UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Renata Maria de Souza ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTIMICROBIANA DE PLANTAS DA CAATINGA Recife, 2015 RENATA MARIA DE SOUZA Atividade antioxidante e antimicrobiana de Plantas da Caatinga Tese de doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco, como pré-requisito para obtenção do título de Doutor em Ciências Biológicas, área de concentração em Biotecnologia. Orientadora: Profa. Dra. Maria Tereza dos Santos Correia - UFPE Co-orientadora: Profa. Dra. Márcia Vanusa da Silva - UFPE Recife, 2015 Catalogação na fonte Elaine Barroso CRB 1728 Souza, Renata Maria de Atividade antioxidante e antimicrobiana de plantas da Caatinga/ Renata Maria de Souza– Recife: O Autor, 2015. 72 folhas : il., fig., tab. Orientadora: Maria Tereza dos Santos Correia Coorientadora: Márcia Vanusa da Silva Tese (doutorado) – Universidade Federal de Pernambuco. Centro de Ciências Biológicas. Biotecnologia, 2015. Inclui bibliografia e anexo 1. Plantas medicinais 2. Plantas da Caatinga 3. Fenóis I. Correia, Maria Tereza dos Santos (orientadora) II. Silva, Márcia Vanusa da (coorientadora) III. Título 615.321 CDD (22.ed.) UFPE/CCB-2015-140 RENATA MARIA DE SOUZA Atividade antioxidante e antimicrobiana de Plantas da Caatinga Aprovada em 27/01/2015. BANCA EXAMINADORA: ______________________________________________________________ Profa. Dra. Maria Tereza dos Santos Correia – UFPE (Orientadora) ______________________________________________________________ Profa. Dra. Vera Lúcia de Menezes Lima – UFPE ______________________________________________________________ Prof. Dr. Ranilson de Souza Bezerra – UFPE ______________________________________________________________ Profa. Dra. Elba Verônica Matoso de Carvalho – UFPE ______________________________________________________________ Prof. Dr. Thiago Henrique Napoleão – UFPE “De tudo ficaram três coisas... A certeza de que estamos começando... A certeza de que é preciso continuar... A certeza de que podemos ser interrompidos antes de terminar... Façamos da interrupção um caminho novo... Da queda, um passo de dança... Do medo, uma escada... Do sonho, uma ponte... Da procura, um encontro!” Fernando Sabino “O que vale na vida não é o ponto de partida e sim a caminhada. Caminhando e semeando, no fim terás o que colher.” Cora Coralina A minha mãe, Cleonice, pela força nos momentos difíceis e demonstração de coragem e fé. A meu pai Adilson, pelo apoio incondicional e pelo exemplo de dignidade e perseverança. A minha avó, Marina, pela dedicação, amor e carinho incessantes e pela sua existência, simplesmente. A minha família e aos amigos mais íntimos, pela participação na minha formação e nesta longa caminhada . A Carlos Alberto pelo companherismo e compreensão, a mim dedicados e pelos grandes momentos de amizades e cumplicidade vividos juntos . DEDICO. AGRADECIMENTOS A Deus, pela oportunidade de desenvolver esta obra, sempre iluminando o meu caminho. A Profa. Maria Tereza dos Santos Correia, pela orientação, oportunidade e confiança na realização deste trabalho. A Profa. Márcia Vanusa da Silva, pela orientação e pela disponibilidade a mim direcionada. A secretária da Pós-Graduação, Adenilda, pela paciência, atenção, carinho e por tudo o que ela fez por mim. Ao professor Nicácio e a todos os integrantes do laboratório de Produtos Naturais. Às pessoas do Laboratório de Glicoproteínas do Departamento de Bioquímica da UFPE, que se dispuseram a me ajudar quando solicitado.da UFPE pela atenção e disponibilidade. Aos funcionários do Departamento de Bioquímica que contribuíram de alguma forma para o desenvolvimento deste trabalho, em especial ao técnico seu João e dona Helena. Agradecimentos especiais aos meus amigos, André Aires, André Lima, Mary Aranda, Rayana Apolinário, Mychely Melo e Elba Carvalho pelos instantes de descontração e diversão para aliviar os momentos de aflição, ansiedade e dúvidas e a Luís Cláudio pelas contribuições intelectuais que me ajudaram no decorrer do trabalho. Obrigada pelos momentos divertidos, pela amizade sinceras e alegrias verdadeira. A minha mãe Cleonice, pelo apoio e amparo nos momentos difíceis, nela encontro o abrigo que me falta na hora do desânimo, ela é meu porto seguro e exemplo de vida. Obrigada pelo amor, carinho e compreensão. Ao meu pai Adilson, por sempre me estimular a estudar, o que foi fundamental para a realização deste trabalho. A minha querida avó Marina, por todo o amor, carinho e mimos, pela preocupação incessante ao meu bem estar. Obrigada por tudo que consegui até agora, e sempre te pedirei obrigada por todas as minhas conquistas em vida. Obrigada por você existir. Aos meus familiares, que ajudaram a me tornar a pessoa que sou. Agradecimento