“Búsqueda De Compuestos Bioactivos De Especies Del Género Dalea Con Influencia Sobre Enzimas Relacionadas a La Melanogénesis”
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TESIS DOCTORAL “Búsqueda de compuestos bioactivos de especies del género Dalea con influencia sobre enzimas relacionadas a la Melanogénesis” Farm. María Daniela Santi Farmacognosia, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. IMBIV-CONICET. Directora de Tesis: Dra. María Gabriela Ortega Comisión Asesora: Dra. Belkys Maletto Dra. Viviana Nicotra Dr. José Luis Cabrera Evaluadora externa: Dra. María Inés Isla A mis padres y hermano Agradecimientos “Un hombre del pueblo Neguá, en la costa de Colombia, pudo subir al alto cielo. A la vuelta, contó. Dijo que había contemplado, desde allá arriba, la vida humana. Y dijo que somos un mar de fueguitos. -El mundo es eso -reveló-. Un montón de gente, un mar de fueguitos. Cada persona brilla con luz propia entre todas las demás. No hay dos fueguitos iguales. Hay fuegos grandes y fuegos chiquitos y fuegos de todos los colores. Hay gente de fuergo sereno, que ni se entera del viento, y gente de fuego loco, que llena el aire de chispas. Algunos fuegos, fuegos bobos, no alumbran ni queman; pero otros arden la vida con tantas ganas que no se puede mirarlos sin parpadear, y quien se acerca, se enciende.” El Mundo, Libro de los Abrazos, Eduardo Galeano. Porque a cada uno de ustedes me he acercado y encendido, para ser una nueva persona cada vez, hoy en este ciclo que se cierra les agradezco: A Gabriela, mi directora, por confiar en mí para el desarrollo de esta Tesis Doctoral, por su sinceridad ante todo, por su empuje, predisposición, aguante y paciencia (estas dos últimas elevadas al número de Avogadro), y por sus constantes enseñanzas no sólo profesionales, sino también humanas. A Mariana Peralta, por invitarme al Laboratorio de Farmacognosia, por ser mi “sensei” e iniciarme en este mundo de las plantas, tan hermoso y gratificante, por enseñarme a ser paciente, por estar ahí siempre con el manual de la Dalea en la mano. Al Dr. José Luis Cabrera, por recibirme en el grupo, dejarme permanecer, por sus aportes en el desarrollo de esta tesis, consejos, aliento, por compartir su sabudiría y vivencias. A las integrantes de mi comisión de tesis, Dra. Belkys Maletto y Dra. Viviana Nicotra, por aceptar ser parte de la evaluación de este trabajo, por sus contribuciones, correcciones, por el seguimiento y compromiso para conmigo y esta tesis, por su energía positiva y constantes enseñanzas. Al Departamento de Farmacia, y cada uno de los integrantes, con los que he compartido todo este tiempo, de los que he aprendido, y con los que también he reído y han aguantado alguna ocurrencia de la que escribe. A los auxiliares, como siempre les digo, gracias por votarme. A gente linda que me he cruzado por el pasillo, con la que he compartido un mate, una charla, un debate, una risa, una ocurrencia, reuniones agitadas e inolvidables de auxiliares: Sole G., Sergio, Octavio, July A., Mely C., Luchi, Juan Pablo, Mely Q., Sol M., Marina, Lina, Caro B. (x 2), Ale, Lily, Moni, Caro A., Cinthya, Vane, Jime, Noel, René, Esteban, Vivi C., Vivi B., Caro R., Dani Q., Naty V., Diame. A Fernanda, Emilia y Laura por el apoyo, los abrazos y el cariño para conmigo. Al grupo de Farmacognosia, por el aguante (de gritos, bailes, chistes, preocupaciones insólitas, malhumores, inquietudes esotéricas-holísticas, sensibilidad extrema), por los consejos (miles), consuelos en forma de abrazos, risas compartidas, contención económica (deberían estar dentro de entidades), alimentos en momentos críticos, refugio (mi bella etapa de nómade-ciruja), miradas cómplices, tolerancia, paciencia, conversaciones profundas, y otras que no llegaron a ningún lado, enseñanzas por doquier etc., etc., etc… A Gertrudis siempre presente en cada evento social, con el sudor en la frente para que todo salga bien. A July, Pame, Laurita, Mica y Jesy, más que compañeras, amigas que he encontrado en esta etapa de mi vida, y que estando en esta instancia final, sé que nuestra amistad es eterna. Sin duda las que más me conocen, y más me han sufrido, estando presentes en los momentos de llantos de emoción y llantos de dolor, de felicidad, ansiedad, preocupación…mi apoyo afectivo en estos 5 años, mis confidentes, mis hermanas… para siempre… A Mely Corti y Maribel, las mejores ayudantas del universo de las ayudantas, gracias por enseñarme a ser mejor persona, por contribuir en esta tesis y en mi vida con tanto. Al Instituto de Virología, y en especial a Brenda, por su alegría que desborda, por esos besos de recibimiento con ruido más geniales del planeta, por su paciencia, por sus enseñanzas, por aceptarme allí. A Javier por su paciencia nivel extremo, por su colaboración, por sus consejos; a Florencia, por esos mates activadores, por brindarme