.7 Сравнение полученного протеома жидкости передней камеры глаза с другими базами данных 90

3

3.8 Результаты анализа слезной жидкости 122 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 124 ВЫВОДЫ 129 Практические рекомендации 130 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 131

4

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВГД – внутриглазное давление ДЗН – диск зрительного нерва ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ед – единица ЖХ-МС/МС / LC-MS/MS – жидкостная хроматография с тандемной масс- спектрометрией / liquid chromatography-mass spectrometry кВ – киловольт КЧСМ – критическая частота слияния мельканий мМ – миллимолярный мм рт ст – миллиметр ртутного столба НАДФ – никотинамидадениндинуклеотидфосфат ОЗСК – острота зрения с коррекцией ОКТ – оптическая когерентная томография ПААГ – полиакриламидный гель ПОУГ – первичная открытоугольная глаукома ПЭС – псевдоэксфолиативный синдром СНВС – слой нервных волокон сетчатки эВ – электрон-вольт °С – градус Цельсия 3α-HSD (3α-hydroxysteroid dehydrogenase) – 3α-гидроксистероиддегидрогеназа ANGPTL7 (angiopoietin-related protein 7) – ангиопоэтин-подобный белок 7 AP4A (diadenosine tetraphosphate) – диаденозина тетрафосфат Apo-C III (apolipoprotein C III) – аполипопротеин C III Apo-D (apolipoprotein D) – аполипопротеин D BDNF (brain-derived neurotrophic factor) – нейротрофический фактор мозга BSA (bovine serum albumin) – бычий сывороточный альбумин BSS (balanced sterile sodium solution) – сбалансированный солевой раствор 5

CD44 – интегральный клеточный гликопротеин FASP (filter aided sample preparation) – подготовка образца с использованием фильтра

FDR (false discovery rate) – число ложноположительных результатов FDT-периметрия (Frequency Doubling Technology Perimetry) – периметрия с удвоением пространственной частоты Gorilla – Gene Ontology enRIchment anaLysis and visuaLizAtion tool GRP78 (78 kDa glucose-regulated protein) – белок, регулируемый глюкозой 78 kDa HRT (Heidelberg retina tomograph) – Гейдельбергская ретинотомография

Hsp (Heat-shock protein) – белок теплового шока HUPO (Human Proteome Organization) – международный консорциумом «Протеом человека» Ig (immunoglobulin) – иммуноглобулин kDa (kilodalton) – кДа – килодальтон LFQ (label-free quantitation) – метод определения интенсивности сигнала m/z – масса/заряд ORA (Ocular Response Analyzer) – анализатор биомеханических свойств глаза PDGF (platelet-derived growth factor) – фактор роста тромбоцитов pH (лат. pondus Hydrogenii) – водородный показатель PTGDS (Prostaglandin-H2 D-isomerase) – простагландин H2 D-изомераза PVDF (polyvinylidene fluoride / polyvinylidene difluoride) – поливинилиденфторид SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) – кислый кальций- связывающий богатый цистеином белок SWAP (Short-Wavelength Automated Perimetry) – коротковолновая автоматизированная периметрия Tris (tris(hydroxymethyl)aminomethane) – трис(гидроксиметил)аминометан 6

VEGF А (vascular endothelial growth factor А) – сосудистый эндотелиальный фактор роста А

7

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы Глаукома является социально значимой болезнью вследствие того, что охватывает большие группы населения и может приводить к слепоте. Потеря зрения у людей всех возрастов является проблемой современной офтальмологии [1, 2]. Как правило, при обследовании у одного из трех пациентов старше 65 лет выявляется снижение остроты зрения и одной из причин может быть глаукома [3, 4]. Поэтому данное заболевание имеет большое медико-социальное значение и является одним из приоритетных направлений современной офтальмологии. Проблема ранней диагностики глаукомы еще далека от своего решения. И, несмотря на значительные успехи в разработке современных патогенетически обоснованных медикаментозных и хирургических методов лечения глаукомы, не всегда удается добиться стабилизации глаукомного процесса и предотвратить инвалидизацию пациентов. Течение глаукомы, как правило, бессимптомное с прогрессирующим снижением зрительных функций [5]. Традиционные методы диагностики основаны на выявлении уже имеющейся клинически значимой симптоматики – дефекты полей зрения, изменение диска зрительного нерва [9, 10]. Установлено, что клинически определяемые изменения поля зрения у больных глаукомой наблюдаются при потере около 40% зрительных волокон [11]. Таким образом, данную диагностику заболевания в начальной стадии трудно назвать ранней. Динамика заболевания, согласно принятой классификации, также оценивается в основном по наличию или отсутствию прогрессирования изменений ДЗН и поля зрения. В связи с этим, продолжается поиск новых методов, позволяющих обнаружить самые ранние доклинические нарушения у больных глаукомой, так

8

как успех медикаментозного и хирургического лечения больных глаукомой во многом зависит от своевременной постановки диагноза. В последние десятилетия увеличивается число 40-60-летних пациентов трудоспособного возраста с диагнозом «катаракта», что требует проведения оперативного лечения. По статистике, диагноз «первичная открытоугольная глаукома» впервые устанавливается как раз в этом возрасте или несколько позже. Что касается исследований, направленных на поиск методов ранней диагностики глаукомы, есть уникальная возможность взять во время операции факоэмульсификации катаракты на исследование жидкость передней камеры глаза для проведения тонкого биохимического анализа. По сравнению со слезой, жидкость передней камеры содержит меньше контаминантов. Одним из новых перспективных направлений биомедицинских исследований является протеомный анализ глазных жидкостей и тканей. Главной целью клинической протеомики является обнаружение нового белкового или пептидного биомаркера, который связан с определенным заболеванием. Сравнение протеомов здорового человека и больного позволяет выявить конкретные белки, потенциально вовлеченные в развитие болезни, которые в дальнейшем могут стать мишенями для новых лекарственных препаратов. Кроме того, если такие белки уже известны, анализ протеома может использоваться как метод ранней диагностики различных заболеваний. Одним из основных методов протеомики является масс-спектрометрия белков, которая позволяет установить количественный и качественный состав в исследуемом образце. В настоящее время в медицине применение методов протеомного анализа позволяет выявить маркеры некоторых заболеваний на ранней стадии болезни.

9

Степень разработанности проблемы Анализ работ, посвященных поиску возможных биомаркеров первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ), выявил недостаточную степень разработанности данной проблемы. В России не проводились исследования жидкости передней камеры глаза и слезы пациентов с катарактой, глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом методами протеомного анализа. В зарубежной литературе есть работы, посвященные поиску биомаркеров глаукомы, однако не было выявлено ни одного достоверно доказанного маркера. Протеомный анализ жидкости передней камеры глаза и слезы позволяет не только определить состав белков исследуемой биологической жидкости, но и выявить изменения состава при развитии заболевания. Проблема поиска биомаркера при первичной открытоугольной глаукоме чрезвычайно актуальна в связи с трудностью диагностики заболевания на ранней стадии. Причины возникновения псевдоэксфолиативного синдрома также не до конца ясны. При этом данный синдром может встречаться как при первичной открытоугольной глаукоме, так и изолированно. Таким образом, протеомные исследования слезы и жидкости передней камеры при глаукоме и псевдоэксфолиативном синдроме очень важны для развития представлений о патогенезе данных заболеваний. Цель данного исследования - усовершенствовать диагностику первичной открытоугольной глаукомы путем использования протеомного анализа жидкости передней камеры глаза и слезы. Задачи исследования 1. Идентифицировать белковый состав жидкости передней камеры глаза методом протеомного анализа. 2. Оценить протеомный профиль жидкости передней камеры глаза и установить возможные биомаркеры первичной открытоугольной глаукомы.

10

3. Определить наличие выявленных в жидкости передней камеры глаза биомаркеров в слезе. 4. Оценить диагностическую значимость выявленных биомаркеров в установке диагноза первичной открытоугольной глаукомы. 5. Сопоставить протеомный профиль слезы и жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой и пациентов без подтвержденного диагноза глаукома. Материал и методы исследования Под наблюдением находились 60 пациентов, из них 24 мужчин (24 глаза), 36 женщин (36 глаз). Все больные были клинически обследованы с использованием стандартных методик (визометрия, тонометрия, гониоскопия, офтальмоскопия, периметрия, определение критической частоты слияния мельканий) и расширенного комплекса диагностических методик (тонография, пахиметрия, компьютерная периметрия, оптическая когерентная томография). Забор слезной жидкости осуществлялся с помощью инсулинового шприца с одноразовой канюлей из нижнего конъюнктивального свода обследуемых накануне операции. Забор жидкости передней камеры проводился во время первого этапа операции факоэмульсификации катаракты. Протеомный анализ жидкости передней камеры глаза проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс- спектрометрией по описанному далее протоколу. Слезная жидкость исследовалась методами вестерн-блоттинг и дот-блоттинг. Методологическая и теоретическая база диссертационного исследования Методологической и теоретической основой диссертационного исследования послужили работы зарубежных и отечественных исследователей, посвященные поиску возможных биомаркеров первичной открытоугольной глаукомы.

11

Для решения поставленных целей и задач при проведении исследования были применены клинический метод, инструментальный метод, биохимический метод, статистический метод. В работе были исследованы образцы жидкости передней камеры глаза 29 пациентов с катарактой, глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом методом хромато-масс-спектрометрии на приборе высокого разрешения и образцы слезной жидкости методом вестерн- блоттинга. Основные научные положения, выносимые на защиту 1. При исследовании жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой было идентифицировано 12 белковых групп, не выявленных в других клинических группах. Полученные данные позволяют проводить дальнейшие исследования по определению данных белков в жидкости передней камеры глаза и установлению возможного биомаркера ПОУГ. 2. Объединение в одну группу белков жидкости передней камеры пациентов с катарактой в сочетании с ПЭС и без него, показывает наибольшее количество специфических белков (45 белковых групп). В данной объединенной группе представлены структурные компоненты вещества хрусталика, а наиболее обогащенный биологический процесс – дифференцировка кератиноцитов (p- value = 2,57 × 10-4). Предположительно, развитие катаракты сопровождается повреждением вещества хрусталика, что приводит к выделению в жидкость передней камеры его компонентов. 3. Исследование объединенного протеома жидкости передней камеры глаза для выявления определенных структурно-функциональных групп белков с использованием категорий Gene Ontology установило, что основной функцией протеома жидкости передней камеры является активность по ингибированию эндопептидаз, что является важным для предотвращения расщепления белков и нарушения прозрачности внутриглазных сред. 12

4. Выявленный при протеомном исследовании жидкости передней камеры белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома, что позволяет проводить раннюю диагностику данного синдрома. Научная новизна исследования 1. В данном научном исследовании в жидкости передней камеры впервые идентифицированы 12 белковых групп, характерных для первичной открытоугольной глаукомы. Выявленные белки являются потенциальными биомаркерами данного заболевания. Это открывает перспективу для дальнейших исследований для поиска маркеров ПОУГ, прогнозирования течения данного заболевания и оценки эффективности проводимой терапии. 2. В ходе протеомного исследования жидкости передней камеры глаза впервые были идентифицированы группы белков, ранее не описанные в составе жидкости передней камеры и выявлены группы белков, характерные для катаракты, псевдоэксфолиативного синдрома и глаукомы. 3. На основании проведенного исследования определено, что основная функция белков жидкости передней камеры глаза - ингибирование эндопептидаз. 4. Установлено, что белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома. 5. Объединение в одну группу белков жидкости передней камеры пациентов с катарактой в сочетании с псевдоэксфолиативным синдромом и без него, показало наибольшее количество специфических белков. Теоретическая и практическая значимость 1. При проведении исследования жидкости передней камеры глаза необходимо обращать внимание на 12 белковых групп, выявленных при первичной открытоугольной глаукоме, так как данные белки являются потенциальными биомаркерами первичной открытоугольной глаукомы.

13

2. Анализ жидкости передней камеры глаза методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс- спектрометрией является высокоточным и позволяет проводить дифференциальную диагностику таких заболеваний, как первичная открытоугольная глаукома и псевдоэксфолиативный синдром. Соответствие диссертации Паспорту научной специальности В соответствии с формулой научной специальности 14.01.07 – «Глазные болезни (медицинские науки)», охватывающей проблемы разработки новых и усовершенствование известных методов обследования органа зрения и его придатков, методов диагностики различных заболеваний; изучение и совершенствование методов диспансеризации пациентов с глаукомой и другими видами прогрессирующей патологии глаза, в диссертационном исследовании набраны 4 группы пациентов с катарактой, первичной открытоугольной глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом. Все больные были клинически обследованы с использованием стандартных и расширенного комплекса диагностических методик. В соответствии с формулой научной специальности 03.01.04 – «Биохимия (биологические науки, химические науки, медицинские науки)», охватывающей проблемы установления химического состава живых организмов, выявления закономерностей строения, содержания и преобразования в процессе жизнедеятельности организмов химических соединений, общих для живой материи в целом; теоретические и прикладные проблемы закономерностей химических превращений в живых организмах, молекулярных механизмов интеграции клеточного метаболизма, связей биохимических процессов с деятельностью органов и тканей, с жизнедеятельностью организма для решения задач сохранения здоровья человека, выяснения причин различных болезней и изыскания путей их эффективного лечения, в диссертационном исследовании проведена идентификация протеомного профиля жидкости передней камеры 14

глаза пациентов с катарактой, первичной открытоугольной глаукомой и псевдоэксофлиативным синдромом и выявлены белки, характерные для каждой группы пациентов. Соответствие диссертации области исследования Область диссертационного исследования Самохиной Н.И. включает разработку новых методов диагностики первичной открытоугольной глаукомы и соответствует п. №1 и №7 паспорта специальности 14.01.07 – «Глазные болезни (медицинские науки)», №3 и №10 паспорта специальности 03.01.04 – «Биохимия (биологические науки, химические науки, медицинские науки)».

15

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Понятие «глаукома» объединяет большую группу заболеваний глаза с различной этиологией. Все эти заболевания включают в себя повышение внутриглазного давления (ВГД) выше толерантного для зрительного нерва уровня, развитие глаукомной оптической нейропатии с последующей атрофией (с экскавацией) головки зрительного нерва, возникновение типичных дефектов поля зрения [5]. В патогенезе глаукомы важнейшее значение имеет нарушение гидродинамики глаза, соотношения продукции и оттока внутриглазной жидкости. Внутриглазная жидкость вырабатывается в задней камере глаза отростками цилиарного тела, а затем через отверстие зрачка поступает в переднюю камеру глаза, откуда направляется к углу передней камеры [6]. Отток водянистой влаги из передней камеры осуществляется через трабекулы, однако в зависимости от направления он может быть разделен на транстрабекулярный (синусный), осуществляемый сквозь трабекулы по интратрабекулярным пространствам и паратрабекулярный (увеальный). Последний состоит из интратрабекулярных щелей увеальных трабекул, непрерывно переходящих в межмышечные пространства цилиарной мышцы, сообщающиеся с супрацилиарным пространством [7, 8]. В патогенезе глаукомной оптической нейропатии принимают участие механические, сосудистые, метаболические факторы [1]. Повышение ВГД оказывает прямое повреждающее действие на структуры диска зрительного нерва (ДЗН). Дисциркуляторные нарушения приводят к изменению ауторегуляции кровотока к головке зрительного нерва, ишемии и гипоксии ткани ДЗН (механико-васкулярная теория патогенеза глаукомы) [9]. Эти факторы являются причиной дистрофии и деструкции аксонов, нарушения аксоплазматического тока и гибели ганглиозных клеток сетчатки.

16

Прогрессирующая атрофия тел ганглиозных клеток и их аксонов приводит к характерным изменениям ДЗН с развитием глаукоматозной экскавации. В настоящее время широко используется классификация глаукомы, в которой учитываются форма и стадия заболевания, состояние уровня ВГД и динамика зрительных функций [2]. По происхождению глаукому подразделяют на первичную, вторичную и сочетанную с дефектами развития глаза или других органов [10]. По механизму повышения ВГД выделяют открытоугольную глаукому, закрытоугольную, с дисгенезом угла передней камеры, с претрабекулярным и периферическим блоком [2]. Первичная открытоугольная глаукома может возникать у лиц в возрасте старше 35 лет и, в основном, диагностируется в диапазоне от 55 до 60 лет. Этиология данного заболевания неизвестна. Угол передней камеры открыт и не склонен к закрытию. Поражаются оба глаза, но при этом патологический процесс асимметричен, иногда по времени существенно. Течение заболевания практически бессимптомно вплоть до появления существенных дефектов в поле зрения, заставляющих пациента обратиться к врачу. Иногда больные жалуются на ощущение тяжести, распирания в глазу, ощущения ложной слезы, отмечают частую смену очков, причем как для дали, так и для близи. Возможные признаки заболевания: нарушение контрастной чувствительности, темновой адаптации, цветоощущения и проведения зрительного ощущения по off-каналам. Дефекты в поле зрения появляются с момента возникновения парацентральных скотом, расширения слепого пятна, дугообразной скотомы Бъеррума, назальной ступеньки. Затем суживаются границы поля зрения с носовой стороны, далее по мере прогрессирования заболевания – сверху, снизу и с височной сторон, до трубчатого поля зрения. В финале – слепота с остаточным островком светоощущения с темпоральной стороны.

17

ПОУГ разделяется на глаукому с повышенным внутриглазным давлением, глаукому с нормальным внутриглазным давлением, псевдоэксфолиативную, пигментную. При первичной глаукоме патогенные процессы, возникающие в углу передней камеры, дренажной системе глаза или в головке зрительного нерва, предшествующие возникновению заболевания, не имеют самостоятельного значения. Они являются начальными этапами патогенеза глаукомы [2, 10]. Механизм нарушения оттока водянистой влаги при ПОУГ связан с развитием трабекулопатии и функционального блока шлеммова канала. Развитие трабекулопатии обусловлено возрастными изменениями и/или (псевдо) эксфолиативным синдромом (ПЭС) или синдромом пигментной дисперсии. Изменение гидродинамики глаза приводит к повышению ВГД выше толерантного уровня и развитию атрофии ДЗН по глаукомному типу. Традиционный интерес офтальмологов к проблеме глаукомы обусловлен многообразием клинических форм, сложностью патогенеза, ранней диагностики и лечения, медикосоциальной значимостью глаукомы [11]. Распознавание глаукомы на развитой и далекозашедшей стадиях, как правило, не представляет затруднений. Особенности диагностики начальной стадии глаукомы вызваны главным образом двумя причинами: отсутствием точной границы между здоровьем и болезнью и относительностью всех нормативов, с которыми приходится иметь дело врачу. Ранняя (своевременная) диагностика необходима для выявления глаукомы до развития атрофических процессов в ДЗН, слое нервных волокон сетчатки и появлении типичных дефектов в поле зрения [12]. 1.1 Методы исследования в ранней диагностике первичной открытоугольной глаукомы Обследование на глаукому должно быть комплексным и не растянутым во времени [12]. Стандартные диагностические методики включают в себя 18

суточную тонометрию, биомикроскопию, гониоскопию, офтальмоскопию, периметрию. В расширенный комплекс диагностических методик входит тонография, эластотонометрия, исследование уровня ВГД по хронобиологическим схемам и/или почасовая тонометрия, динамическая контурная тонометрия, транспальпебральная тонометрия, нагрузочные и/или разгрузочные пробы, исследование морфометрических и биомеханических свойств фиброзной оболочки глаза (пахиметрия, исследование вязкоэластических свойств), фотографирование (исследование) глазного дна с помощью фундус-камеры, Гейдельбергская ретинотомография, и/или лазерная поляриметрия, и/или оптическая когерентная томография (ОКТ), компьютерная периметрия, исследование кровообращения глаза, исследование перфузионного давления, флюоресцентная ангиография, ультразвуковые методы исследования, электрофизиологические методы исследования [12]. В настоящее время с учетом современных технологий для ранней диагностики ПОУГ (мониторинга) наиболее информативными методами исследования признаны бесконтактная тонометрия ORA, динамическая контурная тонометрия Pascal, ОКТ и коротковолновая автоматизированная или сине-жёлтая периметрия. При обследовании одним из важнейших исследуемых показателей является уровень внутриглазного давления, что особенно важно у лиц с начальной стадией глаукомы, когда еще сложно установить другие характерные морфофункциональные изменения, или у больных с глаукомой нормального давления. При однократном измерении ВГД и получении величины, превышающей среднестатистическую верхнюю границу нормы на 2-4 мм, необходимо проводить тщательное дообследование пациента для исключения глаукомы. При этом, прежде всего необходимо повторное измерение уровня ВГД, так как возможны ошибки измерений, связанные с давлением на глазное яблоко, оказываемое специалистом, субъективной оценкой результатов и неточностью калибровки тонометров [12]. 19

На сегодняшний день для измерения уровня ВГД используют аппланационную тонометрию по методу Маклакова, аппланационную тонометрию по методу Гольдмана, пневмотонометрию, бесконтактную тонометрия ORA, динамическую контурную тонометрию Pascal [13]. В настоящее время для коррекции показателей тонометрии необходимо исследование центральной толщины роговицы (пахиметрия). Данное исследование проводится ультразвуковым А-сканированием (контактным или иммерсионным способом). В соответствии с показателями пахиметрии центральную толщину роговицы принято классифицировать на тонкие (≤520 мкм), нормальные (от 521 до 580 мкм) и толстые (≥581 мкм). В то же время принято условное дополнительное деление тонких и толстых роговиц на ультратонкие (441-480 мкм) и ультратолстые (601-644 мкм). Анализатор биомеханических свойств глаза Ocular Response Analyzer (ORA, Reichert Inc., США) является бесконтактным тонометром, работающим по принципу динамической двунаправленной аппланации роговицы. Измерения, произведенные на ORA, позволяют оценить ВГД по Гольдману, ВГД роговично–компенсированное, корнеальный гистерезис, фактор резистентности роговицы, центральную толщину роговицы [14]. Динамическая контурная тонометрия Pascal – модификация контактной тонометрии, исключающая влияние толщины роговицы на показатели измерения ВГД. Динамический контурный тонометр Pascal устанавливается на биомикроскоп, и на его экране учитывается среднее минимальное ВГД и амплитуда глазного пульса давления. Влияние толщины роговицы и ригидность элиминируются при помощи специального микросенсора, чувствительного к давлению и имитирующего кривизну роговицы [15]. Другой важный диагностический метод при глаукоме – гониоскопия – изучение угла передней камеры, недоступного непосредственному наблюдению. Осмотр угла передней камеры необходимо проводить для 20

постановки диагноза и для решении вопроса о дальнейшей тактике лечения (терапевтическое, лазерное или хирургическое), а также в послеоперационном периоде. При обследовании пациента с подозрением на глаукому одним из важнейших этапов является исследование диска зрительного нерва. Наиболее оптимальным методом определения изменений структуры ДЗН является стереоскопия. При этом возможно проведение непрямой офтальмоскопии на щелевой лампе с линзами 60Д, 78Д или 90Д или прямой офтальмоскопии через центральную часть линзы Гольдмана. При проведении офтальмоскопии прежде всего следует обращать внимание на окраску ДЗН. Для глаукомы характерны атрофические изменения в ДЗН, которые клинически проявляются в побледнении атрофических участков диска. Также следует оценивать размер экскавации ДЗН. По литературным данным, размер экскавации диска от 0,0 до 0,3 следует относить к нормальным размерам, от 0,4 до 0,6 – к группе относительного увеличения, а больше 0,6 – к группе повышенного риска развития глаукоматозной атрофии. В начальной стадии глаукомы четких различий между физиологической и глаукоматозной экскавацией не существует. Постепенно происходит уменьшение ширины нейроретинального пояска. Истончение может быть равномерным по всей окружности, локальным, краевым или сочетанным. Обычно принимают во внимание форму и относительный размер экскавации, ее глубину, характер височного края [13, 16]. При офтальмоскопии возможна общая оценка состояния ДЗН, так как невозможно провести количественную оценку его морфометрической структуры. В настоящее время самыми точными методами исследования ДЗН является оптическая когерентная томография и ее ангио-разновидность, Гейдельбергская ретинальная томография (HRT), а также комбинация этих методик [17]. 21

ОКТ – по сути, метод, позволяющий оценить на гистологическом уровне морфологию тканей (форму, структуру, размер, пространственную организацию в целом) и их составных частей. Приборы, которые включают в себя современные ОКТ-технологии и такие методы, как фотоакустическая томография, спектроскопическая томография, поляризационная томография, допплерография и ангиография, эластография, оптофизиология, дают возможность оценить функциональное (физиологическое) и метаболическое состояние исследуемых тканей. В зависимости от возможностей, которыми может располагать ОКТ, ее принято классифицировать на морфологическую, функциональную и мультимодальную. ОКТ-ангиография является неинвазивной трехмерной альтернативой обычной ангиографии. К преимуществам метода относятся неинвазивность исследования, отсутствие необходимости применения флуоресцентных красителей, возможность измерения глазного кровотока в сосудах в количественном выражении [18]. HRT обеспечивает измерение таких морфометрических параметров ДЗН, как размер, контур и форма, нейроретинальный поясок, экскавация, а также измерение перипапиллярной сетчатки и слоя нервных волокон сетчатки (СНВС). Также при HRT происходит математический анализ полученных результатов и их сопоставление с заложенной в компьютерную систему базой данных. Ретинотомографы позволяют проводить диагностический поиск ранних повреждений ДЗН и СНВС у пациентов с подозрением на глаукому, а также мониторинг оптической нейропатии. При выявлении пограничных изменений ДЗН, необходимо проведение повторных исследований в динамике через 3-6 месяцев. При обследовании пациента с подозрением на глаукому одним из важнейших этапов для верификации диагноза является исследование поля зрения. Поле зрения – это область пространства, воспринимаемая глазом при неподвижном взоре. Периметрия – метод исследования поля зрения с 22

использованием движущихся (кинетическая периметрия) или неподвижных стимулов (статическая периметрия) [13, 16]. В дополнение к стандартной, ахроматической («белый на белом»)

периметрии существуют методы «нестандартной» компьютерной периметрии - коротковолновая автоматизированная или сине-жёлтая периметрия (Short- Wavelength Automated Perimetry или SWAP) и периметрия с удвоением пространственной частоты (Frequency Doubling Technology Perimetry или FDT- периметрия). По литературным данным методика SWAP позволяет выявлять патологические изменения в центральном поле зрения и проводить дифференциальную диагностику между офтальмогипертензией и начальной глаукомой. Но, с другой стороны, SWAP оказалась чувствительной к нарушениям прозрачности хрусталика, что в значительной степени снижает достоверность её результатов у пациентов с нередким сочетанием глаукомы и катаракты. По литературным данным в качестве скрининга глаукомы из всех существующих функциональных методов наиболее высоко оценивается периметрия с удвоением пространственной частоты. В основе FDT-периметрии лежит феномен зрительной иллюзии удвоения низкой пространственной частоты, возникающей у человека в норме в условиях её модуляции с высокой временной частотой [19]. Динамика изменения поля зрения является одним из важнейших признаков для оценки динамики прогрессирования глаукоматозного процесса. При этом для сравнения результатов исследования проводиться строго по одной и той же программе. По литературным данным, обоснованное суждение о характере изменений поля зрения обеспечивает сравнение не менее 3, а лучше 5-6 последовательных измерений (учитывая субъективность исследования, в том числе «эффект обучения»). После первого исследования рекомендуется выполнить повторное с небольшим временным интервалом. Для контроля динамики изменений поля зрения повторные исследования следует проводить 2 23

раза в год, а при впервые выявленной глаукоме или изменении гипотензивного режима - 3 раза в год. К сожалению, все перечисленные выше методы диагностики выявляют лишь клинически значимые симптомы, к примеру, глаукомную оптическую нейропатию или изменение поля зрения, которые характерны для развитой и далекозашедшей стадий заболевания. Выявить глаукому на ранней стадии и вовремя начать лечение крайне сложно. В связи с этим, продолжается поиск новых методов, позволяющих обнаружить самые ранние доклинические изменения у больных глаукомой. 1.2 Возможности использования протеомного анализа в исследовании биологических жидкостей Одним из новых направлений исследований является протеомный анализ глазных жидкостей и тканей [20]. Протеомика – наука, основным предметом изучения которой являются белки, их функции и взаимодействия в живых организмах, в том числе – в человеческом. Задача протеомики – количественный анализ экспрессии белков в клетках в зависимости от их типа, состояния или влияния внешних условий [21]. Протеомика осуществляет сравнительный анализ больших групп белков – от всех белков, вовлеченных в тот или иной биологический процесс до полного протеома (совокупности всех белков организма) [22]. Традиционно изучение белков являлось одним из разделов биохимии, но после определения структуры всей геномной ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) человека и ряда других организмов у исследователей белков появились новые методы, с которыми и связывают появление в 1997 году нового термина протеомика [23]. В частности, появились исчерпывающие базы данных, содержащие последовательности всех белков человека. Это позволяет идентифицировать белки по молекулярной массе их фрагментов методом масс-спектрометрии. Поскольку протеомика оперирует большим объемом данных, для обработки которых требуются 24

специализированные алгоритмы и большие вычислительные мощности, она тесно связана с биоинформатикой. В настоящее время протеомика активно развивается во многих странах мира и занимает ведущие позиции в научных программах современной прикладной и фундаментальной биологии, а также фармацевтики и смежных с ней дисциплинах. Перед международным консорциумом «Протеом человека» (HUPO, Human Proteome Organization) ставятся задачи инвентаризации всех белков человека, построения молекулярных белковых атласов клеток, органов и тканей, выяснения закономерностей регуляции работы белков при посттрансляционных модификациях, поиска белок-белковых взаимодействий и новых маркеров патологических процессов. С развитием протеомики связывают большие надежды по внедрению новых подходов при диагностике различных заболеваний, созданию новых лекарственных соединений и выяснению новых закономерностей функционирования клеток [24]. Протеомный профиль характеризуется значительной групповой и индивидуальной изменчивостью, что ранее было показано для белков печени [25], панкреатического сока, плазмы крови [26], глазных жидкостей, а также белков других биологических жидкостей и тканей. При этом, большой интерес представляет характеристика вариабельности белкового состава у специально отобранной группы здоровых людей для определения интервала нормы данных компонентов внутри человеческой популяции. Не вызывает сомнений, что протеом здорового человека в состоянии сохранения организмом его функциональных резервов чрезвычайно пластичен. В последние годы протеомный анализ стал неотъемлемой частью биомедицинских исследований [27]. Главной целью клинической протеомики является обнаружение нового белкового или пептидного биомаркера, который связан с определенным заболеванием. Биомаркер – молекула, наличие или отсутствие которой позволяет сделать вывод о протекании определенного 25

клеточного процесса, или определить тип клетки. Сравнение протеомов здорового человека и пациента позволяет выявить конкретные белки, потенциально вовлеченные в развитие болезни, которые в дальнейшем могут стать мишенями для новых лекарственных препаратов. Кроме того, если такие белки уже известны, анализ протеома может использоваться как метод ранней диагностики. Одним из основных методов протеомики является масс-спектрометрия белков, которая позволяет установить количественный и качественный состав в исследуемом образце, будь то очищенный и выделенный белок или клеточный лизат. Помимо значительных различий белкового спектра у разных индивидуумов и естественных колебаний протеома во времени, существуют вариации количественного и качественного состава белков, связанные с ответом на изменение внешних условий, например, при каком-либо заболевании. В клинической практике установление новых биомаркеров может помочь в разработке методов для ранней диагностики заболевания. В настоящее время в медицине применение методов протеомного анализа позволяет выявить маркеры онкологических заболеваний на ранней стадии заболевания [28-30]. Есть работы по диагностике хронических дерматозов и аутоиммунных заболеваний кожи методом протеомного анализа [31]. Определен протеомный профиль мочи пациентов с хроническим гломерулонефритом и выявлены белки-маркеры, ответственные за разные фазы течения патологического процесса [32]. В последнее время метод протеомного анализа приобретает большую актуальность и в офтальмологии. С помощью масс-спектрометрии была исследована слеза и жидкость передней камеры глаза, забор которых осуществлялся при таких заболеваниях, как синдром сухого глаза [33-35], увеит [36], возрастная макулярная дегенерация [37-41], диабетическая ретинопатия [42, 43], глаукома [44-48]. 26

1.3 Современные представления о слезной жидкости Слезная жидкость является многокомпонентным секретом, находящимся в конъюнктивальной полости и постоянно увлажняющим наружную поверхность эпителия роговицы и конъюнктивы [49]. Толщина слезной пленки колеблется в зависимости от ширины глазной щели от 6 до 12 мкм [50]. Объем слезы, постоянно находящийся в полости конъюнктивы здорового глаза, составляет 6- 7 мкл. Большая часть слезной жидкости выделяется ацинарными клетками слезной железы [35]. В структурном отношении она неоднородна и включает в себя муциновый, водянистый и липидный слой [51]. Каждому слою присущи свои морфологические и функциональные особенности. К физиологическим функциям слезы относятся: защитная, метаболическая, светопреломляющая и саморегулирующая [52]. Слеза представляет собой стерильную, прозрачную, слегка щелочную (pH 7,0 – 7,4) и несколько опалесцирующую жидкость, состоящую на 99% из воды и приблизительно на 1% из органических и неорганических частей. Осмотические характеристики слезной жидкости соответствуют 0,9% раствору хлорида натрия. В состав слезной жидкости входят различные белки, липиды, углеводы, муцин и другие низкомолекулярные метаболиты и электролиты (главным образом, хлорид натрия, а также карбонат натрия и магния, сульфат и фосфат кальция). Концентрация белка в слезе колеблется от 6 до 10 мг/мл [50, 53]. Большую часть белков составляют альбумины и глобулины. Также обнаружены лизоцим [54], лактоферрин [55], секреторный иммуноглобулин А и липокалин [56]. Наряду с белками в слезной жидкости содержатся около 20 аминокислот, причем их уровень выше, чем в сыворотке крови в 3-4 раза. Ферментный состав слезы разнообразен и включает в себя такие ферменты, как оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, синтетазы, дегидрогеназы, что указывает на активные метаболические процессы, происходящие в ней.

27

Важно отметить, что слеза является довольно доступной биологической жидкостью для исследования и получить ее возможно быстро, просто и неинвазивно в достаточном для исследования количестве [57-61]. 1.4 Современные представления о жидкости передней камеры глаза Жидкость передней камеры глаза (синоним - водянистая влага) вырабатывается пигментным и непигментным эпителием цилиарного тела [62]. Секреция происходит со скоростью 2-3 мкл/мин. Человеческий глаз производит от 3 до 9 мл водянистой влаги в сутки. Функция водянистой влаги – обеспечение питанием бессосудистых тканей глаза (хрусталика, стекловидного тела, роговицы) и удаление шлаковых метаболитов. Основная трудность в протеомном исследовании жидкости передней камеры заключается в ограниченном и небольшом количестве ее объема, который можно получить из одного глаза. Так как общий объем водянистой влаги в передней камере не превышает 150-200 мкл [63], и даже с возрастом уменьшается [64], трудно собрать больше 100-150 мкл. В состав жидкости передней камеры входит около 99% воды и менее 1% белков, из которых преобладают фракции альбуминов, глобулины и трансферрин. По сравнению с сывороткой крови, водянистая влага содержит гораздо меньше белка (0,2-0,5 мг/мл). Также в жидкости передней камеры были обнаружены различные аминокислоты (лизин, гистидин, триптофан), ферменты (протеаза), гиалуроновая кислота. В последние годы были представлены результаты протеомных исследований при различных глазных заболеваниях.

