DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR FACULTAD DE FARMACIA UNIVERSIDAD DE SEVILLA “REVALORIZACIÓN DE LOS SUBPRODUCTOS DE LA INDUSTRIA DE HONGOS Y SETAS COMESTIBLES. Aplicación a la obtención de productos de alto valor añadido.” Memoria presentada para optar por el grado de Doctor en Farmacia por: ALBERTO RENATO INCA TORRES Sevilla, 2019 UNIVERSIDAD DE SEVILLA Departamento de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Farmacia Prof. Dr. José Luis Venero Recio C / Profesor García González, 2. 41012 Sevilla (España) Teléfono: 954 55 3803 e-mail: [email protected] José Luis Venero Recio, Catedrático de Universidad de Bioquímica y Biología Molecular de la Universidad de Sevilla (NRP: A0500- 0880376924), Director del Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, de la Facultad de Farmacia, de la Universidad de Sevilla. Informa: Que la tesis doctoral titulada “REVALORIZACIÓN DE LOS SUBPRODUCTOS DE LA INDUSTRIA DE HONGOS Y SETAS COMESTIBLES. Aplicación a la obtención de productos de alto valor añadido”, presentada por el doctorando Alberto Renato Inca Torres, para optar por el título de Doctor en Farmacia por la Universidad de Sevilla, ha sido realizada en el Departamento de Bioquímica y Biología Molecular de la Facultad de Farmacia de la Universidad de Sevilla, bajo la dirección de los Drs.: Juan Dionisio Bautista Palomas y Juan Parrado Rubio, reuniendo todo los requisitos necesarios para presentarse a su defensa. Fdo: José Luis Venero Recio (Director del Departamento de Bioquímica y Biología Molecular). UNIVERSIDAD DE SEVILLA Departamento de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Farmacia Juan Dionisio Bautista Palomas, Catedrático de Universidad de Bioquímica y Biología Molecular de la Universidad de Sevilla (NRP: A055-5159678268), y Juan Parrado Rubio, Catedrático de Universidad de Bioquímica y Biología Molecular de la Universidad de Sevilla (NRP: A0500-2729451168), adscritos al Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, de la Facultad de Farmacia, de la Universidad de Sevilla. Informan: Que la Tesis Doctoral titulada “REVALORIZACIÓN DE LOS SUBPRODUCTOS DE LA INDUSTRIA DE HONGOS Y SETAS COMESTIBLES. Aplicación a la obtención de productos de alto valor añadido.”, realizada por Alberto Renato Inca Torres para optar al título de Doctor en Farmacia por la Universidad de Sevilla, ha sido realizada bajo nuestra dirección en el Departamento de Bioquímica y Biología Molecular (Facultad de Farmacia), Universidad de Sevilla. Y que dicha tesis reúne todos los requisitos académicos y experimentales necesarios para proceder a su presentación y defensa. Fdo.: Dr. Juan D. Bautista Palomas Fdo.: Dr. Juan Parrado Rubio (Director de Tesis) (Director de Tesis) PUBLICACIONES Parte de los resultados presentados en esta Tesis doctoral, han sido publicados en los siguientes artículos: Inca-Torres A.R., Urbina-Salazar A.R., Falcón-García G., Carbonero-Aguilar P., Rodríguez-Morgado B., Parrado J., Bautista J., (2018). Hydrolytic enzymes production by Bacillus licheniformis growth on fermentation media formulated with sewage sludge. Journal of Biotech Research, 9:14-26. Nota: Parte de las enzimas hidrolíticas producidas en este trabajo han sido utilizadas para llevar a cabo la hidrólisis de las proteínas de la harina de tallos de champiñón. Urbina-Salazar A.R., Inca-Torres A.R., Falcón-García G., Carbonero-Aguilar P., Rodríguez-Morgado B., del Campo J.A., Parrado J., Bautista J., (2018). Chitinase Production by Trichoderma harzianum Grown on a Chitin-Rich Mushroom Byproduct Formulated Medium. Waste and Biomass Valorization. https://doi.org/10.1007/s12649-018-0328-4. Nota: En este trabajo se ha contribuido a la caracterización de los subproductos procedentes de la industria del champiñón como