UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS CARRERA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA GERMINACIÓN Y CONSERVACIÓN IN VITRO DE SEMILLAS DE ORQUIDEA (Encyclia angustiloba) TRABAJO EXPERIMENTAL Trabajo de titulación presentado como requisito para la obtención del título de INGENIERA AGRÓNOMA AUTORA OTERO RUIZ KARISSA LISSETH TUTORA PhD. VEGAS GARCÍA ARIADNE GUAYAQUIL – ECUADOR 2020 2 UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS CARRERA DE INGENIERIA AGRONÓMICA APROBACION DEL TUTOR Yo, ARIADNE VEGAS, docente de la Universidad Agraria del Ecuador, en mi calidad de Tutor, certifico que el presente trabajo de titulación: “GERMINACIÓN Y CONSERVACIÓN IN VITRO DE SEMILLAS DE ORQUIDEA (encyclia angustiloba)”, realizado por la estudiante OTERO RUIZ KARISSA LISSETH; con cedula de identidad N° 0706693298 de la carrera de INGENIERIA AGRONÓMICA, Unidad Académica Guayaquil, ha sido orientado y revisado durante su ejecución; y cumple con los requisitos técnicos exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador; por lo tanto se aprueba la presentación del mismo. Atentamente, ……………………………….. PhD. ARIADNE VEGAS Guayaquil, 7 de Febrero del 2020 3 UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS CARRERA DE INGENIERIA AGRONÓMICA APROBACIÓN DEL TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN Los abajo firmantes, docentes designados por el H. Consejo Directivo como miembros del Tribunal de Sustentación, aprobamos la defensa del trabajo de titulación: “GERMINACIÓN Y CONSERVACIÓN IN VITRO DE SEMILLAS DE ORQUIDEA (Encyclia angustiloba)”, realizado por la estudiante OTERO RUIZ KARISSA LISSETH, el mismo que cumple con los requisitos exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador. Atentamente, Ing. Danilo Valdez Rivera PRESIDENTE Ing. Wilmer Baque Bustamante Ing. Kleber Calle Romero EXAMINADOR PRINCIPAL EXAMINADOR PRINCIPAL Blga. Flor Dorregaray Llerena EXAMINADOR SUPLENTE Guayaquil, 10 de febrero 2020 4 Dedicatoria Esta tesis se la dedico exclusivamente a mis padres Diana Ruiz y Bolívar Otero, por ser las personas más importantes en mi vida y que me han apoyado incondicionalmente en todas las decisiones que he tomado, También quiero dedicar este trabajo a mis hermanos Kathia y Kevin por estar en todo momento conmigo y nunca dejarme sola. A mi mejor amiga Bianca, por su absoluta ayuda en los momentos difíciles. 5 Agradecimiento Agradezco a la Universidad Agraria del Ecuador, por permitirme realizar mi proyecto de tesis, en el laboratorio de Biotecnología. A mi tutora de Tesis la Dra. Ariadne Vegas García, por sus enseñanzas y su colaboración incondicional para lograr este proyecto. A mis profesores que con sus enseñanzas han sabido guiarme día a día, Al biólogo. James Pérez por su ayuda fundamental en la obtención de las cápsulas de la orquídea Encyclia angustiloba 6 Autorización de Autoría Intelectual Yo OTERO RUIZ KARISSA LISSETH en calidad de autor(a) del proyecto realizado, sobre “GERMINACIÓN Y CONSERVACIÓN IN VITRO DE SEMILLAS DE ORQUIDEA (Encyclia angustiloba)” para optar el título de INGENIERA AGRÓNOMA por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación. Los derechos que como autor(a) me correspondan, con excepción de la presente autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento. Guayaquil, 04 de Agosto del 2020 OTERO RUIZ KARISSA LISSETH 0706693298 7 Índice general PORTADA……………………………………………………………………………...1 APROBACION DEL TUTOR ………………………………………………………..2 APROBACIÓN DEL TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN………………………….3 Dedicatoria……………………………………………………………………………4 Agradecimiento……………………………………………………………………....5 Autorización de Autoría Intelectual……………………………………………….6 Índice general …………………………………………………………………………7 Índice de tablas……………………………………………………………………...11 Índice de figuras…………………………………………………………………….12 1. Introducción………………………………………………………………………16 1.1 Antecedente del problema…………………………………………………….16 1.2 Planteamiento y formulación del problema………………………………..16 1.2.1 Planteamiento del problema………………………………………………16 1.2.2 Formulación del problema………………………………………………...17 1.3 Justificación de la investigación............................................................ 17 1.4 Delimitación de la investigación ……………………………………………20 1.5 Objetivo general ...................................................................................... 20 1.6 Objetivos específicos ............................................................................. 20 1.7 Hipótesis .................................................................................................. 20 2. Marco teórico……………………………………………………………………..19 2.1 Estado del arte ........................................................................................ 