SPINK1和Vimentin在非小细胞肺癌中的表达及意义 郭晓峰, 李保军, 谢家声, 杨鲲鹏, 余鹏飞, 周笠, 胡长虹, 李丹丹, 孟东亮

引用本文: 郭晓峰, 李保军, 谢家声, 等. SPINK1和Vimentin在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(2): 211-214.

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[文章编号] ·临床医学· 1000鄄2200(2020)02鄄0211鄄04 和 在非小细胞肺癌中的表达及意义 SPINK1 郭晓峰1 ,李保军1 ,谢家声1 ,杨鲲鹏2 ,余鹏飞1 ,周 笠1 ,胡长虹1 ,李丹丹1 ,孟东亮1 摇 [摘要]目的:探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂 型 和 在非小细胞肺癌 Kazal 1 (serine protease inhibitor Kazal 1,SPINK1) Vimentin (non鄄 组织中的表达及其意义 方法:免疫组织化学 法检测 例 和 例正常肺组织中 small cell lung cancer,NSCLC) 。 SP 136 NSCLC 62 和 表达 进行单因素 生 存 分 析 和 多 因 素 回 归 分 析 结 果: 在 例 SPINK1 Vimentin , Kaplan鄄Meier Cox 。 SPINK1、Vimentin 136 组织中的阳性率分别为 在正常肺组织中的阳性表达率分别为 NSCLC 65. 4% (89 / 136)、52. 9% (72 / 136), 4. 8% (3 / 62)、3. 2% 差异均有统计学意义 P 不同 分期 是否淋巴结转移病人的 和 表达阳性率差异均有 (2 / 62), ( < 0. 01)。 TNM 、 SPINK1 Vimentin 统计学意义 P P 不同分化程度病人 表达阳性率差异有统计学意义 P 组织中 ( < 0. 05 ~ < 0. 01), SPINK1 ( < 0. 05)。 NSCLC 与 表达呈正相关关系 r P 多因素 回归分析显示 分期 淋巴结转移 及 SPINK1 Vimentin ( s = 0. 368, < 0. 01)。 Cox ,TNM 、 、SPINK1 表达水平均为 预后的独立影响因素 P P 结论: 和 可能在 的进展 Vimentin NSCLC ( < 0. 05 ~ < 0. 01)。 SPINK1 Vimentin NSCLC 、 转移中扮演重要的角色 同时 可能作为预测 预后的新的标记物 , SPINK1 NSCLC 。 [关键词] 非小细胞肺癌 丝氨酸蛋白酶抑制剂 型 波形蛋白 预后 ; Kazal 1 ; ; [中图法分类号] [文献标志码] DOI R 734. 2摇 摇 摇 A摇 摇 摇 :10. 13898 / j. cnki. issn. 1000鄄2200. 2020. 02. 020 Expression levels of SPINK1 and Vimentin in non鄄small cell lung cancer and its clinical significance

1 1 1 2 1 1 1 GUO Xiao鄄feng ,LI Bao鄄jun ,XIE Jia鄄sheng ,YANG Kun鄄peng ,YU Peng鄄fei ,ZHOU Li ,HU Chang鄄hong , 1 1 LI Dan鄄dan ,MENG Dong鄄liang 1. Department of Thoracic Surgery No. 988 Hospital of the Joint Logistic Support Force of the Chinese People忆s Liberation Army Zhengzhou ( , , Henan 450000 2. Department of Thoracic Surgery The Second Affiliated Hospital Zhengzhou University Zhengzhou Henan 450004 China ; , , , , ) Abstract Objective [ ] :To explore the expression levels of serine protease inhibitor Kazal 1(SPINK1) and Vimentin in non鄄small cell Methods lung cancer(NSCLC) and its clinical significance. :The expression levels of SPINK1 and Vimentin in 136 cases of NSCLC tissue and 62 cases of normal lung tissue were detected using the immunohistochemical SP method,and the data was analyzed using Results univariate Kaplan鄄Meier survival analysis and multivariate Cox regression analysis. :The positive rates of SPINK1 and Vimentin expression in 136 cases of NSCLC tissue and 62 cases of normal tissues were [65. 