mais que especial a Carlos Alberto, pelo amor e companheirismo incondicionais nos momentos de incertezas, pela paciência, por não me deixar abater pelos problemas encontrados no caminho, ficando sempre ao meu lado e mesmo quando não havia nada a ser dito era a melhor conversa que eu poderia ter. Obrigada por fazer parte da minha vida. A CAPES pela bolsa concedida durante os quatro anos de estudos. A todos que indiretamente contribuíram para a conclusão deste trabalho. MUITO OBRIGADA. RESUMO As plantas são importantes fontes de produtos naturais ativos, e é cada vez mais habitual seu uso na medicina popular, como agente antimicrobiano e antioxidante. Porém, no Brasil, as plantas medicinais são utilizadas quase sem nenhuma comprovação científica. Muitas destas plantas podem ser encontradas no bioma exclusivamente brasileiro, a Caatinga e a maioria ainda não apresenta qualquer identificação científica quanto à sua eficiência no combate à doenças e adversidades do corpo e propriedades biológicas. Assim o objetivo deste trabalho é analisar as atividades antimicrobiana e antioxidantes de extratos hidralcoólico e metanólico de Ouratea blanchetiana, Sideroxylon obtusifolium, Manilkara rufula, Myracrodruon urundeuva, Myroxylum peruiferum e Parkinsonia aculeata L., bem como analisar os compostos fenólicos das citadas plantas representates da Caatinga. O material vegetal foi coletado no Parque Nacional do Catimbau Pernambuco e os extratos foram elaborados em diferentes polaridades. Os extratos hidralcoólico e metanólico foram preparados adicionando ao pó dos materiais em estudo determinado solvente para obtenção de extratos a 10%. O conteúdo fenólico total dos extratos foi quantificado pelo ensaio com o reagente Folin-Ciocalteu. Para a determinação da atividade antimicrobiana foi inicialmente utilizado o Método de Difusão em disco, bem como o método concentração mínima inibitória (CIM), no combate às bactérias gram-positiva e gram-negativa. Na atividade antioxidante os extratos foram submetidos ao método fosfomolibdênio (P – Mo), método de seqüestro de radicais livres – DPPH e ensaio sequestro peróxido de hidrogênio. Para o teste antimicrobiano os valores do CIM variaram entre 0.09 e 25 mg/ml, sendo o M. luteus o mais suscetível à ação de substâncias antibacterianas. No ensaio de seqüestro de DPPH foi possível identificar que entre os extratos testados os extratos metanólico e hidralcoólico de S. Obtusifolium mostraram maior eficiência antioxidante, apresentando IC 50 11 e 57.2 µg/ml, respectivamente. No método fosfomolibdênio foi observado que os extratos metanólicos se mostraram mais eficiente e no ensaio sequestro peróxido de hidrogênio valores da IC 50 de todos os extratos em estudos variaram de 4.2 a 10 µg/ml, apresentando melhores resultados que o padrão ácido gálico, com exceção do extrato hidralcoólico de O. blanchetiana com IC 50 de 22.5 µg/ml. Os resultados demonstraram que as amostras estudadas apresentaram uma alta eficiência no combate aos micro-organismos, e aos radicais livres. Palavras – chaves: Atividade antimicrobiana, antioxidante, Bioma Caatinga, compostos fenólicos. ABSTRACT Plants are important sources of active natural products, and is common use in folk medicine as an antimicrobial and antioxidant agent. However, in Brazil, medicinal plants are used almost without any scientific proof. Many of these plants can be found in the biome exclusively Brazilian, the Caatinga, and most still hasn’t and most still has no scientific identification as to their efficiency in combating diseases and adversities of the body and biological properties. The aim this work to evaluate the antimicrobial and antioxidant activities of hydroalcoholic and methanolic extracts of Ouratea blanchetiana, Sideroxylon obtusifolium, Manilkara rufula, Myracrodruon urundeuva, Myroxylum peruiferum e Parkinsonia aculeata L. and analyze the phenolic compounds these plants of Caatinga. The plant material was collected in Parque Nacional do Catimbau Pernambuco and the extracts were prepared at different polarities. The hydralcoholic and methanol extracts were prepared by adding to the powder materials in a given study solvent for obtaining extracts to 10%. The total phenolic content of the extracts was quantified by the assay with the Folin-Ciocalteu. To determine the antimicrobial activity was initially used the disk diffusion method, Minimum Inhibitory Concentration (MIC), for combating gram-positive and gram-negative bacteria . Antioxidant activity in the extracts were subjected to phosphomolybdenum method, method of sequestering free radicals - DPPH assay and hydrogen peroxide. To test the antimicrobial the MIC values ranged between 0.09 and 25 mg / ml, and the Micrococcus. luteus more