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POTENCIAL DOS FRUTOS DE Xylopia Aromatica (Lam.) Mart

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POTENCIAL DOS FRUTOS DE Xylopia Aromatica (Lam.) Mart VERENA BARTKOWIAK DE OLIVEIRA POTENCIAL DOS FRUTOS DE Xylopia aromatica (Lam.) Mart. (ANNONACEAE) NO TRATAMENTO DE ALTERAÇÕES METABÓLICAS, INDUZIDAS POR DIETA EM CAMUNDONGOS BALB/c Faculdade de Farmácia da UFMG Belo Horizonte, MG 2012 VERENA BARTKOWIAK DE OLIVEIRA POTENCIAL DOS FRUTOS DE Xylopia aromatica (Lam.) Mart. (ANNONACEAE) NO TRATAMENTO DE ALTERAÇÕES METABÓLICAS, INDUZIDAS POR DIETA EM CAMUNDONGOS BALB/c Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentos da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal de Minas Gerais, como requisito parcial à obtenção do grau de Mestre em Ciência de Alimentos Orientadora: Maria das Graças Lins Brandão Co-orietadora: Adaliene Versiani Matos Ferreira Faculdade de Farmácia da UFMG Belo Horizonte, MG 2012 2 3 Nome da Mestranda: Verena Bartkowiak de Oliveira Nome da Orientadora: Maria das Graças Lins Brandão Nome da Co-orientadora: Adaliene Versiani Matos Ferreira Linha de Pesquisa do PPGCA Nutrição, Alimentação e Saúde Áreas de conhecimento (CNPq/CAPES) 5.07.01.00-2 – Ciências de Alimentos Instituições participantes: Laboratório de Farmacognosia, Depto. Produtos Farmacêuticos. Faculdade de Farmácia – UFMG. Laboratório de Imunologia e Bioquímica, Depto. Bioquímica, ICB – UFMG. Banco de Dados e Amostras de Plantas Aromáticas, Medicinais e Tóxicas (DATAPLAMT), Museu de História Natural e Jardim Botânico (MHNJB) - UFMG Apoio financeiro: CNPQ, FAPEMIG e CAPES 4 “No final, conservamos somente o que amamos, amaremos somente o que compreendemos, Compreendemos somente o que nos é ensinado.” (Bada Dioum) 5 AGRADECIMENTOS INSTITUCIONAIS Ao Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentos (PPGCA) da Faculdade de Farmácia da UFMG (FAFAR – UFMG), na pessoa do Coordenador Professor Dr. Roberto Gonçalves Junqueira. Ao Laboratório de Imunologia e Bioquímica (ICB – UFMG), por disponibilizar sua infraestrutura para realização dos ensaios biológicos. Ao CNPq, FAPEMIG e a CAPES, pelo apoio financeiro fornecido para a elaboração e concretização deste trabalho. 6 AGRADECIMENTOS PESSOAIS Aos meus pais, Felicita e Carlos, pelo apoio e pelo incentivo na busca de crescimento pessoal e científico. À minha irmã, pelo incentivo, companheirismo e por todos os momentos de convívio e descontração. À minha orientadora, Professora Maria das Graças Lins Brandão, pelo privilégio de sua orientação, incentivo nos estudos e exemplo de determinação e perseverança para alcançar objetivos na vida. À minha co-orientadora, Professora Adaliene Versiani Matos Ferreira, pelo voto de confiança me integrando ao seu grupo de pesquisa e pelos conhecimentos compartilhados. Às Julianas (Almeida e Quadros), Letícia, Daniela, Fernanda, Flávia, Ana Flávia, Darly, Núbia, Luciana, Gustavo e William pelo convívio alegre no laboratório de Farmacognosia, pelo companheirismo e auxílio durante a execução deste trabalho. À Renata, Milene, Zélia e Marina pelos momentos compartilhados no Laboratório de Imunologia e Bioquímica, pelos ensinamentos e ajuda na execução de ensaios. E a todos cujos nomes não foram citados, mas que contribuíram para que este trabalho fosse realizado. 7 SUMÁRIO LISTA DE TABELAS ........................................................................................ 11 LISTA DE FIGURAS ........................................................................................ 12 LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS ........................................................... 14 RESUMO.......................................................................................................... 16 ABSTRACT ...................................................................................................... 17 1. INTRODUÇÃO ............................................................................................. 18 2. REVISÃO DE LITERATURA ........................................................................ 22 2.1. Obesidade ............................................................................................... 22 2.2 Obesidade e inflamação ........................................................................... 24 2.3 Obesidade e resistência à insulina ........................................................... 27 2.4. Substâncias bioativas presentes em vegetais ........................................ 29 2.4.1. Substâncias fenólicas: flavonoides e ácidos fenólicos ....................... 33 2.4.2 Derivados terpênicos: óleos essenciais e saponinas .......................... 35 2.4.2.1 Óleos essenciais ............................................................................ 35 2.4.2.2 Saponinas ...................................................................................... 