4% (89 / 136) and 52. 9% (72 / 136)] and [4. 8% P (3 / 62) and 3. 2% (2 / 62)],respectively,and the differences of which were statistically significant( < 0. 01). The differences of the expression levels of SPINK1 and Vimentin in NSCLC tissues with different TNM stages and lymph node metastasis were significantly P P significant( < 0. 05 to < 0. 01),and the difference of the expression level of SPINK1 in NSCLC tissues with different differentiation P degrees was significantly significant( < 0. 05). The expression level of SPINK1 was positively correlated with Vimentin in NSCLC r P tissue( s = 0. 368, < 0. 01). The results of multivariate Cox regression analysis showed that the TNM stage,lymph node metastasis, P P and expression levels of SPINK1 and Vimentin were the independent influencing factors of NSCLC prognosis( < 0. 05 to < 0. 01). Conclusions :SPINK1 and Vimentin possibly play a role in the development,invasion and metastasis of NSCLC,and SPINK1 may act as a new indicator in predicting the prognosis of NSCLC. Key words [ ] non鄄small cell lung cancer;serine protease inhibitor Kazal 1;Vimentin;prognosis

非 小 细 胞 肺 癌 皮– 间 质 转 化 摇 摇 ( non鄄small cell lung cancer, ( epithelial mesenchymal transition, 是我国最常见的恶性肿瘤之一 病 在该过程中起着重要的作用[1] 在 过 NSCLC) ,NSCLC EMT) 。 EMT 人死亡的主要原因是恶性肿瘤细胞侵袭 转移 而上 程中 扮演重要角色 其作用为增强恶性肿 、 , ,Vimentin , 瘤细胞的运动能力 促进细胞浸润和转移[2] 研 , 。 收稿日期 修回日期 究[3 - 4] 报 道 丝 氨 酸 蛋 白 酶 抑 制 剂 型 [ ] 2017 - 11 - 11摇 [ ] 2018 - 08 - 09 作者单位 中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院 心胸外 , Kazal 1 [ ] 1. 与表皮生 科 河南 郑州 郑州大学第二附属医院 胸外科 河南 , ;2. , (serine protease inhibitor Kazal 1,SPINK1) 郑州 长因子 结构相似 通 450000 ( epidermal growth factor,EGF) , 作者简介 郭晓峰 男 硕士 [ ] (1986 - ), , . 过 通路参与 的发生 促进恶 通信作者 孟东亮 副主任医师 EGFR / PI3K / Akt EMT , [ ] , ,E鄄mail:1023209227@ qq. com 性肿瘤的进展 关于 和 在 。 SPINK1 Vimentin NSCLC , , , 212 J Bengbu Med Coll February 2020 Vol. 45 No. 2 组织中的表达情况国内外文献尚未见报道 本研究 , 结果 采用 免 疫 组 织 化 学 法 检 测 组 织 中 2摇 SP NSCLC 的表达 并探讨其表达与临床病理 和 在正常肺组织和 SPINK1、Vimentin , 2. 1 摇 SPINK1 Vimentin NSCLC 特征的关系及其对预后的预测意义 现作报道 组织中的表达 主要表达于细胞胞质 呈淡 。 。 摇 SPINK1 , 黄色至棕褐色颗粒 主要定位于细胞质 呈 材料与方法 ;Vimentin , 1摇 棕褐色颗粒 见图 在 和正常肺 ( 1)。 SPINK1 NSCLC 材料 选取 年 月至 年 月中国 组织中阳性表达率分别为 和 1. 1摇 摇 2010 6 2011 9 65. 4% 4. 8% ,Vimentin 人民解放军第一五三中心医院病理科存档石蜡包埋 的阳 性 表 达 率 分 别 为 和 二 者 在 52. 