Université de Bourgogne Ecole Doctorale E2S thèse de doctorat pour obtenir le grade de : DOCTEUR DE L’UNIVERSITÉ DE BOURGOGNE DISCIPLINE : PHARMACIE Spécialité : Pharmacognosie-Chimie des substances naturelles Présentée et soutenue publiquement le 8 Juin 2012 par : Gaoussou TIMITE TITRE : Isolement et caractérisation des saponosides de plantes de la famille des Alliaceae, caryophyllaceae et Polygalaceae et évaluation de leurs activités cytotoxiques sur cellules tumorales devant le jury composé de : Présidente : Pr. Françoise BEVALOT Université de Franche-Comté Rapporteur : Pr. Brigitte DEGUIN Université Paris Descartes Rapporteur : Pr. Elisabeth SEGUIN Université de Rouen Examinateur : Dr. Corinne GIRARD-THERNIER Université de Franche-Comté Directeur : Pr. Anne-Claire MITAINE-OFFER Université de Bourgogne Co-Encadrant : Pr. Marie-Aleth LACAILLE-DUBOIS Université de Bourgogne Année 2011-2012 Dédicaces Àmafamille Je dédie spécialement cette thèse à ma regrettée mère, Bakayoko Nohomoga,disparue trop tôt. Cette thèse représente donc l’aboutissement du soutien et des encouragements qu’elle m’a prodigués tout au long de ma scolarité. Qu’elle en soit remerciée par cette trop modeste dédicace. Mention spéciale à mon père Timité Sory pour sa patience, son soutien, ses conseils et surtout l’espoir et la confiance qu’il place en moi. Àmesfrèresetsœursettoutemafamillepourlapatienceetledévouementdontilsont fait preuve, je suis fière d’être de vous. Dédicace spéciale à mon cousin Timité Soualio surnommé VATIER,tonsoutienàtout point de vue et surtout financier a été déterminant dans la réalisation de cet objectif qui a toujours été le mien. Tu as participé à faire de moi ce que je suis aujourd’hui. Cela restera gravé à jamais dans ma mémoire, Merci. Àmesamisetautresconnaissances Àmesamis,Bakayoko Fatouma et Bakayoko Nogosotié,àlafamille Méité,jen’oublierai jamais les bons moments que nous avons passés ensemble depuis mon arrivée en France. Vous avez su à votre manière constituer une famille autour de moi. Vous m’avez affranchi de cette lourde charge qui est de vivre loin des siens. Quel bonheur ! Merci infiniment. Mention spéciale à Monsieur Binaté Abou ainsi que toute sa famille pour m’avoir hébergé et soutenu financièrement durant la période 2001-2007 à Abidjan. Si j’ai pu poursuivre mes études en France, c’est en grande partie grâce à vous, je vous remercie du fond du cœur. Très sincères remerciements à messieurs Soumahoro Karamoko, Bakayoko Losseni,vos soutiens financiers, vos encouragements durant mon cursus universitaire à Cocody (Abidjan) ont sans aucun doute contribué à la réussite de ce rêve, je vous dédie cette thèse. Enfin à toi Soumahoro Mémon, comment aurais-je pu terminer cette thèse sans tes efforts auprès du ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique ivoirien pour le renouvellement de ma bourse ? je te dois cette thèse. ii Remerciements Ce travail est le couronnement d’un processus ayant commencé en 2007/2008 grâce à l’appui des Professeurs Marie-Aleth Lacaille-Dubois (Directrice du laboratoire de Pharmacognosie et co-directeur de thèse) et Anne-Claire Mitaine-Offer (Directeur de thèse). Veuillez trouver ici l’expression de ma gratitude pour m’avoir accueilli au sein de votre laboratoire et de m’avoir donné ainsi l’opportunité d’inscription à l’Université de Bourgogne (UB). Soyez assuré de mon profond respect et de ma vive reconnaissance pour m’avoir fait bénéficier de votre expérience et de votre rigueur scientifique et professionnelle. Recevez ici mes sincères remerciements pour la confiance, les conseils que vous m’avez accordés tout au long de cette thèse. Merci également pour votre encadrement, votre disponibilité et votre gentillesse. Je n’oublie pas votre soutien moral qui m’a souvent aidé à remonter la pente dans les moments difficiles. J’exprime une grande admiration pour votre sens de travail bien fait. Je tiens enfin à remercier le laboratoire pour avoir financé en partie cette thèse, je suis reconnaissant de votre soutien durant toute la période qu’a duré la crise socio-politique dans mon pays la Côte d’Ivoire en 2010/2011. A vrai dire, je ne sais pas comment vous remercier pour tout ce que vous m’avez apporté, transmis et appris lors de cette thèse. Je remercie aussi les Professeurs Odile Chambin et Tan Kimny,tousdeuxmembresde mon comité de suivi de thèse. Ces derniers ont durant toute la durée de mon travail, établi chaque année un compte rendu exhaustif sur l’évolution de mes résultats. Ceci a permis de mettre en évidence les qualités scientifiques de mon travail. À Messieurs Jean-François Mirjolet et Olivier Duchamp de la société Oncodisign Bio- technology, j’adresse mes sincères remerciements pour leur collaboration dans la réalisation des tests de