28

1.5 Возможности протеомного анализа слезы и жидкости передней камеры глаза в диагностике офтальмопатологии 1.5.1 Белки, выявленные при протеомном анализе слезы, жидкости передней камеры глаза и плазмы крови 3α-гидроксистероиддегидрогеназа (3α-HSD) 3α-HSD относится к семейству альдо-кеторедуктаз и катализирует превращение 3-кетостероида в соответствующее 3α-гидрокси-производное. В этой реакции кофактором является никотинамидадениндинуклеотидфосфат (НАДФ). В исследовании Weinstein B.I. et al. было выявлено: чем ниже уровень лимфоцитов в периферической крови, тем выше активность 3α-HSD (независимо от проводимой антиглаукомной терапии) [65]. Авторы считают, что данный фермент может быть маркером первичной открытоугольной глаукомы или маркером высокого риска развития данного заболевания. Ангиопоэтин-подобный белок 7 (ANGPTL7) ANGPTL7 относится к семейству ангиопоэтин-подобных белков, имеющих структурное сходство с ангиопоэтинами, важными регуляторами ангиогенеза [66]. Все изученные ангиопоэтин-подобные белки участвуют в образовании кровеносных сосудов и формировании неоваскуляризации (в том числе роговицы) [67, 68]. Кроме того, ангиопоэтин-подобные белки ингибируют фосфолипазу и, таким образом, участвуют в липидном обмене [69]. В своем исследовании Kuchtey J. et al. установили, что в жидкости передней камеры больных первичной открытоугольной глаукомой повышен уровень ANGPTL7 [70]. Диаденозина тетрафосфат (AP4A) Диаденозина тетрафосфат – соединение, состоящее из 2-х аденозиновых групп, соединенных четырьмя атомами фосфора. AP4A обнаружен в слезной жидкости, сердце и головном мозге [71]. Синтез AP4A индуцируется оксидативным стрессом [72]. В исследовании жидкости передней камеры 29

пациентов с первичной открытоугольной глаукомой было обнаружено повышение уровня AP4A по сравнению с группой контроля. Нейротрофический фактор мозга (BDNF) Белок BDNF относится к семейству полипептидных факторов роста, которые необходимы для образования и жизнедеятельности нейронов. BDNF достигает ганглионарных клеток сетчатки через ретроградный аксональный транспорт и синапсы [73]. В слезной жидкости пациентов с глаукомой нормального давления нейротрофический фактор мозга был обнаружен в меньших количествах, чем в группе контроля. Каспаза-14 Каспаза-14 относится к семейству цистеинил аспартат-специфических протеиназ, которые участвуют в процессах воспаления и апоптоза. Хотя большинство каспаз обнаруживаются практически во всех тканях, каспаза-14 экспрессируется, в основном, в ороговевающем эпителии, например, в коже. Более того, активность каспазы-14 находится в прямой зависимости от процесса ороговения. Согласно последним исследованиям, каспаза-14 может быть вовлечена в апоптоз тканей глаза при первичной открытоугольной глаукоме через активацию ферментов касапаза-8 и каспаза-9 [74]. CD44 CD44 - трансмембранный мультифункциональный гликопротеин с массой 80-90 кДа, является основным рецептором для гликозаминогликана и гиалуроновой кислоты [75, 76]. CD44 экспрессируется зрелыми Т- и В- лимфоцитами, медуллярными тимоцитами, гранулоцитами, макрофагами, фибробластами, клетками эпителия роговицы [77] и клетками сетчатки [78, 79]. Первичная открытоугольная глаукома ассоциируется со снижением содержания гиалуроновой кислоты в слезной жидкости. При исследовании жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой был

30

обнаружен растворимый фрагмент CD44 (sCD44), который оказывает токсичное действие на ганглионарные клетки сетчатки [80]. Цистатин С Цистатин С представляет собой полипептид, состоящий из 120 аминокислотных остатков. Все клетки тела, содержащие ядра, производят цистатин С со стабильной скоростью. Концентрация цистатина С в крови коррелирует со скоростью клубочковой фильтрации. При анализе жидкости передней камеры глаза больных с первичной открытоугольной глаукомой было обнаружено повышение уровня этого белка [74]. Аналогичные изменения характерны и для цереброспинальной жидкости при болезни Альцгеймера. Из этого следует, что в основе этих заболеваний, возможно, лежат сходные механизмы. Цитокины Цитокины – секретируемые белки, играющие центральную роль в формировании иммунного ответа. Кроме того, они участвуют в ангиогенезе. Цитокины включают в себя интерлейкины, интерфероны, колониестимулирующие факторы, хемокины, фактор некроза опухоли и факторы роста. В жидкости передней камеры глаза больных с первичной открытоугольной глаукомой обнаружено изменение концентрации цитокинов [81]. Также при глаукоме обнаружены значительные изменения в концентрации цитокинов в сыворотке крови [82]. Эритропоэтин Человеческий эритропоэтин относится к гликопротеинам с молекулярной массой 34 кДа. Главной его функцией является регуляция образования эритроцитов и инициация синтеза гемоглобина. В исследовании были обнаружены защитные свойства эритропоэтина при ишемии нейронов через уменьшение количества свободных радикалов и их токсичного действия [83]. В

31

других работах была обнаружена роль эритропоэтина в развитии первичной открытоугольной глаукомой [84, 85]. Белок, регулируемый глюкозой 78 kDa (GRP78) GRP78 – белок массой 78 кДа, связывается с эндоплазматическим ретикулумом и служит трансмиттером в регуляции его гомеостаза. Исследования последних лет показали, что GRP78 является уникальным белком эндоплазматического ретикулума, который играет роль в поддержании его структуры и белкового состава. У пациентов с первичной открытоугольной глаукомой выявлено более низкое содержание GRP78 в трабекулярной сети, чем в группе контроля [86]. Гепсидин Прогормон гепсидин - пептид, синтезирующийся в печени. Человеческий гепсидин состоит из 84 аминокислот. Гепсидин играет важную роль в регуляции обмена железа в клетках кишечника, макрофагах и гепатоцитах [87]. Недавнее исследование показало, что гепсидин экспрессируется в клетках Мюллера, фоторецепторах и пигментном эпителии сетчатки [88]. Было показано, что локальная секреция гепсидина играет патогенную роль при первичной открытоугольной глаукоме [89]. Гомоцистеин Гомоцистеин – аминокислота, оказывающая цитотоксическое действие, вызывающая апоптоз ганглионарных клеток сетчатки, изменения внеклеточного матрикса и оксидативный стресс. Также гомоцистеин оказывает прямое токсическое действие на нейроны, кровеносные сосуды и ДНК. Витамин В12, витамин В6 фолат – кофакторы в метаболизме гомоцистеина. В исследовании плазмы крови, слезы и жидкости передней камеры обнаружена зависимость между уровнем гомоцистеина и развитием глаукомы нормального давления, псевдоэксфолиативной глаукомы и первичной открытоугольной глаукомы [90].

32

Гидроксипролин Гидроксипролин – аминокислота, производная эндогенного коллагена, в норме присутствующая в плазме крови. Концентрацию гидроксипролина измеряли в плазме крови и жидкости передней камеры пациентов с первичной открытоугольной глаукомой [90]. Уровень этой аминокислоты в водянистой влаге пациентов с глаукомой оказался значительно выше, чем в контрольной группе. В сыворотке крови существенной разницы обнаружено не было. Миоцилин Миоцилин – секреторный гликопротеин с массой 55-57 кДа, относящийся к семейству олфактомединов, выделяется во многих тканях. Он был обнаружен внутри клеток и в межклеточных пространствах. Также миоцилин присутствует в жидкости передней камеры глаза. В нескольких исследованиях была выявлена связь между уровнем миоцилина и подъемами внутриглазного давления. При первичной открытоугольной глаукоме и псевдоэксфолиативном синдроме было обнаружено повышение уровня этого гликопротеина в жидкости передней камеры глаза и в трабекулярной сети [91]. Синтаза оксида азота Оксид азота – основной регулятор сопротивляемости стенок кровеносных сосудов. Существует несколько вариантов регулирования продукции сосудистого оксида азота: циркуляция и воздействие на эндотелий синтазы оксида азота; через неадренергические, нехолинергические нервы сосудов, воздействующие через нейрональную синтазу оксида азота; механическое повреждение стенки сосуда и кровотечение; воздействие цитокинов или других факторов, присутствующих в гладкой мускулатуре сосудов. Увеличение синтеза оксида азота приводит к расслаблению гладких мышц и расширению сосудов. В исследовании авторы предположили, что повышение экспрессии индуцируемой синтазы оксида азота может поддерживать хроническое прогрессирование первичной открытоугольной глаукомы [92]. 33

Простагландин H2 D-изомераза (PTGDS) Простагландин H2 D-изомераза синтезирует простагландин D2 в центральной нервной системе. В сыворотке крови пациентов с заболеваниями сетчатки, сахарным диабетом и гипертензией были определены повышенные уровни простагландина H2 D-изомеразы. Была доказана способность PTGDS индуцировать апоптоз эпителиальных, нервных и гладкомышечных клеток сосудов [93]. При анализе жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой было выявлено повышение концентрации PGDS по сравнению с группой контроля [74]. Фосфолипаза А2 Фосфолипаза А2 относится к надсемейству ферментов, катализирующих гидролиз фосфоглицерида в фосфолипид. При анализе слезной жидкости пациентов с первичной открытоугольной глаукомой и катарактой не было обнаружено существенной разницы в концентрации фосфолипазы А2 [94]. Тем не менее, недавно было обнаружено повышенное содержание этого фермента в трабекулярной сети при первичной открытоугольной глаукоме [95]. Трансферрин Трансферрин относится к семейству белков, связывающих и переносящих ионы железа. Трансферрин обнаруживается в крови в 200 раз более высокой концентрации, чем в жидкости передней камеры глаза. Этот белок регулирует рост многих клеток в переднем сегменте глазного яблока, и, возможно, вовлечен в патофизиологические процессы, происходящие при глаукоме [96]. Транстиретин Транстиретин – белок плазмы крови, отвечающий за транспорт тироксина и ретинола [97]. Повышение уровня транстиретина приводит к внеклеточной полимеризации и образованию нерастворимых фибрилл, так называемых, отложений амилоида. В жидкости передней камеры пациентов с глаукомой

34

были обнаружены повышенные уровни транстиретина, что свидетельствует о его участии в патогенезе глаукомы [98]. 1.5.2 Результаты протеомного анализа при офтальмопатологии 1) Синдром «сухого глаза» Синдром сухого глаза – одно из самых распространенных заболеваний поверхности глазного яблока. Число пациентов с этим заболеванием возрастает год от года. Распространенность синдрома «сухого глаза» в различных странах мира колеблется от 3 до 90% [99, 100, 52]. Пациенты с синдромом сухого глаза обычно жалуются на дискомфорт, жжение, раздражение глаз, светобоязнь, нечеткое зрение. У таких больных высокий риск развития инфекционных заболеваний (конъюнктивит, кератит). При анализе слезной жидкости таких пациентов, многие белки были обнаружены в существенно больших или меньших концентрациях по сравнению со слезой здоровых людей [101]. В исследовании Ohashi Y. et al., Япония, [34] в слезной жидкости пациентов с синдромом сухого глаза было выявлено снижение концентрации лактоферрина и эпидермального фактора роста. В нескольких исследованиях подтвержденными маркерами синдрома сухого глаза были признаны повышенные уровни белков воспаления (трансферрин, С-реактивный белок) и существенно сниженные уровни «защитных» белков (лизоцим, лактоферрин и эпидермальный фактор роста) [50, 33, 34]. 2) Возрастная макулярная дегенерация Возрастная макулодистрофия остается одной из основных причин, приводящих к слепоте в экономически развитых странах и является самой распространенной причиной слепоты у пациентов старше 65 лет [102]. Проводились исследования по определению протеома сыворотки крови пациентов с макулодистрофией. 35

В исследовании Chen H. et al., Китай, [37] определяли аутоантитела к белкам сетчатки в сыворотке крови пациентов с возрастной макулярной дегенерацией. В большинстве проб был повышенный уровень аутоантител по сравнению с группой контроля. Результаты свидетельствуют о том, что при появлении и/или прогрессировании макулодистрофии сетчатки возникает воспаление и, соответственно, иммунный ответ. Аналогичные результаты были получены в исследовании Gurne D.H. et al., США, [39] и Patel N. et al., Англия [40]. В другом исследовании Penfold P.L. et al., Австралия, [41] проводился анализ содержания иммуноглобулинов, α и β глобулинов и аутоантител в сыворотке крови пациентов с возрастной макулярной дегенерацией. У пациентов с подтвержденным повреждением пигментного эпителия сетчатки были выявлены более высокие уровни α-2 глобулина в сыворотке крови. Также в большинстве проб были определены аутоантитела к астроцитам сетчатки. Астроциты участвуют в формировании гематоофтальмического барьера. Таким образом, появление аутоантител к астроцитам сетчатки может быть ранним признаком развития возрастной макулярной дегенерации. В другом исследовании выявлено повышение концентрации белка теплового шока 60 (Нsp - Heat-shock protein) [38] и уровня С-реактивного белка в сыворотке крови пациентов с макулодистрофией сетчатки. Нsp выполняют защитную роль - участвуют в процессах репарации или элиминации токсических для клетки неправильно свернутых или денатурированных белков. По литературным данным белок теплового шока 60 оказывает противовоспалительный эффект и тормозит развитие аутоиммунных заболеваний [103]. C-реактивный белок относится к группе белков острой фазы, концентрация которых повышается при воспалении [104]. Авторы пришли к выводу, что локальное воспаление играет важную роль в патогенезе развития возрастной макулярной дегенерации [105, 38]. 36

3) Увеиты Увеит – полиэтиологическое заболевание, сопровождающееся значительными нарушениями иммунного гомеостаза, нарастающими при рецидивах заболевания, а его осложнения в 30% случаев приводят к снижению остроты зрения и инвалидизации [106]. Увеит является частой причиной слабовидения и слепоты [107]. При увеите происходит патологическая миграция клеток и белков в переднюю камеру. Гистологически данное заболевание характеризуется проникновением лимфоцитов CD4 в пораженные ткани. В исследовании Lightman S. et al., Англия [108], определяли профиль цитокинов в слезной жидкости пациентов с первым и повторными эпизодами увеита. Так, при первом эпизоде заболевания уровень интерлейкина 10 (цитокин с выраженным противовоспалительным эффектом) выше, чем при повторных эпизодах. В исследовании Fine H.F. et al., США, проводился анализ протеома жидкости передней камеры пациентов с увеитом и кистозным макулярным отеком (ассоциированным с увеитом). Было обнаружено повышение уровня сосудистого эндотелиального фактора роста [36]. Авторы пришли к выводу, что это является ответом на гипоксию и действие провоспалительных цитокинов. 4) Диабетическая ретинопатия Диабетическая ретинопатия относится к поздним микрососудистым осложнениям сахарного диабета и является частой причиной слепоты среди населения развитых стран. Слепота у больных сахарным диабетом наступает в 25 раз чаще, чем в общей популяции [109]. Диабетическая ретинопатия является главной причиной слепоты среди пациентов молодого возраста [110]. Анализ протеома стекловидного тела пациентов с диабетической ретинопатией [39] показал повышенный уровень сосудистого эндотелиального фактора роста, являющегося ключевым звеном в механизме как неоваскуляризации, так и сосудистой гиперфильтрации в сетчатке [111, 112] и 37

более низкий уровень белка серпина F1 (белок пигментного эпителия сетчатки). В другом исследовании (Funatsu H. et al., Япония) измеряли концентрацию сосудистого эндотелиального фактора роста и интерлейкина-6 (медиатор острой фазы воспаления) в жидкости передней камеры и плазме крови пациентов с сахарным диабетом [46]. Были получены следующие результаты: при макулярном отеке более высокий уровень и сосудистого эндотелиального фактора роста, и интерлейкина-6. Авторы пришли к выводу, что оба белка вовлечены в патогенез развития макулярного отека. 1.6 Возможности протеомного анализа слезы и жидкости передней камеры глаза в диагностике первичной открытоугольной глаукомы На сегодняшний день были проведены исследования слезы, жидкости передней камеры и сыворотки крови пациентов с глаукомой. Среди белков жидкости передней камеры пациентов с глаукомой идентифицированы матриксные металлопротеиназы [113], которые осуществляют лизис базальных мембран и гидролиз всех существующих компонентов межклеточного матрикса и активируют связанные с ним ангиогенные факторы роста [111, 112]. Также в жидкости передней камеры выделены ангиогенный фактор VEGF А [45] и фибронектин [48]. Фибронектин является гликопротеином внеклеточного матрикса, выполняет регуляторную и стабилизирующую функции в межклеточных взаимодействиях и является общей адгезивной молекулой для соединительной ткани (тканевая форма), плазмы крови и других биологических жидкостей (плазменная форма) [44, 114]. По литературным данным фибронектин определяется в составе псевдоэксфолиативного материала [115] и во всех структурах дренажной системы глаза. В нескольких исследованиях обнаружена более высокая концентрация фибронектина в жидкости передней камеры глаза пациентов с глаукомой [48, 116], причем при псевдоэксфолиативной глаукоме уровень этого гликопротеина 38

значительно выше, чем при ПОУГ. Авторы связывают это с повреждением и нарушенной проницаемостью гематоофтальмического барьера. В другом исследовании был определен более высокий уровень фибронектина в жидкости передней камеры пациентов с ПЭС (без подтвержденного диагноза глаукома), чем без него [47]. Также в жидкости передней камеры пациентов с псевдоэксфолиативной глаукомой были обнаружены более высокие уровни металлопротеиназ 2 и 3 типа и эндогенного ингибитора металлопротеиназы-2 [113]. Это свидетельствует о нарушении баланса между металлопротеиназами и их эндогеными ингибиторами, и может быть одним из звеньев патогенеза ПЭС. При ПОУГ в жидкости передней камеры глаза были обнаружены более высокие уровни растворимого CD44. CD44 - интегральный клеточный гликопротеин, играющий важную роль в межклеточных взаимодействиях, клеточной адгезии и миграции. Это рецептор для гиалуроновой кислоты, некоторых других лигандов, а также, возможно, матриксных металлопротеиназ [47]. Авторы выдвинули рабочую гипотезу о том, что ПОУГ биохимически характеризуется снижением концентрации гиалуроновой кислоты в жидкости передней камеры и повышением экспрессии рецептора CD44 для гиалуроновой кислоты, что, в свою очередь может влиять на трабекулярный аппарат и выживаемость ганглионарных клеток сетчатки. В нескольких исследованиях определяли уровень антител сыворотки крови пациентов с глаукомой. Были обнаружены антитела к Нsp [75], γ-енолазе [76], белку, стимулирующему активацию аденилатциклазы [77] и гликозаминогликанам [78]. Также были определены повышенные уровни антител к антигенам сетчатки и другим структурам глаза в сыворотке крови больных глаукомой [79-81, 117]. В жидкости передней камеры пациентов с глаукомой нормального давления тоже обнаружили повышенные уровни антител к антигенам сетчатки по сравнению с группой контроля [82]. 39

Исследования показывают, что Нsp играют важную роль в защите ганглиозных клеток сетчатки при глаукоме. Нsp делятся на две основные группы: конститутивные и индуцируемые. Конститутивные постоянно продуцируются в организме, они являются внутриклеточным составляющими и отвечают за упорядочение метаболизма. Индуцируемые Нsp (стрессовые белки) быстро синтезируются в ответ на различные физические и химические воздействия, повышая защитные функции клетки. В исследовании Tezel G. et al., США, выявили, что уровень Hsp 60 и Hsp 27 в сетчатке и зрительном нерве у больных глаукомой достоверно выше, чем у здоровых [118]. По данным Park K. et al., США, избыточная продукция Hsp 70 защищает митохондрии от вредного воздействия реактивных форм кислорода, а Hsp 70 замедляет апоптоз, снижая активацию каспазы-3 [119]. Анализ современных данных литературы подтверждает перспективность проведения протеомного анализа различных биологических жидкостей. В настоящее время растет число работ, посвященных изучению состава глазных жидкостей, как вероятной диагностической среды при глазных заболеваниях. В основном, это статьи зарубежных авторов. В отечественной литературе мало работ, посвященных протеомному анализу биологических жидкостей. Традиционные методы диагностики ПОУГ основаны на выявлении уже имеющейся клинически значимой симптоматики. Данную диагностику заболевания в начальной стадии трудно назвать ранней, поэтому продолжается поиск новых методов, позволяющих обнаружить самые ранние доклинические нарушения у больных глаукомой. Проведение масс-спектрометрии слезной жидкости и жидкости передней камеры может расширить возможности ранней диагностики различных заболеваний глазного яблока, в том числе, первичной открытоугольной глаукомы.

40

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа, представляющая собой комплексное клинико-лабораторное исследование, выполнялась на кафедре офтальмологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования министерства здравоохранения Российской Федерации, которая расположена на базе городской клинической больницы имени С.П. Боткина Филиал №1 «Офтальмологический стационар». В соответствии с решавшимися задачами значительную часть работы составили биохимические (в основном протеомные) исследования. Эти исследования проводились на базе Федерального государственного бюджетного научного учреждения Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича. 2.1 Характеристика клинического материала В целом, при выполнении исследования под наблюдением находились 60 пациентов, из них 24 мужчин (24 глаза), 36 женщин (36 глаз). Возраст пациентов составлял от 45 до 87 лет. В исследование включались пациенты, не имеющие тяжелых соматических заболеваний, хронических системных заболеваний, не переносившие за последний год лазерные операции на исследуемом глазу и не имеющие в анамнезе хирургических вмешательств на глазном яблоке. Все пациенты были обследованы с использованием основных и дополнительных офтальмологических методов исследования для установления диагноза и назначения хирургического лечения. С учетом этого среди наблюдавшихся пациентов были выделены четыре основные исследовательские группы (Рис. 1): 1-ю группу (контрольную) составили пациенты с катарактой (24 человека), не имеющие другой офтальмопатологии; 41

во 2-ю группу вошли пациенты с катарактой и псевдоэксфолиативным синдромом без подтвержденного диагноза глаукома (7 человек); 3-ю группу составили пациенты с катарактой и первичной открытоугольной глаукомой (11 человек); в 4-ю группу вошли пациенты с катарактой, ПОУГ и ПЭС (18 человек).

24 25

18 20

15 11

10 7

5

0 1 группа - 2 группа - 3 группа - 4 группа - катаракта катаракта + ПЭС катаракта + ПОУГ катаракта + ПЭС + ПОУГ

Рис. 1. Распределение пациентов по группам. Накануне операции факоэмульсификации катаракты у всех больных производился забор слезной жидкости (60 образцов), а во время операции осуществлялся сбор жидкости передней камеры глаза (60 образцов). Таким образом, для клинико-лабораторных исследований было собрано 120 биологических образцов. В биохимическую часть исследования были включены 29 пациентов, из них 12 мужчин, 17 женщин. Возраст этих пациентов составлял от 45 до 82 лет и из них также были составлены четыре исследовательские подгруппы: в 1-ой подгруппе (контрольной) находились пациенты с катарактой (11 человек), не имеющие другой офтальмопатологии;

42

во 2-ю подгруппу вошли пациенты с катарактой и псевдоэксфолиативным синдромом без подтвержденного диагноза глаукома (5 человек); 3-ю подгруппу образовали пациенты с катарактой и открытоугольной глаукомой (7 человек, из них 2 пациента с начальной стадией глаукомы, 3 – с развитой, 2- с далекозашедшей стадией); в 4-ю подгруппу включили пациентов с катарактой, ПОУГ и ПЭС (6 человек, из них 2 пациента с начальной стадией глаукомы, 2 – с развитой, 2- с далекозашедшей стадией). Общие сведения о выделенных подгруппах представлены в Таблице 1. Таблица 1. Общие сведения о пациентах выделенных подгрупп* Подгруп- Диагноз Количество Возраст пациентов па проб [лет] ** 1 Катаракта 11 67,5±12,1 2 Катаракта + ПЭС 5 76±5,8 3 Катаракта + ПОУГ 7 76,9±3,6 4 Катаракта + ПОУГ + ПЭС 6 74,5±6,9 Всего 29 72,6±9,3 * - сравнительно малые выборки были обусловлены трудоемкостью проведенных протеомных исследований и необходимостью большого количества повторов при анализе каждого образца ** - среднее арифметическое ± стандартное отклонение 2.2 Клинико-функциональные методы исследования Все больные были клинически обследованы с использованием основных и ряда дополнительных офтальмологических методов исследования, которые включали: визометрию, тонометрию, гониоскопию, биомикроскопию, прямую и непрямую офтальмоскопию, периметрию, определение критической частоты слияния мельканий, оптическую когерентную томографию.  Определение остроты зрения (визометрию) проводили по стандартным методикам без коррекции и с коррекцией с помощью проектора знаков.

43

 Аппланационную тонометрию проводили с помощью тонометра массой 10,0 грамм (г.) по А.Н. Маклакову и расчетной тонометрической линейкой Б.Л. Поляка.  Пневмотонометрию проводили на приборе фирмы Huvitz HNT-7000 (Корея).  Гониоскопию осуществляли с помощью линзы Гольдмана.  Биомикроскопия осуществлялась с помощью щелевой лампы – комбайна ОАР- 311 фирмы «Carl Zeiss», Jena по методикам, описанным Н.Б. Шульпиной (1968 г.) для оценки состояния роговицы, склеры и хрусталика.  Офтальмоскопическое исследование глазного дна проводили с помощью прямого электрического офтальмоскопа Heine Beta 200 (Германия), а также с помощью линзы Volk digital wide field (США).  Кинетическая периметрия осуществлялась на сферическом проекционном периметре «Carl Zeiss», Jena (Германия).  Статическую периметрию проводили на компьютерном периметре «Периком» (Россия).  Для определения критической частоты слияния мельканий (КЧСМ) использовались приборы «Светотест» и «Flash-Test» (Россия). 2.3 Методы получения биоматериалов для биохимических исследований 2.3.1 Забор слезной жидкости Забор слезной жидкости осуществлялся с помощью инсулинового шприца с одноразовой канюлей из нижнего конъюнктивального свода обследуемых накануне операции. Далее анализируемую жидкость помещали в микропробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл и замораживали до -75 градусов Цельсия (оС) до проведения лабораторных исследований.

44

2.3.2 Забор жидкости передней камеры глаза Забор жидкости передней камеры глаза проводился во время операции факоэмульсификации катаракты после 1-го парацентеза в филиале №1 ГКБ им. С.П. Боткина «Офтальмологический стационар». Операция проводилась при помощи факоэмульсификатора Laureate (Alcon, США). Параметры факоэмульсификации: мощность ультразвука 50%, 12 импульсов/сек, вакуум 300 мм рт ст, аспирация 30 мл/мин, высота раствора BSS (сбалансированный солевой раствор, Alcon, США) 94 см (плотность катаракты у всех пациентов составляла 2-3). Параметры ирригации-аспирации: вакуум 300 мм рт ст, аспирация 30 мл/мин, высота раствора BSS 92 см. Ход операции: После стандартной обработки операционного поля устанавливался блефаростат. Парацентез роговицы на 9 часах. С помощью инсулинового шприца с одноразовой канюлей через парацентез собиралась жидкость передней камеры. Далее анализируемую жидкость помещали в микропробирку типа Эппендорф объемом 1,5 мл. Передняя камера восполнена физиологическим раствором. Парацентез роговицы на 3 ч. Тоннельный разрез 2,2 мм на 11 ч. Для формирования парацентезов и основного разреза роговицы использовали одноразовые ножи ClearCut (Alcon, США) 1,2 и 2,2 мм. Вискоэластические растворы Вискот и Провиск (Alcon, США) в переднюю камеру. Капсулорексис. Гидродиссекция и гидроделинеация ядра хрусталика. Фрагментация и удаление ядра (факоэмульсификация) с помощью факонаконечника. С помощью системы аспирации-ирригации удалены остатки кортикальных масс. В капсульный мешок имплантирована мягкая искусственная оптическая линза. Удаление остатков вискоэластика. Гидратация разрезов. За нижнее веко заложена мазь, содержащая антибиотик. Асептическая монокулярная повязка. Взятые пробы жидкости передней камеры замораживали до -75 оС до проведения лабораторных исследований. 45

В целом, взятие на исследование слезы и жидкости передней камеры глаза у всех обследованных пациентов не оказало влияния на ход операции и течение послеоперационного периода. 2.4 Методы протеомного изучения жидкости передней камеры глаза Для протеомного изучения жидкости передней камеры глаза использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией, а также другие вспомогательные биохимические методы. Все реактивы, использованные в данном разделе работы, были специализированными продуктами фирмы Sigma-Aldrich (США), если не указано иное. 2.4.1 Методы пробоподготовки С помощью методов пробоподготовки осуществляли: А) Измерение концентрации белков в образцах жидкости передней камеры; Б) Гидролитическое расщепление белков, содержащихся в анализируемых образцах; В) Приготовление проб, содержащих триптические пептиды, для высокоэффективной жидкостной хроматографии. А) Измерение концентрации белков в образцах жидкости передней камеры. Измерение концентрации белков проводили методом, основанном на применении бицинхониновой кислоты [120]. С этой целью строили калибровочную кривую с использованием стандартных растворов по протоколу описанному ниже [121].  Получали раствор А путем растворения в 80 мл деионизованной воды (mQ) 0,1 г 2,2-бицинхониновой кислоты, 2 г натрия карбоната безводного (Acros Organics, CША), 0,95 г натрия гидрокарбоната, 0,1 г сегнетовой соли и 0,4 г натрия гидроксида (Acros Organics, CША).

46

 Доводили раствором гидроксида натрия до рН (водородный показатель) 11,25. Добавляли деионизованную воду до 100 мл. Приготовленный раствор хранили при температуре от 4°С не более 1 месяца.  Получали раствор Б путем растворения в 100 мл деионизованной воды 4 г сульфата меди. Приготовленный раствор хранили при температуре от 4°С не более 1 месяца.  Получали первый раствор BSA (бычий сывороточный альбумин) с концентрацией 10 г/л в деионизованной воде. Раствор готовился непосредственно перед использованием.  Получали второй раствор BSА с концентрацией 1 г/л в деионизованной воде. Раствор готовили непосредственно перед использованием.  Получали реакционную смесь для измерения концентрации белка. В мерный стакан добавляли 10 мл раствора А, и с помощью одноканальных пипеток ручного дозирования (Eppendorf, Германия) с регулируемым объемом вносили 200 мкл раствора Б, перемешивали взбалтыванием до растворения сульфата меди до приобретения раствором равномерной голубоватой окраски.  В полипропиленовых пробирках объемом 1,5 мл (Eppendorf, Германия) получали первое разведение стандартных растворов (таблица 2) для построения калибровочной кривой. В семь пробирок, промаркированных согласно таблице 2 (К, C1-C6), с помощью одноканальных пипеток ручного дозирования с регулируемым объёмом добавляли деионизованную воду и раствор BSА-1 или BSА-2 в объёмах, указанных в таблице 2. Конечный объем пробы составлял 30 мкл. Конечный объём каждой из таких проб составлял 30 мкл.

47

Таблица 2. Состав стандартных растворов № пробирки Объем Объем раствора Объем раствора Концентрация белка деионизованной BSА -1, мкл BSА -2, мкл первого разведения воды, мкл стандартного раствора, мг/мл C1 28 0 2 0,033 C2 25 0 5 0,17 C3 20 0 10 0,33 C4 27,5 2,5 0 0,83 C5 25 5 0 1,67 C6 22 8 0 21,33 К 30 0 0 0 В качестве контрольной пробы, относительно которой выставляли шкалу измерения концентраций, и которая принималась за нулевое значение концентрации, бралась проба в пробирке К.  В полипропиленовой пробирке П1 объемом 1,5 мл приготавливали разведение пробы 1/30. С помощью одноканальной пипетки ручного дозирования с регулируемым объёмом в пробирку добавляли: − 1 мкл пробы; − 29 мкл деионизованной воды; Перемешивали на шейкере в течение 5 с.  В полипропиленовой пробирке П2 объемом 1,5 мл приготавливали разведение пробы 1/15. С помощью одноканальной пипетки ручного дозирования с регулируемым объёмом в пробирку добавляли: − 2 мкл пробы; − 28 мкл деионизованной воды; Перемешивали на шейкере в течение 5 с.

48

 В полипропиленовые пробирки K, C1-C6, П1, П2, содержащие стандартные растворы белка и разведения, с помощью одноканальной пипетки ручного дозирования с регулируемым объёмом добавляли по 1 мл реакционной смеси для измерения концентрации белка. Перемешивали на шейкере в течение 5 с. Получали второе разведение стандартных растворов и разведение пробы 1/1000 и 1/500. Концентрация белка в стандартных растворах приведена в таблице 3. Таблица 3. Концентрация белка (мг/мл) в стандартных растворах второго разведения С1 С2 С3 С4 С5 С6 К 2 5 10 25 50 80 0 Пробирки K, C1-C6, П1, П2, содержащие стандартные (С1-С6), контрольную (К) и опытную пробу в двух разведениях (П1,П2), инкубировали при 56°С в течение 20 мин в термостате.  По окончании инкубации пробирки снимали и охлаждали до комнатной температуры в течение 5-7 мин.  Измерение концентрации общего белка в пробе методом BCA производили на приборе NanoDropND-1000 (Thermo Fisher Scientific, США)  На компьютере запускали программу ND1000. Выбирали режим фотометрического измерения «ВСА». По запросу программного обеспечения проводилась инициализация спектрофотометра согласно инструкции производителя. В открывшемся окне вводили значения концентрации стандартных растворов (по таблице 2, 3).  Оптическую плотность измеряли спектрофотометрически в 2 мкл контрольного раствора (пробирка К) при длине волны 562 нм согласно инструкции производителя спектрофотометра. Шкалу измерения выставляли по значению оптической плотности контрольного раствора К (который не содержал белковой фракции).

49

 Для построения калибровочной кривой (рис. 2) переходили во вкладку «Standards», в таблице, содержащейся во вкладке, выбирали строку «Standard 1», в всплывающем окне вводили значения концентрации BSА в стандартном растворе С1, оптическую плотность измерялась спектрофотометрически в 2 мкл стандартного раствора С1 при длине волны 562 нм согласно инструкции производителя спектрофотометра в трех технических повторениях.  Данный пункт повторяли для стандартных растворов C2-C6.  Для просмотра калибровочной кривой в меню панели задач выбирали «StandardCurve: ViewStandardCurve». В данном режиме автоматически строилась калибровочная кривая при получении значений трех измерений для каждой концентрационной точки (по среднему значению).  Для измерения концентрации белка в пробе переходили во вкладку «Sample», затем оптическую спектрофотометрическую плотность измеряли в 2 мкл проб П1 и П2 при длине волны 562 нм в трех технических повторах. Концентрация белка в пробе для каждого технического повтора рассчитывалась автоматически на основе построенной ранее калибровочной кривой, значение концентрации отображалось в правом нижнем углу, размерность мг/мл.