9% 3. 2% , 组织标本 例和正常肺组织标本 例 和正常肺组织中阳性表达率差异均有统计 NSCLC 136 62 。 NSCLC 例 病人中男 例 女 例 年龄 学意义 P 见表 136 NSCLC 85 , 51 ; 42 ~ ( < 0. 01)( 1)。 岁 中位年龄 岁 经病理学诊断 鳞状细胞癌 74 , 56 ; : 例 腺癌 例 腺鳞癌 例 大细胞癌 例 肉瘤 53 , 77 , 3 , 1 , 样癌 例 高分化 例 中分化 例 低分化 2 ; 27 , 68 , 41 例 有淋巴结转移者 例 无淋巴结转移者 例 ; 89 , 47 ; 根据 版 病理分期标准进行分期 UICC 2017 TNM :玉 期 例 期 例 期 例 对照组 例均经 67 ,域 40 ,芋 29 。 62 病理 染色证实为正常肺组织 所有病人均未经 HE 。 放射治疗 化学治疗及生物治疗 随访截止日期为 、 。 年 月 生存期为从手术日期到随访截止日 2016 9 , 期 或因复发转移 其他疾病而死亡的日期为止 截 , 、 , 尾值指定为 0。 主要试剂 鼠抗人 抗体购于上海研 1. 2摇 摇 SPINK1 晶生物科技有限公司 鼠抗人 抗体购于上 ; Vimentin 海博研生物技术有限公司 试剂盒及 显色 ;SP DAB 试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司 。 方法 将石蜡包埋组织标本在切片机上制成 1. 3摇 摇 厚切片 按免疫组织化学 法具体步骤 烤 4 滋m , SP : 片 二甲苯脱蜡 梯度乙醇逐级水化 热修复抗原 消 , , ; ; 除内源性过氧化物酶活性 封闭 孵一抗 孵二抗 加 ; ; ; ; 入辣根过氧化物酶 显色 复染 脱水 透明 封 ;DAB ; , , , 表 、 蛋白在 和正常肺组织中的 片 一抗均按 倍稀释 用已知阳性片作对 摇 1摇 SPINK1 Vimentin NSCLC 。 1 颐 100 。 表达[n;百分率( )] 照 以 液代替一抗作空白对照 % , PBS 。 结果判定 结果判定采用双盲法 同时由 位 分组 n 1. 4摇 摇 , 2 SPINK1 Vimentin 资深病理科医师独立观察每张切片后做出判定 阳 组织 。 NSCLC 136 89(65. 4) 72(52. 9) 性细胞百分比计分 阴性为 分 为 分 正常肺组织 : 0 ,1% ~ 10% 1 , 62 3(4. 8) 2(3. 2) 为 分 为 分 为 字2 11% ~ 50% 2 ,51% ~ 75% 3 , > 75% — 62. 88 44. 97 分 染色强度计分 无色为 分 淡黄色为 分 P 4 。 : 0 , 1 , — < 0. 01 < 0. 01 棕黄色为 分 棕褐色为 分 以染色强度得分和 2 , 3 。 细胞数得分的乘积为判断标准 若积分 分为 不 同 临 床 特 征 病 人 的 、 , 逸4 2. 2 摇 NSCLC SPINK1 阳性 表 达 比 较 不 同 性 别 年 龄 病 理 类 型 。 Vimentin 摇 、 、 统 计 学 方 法 采 用 字2 检 验 秩 和 检 验 病人的 和 表达阳性率差异 1. 5 摇 摇 、 、 NSCLC SPINK1 Vimentin 等 级 相 关 分 析 生 存 分 析 均无统计学意义 P 不同分化程度病人的 Spearman 、 Kaplan鄄Meier 、 ( > 0. 05), 检验和多因素 风险比例回归分析 表 达 阳 性 率 差 异 无 统 计 学 意 义 P Log鄄rank Cox 。 Vimentin ( > 蚌埠医学院学报 年 月第 卷第 期 2020 2 45 2 213 不 同 分 期 是 否 淋 巴 结 转 移 病 人 的 中位生存时间为 个月 高于阳性表达组的 个 0. 05), TNM 、 35 , 21 和 表达阳性率及不同分化程度病 月 字2 P 见图 阴性表 SPINK1 Vimentin ( = 21. 00, < 0. 01)( 2);Vimentin 人 表达阳性率差异均有统计学意义 P 达组病人的中位生存时间为 个月 高于阳性表达 SPINK1 ( < 31 , P 见表 组的 个月 字2 P 见图 0. 05 ~ < 0. 01)( 2)。 17 ( = 11. 10, < 0. 01) ( 3)。 表 不同临床特征 病人的 、 表 表 组织中 和 的表达的相关性 摇 2摇 NSCLC SPINK1 Vimentin 摇 3摇 NSCLC Vimentin SPINK1 达比较[n;百分率( )] 分析 % 临床特征 n 表达 表达 表达 SPINK1 Vimentin 表达 SPINK1 合计 Vimentin 阳性 阴性 性别 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 男 阳性 摇 85 57(67. 1) 44(51. 8) 59 13 72 女 阴性 摇 51 32(62. 7) 28(54. 9) 30 34 64 字2 合计 摇 — 0. 26 0. 13 89 47 136摇 P 摇 — > 0. 05 > 0. 05 年龄 岁 / 模型分析 病人预后的影响因素 2. 5摇 Cox NSCLC 摇 摇 < 60 82 55(67. 1) 47(57. 3) 多因素 风险比例模型分析结果显示 分 Cox ,TNM 摇 逸60 54 34(63. 