UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA La Universidad Católica de Loja ÁREA BIOLÓGICA Y BIOMÉDICA TÍTULO DE BIOQUÍMICO FARMACÉUTICO Extracción, aislamiento y caracterización de metabolitos secundarios del extracto en diclorometano de la especie Loricaria thuyoides (Lam.) Sch. Bip. TRABAJO DE TITULACIÓN AUTORA: Encalada Collahuazo, Karem Lizbeth DIRECTOR: Gilardoni, Gianluca Ph.D. LOJA – ECUADOR 2016 Esta versión digital, ha sido acreditada bajo la licencia Creative Commons 4.0, CC BY-NY- SA: Reconocimiento-No comercial-Compartir igual; la cual permite copiar, distribuir y comunicar públicamente la obra, mientras se reconozca la autoría original, no se utilice con fines comerciales y se permiten obras derivadas, siempre que mantenga la misma licencia al ser divulgada. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/deed.es Septiembre, 2016 APROBACIÓN DEL DIRECTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN Ph.D. Gianluca Gilardoni DOCENTE DE LA TITULACIÓN De mi consideración: El presente trabajo de titulación: “Extracción, aislamiento y caracterización de metabolitos secundarios del extracto en diclorometano de la especie Loricaria thuyoides (Lam.) Sch. Bip.” realizado por Encalada Collahuazo Karem Lizbeth, ha sido orientado y revisado durante su ejecución, por cuanto se aprueba la presentación del mismo. Loja, ……………… f) …………………………………….. Ph.D. Gianluca Gilardoni ii DECLARACIÓN DE AUTORÍA Y CESIÓN DE DERECHOS “Yo Encalada Collahuazo Karem Lizbeth, declaro ser autora del presente trabajo de titulación: “Extracción, aislamiento y caracterización de metabolitos secundarios del extracto en diclorometano de la especie Loricaria thuyoides (Lam.) Sch. Bip.”, de la Titulación de Bioquímica y Farmacia, siendo el Ph.D. Gianluca Gilardoni director del presente trabajo; y eximo expresamente a la Universidad Técnica Particular de Loja y a sus representantes legales, de posibles reclamos o acciones legales. Además; certifico que las ideas, conceptos, procedimientos y resultados vertidos en el presente trabajo investigativo, son de mi exclusiva responsabilidad. Adicionalmente declaro conocer y aceptar la disposición del Art. 88 del Estatuto Orgánico de la Universidad Técnica Particular de Loja, que en su parte pertinente textualmente dice: “Forman parte del patrimonio de la Universidad de propiedad intelectual de investigaciones, trabajos científicos o técnicos y tesis de grado o trabajos de titulación que se realicen con el apoyo financiero, académico o institucional (operativo) de la Universidad”. …………………………………… Encalada Collahuazo Karem Lizbeth CI: 1104113467 iii DEDICATORIA Dedico este trabajo principalmente a Dios, por darme la vida y haberme permitido llegar hasta éste momento tan importante en mi carrera profesional. A mi madre, por ser el pilar más importante, por demostrarme siempre su cariño y apoyo incondicional. A mi padre, por sus sabias enseñanzas y ejemplo a seguir, Tú me has demostrado que solo con el esfuerzo y sacrificio me conduciría al éxito. A mi hermano, por ser un ser sin igual, ya que a pesar de nuestras diferencias de ideas, siempre hemos estados unidos por el amor fraterno; estoy segura, que los tres sienten lo mismo que Yo, este júbilo de culminar mi carrera. iv AGRADECIMIENTO Al personal docente, que con sus místicas enseñanzas y sabiduría, me han ayudado a descubrir el camino hacia el conocimiento, hasta poseer ese haz del saber dentro de mí. Especialmente al Ph.D. Gianluca Gilardoni, Ph.D. Omar Malagón y al Ph.D. Vladimir Morocho, que me han guiado en el transcurso del proyecto; con sus consejos, ilustres aportes y sugerencias durante el desarrollo de la investigación, aún más, por su tiempo ofrecido en forma incondicional. v ÍNDICE DE CONTENIDOS CONTENIDO APROBACIÓN DEL DIRECTOR DEL TRABAJO DE FIN DE TITULACIÓN .............................. ii DECLARACIÓN DE AUTORÍA Y CESIÓN DE DERECHOS ........................................................ iii DEDICATORIA ..................................................................................................................................... iv AGRADECIMIENTO ............................................................................................................................. v ÍNDICE DE CONTENIDOS ................................................................................................................. vi ÍNDICE DE FIGURAS .......................................................................................................................... ix ÍNDICE DE TABLAS ............................................................................................................................. x ABREVIATURAS .................................................................................................................................. xi RESUMEN ..............................................................................................................................................1 ABSTRACT ............................................................................................................................................2 INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................................3 CAPÍTULO I ............................................................................................................................................5 REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA ...............................................................................................................5 1.1 Antecedentes .........................................................................................................................6 1.2 Plantas medicinales ..............................................................................................................6 1.3 Plantas medicinales en la región sur del Ecuador ...........................................................7 1.4 Familia Asteraceae ................................................................................................................7 1.4.1 Descripción del género Loricaria.................................................................................8 1.4.2 Descripción de la especie Loricaria thuyoides. .........................................................9 1.4.3 Descripción botánica de la especie Loricaria thuyoides. ..................................... 10 1.5 Metabolitos secundarios .................................................................................................... 10 1.5.1 Cumarinas. .................................................................................................................. 11 1.5.2 Terpenos ...................................................................................................................... 13 1.6 Cromatografía ..................................................................................................................... 14 1.6.1 Cromatografía de partición o de reparto. ................................................................ 15 1.6.2 Cromatografía de adsorción. .................................................................................... 15 1.6.3 Cromatografía en capa fina (CCF). ......................................................................... 16 1.6.4 Cromatografía en columna (CC) .............................................................................. 17 vi 1.7 Resonancia magnética nuclear (RMN) ........................................................................... 18 1.8 Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM) ................ 18 1.9 Ensayos biológicos ............................................................................................................. 19 1.9.1 Inhibición de las colinesterasas (AChE y BuChE) ................................................. 19 CAPÍTULO II ....................................................................................................................................... 21 MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................................ 21 2.1 Área de recolección............................................................................................................ 23 2.2 Tratamiento de la planta .................................................................................................... 23 2.3 Obtención de los extractos................................................................................................ 23 2.4 Cromatografía de capa fina .............................................................................................. 24 2.5 Cromatografía en columna ................................................................................................ 24 2.6 Unión y purificación de fracciones ................................................................................... 25 2.7 Purificación cromatográfica ............................................................................................... 25 2.7.1 Fraccionamiento de la fracción 16 (KE16-12, 170.0mg). ..................................... 25 2.7.2 Fraccionamiento de la fracción 18 (KE18-12, 120.0mg). ..................................... 26 2.7.3 Fraccionamiento de la fracción 8 (KE8-12, 345.1mg). ......................................... 26 2.8 Identificación de los compuestos aislados ..................................................................... 26 2.8.1 Resonancia magnética nuclear (RMN). .................................................................. 26 2.8.2 Cromatografía