Рис. 2. Пример калибровочной кривой 50

Б). Гидролитическое расщепление белков, содержащихся в анализируемых образцах. Гидролитическое расщепление белков трипсином производили по протоколу Filter Aided Sample Preparation (FASP). Для этой цели использовали:  Концентрирующие фильтры Millipore Microcon YM-30 Centrifugal Filter Unit, 30kDa NMWL (Merck Millipore, Германия).  Восстанавливающий раствор: 100мМ DTT в 100мМ Tris-HCl, pH 8,5. Готовили непосредственно перед использованием из 500мМ стокового раствора Tris-HCl, pH 8,5 и 2М стокового раствора DTT.  Буфер для промывки: 8 М мочевина в растворе, содержащем 100мМ Tris-HCl, pH 8,5. Готовили непосредственно перед использованием: навеску мочевины растворяли Tris-HCl, pH 8,5.  Алкилирующий раствор: 50 мМ йодацетамид, растворенный в буфере для промывки. 8М мочевину в растворе, содержащем 100мМ Tris-HCl, pH 8,5 готовили непосредственно перед использованием: навеску йодацетамида растворяли в буфере для промывки.  Буфер для трипсинолиза: водный раствор 50 мМ тетраэтиламмоний бикарбоната, pH 8,5 приготавливали непосредственно перед использованием.  Раствор фермента, приготовленный из коммерческого препарата трипсина (трипсин, лиофилизированный, модифицированный, полученный из поджелудочной железы свиньи Sus scrofa, специфичная активность фермента 15600 Ед/мг, фирма Promega, США). Стоковый раствор для хранения 200 нг/мкл, аликвоты по 5 мкл, хранили при -20оС. Для протеомного анализа готовили пробы образцов жидкости передней камеры, содержащие необходимое количество тотального белка. С этой целью аликвоту каждого белкового раствора (минимальный объем = 30 мкл, если аликвота белкового раствора меньшего объема, объем доводили лизирующим

51

буфером) помещали на концентрирующий фильтр Microcon devices YM-30. Последующая процедура состояла из нескольких этапов. Восстановление. На фильтр добавляли 100 мкл восстанавливающего раствора, который затем перемешивали на шейкере Vortex TTS 2 (Imlab, Бельгия) в течение 20-30 с. Пробы инкубировали в течение 1 часа при температуре 56°С с использованием термомиксера Thermomixer Comfort (Eppendorf, Германия) при периодическом встряхивании (30 с, 600 об/мин, 300 с – отсутствие встряхивания), затем центрифугировали при 9000 g в течение 15 мин в термостатируемой центрифуге при температуре 20 °C. Промывка 1. Пробы промывали 3 раза путем добавления 200 мкл буфера для промывки с последующим центрифугированием при 9000 g в течение 15 мин в термостатируемой центрифуге при температуре 20 °C. Алкилирование. К пробам в концентрирующих фильтрах добавляли 100 мкл алкилирующего раствора и проводили инкубацию в течение 1 часа при температуре 25°С с использованием термомиксера Thermomixer Comfort (Eppendorf, Германия) при периодическом встряхивании (30 с при 600 об/мин, 300 с – отсутствие встряхивания), затем центрифугировали при 9000 g в течение 15 мин в термостатируемой центрифуге при температуре 20 °C. Промывка 2. После алкилирования пробы дважды промывали 200 мкл буфера для промывки с помощью центрифугирования при 9000 g в течение 15 мин при температуре 20 °C. Промывка 3. Пробы промывали 2 раза путем добавления каждый раз 200мкл буфера для трипсинолиза с последующим центрифугированием при 9000 g в течение 15 мин в термостатируемой центрифуге при температуре 20 °C. Трипсинолиз. К пробам в концентрирующих фильтрах добавляли по 100 мкл буфера для трипсинолиза. К каждой пробе добавляли раствор трипсина в соотношении общая масса фермента/общая масса белка =1/100, далее пробы 52

инкубировали в течение ночи при температуре 37 °C при периодическом встряхивании (30 с при 600 об/мин, 300 с – отсутствие встряхивания). Затем добавляли трипсин в соотношении общая масса фермента/общая масса белка =1/100 и инкубировали в течение 2 ч при температуре 37 °C при периодическом встряхивании (30 с при 600 об/мин., 300 с – отсутствие встряхивания). Крышки каждой пробирки заматывали герметизирующей пленкой PARAFILM M, БиоЛайн (Роcсия) во избежание испарения буфера. В) Приготовление проб, содержащих триптические пептиды, для высокоэффективной жидкостной хроматографии Пробы, полученные, как описано выше, центрифугировали при 9000 g в течение 15 мин. в термостатируемой центрифуге Centrifuge 5415 R (Eppendorf, Германия) при температуре 20 °C. Надосадочную жидкость собирали. Фильтры промывали 50 мкл 30% (об/об) раствора муравьиной кислоты (Спектр-Хим, Россия) c помощью центрифугирования при 9000 g в течение 15 мин в термостатируемой центрифуге при температуре 20 °C, собирали надосадочную жидкость и объединяли ее с ранее полученной. Объединенную жидкость подвергали вакуумному концентрированию с помощью концентратора (Concentrator plus, фирма Eppendorf, Германия) и растворяли в 5% (об/об) муравьиной кислоте. Эти полученные в ходе пробоподготовки пробы, содержащие триптические пептиды, (объем ≈100 мкл) анализировали далее с помощью протеомных технологий. 2.4.2 Методы протеомного анализа Для протеомного анализа использовали технологию, сочетающую высокоэффективную жидкостную хроматографию и тандемную масс- спектрометрию, которую обычно относят к так называемой «shotgun proteomics».

53

Высокоэффективную жидкостную хроматографию проводили на приборе Agilent 1100 Series (Agilent Technologies, США). 4 мкг пептидов в 5% муравьиной кислоте загружали на колонку Zorbax 300SB–C18, 5 x 0,3 мм (Agilent Technologies, США) и промывали 5% ацетонитрилом в 0,1% муравьиной кислоте в течение 5 минут. Пептиды разделяли на аналитической колонке обращенной фазы Zorbax 300SB-C18, 150 мм x 75 мкм (Agilent Technologies, США) в градиенте ацетонитрила: от 5 до 60% в 0,1% муравьиной кислоте при скорости потока 0,3 мкл/мин за 30 минут. Тандемный масс-спектрометрический анализ проводили на приборе Orbitrap Q Exactive (Thermo Scientific, США). Нано-электроспрейную ионизацию осуществляли на эмиттере (напряжение 2,0 кВ) из плавленого кварца с диаметром 8 мкм (New Objective, США). Масс-спектры получали в режиме положительных ионов с использованием анализатора типа орбитальной ионной ловушки с разрешением 70000 (m/z 400) для получения МС скана и 15000 (m/z 400) для МС/МС. Пять наиболее интенсивных ионов из спектра родительских масс выбирали для последующей фрагментации. Для фрагментации пептидов использовали метод высокоэнергетической столкновительной диссоциации (HCD) с энергией 35 эВ, порогом сигнала 5000 и окном изоляции 2 m/z, в спектре дочерних масс сканирование начиналось от величины 100 m/z. Фрагментированные прекурсоры были динамически исключены в течение 90 секунд. Однозаряженные и не имеющие заряда прекурсоры исключали из списка для фрагментации. Автоматическую регулировку усиления устанавливали на 1 × 106 ионов при максимальном времени накопления 100 мс для MS-сканов и 1 × 105 ионов при максимальном времени накопления 250 мс для MS/MS-сканов. Протеомный анализ осуществляли на оборудовании Отдела протеомных исследований и масс-спектрометрии ИБМХ при участии сотрудника лаборатории системной биологии ИБМХ Згоды В.Г. 54

2.5 Методы биоинформационного анализа и статистическая обработка данных Выполненные протеомные исследования обеспечили получение большого количества различных масс-спектров, для расшифровки которых был использован биоинформационный анализ, проводившийся с помощью программ MaxQuant, Perseus и других биоинформационных инструментов. 2.5.1 Обработка данных в программе MaxQuant 100 Гб спектров формата «.raw» в трех технических повторах обрабатывали с использованием программы MaxQuant версии 1.5.2.8 [122], использующей в качестве поискового инструмента программу Andromeda [123]. Первичный поиск производили с установкой допустимого отклонения для пептидных ионов 20 частей на миллион (м.д.), результаты которого использовали для повторной калибровки. Главный поиск по Andromeda производили с допустимым отклонением m/z иона-предшественника и фрагментов, равным 4,5 м.д. и 20 м.д., соответственно. В качестве вариабельной модификации выбирали окисление метионина и ацетилирование N-конца, в качестве фиксированной модификации выбрали карбамидометилирование цистеина. Минимальную длину пептидных фрагментов для поиска выбирали от семи аминокислотных остатков. Параллельный поиск проводили по базе данных инвертированных последовательностей пептидов (decoy). Число ложноположительных результатов (FDR) по оценке с помощью инвертированных последовательностей устанавливали на уровне 1% как для пептидных, так и для белковых идентификаций. 2.5.2 Обработка данных в программе Perseus Для обработки данных, полученных с помощью программы MaxQuant, использовали программу Perseus 1.5.1.6 (http://www.perseus-framework.org). 1. Столбцы аннотировали соответствующим скриптом Python.

55

2. При открытии аннотированного файла в Perseus вручную распределяли неаннотированные столбцы. 3. В Perseus образцы распределяли по четырем группам (Annotation rows - >Categorical annotation rows). 4. Для нахождения белков, идентифицированных по двум уникальным пептидам, производили фильтрацию по рядам (Filterrows>Filter rows based on numerical/expression coloumn; в первом поле выбирали колонку Unique peptides и в поле форму прописывали >1). 5. Reverse белки удаляли с применением соответствующих фильтров. 6. Потенциальные контаминанты (такие как трипсин и кератины), удаляли из таблицы вручную. 2.5.3 Анализ аннотации белков жидкости передней камеры глаза элементами Gene Ontology Расчет проводили с помощью программы Gorilla (GeneOntology enRIchment anaLysis and visuaLizAtion tool). Программное обеспечение Gorilla периодически обновляется с помощью базы данных Gene Ontology (http://geneontology.org) и других ресурсов. Последнее обновление: 18 апреля, 2015 г. Уровень значимости p (p-value)– уровень значимости обогащения, вычисленный в соответствии с моделью о гипергеометрическом или мультивариантном гипергеометрическом распределении [124], которое в теории вероятностей моделирует количество удачных выборок без возвращения из конечной совокупности. FDR q-value – это коррекция вышеупомянутого p-value с использованием метода Бенджамини-Хочберга [125]. Обогащение (N, B, n, b) определяли следующим образом (формула 1): N – общее количество генов. Список генов человека был загружен по ссылке (http://www.genenames.org/cgi-bin/statistics). 56

B–общее количество генов, ассоциированных со специфичными элементами GO n–это число генов в верхней части списка пользовательского ввода или в набор целей в соответствующих случаях b–количество генов в пересечении Формула 1. Расчет обогащения. b/n Enrichment = ------B/N 2.5.4 Статистический анализ Статистическую обработку данных проводили с использованием среды R 3.1.2. В работе был проведен категориальный анализ, алгоритм которого включал:  построение таблиц сопряженности 2x2;  проверку критерием χ-квадрат;  поправку на множественность сравнения - метод Бенджамини-Хочберга. Для построения решающего правила, позволяющего классифицировать образец, как принадлежащий к тому или иному классу, использовали метод деревьев решений (decision trees). Дерево решений представляет собой способ представления правил для классификации объектов (пациентов) в последовательной иерархической структуре. В каждом узле дерева определяли, для какой из двух веток справедливо указанное соотношение, и переходили по этой ветке вниз по дереву. В конечном итоге обход дерева заканчивали в терминальном узле (листе) дерева, который и представлял собой классификацию объекта. Данный подход хорошо зарекомендовал себя на практике, а результаты применения деревьев решений (в отличие от многих других алгоритмов классификации, например, нейронных сетей) могут быть наглядно интерпретированы.

57

2.6 Методы изучения белков слезной жидкости С указанной целью использовали две модификаций иммуноблоттинга. 2.6.1 Иммуноблоттинг на сухой мембране Данная модификация выполнялась в виде нескольких следующих этапов: 1 этап – электрофорез белков в полиакриламидном геле (ПААГ) Электрофорез образцов слезы и жидкости передней камеры глаза проводили с использованием 10% разрешающего геля согласно протоколу Лэмли [126] с модификациями, используя камеру Mini Protean 3 Dodeca cell (BioRad, USA), и напряжение 10 В/cm в концентрирующем геле, 180 В - в разрешающем. 2 этап – перенос После электрофореза пластину ПААГ отмывали в буфере для переноса (48мМ Tris, 39 мМ глицин, 0,037% метанола) и переносили на PVDF (поливинилиденфторид) мембрану (BioRad, USA). PVDF мембрану разрезали по

размеру геля (85×85 мм) и вымачивали 15 сек в метаноле, 5 мин в H2O, а затем 5 мин в буфере для переноса. Незначительно большего размера (87×87 мм) куски бумаги для блоттинга Extra thick blot paper (BioRad, USA) также были помещены в буфер для переноса на 10 мин. Собирали сэндвич бумага/гель/PVDF мембрана/бумага и помещали между электродами прибора Trans-blot SD Semi-Dry Transfer Cell (BioRad, USA). Перенос осуществлялся 30 минут при напряжении 18 В. 3 этап – окрашивание мембраны После переноса мембрану отмывали в 100% метаноле 10 сек, белки окрашивали посредством инкубации в растворе 0,1 Coomassie R в 30% метаноле и 10 об.% уксусной кислоте 1 мин. Отмывали в 50 об.% метаноле 2 раза по 1 мин. Мембрану полностью высушивали в течение 10 мин при 40°С в приборе Gel Air Dryer (BioRad, USA), после чего проводили иммунодетекцию сухой окрашенной мембраны согласно методике, описанной ранее [127]. 58

Высушенную мембрану инкубировали 25 мин с первичными антителами (разведение 1:10000 согласно протоколу производителя в растворе TBS [25 мМ Tris (трис(гидроксиметил)аминометан) (pH 7,5) и 150 мМ NaCl], содержащем 3% BSA, отмывали в TBS и инкубировали со вторичными антителами (разведение 1:10000 в растворе TBS , содержащем 3 % Blotting Grade Blocker Non Fat Dry Milk (BioRad, USA) в течение 25 мин. После двухкратной отмывки в TBS, мембрану инкубировали в растворе ECL (Santa Cruz biotechnology, USA) 1 мин и помещали между двумя ацетатными пленочными листами кассеты Hypercassette (Amersham Biosciense, UK), экспозицию проводили на плене Amersham Hyperfilm (GE heathcare, USA) 15 сек или более в соответствии с интенсивостью сигнала. Проявка осуществлялась вручную с использованием проявителя РЕНМЕД-ПЛЮС (Випс-мед, Россия) и фиксажа РЕНМЕД-ПЛЮС (Випс-мед, Россия). Полученные результаты были оценены визуально и измерительным контролем. 2.6.2 «Классический» Вестерн-блоттинг «Классический» способ иммунодетеции выполняли согласно протоколу Cold Spring Harbor Protocol [128]. После переноса мембрану помещали в блокирующий раствор (TBS, содержащий 3% BSA и 0,1 об.% Tween 20) на ночь. Мембрану инкубировали с первичными антителами, растворенными в блокирующем растворе в течение 1 ч при комнатной температуре, промывали 3 раза по 15 мин в отмывочном растворе (TBS, содержащий 0,1 об.% Tween 20) и инкубировали со вторичными антителами в блокирующем растворе, содержащем 5% Blotting Grade Blocker Non Fat Dry Milk и 0,1 об.% Tween 20 в TBS в течение 1 ч при комнатной температуре. Блот отмывали 3 раза по 15 мин. Детекцию иммунного окрашивания проводили с помощью люминесцентной ферментативной реакции, используя набор реагентов ECL (Santa Cruz biotechnology, USA): раствор В : раствор А = 1:40 5 минут при комнатной

59

температуре. Фиксация результатов иммунного окрашивания осуществлялась на приборе Typhoon FLA 9500 (GE Health Care, USA).

60

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Все больные были клинически обследованы с использованием основных и ряда дополнительных офтальмологических методов исследования до операции факоэмульсификации катаракты и после операции (таблица 4, таблица 5). Таблица 4. Результаты визометрии в выделенных клинических группах до операции и в 1-ые сутки после операции (ОЗСК – острота зрения с коррекцией). Группа ОЗСК до операции ОЗСК в 1-ые сутки после операции * 1 0,14±0,12 0,55±0,19 2 0,22±0,19 0,64±0,05 3 0,18±0,12 0,6±0,17 4 0,14±0,13 0,6±0,16 * - среднее арифметическое ± стандартное отклонение Таблица 5. Внутриглазное давление в выделенных клинических группах до операции (Ро по пневмотонометрии) Группа ВГД до операции [мм рт ст] * 1 14,76±3,84 2 18,0±4,2 3 16,78±6,08 4 18,94±4,32 * - среднее арифметическое ± стандартное отклонение У всех пациентов операция и послеоперационный период протекали без осложнений. Больные были выписаны из стационара на следующий день после операции. Острота зрения в первые сутки составляла от 0,3 до 1,0 с коррекцией, давление по пневмотонометрии у всех пациентов было в пределах нормы. В первые сутки после операции передний отрезок глазного яблока всех обследованных был практически спокоен, роговица прозрачная, передняя 61

камера средней глубины, жидкость передней камеры прозрачная, зрачок в медикаментозном мидриазе, искусственная оптическая линза в задней камере, центрирована, рефлекс с глазного дна розовый. Таким образом, взятие на исследование слезы и жидкости передней камеры глаза не оказало влияния на ход операции и течение послеоперацинного периода. В работе с помощью хромато-масс-спектрометрических методов высокого разрешения исследован протеом жидкости передней камеры глаза у пациентов с такими глазными заболеваниями, как катаракта, глаукома, а также псевдоэксфолиативный синдром. Протеомный анализ с использованием масс-спектрометров высокого разрешения является трудоемким и дорогостоящим тестом. В данной работе анализ протеома жидкости передней камеры глаза осуществлялся на новейшем масс-спектрометре высокого разрешения (Thermo Q Exactive, США). Такое исследование проводилось впервые в России. Анализ каждого образца требовал как минимум 3 технических повторов. В связи с этим в лабораторную часть исследования были включены 29 пациентов. Трудоемкость проведенных анализов обуславливает заданный объем выборки пациентов. Таблица 6. Средняя концентрация белка в исследуемых подгруппах. Под- Диагноз Коли- Концентрация белка, [мкг/мкл] группа чество (среднее ± стандартное отклонение) проб 1 Катаракта 11 4,6±1,7 2 Катаракта + ПЭС 5 2,5±1,6 3 Катаракта + ПОУГ 7 4,3±1,8 4 Катаракта + ПОУГ + ПЭС 6 2,7±0,7 Всего 29 3,8±1,8

62

3.1 Белки жидкости передней камеры глаза, полученные в результате протеомного анализа, и их функции В работе найдено 269 белковых групп, характеризующих протеом жидкости передней камеры глаза.

Рис. 3. Диаграмма Эйлера-Венна для четырех множеств. Распределение белков жидкости передней камеры глаза в исследуемых подгруппах. Большая часть белков (154 из 269) была обнаружена во всех подгруппах. В соответствии с классификацией Gene Ontology [129], большинство выделенных белковых групп участвуют в регуляции протеолиза. Точнее, активности по ингибированию эндопептидаз и пепидаз-регулирующая активность были обогащены в протеоме жидкости передней камеры глаза при сравнении со всеми белок-кодирующими генами человека. Это означает, что протеолиз в жидкости передней камеры глаза строго контролируется для предотвращения расщепления белков и нарушения прозрачности внутриглазных сред. Так, например, протеолиз и фрагментация кристаллинов в веществе хрусталика значительно возрастают при развитии возрастной катаракты [130]. Более того, некоторые белки, являющиеся продуктами

63

протеолиза могут выступать в качестве анти-шаперонов и вызывать дальнейшую агрегацию белков [131]. 3.2 Состав протеома жидкости передней камеры глаза Для того чтобы определить основу протеома жидкости передней камеры глаза, были выделены белки, обнаруженные в большинстве образцов. Очевидно, что такой «конститутивный» протеом состоит из наиболее распространенных белков, секретируемых в жидкости передней камеры глаза. Результирующий список содержит 36 белковых групп, представленных в Таблице 7. По крайней мере, 10 ингибиторов протеаз были включены в список в соответствии с указанным выше обогащением жидкости передней камеры глаза. Данные белки выделены во многих биологических жидкостях, в частности, в плазме крови и цереброспинальной жидкости. Один из них - белок пигментного эпителия сетчатки (gene name SERPINF1), относящийся к семейству ингибиторов сериновых протеаз. Не имеющий активности по ингибированию протеаз, он, тем не менее, является потенциальным ингибитором ангиогенеза, взаимодействующим с нервной тканью и сетчаткой [132]. Точно так же, как и плазма крови, конститутивный протеом жидкости передней камеры содержит липопротеины, иммуноглобулины и белковые переносчики различных гормонов и метаболитов (Таблица 7). Особый интерес представляют белки, не являющиеся типичными для плазмы крови. К примеру, дермоцидин, пептид, секретируемый потовыми железами и обладающий антибактериальными свойствами [133], может выполнять такую же функцию и в жидкости передней камеры глаза. Также в состав конститутивного протеома входят белки, связанные с формированием глазного яблока из нервной ткани. В дополнение к серпину F1, описанному выше, простагландин D2 синтаза 21 кДа (PTGDS) обладает способностью к регуляции нейротрофической и барьерной функций [134]. Dickkopf- связывающий белок-3 (DKK3) регулирует развитие нервной системы и глазного 64

яблока, но функция этого белка в жидкости передней камеры взрослых остается неизвестной. Таблица 7. Конститутивный протеом жидкости передней камеры глаза. Протеом состоит из наиболее распространенных белков, секретируемых в жидкости передней камеры глаза. № UniProtID Ген Белок Mean CV LFQint*±SD(×108) (коэффи- (интенсивнсть циент сигнала LFQint ± вариации) стандартное отклонение) Транспортные белки 1 P02768 ALB Serum albumin / Сывороточный 763,58±337,29 0,44 альбумин 2 P02787 TF Serotransferrin / Серотрансферрин 203,34±70,60 0,35 3 P02790 HPX Hemopexin / Гемопексин 20,23±8,96 0,44 4 P02774 GC Vitamin D-binding protein / 12,05±6,29 0,52 Витамин D-связывающий белок 5 P00450 CP Ceruloplasmin / Церулоплазмин 10,10±3,25 0,32 6 P00738 HP Haptoglobin / Гаптоглобин 5,67±7,51 1,32 7 P02766 TTR Transthyretin / Транстиретин 5,05±2,61 0,52 8 P10745 RBP3 Retinol-binding protein 3 / 4,95±2,95 0,60 Ретинол-связывающий белок 3 9 P04196 HRG Histidine-rich glycoprotein / 1,81±0,92 0,51 Гликопротеин, богатый гистидином Ингибиторы протеаз 10 P01009 SERPI Alpha-1-antitrypsin / 55,64±26,27 0,47 NA1 Альфа-1-антитрипсин 11 P36955 SERPI Pigment epithelium-derived factor / 24,93±12,90 0,52 NF1 Белок пигментного эпителия

65

сетчатки 12 P02763 ORM1 Alpha-1-acid glycoprotein 1 / 24,45±11,49 0,47 Альфа-1-кислый гликопротеин 1 13 P01011 SERPI Alpha-1-antichymotrypsin / 5,52±2,34 0,42 NA3 Альфа-1-антихимотрипсин 14 P01008 SERPI Antithrombin-III / 4,66±2,29 0,49 NC1 Антитромбин III 15 P05155 SERPI Plasma protease C1 inhibitor / 4,16±1,39 0,33 NG1 Ингибитор плазменной протеазы С1 16 P01023 A2M Alpha-2-macroglobulin / 3,50±3,26 0,93 Альфа-2-макроглобулин 17 P19652 ORM2 Alpha-1-acid glycoprotein 2 / 3,06±1,66 0,54 Альфа-1-кислый гликопротеин 2 18 P01034 CST3 Cystatin-C / Цистатин-С 2,36±1,11 0,47 19 P01019 AGT Angiotensinogen / 1,20±0,65 0,54 Ангиотензиноген Белки липидного связывания 20 P02647 APOA1 Apolipoprotein A-I / 24,91±11,89 0,48 Аполипопротеин A-I 21 P10909 CLU Clusterin / Кластерин 12,45±6,76 0,54 22 P25311 AZGP1 Zinc-alpha-2-glycoprotein / 2,32±0,88 0,38 Цинк-альфа-2-гликопротеин Иммуноглобулины (Ig) 23 P01857 IGHG1 Ig gamma-1 chain C region / 73,90±26,63 0,36 Иммуноглобулин гамма-1 цепь область С 24 P01834 IGKC Ig kappa chain C region / 22,46±7,37 0,33 Иммуноглобулин каппа цепь область С 25 P01859 IGHG2 Ig gamma-2 chain C region / 11,07±5,26 0,48 Иммуноглобулин гамма-2 цепь

66

область С 26 B9A064 IGLL5 Ig lambda-like polypeptide 5 / 8,18±3,02 0,37 Иммуноглобулин лямбда- подобный полипептид 5 27 P01860 IGHG3 Ig gamma-3 chain C region / 5,64±2,24 0,40 Иммуноглобулин гамма-3 цепь область С 28 P01876 IGHA1 Ig alpha-1 chain C region / 5,32±2,73 0,51 Иммуноглобулин альфа-1 цепь область С Другие белки 29 P41222 PTGDS Prostaglandin-H2 D-isomerase / 27,30±10,46 0,38 Простагландин-Н2 D-изомераза 30 P01024 C3 Complement C3 / Комплемент С3 11,36±7,81 0,69 31 P22352 GPX3 Glutathione peroxidase 3 / 3,47±1,47 0,42 Глутатионпероксидаза 3 32 P81605 DCD Dermcidin / Дермцидин 3,11±3,76 1,21 33 Q9UBP4 DKK3 Dickkopf-related protein 3 / 2,65±1,21 0,46 Dickkopf-связывающий белок-3 34 P10451 SPP1 Osteopontin / Остеопонтин 2,05±0,94 0,46 35 P61769 B2M Beta-2-microglobulin / 1,65±0,97 0,59 Бета-2-микроглобулин 36 Q86YZ3 HRNR Hornerin / Хорнерин 0,42±0,29 0,69 * – LFQint. – intensity-based label-free quantification, интенсивность сигнала при количественном анализе без использования изотопной метки – метод количественного анализа в масс-спектрометрии, который позволяет определить относительное количество белков при сравнении двух или более образцов. Метод основывается на измерении и сравнении интенсивностей пиков прекурсорных ионов. Его уникальность заключается в количественном анализе белков без использования стабильных изотопов в качестве меток [135]. 3.3 Распределение белков жидкости передней камеры глаза в выделенных клинических подгруппах Качественное распределение идентифицированных белков в четырех подгруппах показано на диаграмме Эйлера-Венна (Рис. 3). Значительная часть 67

выделенных белков (154 из 269; 57,2%) обнаружена во всех подгруппах. В исследовании обнаружено небольшое число уникальных белков для каждой клинической подгруппы. Таблица 8. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные во всех клинических подгруппах. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены 14-3-3 protein sigma / 14-3-3 белок сигма SFN 14-3-3 protein zeta/delta / 14-3-3 белок зета/дельта YWHAZ Afamin / Афамин AFM Aldehyde dehydrogenase, dimeric NADP-preferring / Альдегиддегидрогеназа, димерная НАДФ-зависимая ALDH3A1 Alpha-1-acid glycoprotein 1 / Альфа-1-кислый гликопротеин 1 ORM1 Alpha-1-acid glycoprotein 2 / Альфа-1-кислый гликопротеин 2 ORM2 Alpha-1-antichymotrypsin; Alpha-1-antichymotrypsin His-Pro-less / Альфа-1- антихимотрипсин SERPINA3 Alpha-1-antitrypsin; Short peptide from AAT / Альфа-1-антитрипсин SERPINA1 Alpha-1B-glycoprotein / Альфа-1В-гликопротеин A1BG Alpha-2-antiplasmin / Альфа-2-антиплазмин SERPINF2 Alpha-2-HS-glycoprotein; Alpha-2-HS-glycoprotein chain A; Alpha-2-HS- glycoprotein chain B / Альфа-2-HS-гликопротеин; Альфа-2-HS-гликопротеин цепь А; Альфа-2-HS-гликопротеин цепь В AHSG Alpha-2-macroglobulin / Альфа-2-макроглобулин A2M Alpha-enolase; Enolase / Альфа-енолаза; Енолаза ENO1 Amyloid beta A4 protein; N-APP; Soluble APP-alpha; Soluble APP-beta; C99; Beta-amyloid protein 42; Beta-amyloid protein 40; C83; P3(42); P3(40); C80; Gamma-secretase C-terminal fragment 59; Gamma-secretase C-terminal fragment 57; Gamma-secretase C-terminal fragment 50; C31 / Бета А4 амилоид; Растворимый АРР-альфа; Растворимый АРР-бета; С99; Бета-амилоид 42; Бета-амилиод 40; С83; P3(42); P3(40); C80; Терминальный фрагмент 59 гамма- секретазы С; Терминальный фрагмент 57 гамма-секретазы С; Терминальный фрагмент 50 гамма-секретазы С; С31 APP Amyloid-like protein 2 / Амилоид-подобный белок 2 APLP2

68

Angiotensinogen; Angiotensin-1; Angiotensin-2; Angiotensin-3; Angiotensin-4; Angiotensin 1-9; Angiotensin 1-7; Angiotensin 1-5; Angiotensin 1-4 / Ангиотензиноген; Ангиотензин-1; Ангиотензин-2; Ангиотензин-3; Ангиотензин-4; Ангиотензин 1-9; Ангиотензин1-7; Ангиотензин 1-5; Ангиотензин 1-4 AGT Annexin A2; Annexin; Putative annexin A2-like protein / Аннексин А2; ANXA2; Аннексин; Предполагаемый аннексин А2-подобный белок ANXA2P2 Antithrombin-III / Антитромбин-III SERPINC1 Apolipoprotein A-I; Proapolipoprotein A-I; Truncated apolipoprotein A-I / Аполипопротеин А-I; Проаполипопротеин А-I; Укороченный аполипопротеин А-I APOA1 Apolipoprotein A-II; Proapolipoprotein A-II; Truncated apolipoprotein A-II / Аполипопротеин А-II; Проаполипопротеин А-II; Укороченный аполипопротеин А-II APOA2 Apolipoprotein A-IV / Аполипопротеин А-IV APOA4 Apolipoprotein D / Аполипопротеин D APOD Apolipoprotein E / Аполипопротеин E APOE Beta-2-glycoprotein 1 / Бета-2-гликопротеин 1 APOH Beta-2-microglobulin; Beta-2-microglobulin form pI 5.3 / Бета-2-микроглобулин B2M Beta-crystallin B2 / Бета-кристаллин В2 CRYBB2 Beta-crystallin S / Бета-кристаллин S CRYGS Biotinidase / Биотинидаза BTD C3 and PZP-like alpha-2-macroglobulin domain-containing protein 8 / Домен, содержащий С3 и PZP-подобный альфа-2-макроглобулин 8 CPAMD8 CALM2; Calmodulin / Кальмодулин CALM1; CALM3 Calmodulin-like protein 5 / Кальмодулин подобный белок 5 CALML5 Calsyntenin-1; Soluble Alc-alpha; CTF1-alpha / Кальсинтенин-1 CLSTN1 Carboxypeptidase E / Карбоксипептидаза Е CPE Cartilage acidic protein 1 / Картилаж кислый белок 1 CRTAC1 Caspase-14; Caspase-14 subunit p19; Caspase-14 subunit p10 / Каспаза-14; Каспаза-14 субъединица р19; Каспаза-14 субъединица р10 CASP14 Cathepsin D; Cathepsin D light chain; Cathepsin D heavy chain / Катепсин D; Катепсин D легкая цепь; Катепсин D тяжелая цепь CTSD Ceruloplasmin / Церулоплазмин CP Chitinase-3-like protein 1 / Хитиназа-3-подобный белок 1 CHI3L1

69

Clusterin; Clusterin beta chain; Clusterin alpha chain / Кластерин; Кластерин бета цепь; Кластерин альфа цепь CLU Coagulation factor XII; Coagulation factor XIIa heavy chain; Beta-factor XIIa part 1; Beta-factor XIIa part 2; Coagulation factor XIIa light chain / Фактор свертывания XII; Фактор свертывания XIIа тяжелая цепь; Бета-фактор Фактор XIIа часть 1; Бета-фактор Фактор XIIа часть 2; Фактор свертывания XIIа легкая цепь F12 Complement C3; Complement C3 beta chain; C3-beta-c; Complement C3 alpha chain; C3a anaphylatoxin; Acylation stimulating protein; Complement C3b alpha chain; Complement C3c alpha chain fragment 1; Complement C3dg fragment; Complement C3g fragment; Complement C3d fragment; Complement C3f fragment; Complement C3c alpha chain fragment 2 / Комплемент С3; Комплемент С3 бета цепь; Комплемент С3 альфа цепь; С3а анафилатоксин; Белок, стимулирующий ацилирование; Комплемент С3b альфа цепь; Комплемент С3с альфа цепь фрагмент1; Комплемент С3dg фрагмент; Комплемент С3g фрагмент; Комплемент С3d фрагмент; Комплемент С3f фрагмент; Комплемент С3c альфа цепь фрагмент 2 C3 Complement C4-A; Complement C4 beta chain; Complement C4-A alpha chain; C4a anaphylatoxin; C4b-A; C4d-A; Complement C4 gamma chain / Комплемент С4-А; Комплемент С4 бета цепь; Комплемент С4-А альфа цепь; С4а анафилотоксин; Комплемент С4 гамма цепь C4A Complement C4-B; Complement C4 beta chain; Complement C4-B alpha chain; C4a anaphylatoxin; C4b-B; C4d-B; Complement C4 gamma chain / Комплемент С4-В; Комплемент С4 бета цепь; Комплемент С4-В альфа цепь; С4а анафилотоксин; Комплемент С4 гамма цепь C4B Complement component C9; Complement component C9a; Complement component C9b / Компонент комплемента С9; Компонент комплемента С9а; Компонент комплемента С9b C9 Complement factor B; Complement factor B Ba fragment; Complement factor B Bb fragment / Комплемент фактор В; Комплемент фактор В фрагмент Ва CFB Complement factor D / Комплемент фактор D CFD Complement factor H-related protein 1; Complement factor H-related protein 2 / Комплемент фактор Н-связанный белок 1; Комплемент фактор Н-связанный белок 2 CFHR1; CFHR2 Complement factor I; Complement factor I heavy chain; Complement factor I light chain / Комплемент фактор I; Комплемент фактор I тяжелая цепь; Комплемент фактор I легкая цепь CFI 70

Corticosteroid-binding globulin / Кортикостероид-связывающий глобулин SERPINA6 Cystatin-C / Цистатин-С CST3 Decorin / Декорин DCN Dermcidin; Survival-promoting peptide; DCD-1 / Дермцидин; Пептид, повышающий выживание DCD Desmoglein-1 / Десмоглеин-1 DSG1 Desmoplakin / Десмоплакин DSP Dickkopf-related protein 3 / Dickkopf-связывающий белок-3 DKK3 Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2 / Внеядерная пирофосфатаза/семейство фосфодиэстераз член 2 ENPP2 EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1 / EGF-содержащий фибрулин-подобный внеклеточный матриксный белок 1 EFEMP1 Epididymal secretory protein E1 / Эпидидимальный секреторный белок 1 NPC2 Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn] / Внеклеточная супероксид дисмутаза [Cu-Zn] SOD3 Fatty acid-binding protein, epidermal / Эпидермальный белок, связывающий жирные кислоты FABP5 Fibulin-1 / Фибрулин-1 FBLN1 Filaggrin / Филаггрин FLG Filaggrin-2 / Филаггрин-2 FLG2 Follistatin-related protein 1 / Фоллистатин-связанный белок 1 FSTL1 Fructose-bisphosphate aldolase A / Фруктозо-бисфосфат альдолаза А ALDOA Galectin-3-binding protein / Галектин-3-связывающий белок LGALS3BP Galectin-7 / Галектин-7 LGALS7 Gamma-crystallin C / Гамма-кристаллин С CRYGC Gamma-crystallin D / Гамма-кристаллин D CRYGD Gelsolin / Гелсолин GSN Glutathione peroxidase 3 / Глутатион пероксидаза 3 GPX3 Glutathione S-transferase P / Глутатион S-трансфераза Р GSTP1 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase / Глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназа GAPDH Haptoglobin; Haptoglobin alpha chain; Haptoglobin beta chain; Haptoglobin- related protein / Гаптоглобин; Гаптоглобин альфа цепь; Гаптоглобин бета цепь; Гаптоглобин-связанный белок HP; HPR Heat shock 70 kDa protein 1A/1B / Белок теплового шока 70 кДа 1А HSPA1A Hemoglobin subunit alpha / Гемоглобин субъединица альфа HBA1

