1 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE FARMÁCIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Análise química, avaliação da atividade antioxidante e obtenção de culturas in vitro de espécies de Hypericum nativas do Rio Grande do Sul ANA PAULA MACHADO BERNARDI PORTO ALEGRE, 2007. 2 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE FARMÁCIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS Análise química, avaliação da atividade antioxidante e obtenção de culturas in vitro de espécies de Hypericum nativas do Rio Grande do Sul Tese apresentada por Ana Paula Machado Bernardi para obtenção do TÍTULO DE DOUTOR em Ciências Farmacêuticas Orientador: Profa. Dr. Gilsane Lino von Poser Co-orientador: Profa. Dr. Sandra Beatriz Rech 3 Tese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, em nível de Doutorado, da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e aprovada em 09/04/2007, pela Banca Examinadora constituída por: Profa. Dr. Alexandra Latini Universidade Federal de Santa Catarina Prof. Dr. Arthur Germano Fett Neto Universidade Federal do Rio Grande do Sul Prof. Dr. José Angelo Silveira Zuanazzi Universidade Federal do Rio Grande do Sul B523a Bernardi, Ana Paula Machado Análise química, avaliação da atividade antioxidante e obtenção de culturas in vitro de espécies de Hypericum nativas do Rio Grande do Sul / Ana Paula Machado Bernardi – Porto Alegre, UFRGS : 2007. - xxii, 342 p. : il., gráf., tab. Tese (doutorado). UFRGS. Faculdade de Farmácia. Programa de Pós- Graduação em Ciências Farmacêuticas. 1. Hypericum. 2. Guttiferae. 3. Atividade antioxidante. 4. Compostos fenólicos. I. Von Poser, Gilsane Lino. II. Rech, Sandra Beatriz. III. Título. CDU: 615.322:582.824 Bibliotecárias responsáveis: Margarida Maria Cordeiro Fonseca Ferreira, CRB 10/480 Heloísa do Canto Canabarro, CRB 10/1036 4 Descobri como é bom chegar quando se tem paciência, e para chegar onde quer que seja, aprendi que não é preciso dominar a força, mas a razão. É PRECISO, ANTES DE MAIS NADA, QUERER. Amyr Klink 5 6 AGRADECIMENTOS A Deus, pelas oportunidades que cruzaram e que ainda hão de cruzar em meu caminho. À querida professora Dr. Gilsane Lino von Poser, pela amizade, confiança e orientação iniciados com a iniciação científica e fortalecidos com a pós-graduação. À querida professora Dr. Sandra Beatriz Rech, igualmente pela amizade, orientação e dedicação no auxílio ao desenvolvimento deste trabalho. Aos professores Dr. Eduardo Lissi, pela oportunidade de desenvolvimento de parte deste trabalho no Departamento de Ciencias Químicas da Facultad de Química y Biología da Universidad de Santiago de Chile, e Dr. Raquel Bridi, cujos conhecimentos dos mecanismos antioxidantes foram imprescindíveis para o entendimento dos resultados apresentados. Ao querido botânico Dr. Sérgio Bordignon, pela identificação do material vegetal utilizado neste trabalho e, principalmente, pela alegria e bons momentos compartilhados na época das coletas. À querida amiga Natasha Maurmann, pela sempre disponível ajuda nos experimentos de cultivo in vitro, e auxílio nas análises estatísticas. Aos meus grandes amigos do coração Alexandre Ferraz, Carolina Nör e Daniela Albring, pela troca de conhecimentos, amizade e terapia em grupo realizada durante os momentos difíceis. Às minhas amigas especiais e autênticas “gnosetes” Camila Sebben, Ana Cristina Fonseca e Liziane da Luz, pela alegria e descontração de sempre, cuja amizade iniciada na faculdade foi fortalecida pela iniciação científica. 7 Às queridas amigas e incansáveis ajudantes, Juliana Hass, Kênia Figueredo, e Jéssica Nunes, pelo auxílio dedicado para a realização dos experimentos. À grande amiga Marga, pelos cuidados dedicados desde o meu nascimento, pela torcida ao meu sucesso e pelos ensinamentos cristãos e palavras de apoio durante os momentos de necessidade. Aos meus amados padrinhos, tio Neri e tia Vanda, pela torcida de minhas conquistas e pelo orgulho sempre declarado. À minha família chilena, Pedro, Nicole e Valentina, pelos dois meses de casa, comida e alegria, em Santiago do Chile, durante minha estadia para a realização dos experimentos, e pela confiança ao me permitirem fazer parte da família Molina. Um agradecimento especial ao meu amor, Matias Molina, por acreditar que o amor é paciente e esperar o término dessa tese para que a distância não seja mais algo presente em nossas vidas e, principalmente, pela confiança e crédito sempre depositado em mim. Finalmente, agradeço à minha família. Vó e mana, que acompanharam o meu desenvolvimento acadêmico de perto, sempre com orgulho de minhas conquistas e vitórias e suportando as alterações de humor provocadas por momentos difíceis. Tia Vera, pela dedicação e comidinhas gostosas sempre preparadas com muito amor. Pai e mãe, pelo amor dedicado ao longo do meu crescimento, pela oportunidade do ensino de qualidade, pelo incentivo ao estudo em uma universidade federal, e pelo respeito nas minhas decisões. 