T.C. SÜLEYMAN DEMİREL ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ MAXMA 14 (Prunus mahaleb L. × P. avium L.) VE MAZZARD F12-1 (P. avium L.) KİRAZ ANAÇLARININ IN VITRO ÇOĞALTIMI VE REJENERASYONU Fulya DEMİR Danışman Doç. Dr. Fatih Ali CANLI YÜKSEK LİSANS TEZİ TARIMSAL BİYOTEKNOLOJİ ANABİLİM DALI ISPARTA - 2013 © 2013 [Fulya DEMİR] İÇİNDEKİLER Sayfa İÇİNDEKİLER ............................................................................................................................................. i ÖZET .............................................................................................................................................................. iii ABSTRACT .................................................................................................................................................. iv TEŞEKKÜR .................................................................................................................................................. v ŞEKİLLER DİZİNİ ..................................................................................................................................... vi ÇİZELGELER DİZİNİ ............................................................................................................................... viii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ ............................................................................................ ix 1. GİRİŞ ......................................................................................................................................................... 1 2. KAYNAK ÖZETLERİ ........................................................................................................................... 4 2.1. Multiplikasyon Çalışmaları .................................................................................................. 4 2.2 Rejenerasyon Çalışmaları...................................................................................................... 8 3. MATERYAL VE YÖNTEM ................................................................................................................. 15 3.1. Materyal ........................................................................................................................................ 15 3.1.1. Bitki Materyali ................................................................................................................. 15 3.1.1.1. ‘Mazzard F12-1’ .......................................................................................................... 15 3.1.1.2‘Maxma 14’ ...................................................................................................................... 15 3.1.2. Besin ortamı .................................................................................................................... 16 3.1.3. Sterilizasyon, in vitro doku kültürlerin oluşturulması ................................ 16 3.2. Yöntem .......................................................................................................................................... 17 3.2.1. Kültür odası şartları ...................................................................................................... 17 3.2.2. Alt kültürler ...................................................................................................................... 18 3.2.3. Multiplikasyon denemeleri ....................................................................................... 18 3.2.3.1. Benziladenin (BA)’ in Mazzard F 12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının çoğalması üzerine etkileri ....................................................................... 18 3.2.3.2. Thidiazuron (TDZ)’ un Mazzard F 12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının çoğalması üzerine etkileri ....................................................................... 19 3.2.4. Yapraktan regenerasyon denemeleri ................................................................... 19 3.2.4.1 Benziladenin (BA) ‘nin Mazzard F 12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkileri ..................................................................... 20 3.2.4.2. Thidiazuron (TDZ)’nun Mazzard F 12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkileri .................................................................... 20 3.2.5. Optimizasyon denemeleri .......................................................................................... 21 3.2.5.1. Mazzard F12-1 kiraz anacının aydınlık ortamda NAA (Naftelenasetikasit) ve BA (Benziladenin)‘ in kombinasyonları üzerinde yapılan çalışmalar ...................................................................................................................... 21 3.2.5.2. Rejenerasyon gösteren TDZ Muamelesi etrafında optimizasyon ....... 21 3.2.5.3. Karanlık inkübasyonunun regenerasyona etkilerinin belirlenmesi . 21 3.2.5.4. Thidiazuron (TDZ) ile ön muamelenin regenerasyona etkilerinin belirlenmesi ........................................................................................................... 22 3.2.5.5. Benziladenin (BA) ile ön muamelenin regenerasyona etkilerinin belirlenmesi ........................................................................................................... 22 3.2.6. Köklendirme ve alıştırma........................................................................................... 23 3.2.7. Veri toplanması ve istatistikî analizlerin yapılması ...................................... 23 4. ARAŞTIRMA BULGULARI................................................................................................................ 24 4.1. Multiplikasyon Denemeleri ................................................................................................. 24 4.1.1. Benziladenin (BA) ‘nin Mazzard F12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının multiplikasyonu üzerine etkileri ......................................................... 24 4.1.1.1. Benziladenin (BA) ‘nin Mazzard F12-1 kiraz anacının multiplikasyonu üzerine etkileri ........................................................................................ 24 4.1.1.2. Benziladenin (BA) ‘nin Maxma 14 kiraz anacının multiplikasyonu üzerine etkileri ........................................................................................ 25 i 4.1.2. Thidiazuron (TDZ)’nun Mazzard F12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının multiplikasyonu üzerine etkileri ......................................................... 27 4.1.2.1. Thidiazuron (TDZ)’nun Mazzard F12-1 kiraz anacının multiplikasyonu üzerine etkileri......................................................................................... 27 4.1.2.2. Thidiazuron (TDZ)’nun Maxma 14 kiraz anacının multiplikasyonu üzerine etkileri ............................................................................................................................ 28 4.2. Yapraktan Rejenerasyon Denemeleri............................................................................. 29 4.2.1. Benziladenin (BA) ‘nin Mazzard F12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonu üzerine etkileri ............................................. 29 4.2.1.1 Benziladenin (BA)’ın aydınlık ortamda Mazzard F 12-1 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ......................................................................... 29 4.2.1.2. Benziladenin (BA)’in karanlık ortamda (10 günlük karanlık inkübasyon uygulaması) Mazzard F12-1 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ............................................................................................................ 31 4.2.1.3. Benziladenin (BA)’in aydınlık ortamda Maxma14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ............................................................................................ 32 4.2.1.4. Benziladenin (BA)’in karanlık ortamda (10 günlük karanlık inkübasyon uygulaması) Maxma14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ............................................................................................................ 33 4.2.2. Thidiazuron (TDZ)’nun Mazzard F12-1 ve Maxma 14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonu üzerine etkileri ............................................. 33 4.2.2.1. Thidiazuron (TDZ)’ un aydınlık ortamda Mazzard F 12-1 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ......................................................................... 33 4.2.2.2. Thidiazuron (TDZ)’ un karanlık ortamda (10 günlük karanlık inkübasyon uygulaması) Mazzard F12-1 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ............................................................................................................ 34 4.2.2.3. Thidiazuron (TDZ)’ un aydınlık ortamda Maxma 14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ............................................................................................ 35 4.2.2.4. Thidiazuron (TDZ)’ un karanlık ortamda (10 günlük karanlık inkübasyon uygulaması) Maxma 14 kiraz anacının yaprak rejenerasyonuna etkisi ............................................................................................................ 37 4.3. Optimizasyon Denemeleri ................................................................................................... 38 4.3.1. Mazzard F12-1 kiraz anacının aydınlık ortamda NAA (Naftelenasetikasit) ve BA (Benziladenin)‘ in kombinasyonları üzerinde yapılan çalışmalar ...................................................................................................................... 38 4.3.2. Rejenerasyon gösteren TDZ Muamelesi etrafında optimizasyon ........... 39 4.3.3. Karanlık uygulamasının rejenerasyona