Hox

Hox

/T

Hox

Hox

Hox

Hox

Hox

Hox13

Hoxb13 Hoxc13

T/Brachyury

Cyp26A1

Cyp26A1

Cyp26A1

Raldh2

Raldh2

Raldh2

Hoxb1-9

Hoxb1-9

Hox

Hox

Brachyury/T

Hox

Hoxb1-9

Hox

Hoxb9

Hox

Hoxc8 Hoxd8

Hoxa13

Hox

Hox

Hox

in vivo

Hox

Hox

Hox Hoxa9, Hoxc9, Hoxd10, Hoxd11, Hoxc11, Hoxa13,

Hoxb13Hoxc13 Hox

Hox

Hoxa10, Hoxc10, Hoxa11, Hoxc12, Hoxd12 and Hoxd13

Hoxd10 Hoxc11

Hoxc11

Hoxd10

Hoxa13Hoxc11

Hox

Hox

Hoxa13

Hoxa13

Hoxa13

Hoxa13

Sox2

Hoxa13

Hox

RhoA

Hoxa13DN-RhoA

.

, Hox

Hox

Hoxa9, Hoxc9, Hoxd10, Hoxd11, Hoxc11, Hoxa13, Hoxb13 Hoxc13

Hoxa10, Hoxc10, Hoxa11, Hoxc12, Hoxd12 Hoxd13

Hox

Hox

Hox

Hox

Hox

DrosophilaHox

Hoxb1-9

Hox

Hoxd10

Hoxc11

Hoxc11Hoxc11

Hoxc11mutH

HoxHoxc11

Hoxc11Hoxd10.

Hoxa13Hoxc11

Hox

Hox

Hox

Hox

Hox

Pbx1

Pbx1Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Hoxb7, Hoxb9

Hoxa9, Hoxc9, Hoxd10, Hoxd11, Hoxc11, Hoxa13, Hoxb13 Hoxc13

Pbx1HoxHoxb7Hoxb9 Pbx1

Hox

Pbx1Hox

Pbx1

Pbx1Hox

Hox

Pbx1Hox

Hox β

Hox

H2B-Venus

Hoxa13H2B-Venus

β

Axin2, Fgf8 Sp8 Hoxa13

Hox

β

in situAxin2, Fgf8

TBrachyury

Hoxa13

Axin2, Fgf8

TBrachyury.

Hoxd10, Hoxc11Hoxa13βcatLEF

β

β

Hoxa9 Hoxc9 Hoxd10 Hoxd11 Hoxc11, Hoxa13,

Hoxb13 Hoxc13 Hox

Hoxd10Hoxd11

Hox

β Hoxa9 Hoxa13

Hoxa13

Hoxa13

Hox

HoxHoxa13

Lrp6Ctbbn1

Wnt3Wnt5a

Hox

Fzd2Hoxa13

Hoxa13

Fzd2

Dact2

Hoxa13

Hoxa13FGFR1 Fgf8,

Etv1Cyp26A1 Rasgrp3,

Spred2

Hoxa13

Hoxc11 Hoxa13

Cyp26A1,

Hox

T/BrachyuryHox

TBrachyury

T

T

Hoxa9Hoxd10Hoxc11Hoxa13

T

Hoxa13

T µµ Hoxa13

THoxa13

THoxc11Hoxa13

T Hoxa13

βcatLEFT

Hoxa13βcatLEFT

HoxT

β

Hox

T

Hoxa13

Hoxa13dn Hox13

Hox13Hoxa13dn

Hoxa13

Hoxd10 Hoxd10dn)

Hoxc11Hoxc11dn)

Hoxa13dn

Hoxc11dn Hoxc11dn Hoxd10dn

Hox10-13

Hoxd10dn, Hoxc11dn Hoxa13dn

TAxin2Fzd2

β

Hox

T/Brachyury

T/Brachyury

T/Brachyury

T/Brachyury.

T/Brachyury

T/Brachyury.

T/Brachyury

T/Brachyury

T/Brachyury .

