UNIVERSIDADE ESTATUAL PAULISTA – UNESP INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS – CÂMPUS DE RIO CLARO CURSO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS MESTRADO EM ZOOLOGIA DIVERSIDADE GENÉTICA E CONSIDERAÇÕES SOBRE Elachistocleis cesarii (MIRANDA-RIBEIRO, 1920) Aluno: Vinicius Simões de Almeida Loredam Orientador: Célio Fernando Baptista Haddad Co-Orientador: Victor Goyannes Dill Orrico Rio Claro 2015 VINICIUS SIMÕES DE ALMEIDA LOREDAM DIVERSIDADE GENÉTICA E CONSIDERAÇÕES SOBRE Elachistocleis cesarii (MIRANDA-RIBEIRO, 1920) Dissertação apresentada ao Instituto de Biociências do Campus de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, como parte dos requisitos para obtenção do título de Mestre em Ciências Biológicas (Zoologia). Orientador: Célio Fernando Baptista Haddad Co-Orientador: Victor Goyannes Dill Orrico Rio Claro 2015 597.6 Loredam, Vinicius L868d Diversidade genética e considerações sobre Elachistocleis cesarii (Miranda-Ribeiro, 1920) / Vinicius Loredam. - Rio Claro, 2015 86 f. : il., figs., gráfs., tabs., fots., mapas Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biociências de Rio Claro Orientador: Célio Fernando Baptista Haddad Coorientador: Victor Goyannes Dill Orrico 1. Anfíbio. 2. Anura. 3. Microhylidae. 4. 16S. 5. CO1. I. Título. Ficha Catalográfica elaborada pela STATI - Biblioteca da UNESP Campus de Rio Claro/SP AGRADECIMENTOS Gostaria de agradecer primeiramente ao Prof. Dr. Célio Haddad e o Prof. Dr. Victor Dill pela confiança em mim depositada e toda a assistência prestada durante o desenvolvimento deste projeto. Agradeço a Mariana Lyra, Délio Baeta, Bianca Berneck, Ariadne Sabbag, Francisco Brusquetti, Thais Condez, Nadya Pupin, Leo Malagolli e todas as pessoas que me ajudaram direta ou indiretamente nesse aprendizado e pelo convívio agradável do dia a dia. Agradeço aos pesquisadores, curadores e as coleções herpetológicas que contribuíram de maneira tão significativa para a realização deste estudo: Dra. Cynthia Prado — UNESP Jaboticabal Dr. Daniel Loebmann — FURG Francisco Brusquetti — IIPBH Dra. Glaucia Pontes — PUC-RS Dr. Hussam Zaher — MZUSP Dr. Julian Faivovich — MACN Dr. Marcelo Napoli — UFBA Dr. Miguel Trefaul — USP Dr. Natan Maciel — UFG Dra. Paula Valdujo — WWF Dr. Paulo Garcia — UFMG Dr. Pedro Peloso — AMNH / MPEG Dr. Robson Ávilla — URCA Agradeço também ao Idea Wild pelo belo trabalho desenvolvido, em especial Ann Marie Gage por todo o apoio e pela doação de equipamentos, que sem dúvida foi e será de grande valia. Ao Centro de Estudos de Insetos Sociais, UNESP, Rio Claro (CEIS), em especial ao Prof. Dr. Maurício Bacci Jr., pela permissão no uso de suas instalações para as análises moleculares. A Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) por tornar essa pesquisa possível financeiramente (processo 2013/19490-8). “A noble spirit embiggens the smallest man” Jebediah Springfield LISTA DE SIGLAS Para instituições: CFBH Coleção de anfíbios “Célio F. B. Haddad” - UNESP Rio Claro UNESP Universidade Estadual Paulista USP Universidade de São Paulo UFMG Universidade Federal de Minas Gerais UFG Universidade Federal de Goiás URCA Universidade Regional do Cariri UFBA Universidade Federal da Bahia FURG Fundação Universidade Federal do Rio Grande MNRJ Museu Nacional, Rio de Janeiro MPEG Museu Paraense “Emílio Goeldi” MCP Museu de Ciências e Tecnologia da PUC-RS MACN Museo Argentino de Ciencias Naturales “Bernardino Rivadavia” IIBP Instituto de Investigaciones Biológicas del Paraguay AMNH American Museum of Natural History – Estados Unidos da América Para as espécies e amostras: BB Elachistocleis bumbameuboi OV Elachistocleis ovalis BC Elachistocleis bicolor PE Elachistocleis pearsei CS Elachistocleis cesarii PN Elachistocleis panamensis CV Elachistocleis carvalhoi PS Elachistocleis piauiensis HE Elachistocleis helianneae SU Elachistocleis surumu MN Elachistocleis magnus sp. espécie não identificada MO Elachistocleis matogrosso Para o grupo externo: DM Dermatonotus muelleri MH Microhyla heymonsi Para os países: AR Argentina PN Panamá BO Bolívia PY Paraguai BR Brasil UR Uruguai CO Colômbia VE Venezuela GU Guiana XX Localidade desconhecida RESUMO O gênero Elachistocleis é composto atualmente por 16 espécies além de Elachistocleis ovalis, considerada espécie inquirenda. Diversos autores indicam a necessidade de uma revisão taxonômica do gênero em seus trabalhos, alegando a presença de complexos de espécies ainda a serem descritos e, apesar do avanço da genética como ferramenta taxonômica nas últimas duas décadas, nenhum trabalho desse tipo foi realizado para as espécies do gênero. Nesse estudo foi avaliada a diversidade genética de Elachistocleis cesarii com considerações taxonômicas, além de buscar entender suas relações com as demais espécies do gênero. Uma abordagem integrativa, usando dados moleculares e morfológicos, foi utilizada. Foram encontrados baixos valores de divergência genética dentro da espécie e em comparação com as demais de ventre manchado, assim como uma sobreposição geográfica e de caracteres morfológicos, nos levando a crer que o gênero Elachistocleis contém espécies que devem ser sinonimizadas. Palavras-chave: Anura. Microhylidae. 