37 2.4.3 Alcaloides ............................................................................................ 37 2.4.4 Ácidos graxos ...................................................................................... 38 2.5 Xylopia aromatica (Lam.) Mart. (pimenta-de-macaco) ............................. 41 3. MATERIAL E MÉTODOS ............................................................................. 46 3.1 Materiais ................................................................................................... 46 3.1.1 Equipamentos ..................................................................................... 46 3.1.2 Reagentes e solventes ........................................................................ 47 3.1.3 Outros materiais .................................................................................. 48 3.2 Métodos ................................................................................................... 49 3.2.1 Preparação dos frutos para estudo ..................................................... 50 3.2.1.1 Moagem e acondicionamento ........................................................ 50 3.2.1.2 Preparação dos extratos e frações ................................................ 50 3.2.2 Extração e quantificação de óleos essenciais ..................................... 52 3.2.3 Extração de alcaloides ........................................................................ 53 3.2.4 Caracterização das substâncias químicas em EBXA e suas frações . 54 8 3.2.4.1 Cromatografia em camada delgada (CCD) .................................... 54 3.2.4.2 Cromatografia gasosa de alta resolução acoplada ao detector de massas (GC/ EM) ...................................................................................... 55 3.2.5 Ensaios biológicos .............................................................................. 57 3.2.5.1 Animais .......................................................................................... 57 3.2.5.2 Preparo da dieta rica em carboidratos ........................................... 57 3.2.5.3 Esquema de tratamento ................................................................. 58 3.2.5.4 Eutanásia ....................................................................................... 60 3.2.5.5 Desenho experimental ................................................................... 60 3.2.5.6 Obtenção do soro........................................................................... 61 3.2.6 Protocolos experimentais .................................................................... 61 3.2.6.1 Teste de tolerância oral à glicose (TTOG) ..................................... 61 3.2.6.2 Teste de sensibilidade à insulina (TSI) .......................................... 61 3.2.6.3 Cálculo do Índice de HOMA-IR e HOMA-β .................................... 62 3.2.6.4. Análise morfológica dos adipócitos do tecido adiposo .................. 62 epididimal ................................................................................................... 62 3.2.6.4.1. Processamento do tecido adiposo epididimal para a ............... 62 microscopia de luz ................................................................................... 62 3.2.6.4.2. Aquisição de imagem no microscópio e mensuração da ......... 62 área e diâmetro dos adipócitos ................................................................ 62 3.2.6.5. Dosagens sorológicas ................................................................... 63 3.2.6.6. Contagem total de leucócitos, células mononucleares e .............. 63 neutrófilos .................................................................................................. 63 3.2.6.7. Extração de citocinas dos tecidos ................................................. 63 3.2.6.8. Determinação da concentração de citocinas por ELISA ............... 64 3.2.7. Análise estatística .............................................................................. 64 4. RESULTADOS ............................................................................................. 65 4.1 Análises químicas do EBXA e suas frações ............................................. 65 4.1.1 Rendimento das extrações .................................................................. 65 4.1.2. Quantificação e caracterização do óleo essencial de X. aromatica (OEXA) ......................................................................................................... 66 9 4.1.3. Caracterização química dos frutos de X. aromatica por CCD ............ 66 4.1.4 Caracterização do HEXA dos frutos de X. aromatica por CG/ EM ...... 71 4.1.5 Perfil de ácidos graxos dos frutos de X. aromatica por CG/ EM ......... 76 4.2 Efeitos do EBXA no tratamento de alterações metabólicas induzidas por dieta em camundongos BALB/c ....................................................................
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