cytotoxicité. Aux Professeurs Brigitte Deguin, Elisabeth Seguin, Françoise Bevalot et au Docteur Corinne Girard,recevezmesremerciementspouravoiracceptéd’êtremembredecejury.Je vous adresse ma profonde reconnaissance pour vos remarques et conseils en vue d’améliorer ce manuscrit. Je tiens à remercier tout le personnel du laboratoire de pharmacognosie. iii Aux docteurs Nicolas Desbois et Marc Sautour,jevousremerciepourvotresoutienmoral, vos encouragements et conseils. Àmesamisetcollèguesduditlaboratoire,jeciteDebabrata Acharya, Olivier Noté, Guy Kougan, Jabrane Aymen, Manase Mahenina, Jens Linnek, Abdelmalek Rezgui, Elier Galarraga, Alida Pérez Colmenares, Bencharif Betina Soumeya,mercipour votre aide technique et scientifique et votre amitié. Au personnel technique, David Pertuit, Sandrine Pacquelet et Stephanie Masselot,mercipourvotrechaleureusecollaborationet votre aide technique. Mes remerciements vont à travers l’Université de Bourgogne au gouvernement et au peuple français qui contribuent ainsi au renforcement des capacités scientifiques et techniques des pays en développement. Je tiens vivement à remercier le gouvernement ivoirien àtraversleMinistère de l’en- seignement supérieur et de la recherche scientifique qui nous a octroyé la plus grande partie des moyens financiers nécessaires à notre formation. Àtousceuxquideprèsoudeloinontcontribuéàlaréalisationetaubondéroulementde cette thèse. Amonpèreetàmamère Amesfrèresetsœurs, et à tous mes amis iv Liste des Publications, Posters et Communication Orale Publications 1. G. Timité, A-C. Mitaine-Offer, T. Miyamoto, M. Ramezani, A. Rustaiyan, J-F. Mirjolet, O. Duchamp, M-A. Lacaille-Dubois Structure elucidation of new oleanane-type glycosides from three species of Acanthophyl- lum, Magnetic Resonance in Chemistry Volume 48, Issue 5, Page(s) :2237-2244 (2010). 2. G. Timité, A-C. Mitaine-Offer,T. Miyamoto, C. Tanaka, T. Paululat, C. De- laude, M-A. Lacaille-Dubois Presenegenin Glycosides from Securidaca welwitschii, Helvetica Chimica Acta, Volume 93, Issue 11, Page(s) :370-374 (2010). 3. G. Timité, A-C. Mitaine-Offer,T. Miyamoto, C. Tanaka, J-F. Mirjolet, O. Du- champ, M-A. Lacaille-Dubois Unusual oleanane-type saponins from Arenaria montana, Phytochemistry, Volume 72, Issue 6, Page(s) :503-507 (2011). 4. G. Timité, A-C. Mitaine-Offer,T. Miyamoto, C. Tanaka, J-F. Mirjolet, O. Du- champ, M-A. Lacaille-Dubois Structure and cytotoxicity of steroidal glycosides from Allium schoenoprasum, soumise à Food Chemistry. v Posters et Communication oral 1. 15e Forum des Jeunes Chercheurs, (Poster 1) Etude Phytochimique de deux espèces d’Acanthophyllum : Acanthophyllum sordidum et A. elatius,Dijon,25-26juin2009,France 2. 4th International Conference on Saponins, (Poster 2) Phytochemical study of Two species of Acanthophyllum : Acanthophyllum sordidum and A. elatius,Nancy,July9-11,2009,France 3. 9th International Symposium on Pharmaceutical Sciences, (Poster 3) Chemotaxonomic study of the Caryophyllaceae family : Saponins from Acanthophyllum sordidum and A. elatius,Ankara,June23-26,2009,Turkey 4. 16e forum des jeunes chercheurs, (Poster 4) Etude Chimiotaxonomique d’une espèce de Polygalaceae : Securidaca welwitschii,Besan- çon, 7-8 juin 2010, France 5. 58th International Congress and Annual Meeting of the Society for Medicinal Plant and Natural Product Research, (Poster 5) Chemotaxonomic study of the Polygalaceae family : saponins from Securidaca welwitschii, Berlin, Aug 29 - Sep 2, 2010, Germany 6. Colloque SAPONINA - utilisation des plantes à saponines dans l’agriculture et l’industrie, (Poster 6) Acylated saponins from Securidaca welwitschii, Chemillé, 13-14 Janvier 2011, France 7. 17e Forum des Jeunes Chercheurs, (Communication orale) Plantes des familles de Caryophyllaceae et Polygalaceae : Chimie extractive, chimie struc- turale et étude cytotoxique des saponinosides triterpéniques,Dijon,16-17juin2011,France vi Abréviations ADN Acide désoxyribonucléique APG Angiosperm Phylogeny Group CCM Chromatographie sur couche mince HPTLC High performance thin layer chromatography CHCl3 Chloroforme MeOH Méthanol AcOH Acide Acétique H2O Eau UV Ultraviolet VLC Chromatographie liquide sous vide MPLC Chromatographie liquide à moyenne pression HPLC Chromatographie liquide haute performance MS Spectrométrie de masse FAB Ionisation par bombardement d’atomes rapides RMN Résonance magnétique nucléaire RMN 1H Résonance magnétique nucléaire du proton RMN 13C Résonance magnétique nucléaire du carbone ppm Partie par million COSY COrrélation SpectroscopY TOCSY TOtal Correlation SpectroscopY ROESY Rotating-frame Overhauser SpectroscopY NOESY Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY HSQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer vii TMS Tétraméthylsilane