71

Hemoglobin subunit beta; LVV-hemorphin-7; Spinorphin / Гемоглобин субъединица бета; LVV-геморфин-7; Спинорфин HBB Hemopexin / Гемопексин HPX Heparin cofactor 2 / Кофактор гепарина 2 SERPIND1 Histidine-rich glycoprotein / Гликопротеин, богатый гистидином HRG HIST1H2BN; HIST1H2BL; HIST1H2BM; HIST1H2BH; HIST2H2BF; Histone H2B; Histone H2B type 1-L; Histone H2B type 1-M; Histone H2B type HIST2H2BE; 1-N; Histone H2B type 1-H; Histone H2B type 2-F; Histone H2B type 2-E; HIST1H2BC; Histone H2B type 1-C/E/F/G/I; Histone H2B type 1-D; Histone H2B type F-S; HIST1H2BD; Histone H2B type 1-B; Histone H2B type 1-O; Histone H2B type 1-J; Histone H2BFS; H2B type 1-K; Histone H2B type 3-B; Histone H2B type 1-A / Гистон H2B; HIST1H2BB; Гистон H2B тип 1-L; Гистон H2B тип 1-M; Гистон H2B тип 1-N; Гистон HIST1H2BO; H2B тип 1-H; Гистон H2B тип 2-F; Гистон H2B тип 2-E; Гистон H2B тип HIST1H2BJ; 1-C/E/F/G/I; Гистон H2B тип 1-D; Гистон H2B тип F-S; Гистон H2B тип 1- HIST1H2BK; B; Гистон H2B тип 1-O; Гистон H2B тип 1-J; Гистон H2B тип 1-K; Гистон HIST3H2BB; H2B тип 3-B; Гистон H2B тип 1-A HIST1H2BA Histone H4 / Гистон Н4 HIST1H4A Hornerin / Хорнерин HRNR Ig alpha-1 chain C region / Иммуноглобулин альфа-1 цепь область С IGHA1 Ig gamma-1 chain C region / Иммуноглобулин гамма-1 цепь область С IGHG1 Ig gamma-2 chain C region / Иммуноглобулин гамма-2 цепь область С IGHG2 Ig gamma-3 chain C region / Иммуноглобулин гамма-3 цепь область С IGHG3 Ig gamma-4 chain C region / Иммуноглобулин гамма-4 цепь область С IGHG4 Ig kappa chain C region / Иммуноглобулин каппа цепь область С IGKC IgGFc-binding protein / Белок, связывающий иммуноглобулин GFc FCGBP Immunoglobulin lambda-like polypeptide 5; Ig lambda-1 chain C regions / Иммуноглобулин лямбда подобный полипептид 5; Иммуноглобулин лямбда-1 цепь область С IGLL5; IGLC1 Insulin-like growth factor-binding protein 6 / Белок 6, связывающий инсулиноподобный фактор роста IGFBP6 Insulin-like growth factor-binding protein 7 / Белок 7, связывающий инсулиноподобный фактор роста IGFBP7

72

Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1 / Ингибитор интер- альфа-трипсина тяжелая цепь Н1 ITIH1 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2 / Ингибитор интер-альфа-трипсина тяжелая цепь Н2 ITIH2 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4; 70 kDa inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4; 35 kDa inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 / Ингибитор интер-альфа-трипсина тяжелая цепь Н4; Ингибитор интер-альфа-трипсина тяжелая цепь Н4 70 кДа; Ингибитор интер-альфа-трипсина тяжелая цепь Н4 35 кДа ITIH4 Junction plakoglobin / Плакоглобин JUP Kallistatin / Каллистатин SERPINA4 Keratinocyte proline-rich protein / Белок кератиноцитов, богатый пролином KPRP Kininogen-1; Kininogen-1 heavy chain; T-kinin; Bradykinin; Lysyl-bradykinin; Kininogen-1 light chain; Low molecular weight growth-promoting factor / Кининоген-1; Кининоген-1 тяжелая цепь; Т-кинин; Брадикинин; Лизил- Брадикинин; Кининоген-1 легкая цепь; Низкомолекулярный фактор, стимулирующий рост KNG1 Latent-transforming growth factor beta-binding protein 2 / Белок, связывающий неактивный трансформирующий фактор роста бета 2 LTBP2 Leucine-rich alpha-2-glycoprotein / Альфа-2-гликопротеин, богатый лейцином LRG1 Lipocalin-1 / Липокалин-1 LCN1 L-lactate dehydrogenase A chain / L-лактат дегидрогеназа цепь А LDHA Lumican / Люмикан LUM Lysozyme C / Лизоцим С LYZ Monocyte differentiation antigen CD14; Monocyte differentiation antigen CD14, urinary form; Monocyte differentiation antigen CD14, membrane-bound form / Антиген дифференцировки моноцитов CD14; Антиген дифференцировки моноцитов CD14, мочевая форма; Антиген дифференцировки моноцитов CD14, мембранно-связанная форма CD14 Myocilin; Myocilin, N-terminal fragment; Myocilin, C-terminal fragment / Миоцилин; Миоцилин N-терминальный фрагмент; Миоцилин С- терминальный фрагмент; MYOC N-acetyllactosaminide beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase / N- ацетиллактозаминид бета-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза B3GNT1 N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase / N-ацетилмурамоил-L-аланин амидаза PGLYRP2 Neuroserpin / Нейросерпин SERPINI1

73

Opticin / Оптицин OPTC Osteopontin / Остеопонтин SPP1 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase; Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A; Peptidyl- prolyl cis-trans isomerase A, N-terminally processed; Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4A/B/C; Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4D / Пептидил-пролил цис-транс изомераза; Пептидил-пролил цис-транс изомераза А, N-терминальный конец; Пептидил-пролил цис-транс изомераза А подобный белок 4A/B/C; Пептидил-пролил цис-транс изомераза А PPIA; PPIAL4A; подобный белок 4D PPIAL4D Peroxiredoxin-2 / Пероксиредоксин-2 PRDX2 Phosphoglycerate kinase 1 / Фосфоглицират киназа 1 PGK1 Pigment epithelium-derived factor / Белок пигментного эпителия сетчатки SERPINF1 Plasma protease C1 inhibitor / Ингибитор плазменной протеазы С1 SERPING1 Plasminogen; Plasmin heavy chain A; Activation peptide; Angiostatin; Plasmin heavy chain A, short form; Plasmin light chain B / Плазминоген; Плазмин тяжелая цепь А; Активационный пептид; Ангиостатин; Плазмин тяжелая цепь А, короткая форма; Плазмин тяжелая цепь В PLG Probable ATP-dependent RNA helicase DDX41 / Вероятная АТФ-зависимая РНК геликаза DDX41 DDX41 Prosaposin; Saposin-A; Saposin-B-Val; Saposin-B; Saposin-C; Saposin-D / Просапосин; Сапосин-А; Сапосин-B; Сапосин-С; Сапосин-D PSAP Prostaglandin-H2 D-isomerase / простагландин H2 D-изомераза PTGDS Protein AMBP; Alpha-1-microglobulin; Inter-alpha-trypsin inhibitor light chain; Trypstatin / Белок AMBP; Альфа-1-микроглобулин; Ингибитор интер-альфа- трипсина легкая цепь; Трипстатин AMBP Protein S100; Protein S100-A6 / Белок S100; Белок S100-A6 S100A6 Protein S100-A4 / Белок S100-A4 S100A4 S100A7; Protein S100-A7; Protein S100-A7A / Белок S100-A7; Белок S100-A7А S100A7A Protein S100-A8; Protein S100-A8, N-terminally processed / Белок S100-A8; S100-A8, N-терминальный конец S100A8 Protein S100-A9 / Белок S100-A9 S100A9 Prothrombin; Activation peptide fragment 1; Activation peptide fragment 2; Thrombin light chain; Thrombin heavy chain / Протромбин; Активационный пептид фрагмент 1; Активационный пептид фрагмент 2; Тромбин легкая цепь; Тромбин тяжелая цепь F2

74

Pyruvate kinase PKM; Pyruvate kinase /Пируват киназа, М-изомер; Пируват киназа PKM Retinoic acid receptor responder protein 2 / Белок 2, отвечающий за рецептор ретиноевой кислоты RARRES2 Retinol-binding protein 3 / Ретинол-связывающий белок 3 RBP3 Retinol-binding protein 4; Plasma retinol-binding protein (1-182); Plasma retinol- binding protein (1-181); Plasma retinol-binding protein (1-179); Plasma retinol- binding protein (1-176) / Ретинол-связывающий белок 4; Плазменный ретинол- связывающий белок (1-182); Плазменный ретинол-связывающий белок (1- 181); Плазменный ретинол-связывающий белок (1-179); Плазменный ретинол- связывающий белок (1-176) RBP4 Retinoschisin / Ретиношизин RS1 Ribonuclease pancreatic / Панкреатическая рибонуклеаза RNASE1 Ryanodine receptor 2 / Рецептор рианодина 2 RYR2 Secreted frizzled-related protein 3 / Секретируемый спутанно-связанный белок 3 FRZB Serotransferrin / Серотрансферрин TF Serum albumin / Сывороточный альбумин ALB SPARC-like protein 1 / SPARC-подобный белок 1 SPARCL1 Spondin-1 / Спондин-1 SPON1 Testican-1 / Тестикан-1 SPOCK1 Tetranectin / Тетранектин CLEC3B Thyroxine-binding globulin / Тироксин-связывающий белок SERPINA7 Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3 / Белок ig-h3, индуцирующий преобразование фактора роста-бета TGFBI Transketolase / Транскетолаза TKT Transthyretin / Транстиретин TTR Triosephosphate isomerase / Триосефосфат изомераза TPI1 Tripeptidyl-peptidase 1 / Трипептидил-пептидаза 1 TPP1 Ubiquitin-60S ribosomal protein L40; Ubiquitin; 60S ribosomal protein L40; Ubiquitin-40S ribosomal protein S27a; Ubiquitin; 40S ribosomal protein S27a; Polyubiquitin-B; Ubiquitin; Polyubiquitin-C; Ubiquitin / Убиквитин-60S UBB; RPS27A; рибосомальный белок L40; Убиквитин-40S рибосомальный белок S27a; UBC; UBA52; Полиубиквитин-В; Убикситин; Полиубиквитин-С UBBP4 Vitamin D-binding protein / Витамин D-связывающий белок GC Vitronectin; Vitronectin V65 subunit; Vitronectin V10 subunit; Somatomedin-B / Витронектин; Витронектин V65 субъединица; Витронектин V10 субъединица; VTN

75

Соматомедин-В Wnt inhibitory factor 1 / Wnt ингибиторный фактор 1 WIF1 Zinc-alpha-2-glycoprotein / Цинк-альфа-2-гликопротеин AZGP1 Таблица 9. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппе катаракта. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены Actin, alpha skeletal muscle; Actin, alpha cardiac muscle 1; Actin, gamma-enteric smooth muscle; Actin, aortic smooth muscle / Актин альфа скелетных мышц; Актин альфа сердечной мышцы 1; Актин гамма гладкой мускулатуры ACTA1; ACTC1; кишечника; Актин гладкой мускулатуры аорты ACTG2; ACTA2 Alpha-crystallin A chain; Alpha-crystallin A (1-172); Alpha-crystallin A(1-168); Alpha-crystallin A(1-162) / Альфа-кристаллин А цепь; Альфа-кристаллин A (1- 172); Альфа-кристаллин A (1-168) CRYAA Annexin A1; Annexin / Аннексин А1; Аннексин ANXA1 ATP synthase subunit beta, mitochondrial; ATP synthase subunit beta / АТФ синтаза субъединица бета, митохондриальная; АТФ синтаза субъединица бета ATP5B Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein; Endorepellin; LG3 peptide / Основной мембрано-специфический гепаран сульфат протеогликан ядерный белок; Эндорепеллин; LG3 пептид HSPG2 Beta-crystallin A3; Beta-crystallin A3, isoform A1, Delta 4 form; Beta-crystallin A3, isoform A1, Delta 7 form; Beta-crystallin A3, isoform A1, Delta 8 form / Бета- кристаллин А3; Бета-кристаллин А3, изоформа А1, форма делта 4; Бета- кристаллин А3, изоформа А1, форма делта 7; Бета-кристаллин А3, изоформа А1, форма делта 8 CRYBA1 Beta-crystallin A4 / Бета-кристаллин А4 CRYBA4 Complement C1r subcomponent; Complement C1r subcomponent heavy chain; Complement C1r subcomponent light chain / Субкомпонент комплемента C1r; Субкомпонент комплемента C1r тяжелая цепь; Субкомпонент комплемента C1r легкая цепь C1R Complement component C7 / Компонент комплемента С7 C7 Corneodesmosin / Корнеодесмосин CDSN Desmocollin-3 / Десмоколлин-3 DSC3 Epiplakin / Эпиплакин EPPK1 Histidine ammonia-lyase / Гистидин аммониа-лиаза HAL

76

H3F3B; H3F3A; HIST2H3A; HIST3H3; Histone H3; Histone H3.2; Histone H3.1t; Histone H3.3; Histone H3.1; Histone HIST1H3A; H3.3C / Гистон Н3; Гистон Н3.2; Гистон Н3.1t; Гистон Н3.3; Гистон Н3.1; HIST2H3PS2; Гистон Н3.3С H3F3C Lysosome-associated membrane glycoprotein 2 / Лизосом-ассоциированный мембранный гликопротеин 2 LAMP2 Plakophilin-1 / Плакофиллин-1 PKP1 Prelamin-A/C; Lamin-A/C / Преламин-A/C; Ламин-A/C LMNA Protein DJ-1 / Белок DJ-1 PARK7 Protein POF1B / Белок POF1B POF1B Protein S100-A11; Protein S100-A11, N-terminally processed / Белок S100- A11; Белок S100-A11, N-терминальный конец S100A11 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase E; Protein-glutamine gamma- glutamyltransferase E 50 kDa catalytic chain; Protein-glutamine gamma- glutamyltransferase E 27 kDa non-catalytic chain / Белок глютамин гамма- глютамилтрансфераза Е; Белок глютамин гамма-глютамилтрансфераза Е 50 кДа каталитическая цепь; Белок глютамин гамма-глютамилтрансфераза Е 27 кДа некаталитическая цепь TGM3 Putative keratin-87 protein / Предполагаемый белок кератин-87 KRT87P Skin-specific protein 32 / Кожно-специфический белок 32 XP32 Small proline-rich protein 2B; Small proline-rich protein 2D; Small proline- SPRR2B; rich protein 2A; Small proline-rich protein 2E; Small proline-rich protein 2G / SPRR2D; Малый белок, богатый пролином 2В; Малый белок, богатый пролином SPRR2A; 2D; Малый белок, богатый пролином 2A; Малый белок, богатый SPRR2E; пролином 2E; Малый белок, богатый пролином 2G SPRR2G TUBA1B; Tubulin alpha-1B chain; Tubulin alpha-1A chain; Tubulin alpha-1C chain / TUBA1A; Тубулин цепь альфа-1В; Тубулин цепь альфа-1А; Тубулин цепь альфа-1С TUBA1C; KLK9 Vitamin K-dependent protein S / Витамин К-зависимый белок S PROS1

77

Таблица 10. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппе катаракта + ПЭС. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены Agrin; Agrin N-terminal 110 kDa subunit; Agrin C-terminal 110 kDa subunit; Agrin C-terminal 90 kDa fragment; Agrin C-terminal 22 kDa fragment / Аргин; Аргин N-терминальная субъединица 110 кДа; Аргин С-терминальная субъединица 110 кДа; Аргин С-терминальный фрагмент 90 кДа; Аргин С- терминальный фрагмент 22 кДа; AGRN Collagen alpha-1(VI) chain / Коллаген цепь альфа-1(VI) COL6A1 Collagen alpha-1(XVIII) chain; Endostatin / Коллаген цепь альфа-1(XVIII); Эндостатин COL18A1 Collagen alpha-2(IX) chain / Коллаген цепь альфа-2(IX) COL9A2 Complement C1q subcomponent subunit C / Субкомпонент комплемента C1q субъединица С C1QC Complement component C8 alpha chain / Компонент комплемента С8 альфа цепь C8A Flavin reductase (NADPH) / Флавин редуктаза (НАДФ) BLVRB Glutathione S-transferase Mu 3 / Глутатион S-трансфераза Мью 3 GSTM3 Heat shock cognate 71 kDa protein; Heat shock-related 70 kDa protein 2 / Родственный белку теплового шока 71 кДА белок; Связанный белок теплового шока 70 кДа 2 HSPA8; HSPA2 Phosphatidylethanolamine-binding protein 4 / Фосфатидилэтаноламин- связывающий белок 4 PEBP4 Phosphoglycerate mutase 1; Phosphoglycerate mutase 2; Probable phosphoglycerate mutase 4 / Фосфоглицерат мутаза 1; Фосфоглицерат мутаза 2; PGAM1; PGAM2; Возможная фосфоглицерат мутаза 4 PGAM4 Protein S100-A1; Protein S100 / Белок S100-A1; Белок S100 S100A1 Ribonuclease 4 / Рибонуклеаза 4 RNASE4 Selenium-binding protein 1 / Селен-связывающий белок 1 SELENBP1 Superoxide dismutase [Cu-Zn] / Супероксид дисмутаза [Cu-Zn] SOD1 Vimentin; Desmin / Виментин; Десмин VIM; DES

78

Таблица 11. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппе катаракта + ПОУГ. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены Apolipoprotein C-III / Аполипопротеин C-III APOC3 Carboxypeptidase B2 / Карбоксипептидаза В2 CPB2 Collagen alpha-2(I) chain / Коллаген цепь альфа-2(I) COL1A2 Collagen alpha-3(IX) chain / Коллаген цепь альфа-3(IX) COL9A3 Complement component C6 / Компонент комплемента С6 C6 Complement component C8 beta chain / Компонент комплемента С8 бета цепь C8B Fibronectin; Anastellin; Ugl-Y1; Ugl-Y2; Ugl-Y3 / Фибронектин; Анастеллин FN1 Insulin-like growth factor-binding protein 5 / Белок 5, связывающий инсулиноподобный фактор роста IGFBP5 Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit / Белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста комплекс кислых лабильных субъединиц IGFALS Neurosecretory protein VGF; Neuroendocrine regulatory peptide-1; Neuroendocrine regulatory peptide-2; Antimicrobial peptide VGF[554-577] / Нейросекреторный белок VGF; Нейроэндокринный регуляторный пептид-1; Нейроэндокринный регуляторный пептид-2; Антимикробный пептид VGF[554-577] VGF Proline-rich protein 4 / Белок, богатый пролином 4 PRR4 SPARC / Кислый кальций-связывающий богатый цистеином белок SPARC

Таблица 12. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппе катаракта + ПОУГ + ПЭС. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены F-box only protein 50 / Только F-box белок 50 NCCRP1 Malate dehydrogenase, cytoplasmic; Malate dehydrogenase / Цитоплазматическая малат дегидрогеназа; Малат дегидрогеназа MDH1

79

NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1 / НАДФ дегидрогеназа 1 NQO1 Phosphatidylethanolamine-binding protein 1; Hippocampal cholinergic neurostimulating peptide / Фосфатидилэтаноламин-связывающий белок 1; Нейростимулирующий холинергический пептид гиппокампа PEBP1 Таблица 13. Белки жидкости передней камеры, выделенные в подгруппах катаракта и катаракта + ПЭС. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены Fibrinogen beta chain; Fibrinopeptide B / Фибриноген бета цепь; Фибринопептид В FGB Fibrinogen gamma chain / Фибриноген гамма цепь FGG Immunoglobulin J chain / Иммуноглобулин J цепь IGJ Таблица 14. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппах катаракта и катаракта + ПОУГ. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены Amyloid-like protein 1; C30 / Амилоид-подобный белок 1 APLP1 Bleomycin hydrolase / Блеомицин гидролаза BLMH Complement C1s subcomponent; Complement C1s subcomponent heavy chain; Complement C1s subcomponent light chain / Субкомпонент комплемента C1s; Субкомпонент комплемента C1s тяжелая цепь; Субкомпонент комплемента C1s легкая цепь C1S Complement C2; Complement C2b fragment; Complement C2a fragment / Комплемент С2; Фрагмент комплемента C2b; Фрагмент комплемента C2а C2 Extracellular matrix protein 1 / Белок внеклеточного матрикса 1 ECM1 Fibrillin-1 / Фибриллин-1 FBN1 Metalloproteinase inhibitor 1 / Ингибитор металлопротеиназы 1 TIMP1 Neutrophil defensin 3; HP 3-56; Neutrophil defensin 2; Neutrophil defensin 1; HP 1-56 / Нейтрофильный дефензин 3; HP 3-56; Нейтрофильный дефензин 2; Нейтрофильный дефензин 1; HP 1-56 DEFA3; DEFA1 Nucleobindin-1 / Нуклеобиндин-1 NUCB1 Peroxiredoxin-1 / Пероксиредоксин-1 PRDX1 Prolactin-inducible protein / Пролактин-индуцибельный белок PIP

80

Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K / Белок глютамин гамма- глютамилтрансфераза К) TGM1 Putative elongation factor 1-alpha-like 3; Elongation factor 1-alpha 1; Elongation factor 1-alpha 2 / Предполагаемый белок 3, подобный элонгирующему фактору EEF1A1P5; 1-альфа; Элонгирующий фактор 1-альфа 1; Элонгирующий фактор 1-альфа 2 EEF1A1; EEF1A2 Serpin B3 / Серпин В3 SERPINB3 Vasorin / Вазорин VASN Таблица 15. Белок жидкости передней камеры и кодирующий его ген, выделенный в подгруппе катаракта и катаракта + ПОУГ + ПЭС. Белок Ген Beta-crystallin B1 / Бета-кристаллин В1 CRYBB1 Таблица 16. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппах катаракта + ПЭС и катаракта + ПОУГ. Уникальный белок, идентифицированный только в данном исследовании выделен жирным шрифтом. Белки Гены Band 3 anion transport protein / Анионный транспортный белок зона 3 SLC4A1 Catalase / Каталаза CAT Low-density lipoprotein receptor-related protein 2 / Рецептор, связывающий липопротеин низкой плотности 2 LRP2 Prolargin / Проларгин PRELP Serum paraoxonase/arylesterase 1 / Сывороточная параоксоназа/арилестераза 1 PON1 Таблица 17. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппах катаракта + ПЭС и катаракта + ПОУГ + ПЭС. Белки Гены 14-3-3 protein epsilon / 14-3-3 белок эпсилон YWHAE Annexin A5; Annexin / Аннексин А5; Аннексин ANXA5 Carbonic anhydrase 3 / Карбоангидраза 3 CA3 Glucose-6-phosphate isomerase / Глюкозо-6-фосфат изомераза GPI L-lactate dehydrogenase B chain; L-lactate dehydrogenase / L-лактат дегидрогеназа В цепь; L-лактат дегидрогеназа LDHB Protein FAM3C / Белок FAM3C FAM3C Semaphorin-7A / Семафорин-7А SEMA7A

81

Таблица 18. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппах катаракта, катаркта + ПЭС и катаракта + ПОУГ. Уникальные белки, идентифицированные только в данном исследовании выделены жирным шрифтом. Белки Гены Cadherin-2 / Кадгерин-2 CDH2 Carbonic anhydrase 1 / Карбоангидраза 1 CA1 Coagulation factor V; Coagulation factor V heavy chain; Coagulation factor V light chain / Фактор свертывания V; Фактор свертывания V тяжелая цепь; Фактор свертывания V легкая цепь F5 Complement C5; Complement C5 beta chain; Complement C5 alpha chain; C5a anaphylatoxin / Комплемент С5; Комплемент С5 бета цепь; Комплемент С5 альфа цепь; С5а анафилотоксин C5 Complement factor H / Комплемент фактор Н CFH Fibrinogen alpha chain; Fibrinopeptide A; Fibrinogen alpha chain / Фибриноген альфа цепь; Фибринопептид А; Фибриноген альфа цепь FGA Hemoglobin subunit delta / Гемоглобин субъединица дельта HBD Ig alpha-2 chain C region / Иммуноглобулин альфа-2 цепь область С IGHA2 Ig mu chain C region; Ig mu heavy chain disease protein / Иммуноглобулин мью цепь область С; Иммуноглобулин мью тяжелая цепь IGHM Insulin-like growth factor-binding protein 2 / Белок 2, связывающий инсулиноподобный фактор роста IGFBP2 Keratocan / Кератокан KERA Plasma serine protease inhibitor / Ингибитор плазменной сериновой протеазы SERPINA5; GAA Suprabasin / Супрабазин SBSN Таблица 19. Белки жидкости передней камеры и кодирующие их гены, выделенные в подгруппах катаракта, катаракта + ПЭС и катаракта + ПОУГ + ПЭС. Белки Гены Thioredoxin / Тиоредоксин TXN Arginase-1 / Аргиназа-1 ARG1 Cystatin-A; Cystatin-A, N-terminally processed / Цистатин-А; Цистатин-А, N- терминальный конец CSTA Desmocollin-1 / Десмоколлин-1 DSC1

82

Heat shock protein beta-1 / Белок теплового шока бета-1 HSPB1 Lactotransferrin; Lactoferricin-H; Kaliocin-1; Lactoferroxin-A; Lactoferroxin-B; Lactoferroxin-C / Лактотрансферрин; Лактоферрицин-Н; Калиоцин-1; Лактоферроксин-А; Лактоферроксин-В; Лактоферроксин-С LTF Procollagen C-endopeptidase enhancer 1 / Энханасер 1 проколлаген С- эндопептидазы PCOLCE Retinal dehydrogenase 1 / Ретинальная дегидрогеназа 1 ALDH1A1 Serpin B12 / Серпин В12 SERPINB12 SERPINB4; Serpin B4 / Серпин В4 SERPINB3 Carbonic anhydrase 2 / Карбоангидраза 2 CA2 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H5 / Ингибитор интер-альфа-трипсина тяжелая цепь Н5 ITIH5 Secretogranin-2; Secretoneurin / Секретогранин-2; Секретонейрин SCG2 3.4 Характеристика белков жидкости передней камеры глаза, выделенных только в подгруппе «катаракта + первичная открытоугольная глаукома» Особый интерес представляют 12 белковых групп, являющихся уникальными для подгруппы «катаракта + первичная открытоугольная глаукома»: 1. Apolipoprotein C-III – аполипопротеин C-III – APOC3 (ген) Аполипопротеин С-III – аполипопротеин плазмы крови, который входит в состав липопротеинов очень низкой плотности и липопротеинов высокой плотности, содержит 79 аминокислотных остатков и имеет молекулярную массу 8764 кДа, экспрессируется главным образом в клетках печени [136]. Предположительно, аполипопротеин С-III ингибирует липопротеинлипазу и, таким образом, участвует в метаболизме триглицеридов. 2. Carboxypeptidase B2 – карбоксипептидаза В2 – CPB2 (ген) Семейство карбоксипептидаз включает в себя металло-, сериновые и цистеиновые карбоксипептидазы. В зависимости от строения их разделяют на карбоксипептидазу А и карбоксипептидазу В. Карбокиспепдидаза В2 –

83

фермент, синтезирующийся в печени. В плазме крови циркулирует в виде предшественника плазминогена – зимогена [137], активируется тромбином. После активации Карбоксипептидаза В2 участвует в регуляции фибринолиза (подавляет фибринолиз) [138]. 3. Collagen alpha-2(I) chain – коллаген альфа-2(I) цепь – COL1A2 (ген) Коллаген I типа – фибриллярный белок, составляющий основу соединительной ткани организма (сухожилие, органическая часть кости, хрящ, дерма, дентин, капсулы внутренних органов) и обеспечивающий её прочность и эластичность. Коллаген альфа-2(I) цепь кодируется геном COL1A2 [139]. Мутации в гене COL1A2 ассоциированы с нарушениями остеогенеза, синдромом Элераса-Данлоса, идиопатическим остеопорозом и синдромом Марфана [140]. 4. Collagen alpha-3(IX) chain – коллаген альфа-3(IХ) цепь – COL9A3 (ген) Коллаген цепь альфа-3(IХ) кодируется геном COL9A3. Этот ген кодирует 3 альфа цепи коллагена IX типа, который является основным компонентом гиалинового хряща. Мутации в гене COL9A3 ассоциированы с болезнью Фейрбанка, или множественной эпифизарной дисплазией [141, 142]. 5. Complement component C6 – компонент комплемента С6 – C6 (ген) 6. Complement component C8 beta chain – компонент комплемента С8 бета цепь – C8B (ген) Система комплемента – комплекс сложных белков, постоянно присутствующих в крови, каскадная система протеолитических ферментов, предназначенная для гуморальной защиты организма от действия чужеродных агентов, участвует в реализации иммунного ответа организма и является важным компонентом как врождённого, так и для приобретённого иммунитета. Комплемент – система белков, включающая около 20 взаимодействующих компонентов: С1 (комплекс из трех белков), С2, СЗ, С4, С5, С6, С7, С8, С9, фактор В, фактор D и ряд регуляторных белков. Все эти компоненты – белки, 84

циркулирующие в крови и тканевой жидкости. Белки комплемента синтезируются в основном в печени и составляют приблизительно 5 % от всей глобулиновой фракции плазмы крови [143, 144]. 7. Fibronectin – фибронектин – FN1 (ген) Фибронектин – гликопротеид (молекулярная масса субъединиц 250 кДа), существующий в двух формах: тканевой и плазменной. Полипептидная цепь содержит несколько доменов, способных связывать разные белки (интегрины, коллаген, актин, некоторые мембранные рецепторы). Полипептидная цепь фибронектина содержит 7-8 доменов, на каждом из которых расположены специфические центры для связывания разных веществ. Фибронектин может связывать коллаген, протеогликаны, гиалуроновую кислоту, углеводы плазматических мембран, гепарин, фермент трансглутаминазу. Благодаря своей структуре фибронектин может выполнять интегрирующую роль в организации межклеточного вещества, а также способствовать адгезии клеток [145]. 8. Insulin-like growth factor-binding protein 5 – белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста 5 – IGFBP5 (ген) Инсулиноподобный фактор роста – это комплекс белков, ответственных за нормальный рост и развитие человека. Активность инсулиноподобного фактора роста регулируется семейством белков, связывающих инсулиноподобный фактор роста (6 типов) [146]. В нескольких исследованиях описана связь IGFBP5 с канцерогенезом через регуляцию роста опухолевых клеток, их миграцию и инвазию. При этом IGFBP5 может, как подавлять рост опухолевых клеток и метастазов, так и выступать онкогеном, поддерживая метастазирование [147-149]. 9. Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit – белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста комплекс кислых лабильных субъединиц – IGFALS (ген)

85

По литературным данным, белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста комплекс кислых лабильных субъединиц, регулирует уровень инсулиноподобного фактора роста в сыворотке крови [150]. 10. Neurosecretory protein VGF, Neuroendocrine regulatory peptide-1; Neuroendocrine regulatory peptide-2; Antimicrobial peptide VGF – нейросекреторные белки – VGF (ген) VGF это нейрональный полипептид, обнаруженный в нейронах головного мозга и гиппокампе. VGF впоследствии превращается в более 10 различных пептидов, которые регулируют пластичность, нейрогенез, энергетический гомеостаз, восприятие боли и сексуальное поведение [151]. Некоторые VGF пептиды также участвуют в регуляции пищевого поведения и энергетического баланса организма [152]. 11. Proline-rich protein 4 – Белок, богатый пролином 4 – PRR4 (ген) PRR4 – белок, синтезируемый ацинарными клетками слезных и слюнных желез человека. Данный белок выполняет антимикробную и защитную функции (защита поверхности глазного яблока и ротовой полости) [153]. По данным исследования Aluru S.V. et al., 2012, пролин-богатый белок 4 является потенциальным биомаркером синдрома сухого глаза [154]. 12. Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine – кислый кальций- связывающий богатый цистеином белок – SPARC (ген) SPARC – это гликопротеин внеклеточного матрикса массой 35 кДа, состоящий из 303 аминокислот, так же известный как остеонектин [155]. SPARC регулирует активность тромбоцитарного фактора роста PDGF, фактора роста фибробластов, фактора роста эндотелия сосудов VEGF [156]. Белок способствует изменениям морфологии клеток и их дифференциации, останавливает клеточный цикл в G1 фазе, регулирует выработку внеклеточных металлопротеаз [157].

86

Выявленные белки являются потенциальными биомаркерами ПОУГ. Но для того, чтобы исключить возможность «случайного» обнаружения данных белковых групп в жидкости передней камеры глаза, необходимы дальнейшие исследования. 3.5 Характеристика белков жидкости передней камеры глаза, выделенных в подгруппах «катаракта» и «катаракта + псевдоэксфолиативный синдром» Объединение в одну группу белков жидкости передней камеры пациентов с катарактой в сочетании с псевдоэксфолиативным синдромом и без него, показывает наибольшее количество специфических белков (45 белковых групп). Все 45 потенциальных маркеров катаракты были проверены на обогащение по классификации Gene Ontology. Это показало статистически значимый результат. В качестве контроля использовался объединенный протеом жидкости передней камеры глаза, полученный в данном исследовании в сочетании с результатами исследований Chowdhury et al. [158], Bennett et al. [159], Murthy et al. [160], Ji et al. [161] (всего 883 белков). Дифференцировка кератиноцитов оказалась наиболее обогащенным биологическим процессом (GO: 0030216, p-value = 2,57 × 10-4). Также в данной объединенной группе представлены структурные компоненты вещества хрусталика. Предположительно, развитие катаракты сопровождается повреждением вещества хрусталика, что приводит к выделению в жидкость передней камеры его компонентов, таких как альфа-кристаллин A, бета- кристаллины A3 и A4, ламин-A/C, плакофиллин-1 и тубулин альфа. Связь между найденными белками, особенно кристаллинами, и катарактогенезом описывалась ранее. Мутации в генах альфа-кристаллин А (CRYAA), бета- кристаллин А3 (CRYBA1) и бета-кристаллин А4 (CRYBA4) приводят к развитию катаракты [162, 163].

87

3.6 Аполипопротеин D – потенциальный биомаркер псевдоэксфолиативного синдрома В исследовании были проанализированы данные интенсивности сигнала LFQ протеома жидкости передней камеры глаза с использованием многомерной статистики для того, чтобы найти одиночные биомаркеры или комбинации белков, которые бы различались в выделенных клинических подгруппах. В эксперименте было проведено около девяноста прогонов, при этом на результат влияло множество факторов, например, изменение условий окружающей среды, старение хроматографической колонки и так далее. Это, вероятно, поставило под угрозу воспроизводимость результата. LFQ результаты сами по себе не следует использовать, чтобы делать клинически значимые выводы. Тем не менее, эти данные могут лечь в основу дальнейших исследований. При сравнении полученных результатов в разных клинических группах, например, в подгруппах «катаракта» и «глаукома», не было найдено одиночного биомаркера или комбинации белков, которые можно рассматривать в качестве биомаркера. По-видимому, это связано с ограниченным небольшим объемом образцов и большой вариабельностью измерений. Тем не менее, при использовании другого статистического метода анализа, построения дерева решений, был получен многообещающий результат по классификации образцов жидкости передней камеры пациентов с псевдоэксфолиативным синдромом и без него. Выявлено диагностическое правило, которое корректно классифицирует 26 из 29 образцов по наличию или отсутствию ПЭС путем сравнения средней интенсивности сигнала (LFQ int) каждого образца (Рисунок 4). чувствительность = ДП/(ДП+ЛО) = 8/11 = 72,7%; специфичность = ДО/(ДО+ЛП) = 18/8 = 100%; диагностическая точность = (ДП+ДО)/(ДП+ДО+ЛП+ЛО) = (8+18)/(8+18+0+3) = 89,6%, где ДП – истинно положительный результат; 88

ЛО - ложноотрицательный результат (не выявлено диагностируемое состояние, хотя оно было); ДО - истинно отрицательный результат; ЛП - ложноположительный результат (предположено наличие там, где его нет). Дерево решений было построено по нормированной интенсивности сигнала Аполипопротеина D (gene name APOD, Uniprot ID APOD_HUMAN).