8 SUMÁRIO LISTA DE FIGURAS................................................................................... xiii LISTA DE TABELAS.................................................................................. xvii RESUMO................................................................................................. xix ABSTRACT.............................................................................................. xxi 1 INTRODUÇÃO GERAL............................................................................... 1 2 CAPÍTULO 1 – ANÁLISE FITOQUÍMICA DE HYPERICUM TERNUM A. ST. HIL. E HYPERICUM MYRIANTHUM CHAM. & SCHLTDL............................................ 7 2.1 INTRODUÇÃO........................................................................................... 9 2.2 OBJETIVOS.............................................................................................. 10 2.3 REVISÃO................................................................................................. 11 2.3.1 Generalidades sobre o gênero.............................................................. 11 2.3.2 Aspectos botânicos............................................................................... 12 2.3.2.1 Taxonomia............................................................................................. 12 2.3.2.2 Morfologia.............................................................................................. 13 2.3.3 Aspectos químicos................................................................................ 13 2.3.3.1 Constituição química............................................................................. 14 2.3.3.1.1 Quinonas policíclicas............................................................................. 14 2.3.3.1.2 Xantonas............................................................................................... 15 2.3.3.1.3 Benzofenonas....................................................................................... 16 2.3.3.1.4 Benzopiranos........................................................................................ 17 2.3.3.1.5 Derivados de floroglucinol..................................................................... 17 2.3.3.1.6 Flavonóides........................................................................................... 18 2.3.3.1.7 Ácidos fenólicos.................................................................................... 20 2.3.3.1.8 Taninos.................................................................................................. 20 2.3.3.1.9 Óleos voláteis........................................................................................ 20 2.4 MATERIAIS E MÉTODOS............................................................................ 21 2.4.1 Material Vegetal.................................................................................... 21 2.4.2 Preparação dos extratos....................................................................... 22 2.4.3 Análise cromatográfica.......................................................................... 22 2.4.4 Isolamento e purificação....................................................................... 23 2.4.5 Identificação dos produtos.................................................................... 24 9 2.5 RESULTADOS E DISCUSSÃO...................................................................... 25 2.5.1 Análise da constituição química de Hypericum ternum e de 25 Hypericum myrianthum......................................................................... 2.5.1.1 Análise cromatográfica qualitativa das frações de Hypericum ternum. 25 2.5.1.1.1 Partes aéreas........................................................................................ 25 2.5.1.1.2 Raízes................................................................................................... 26 2.5.1.2 Isolamento de compostos fenólicos de Hypericum ternum................... 26 2.5.1.3 Análise estrutural das substâncias isoladas......................................... 27 2.5.1.3.1 Substância HT1 .................................................................................... 27 2.5.1.3.2 Substância HT2..................................................................................... 29 2.5.1.3.3 Substância HT3..................................................................................... 30 2.5.1.3.4 Substância HT4…………………………………………..………………… 32 2.5.1.3.5 Substâncias HT5, HT6 e HT7............................................................... 34 2.5.1.3.6 Substância