0) 25(46. 3) 期 淋巴结转移 及 表达水平均为 字2 摇 — 0. 24 1. 59 、 、SPINK1 Vimentin P 病人预后的独立影响因素 P P 摇 — > 0. 05 > 0. 05 NSCLC ( < 0. 05 ~ < 病理类型 见表 0. 01)( 4)。 腺癌 摇 77 53(68. 8) 43(55. 8) 鳞癌 讨论 摇 53 34(64. 2) 28(52. 8) 3摇 其他 摇 6 2(33. 3) 1(16. 7) 位于染色体 上 编码 个氨基酸 字2 摇 摇 SPINK1 5q32 , 56 摇 — 3. 00 3. 66 的肽 其 启 动 子 共 有 序 列 为 研 P 摇 — > 0. 05 > 0. 05 , TTGNNGNAATG。 分期 究[5] 报道 与 结构相似 与 受体结 TNM ,SPINK1 EGF , EGF 合并激活信号转导通路 促进恶性肿瘤细胞的侵袭 摇 玉 67 36(53. 7) 28(41. 8) , 及转移 另有实验[4] 表明 敲除 蛋白的表 摇 域 40 31(77. 5) 25(62. 5) 。 , SPINK1 摇 芋 29 22(75. 9) 19(65. 5) 达 能够降低恶性肿瘤的浸润及转移 实验[6] 表 u , 。 摇 c — 2. 61 2. 49 明 在恶性肿瘤中异常表达 并可作为预后 P ,SPINK1 , 摇 — < 0. 01 < 0. 05 的独立因子 如卵巢癌 前列腺癌 肝细胞癌等 本 分化程度 , 、 、 。 高 研究结果显示 在 组织中高表达 与 摇 27 12(44. 4) 8(29. 6) ,SPINK1 NSCLC , 中 正常肺组织表达有显著差异 这与 等[7] 对 摇 68 47(69. 1) 43(63. 2) , CHANG 低 胰腺癌的研究观点相同 本研究结果亦显示 在 摇 41 30(73. 2) 21(51. 2) 。 , u 摇 c — 2. 21 1. 24 组织中 随着 分期越晚及分化程度越 P NSCLC , TNM 摇 — < 0. 05 > 0. 05 低 表达率越高 这与 等[8] 对卵 淋巴结转移 ,SPINK1 , CHRISTIN 巢癌中 的研究观点相似 另外 有淋巴结转 是 SPINK1 ; , 摇 89 67(75. 3) 54(60. 7) 移 组织中 表达较无淋巴结转移组织 否 NSCLC SPINK1 摇 47 22(46. 8) 18(38. 3) 中高 生存分析及多因素 结果示 低表 字2 摇 — 11. 02 6. 18 。 Cox ,SPINK1 P 达组的病人生存时间优于 高表达组病人 摇 — < 0. 01 < 0. 05 SPINK1 , 组织中 与 表达的相 并且 可作为 预后的独立危险因素 2. 3摇 NSCLC SPINK1 Vimentin SPINK1 NSCLC , 关性分析 组织中 与 表 这与 在前列腺癌[9] 结肠癌[4] 卵巢癌[8] 等 摇 NSCLC ,SPINK1 Vimentin SPINK1 、 、 达呈正相关关系 r P 见表 肿瘤组织中的多因素 分析结果一致 ( s = 0. 368, < 0. 01)( 3)。 Cox 。 组织中 和 表达水平 在 过程中起关键作用 能够增强 2. 4摇 NSCLC SPINK1 Vimentin Vimentin EMT , 与病人术后生存期的关系 对 例 病人 恶性 肿 瘤 细 胞 的 运 动 能 力 促 进 细 胞 浸 润 和 转 摇 136 NSCLC , 进行随访 失访率 生存曲线和 移[2] 本研究结果显示 的表达与 , 6. 4% 。 Kaplan鄄Meier 。 ,Vimentin NSCLC 检验分析显示 阴性表达组病人的 组织的 淋 巴 结 转 移 及 分 期 因 素 有 关 提 示 Log鄄rank ,SPINK1 TNM , , , , 214 J Bengbu Med Coll February 2020 Vol. 45 No. 2 可能促进恶性肿瘤细胞浸润 另外多因素 信号转导通路参与 的发生 Vimentin 。 EGFR / PI3K / Akt EMT , 分析示 可作为 预后的独立影 而在 过程中 表达上调并扮演重要角 Cox ,Vimentin NSCLC EMT ,Vimentin 响因素 这与其在口腔癌[10] 宫颈癌[11] 直肠癌[12] 色 我们可推知 通过信号转导通路 促进 , 、 、 , SPINK1 , 等肿瘤组织中的多因素 分析结果相似 本研究 的表达 这或许可以解释我们研究的结果 Cox 。 Vimentin , , 结果亦显示 与 表达呈正相关关 又或有其他机制来解释 和 之间关 ,SPINK1 Vimentin Vimentin SPINK1 系 研究[3 - 4] 发现 与 密切相关 系 尚有待进一步研究 。 SPINK1 Vimentin , , 。 与 结构相似 可与 受体结合 激活 SPINK1 EGF , EGF ,