Hox

β

T/Brachyury

Hox

Hox

Sox2Brachyury

Hoxa13

Hoxa13

Hoxa13

Hoxb13 Hoxc13

Hox

Hox

vivo

Cyp26A1

raldh2

Hox

Hoxa13b13c13

Hoxd

Hoxd

Hoxd

Hoxc13

Cyp26A1

Hoxa13

raldh2

raldh2

Hox

Hox

Hox

Hox

Hoxb1-9

in vivo

Hox

Hox

Hox

Hox10Hox11

Hox

Pbx1

Pbx1Pbx2

Pbx1-/-; Pbx2+/-Hox

Wnt3a

T

Hox13

Hox

T

Hoxa13Hox

Hoxa13

Hox

Hoxa13

Sox2in situ

Hox

Sox2

Hox

T

Hox

Hox

ex ovo

Hox T…)

Hox

Hox

pCAGGS-VenuspCAGGS-Hoxa13-IRES2-Venus

in situin situ

Pbx1

Fgf8

Fzd2 Dact2

TcSox

HoxHoxa2 Hoxa3, b3,

d4Hoxa10, a11, a13, c4, c5, c6, c8, c9,d8d9d10, d11, d12

d13 Hoxb1, b4, b7, b9

Hoxb8Hoxb5, c10, c11, c12, c13b13

Hoxa4

Hoxa5 Hoxa6Hoxa7

Hoxa9Hoxb2

Hoxb6Hoxd3

Hox Pbx1 T

Wnt3a Wnt5a, Dact2Fzd2

Accuprime pfx

lef1

β

Lrp6 ∆ Ctbbn1

Rhoa

Hoxa13, Hoxc11, Hoxd10

Hoxd10c11a13Hoxd10dn, Hoxc11dnHoxa13dn

T

firefly

siamois

firefly

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1

µ

Hox T

Hox

µ

µµ

µµ

µµ

Hox

Hoxa13mutH

Hoxc11mutHHoxa13mutH orHoxd10mutHHoxc11mutHHoxa13mutH

Hoxa13dn Hoxc11dn

Hoxa13dn Hoxd10dn, Hoxc11dn Hoxa13dn

Hoxa13

µ

Hoxa13

µ

µ µ

−β

µ

in vitro

In Situ

H2B-venusHoxa13H2B-venus

Hoxa13

µ

Hoxa13

Hoxa13

Hoxa13

µ µ

µµ

gapdh

gapdh.

Hoxd10mutH, Hoxc11mutH and Hoxa13mutH

Hoxd10dn, Hoxc11dn Hoxa13dn

µ

µ µ

µµ

gapdh

gapdh.

µ

µ µ

µµ

gapdh

gapdh.