Рис. 4. Разделение пациентов с ПЭС и без ПЭС, основанное на интенсивности сигнала аполипопротеина D (ApoD). Дерево решений корректно классифицирует 26 из 29 образцов. Более низкий уровень этого белка свидетельствует о наличии ПЭС. Наличие ПЭС связано с более низким уровнем этого белка. Аполипопротеин D (ApoD) представляет собой секретируемый гликопротеин. Одна из его функций - предотвращение перекисного окисления липидов [164, 165]. ApoD фигурирует в ряде исследований, изучающих молекулярные основы

89

старения и развитие возрастных заболеваний [166, 167]. В одном из них сообщается, в отличие от полученнных в данном исследовании результатов, что при развитии ПЭС усиливается активность мРНК ApoD в тканях переднего отрезка глазного яблока [168]. Кроме того, повышается регуляция экспрессии ApoD при старении и при развитии некоторых патологических состояний, в том числе атеросклероза, различных видах рака и неврологических заболеваниях [169]. В нескольких исследованиях выдвигается гипотеза, что ApoD может выполнять защитную роль в ответ на воздействие стрессовых стимулов. В данной работе более низкие уровни белка продемонстрировали снижение защитных способностей жидкости передней камеры глаза при возникновении ПЭС. Кроме того, гипотеза была подтверждена несколькими исследованиями in vivo. Избыточная экспрессия ApoD нейронами у трансгенных мышей привела к повышению устойчивости к окислительному стрессу [170] и воспалению [171]. В противоположность этому, выключение гена ApoD у мышей приводило к снижению резистентности головного мозга к окислительному стрессу [170]. Исследования также показали, что ApoD может модулировать пути развития воспаления [171-173]. Таким образом, учитывая характер экспрессии, ApoD был назван мультилигандным многофункциональным белком [170]. В любом случае, на основе имеющихся данных, этот белок предположительно участвует в прогрессировании ПЭС. Целенаправленные исследования его уровня и изоформ в структурах глаза необходимы для определения точной роли ApoD в развитии ПЭС. 3.7 Сравнение полученного протеома жидкости передней камеры глаза с другими базами данных В работе было проведено сравнение полученного протеома жидкости передней камеры глаза с результатами аналогичных исследований. Подобное сравнение уже проводил в своем исследовании Kim et al. [174]. В исследовании 90

Kim et al. сравнивался протеом, идентифицированный при LC-MS/MS, с белками, полученными при проведении других протеомных исследований (двухмерный электрофорез с MALDI-TOF MS и др.). Но поскольку технические возможности к идентификации белков постоянно совершенствуются [175], сравнение баз данных, полученных с разницей более чем в 5 лет, не может дать полной достоверности. Таким образом, были отобраны 4 работы, в которых проводился протеомный анализ при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией [158-161]. Более ранние работы, в которых применялся, к примеру, двухмерный электрофорез, не рассматривались [176, 177]. В работе были объединены белки, идентифицированные в выбранных базах данных. Всего получилось 883 белков (таблица 20). Из них 102 белка были идентифицированы во всех исследованиях, 32 белка являлись уникальными для этого исследования. Объединенный протеом жидкости передней камеры был обогащен белками, регулирующие активность эндопептидаз (GO:0061135; p value = 3,6×10-34). К сожалению, даже при использовании LC-MS/MS с высокой разрешающей способностью, полученные результаты могут сильно отличаться от имеющихся баз данных из-за разных возможностей поиска в базах данных. В открытом доступе были необработанные данные хорошего качества только одного исследования жидкости передней камеры глаза [160]. Эти данные были повторно проанализированы и сравнены с полученными в данном исследовании результатами (рис. 5).

91

Рис. 5. Сравнение протеома жидкости передней камеры глаза, полученного в данном исследовании с результатами Murthy, полученными при объединении 250 образцов жидкости передней камеры глаза. Контаминанты, такие как трипсин и кератины, были удалены. В исследовании Murthy et al. [160] было собрано 250 образцов жидкости передней камеры глаза (250 пациентов). Забор жидкости осуществлялся во время операции экстракции катаракты. Образцы были объединены для дальнейшего исследования (создан пул). Перед проведением анализа было проведено расщепление и предварительное фракционирование белков. Большое количество образцов и экстенсивное фракционирование объясняет большее количество идентифицированных пептидов и групп белков по сравнению с данным исследованием (рис. 5). Однако при объединении образцов теряется индивидуальная вариабельность идентифицированных белков.

92

Таблица 20. Сравнение построенного протеомного профиля жидкости передней

камеры глаза с аналогичными данными других авторов.

]

61

ание

]

8

5

] ]

9 0

5 6

исследов et Chowdhury al.[1 al. et Bennett [1 al. et Murthy [1 [1 Jial. et Название гена (название белка) Данное A1BG (Alpha-1B-glycoprotein / Альфа-1В-гликопротеин) 1 1 1 1 1 A2M (Alpha-2-macroglobulin / Альфа-2-макроглобулин) 1 1 1 1 1 ABHD14B (Recombinant Human Abhydrolase domain-containing protein 14B / Человеческий, рекомбинантный, содержащий домен абгидролазы, белок 14В) 1 ABHD4 (Abhydrolase Domain Containing 4 / Белок, содержащий домен абгидролазы 4) 1 ABI3BP (ABI Family Member 3 Binding Protein / Связывающий белок 3, входящий в семество ABI) 1 1 ACLY (ATP citrate synthase / АТФ цитрат синтаза) 1 ACSL4 (Long chain fatty Acyl-CoA synthetase 4 / Жирная ацил- кофермент А синтетаза 4, длинная цепь) 1 ACTA1; ACTC1; ACTG2; ACTA2 (Actin, alpha skeletal muscle; Actin, alpha cardiac muscle 1; Actin, gamma-enteric smooth muscle; Actin, aortic smooth muscle / Актин альфа скелетных мышц; Актин альфа сердечной мышцы 1; Актин гамма гладкой мускулатуры кишечника; Актин гладкой мускулатуры аорты) 1 1 ACTB (Actin, cytoplasmic 1 / Актин цитоплазматический 1) 1 1 1 ACTG1 (Actin, cytoplasmic 2 / Актин цитоплазматический 2) 1 ACTL6A (Actin-like protein 6A / Подобный актину белок 6А) 1 ACTN1 (Alpha-actinin-1 / Альфа-актинин-1) 1 ACTR1B (Beta-centractin / Бета-центрактин) 1 ACTR2 (Actin-related protein 2 / Связанный с актином белок 2) 1 ADAM21 (Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 21 / Белок, содержащий домен дисинтегрина и металлопротеиназы 21) 1 ADAMTS1 (A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1 / Дисинтегрин и металлопротеиназа с основанием тромбоспондина 1) 1 ADAMTS3 (A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 3 / Дисинтегрин и металлопротеиназа с основанием тромбоспондина 3) 1 ADIPOQ (Adiponectin / Адипонектин) 1 ADRM1 (Proteasomal ubiquitin receptor ADRM1 / Протеасомный рецептор убиквитина ADRM1) 1 AEBP1 (Adipocyte enhancer-binding protein 1 / Белок-энхансер, связывающий адипоциты 1) 1 AFM (Afamin / Афамин) 1 1 1 1 1 AFTPH (Aftiphilin / Афтифилин) 1 93

AGA (Aspartylglucosaminidase / Аспартилглюкозаминидаза) 1 1 AGRN (Agrin / Аргин) 1 1 1 1 1 AGT (Angiotensinogen / ангиотензиноген) 1 1 1 1 1 AHSG (Alpha-2-HS-glycoprotein / Альфа-2-HS-гликопротеин) 1 1 1 1 1 AJUBA (LIM domain-containing protein ajuba / Белок аджуба, содержащий домен LIM) 1 AKAP13 (A-kinase anchor protein 13 / А-киназа якорный белок 13) 1 AKR1A1 (Alcohol dehydrogenase [NADP(+)] / Алкоголь дегидрогеназа [НАДФ(+)]) 1 AKR1B1 (Aldose reductase / Альдоредуктаза) 1 ALAD (Delta-aminolevulinic acid dehydratase / Дегидротаза дельта- аминолевулиновой кислоты) 1 ALB (Serum albumin / Сывороточный альбумин) 1 1 1 1 ALDH1A1 (Retinal dehydrogenase 1 / Ретинальная дегидрогеназа 1) 1 1 1 1 ALDH3A1 (Aldehyde dehydrogenase, dimeric NADP-preferring / Альдегиддегидрогеназа, димерная НАДФ-зависимая) 1 1 1 1 1 ALDH9A1 (4-trimethylaminobutyraldehyde dehydrogenase / 4- триметиламинобутиральдегид дегидрогеназа) 1 ALDOA (Fructose-bisphosphate aldolase A / Фруктозо-бисфосфат альдолаза А) 1 1 1 ALDOC (Fructose-bisphosphate aldolase C / Фруктозо-бисфосфат альдолаза С) 1 AMBP (Alpha-1-microglobulin / Альфа-1-микроглобулин) 1 1 1 1 1 AMY1A (Alpha-amylase 1 / Альфа-амилиза 1) 1 ANG (Angiogenin / Ангиогенин) 1 1 1 ANGPTL7 (Angiopoietin-related protein 7 / ангиопоэтин-подобный белок 7) 1 1 1 ANK3 (Ankyrin-3 / Анкирин-3) 1 ANO3 (Anoctamin-3 / Аноктамин-3) 1 ANXA1 (Annexin A1 / Аннексин А1) 1 1 ANXA2 (Annexin A2 / Аннексин А2) 1 1 1 1 ANXA5 (Annexin A5 / Аннексин А5) 1 1 1 AP1B1 (AP-1 complex subunit beta-1 / Комплекс AP-1 субъединица бета-1) 1 AP2B1 (AP-2 complex subunit beta / Комплекс AP-2 субъединица бета) 1 APCS (Serum amyloid P-component / Р-компонент сывороточного амилоида) 1 1 1 APLP1 (Amyloid-like protein 1 / Амилоид-подобный белок 1) 1 1 1 1 APLP2 (Amyloid-like protein 2 / Амилоид-подобный белок 2) 1 1 1 1 1 APOA1 (Apolipoprotein A-I / Аполипопротеин А-I) 1 1 1 1 1 APOA2 (Apolipoprotein A-II / Аполипопротеин А-II) 1 1 1 1 1 APOA4 (Apolipoprotein A-IV / Аполипопротеин А-IV) 1 1 1 1 1 APOB (Apolipoprotein B / Аполипопротеин В) 1 APOC3 (Apolipoprotein C-III / Аполипопротеин C-III) 1

94

APOD (Apolipoprotein D / Аполипопротеин D) 1 1 1 1 APOE (Apolipoprotein E / Аполипопротеин E) 1 1 1 1 1 APOH (Beta-2-glycoprotein 1 / Бета-2-гликопротеин 1) 1 1 1 1 1 APOL1 (Apolipoprotein L1 / Аполипопротеин L1) 1 APOM (Apolipoprotein M / Аполипопротеин М) 1 APP (Amyloid beta A4 protein / Бета А4 амилоид) 1 1 1 1 ARF4 (ADP-ribosylation factor 4 / Фактор-4 АДФ-рибозилирования) 1 ARG1 (Arginase-1 / Аргиназа-1) 1 1 1 ARHGDIA (Rho GDP-dissociation inhibitor 1 / Ингибитор Rho GDP- диссоциации 1) 1 ARHGEF17 (Rho guanine nucleotide exchange factor 17 / Rho обменный фактор нуклеотида гуанин 17) 1 ARSA (Arylsulfatase A / Арилсульфатаза А) 1 ASAH1 (Acid ceramidase / Кислая церамидаза) 1 1 1 ASPM (Abnormal spindle-like microcephaly-associated protein / Ненормальный веретено-подобный белок, ассоциированный с микроцефалией) 1 ATP5B (ATP synthase subunit beta / АТФ синтаза субъединица бета) 1 1 1 ATP5O (ATP synthase subunit O, mitochondrial / АТФ синтаза субъединица О, митохондриальная) 1 ATP6AP1 (V-type proton ATPase subunit S1 / АТФаза V-типа протонная субъединица S1) 1 1 ATP6V1A (V-type proton ATPase catalytic subunit A / АТФаза V-типа протонная каталитическая субъединица А) 1 ATRN (Attractin / Аттрактин) 1 1 1 1 AZGP1 (Zinc-alpha-2-glycoprotein / Цинк-альфа-2-гликопротеин) 1 1 1 1 1 B2M (Beta-2-microglobulin / Бета-2-микроглобулин) 1 1 1 1 B3GAT3 (Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta- glucuronosyltransferase 3 / Галактозилгалактозилксилозил протеин 3- бета-глюкуронозилтрансфераза 3) 1 B3GNT1 (N-acetyllactosaminide beta-1,3-N- acetylglucosaminyltransferase / N-ацетиллактозаминид бета-1,3-N- ацетилглюкозаминилтрансфераза) 1 1 1 B4GALT1 (Beta-1,4-galactosyltransferase 1 / Бета-1,4- галактотрансфераза 1) 1 1 B4GAT1 (Beta-1,4-glucuronyltransferase 1 / Бета-1,4- глюкуронилтрансфераза 1) 1 1 BARD1 (BRCA1-associated RING domain protein 1 / RING домен BRCA1-ассоциированного белка 1) 1 BASP1 (Brain acid soluble protein 1 / Кислый растворимый белок мозга 1) 1 BCAN (Brevican core protein / Ядерный белок поверхности нейронов) 1 BCHE (Cholinesterase / Холинэстераза) 1 BCOR (BCL-6 corepressor / BCL-6 корепрессор) 1 BEX5 (Brain-expressed X-linked protein 5 / Белок 5, представленный в мозге, Х-связанный) 1 BFSP1 (Filensin / Филенсин) 1 95

BFSP2 (Phakinin / Факинин) 1 BLMH (Bleomycin hydrolase / Блеомицин гидролаза) 1 BLVRB (Flavin reductase (NADPH) / Флавин редуктаза (НАДФ)) 1 BOC (Protein BOC / Белок BOC) 1 BPGM (Bisphosphoglycerate mutase / Бисфосфоглицерат мутаза) 1 BPHL (Valacyclovir hydrolase / Валацикловир гидролаза) 1 BRAP (BRCA1-associated protein / BRCA1-ассоциированный белок) 1 BRMS1L (Breast cancer metastasis-suppressor 1-like protein / Белок, подобный супрессору 1 метастазов рака молочной железы) 1 BTD (Biotinidase / Биотинидаза) 1 1 1 1 1 C18orf63 (Uncharacterized protein C18orf63 / Неохарактеризованный белок C18orf63) 1 C1orf68 (Chromosome 1 open reading frame 68 / Открытый фрагмент 68 хромосомы 1) 1 C1QA (Complement C1q subcomponent subunit A / Субкомпонент комплемента C1q субъединица А) 1 1 C1QB (Complement C1q subcomponent subunit B / Субкомпонент комплемента C1q субъединица В) 1 1 C1QC (Complement C1q subcomponent subunit C / Субкомпонент комплемента C1q субъединица С) 1 1 1 1 C1QTNF3 (Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 3 / Комплемент C1q, связанный с фактором некроза опухоли, 3) 1 C1QTNF5 (Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 5 / Комплемент C1q, связанный с фактором некроза опухоли, 5) 1 C1R (Complement C1r subcomponent / Субкомпонент комплемента C1r) 1 1 1 1 C1RL (Complement C1r subcomponent-like protein / Белок, подобный субкомпоненту комплемента C1r) 1 C1S (Complement C1s subcomponent / Субкомпонент комплемента C1s) 1 1 1 1 C2 (Complement C2 / Комплемент С2) 1 1 1 1 C3 (Complement C3 / комплемент С3) 1 1 1 1 1 C3orf33 (Protein C3orf33 / Белок C3orf33) 1 C4A (Complement C4-A / Комплемент С4-А) 1 1 1 1 1 C4B (Complement C4-B / Комплемент С4-В) 1 1 1 1 C5 (Complement C5 / Комплемент С5) 1 1 1 1 1 C6 (Complement component C6 / Компонент комплемента С6) 1 1 1 1 C6orf106 (Uncharacterized protein C6orf106 / Неохарактеризованный белок C6orf106) 1 C6orf165 (Chromosome 6 open reading frame 165 / Открытый фрагмент 165 хромосомы 6) 1 C7 (Complement component C7 / Компонент комплемента С7) 1 1 1 C8A (Complement component C8 alpha chain / Компонент комплемента С8 альфа цепь) 1 1 1 1 C8B (Complement component C8 beta chain / Компонент комплемента С8 бета цепь) 1 1 1 1 C8G (Complement component C8 gamma chain / Компонент 1 1 96

комплемента С8 гамма цепь) C9 (Complement component C9 / Компонент комплемента С9) 1 1 1 1 1 CA1 (Carbonic anhydrase 1 / Карбоангидраза 1) 1 1 1 1 CA10 (Carbonic Anhydrase 10 / Карбоангидраза 10) 1 1 CA11 (Carbonic Anhydrase 11 / Карбоангидраза 11) 1 CA14 (Carbonic Anhydrase 14 / Карбоангидраза 14) 1 CA2 (Carbonic anhydrase 2 / Карбоангидраза 2) 1 1 1 1 1 CA3 (Carbonic anhydrase 3 / Карбоангидраза 3) 1 1 1 1 1 CADM1 (Cell adhesion molecule 1 / Молекула 1 клеточной адгезии) 1 1 CADM2 (Cell adhesion molecule 2 / Молекула 2 клеточной адгезии) 1 CADM4 (Cell adhesion molecule 4 / Молекула 4 клеточной адгезии) 1 CALM2; CALM1; CALM3 (Calmodulin / Кальмодулин) 1 CALML5 (Calmodulin-like protein 5 / Кальмодулин подобный белок 5) 1 1 1 CALR (Calreticulin / Калретикулин) 1 1 1 1 CANT1 (Soluble calcium-activated nucleotidase 1 / Растворимая, активированная кальцием, нуклеотидаза 1) 1 1 CAP1 (Adenylyl cyclase-associated protein 1 / Белок 1, ассоциированный с аденилил циклазой) 1 CAPG (Macrophage-capping protein / Белок, ограничивающий макрофагов) 1 CARKD (ATP-dependent (S)-NAD(P)H-hydrate dehydratase / АТФ- зависимая (S)-НАДФ-гидроксид дегидратаза) 1 CARTPT (Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein / Кокаин- и амфетамин-регулируемый транскрипт белок) 1 CASP14 (Caspase-14 / Каспаза-14) 1 1 1 1 CAT (Catalase / Каталаза) 1 1 1 CAV1 (Caveolin-1 / Кавеолин-1) 1 CBR1 (Carbonyl reductase [NADPH] 1 / Карбонил редуктаза [НАДФ] 1) 1 CCDC178 (Coiled-coil domain-containing protein 178 / Белок 178, содержащий спирально-закрученный домен) 1 CCT5 (T-complex protein 1 subunit epsilon / Белок 1 Т-комплекс субъеединица эпсилон) 1 CD14 (Monocyte differentiation antigen CD14 / Антиген дифференцировки моноцитов CD14) 1 1 1 1 CD44 (CD44 / интегральный клеточный гликопротеин CD44) 1 CD55 (Complement decay-accelerating factor / Фактор, ускоряющий разрушение комплемента) 1 CD59 (CD59 glycoprotein / гликопротеин CD59) 1 1 1 CD99L2 (CD99 antigen-like protein 2 / Белок 2, подобный антигену CD99) 1 CDH13 (Cadherin-13 / Кадгерин-13) 1 CDH2 (Cadherin-2 / Кадгерин-2) 1 1 1 1 1 CDH3 (Cadherin-3 / Кадгерин-3) 1

97

CDH6 (Cadherin-6 / Кадгерин-6) 1 1 CDHR1 (Cadherin-related family member 1 / Связанный с семейством кадгерина член 1) 1 CDSN (Corneodesmosin / Корнеодесмосин) 1 1 CFAP45 (Cilia- and flagella-associated protein 45 / Белок 45, ассоциированный с ресничками и жгутиками) 1 CFB (Complement factor B / Комплемент фактор В) 1 1 1 1 1 CFD (Complement factor D / Комплемент фактор D) 1 1 1 1 1 CFH (Complement factor H / Комплемент фактор Н) 1 1 1 1 1 CFHR1 (Complement factor H-related protein 1 / Комплемент фактор Н-связанный белок 1) 1 1 1 1 1 CFHR2 (Complement factor H-related protein 2 / Комплемент фактор Н-связанный белок 2) 1 1 CFI (Complement factor I / Комплемент фактор I) 1 1 1 1 CFL1 (Cofilin-1 / Кофилин-1) 1 CFP (Properdin / Пропердин) 1 CHAD (Chondroadherin / Хондроадгерин) 1 CHGA (Chromogranin-A / Хромогранин-А) 1 1 CHGB (Secretogranin-1 / Секретогранин-1) 1 1 1 1 CHI3L1 (Chitinase-3-like protein 1 / Хитиназа-3-подобный белок 1) 1 1 1 1 1 CHIT1 (Chitotriosidase-1 / Хитотриозидаза-1) 1 CHL1 (Neural cell adhesion molecule L1-like protein / Белок, подобный молекуле L1 невральной клеточной адгезии) 1 1 1 1 CHRDL1 (Chordin-like protein 1 / Хордин-подобный белок 1) 1 CKB (Creatine kinase B-type / Креатин киназа В-тип) 1 CKMT1A (Creatine kinase U-type / Креатин киназа U-тип) 1 CLEC19A (C-type lectin domain family 19 member A / С-тип домена лектина семейство 19 член А) 1 CLEC3B (Tetranectin / Тетранектин) 1 1 1 1 1 CLK4 (Dual specificity protein kinase CLK4 / Протеин киназа CLK4 двойной специфичности) 1 CLN5 (Ceroid-lipofuscinosis neuronal protein 5 / Белок 5 нейронального цероидного липофусциноза) 1 CLSTN1 (Calsyntenin-1 / Кальсинтенин-1) 1 1 1 1 1 CLSTN2 (Calsyntenin-2 / Кальсинтенин-2) 1 1 1 CLSTN3 (Calsyntenin-3 / Кальсинтенин-3) 1 1 CLTB (Clathrin light chain B / Клатрин легкая цепь В) 1 CLU (Clusterin / Кластерин) 1 1 1 1 1 CNDP1 (Beta-Ala-His dipeptidase / Бета-Ала-Гис дипептидаза) 1 1 CNDP2 (Cytosolic non-specific dipeptidase / Цитозольная неспецифическая дипептидаза) 1 CNN2 (Calponin-2 / Кальпонин-2) 1 CNTN1 (Contactin-1 / Контактин-1) 1 1 1 1 CNTN2 (Contactin-2 / Контактин-2) 1 1

98

COL11A1 (Collagen alpha-1(XI) chain / Коллаген цепь альфа-1(XI)) 1 COL18A1 (Collagen alpha-1(XVIII) chain / Коллаген цепь альфа- 1(XVIII)) 1 1 COL1A1 (Collagen alpha-1(I) chain / Коллаген цепь альфа-1(I)) 1 COL1A2 (Collagen alpha-2(I) chain / Коллаген цепь альфа-2(I)) 1 1 COL2A1 (Collagen alpha-1(II) chain / Коллаген цепь альфа-1(II)) 1 COL6A1 (Collagen alpha-1(VI) chain / Коллаген цепь альфа-1(VI)) 1 1 1 1 COL6A2 (Collagen alpha-2(VI) chain / Коллаген цепь альфа-2(VI)) 1 COL6A3 (Collagen alpha-3(VI) chain / Коллаген цепь альфа-3(VI)) 1 1 COL9A1 (Collagen alpha-1(IX) chain / Коллаген цепь альфа-1(IX)) 1 1 COL9A2 (Collagen alpha-2(IX) chain / Коллаген цепь альфа-2(IX)) 1 1 1 1 1 COL9A3 (Collagen alpha-3(IX) chain / Коллаген цепь альфа-3(IX)) 1 COLEC11 (Collectin-11 / Коллектин-11) 1 COLEC12 (Collectin-12 / Коллектин-12) 1 COMP (Cartilage oligomeric matrix protein / Олигомерный белок матрикса хряща) 1 COTL1 (Coactosin-like protein / Коактозин-подобный белок) 1 CP (Ceruloplasmin / церулоплазмин) 1 1 1 1 1 CPA4 (Carboxypeptidase A4 / Карбоксипептидаза А4) 1 CPAMD8 (C3 and PZP-like alpha-2-macroglobulin domain-containing protein 8 / Домен, содержащий С3 и PZP-подобный альфа-2- макроглобулин 8) 1 1 1 1 CPB2 (Carboxypeptidase B2 / Карбоксипептидаза В2) 1 1 1 1 CPE (Carboxypeptidase E / Карбоксипептидаза Е) 1 1 1 1 CPQ (Carboxypeptidase Q / Карбоксипептидаза Q) 1 1 CPSF3L (Cleavage and polyadenylation-specific factor 3-like protein / Белок, подобный фактору 3 специфического расщепления и аденилирования) 1 CRABP1 (Cellular retinoic acid-binding protein 1 / Клеточный ретиноевый связывающий кислоты белок 1) 1 CRP (C-reactive protein / С-реактивный белок) 1 1 1 CRTAC1 (Cartilage acidic protein 1 / Картилаж кислый белок 1) 1 1 1 CRYAA (Alpha-crystallin A chain / Альфа-кристаллин А цепь) 1 1 1 CRYAB (Alpha-crystallin B chain / Альфа-кристаллин В цепь) 1 CRYBA1 (Beta-crystallin A3 / Бета-кристаллин А3) 1 1 CRYBA4 (Beta-crystallin A4 / Бета-кристаллин А4) 1 1 CRYBB1 (Beta-crystallin B1 / Бета-кристаллин В1) 1 1 1 1 CRYBB2 (Beta-crystallin B2 / Бета-кристаллин В2) 1 1 1 1 1 CRYBB3 (Beta-crystallin B3 / Бета-кристаллин В3) 1 CRYGB (Gamma-crystallin B / Гамма-кристаллин В) 1 CRYGC (Gamma-crystallin C / Гамма-кристаллин С) 1 1 1 1 1 CRYGD (Gamma-crystallin D / Гамма-кристаллин D) 1 1 1 1 1 CRYGS (Beta-crystallin S / Бета-кристаллин S) 1 1 1 1 1 99

CRYL1 (Lambda-crystallin homolog / Гомолог лямбда-кристаллина) 1 CRYM (Ketimine reductase mu-crystallin / Кетимин редуктаза мью- кристаллин) 1 CSAD (Cysteine sulfinic acid decarboxylase / Декарбоксилаза цистеин сульфиновой кислоты) 1 CSF1R (Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor / Рецептор колониестимулирующего фактора 1 макрофагов) 1 1 CSPG5 (Chondroitin sulfate proteoglycan 5 / Хондроитин сульфат протеогликан 5) 1 CST3 (Cystatin-C / Цистатин-С) 1 1 1 1 1 CST4 (Cystatin-S / Цистатин-S) 1 1 CSTA (Cystatin-A / Цистатин-А) 1 1 CTBS (Di-N-acetylchitobiase / Ди-N-ацетилхитобиаза) 1 1 1 1 CTGF (Connective tissue growth factor / Фактор роста соединительной ткани) 1 CTSA (Lysosomal protective protein / Лизосомальный защитный белок) 1 CTSB (Cathepsin B / Катепсин В) 1 1 1 1 CTSD (Cathepsin D / Катепсин D) 1 1 1 1 1 CTSL (Cathepsin L1 / Катепсин L1) 1 1 1 1 CTSO (Cathepsin K / Катепсин К) 1 CTSZ (Cathepsin Z / Катепсин Z) 1 1 1 1 CUL5 (Cullin-5 / Куллин-5) 1 CUTA (Protein CutA / Белок CutA) 1 1 CXCL14 (C-X-C motif chemokine 14 / C-X-C основание хемокина 14) 1 DACT1 (Dapper homolog 1 / Даппер гомолог 1) 1 DAG1 (Dystroglycan / Дистрогликан) 1 1 1 DAP3 (28S ribosomal protein S29, mitochondrial / 28S рибосомальный белок S29, митохондриальный) 1 DBI (Acyl-CoA-binding protein / Ацил-КоА-связывающий белок) 1 DCD (Dermcidin / Дермцидин) 1 1 1 1 1 DCN (Decorin / Декорин) 1 1 1 DDAH1 (N(G),N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 1 / N(G),N(G)-диметиларгинин диметиламиногидролаза 1) 1 DDX41 (Probable ATP-dependent RNA helicase DDX41 / Вероятная АТФ-зависимая РНК геликаза DDX41) 1 DDX55 (ATP-dependent RNA helicase DDX55 / АТФ-зависимая РНК геликаза DDX55) 1 DEFA1 (Neutrophil defensin 1 / Нейтрофильный дефензин 1) 1 DEFA3; DEFA1 (Neutrophil defensin 3; Neutrophil defensin 1 / Нейтрофильный дефензин 3; Нейтрофильный дефензин 1) 1 DHX33 (ATP-dependent RNA helicase DHX33 / АТФ-зависимая РНК геликаза DDX33) 1 DKK3 (Dickkopf-related protein 3 / Dickkopf-связывающий белок-3) 1 1 1 1 1 DNAH12 (Dynein heavy chain 12, axonemal / Аксонемный динеин тяжелая цепь 12) 1 100

DNAH3 (Dynein heavy chain 3, axonemal / Аксонемный динеин тяжелая цепь 3) 1 DNASE2 (Deoxyribonuclease-2-alpha / Дезоксирибонуклеаза-2-альфа) 1 DOCK8 (Dedicator of cytokinesis protein 8 / 1 DPP7 (Dipeptidyl-peptidase 7 / Дипептидил-пептидаза 7) 1 1 1 1 DPT (Dermatopontin / Дерматопонтин) 1 DPYSL2 (Dihydropyrimidinase-related protein 2 / Дигидропиримидиназа-связанный белок 2) 1 DQX1 (ATP-dependent RNA helicase DQX1 / АТФ-зависимая РНК геликаза DQX1) 1 DSC1 (Desmocollin-1 / Десмоколлин-1) 1 1 1 1 DSC3 (Desmocollin-3 / Десмоколлин-3) 1 1 1 DSG1 (Desmoglein-1 / Десмоглеин-1) 1 1 1 DSG2 (Desmoglein-2 / Десмоглеин-2) 1 1 1 DSP (Desmoplakin / Десмоплакин) 1 1 1 1 1 DST (Dystonin / Дистонин) 1 DSTN (Destrin / Дестрин) 1 DYNC1H1 (Cytoplasmic dynein 1 heavy chain 1/ Цитоплазматический динеин 1 тяжелая цепь 1) 1 DYNC2H1 (Cytoplasmic dynein 2 heavy chain 1/ Цитоплазматический динеин 2 тяжелая цепь 1) 1 DZIP1 (Zinc finger protein DZIP1 / Цинксодержащий пальцевидный белок DZIP1) 1 ECM1 (Extracellular matrix protein 1 / Белок внеклеточного матрикса 1) 1 1 1 1 EDIL3 (EGF-like repeat and discoidin I-like domain-containing protein 3 / EGF-подобный повтор и дикоидин I-подобный домен-содержащий белок 3) 1 EEF1A1 (Elongation factor 1-alpha 1 / Элонгирующий фактор 1-альфа 1) 1 1 1 EEF1G (Elongation factor 1-gamma / Элонгирующий фактор 1-гамма) 1 EEF2 (Elongation factor 2 / Элонгирующий фактор 2) 1 1 EFEMP1 (EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1 / EGF-содержащий фибрулин-подобный внеклеточный матриксный белок 1) 1 1 1 1 1 EFEMP2 (EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 2 / EGF- содержащий фибрулин-подобный внеклеточный матриксный белок 2) 1 EIF4A3 (Eukaryotic initiation factor 4A-III / Эукариотический инициирующий фактор 4A-III) 1 EMR2 (EGF-like module containing, mucin-like, hormone receptor-like 2 / Содержащий EGF-подобный модуль, муцин-подобный, подобный рецептору гормонов белок 2) 1 ENDOD1 (Endonuclease domain-containing 1 protein / Белок 1, содержащий домен эндонуклеазы) 1 ENO1 (Alpha-enolase; Enolase / Альфа-енолаза; Енолаза) 1 1 1 1 1 ENO2 (Gamma-enolase / Гамма-енолаза) 1 1 1

101

ENPP2 (Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2 / Внеядерная пирофосфатаза/семейство фосфодиэстераз член 2) 1 1 1 1 1 EPB41L2 (Band 4.1-like protein 2 / Зона 4.1-подобный белок 2) 1 EPDR1 (Mammalian ependymin-related protein 1 / Эпендимил- связанный белок 1 млекопитающих) 1 EPHA5 (Ephrin type-A receptor 5 / Эфрин тип-А рецептор 5) 1 EPHX2 (Bifunctional epoxide hydrolase 2 / Бифункциональная эпоксид гидролаза 2) 1 EPPK1 (Epiplakin / Эпиплакин) 1 ERAP1 (Endoplasmic reticulum aminopeptidase 1 / Аминопептидаза эндоплазматического ретикулума 1) 1 1 ERBB2 (Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 / Рецептор тирозин- протеин киназы erbB-2) 1 ESCO2 (N-acetyltransferase ESCO2 / N-ацетилтрансфераза ESCO2) 1 F10 (Coagulation factor X / Фактор свертывания X) 1 F12 (Coagulation factor XII / Фактор свертывания XII) 1 1 1 F2 (Prothrombin / Протромбин) 1 1 1 1 1 F5 (Coagulation factor V / Фактор свертывания V) 1 1 1 1 FABP5 (Fatty acid-binding protein, epidermal / Эпидермальный белок, связывающий жирные кислоты) 1 1 1 1 FAH (Fumarylacetoacetase / Фумарилацетоацетаза) 1 FAIM2 (Fas apoptotic inhibitory molecule 2 / Молекула 2, обладающая правом ингибировать апоптоз) 1 FAIM3 (Fas apoptotic inhibitory molecule 3 / Молекула 3, обладающая правом ингибировать апоптоз) 1 FAM3C (Protein FAM3C / Белок FAM3C) 1 1 1 1 1 FBLN1 (Fibulin-1 / Фибрулин-1) 1 1 1 1 FBN1 (Fibrillin-1 / Фибриллин-1) 1 1 1 1 FBXO40 (F-box only protein 40 / Только F-box белок 40) 1 FCGBP (IgGFc-binding protein / Белок, связывающий иммуноглобулин GFc) 1 1 1 FER1L5 (Fer-1-like protein 5/ Fer-1-подобный белок 5) 1 FETUB (Fetuin-B / Фетуин-В) 1 1 FGA (Fibrinogen alpha chain / Фибриноген альфа цепь) 1 1 1 1 FGB (Fibrinogen beta chain / Фибриноген бета цепь) 1 1 1 1 FGG (Fibrinogen gamma chain / Фибриноген гамма цепь) 1 1 1 1 FH (Fumarase / Фумараза) 1 FLG (Filaggrin / Филаггрин) 1 1 FLG2 (Filaggrin-2 / Филаггрин-2) 1 1 1 FLNA (Filamin-A / Филамин-А) 1 FN1 (Fibronectin / Фибронектин) 1 1 1 1 FRMPD1 (FERM and PDZ domain-containing protein 1 / Белок 1, содержащий домен FERM и PDZ) 1 FRZB (Secreted frizzled-related protein 3 / Секретируемый спутанно- 1 1 1 1 102