表 病人预后的多因素 比例风险模型分析 4摇 NSCLC cox [J]. Front Physiol,2012,3(4):126. 临床病理参数 茁 SE Wald P RR CI [6]摇 STENMAN UH. Role of the tumor鄄associated inhibitor 95% SPINK1 in cancer development [ J]. Asian J Androl,2011,13 分期 TNM 0. 425 0. 193 4. 852 < 0. 05 1. 529 1. 048 ~ 2. 232 (4):628. 淋巴结转移 et al 0. 505 0. 205 6. 083 < 0. 05 1. 657 1. 109 ~ 2. 475 [7]摇 CHANG MC, WU CH, YANG SH, . 表达 Vimentin 0. 578 0. 187 9. 556 < 0. 01 1. 783 1. 236 ~ 2. 573 screening in different risk individuals with family history of 表达 SPINK1 0. 815 0. 204 15. 914 < 0. 01 2. 260 1. 514 ~ 3. 373 pancreatic cancer—a prospective cohort study in Taiwan[J]. Am 综上 在 的浸润及转移中扮演 J Cancer Res,2017,7(2):357. 摇 摇 ,SPINK1 NSCLC et al 重要角色 可能成为预测 病人预后的新的标 [8]摇 MEHNER C,OBERG AL,KIMBERLY R, . Serine protease , NSCLC 记物 inhibitor Kazal type 1 (SPINK1) drives proliferation and anoikis 。 resistance in a subset of ovarian cancers[ J]. Oncotarget,2015,6 [ 参 考 文 献 ] (34):35737. et al et al [1]摇 SANTAMARIA PG,MORENO鄄BUENO G,PORTILLO F, . [9]摇 ZHANG XM,YIN XX,SHEN PF, . The association between EMT:Present and future in clinical oncology [ J]. Mol Oncol, SPINK1and clinical outcomes in patients with ;a 2017,11(7):718. systematic review and meta鄄analysis [ J ]. Onco Targets Ther, et al [2]摇 P魪REZ鄄SALA D, OESTE CL, MART魱NEZ AE, . Vimentin 2017,10(7):3123. filament organization and stress sensing depend on its single et al [10]摇 DMELLO C, SAWANT S, ALAM H, . Vimentin regulates cysteine residue and zinc binding [ J]. Nat Commun,2015,6: differentiation switch via modulation of keratin 14 levels and their 7287. et al expression together correlates with poor prognosis in oral cancer [3]摇 LIU XL,ZHANG XT,MENG J, . ING5 knockdown enhances patients[J]. PLoS One,2017,12(2):e0172559. migration and invasion of lung cancer cells by inducing EMT via et al [11]摇 LIN JY, LU JQ, WANG C, . The prognostic values of the EGFR / PI3K / Akt and IL鄄6 / STAT3 signaling pathways [ J ]. expression of Vimentin, TP53, and Podoplanin in patients with Oncotarget,2017,8(33):54265. et al cervical cancer[J]. Cancer Cell Int,2017,17(9):80. [4]摇 TIWARI R, PANDEY SK, GOEL S, . SPINK1 promotes et al [12]摇 LIU LG,YAN XB,XIE RT, . Stromal expression of Vimentin progression by downregulating Metallothioneins predicts the clinical outcome of stage 域 colorectal cancer for expression[J]. Oncogenesis,2015,4(8):e162. et al [5]摇 OHMURAYA M, SUGANO A, HIROTA M, . Role of high鄄risk patients[J]. Med Sci Monit,2017,23(7):2897. (本文编辑 卢玉清) intrapancreatic SPINK1 / Spink3 expression in the development of 摇