16S. CO1. ABSTRACT The genre Elachistocleis is currently composed of 16 species aside from Elachistocleis ovalis, considered species inquirenda. Several authors indicate the necessity of an taxonomic revision in their work, citing the presence of complex of species to be described and, despite the advance of genetic and taxonomic tools in the last two decades, no such work was carried out from this genre. In this study we evaluated the genetic diversity of Elachistocleis cesarii with taxonomic considerations, and seek to understand it relationship with the other species of the genus. An integrative approach, using molecular and morphological data was used. Low genetic diversity values were found within species and compared with other spotted belly, as well as geographical and morphological characters overlap, leading us to believe that the Elachistocleis genus contains species that should be synonymized. Keywords: Anura. Microhylidae. 16S. CO1. SUMÁRIO Página 1. INTRODUÇÃO .......................................................................................................... 10 OBJETIVOS ......................................................................................................................... 14 2. MATERIAIS E MÉTODOS ....................................................................................... 15 2.1. MATERIAL DE ESTUDO .............................................................................................. 15 2.2. TRABALHO DE CAMPO .............................................................................................. 15 2.3. DADOS MOLECULARES ............................................................................................. 15 2.3.1. Análise dos dados moleculares .................................................................................................... 17 2.3.2. Grupo Externo ................................................................................................................................. 19 2.3.3. Teste de mantel ............................................................................................................................... 19 2.4. DADOS MORFOLÓGICOS E MORFOMÉTRICOS ..................................................... 20 2.4.1. Caracteres Morfométricos ............................................................................................................. 20 2.4.2. Caracteres morfológicos e seus estados .................................................................................... 22 2.4.3. Análise dos dados morfométricos e morfológicos ..................................................................... 26 3. RESULTADOS .......................................................................................................... 28 3.1. DISTÂNCIAS GENÉTICAS........................................................................................... 28 3.1.1. Clados ............................................................................................................................................... 32 3.2. TESTE DE MANTEL ..................................................................................................... 39 3.3. DADOS MORFOMÉTRICOS E MORFOLÓGICOS ..................................................... 40 4. DISCUSSÃO ............................................................................................................. 46 4.1. ELACHISTOCLEIS CESARII ....................................................................................... 46 4.1.1. Diagnose de Elachistocleis cesarii ............................................................................................... 46 4.1.2. Vocalização de Elachistocleis cesarii .......................................................................................... 47 4.3. TESTE DE MANTEL ..................................................................................................... 50 4.4. MORFOLOGIA .............................................................................................................. 51 4.4.1. Estágios larvais em Elachistocleis ............................................................................................... 51 4.5. OUTROS AGRUPAMENTOS ....................................................................................... 53 5. CONCLUSÕES ........................................................................................................