связанный белок 3) FSCB (Fibrous sheath CABYR-binding protein / CABYR-связывающий белок фиброзной оболочки) 1 FSTL1 (Follistatin-related protein 1 / Фоллистатин-связанный белок 1) 1 1 1 1 1 FSTL4 (Follistatin-related protein 4 / Фоллистатин-связанный белок 4) 1 FSTL5 (Follistatin-related protein 5 / Фоллистатин-связанный белок 5) 1 1 1 FTH1 (Ferritin heavy chain / Ферритин тяжелая цепь) 1 1 1 FTL (Ferritin light chain / Ферритин легкая цепь) 1 1 FUCA2 (Plasma alpha-L-fucosidase / Плазменная альфа-L-фукозидаза) 1 1 G6PD (Glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase / Глюкозо-6-фосфат 1- дегидрогеназа) 1 GAA (Lysosomal alpha-glucosidase / Лизосомальная альфа- глюкозидаза) 1 GALNS (N-acetylgalactosamine-6-sulfatase / N-ацетилгалактозамин-6- сульфатаза) 1 GALNT10 (Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 10 / Полипептид N-ацетилгалактозаминилтрансфераза 10) 1 GALNT2 (Polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 2 / Полипептид N-ацетилгалактозаминилтрансфераза 2) 1 GANAB (Neutral alpha-glucosidase AB / Нейтральная альфа- глюкозидаза АВ) 1 GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase / Глицеральдегид- 3-фосфат дегидрогеназа) 1 1 1 GARS (Glycine--tRNA ligase / Глицин--тРНК лигаза) 1 GAS1 (Growth arrest-specific protein 1 / Специфический белок 1, задерживающий рост) 1 GAS6 (Growth arrest-specific protein 6 / Специфический белок 6, задерживающий рост) 1 GBA (Glucosylceramidase / Глюкозилцерамидаза) 1 GC (Vitamin D-binding protein / Витамин D-связывающий белок) 1 1 1 1 1 GDI2 (Rab GDP dissociation inhibitor beta / Rab GDP ингибитор диссоциации бета) 1 GFAP (Glial fibrillary acidic protein / Глиальный фибриллярный кислый белок) 1 GGCT (Gamma-glutamylcyclotransferase / Гамма- глютамилциклотрансфераза) 1 1 GGH (Gamma-glutamyl hydrolase / Гамма-глютамил гидролаза) 1 1 GM2A (Ganglioside GM2 activator / Ганглиозид GM2 активатор) 1 GNA13 (Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-13 / Гуанин нуклеотид-связывающий белок субъединица альфа-13) 1 GNAO1 (Guanine nucleotide-binding protein G(o) subunit alpha / Гуанин нуклеотид-связывающий белок G(o) субъединица альфа) 1 GNAT1 (Guanine nucleotide-binding protein G(t) subunit alpha-1 / Гуанин нуклеотид-связывающий белок G(t) субъединица альфа-1) 1 GNB1L (Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein 1 / Белок 1, подобный гуанин нуклеотид-связывающему белку бета) субъединица 1 GNPAT (Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase / Дигидроацетон 1 103

фосфат ацилтрансфераза) GNPTG (N-acetylglucosamine-1-phosphotransferase subunit gamma / N- ацетилглюкозамин-1-фосфотрансфераза субъединица гамма) 1 GNS (N-acetylglucosamine-6-sulfatase / N-ацетилглюкозамин-6- сульфатаза) 1 1 1 1 GOLIM4 (Golgi integral membrane protein 4 / Гольджи интегральный мембранный белок 4) 1 GOLM1 (Golgi membrane protein 1 / Гольджи мембранный белок 1) 1 GOT1 (Aspartate aminotransferase, cytoplasmic / Цитоплазматическая аспартат аминотрансфераза) 1 1 GOT2 (Aspartate aminotransferase, mitochondrial / Митохондриальная аспартат аминотрансфераза) 1 GPI (Glucose-6-phosphate isomerase / Глюкозо-6-фосфат изомераза) 1 1 1 GPNMB (Transmembrane glycoprotein NMB / Трансмембранный гликопротеин NMB) 1 GPR155 (Integral membrane protein GPR155 / Интегральный мембранный белок GPR155) 1 GPR37 (Prosaposin receptor GPR37 / Рецептор просапосина GPR37) 1 GPX3 (Glutathione peroxidase 3 / Глутатион пероксидаза 3) 1 1 1 1 1 GRIA4 (Glutamate receptor 4 / Рецептор глутамата 4) 1 1 GRM2 (Metabotropic glutamate receptor 2 / Метаботропный рецептор глутамата 2) 1 GRN (Granulins / Гранулины) 1 GSN (Gelsolin / Гелсолин) 1 1 1 1 1 GSR (Glutathione reductase, mitochondrial / Митохондриальная глутатоин редуктаза) 1 1 GSS (Glutathione synthetase / Глутатион синтетаза) 1 1 GSTK1 (Glutathione S-transferase kappa 1 / Глутатион S-трансфераза каппа 1) 1 GSTM3 (Glutathione S-transferase Mu 3 / Глутатион S-трансфераза Мью 3) 1 GSTO1 (Glutathione S-transferase omega-1 / Глутатион S-трансфераза омега-1) 1 GSTP1 (Glutathione S-transferase P / Глутатион S-трансфераза Р) 1 1 1 GSTT1 (Glutathione S-transferase theta-1 / Глутатион S-трансфераза тета-1) 1 GUK1 / 1 H3F3B; H3F3A; HIST2H3A; HIST3H3; HIST1H3A; HIST2H3PS2; H3F3C (Histone H3; Histone H3.2; Histone H3.1t; Histone H3.3; Histone H3.1; Histone H3.3C / Гистон Н3; Гистон Н3.2; Гистон Н3.1t; Гистон Н3.3; Гистон Н3.1; Гистон Н3.3С) 1 HABP2 (Hyaluronan-binding protein 2 / Гиалуронан-связывающий белок 2) 1 1 HAGH (Hydroxyacylglutathione hydrolase, mitochondrial / Митохондриальная гидроксиацилглутатион гидролаза) 1 HAL (Histidine ammonia-lyase / Гистидин аммониа-лиаза) 1 HBA1 (Hemoglobin subunit alpha / Гемоглобин субъединица альфа) 1 1 1 1 1 HBB (Hemoglobin subunit beta / Гемоглобин субъединица бета) 1 1 1 1 1 104

HBD (Hemoglobin subunit delta / Гемоглобин субъединица дельта) 1 1 1 HBG1 (Hemoglobin subunit gamma-1 / Гемоглобин субъединица гамма-1) 1 HEXA (Beta-hexosaminidase subunit alpha / Бета-гексоаминидаза субъединица альфа) 1 HEXB (Beta-hexosaminidase subunit beta / Бета-гексоаминидаза субъединица бета) 1 1 1 HGFAC (Hepatocyte growth factor activator / Активатор фактора роста гепатоцитов) 1 1 HIST1H2BK (Histone H2B type 1-K / Гистон H2B тип 1-K) 1 HIST1H2BN; HIST1H2BL; HIST1H2BM; HIST1H2BH; HIST2H2BF; HIST2H2BE; HIST1H2BC; HIST1H2BD; H2BFS; HIST1H2BB; HIST1H2BO; HIST1H2BJ; HIST1H2BK; HIST3H2BB (Histone H2B; Histone H2B type 1-L; Histone H2B type 1-M; Histone H2B type 1-N; Histone H2B type 1-H; Histone H2B type 2-F; Histone H2B type 2-E; Histone H2B type 1-C/E/F/G/I; Histone H2B type 1-D; Histone H2B type F-S; Histone H2B type 1-B; Histone H2B type 1-O; Histone H2B type 1- J; Histone H2B type 1-K; Histone H2B type 3-B / Гистон H2B; Гистон H2B тип 1-L; Гистон H2B тип 1-M; Гистон H2B тип 1-N; Гистон H2B тип 1-H; Гистон H2B тип 2-F; Гистон H2B тип 2-E; Гистон H2B тип 1-C/E/F/G/I; Гистон H2B тип 1-D; Гистон H2B тип F-S; Гистон H2B тип 1-B; Гистон H2B тип 1-O; Гистон H2B тип 1-J; Гистон H2B тип 1-K; Гистон H2B тип 3-B) 1 HIST1H4A (Histone H4 / Гистон Н4) 1 1 1 1 HIST2H2AB (Histone H2A type 2-B / Гистон Н2А тип 2-В) 1 HLA-A (HLA class I histocompatibility antigen, A-2 alpha chain / Антиген гистосовместимости HLA класс I, цепь А-2 альфа) 1 HLA-E (HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E / Антиген гистосовместимости HLA класс I, цепь альфа Е) 1 HMP19 (HMP19 protein / Белок HMP19) 1 HNRNPA2B1 (Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2/B1 / Гетерогенные ядерные рибонулеопротеины A2/B1) 1 HNRNPAB (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A/B / Гетерогенный ядерный рибонулеопротеин A/B) 1 HNRNPD (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D0 / Гетерогенный ядерный рибонулеопротеин D0) 1 HOXB4 (Homeobox protein Hox-B4 / Гомеобокс белок Hox-B4) 1 HP (Haptoglobin / Гаптоглобин) 1 1 1 1 HPD (4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase / 4- гидроксифенилпируват диоксигеназа) 1 1 HPRT1 (Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase / Гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансфераза) 1 HPX (Hemopexin / Гемопексин) 1 1 1 1 1 HRG (Histidine-rich glycoprotein / Гликопротеин, богатый гистидином) 1 1 1 1 1 HRNR (Hornerin / Хорнерин) 1 1 1 1 HSP90AA1 (Heat shock protein HSP 90-alpha / Белок теплового шока HSP 90-альфа) 1 HSPA13 (Heat shock 70 kDa protein 13 / Белок теплового шока 70 кДа 1 1 105

13) HSPA1A (Heat shock 70 kDa protein 1A/1B / Белок теплового шока 70 кДа 1А/1B) 1 1 1 HSPA1L (Heat shock 70 kDa protein 1-like / Белок, подобный белку теплового шока 1) 1 1 HSPA5 (Endoplasmic reticulum chaperone BiP / Шаперон BiP эндоплазматического ретикулума) 1 HSPA8 (Heat shock cognate 71 kDa protein / Родственный белку теплового шока 71 кДА белок) 1 1 1 HSPB1 (Heat shock protein beta-1 / Белок теплового шока бета-1) 1 1 HSPG2 (Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein / Основной мембрано-специфический гепаран сульфат протеогликан ядерный белок) 1 1 1 1 1 HTRA1 (Serine protease HTRA1 / Сериновая протеаза HTRA1) 1 HYI (Putative hydroxypyruvate isomerase / Предполагаемая гидроксипируват изомераза) 1 HYOU1 (Hypoxia up-regulated protein 1 / Белок 1, увеличивающий экспрессию при гипоксии) 1 IDI1 (Isopentenyl-diphosphate Delta-isomerase 1 / Изопентенил- дифосфат Дельта-изомераза 1) 1 IDS (Iduronate 2-sulfatase / Идуронат 2-сульфатаза) 1 1 IGF2 (Insulin-like growth factor II / Инсулиноподобный фактор роста II) 1 IGFALS (Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit / Белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста комплекс кислых лабильных субъединиц) 1 1 1 1 IGFBP2 (Insulin-like growth factor-binding protein 2 / Белок 2, связывающий инсулиноподобный фактор роста) 1 1 1 IGFBP3 (Insulin-like growth factor-binding protein 3 / Белок 3, связывающий инсулиноподобный фактор роста) 1 IGFBP4 (Insulin-like growth factor-binding protein 4 / Белок 4, связывающий инсулиноподобный фактор роста) 1 1 1 IGFBP5 (Insulin-like growth factor-binding protein 5 / Белок 5, связывающий инсулиноподобный фактор роста) 1 1 1 1 IGFBP6 (Insulin-like growth factor-binding protein 6 / Белок 6, связывающий инсулиноподобный фактор роста) 1 1 1 1 1 IGFBP7 (Insulin-like growth factor-binding protein 7 / Белок 7, связывающий инсулиноподобный фактор роста) 1 1 1 1 1 IGHA1 (Ig alpha-1 chain C region / Иммуноглобулин альфа-1 цепь область С) 1 1 IGHA2 (Ig alpha-2 chain C region / Иммуноглобулин альфа-2 цепь область С) 1 IGHG1 (Ig gamma-1 chain C region / Иммуноглобулин гамма-1 цепь область С) 1 1 1 IGHG2 (Ig gamma-2 chain C region / Иммуноглобулин гамма-2 цепь область С) 1 1 1 IGHG3 (Ig gamma-3 chain C region / Иммуноглобулин гамма-3 цепь область С) 1 IGHG4 (Ig gamma-4 chain C region / Иммуноглобулин гамма-4 цепь область С) 1 1 1 106

IGHM (Ig mu chain C region / Иммуноглобулин мью цепь область С) 1 IGJ (Immunoglobulin J chain / Иммуноглобулин J цепь) 1 IGKC (Ig kappa chain C region / Иммуноглобулин каппа цепь область С) 1 1 IGLL1 (Immunoglobulin lambda-like polypeptide 1 / Иммуноглобулин лямбда подобный полипептид 1) 1 IGLL5; IGLC1 (Immunoglobulin lambda-like polypeptide 5; Ig lambda-1 chain C regions / Иммуноглобулин лямбда подобный полипептид 5; Иммуноглобулин лямбда-1 цепь область С) 1 1 IL6ST (Interleukin-6 receptor subunit beta / Рецептор интерлейкина-6 субъединица бета) 1 1 IMPG1 (Interphotoreceptor matrix proteoglycan 1 / Матриксный протеогликан внутренних фоторецепторов 1) 1 IMPG2 (Interphotoreceptor matrix proteoglycan 2 / Матриксный протеогликан внутренних фоторецепторов 2) 1 INADL (INADL protein / Белок INADL) 1 IPO5 (Importin-5 / Импортин-5) 1 ISLR (Immunoglobulin superfamily containing leucine rich repeat / Член надсемейства иммуноглобулинов, содержащее повтор, обогащенный лейцином) 1 ITIH1 (Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1 / Ингибитор интер- альфа-трипсина тяжелая цепь Н1) 1 1 1 1 1 ITIH2 (Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2 / Ингибитор интер- альфа-трипсина тяжелая цепь Н2) 1 1 1 1 1 ITIH3 (Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3 / Ингибитор интер- альфа-трипсина тяжелая цепь Н3) 1 1 ITIH4 (Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 / Ингибитор интер- альфа-трипсина тяжелая цепь Н4) 1 1 1 1 1 ITIH5 (Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H5 / Ингибитор интер- альфа-трипсина тяжелая цепь Н5) 1 1 1 ITM2B (Integral membrane protein 2B / Интегральный мембранный белок 2В) 1 ITM2C (Integral membrane protein 2С / Интегральный мембранный белок 2С) 1 JMJD7 (JmjC domain-containing protein 7 / Белок 7, содержащий домен JmjC) 1 JUP (Junction plakoglobin / Плакоглобин) 1 1 1 1 KARS (Lysine--tRNA ligase / Лизин--тРНК лигаза) 1 KCNH7 (Potassium voltage-gated channel subfamily H member 7 / Член 7 подсемейства потенциалозависимых калиевых каналов) 1 KERA (Keratocan / Кератокан) 1 1 1 KIF16B (Kinesin-like protein KIF16B / Кинезин-подобный белок KIF16B) 1 KIF1B (Kinesin-like protein KIF1B / Кинезин-подобный белок KIF1B) 1 KLK11 (Kallikrein-11 / Калликреин-11) 1 KLKB1 (Plasma kallikrein / Плазменный калликреин) 1 1 KNG1 (Kininogen-1 / Кининоген-1) 1 1 1 1 KPNA3 (Importin subunit alpha-4 / Импортин субъединица альфа-4) 1 107

KPRP (Keratinocyte proline-rich protein / Белок кератиноцитов, богатый пролином) 1 1 KRT1 (Keratin, type II cytoskeletal 1 / Цитоскелетный кератин 1, тип II) 1 1 KRT10 (Keratin, type I cytoskeletal 10 / Цитоскелетный кератин 10, тип I) 1 1 KRT12 (Keratin, type I cytoskeletal 12 / Цитоскелетный кератин 12, тип I) 1 KRT13 (Keratin, type I cytoskeletal 13 / Цитоскелетный кератин 13, тип I) 1 KRT14 (Keratin, type I cytoskeletal 14 / Цитоскелетный кератин 14, тип I) 1 KRT16 (Keratin, type I cytoskeletal 16 / Цитоскелетный кератин 16, тип I) 1 KRT17 (Keratin, type I cytoskeletal 17 / Цитоскелетный кератин 17, тип I) 1 KRT19 (Keratin, type I cytoskeletal 19 / Цитоскелетный кератин 19, тип I) 1 KRT2 (Keratin, type II cytoskeletal 2 epidermal / Цитоскелетный кератин 2 эпидермальный, тип II) 1 KRT25 (Keratin, type I cytoskeletal 25 / Цитоскелетный кератин 25, тип I) 1 KRT31 (Keratin, type I cuticular Ha1 / Кутикулярный кератин Ha1, тип I) 1 KRT34 (Keratin, type I cuticular Ha4 / Кутикулярный кератин Ha4, тип I) 1 KRT5 (Keratin, type II cytoskeletal 5 / Цитоскелетный кератин 5, тип II) 1 KRT6A (Keratin, type II cytoskeletal 6A / Цитоскелетный кератин 6А, тип II) 1 KRT6B (Keratin, type II cytoskeletal 6B / Цитоскелетный кератин 6В, тип II) 1 KRT74 (Keratin, type II cytoskeletal 74 / Цитоскелетный кератин 74, тип II) 1 KRT77 (Keratin, type II cytoskeletal 1b / Цитоскелетный кератин 1b, тип II) 1 KRT78 (Keratin, type II cytoskeletal 78 / Цитоскелетный кератин 78, тип II) 1 KRT82 (Keratin, type II cuticular Hb2 / Кутикулярный кератин Hb2, тип II) 1 KRT85 (Keratin, type II cuticular Hb5 / Кутикулярный кератин Hb5, тип II) 1 KRT86 (Keratin, type II cuticular Hb6 / Кутикулярный кератин Hb6, тип II) 1 KRT87P (Putative keratin-87 protein / Предполагаемый белок кератин- 87) 1 KRT9 (Keratin, type I cytoskeletal 9 / Цитоскелетный кератин 9, тип I) 1 1 KRTAP11-1 (Keratin-associated protein 11-1 / Белок, ассоциированный с кератином 11-1) 1 KRTAP19-5 (Keratin-associated protein 19-5 / Белок, ассоциированный с кератином 19-5) 1

108

KRTAP9-4 (Keratin-associated protein 9-4 / Белок, ассоциированный с кератином 9-4) 1 L1CAM (Neural cell adhesion molecule L1 / Молекула L1 невральной клеточной адгезии) 1 LAGE3 (EKC/KEOPS complex subunit LAGE3 / EKC/KEOPS комплекс субъединица LAGE3) 1 LAMP2 (Lysosome-associated membrane glycoprotein 2 / Лизосом- ассоциированный мембранный гликопротеин 2) 1 1 1 LBP (Upstream-binding protein 1 / Белок 1, связывающий против потока) 1 LCN1 (Lipocalin-1 / Липокалин-1) 1 1 1 1 1 LCN2 (Neutrophil gelatinase-associated lipocalin / Нейтрофильный желатиназа-ассоциированный липокалин) 1 1 1 LDHA (L-lactate dehydrogenase A chain / L-лактат дегидрогеназа цепь А) 1 1 1 1 LDHB (L-lactate dehydrogenase B chain / L-лактат дегидрогеназа В цепь) 1 1 1 LEPR (Leptin receptor / Рецептор лептина) 1 LGALS1 (Galectin-1 / Галектин-1) 1 LGALS3BP (Galectin-3-binding protein / Галектин-3-связывающий белок) 1 1 1 1 1 LGALS7 (Galectin-7 / Галектин-7) 1 1 1 1 LGMN (Legumain / Легумаин) 1 LGSN (Lengsin / Ленгсин) 1 LIMA1 (LIM domain and actin-binding protein 1 / LIM домен и актин- связывающий белок 1) 1 LMAN2 (Vesicular integral-membrane protein VIP36 / Везикулярный цельно-мембранный белок VIP36) 1 1 1 LMNA (Prelamin-A/C / Преламин-A/C) 1 LMNB2 (Lamin-B2 / Ламин-В2) 1 LOC100293211 (неописанный белок LOC100293211) 1 LOC102723407 (Immunoglobulin Heavy Variable 4-38-2-Like / Белок, подобный тяжелому вариабельному иммуноглобулину 4-38-2) 1 LOC102725018 (неописанный белок LOC102725018) 1 LOC102725101 (Immunoglobulin Heavy Variable 3-23-Like / Белок, подобный тяжелому вариабельному иммуноглобулину 3-23) 1 LOC102725198 (ras GTPase-activating protein 4-like / Белок 4, подобный ras GTPаза активирующему белку) 1 LOC642131 (Immunoglobulin Heavy Variable 1/OR15-3 (Pseudogene) / Тяжелый вариабельный иммуноглобулин 1/OR15-3 (Псевдоген)) 1 LPA (Apolipoprotein(a) / Аполипопротеин(а)) 1 LRFN3 (Leucine-rich repeat and fibronectin type-III domain-containing protein 3 / Белок 3, содержащий богатый лейцином повтор и домен фиборнектина тип-III) 1 LRG1 (Leucine-rich alpha-2-glycoprotein / Альфа-2-гликопротеин, богатый лейцином) 1 1 1 1 1 LRIT1 (Leucine-rich repeat, immunoglobulin-like domain and transmembrane domain-containing protein 1 / Белок 1, содержащий богатый лейцином повтор, иммуноглобулин-подобный домен и 1 109

трансмембранный домен) LRP2 (Low-density lipoprotein receptor-related protein 2 / Рецептор, связывающий липопротеин низкой плотности 2) 1 1 1 1 1 LRRC4 (Leucine-rich repeat-containing protein 4 / Белок 4, содержащий богатый лейцином повтор) 1 LRRC4B (Leucine-rich repeat-containing protein 4B / Белок 4В, содержащий богатый лейцином повтор) 1 1 LSAMP (Limbic system-associated membrane protein / Мембранный протеин, ассоциированный с лимбической системой) 1 1 1 LTA4H (Leukotriene A-4 hydrolase / Лейкотриен А-4 гидролаза) 1 LTBP1 (Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1 / Белок, связывающий неактивный трансформирующий фактор роста бета 1) 1 LTBP2 (Latent-transforming growth factor beta-binding protein 2 / Белок, связывающий неактивный трансформирующий фактор роста бета 2) 1 1 1 1 1 LTF (Lactotransferrin / Лактотрансферрин) 1 1 LUM (Lumican / Люмикан) 1 1 1 1 1 LYPD3 (Ly6/PLAUR domain-containing protein 3 / Белок 3, содержащий домен Ly6/PLAUR) 1 LYPLAL1 (Lysophospholipase-like protein 1 / Лизофосфолипаза- подобный белок 1) 1 LYST (Lysosomal-trafficking regulator / Регулятор лизосомального транспорта) 1 LYZ (Lysozyme C / Лизоцим С) 1 1 1 1 1 MACF1 (Microtubule-actin cross-linking factor 1, isoforms 1/2/3/5 / Перекрестный фактор 1 микротрубочек актина, изоформы 1/2/3/5) 1 MAN1A1 (Mannosyl-oligosaccharide 1,2-alpha-mannosidase IA / Маннозил-олигосахарид 1,2-альфа-маннозидаза IA) 1 1 1 MAN2A1 (Alpha-mannosidase 2 / Альфа-маннозидаза 2) 1 MAN2A2 (Alpha-mannosidase 2x / Альфа-маннозидаза 2х) 1 MANBA (Beta-mannosidase / Бета-маннозидаза) 1 1 MAPK1 (Mitogen-activated protein kinase 1 / Митоген-активированная протеин киназа 1) 1 MAPK3 (Mitogen-activated protein kinase 3 / Митоген-активированная протеин киназа 3) 1 MAT2A (S-adenosylmethionine synthase isoform type-2 / S- аденозилметионин синтаза изоформа тип-2) 1 MBIP (MAP3K12-binding inhibitory protein 1 / MAP3K12- связывающий ингибиторный белок 1) 1 MCAM (Cell surface glycoprotein MUC18 / Гликопротеин поверхности клетки MUC18) 1 MCFD2 (Multiple coagulation factor deficiency protein 2 / Белок 2 дефицита множества факторов свертываемости) 1 MDH1 (Malate dehydrogenase, cytoplasmic / Цитоплазматическая малат дегидрогеназа) 1 1 1 1 ME1 (NADP-dependent malic enzyme / НАДФ-зависимый малик энзим) 1 ME3 (NADP-dependent malic enzyme, mitochondrial / 1 110

Митохондриальный НАДФ-зависимый малик энзим) MED1 (Mediator of RNA polymerase II transcription subunit 1 / Медиатор транскрипторной РНК-полимеразы II субъединица 1) 1 MED14 (Mediator of RNA polymerase II transcription subunit 14 / Медиатор транскрипторной РНК-полимеразы II субъединица 14) 1 MEGF8 (Multiple epidermal growth factor-like domains protein 8 / Белок 8, содержащий многочисленные домены, подобные эпидермальному фактору роста) 1 1 1 MFAP2 (Microfibrillar-associated protein 2 / Белок 2, ассоциированный с микрофибриллами) 1 MFAP4 (Microfibril-associated glycoprotein 4 / Гликопротеин 4, ассоциированный с микрофибриллами) 1 1 MGLL (Monoglyceride lipase / Моноглицерид липаза) 1 MIF (Macrophage migration inhibitory factor / Фактор, ингибирующий миграцию макрофагов) 1 1 MINPP1 (Multiple inositol polyphosphate phosphatase 1 / Множество инозитол полифосфат фосфатаза 1) 1 1 MIP (Lens fiber major intrinsic protein / Основной белок, характерный для волокон хрусталика) 1 MMP2 (72 kDa type IV collagenase / Коллагеназа тип IV 72 кДа) 1 1 1 MSH5 (MutS protein homolog 5 / Гомолог 5 MutS белка) 1 MST1 (Hepatocyte growth factor-like protein / Белок, подобный фактору роста гепатоцитов) 1 MST1L (Putative macrophage stimulating 1-like protein / Белок, подобный предполагаемому макрофаг-стимулирующему белку 1) 1 MT1X (Metallothionein-1X / Металлотионеин-1Х) 1 MTPN (Myotrophin / Миотрофин) 1 MUC5AC (Mucin-5AC / Муцин-5АС) 1 MUC7 (Mucin-7 / Муцин-7) 1 MVP (Major vault protein / Основной вольт белок) 1 MXRA7 (Matrix-remodeling-associated protein 7 / Матрикс- ремоделирующий-ассоциированный белок 7) 1 MYH15 (Myosin-15 / Миозин-15) 1 MYO3A (Myosin-IIIa / Миозин-IIIa) 1 MYOC (Myocilin / Миоцилин) 1 1 NAGA (Alpha-N-acetylgalactosaminidase / Альфа-N- ацетилгалактозаминидаза) 1 1 NAGLU (Alpha-N-acetylglucosaminidase / Альфа-N- ацетилглюкозаминидаза) 1 NBAS (Neuroblastoma-amplified sequence / Нейробластома-усиленная последовательность) 1 NBL1 (Neuroblastoma suppressor of tumorigenicity 1 / Супрессор регенерации опухоли нейробластомы 1) 1 1 NCAM1 (Neural cell adhesion molecule 1 / Молекула 1 невральной клеточной адгезии) 1 1 1 1 NCCRP1 (F-box only protein 50 / Только F-box белок 50) 1 NCOA5 (Nuclear receptor coactivator 5 / Ядерный рецептор коактиватор 5) 1 111

NDUFB10 (NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 10 / НАДФ дегидрогеназа [убиквинон] 1 бета субкомплекс субъединица 10) 1 NEBL (Nebulette / Небулет) 1 NEGR1 (Neuronal growth regulator 1 / Нейрональный регулятор роста 1) 1 1 1 NELL2 (Protein kinase C-binding protein NELL2 / Протеин киназа C- связывающий белок NELL2) 1 1 1 NEO1 (Neogenin / Неогенин) 1 1 NEU1 (Sialidase-1 / Сиалидаза-1) 1 NFASC (Neurofascin / Нейрофасцин) 1 NID1 (Nidogen-1 / Нидоген-1) 1 NID2 (Nidogen-2 / Нидоген-2) 1 NIN (Ninein / Нинеин) 1 NLRP8 (NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 8 / NACHT, LRR и PYD домены-содержащий белок 8) 1 NME1 (Nucleoside diphosphate kinase A / Нуклеозид дифосфат киназа А) 1 NPC2 (Epididymal secretory protein E1 / Эпидидимальный секреторный белок 1) 1 1 1 1 NPEPPS (Puromycin-sensitive aminopeptidase / Пуромицин- чувствительная аминопептидаза) 1 NPTX1 (Neuronal pentraxin-1 / Нейрональный пентраксин-1) 1 NQO1 (NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1 / НАДФ дегидрогеназа 1) 1 NRCAM (Neuronal cell adhesion molecule / Молекула нейрональной клеточной адгезии) 1 1 1 1 NRXN1 (Neurexin-1-beta / Нейрексин-1-бета) 1 NRXN2 (Neurexin-2 / Нейрексин-2) 1 NRXN3 (Neurexin-3-beta / Нейрексин-3-бета) 1 1 NSF (Vesicle-fusing ATPase / АТФаза, вызывающая слияние везикул) 1 NSG1 (Neuronal vesicle trafficking-associated protein 1 / Нейрональный белок 1, ассоциированный с везикулярным транспортом) 1 NTM (Neurotrimin / Нейротримин) 1 1 1 NUCB1 (Nucleobindin-1 / Нуклеобиндин-1) 1 1 1 1 1 NUDCD2 (NudC domain-containing protein 2 / NudC домен- содержащий белок 2) 1 NUP210L (Nucleoporin 210 kDa-like / Белок, подобный нуклеопорину 210 кДа) 1 OAF (Out at first protein homolog / Первый белок гомолог) 1 OBFC1 (CST complex subunit STN1 / CST комплекс субъединица STN1) 1 OBSCN (Obscurin / Обскурин) 1 1 OGN (Mimecan / Мимекан) 1 OLFM1 (Noelin / Ноэлин) 1 OLFML3 (Olfactomedin-like protein 3 / Ольфактомедин-подобный белок 3) 1

112

OMD (Osteomodulin / Остеомодулин) 1 OPCML (Opioid-binding protein/cell adhesion molecule / Опиоид- связывающий белок/молекула клеточной адгезии) 1 OPTC (Opticin / Оптицин) 1 1 1 1 1 ORM1 (Alpha-1-acid glycoprotein 1 / Альфа-1-кислый гликопротеин 1) 1 1 1 1 1 ORM2 (Alpha-1-acid glycoprotein 2 / Альфа-1-кислый гликопротеин 2) 1 1 1 1 1 OSBPL1A (Oxysterol-binding protein-related protein 1 / Белок 1, связанный с оксистерол-связывающим белком) 1 OTOF (Otoferlin / Отоферлин) 1 PAM (Peptidyl-glycine alpha-amidating monooxygenase / Пептидил- глицин альфа-амидирующая монооксигеназа) 1 1 PAPLN (Papilin / Папилин) 1 PAPOLB (Poly(A) polymerase beta / Поли(А) полимераза бета) 1 PAPPA2 (Pappalysin-2 / Паппализин-2) 1 1 1 PARK7 (Protein DJ-1 / Белок DJ-1) 1 1 PCLO (Protein piccolo / Белок пикколо) 1 PCOLCE (Procollagen C-endopeptidase enhancer 1 / Энханасер 1 проколлаген С-эндопептидазы) 1 1 1 1 PCSK1N (ProSAAS / ПроSAAS) 1 1 PCSK2 (Neuroendocrine convertase 2 / Нейроэндокринная конвертаза 2) 1 PDGFA (Platelet-derived growth factor subunit A / Тромбоцитарный фактор роста субъединица А) 1 PDGFB (Platelet-derived growth factor subunit B / Тромбоцитарный фактор роста субъединица В) 1 PDGFD (Platelet-derived growth factor D / Тромбоцитарный фактор роста D) 1 PDIA3 (Protein disulfide-isomerase A3 / Белок дисульфид-изомераза А3) 1 PEBP1 (Phosphatidylethanolamine-binding protein 1 / Фосфатидилэтаноламин-связывающий белок 1) 1 1 1 1 1 PEBP4 (Phosphatidylethanolamine-binding protein 4 / Фосфатидилэтаноламин-связывающий белок 4) 1 1 1 1 PEPD (Xaa-Pro dipeptidase / Xaa-Pro дипептидаза) 1 PER1 (Period circadian protein homolog 1 / Гомолог 1 белка циркадного периода) 1 PFKL (ATP-dependent 6-phosphofructokinase, liver type / АТФ- зависимая 6-фосфофруктокиназа, печеночный тип) 1 PGAM1 (Phosphoglycerate mutase 1 / Фосфоглицерат мутаза 1) 1 PGAM1; PGAM2; PGAM4 (Phosphoglycerate mutase 1; Phosphoglycerate mutase 2; Probable phosphoglycerate mutase 4 / Фосфоглицерат мутаза 1; Фосфоглицерат мутаза 2; Возможная фосфоглицерат мутаза 4) 1 1 1 PGD (6-phosphogluconate dehydrogenase / 6-фосфоглюконат дегидрогеназа) 1 1 PGK1 (Phosphoglycerate kinase 1 / Фосфоглицират киназа 1) 1 1

113

PGLS (6-phosphogluconolactonase / 6-фосфоглюконолактоназа) 1 PGLYRP2 (N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase / N-ацетилмурамоил- L-аланин амидаза) 1 1 1 1 PGM1 (Phosphoglucomutase-1 / Фосфоглюкомутаза-1) 1 PGM5 (Phosphoglucomutase-like protein 5 / Фосфоглюкомутаза- подобный белок 5) 1 PIGN (GPI ethanolamine phosphate transferase 1 / GPI этаноламин фосфат трансфераза 1) 1 PIKFYVE (1-phosphatidylinositol 3-phosphate 5-kinase / 1- фосфатидилинозитол 3-фосфат 5-киназа) 1 PIP (Prolactin-inducible protein / Пролактин-индуцибельный белок) 1 1 1 1 PKM (Pyruvate kinase /Пируват киназа) 1 1 1 1 PKP1 (Plakophilin-1 / Плакофиллин-1) 1 PLA2G2A (Phospholipase A2, membrane associated / Фосфолипаза А2, мембраноассоциированная) 1 PLBD2 (Putative phospholipase B-like 2 / Белок 2, подобный предполагаемой фосфолипазе В) 1 PLG (Plasminogen / Плазминоген) 1 1 1 1 1 PLOD1 (Procollagen-lysine,2-oxoglutarate 5-dioxygenase 1 / Проколлаген-лизин,2-оксоглютарат 5-диоксигеназа 1) 1 1 PLOD3 (Procollagen-lysine,2-oxoglutarate 5-dioxygenase 3 / Проколлаген-лизин,2-оксоглютарат 5-диоксигеназа 3) 1 PLTP (Phospholipid transfer protein / Белок-переносчик фосфолипидов) 1 PLXDC2 (Plexin domain-containing protein 2 / Плексин домен- содержащий белок 2) 1 PLXNB2 (Plexin-B2 / Плексин-В2) 1 1 PLXNB3 (Plexin-B3 / Плексин-В3) 1 PNP (Purine nucleoside phosphorylase / Пурин нуклеозид фосфорилаза) 1 POF1B (Protein POF1B / Белок POF1B) 1 POL (DNA polymerase / ДНК-полимераза) 1 POLRMT (DNA-directed RNA polymerase, mitochondrial / ДНК- направленная РНК полимераза, митохондриальная) 1 PON1 (Serum paraoxonase/arylesterase 1 / Сывороточная параоксоназа/арилестераза 1) 1 1 1 1 PON3 (Serum paraoxonase/lactonase 3 / Сывороточная параоксоназа/лактоназа 3) 1 POTEE (POTE ankyrin domain family member E / POTE анкирин домен семейство Е) 1 PPBP (Platelet basic protein / Тромбоцитарный основной белок) 1 PPIA (Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A / Пептидил-пролил цис- транс изомераза А) 1 1 1 1 1 PPP1CC (Serine/threonine-protein phosphatase PP1-gamma catalytic subunit A / Серин/треонин-белок фосфатаза РР1-гамма каталитическая субъединица А) 1 PPP2R1B (Serine/threonine-protein phosphatase 2A 65 kDa regulatory subunit A beta isoform / Серин/треонин-белок фосфатаза 2А 65 кДа регуляторная субъединица А бета изоформа) 1 114