Hoxin situ

15

4 466 29 129 134 321 51 9 220 239 49 206 129 134 10 427 256

13 98 78 12 127 454 312 12 195 195 18 120 375 442 104 205 420 125

22 23 344 100 24 22 135 134 291 15 108 10 104 134 10

120 122 44 15 193 112 128 , et al. 147 22 15 7 10 10 , et al. 141 5 17

238 301 192 55 121 136 13 , et al. 17

Hox

Hox

HoxaHoxb

Hoxc Hoxd

Hox

Hox

Hox

Hox

Hoxa9 Hoxc11, Hoxb13

Hox

Hox

Hoxa13

Hoxa13α

Hoxa13

Hoxa13

Hoxa13

In situ

Hoxa13 Sox2

Hoxa13+DN-RhoA

Hox

Hoxa13

Hoxa9 Hoxc9 Hoxd10

Hoxd11 Hoxc11, Hoxa13, Hoxb13 Hoxc13

Hox

Hoxc11CherryHoxc11mutH-Cherry Hoxd10-Venus

Hoxc11-Venus

Hoxa1-CherryHoxa13mutH-CherryHoxa13-Venus

Hoxc11-Venus

β

Hoxa9 Hoxa13 Hoxa9 Hoxa13

Hoxa13 µµ

Hoxa13

µ

Hoxa13

µ

Hox

Pbx1Pbx1

Pbx1

Pbx1

Pbx1Pbx1Hoxb7

Hoxb9 Hoxc9 Hoxc11 Hoxa13

Pbx1

β Hox

Hoxa13T/Brachyruy

Axin2Fgf8

Hoxd10mutH Hoxd10

Hoxd10+βcatLEF Hoxc11mutH Hoxc11 Hoxc11+βcatLEF Hoxa13mutH

Hoxa13Hoxa13+βcatLEF.β

Hoxa9

Hoxc9Hoxd10Hoxd11Hoxc11, Hoxa13, Hoxb13Hoxc13

β

Hoxa13 Hoxa13+dBC Hoxa13+Lrp6∆ Hoxa13

Hoxa13+Wnt3aHoxa13+Wnt5aFzd2Hoxa13Hoxa13+Fzd2

Dact2

Hox Brachyury

β

T Hoxa13

Hoxa13Hoxa13

T T Hoxa13

Hoxc11 Hoxa13

βcatLEF, Hoxa13 Hoxa13βcatLEF

β

Hoxa13mutH, Hoxa13dn, Hoxa13+Hoxa13mutH Hoxa13+Hoxa13dn

Hoxd10mutH Hoxd10dn Hoxd10+Hoxd10mutH Hoxd10+Hoxd10dn

Hoxc11mutH, Hoxc11dn, Hoxc11+Hoxc11mutH Hoxc11+Hoxc11dn

β

Hoxa13mutH

Hoxa13dn Hoxa13mutHHoxc11mutH Hoxa13dnHoxc11dn

Hoxa13mutHHoxc11mutH Hoxd10mutH Hox13dn Hoxc11dn

Hoxd10dnTAxin2Fzd2

Hoxa13mutHHoxc11mutH Hoxd10mutH

Hoxa13dnHoxc11dnHoxd10dn

Hoxa5Hoxa13,

Hoxa5Ha13 Hoxa13Ha5 Hoxa13, NHox13HCa5 Hoxa5Ca13

Hoxc11Ha5 Hoxa13Ha5.

Hox

Hox

Hox

Pbx1

Hox

5 Hox

Hox

Hox T/Brachyury

HoxPbx1

Hoxa13

Standard Standard Average Average (Control) Dev dev Fold Change (Hoxa13) (control) (Hoxa13)

Sp8 949.9 279.2 483.8 21.4 0.51

Fzd2 139.7 10.7 78.5 8.6 0.56

Axin2 857.8 42.5 677.0 99.1 0.79

Dact2 415.8 134.4 989.8 270.1 2.38

Cyp26a1 625.1 258 102.9 13 0.16

Fgf8 1523.9 159.3 591.2 65 0.39

Etv1 296.6 113.2 155.1 23.8 0.52

Fgfr1 145.9 5.8 80 0.6 0.55

Rasgrp3 1441.3 671.8 362.8 218.8 0.25

gene size of the gene reference primers sequence 5'-->3' name amplicon F: GCTGAGAACGGGAAACTTGTG Gapdh NM_204305.1 62bp R: GGGTCACGCTCCTGGAAGA F: CGAGGAGATCACAGCTTTAAAAATT T NM_204940.1 75bp R: TCATTTCTTTCCTTTGCGTCAA F: GCGCAAACGATAGTGAGATATCC Axin2 NM_204491.1 76bp R: CCATCTACACTGCTGTCTGTCATTG F: CATGGCGCACCCCTACGAGTC Sp8 NM_001198666.1 131bp R: CGTTGGGGGCACGTCGATCCA F: CCCTGCCCGCTGCACTTCAC Fzd2 NM_204222.1 190bp R: CCGCTCACACCGTGGTCTCG F: AGGAGCCCGAGGGTGGCTACA Cyp26a1 NM_001001129.1 138bp R: TGGCAGTGGTTTCATGACCTCCAA F: CGCTCTTCAGCTACGTGTTCATGC Fgf8 NM_001012767.1 108bp R: TGGTAGGTGCGCACGAGCC F: ATGGACCACAGATTTCGCCGCC Etv1 NM_204917.1 145bp R: TTGGACGTCCTTCCCTCGGCA F: CACGCTGCCCGACCAAGCTC Fgfr1 NM_205510.1 168bp R: GTGATGCGCGTGCGGTTGTT Rasgrp3 NM_001006401.1 111bp

Hox

Hoxd10-CherryHoxc11-Venus

Hoxc11CherryHoxa13-Venus

Hoxa13

Hoxc11Hoxd10

Hox

In situ

Hoxa13 Axin2Fgf8TFzd2

Dact2

Dact2Hoxa13

Hox

Hoxd10 Hoxd11

Hox

Hoxb1Hoxa5Hoxc11Hoxa13.

β

T Hoxa13 Hoxa13+T.

Hoxa13

H2B-Venus

Hoxa9Hoxc11 Hoxa13

H2B-Venus

Hoxa9-ires2-H2B-Venus Hoxc11-ires2-H2B-Venus

Hoxa13-ires2-H2B-Venus

Hoxa9, c11 and a13

Pbx1

pBIC Pbx1pBIC

Pbx1

β T

Hoxa13

Hoxa13mutH-ires2-H2B-Venus

Hoxa13-ires2-H2B-Venus T Hoxa13-ires2-H2B-Venus

βcatLEF Hoxa13-ires2-H2B-Venus

β

Hoxd10

Hoxd10mutH-ires2-H2B-

Venus Hoxd10-ires2-H2B-Venus βcatLEF Hoxd10-

ires2-H2B-Venus

β

Hoxc11

Hoxc11mutH-ires2-H2B-

Venus Hoxc11-ires2-H2B-Venus βcatLEF Hoxc11-

ires2-H2B-Venus