19 2.2 Bases teóricas ......................................................................................... 23 2.2.1 Generalidades de Encyclia angustiloba ............................................ 23 2.2.2 Taxonomía de la orquídea Encyclia angustiloba .............................. 23 8 2.2.3 Morfología de la orquídea Encyclia angustiloba ............................... 24 2.2.4 Micropropagación de orquídeas ........................................................ 24 2.2.5 Propagación de orquídeas por semillas ............................................ 25 2.2.6 Etapas de la Micropropagación ......................................................... 25 2.2.6.1. Selección del explante .................................................................... 25 2.2.6.2. Establecimiento de medios de cultivo .......................................... 26 2.2.6.3. Multiplicación ................................................................................. 26 2.2.6.4. Desarrollo y enraizamiento…………………………………….…...…26 2.2.6.5. Adaptación a medio externo…………………………………………..26 2.2.7 Factores que afectan la propagación, la germinación y crecimiento de las orquídeas .................................................................................. 27 2.2.7.1. Luz ................................................................................................... 27 2.2.7.2. Temperatura ................................................................................... 30 2.2.7.3. pH .................................................................................................... 30 2.2.7.4. Humedad relativa (HR) ................................................................... 30 2.2.8 Medios de cultivos en orquídeas ....................................................... 31 2.2.9 Medios de cultivo con suplementos orgánicos ................................ 29 2.2.9.1. Agua de coco.................................................................................. 29 2.2.9.2. Medio PDA (Agar Dextrosa-Papa) ................................................. 29 2.2.10 Medios de cultivo con reguladores de crecimiento ........................ 30 2.2.10.1 Citocininas (BAP) 6-benzilaminopurina....................................... 30 2.2.11 Fitohormonas .................................................................................... 30 2.3 Marco legal .............................................................................................. 30 3. Materiales y métodos……………………………………………………………33 3.1 Enfoque de la investigación………………………………………………….33 9 3.1.1 Tipo de investigación.......................................................................... 33 3.2 Metodología .............................................................................................. 33 3.2.1 Variables .............................................................................................. 33 3.2.1.1. Variable independiente para la germinación in vitro de semillas 33 3.2.1.2. Variables independientes para la conservación in vitro de semillas…………………………………………………………………..33 3.2.1.3. Variable dependiente para la germinación in vitro de semillas…34 3.2.1.4. Variable dependiente para la conservación in vitro de semillas..34 3.2.2 Tratamientos………………………………………………………………...34 3.2.3 Diseño experimental……………………………………………………….35 3.2.4 Recolección de datos ......................................................................... 36 3.2.4.2. Métodos y técnicas ........................................................................ 36 3.2.5 Análisis estadístico ............................................................................. 37 3.2.5.1. Análisis funcional............................................................................ 37 3.2.5.3. Hipótesis estadística ........................................................................ 37 3.2.5.3.1. Hipótesis estadística para la germinación de las semillas......... 37 3.2.5.5 Manejo del ensayo………………………………………………………..38 3.2.5.6 Variables a evaluarse………………………………………...................39 3.3. Aspectos administrativos ...................................................................... 41 3.3.1 Recursos bibliográficos ...................................................................... 41 3.3.2 Materiales y equipos ........................................................................... 41 3.3.3 Recursos humanos ............................................................................. 42 3.3.4 Recursos económicos ........................................................................ 42 4.Resultados…………………………………………………………………………43 10 4.1 Determinar el porcentaje