PPT1 (Palmitoyl-protein thioesterase 1 / Пальмитоил-белок тиоэстераза 1) 1 PRAP1 (Proline-rich acidic protein 1 / Богатый пролином кислый белок 1) 1 PRB2 (Basic salivary proline-rich protein 2 / Основной слюнной богатый пролином белок 2) 1 PRB4 (Basic salivary proline-rich protein 4 / Основной слюнной богатый пролином белок 4) 1 PRDX1 (Peroxiredoxin-1 / Пероксиредоксин-1) 1 1 1 1 1 PRDX2 (Peroxiredoxin-2 / Пероксиредоксин-2) 1 1 PRDX6 (Peroxiredoxin-6 / Пероксиредоксин-6) 1 1 PRELP (Prolargin / Проларгин) 1 1 PRG4 (Proteoglycan 4 / Протеогликан 4) 1 PRH2 (Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 2 / Слюнной кислый богатый пролином фосфопротеин 2) 1 PRKAR1A (cAMP-dependent protein kinase type I-alpha regulatory subunit / сАМФ-зависимая протеин киназа тип I-альфа регуляторная субъединица) 1 PRKCSH (Glucosidase 2 subunit beta / Глюкозидаза 2 субъединица бета) 1 1 PRNP (Major prion protein / Главный прионный белок) 1 1 PROC (Vitamin K-dependent protein C / Витамин К-зависимый белок С) 1 PROS1 (Vitamin K-dependent protein S / Витамин К-зависимый белок S) 1 1 1 PRR11 (Proline-rich protein 11 / Белок, богатый пролином 11) 1 PRR4 (Proline-rich protein 4 / Белок, богатый пролином 4) 1 PRSS1 (Trypsin-1 / Трипсин-1) 1 PRSS23 (Serine protease 23 / Сериновая протеаза 23) 1 PRSS3 (Trypsin-3 / Трипсин-3) 1 PRX (Periaxin / Периаксин) 1 PSAP (Prosaposin / Просапосин) 1 1 1 PSAT1 (Phosphoserine aminotransferase / Фосфосериновая аминотрансфераза) 1 PSMA5 (Proteasome subunit alpha type-5 / Протеасомная субъединица альфа тип-5) 1 PSMD7 (26S proteasome non-ATPase regulatory subunit 7 / 26S протеасомная неАТФаза регуляторная субъединица 7) 1 PTCHD2 (Patched domain-containing protein 2 / Белок 2, содержащий исправленный домен) 1 PTGDS (Prostaglandin-H2 D-isomerase / простагландин H2 D- изомераза) 1 1 1 1 1 PTK7 (Inactive tyrosine-protein kinase 7 / Неактивная тирозин-протеин киназа 7) 1 PTPRG (Receptor-type tyrosine-protein phosphatase gamma / Рецептор- тип тирозин-протеин фосфатаза гамма) 1 PTPRS (Receptor-type tyrosine-protein phosphatase S / Рецептор-тип тирозин-протеин фосфатаза S) 1 115

PTPRZ1 (Receptor-type tyrosine-protein phosphatase zeta / Рецептор- тип тирозин-протеин фосфатаза зета) 1 1 1 PUS10 (Putative tRNA pseudouridine synthase Pus10 / Предполагаемая тРНК псевдоуридин синтаза Pus10) 1 PXMP2 (Peroxisomal membrane protein 2 / Пероксисомный мембранный белок 2) 1 PYGL (Glycogen phosphorylase, liver form / Гликоген фосфорилаза, печеночная форма) 1 QDPR (Dihydropteridine reductase / Дигидроптеридин редуктаза) 1 QPCT (Glutaminyl-peptide cyclotransferase / Глютаминил-пептид циклотрансфераза) 1 1 1 QSER1 (Glutamine and serine-rich protein 1 / Глютамин и серин- богатый белок 1) 1 QSOX1 (Sulfhydryl oxidase 1 / Сульфгидрил оксидаза 1) 1 RAB21 (Ras-related protein Rab-21 / Ras-связанный белок Rab-21) 1 RAB2A (Ras-related protein Rab-2A / Ras-связанный белок Rab-2A) 1 RAB39A (Ras-related protein Rab-39A / Ras-связанный белок Rab- 39A) 1 RAB43 (Ras-related protein Rab-43 / Ras-связанный белок Rab-43) 1 RABGGTA (Geranylgeranyl transferase type-2 subunit alpha / Геранилгеранил трансфераза тип-2 субъединица альфа) 1 RAD21 (Cohesin subunit rad21 / Субъединица когезина rad21) 1 RAN (GTP-binding nuclear protein Ran / GTP-связывающий ядерный белок Ran) 1 RARRES1 (Retinoic acid receptor responder protein 1 / Белок 1, отвечающий за рецептор ретиноевой кислоты) 1 1 RARRES2 (Retinoic acid receptor responder protein 2 / Белок 2, отвечающий за рецептор ретиноевой кислоты) 1 1 1 1 RBAK (RB-associated KRAB zinc finger protein / RB- ассоциированный KRAB цинксодержащий пальцевидный белок) 1 RBP3 (Retinol-binding protein 3 / Ретинол-связывающий белок 3) 1 1 1 1 1 RBP4 (Retinol-binding protein 4 / Ретинол-связывающий белок 4) 1 1 1 1 RCN2 (Reticulocalbin-2 / Ретикулокаблин-2) 1 RDX (Radixin / Радиксин) 1 RELN (Reelin / Реелин) 1 1 1 RETSAT (All-trans-retinol 13,14-reductase / Полностью-транс-ретинол 13,14-редуктаза) 1 REXO2 (Oligoribonuclease, mitochondrial / Митохондриальная олигорибонуклеаза) 1 RHOA (Transforming protein RhoA / Трансформирующий белок RhoA) 1 RLBP1 (Retinaldehyde-binding protein 1 / Ретинальдегид- связывающий белок 1) 1 RNASE1 (Ribonuclease pancreatic / Панкреатическая рибонуклеаза) 1 1 1 1 1 RNASE4 (Ribonuclease 4 / Рибонуклеаза 4) 1 1 RNASET2 (Ribonuclease T2 / Рибонуклеаза T2) 1 1 1 RNH1 (Ribonuclease inhibitor / Ингибитор рибонуклеазы) 1

116

RPL14 (60S ribosomal protein L14 / 60S рибосомальный белок L14) 1 RPLP0 (60S acidic ribosomal protein P0 / Белок Р0 рибосомальный кислый 60S) 1 RS1 (Retinoschisin / Ретиношизин) 1 1 1 1 1 RTBDN (Retbindin / Ретбиндин) 1 RYR2 (Ryanodine receptor 2 / Рецептор рианодина 2) 1 S100A1 (Protein S100-A1 / Белок S100-A1) 1 S100A11 (Protein S100-A11 / Белок S100-A11) 1 S100A4 (Protein S100-A4 / Белок S100-A4) 1 S100A6 (Protein S100-A6 / Белок S100-A6) 1 1 1 S100A7 (Protein S100-A7 / Белок S100-A7) 1 1 S100A8 (Protein S100-A8 / Белок S100-A8) 1 1 1 1 S100A9 (Protein S100-A9 / Белок S100-A9) 1 1 1 SAA4 (Serum amyloid A-4 protein / Сывороточный амилиод А-4) 1 1 1 1 SAG (S-arrestin / S-аррестин) 1 1 SAP30BP (SAP30-binding protein / SAP30-связывающий белок) 1 SBSN (Suprabasin / Супрабазин) 1 1 1 SCG2 (Secretogranin-2 / Секретогранин-2) 1 1 SCG3 (Secretogranin-3 / Секретогранин-3) 1 SCG5 (Secretogranin-5 / Секретогранин-5) 1 1 SCGB1D2 (Secretoglobin family 1D member 2 / Секретоглобин семейство 1D член 2) 1 SDC4 (Syndecan-4 / Синдекан-4) 1 1 1 SDF4 (45 kDa calcium-binding protein / Кальций-связывающий белок 45 кДа) 1 1 SECISBP2 (Selenocysteine insertion sequence-binding protein 2 / Белок 2, связывающий последовательность вставки селеноцистеин) 1 SELENBP1 (Selenium-binding protein 1 / Селен-связывающий белок 1) 1 1 SEMA3A (Semaphorin-3A / Семафорин-3A) 1 1 SEMA3B (Semaphorin-3B / Семафорин-3B) 1 SEMA3F (Semaphorin-3F / Семафорин-3F) 1 SEMA4B (Semaphorin-4B / Семафорин-4B) 1 1 1 SEMA6D (Semaphorin-6D / Семафорин-6D) 1 SEMA7A (Semaphorin-7A / Семафорин-7А) 1 1 1 1 1 SEPP1 (Selenoprotein P / Селенопротеин Р) 1 1 1 SERPINA1 (Alpha-1-antitrypsin / Альфа-1-антитрипсин) 1 1 1 1 1 SERPINA10 (Protein Z-dependent protease inhibitor / Белок Z- зависимый ингибитор протеазы) 1 SERPINA3 (Alpha-1-antichymotrypsin / Альфа-1-антихимотрипсин) 1 1 1 1 1 SERPINA4 (Kallistatin / Каллистатин) 1 1 1 1 1 SERPINA5 (Plasma serine protease inhibitor / Ингибитор плазменной сериновой протеазы) 1 1 1 1 1

117

SERPINA6 (Corticosteroid-binding globulin / Кортикостероид- связывающий глобулин) 1 1 1 1 1 SERPINA7 (Thyroxine-binding globulin / Тироксин-связывающий белок) 1 1 1 1 1 SERPINB1 (Serpin B1 / Серпин В1) 1 1 SERPINB12 (Serpin B12 / Серпин В12) 1 1 1 SERPINB3 (Serpin B3 / Серпин В3) 1 1 1 SERPINB4 (Serpin B4 / Серпин В4) 1 1 SERPINB6 (Serpin B6 / Серпин В6) 1 1 SERPINB9 (Serpin B9 / Серпин В9) 1 SERPINC1 (Antithrombin-III / Антитромбин III) 1 1 1 1 1 SERPIND1 (Heparin cofactor 2 / Кофактор гепарина 2) 1 1 1 1 SERPINE3 (Serpin E3 / Серпин Е3) 1 SERPINF1 (Pigment epithelium-derived factor / Белок пигментного эпителия сетчатки) 1 1 1 1 1 SERPINF2 (Alpha-2-antiplasmin / Альфа-2-антиплазмин) 1 1 1 1 1 SERPING1 (Plasma protease C1 inhibitor / Ингибитор плазменной протеазы С1) 1 1 1 1 1 SERPINI1 (Neuroserpin / Нейросерпин) 1 1 1 1 1 SEZ6 (Seizure protein 6 homolog / Гомолог белка захвата 6) 1 SEZ6L (Seizure 6-like protein / Белок, подобный белку захвата 6) 1 1 SF3B1 (Splicing factor 3B subunit 1 / Фактор сплайсинга 3В субъединица 1) 1 SFN (14-3-3 protein sigma / 14-3-3 белок сигма) 1 1 1 SFRP1 (Secreted frizzled-related protein 1 / Секретируемый спутанно- связанный белок 1) 1 SH3BGRL3 (SH3 domain-binding glutamic acid-rich-like protein 3 / Белок 3, связывающий SH3 домен, богатый глутаминовой кислотой) 1 SHANK3 (SH3 and multiple ankyrin repeat domains protein 3 / Домены SH3 и многочисленные повторы анкирина белок 3) 1 SHBG (Sex hormone-binding globulin / Глобулин, связывающий половые гормоны) 1 1 SHISA5 (Protein shisa-5 / Белок шиза-5) 1 SIAE (Sialate O-acetylesterase / Сиалат О-ацетилэстераза) 1 1 1 SIRPB1 (Signal-regulatory protein beta-1 / Белок бета-1, регулирующий сигнал) 1 SLC24A2 (Sodium/potassium/calcium exchanger 2 / Натрий/Калий/Кальциевый обменник 2) 1 SLC25A5 (ADP/ATP translocase 2 / АДФ/АТФ транслоказа 2) 1 SLC3A2 (4F2 cell-surface antigen heavy chain / Антиген 4F2 поверхности клетки тяжелая цепь) 1 SLC4A1 (Band 3 anion transport protein / Анионный транспортный белок зона 3) 1 SLC6A1 (Sodium- and chloride-dependent GABA transporter 1 / Натрий- и хлорид-зависимый GABA транспортер 1) 1 SLIT1 (Slit homolog 1 protein / Белок слит гомолога 1) 1

118

SLIT2 (Slit homolog 2 protein / Белок слит гомолога 2) 1 SLPI (Antileukoproteinase / Антилейкопротеиназа) 1 SMARCA4 (Transcription activator BRG1 / Активатор транскрипции BRG1) 1 SMARCA5 (SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator of chromatin subfamily A member 5 / Член 5 подсемейства А SWI/SNF-связанного матрикс-ассоциированного актин-зависимого регулятора хроматина) 1 SMPDL3A (Acid sphingomyelinase-like phosphodiesterase 3a / Кислая сфингомиелиназа-подобная фосфодиэстераза 3а) 1 SOD1 (Superoxide dismutase [Cu-Zn] / Супероксид дисмутаза [Cu-Zn]) 1 1 1 1 1 SOD3 (Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn] / Внеклеточная супероксид дисмутаза [Cu-Zn]) 1 1 1 1 1 SORCS1 (VPS10 domain-containing receptor SorCS1 / Рецептор SorCS1, содержащий VPS10 домен) 1 1 1 SORD (Sorbitol dehydrogenase / Сорбитол дегидроназа) 1 SPARC (Secreted protein acidic and rich in cysteine / Кислый кальций- связывающий богатый цистеином белок) 1 1 1 1 SPARCL1 (SPARC-like protein 1 / SPARC-подобный белок 1) 1 1 1 1 1 SPATA4 (Spermatogenesis-associated protein 4 / Сперматогенез- ассоциированный белок 4) 1 SPDL1 (Protein Spindly / Белок Спиндли) 1 SPERT (Spermatid-associated protein / Сперматид-ассоциированный белок) 1 SPINK4 (Serine protease inhibitor Kazal-type 4 / Ингибитор сериновой протеазы Казал-типа 4) 1 SPOCK1 (Testican-1 / Тестикан-1) 1 1 1 1 SPOCK2 (Testican-2 / Тестикан-2) 1 1 SPON1 (Spondin-1 / Спондин-1) 1 1 1 1 1 SPP1 (Osteopontin / Остеопонтин) 1 1 1 1 1 SPRR2B; SPRR2D; SPRR2A; SPRR2E; SPRR2G (Small proline-rich protein 2B; Small proline-rich protein 2D; Small proline-rich protein 2A; Small proline-rich protein 2E; Small proline-rich protein 2G / Малый белок, богатый пролином 2В; Малый белок, богатый пролином 2D; Малый белок, богатый пролином 2A; Малый белок, богатый пролином 2E; Малый белок, богатый пролином 2G) 1 SPTAN1 (Alpha-II spectrin / Альфа-II спектрин) 1 SRD5A1 (3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1 / 3-оксо-5-альфа- стероид 4-дегидрогеназа 1) 1 SUGT1 (Protein SGT1 homolog / Гомолог белка SGT1) 1 SULF2 (Extracellular sulfatase Sulf-2 / Внеклеточная сульфатаза Сульф-2) 1 SYNE1 (Nesprin-1 / Несприн-1) 1 TAC3 (Tachykinin-3 / Тахикинин-3) 1 TALDO1 (Transaldolase / Трансальдолаза) 1 1 TANGO6 (Transport and Golgi organization protein 6 homolog / Гомолог белка 6 транспорта и структуры Гольджи) 1

119

TCN2 (Transcobalamin-2 / Транскобаламин-2) 1 TF (Serotransferrin / Серотрансферрин) 1 1 1 1 1 TFAP2D (Transcription factor AP-2-delta / Фактор транскрипции AP-2- дельта) 1 TGFB2 (Transforming growth factor beta-2 / Трансформирующий фактор роста бета-2) 1 1 TGFBI (Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3 / Белок ig-h3, индуцирующий преобразование фактора роста-бета) 1 1 1 1 1 TGM1 (Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K / Белок глютамин гамма-глютамилтрансфераза К) 1 TGM3 (Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase E / Белок глютамин гамма-глютамилтрансфераза Е) 1 1 1 TGOLN2 (Trans-Golgi network integral membrane protein 2 / Белок 2 интегральной мембранной сети транс-Гольджи) 1 THBS4 (Thrombospondin-4 / Тромбоспондин-4) 1 1 TIMP1 (Metalloproteinase inhibitor 1 / Ингибитор металлопротеиназы 1) 1 1 1 TIMP2 (Metalloproteinase inhibitor 2 / Ингибитор металлопротеиназы 2) 1 1 1 1 TKT (Transketolase / Транскетолаза) 1 1 1 TMEM198 (Transmembrane protein 198 / Трансмембранный белок 198) 1 TMEM47 (Transmembrane protein 47 / Трансмембранный белок 47) 1 TMSB10 (Thymosin beta-10 / Тимозин бета-10) 1 TMSB4X (Thymosin beta-4 / Тимозин бета-4) 1 TNFRSF12A (Tumor necrosis factor receptor superfamily member 12A / Член 12А надсемейства рецептора фактора некроза опухоли) 1 TNR (Tenascin-R / Тенасцин-R) 1 TP53I3 (Tumor protein p53-inducible protein 3 / Белок 3, индуцируемый опухолевым белком р53) 1 TPI1 (Triosephosphate isomerase / Триосефосфат изомераза) 1 1 1 1 1 TPM3 (Tropomyosin alpha-3 chain / Тропомиозин цепь альфа-3) 1 1 TPP1 (Tripeptidyl-peptidase 1 / Трипептидил-пептидаза 1) 1 1 1 1 TRANK1 (TPR and ankyrin repeat-containing protein 1 / Белок 1, содержащий TPR и анкирин повтор) 1 TRH (Pro-thyrotropin-releasing hormone / Про-тиротропин- выпускающий гормон) 1 TRIM5 (Tripartite motif-containing protein 5 / Белок 5, содержащий 3-х стороннее основание) 1 TRPV3 (Transient receptor potential cation channel subfamily V member 3 / Член 3 подсемейства V временного рецептора потенциального катионного канала) 1 TRRAP (Transformation/transcription domain-associated protein / Белок, ассоциированный с доменом трансформации/транскрипции) 1 TSKU (Tsukushin / Цукушин) 1 TTN (Titin / Титин) 1 1 TTR (Transthyretin / Транстиретин) 1 1 1 1 1

120

TUBA1B; TUBA1C; TUBA1A; KLK9; TUBA3C; TUBA8; TUBA3E (Tubulin alpha-1B chain; Tubulin alpha-1C chain; Tubulin alpha-1A chain; Kallikrein-9; Tubulin alpha-3C chain; Tubulin alpha-8 chain; Tubulin alpha-3E chain / Тубулин цепь альфа-1В; Тубулин цепь альфа-1С; Тубулин цепь альфа-1А; Кллинкреин-9; Тубулин цепь альфа-3С; Тубулин цепь альфа-8; Тубулин цепь альфа-3Е) 1 1 TUBA8 (Tubulin alpha-8 chain / Тубулин цепь альфа-8) 1 TUBB2B (Tubulin beta-2B chain / Тубулин цепь бета-2В) 1 TUBB4B (Tubulin beta-4B chain / Тубулин цепь бета-4В) 1 TWSG1 (Twisted gastrulation protein homolog 1 / Гомолог 1 закрученного белка гаструляции) 1 TXN (Thioredoxin / Тиоредоксин) 1 1 TYRP1 (Tyrosinase-related protein 1 / Тиросиназа-связанный белок 1) 1 UBA1 (Ubiquitin-like modifier-activating enzyme 1 / Подобный убиквитину изменяющий активизирующий энзим 1) 1 UBB; RPS27A; UBC; UBA52; UBBP4 (Ubiquitin-60S ribosomal protein L40; Ubiquitin; 60S ribosomal protein L40; Ubiquitin-40S ribosomal protein S27a; Ubiquitin; 40S ribosomal protein S27a; Polyubiquitin-B; Ubiquitin; Polyubiquitin-C; Ubiquitin / Убиквитин-60S рибосомальный белок L40; Убиквитин-40S рибосомальный белок S27a; Полиубиквитин-В; Убикситин; Полиубиквитин-С) 1 UBC (Polyubiquitin-C / Полиубиквитин-С) 1 VASN (Vasorin / Вазорин) 1 1 1 1 VCAM1 (Vascular cell adhesion protein 1 / Белок 1 сосудистой клеточной адгезии) 1 VEPH1 (Ventricular zone-expressed PH domain-containing protein homolog 1 / Гомолог 1 белка, представленного в вентрикулярной зоне, содержащего РН домен) 1 VGF (Neurosecretory protein VGF / Нейросекреторный белок VGF) 1 1 1 VIM; DES (Vimentin; Desmin / Виментин; Десмин) 1 1 VSTM2A (V-set and transmembrane domain-containing protein 2A / Белок 2А, содержащий трансмембранный домен и V-набор) 1 VTN (Vitronectin / Витронектин) 1 1 1 1 1 WDR87 (WD repeat-containing protein 87 / Белок 87, содержащий WD повтор) 1 WFDC1 (WAP four-disulfide core domain protein 1 / Белок 1WAP 4- дисульфид ядерный домен) 1 WFIKKN2 (WAP, Kazal, immunoglobulin, Kunitz and NTR domain- containing protein 2 / WAP, Казал, иммуноглобулин, Кунитц и NTR домен-содержащий белок 2) 1 WIF1 (Wnt inhibitory factor 1 / Wnt ингибиторный фактор 1) 1 1 1 1 XP32 (Skin-specific protein 32 / Кожно-специфический белок 32) 1 XPOT (Exportin-T / Экспортин-Т) 1 XXYLT1 (Xyloside xylosyltransferase 1 / Ксилозид ксилозилтрансфераза 1) 1 XYLT1 (Xylosyltransferase 1 / Ксилозилтрансфераза 1) 1 YIPF3 (Protein YIPF3 / Белок YIPF3) 1

121

YWHAE (14-3-3 protein epsilon / 14-3-3 белок эпсилон) 1 1 1 YWHAG (14-3-3 protein gamma / 14-3-3 белок гамма) 1 YWHAQ (14-3-3 protein theta / 14-3-3 белок тета) 1 YWHAZ (14-3-3 protein zeta/delta / 14-3-3 белок зета/дельта) 1 1 1 1 YY1AP1 (YY1-associated protein 1 / YY1-ассоциированный белок 1) 1 ZBED8 (Protein ZBED8 / Белок ZBED8) 1 ZBTB4 (Zinc finger and BTB domain-containing protein 4 / Цинксодержащий пальцевидный и ВТВ домен-содержащий белок ) 1 ZBTB40 (Zinc finger and BTB domain-containing protein 40 / Цинксодержащий пальцевидный и ВТВ домен-содержащий белок 40) 1 ZFHX3 (Zinc finger homeobox protein 3 / Цинксодержащий пальцевидный гомеобокс белок 3) 1 ZFP42 (Zinc finger protein 42 / Цинксодержащий пальцевидный белок 42) 1 ZG16B (Zymogen granule protein 16 homolog B / Белок зимогенная гранула 16 гомолог В) 1 ZNF165 (Zinc finger protein 165 / Цинксодержащий пальцевидный белок 165) 1 ZNF224 (Zinc finger protein 224 / Цинксодержащий пальцевидный белок 224) 1 ZNF234 (Zinc finger protein 234 / Цинксодержащий пальцевидный белок 234) 1 ZNF469 (Zinc finger protein 469 / Цинксодержащий пальцевидный белок 469) 1 Количество 269 352 195 759 212 3.8 Результаты анализа слезной жидкости Определение общего белка в слезной жидкости дало существенные индивидуальные колебания, поэтому протеомный анализ путем масс- спектрометрии, которым мы располагали, можно признать неэффективным инструментом в случае слезы. Предварительный анализ также выявил в этой жидкости большое количество контаминантных белков, например, кератинов кожи. Таким образом, данная работа представляет собой комплексное клинико- лабораторное исследование. Доказано, что взятие на анализ жидкости передней камеры глаза во время операции факоэмульсификации катаракты не влияет на результат операции и не увеличивает сроки послеоперационного восстановления. В работе с помощью хромато-масс-спектрометрических методов высокого разрешения исследован протеом жидкости передней камеры 122

глаза у пациентов с такими глазными заболеваниями, как катаракта, глаукома, а также псевдоэксфолиативный синдром. Доказана высокая информативность проведения данного анализа для поиска биомаркеров первичной открытоугольной глаукомы.

123

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Глаукома является проблемой современной офтальмологии, так как может потенциально приводить к слепоте. По литературным данным у одного из трех пациентов старше 65 лет выявляется снижение остроты зрения, одной из причин которого может быть глаукома. Проблема ранней диагностики глаукомы является одним из приоритетных направлений современной офтальмологии. Течение глаукомы, как правило, бессимптомное с прогрессирующим снижением зрительных функций, поэтому не всегда удается установить диагноз в начальной стадии и начать лечение. Доказано, что успех медикаментозного и хирургического лечения больных глаукомой во многом зависит именно от своевременной постановки диагноза. Таким образом, продолжается поиск новых методов, позволяющих обнаружить самые ранние доклинические нарушения у больных глаукомой, изучить их топографию и выявить дополнительные критерии динамики глаукомного процесса. Протеомный анализ является одним из новых направлений исследований

состава биологических жидкостей. Основная задача протеомики – количественный анализ экспрессии белков в клетках в зависимости от их типа,

состояния или влияния внешних условий. В последние годы протеомный анализ стал неотъемлемой частью биомедицинских исследований. Главной целью клинической протеомики является обнаружение нового белкового или пептидного биомаркера, который связан с определенным заболеванием. Одним из основных методов протеомики является масс-спектрометрия белков, которая позволяет установить количественный и качественный состав в исследуемом образце.

124

Цель данного исследования - усовершенствовать диагностику первичной открытоугольной глаукомы путем использования протеомного анализа жидкости передней камеры глаза и слезы. В процессе исследования решали следующие задачи: 1. Идентифицировать белковый состав жидкости передней камеры глаза методом протеомного анализа. 2. Оценить протеомный профиль жидкости передней камеры глаза и установить возможные биомаркеры первичной открытоугольной глаукомы. 3. Определить наличие выявленных в жидкости передней камеры глаза биомаркеров в слезе. 4. Оценить диагностическую значимость выявленных биомаркеров в установке диагноза первичной открытоугольной глаукомы. 5. Сопоставить протеомный профиль слезы и жидкости передней камеры глаза пациентов с первичной открытоугольной глаукомой и пациентов без подтвержденного диагноза глаукома. Работа, представляющая собой комплексное клинико-лабораторное исследование, выполнялась на кафедре офтальмологии ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования министерства здравоохранения Российской Федерации, которая расположена на базе городской клинической больницы имени С.П. Боткина Филиал №1 «Офтальмологический стационар». В соответствии с решавшимися задачами значительную часть работы составили биохимические (в основном протеомные) исследования. Эти исследования проводились на базе ФГБНУ Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича. При выполнении исследования под наблюдением находились 60 пациентов, из них 24 мужчин (24 глаза), 36 женщин (36 глаз). Все пациенты были обследованы с использованием основных и дополнительных 125

офтальмологических методов исследования для установления диагноза и назначения хирургического лечения. Для проведения исследования были выделены четыре основные исследовательские группы: 1-ю группу (контрольную) составили пациенты с катарактой (24 человека), не имеющие другой офтальмопатологии; во 2-ю группу вошли пациенты с катарактой и псевдоэксфолиативным синдромом без подтвержденного диагноза глаукома (7 человек); 3-ю группу составили пациенты с катарактой и первичной открытоугольной глаукомой (11 человек); в 4-ю группу вошли пациенты с катарактой, ПОУГ и ПЭС (18 человек). Накануне операции факоэмульсификации катаракты у всех больных производился забор слезной жидкости (60 проб), а во время операции осуществлялся сбор жидкости передней камеры глаза (60 проб). У всех пациентов операция и послеоперационный период протекали без осложнений. Больные были выписаны из стационара на следующий день после операции. Доказано, что взятие на анализ жидкости передней камеры глаза во время операции факоэмульсификации катаракты не ухудшает результатов операции и не увеличивает сроки послеоперационного восстановления. В работе с помощью хромато-масс-спектрометрических методов высокого разрешения исследован протеом жидкости передней камеры глаза у пациентов с такими глазными заболеваниями, как катаракта, глаукома, а также псевдоэксфолиативный синдром. В работе найдено 269 белковых групп, характеризующих протеом жидкости передней камеры глаза. В соответствии с классификацией Gene Ontology, большинство выделенных белковых групп участвуют в регуляции протеолиза и основной функцией белков жидкости передней камеры глаза является активность по ингибированию эндопептидаз. По литературным данным, это является важным для предотвращения расщепления белков и нарушения прозрачности внутриглазных сред. 126

В исследовании определен «конститутивный» протеом жидкости передней камеры глаза, то есть были выделены белки, обнаруженные в большинстве образцов. Результирующий список содержит 36 белковых групп. Среди них транспортные белки, ингибиторы протеаз, белки липидного связывания, иммуноглобулины. При исследовании жидкости передней камеры методом масс- спектрометрии выявлено 12 уникальных белковых групп, характерных только для первичной открытоугольной глаукомы. Это аполипопротеин C-III, карбоксипептидаза В2, коллаген альфа-2(I) цепь, коллаген альфа-3(IХ) цепь, компонент комплемента С6, компонент комплемента С8 бета цепь, фибронектин, белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста 5, белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста комплекс кислых лабильных субъединиц, нейросекреторные белки (VGF), белок, богатый пролином 4, кислый кальций-связывающий богатый цистеином белок. Выявленные белки являются потенциальными биомаркерами ПОУГ. Но для того, чтобы исключить возможность «случайного» обнаружения данных белковых групп в жидкости передней камеры глаза, необходимы дальнейшие исследования. При использовании статистического метода анализа - построения дерева решений - было выявлено, что обнаруженный в жидкости передней камеры белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома. Средняя интенсивность сигнала (LFQ int) аполипопротеина D менее 4,8 х 107 с чувствительностью 72,7% и специфичностью 100% прогнозирует псевдоэксфолиативный синдром. По литературным данным, этот белок предположительно участвует в прогрессировании ПЭС. Целенаправленные исследования его уровня и изоформ в структурах глаза необходимы для определения точной роли аполипопротеина D в развитии ПЭС.

127

Анализ слезной жидкости выявил большое количество контаминантных белков, например, кератинов кожи. Также при определении общего белка в слезной жидкости обнаружены существенные индивидуальные колебания. Таким образом, исследование слезной жидкости в плане поиска биомаркеров ПОУГ является менее информативным, чем исследование жидкости передней камеры глаза из-за присутствия в слезной жидкости контаминантов, в частности, кератинов кожи, а также из-за высокой индивидуальной вариабельности содержания общего белка в этой жидкости. В исследовании доказана высокая информативность проведения протеомного анализа жидкости передней камеры глаза методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с высокоточной тандемной масс-спектрометрией для поиска биомаркеров первичной открытоугольной глаукомы.

128

Выводы 1. Протеомные исследования жидкости передней камеры глаза больных с катарактой, первичной открытоугольной глаукомой и псевдоэксфолиативным синдромом показали, что основной функцией белков жидкости передней камеры глаза является активность по ингибированию эндопептидаз, что является важным для предотвращения расщепления белков и нарушения прозрачности внутриглазных сред. 2. При анализе данных интенсивности сигнала LFQ протеома жидкости передней камеры глаза пациентов с ПОУГ и без подтвержденного диагноза глаукомы с использованием многомерной статистики, не было найдено одиночного биомаркера или комбинации белков, которые можно рассматривать в качестве биомаркера. Это подтверждает необходимость проведения дальнейших протеомных исследований по поиску биомаркеров ПОУГ. 3. В ходе исследования жидкости передней камеры методом масс-спектрометрии выявлено 12 уникальных белковых групп, характерных только для первичной открытоугольной глаукомы. Это является важным для проведения дальнейших исследований и для выявления возможных биомаркеров ПОУГ в жидкости передней камеры глаза. 4. При использовании статистического метода анализа - построения дерева решений - было выявлено, что обнаруженный в жидкости передней камеры белок аполипопротеин D является потенциальным биомаркером псевдоэксфолиативного синдрома. Средняя интенсивность сигнала (LFQ int) аполипопротеина D менее 4,8 х 107 с чувствительностью 72,7% и специфичностью 100% прогнозирует псевдоэксфолиативный синдром. 5. Исследование слезной жидкости в плане поиска биомаркеров ПОУГ является менее информативным, чем исследование жидкости передней камеры глаза из- за присутствия в слезной жидкости контаминантов, в частности, кератинов

129

кожи, а также из-за высокой индивидуальной вариабельности содержания общего белка в этой жидкости. Практические рекомендации 1. Для ранней диагностики ПОУГ у пациентов с катарактой и подозрением на глаукому может быть применен метод протеомного анализа жидкости передней камеры глаза. 2. Взятие на анализ жидкости передней камеры глаза во время операции ФЭК не ухудшает результатов операции и не увеличивает сроки послеоперационного восстановления. 3. При исследовании жидкости передней камеры глаза пациентов с катарактой, ПОУГ и ПЭС необходимо обращать внимание на белковые группы, выявленные только при глаукоме. 4. Взятие на анализ жидкости передней камеры при факоэмульсификации катаракты дает возможность проведения тонкого биохимического исследования для выявления возможных биомаркеров ПОУГ.

130

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Нестеров А.П. Глаукома // М.: Медицина. 1995. 246 с. 2. Нестеров А.П., Егоров Е.А. Классификация глаукомы // Клиническая офтальмология. 2001. № 2 (2). С. 35-38. 3. Quigley H.A. Number of people with glaucoma worldwide // Br. J. Ophthalmol. 1996. Vol. 80 (5). P. 389-393. 4. Quillen D.A. Common causes of vision loss in elderly patients // Am Fam Phisician. 1999. Vol. 60 (1). P. 99-108. 5. Егоров Е.А. Клинические лекции п5о офтальмологии // М.: Гэотар-Медиа. 2007. 20 с. 6. Grub M., Mielke J. Aqueous humor dynamics // Ophthalmology. 2004. Vol. 101 (4). P. 357-365. 7. Золотарев А.В., Карлова Е.В., Николаева Г.А. Роль трабекулярной сети в осуществлении увеосклерального оттока. // Клиническая офтальмология. 2006. № 2. С. 67-69. 8. Nilsson S.F. The uveoscleral outflow routes // Eye. 1997. Vol. 11 (2). P. 149-154. 9. Hayreh S.S. The pathogenesis of optic nerve lesions in glaucoma // Transactions. Section on Ophthalmology. American Academy of Ophthalmology and Otolaryngology. 1976. Vol. 81 (2). P. 197-213. 10. Кански Д.Д. Клиническая офтальмология: систематизированный подход. Глава 13. Глаукома // М.: Логосфера. 2010. С. 13-32. 11. Егоров Е.А., Ставицкая Т.В., Налобнова Ю.В. Электрофизиологические и психофизические методы исследования в ранней диагностике глаукомы // Клиническая офтальмология. 2003. № 4 (2). С. 68-70. 12. Егоров Е.А., Астахов Ю.С., Щуко А.Г. Национальное руководство по глаукоме для практикующих врачей // М.: Гэотар-Медиа. 2011. 280 с. 13. Егоров Е.А., Астахов Ю.С., Щуко А.Г. Национальное руководство по глаукоме: путеводитель для поликлинических врачей // М.: Гэотар-Медиа. 2008. C. 9-55. 131

14. Егоров Е.А., Васина М.В. Значение исследования биомеханических свойств роговой оболочки в оценке офтальмотонуса // Клиническая офтальмология. 2008. № 1 (9). С. 1-4. 15. Костова С., Ангелов Б., Петкова Н. Сравнительное исследование внутриглазного давления при первичной открытоугольной глаукоме, измеренного с помощью контурного динамического тонометра Pascal, аппланационного тонометра Goldmann и аппланационного тонометра Маклакова // Клиническая офтальмология. 2009. № 4 (10). С. 123-125. 16. Нестеров А.П. Глаукома (изд. 2-е) // М.: МИА. 2008. 360 c. 17. Гапонько О.В., Куроедов А.В., Городничий В.В., Огородникова В.Ю., Захарова М.А., Кондракова И.В., Кузнецов К.В., Фомин Н.Е. Новые морфометрические маркеры диагностики глаукомы // Клиническая офтальмология. 2016. № 1 (16). С. 1-6. 18. Захарова М.А., Куроедов А.В. Оптическая когерентная томография: технология, ставшая реальностью // Клиническая офтальмология. 2015. № 4 (15). С. 204-211.