su amistad, por los momentos compartidos allí y en la vida. A Pedro por su ayuda en aquel caluroso enero en el que hasta las células se querían tomar vacaciones. A todo el resto, Eli, Guille, Agustín, Adrián, Laura T. (otra amiga que me regaló la vida), Mauri, por su predisposición a ayudarme, aguante, y risas compartidas. Al grupo de Investigación del Departamento de Bioquímica y Biología Molecular B e Inmunología de la Facultad de Medicina, Universidad de Murcia (España), en especial a mi tutor, el Investigador Principal - Catedrático Dr. José Carlos García-Borrón, por recibirme en su laboratorio, por enseñarme tanto y presentarme a las maravillosas personas que conocí en esa estancia, Conchi, Marta, Ana T., Ana L., Antonio, entre otros. A Dina y Karla, que hicieron de mis días en España una experiencia inolvidable. A Gloria Bonetto y Romina Di Paola, por su apoyo en análisis de RMN y Masa de alta resolución, respectivamente, piezas fundamentales del desarrollo de este trabajo, que no podría haber sido posible sin su predisposición y continua ayuda. Al Dr. Grougnet, el Dr. Puiatti y la Dra. Moyano junto con su tesista Lourdes Sciu, por confiar en mí y Gabriela para trabajar en equipo. A los olímpicos, pilares fundamentales en estos últimos años, por aceptarme así, todo terremoto y llanto a flor de piel, por la confianza, el amor en múltiples formas, por hacerme volar, por enseñarme a trabajar en equipo, a luchar por lo que uno quiere, …por hacerme sentir que nunca estoy sola… A mis compañeros del Cursillo, por compartir conmigo esto tan lindo que es recibir a estos niños de secundario que sueñan con ingresar a la facu con todo el amor del mundo, ahí pendientes de sus necesidades, haciendo todo lo posible por verlos brillar. A mis padres, que me dieron la vida, que me enseñaron de valores y persistencia, de sacrificio y confianza, siempre a mi lado en todo momento, apoyándome, aceptándome y amándome incondicionalmente. Si no fuera por ellos, hoy no estaría aquí cumpliendo este sueño. A mi pequeño hermanito, Diego por su ejemplo de fuerza, voluntad, disciplina, por estar siempre te agradezco. A Ana Julia por su cariño y apoyo, y a ambos por haberme dado el maravilloso regalo de ser tía y madrina de la luz de mis ojos, Benjamín. A mis abuelos, mis antepasados, la sangre que corre por mis venas, la sabiduría transmitida en generaciones, mis defectos y virtudes, mis fortalezas y debilidades. A mis familiares, amigos de la vida, y personas que ya no están junto a mí, que me acompañaron durante estos años, algunos desde siempre, otros que encontré a la mitad del camino, que me apoyaron, contuvieron y compartieron conmigo innumerables momentos en este tiempo. A mi matriz de Biodanza, soporte afectivo-emocional fundamental de estos últimos años. A las entidades que han confiado en este proyecto siendo el sostén económico mediante Becas Doctorales y subsidios, SeCyT, CONICET, FONCyT. A mis queridas Universidad Nacional de Córdoba y Facultad de Ciencias Químicas a las que espero de alguna manera seguir contribuyendo con mi granito de arena por tanto brindado durante mi carrera de grado y posgrado. Al Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (IMBIV), al cual pertenezco por su apoyo en el desarrollo de esta tesis. ÍNDICE Abreviaturas ……………………………………………………………………………………………………….. 1 Resumen…………………………………………………………………………………………………………...... 9 Abstract……………………………………………………………………………………………………………….. 11 CAPÍTULO 1: INTRODUCCIÓN GENERAL ……………………………………………………………... 13 CAPÍTULO 2: INTRODUCCIÓN Y ANTECEDENTES …………………………………………..…….. 17 2.1. El género Dalea………………………………………………………………………………………….... 19 2.1.1.Características botánicas del género………………………………………………………… 19 2.1.2.Usos en la medicina tradicional………………………………………………………………… 20 2.1.3. Dalea L. en Argentina y Bolivia………………………………………………………………..… 21 2.1.4. Flavonoides en el género Dalea L.: Estudios químicos y de actividad biológica………………………………………………………………………………………………………….... 22 2.1.4.1. Flavonoides: química y bioactividad……………………………………….............. 22 2.1.4.2. Género Dalea L.: Estudios químicos y de actividad biológica……………... 26 CAPÍTULO 3: OBJETIVOS………………………………………………………………………………………. 35 3.1. Objetivo General………………………………………………………………………………………….. 37 3.2. Objetivos Específicos……………………………………………………………………………………. 37 CAPÍTULO 4: ESTUDIOS QUÍMICOS EN ESPECIES DEL GÉNERO Dalea……………….….. 39 4.1. Antecedentes……………………………………………………………………………………………….. 41 4.1.1. Dalea elegans…………………………………………………………………………………….……. 41 4.1.2. Dalea pazensis……………………………………………………………………………………….... 41 4.2. Estudios de flavonoides en D. elegans Gillies ex Hook. et Arn. var. elegans….. 41 4.2.1. Obtención y procesamiento del material vegetal…………………………………….. 41 4.2.2. Preparación de los extractos……………………………………………………………………. 41 4.2.3. Aislamiento, separación y purificación de los principios activos……………….