19. Сердюкова С.А., Симакова И.Л. Компьютерная периметрия в диагностике первичной открытоугольной глаукомы // Офтальмологические ведомости. 2018. № 1 (11). С. 54-65. 20. Grus F.H., Joachim S.C., Pfeiffer N. Proteomics in ocular fluids // Wiley-VCH. 2007. Vol. 1 (8). P. 876-888. 21. Anderson N.L., Anderson N.G.. Proteome and proteomics: new technologies, new concepts, and new words // Electrophorresis. 1998. Vol. 19 (11). P. 1853-1861. 22. Engholm-Keller K., Larsen M.R. Technologies and challenges in large-scale phosphoproteomic // Proteomics. 2013. Vol. 13 (6). P. 910-931. 23. James P. Protein identification in the post-genome era: the rapid rise of proteomics // Quarterly reviews of biophysics. 1997. Vol. 30 (4). P. 279-331. 24. Говорун В.М., Арчаков А.И. Протеомные технологии в современной биомедицинской науке // Биохимия. 2002. № 10 (67). С. 1341–1359. 132

25. Shi R., Kumar C., Zougman A., Zhang Y, Podtelejnikov A, Cox J, Wisniewski JR, Mann M. Analysis of the mouse liver proteome using advanced mass spectrometry // J Proteome Res. 2007. Vol. 6 (8). P. 2963-2972. 26. Nelsestuen G.L., Zhang Y., Martinez M.B., Key N.S., Jilma B., Verneris M., Sinaiko A., Kasthuri R.S. Plasma protein profiling: unique and stable features of individuals // Proteomics. 2005. Vol. 5 (15). P. 4012-4024. 27. Hu S., Loo J.A., Wong D.T. Human body fluid proteome analysis // Proteomics. 2006. Vol. 6 (23). P. 6326-6353. 28. Власова М.А., Мошковский С.А., Сафарова М.Р., Макаров О.В., Арчаков А.И. Молекулярная диагностика рака яичника с использованием протеомных технологий // Биомедицинская химия. 2005. № 51 (4). С. 367-383. 29. Soltys S.G., Shi G., Tibshirani R. et al. The use of plasma SELDI-TOF MS proteomic patterns for detection of head and neck squamous cell cancers (HNSCC) // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 2003. Vol. 57. P. 202. 30. Zhang Z., Bast R.C., Yu Y. et al. Three biomarkers identified from serum proteomic analysis for the detection of early stage ovarian cancer // Cancer Res. 2004. Vol. 64. P. 5882-5890. 31. Знаменская Л.Ф. Протеомные технологии в изучении патогенеза псориаза // Вестник дерматологии и венерологии. 2011. № 3. С. 27-33. 32. Гасанов М.З., Батюшин М.М., Терентьев В.П., Садовничая Н.А. Протеомный спектр мочи пациентов с хроническим гломерулонефритом // Клиническая нефрология. 2012. № 5. С. 28-32. 33. Grus F.H., Podust V.N., Bruns K., Lackner K., Fu S., Dalmasso E.A., Wirthlin A., Pfeiffer N. SELDI-TOF-MS ProteinChip array profiling of tears from patients with dry eye // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2005. Vol. 46. P. 863-876. 34. Ohashi Y., Ishida R., Kojima T., Goto E., Matsumoto Y., Watanabe K., Ishida N., Nakata K., Takeuchi T., Tsubota K. Abnormal protein profiles in tears with dry eye syndrome // Am. J. Ophthalmol. 2003. Vol. 136. P. 291-299. 133

35. Scherz W. Keratoconjunctivitis sicca caused by denervation of lacrimal gland // Klin. Monatsbl. Augenheilkd. 1979. Vol. 174. P. 188-192. 36. Fine H.F., Baffi J., Reed G.F., Csaky K.G., Nussenblatt R.B. Aqueous humor and plasma vascular endothelial growth factor in uveitis-associated cystoid macular edema // Am. J. Ophthalmol. 2001. Vol. 132. P. 794-796. 37. Chen H., Wu L., Pan S., Wu D.Z. An immunologic study on age-related macular degeneration // Yan Ke Xue Bao. 1993. Vol. 9. P. 113-120. 38. Ethen C.M., Reilly C., Feng X., Olsen T.W., Ferrington D.A. The proteome of central and peripheral retina with progression of age-related macular degeneration // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2006. Vol. 47. P. 2280-2290. 39. Gurne D.H., Tso M.O., Edward D.P., Ripps H. Antiretinal antibodies in serum of patients with age-related macular degeneration // Ophthalmology. 1991. Vol. 98. P. 602-607. 40. Patel N., Ohbayashi M., Nugent A.K., Ramchand K., Toda M., Chau K.Y., Bunce C., Webster A., Bird A.C., Ono S.J., Chong V. Circulating anti-retinal antibodies as immune markers in age-related macular degeneration // Immunology. 2005. Vol. 115. P. 422-430. 41. Penfold P.L., Provis J.M., Furby J.H., Gatenby P.A., Billson F. A. Autoantibodies to retinal astrocytes associated with age-related macular degeneration // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1990. Vol. 228. P. 270-274. 42. Funatsu H., Yamashita H., Noma H., Mimura T., Yamashita T, Hori S. Increased levels of vascular endothelial growth factor and interleukin-6 in the aqueous humor of diabetics with macular edema // Am. J. Ophthalmol. 2002. Vol. 133. P. 70-77. 43. Patel J.I., Tombran-Tink J., Hykin P.G., Gregor Z.J., Cree I.A. Vitreous and aqueous concentrations of proangiogenic, antiangiogenic factors and other cytokines in diabetic retinopathy patients with macular edema: Implications for structural differences in macular profiles // Exp. Eye. Res. 2006. Vol. 82. P. 798-806.

134

44. Бродская М.В., Бабижаев М.А., Ермолин Г.А. Об участии фибронектина в механизмах дистрофических изменений дренажной системы глаз при открытоугольной глаукоме // Вестник офтальмологии. 1988. № 104 (6). С. 10-13. 45. Hu D.N., Ritch R., Liebmann J., Liu Y., Cheng B., Hu M.S. Vascular endothelial growth factor is increased in aqueous humor of glaucomatous eyes // J. Glaucoma. 2002. Vol. 11. P. 406-410. 46. Knepper P.A., Mayanil C.S., Goossens W., Wertz R.D., Holgren C., Ritch R., Allingham R.R. Aqueous humor in primary open-angle glaucoma contains an increased level of CD44S // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. Vol. 43. P. 133-139. 47. Kuchle M., Ho T.S., Nguyen N.X., Hannappel E., Naumann G.O.H. Protein quantification and electrophoresis in aqueous humor of pseudoexfoliation eyes // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1994. Vol. 35. P. 748-752. 48. Vesaluoma M., Mertaniemi P., Mannonen S., Lehto I., Uusitalo R., Sarna S., Tarkkanen A., Tervo T. Cellular and plasma fibronectin in the aqueous humour of primary open-angle glaucoma, exfoliative glaucoma and cataract patients // Eye. 1998. Vol. 12. P. 886-890. 49. Сомов Е.Е., Бржеский В.В. Слеза // СПб.: Наука; 1994. 156 с. 50. Мошетова Л.К., Волков О.А. Современное представление о слезной жидкости, значение ее в диагностике // Клиническая офтальмология. 2004. № 5 (4). С. 138- 141. 51. Holly F.J., Lemp M.A. Tear physiology and dry eyes // Surv. Ophthalmol. 1977. Vol. 22. P. 69-87. 52. Schein O.D., Munoz B., Tielsch J.M., Bandeen-Roche K., West S. Prevalence of dry eye among the elderly // Am. J. Ophthalmol. 1997. Vol. 124. P. 723-728. 53. Gachon A.M., Richard J., Dastugue B. Human tears: Norma protein pattern and individual protein determinations in adults // Curr. Eye Res. 1982. Vol. 2. P. 301-308. 54. Pietsch R.L., Pearlman M.E. Human tear lysozyme variables // Arch. Ophthalmol. 1973. Vol. 90. P. 94-96. 135

55. Broekhuyse R.M. Tear lactoferrin: A bacteriostatic and complexing protein // Invest. Ophthalmol. 1974. Vol. 13. P. 550-554. 56. Molloy M.P., Bolis S., Herbert B.R., Ou K. Tyler M.I., van Dyk D.D., Willcox M.D., Gooley A.A., Williams K.L., Morris C.A., Walsh B.J. Establishment of the human reflex tear two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis reference map: new proteins of potential diagnostic value // Electrophoresis. 1997. Vol. 18. P. 2811-2815. 57. Dogru M., Katakami C., Inoue M., Tear function and ocular surface changes in noninsulin-dependent diabetes mellitus // Ophthalmology. 2001. Vol. 108. P. 586- 592. 58. Evans V., Vockler C., Friedlander M., Walsh B., Willcox M.D. Lacryglobin in human tears, a potential marker for cancer // Clin. Exp. Ophthalmol. 2001. Vol. 29. P. 161- 163. 59. Herber S., Grus F.H., Sabuncuo P., Augustin A.J., Changes in the tear protein patterns of diabetic patients using two-dimensional electrophoresis // Adv. Exp. Med. Biol. 2002. Vol. 506. P. 623–626. 60. Herber S., Grus F.H., Sabuncuo P., Augustin A.J. Twodimensional analysis of tear protein patterns of diabetic patients // Electrophoresis. 2001. Vol. 22. P. 1838-1844. 61. Stolwijk T.R., Kuizenga A., van Haeringen N.J., Kijlstra A. Oosterhuis J.A., van Best J.A. Analysis of tear fluid proteins in insulin-dependent diabetes mellitus // Acta Ophthalmol. 1994. Vol. 72. P. 357-362. 62. Civan M.M., Macknight A.D. The ins and outs of aqueous humour secretion // Exp. Eye Res. 2004. Vol. 78. P. 625-631. 63. Jonsson M., Markstrom K., Behndig A. Slit-scan tomography evaluation of the anterior chamber and corneal con figurations at different ages // Acta Ophthalmol. Scand. 2006. Vol. 84. P. 116-120. 64. Toris C.B., Yablonski M.E., Wang Y.L., Camras C.B. Aqueous humor dynamics in the aging human eye // Am. J. Ophthalmol. 1999. Vol. 127. P. 407-412.

136

65. Weinstein B.I., Iyer R.B., Binstock J.M. et al. Decreased 3 alpha-hydroxysteroid dehydrogenase activity in peripheral blood lymphocytes from patients with primary open angle glaucoma // Exp Eye Res. 1996. Vol. 62 (1). P. 39-45. 66. Katoh Y., Katoh M. Comparative integromics on Angiopoietin family members // Int J Mol Med. 2006. Vol. 17 (6). P. 1145-1149. 67. Camenisch G., Pisabarro M.T., Sherman D. et al. ANGPTL3 stimulates endothelial cell adhesion and migration via integrin alpha v beta 3 and induces blood vessel formation in vivo // J Biol Chem. 2002. Vol. 277 (19). P. 17281-17290. 68. Oike Y., Yasunaga K., Suda T. Angiopoietin-related/angiopoietin-like proteins regulate angiogenesis // Int J Hematol. 2004. Vol. 80 (1). P. 21-8. 69. Sukonina V., Lookene A., Olivecrona T., Olivecrona G. Angiopoietin-like protein 4 converts lipoprotein lipase to inactive monomers and modulates lipase activity in adipose tissue // Proc Natl Acad Sci USA. 2006. Vol.103 (46). P. 17450-17455. 70. Kuchtey J., Källberg M.E., Gelatt K.N. et al. Angiopoietin-like 7 secretion is induced by glaucoma stimuli and its concentration is elevated in glaucomatous aqueous humor // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008. Vol. 49 (8). P. 3438-3448. 71. Castany M., Jordi I., Catala J., Gual A., Morales M., Gasull X., Pintor J. Glaucoma patients present increased levels of diadenosine tetraphosphate, Ap(4)A, in the aqueous humour // Exp Eye Res. 2011. Vol. 92 (3). P. 221-226. 72. Bochner B.R., Lee P.C., Wilson S.W., Cutler C.W., Ames B.N. AppppA and related adenylylated nucleotides are synthesized as a consequence of oxidation stress // Cell. 1984. Vol. 37 (1). P. 225-232. 73. Ghaffariyeh A., Honarpisheh N., Heidari M.H. et al. Brain-derived neurotrophic factor as a biomarker in primary open-angle glaucoma // Optom Vis Sci. 2011. Vol. 88 (1). P. 80-85. 74. Duan X., Xue P., Wang N. et al. Proteomic analysis of aqueous humor from patients with primary open angle glaucoma // Mol Vis. 2010. Vol. 16. P. 2839-2846.

137

75. Entwistle J., Hall C.L., Turley E.A. HA receptors: regulators of signaling to the cytoskeleton // J Cell Biochem. 1996. Vol. 61. P. 569-577. 76. Sherman L., Sleeman J., Dall P., Hekele A., Moll J., Ponta H., Herrlich P. The CD44 proteins in embryonic development and in cancer // Curr Top Microbiol Immunol. 1996. Vol. 213 (1). P. 249-269. 77. Kaya G., Rodriguez I., Jorcano J.L., Vassalli P., Stamenkovic I. Selective suppression of CD44 in keratinocytes of mice bearing an antisense CD44 transgene driven by a tissue-specific promoter disrupts hyaluronate metabolism in the skin and impairs keratinocyte proliferation // Genes Dev. 1997. Vol. 11. P. 996-1007. 78. Chaitin M.H., Wortham H.S., Brun-Zinkernagel A.M. Immunocytochemical localization of CD44 in the mouse retina // Exp Eye Res. 1994. Vol. 58. P. 359-365. 79. Nishina S., Hirakata A., Hida T., Sawa H., Azuma N. CD44 expression in the developing human retina // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1997. Vol. 35. P. 92- 96. 80. Knepper P.A., Miller A.M., Choi J., Wertz R.D., Nolan M.J., Goossens W., Whitmer S., Yue B.Y., Ritch R., Liebmann J.M., Allingham R.R., Samples J.R. Hypophosphorylation of aqueous humor sCD44 and primary open-angle glaucoma // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005. Vol. 46. P. 2829-2837. 81. Kuchtey J., Rezaei K.A., Jaru-Ampornpan P., Sternberg P.J., Kuchtey R.W. Multiplex cytokine analysis reveals elevated concentration of interleukin-8 in glaucomatous aqueous humor // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2010. Vol. 51. P. 6441-6447. 82. Sawada H., Fukuchi T., Tanaka T., Abe H. Tumor necrosis factoralpha concentrations in the aqueous humor of patients with glaucoma // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2010. Vol. 51. P. 903-906. 83. Sakanaka M., Wen T.C., Matsuda S. et al. In vivo evidence that erythropoietin protects neurons from ischemic damage // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. Vol. 95 (8). P. 4635-4640.

138

84. Mokbel T.H., Ghanem A.A., Kishk H. et al. Erythropoietin and soluble CD44 levels in patients with primary open-angle glaucoma // Clin Experiment Ophthalmol. 2010. Vol. 38 (6). P. 560-565. 85. Cumurcu T., Bulut Y., Demir H.D., Yenisehirli G. Aqueous humor erythropoietin levels in patients with primary open-angle glaucoma // J Glaucoma. 2007. Vol. 16 (8). P. 645-648. 86. Chai F., Luo R., Li Y. et al. Down-regulation of GRP78 in human glaucomatous trabecular meshwork cells // Mol Vis. 2010. Vol. 16. P. 1122-1131. 87. Nemeth E., Tuttle M.S., Powelson J. et al. Hepcidin regulates cellular iron efflux by binding to ferroportin and inducing its internalization // Science. 2004. Vol. 306 (5704). P. 2090-2093. 88. Gnana-Prakasam J.P., Martin P.M., Mysona B.A. et al. Hepcidin expression in mouse retina and its regulation via lipopolysaccharide/Toll-like receptor-4 pathway independent of Hfe // Biochem J. 2008. Vol. 411 (1). P. 79-88. 89. Sorkhabi R., Ghorbanihaghjo A., Javadzadeh A. et al. Aqueous humor hepcidin prohormone levels in patients with primary open angle glaucoma // Mol Vis. 2010. Vol. 16. P. 1832-1836. 90. Ghanem A.A., Mady S.M., El Awady H.E., Arafa L.F. Homocysteine and hydroxyproline levels in patients with primary open-angle glaucoma // Curr Eye Res. 2012. Vol. 37 (8). P. 712-718. 91. Howell K.G., Vrabel A.M., Chowdhury U.R. et al. Myocilin levels in primary open- angle glaucoma and pseudoexfoliation glaucoma human aqueous humor // J Glaucoma. 2010. Vol. 19 (9). P. 569-575. 92. Moncada S., Palmer R.M., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology // Pharmacol Rev. 1991. Vol. 43 (2). P. 109-142. 93. Ragolia L., Palaia T., Paric E., Maesaka J.K. Prostaglandin D2 synthase inhibits the exaggerated growth phenotype of spontaneously hypertensive rat vascular smooth muscle cells // J Biol Chem. 2003. Vol. 278 (24). P. 22175-22181. 139

94. Aho V.V., Nevalainen T.J., Paavilainen V., Saari K.M. Group II phospholipase A2 content of tears in patients with senile cataract and primary open-angle glaucoma // Eur J Ophthalmol. 2002. Vol. 12 (1). P. 40-43. 95. Rönkkö S., Rekonen P., Kaarniranta K. et al. Phospholipase A2 in chamber angle of normal eyes and patients with primary open angle glaucoma and exfoliation glaucoma // Mol Vis. 2007. Vol. 13. P. 408-417. 96. Tripathi R.C., Kolli S.P., Borisuth N.S., Tripathi B.J. Identification and quantification of transferrin receptors on trabecular cells // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1992. Vol. 33 (12). P. 3449-3454. 97. Monaco H.L., Rizzi M., Coda A. Structure of a complex of two plasma proteins: transthyretin and retinol-binding protein // Science. 1995. Vol. 268 (5213). P. 1039- 1041. 98. Grus F.H., Joachim S.C., Sandmann S. et al. Transthyretin and complex protein pattern in aqueous humor of patients with primary open-angle glaucoma // Mol Vis. 2008. Vol. 14. P. 1437-1445. 99. Бржеский В.В. Изменения роговицы ксеротической природы // Новое в офтальмологии. 2014. № 3. С. 80-87. 100. Pflugfelder S.C. Antiinflammatory therapy for dry eye // Am. J. Ophthalmol. 2004. Vol. 137. P. 337-342. 101. Kijlstra A., Jeurissen S.H., Koning K.M. Lactoferrin levels in normal human tears // Br. J. Ophthalmol. 1983. Vol. 67. P. 199-202. 102. Ермакова Н.А., Рабданова О.Ц. Основные этиологические факторы и патогенетические механизмы развития возрастной макулярной дегенерации // Клиническая офтальмология. 2007. № 8 (3). С. 125-128. 103. Бобкова И.Н., Чеботарева Н.В., Козловская Л.В., Непринцева Н.В. Защитное действие белков теплового шока при заболеваниях почек // Клиническая нефрология. 2011. № 6. С. 59-66.

140

104. Вельков В.В. С-белок – структура, функция, методы определения // Медицинский дайджест. Медэксперт. 2008. № 2. С. 33-36. 105. Anderson D.H., Mullins R.F., Hageman G.S., Johnson L.V. A role for local inflammation in the formation of drusen in the aging eye // Am. J. Ophthalmol. 2002. Vol. 134. P. 411-431. 106. Годзенко А.А. Перспективы лечения увеита при ревматических заболеваниях // Современная ревматология. 2011. Vol. 2. P. 37-42. 107. Аветисов С.Э. Офтальмология. Национальное руководство // М.: Гэотар- Медиа. 2008. С. 482-523. 108. Lightman S., Uveitis: What do we know and how does it help? // Clin. Exp. Ophthalmol. 2001. Vol. 29. P. 48-51. 109. Мошетова Л.К., Аржиматова Г.Ш., Строков И.А., Яровая Г.А. Современная антиоксидантная терапия диабетической ретинопатии // Клиническая офталтмология. 2006. № 7 (1). С. 36-38. 110. Lueder G.T., Silverstein J. Screening for retinopathy in the pediatric patient with type 1 diabetes mellitus // Pediatrics. 2005. Vol. 116. P. 270-273. 111. Воробьева И.В., Меркушенкова Д.А., Эстрин Л.Г. Роль фактора роста эндотелия сосудов в развитии диабетической ретинопатии и диабетического макулярного отека у больных сахарным диабетом второго типа // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2012. № 3. С. 48-55. 112. Соловьева Н.И. Основные металлопротеиназы соединительно-тканного матрикса // Биоорганическая химия. 1994. № 20 (2). С. 143-152. 113. Schlotzer-Schrehardt U., Lommatzsch J., Kuchle M., Konstas A. G., Naumann G. O. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in aqueous humor of patients with pseudoexfoliation syndrome/glaucoma and primary open-angle glaucoma // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2003. Vol. 44. P. 1117-1125. 114. Ruoslahti E. Fibronectin and its receptors // Annu Rev Biochem. 1988. Vol. 57. P. 375-413. 141

115. Schlatzer-Schrehardt U., Darfler S., Naumann G.O.H. Immunohistochemical localization of basement membrane components in pseudoexfoliation material of the lens capsule // Curr. Eye Res. 1992. Vol. 11. P. 343-355. 116. Kim K.S., Lee B.H., Kim I.S. Measurement of fibronectin concentrations in human aqueous humor // Korean J. Ophthalmol. 1992. Vol. 6. P. 1-5. 117. Knepper P.A., Goossens W., Mayanil C.S. CD44H localization in primary open-angle glaucoma // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 1998. Vol. 39. P. 673-680. 118. Tezel G., Hernandez R., Wax M. Immunostaining of heat shock proteins in the retina and optic nerve head of normal and glaucomatous eyes // Arch. Ophthalmol. 2000; Vol. 118. P. 511-518. 119. Park K., Cozier F., Ong O., Caprioli J. Induction of heat shock protein 72 protects retinal ganglion cells in a rat glaucoma model // Аrch. Ophthalmol. 2006. Vol. 137. P. 89-97. 120. Wiechelman K., Braun R., Fitzpatrick J. Investigation of the bicinchoninic acid protein assay: Identification of the groups responsible for color formation // Analytical Biochemistry. 1988. Vol. 175 (1). P. 231–237. 121. Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., Mallia A.K., Gartner F.H., Provenzano M.D., Fujimoto E.K., Goeke N.M., Olson B.J., Klenk D.C. Measurement of protein using bicinchoninic acid // Anal Biochem. 1985 Vol. 150 (1). P. 76–85. 122. Neuhauser N., Nagaraj N., McHardy P., Zanivan S., Scheltema R., Cox J., Mann M. High performance computational analysis of large-scale proteome data sets to assess incremental contribution to coverage of the human genome // J Proteome Res. 2013. Vol. 12 (6). P. 2858–2868. 123. Cox J., Neuhauser N., Michalski A., Scheltema R.A., Olsen J.V., Mann M. Andromeda: a peptide search engine integrated into the MaxQuant environment // J Proteome Res. 2011. Vol. 10 (4). P. 1794–1805.

142

124. Rivals I., Personnaz L., Taing L., Potier M.C. Enrichment or depletion of a GO category within a class of genes: which test? // Bioinformatics. 2007. Vol. 23 (4). P. 401–7. 125. Benjamini Y., Hochberg Y. Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing // Journal of the Royal Statistical Society, Series B. 1995. Vol. 57 (1). P. 11. 126. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685. 127. Naryzhny S.N. Blue Dry Western: simple, economic, informative, and fast way of immunodetection // Anal. Biochem. 2009. Vol. 392 (1). P. 90-5. 128. Harlow E., Lane D. Using Antibodies: A Laboratory Manual // New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988. 129. Blake J.A., Dolan M., Drabkin H., Hill D.P. et al. Gene ontology annotations and resources // Nucleic Acids Res. 2013. Vol. 41. P. 530-535. 130. Sharma K.K., Santhoshkumar P. Lens aging: effects of crystallins // Biochim. Biophys. Acta. 2009. Vol. 1790 (10). P. 1095–1108. 131. Rao G., Santhoshkumar P., Sharma K.K. Anti-chaperone betaA3/A1(102-117) peptide interacting sites in human alphaB-crystallin // Mol. Vis. 2008. Vol. 14. P. 666–674. 132. Bouck N. PEDF: anti-angiogenic guardian of ocular function // Trends Mol. Med. 2002. Vol. 8. P. 330–334. 133. Schittek B., Hipfel R., Sauer B., Bauer J. et al. Dermcidin: a novel human antibiotic peptide secreted by sweat glands // Nat. Immunol. 2001. Vol. 2. P. 1133– 1137. 134. Urade Y., Hayaishi O. Prostaglandin D synthase: structure and function // Vitam. Horm. 2000. Vol. 58. P. 89-120.

143

135. Bantscheff M., Schirle M., Sweetman G., Rick J., Kuster B. Quantitative mass spectrometry in proteomics: a critical review // Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2007. Vol. 389 (4). P. 1017-1031. 136. Talmud P.J., Humphries S.E. Apolipoprotein C-III gene variation and dyslipidaemia // Curr. Opin. Lipidol. 1997. Vol. 8 (3). Р. 154-158. 137. Kaushansky K., Lichtman M., Beutler E., Kipps T., Prchal J., Seligsohn U. Williams Hematology // McGraw-Hill. 2010. Edition 8. P. 1833-1834, 2040-2041. 138. Boffa M.B., Reid T.S., Joo E., Nesheim M.E., Koschinsky M.L. Characterization of the gene encoding human TAFI (thrombin-activable fibrinolysis inhibitor; plasma procarboxypeptidase B) // Biochemistry. 1999. Vol. 38 (20). P. 6547–6558. 139. Retief E., Parker M.I., Retief A.E. Regional chromosome mapping of human collagen genes alpha 2(I) and alpha 1(I) (COLIA2 and COLIA1) // Hum Genet. 1985. Vol. 69 (4). P. 304–308. 140. Hata R., Kurata S., Shinkai H. Existence of malfunctioning pro alpha2(I) collagen genes in a patient with a pro alpha 2(I)-chain-defective variant of Ehlers- Danlos syndrome // Eur J Biochem. 1988. Vol. 174 (2). P. 231-237. 141. Brewton R.G., Wood B.M., Ren Z.X., Gong Y., Tiller G.E., Warman M.L., Lee B., Horton W.A., Olsen B.R., Baker J.R. et al. Molecular cloning of the alpha 3 chain of human type IX collagen: linkage of the gene COL9A3 to chromosome 20q13.3 // Genomics. 1996. Vol. 30 (2). P. 329–336. 142. Wu J.J., Woods P.E., Eyre D.R. Identification of cross-linking sites in bovine cartilage type IX collagen reveals an antiparallel type II-type IX molecular relationship and type IX to type IX bonding // J Biol Chem. 1992. Vol. 267 (32). P. 23007-23014. 143. Sörman A., Zhang L., Ding Z., Heyman B. How antibodies use complement to regulate antibody responses // Mol Immunol. 2014. Vol. 61 (2). P. 79-88.

144

144. Mayilyan K.R. Complement genetics, deficiencies, and disease associations // Protein Cell. 2012. Vol. 3 (7). P. 487-496. 145. Северин Е.С. Биохимия: учебник для вузов // Гэотар-Медиа. 2003. Стр. 712-715. 146. Bach L.A. Insulin-Like Growth Factor Binding Proteins // Pediatr Endocrinol. 2015. Vol. 13 (2). P. 521-30. 147. Gullu G., Karabulut S., Akkiprik M. Functional roles and clinical values of insulin-like growth factor-binding protein-5 in different types of cancers // Chinese journal of cancer. 2012. Vol. 31. P. 266-280. 148. Baxter R.C. IGF binding proteins in cancer: mechanistic and clinical insights // Nature reviews Cancer. 2014. Vol. 14. P. 329–341. 149. Akkiprik M., Feng Y., Wang H., Chen K., Hu L., Sahin A., Krishnamurthy S., Ozer A., Hao X., Zhang W. Multifunctional roles of insulin-like growth factor binding protein 5 in breast cancer // Breast cancer research: BCR. 2008. Vol. 10. P. 212. 150. Janosi J.B., Ramsland P.A., Mott M.R., Firth S.M., Baxter R.C., Delhanty P.J. The acid-labile subunit of the serum insulin-like growth factor-binding protein complexes. Structural determination by molecular modeling and electron microscopy // J Biol Chem. 1999. Vol. 274. P. 23328-23332. 151. Ferri G.L., Noli B., Brancia C., D'Amato F., Cocco C. VGF: an inducible gene product, precursor of a diverse array of neuro-endocrine peptides and tissue-specific disease biomarkers // Journal of chemical neuroanatomy. Vol. 42. P. 249-261. 152. Busse S., Steiner J., Micheel J., Dobrowolny H., Mawrin C., Krause T.J., Adamaszek M., Bogerts B., Bommhardt U., Hartig R., Busse M. Age-related increase of VGF-expression in T lymphocytes // Aging (Albany NY). 2014. Vol. 6 (6). P. 440- 453. 153. Ekizoglu S., Ulutin T., Guliyev J., Buyru N. PRR4: A novel downregulated gene in laryngeal cancer // Oncol Lett. 2018. Vol. 15 (4). P. 4669-4675. 145

154. Aluru S.V., Agarwal S., Srinivasan B., Iyer G.K., Rajappa S.M., Tatu U., Padmanabhan P., Subramanian N., Narayanasamy A. Lacrimal proline rich 4 (LPRR4) protein in the tear fluid is a potential biomarker of dry eye syndrome // PLoS One. 2012. Vol. 7 (12). P. 51979. 155. Sage H., Johnson C., Bornstein P. Characterization of a novel serum albumin- binding glycoprotein secreted by endothelial cells in culture. // J. Biol. Chem. 1984. Vol. 259 (6). P. 3993–4007. 156. Kupprion C., Motamed K., Sage E.H. SPARC (BM-40, osteonectin) inhibits the mitogenic effect of vascular endothelial growth factor on microvascular endothelial cells // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273 (45). P. 29635–29640. 157. Funk S.E., Sage E.H. The Ca2(+)-binding glycoprotein SPARC modulates cell cycle progression in bovine aortic endothelial cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1991. Vol. 88 (7). P. 2648-2652. 158. Chowdhury U.R., Madden B.J., Charlesworth M.C., Fautsch M.P. Proteome analysis of human aqueous humor // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2010. Vol. 51. P. 4921–4931. 159. Bennett K.L., Funk M., Tschernutter M., Breitwieser F.P. et al. Proteomic analysis of human cataract aqueous humour: comparison of one-dimensional gel LCMS with two-dimensional LCMS of unlabelled and iTRAQR-labelled specimens // J. Proteomics. 2011. Vol. 74. P. 151–166. 160. Murthy K.R., Rajagopalan P., Pinto S.M., Advani J. et al. Proteomics of human aqueous humor // OMICS. 2015. Vol. 19. P. 283–293. 161. Ji Y., Rong X., Ye H., Zhang K., Lu Y. Proteomic analysis of aqueous humor proteins associated with cataract development // Clin. Biochem. 2015. Vol. 48. P. 1304–1309. 162. Horwitz J. Alpha-crystallin // Exp. Eye Res. 2003. Vol. 76. P. 145–153. 163. Yi J., Yun J., Li Z.K., Xu C.T., Pan B.R. Epidemiology and molecular genetics of congenital cataracts // Int. J. Ophthalmol. 2011. Vol. 4. P. 422-432. 146

164. Bhatia S., Knoch B., Wong J., Kim W.S. et al. Selective reduction ofhydroperoxyeicosatetraenoic acids to their hydroxy derivatives by apolipoprotein D: implications for lipid antioxidant activity and Alzheimer’s disease // Biochem. J. 2012. Vol. 442. P. 713–721. 165. Oakley A.J., Bhatia S., Ecroyd H., Garner B. Molecular dynamics analysis of apolipoprotein-D - lipid hydroperoxide interactions: mechanism for selective oxidation of Met-93 // PLoS One. 2012. Vol. 7 (3). P. 34057. 166. De Magalhaes J.P., Curado J., Church G.M. Meta-analysis of age-related gene expression profiles identifies common signatures of aging // Bioinformatics. 2009. Vol. 25. P. 875–881. 167. Loerch P.M., Lu T., Dakin K.A., Vann J.M. et al. Evolution of the aging brain transcriptome and synaptic regulation // PLoS One. 2008. Vol. 3. P. 3329. 168. Zenkel M., Poschl E., von der Mark K., Hofmann-Rummelt C. et al. Differential gene expression in pseudoexfoliation syndrome. Invest. Ophthalmol // Vis. Sci. 2005. Vol. 46. P. 3742–3752. 169. Najyb O., Brissette L., Rassart E. Apolipoprotein D internalization is a basigindependent mechanism // J. Biol. Chem. 2015. Vol. 290. P. 16077–16087. 170. Ganfornina M.D., Do Carmo S., Lora J.M., Torres-Schumann S. et al. Apolipoprotein D is involved in the mechanisms regulating protection from oxidative stress // Aging Cell. 2008. Vol. 7. P. 506–515. 171. Do Carmo S., Jacomy H., Talbot P.J., Rassart E. Neuroprotective effect of apolipoprotein D against human coronavirus OC43-induced encephalitis in mice // J. Neurosci. 2008. Vol. 28. P. 10330–10338. 172. Thomas E.A., Copolov D.L., Sutcliffe J.G. From pharmacotherapy to pathophysiology: emerging mechanisms of apolipoprotein D in psychiatric disorders // Curr. Mol. Med. 2003. Vol. 3. P. 408–418.

147

173. Thomas E.A., George R.C., Sutcliffe J.G. Apolipoprotein D modulates arachidonic acid signaling in cultured cells: Implications for psychiatric disorders // Prostaglandins Leukot. Essent. Fat. Acids. 2003. Vol. 69. P. 421–427. 174. Kim T.W., Kang J.W., Ahn J., Lee E.K. et al. Proteomic analysis of the aqueous humor in age-related macular degeneration (AMD) Patients // J. Proteome Res. 2012. Vol. 11. P. 4034–4043. 175. Mallick P., Kuster B., Proteomics: a pragmatic perspective // Nat. Biotechnol. 2010. Vol. 28. P. 695–709. 176. Mandal N., Heegaard S., Prause J.U., Honore B., Vorum H. Ocular proteomics with emphasis on two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry // Biol. Proced. Online. 2009. Vol. 12. P. 56–88. 177. Richardson M.R., Price M.O., Price F.W., Pardo J.C. et al. Proteomic analysis of human aqueous humor using multidimensional protein identification technology // Mol. Vis. 2009. Vol. 15. P. 2740–2750.

148