etapa previa a su utilización como fuente de cultivo para la producción de enzimas hidrolíticas fundamentalmente quitinasas. Parte de los resultados presentados en esta tesis doctoral han sido presentados en los siguientes Congresos y Jornadas: Inca-Torres A.R., Urbina-Salazar A.R., Falcón-García G., Carbonero-Aguilar P. and Bautista J., (2017). Preparation of fungal chitin from agroindustrial by- products: Aplication to edible mushrooms (Agaricus bisporus) by-products. Póster en Congreso. XIII EUCHIS & VIII SIAQ. Sevilla, Mayo 2017. Inca-Torres A.R., Urbina-Salazar A.R., Falcón-García G., Cremades O. and Bautista J., (2018) “In vitro” study of mushroom ergothioneine enriched aqueous extracts (M-ERG-EAE) against oxygen activated substances. Póster en Congreso. IV JORNADAS DOCTORALES DE LA UNIVERSIDAD DE MURCIA. Murcia, Mayo 2018. Inca-Torres A.R., (2018). Revalorización de los subproductos de la industria de hongos y setas comestibles. Aplicación a la obtención del antioxidante natural Ergotioneina y de Biofertilizantes ricos en aminoácidos y oligopéptidos. Comunicación Oral. III JORNADAS DOCTORALES DE FARMACIA. Sevilla, Julio 2018. Inca-Torres A.R., Urbina-Salazar A.R., and Bautista J., (2018). Preparation of nanochitin from crawfish (Procambarus clarkii) by- products. Póster en Congreso. IPAP18 INNOVATIONS IN PHARMACY (ADVANCES & PERSPECTIVES). Salamanca, Septiembre 2018. Urbina-Salazar A.R., Inca-Torres A.R., Carbonero-Aguilar P., Falcón-García G., and Bautista J., (2017). Production of chitinases by submerged fermentation in media formulated with colloidal chitin of fungi. Póster en Congreso. XIII EUCHIS & VIII SIAQ. Sevilla, Mayo 2017. Urbina-Salazar A.R., Inca-Torres A.R., Carbonero-Aguilar P., Cremades O., and Bautista J., (2018). Mushroom ergothioneine enriched aqueous extracts (M- ERG-EAE) suppress TNF-α and MMP-1 expression in UV-irradiated human dermal fibroblasts. Póster en Congreso. IV JORNADAS DOCTORALES DE LA UNIVERSIDAD DE MURCIA. Murcia, Mayo 2018. Urbina-Salazar A.R., Inca-Torres A.R., and Bautista J., (2018). Preparation of fungal- nano chitin crystals: aplication to mushroom (Agaricus bisporus) by - products. Póster en Congreso. IPAP18 INNOVATIONS IN PHARMACY (ADVANCES & PERSPECTIVES). Salamanca, Septiembre 2018. Carbonero-Aguilar P., Falcón-García G., Urbina-Salazar A.R., Inca-Torres A.R., and Bautista J., (2017). Use of crayfish (Procambarus clarkii) chitin as carbon source for the production of chitinases by submerged fermentation. Póster en Congreso. XIII EUCHIS & VIII SIAQ. Sevilla, Mayo 2017. Falcón-García G., Carbonero-Aguilar P., Inca-Torres A.R., Urbina-Salazar A.R., and Bautista J., (2017). Production of Crawfish (Procambarus clarkii) chitin enriched fractions by enzymatic procedures for fermentation uses and chitin-oligosaccharides production. Póster en Congreso. XIII EUCHIS & VIII SIAQ. Sevilla, Mayo 2017. Rodríguez-Morgado B., Caballero Jiménez P., Inca-Torres A.R., Urbina- Salazar A.R., Parrado J., Tejada M., (2016). Obtaining a soil biostimulant from sewage sludge: Effect on soil biochemistry. Póster en Congreso. 5th International Conference Enzymes in the Environment. Ecology, Activity and Application. Bangor, Gales, Reino Unido. 2016. UNIVERSIDAD DE SEVILLA Departamento de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Farmacia Esta Tesis se ha realizado gracias a la financiación de los siguientes Proyectos de Investigación: Proyecto: Aumento del contenido de vitamina D en champiñón fresco (CHAMPI-D). (Ref.: RTC2015-4039-2), Ministerio de Economía y Competitividad, del gobierno de España. Proyecto: Valorización de fibras celulósicas y de quitina obtenidas de subproductos de la industria agroalimentaria mediante el desarrollo de biocomposites poliméricos (VALORIZAGRO). (Ref.: PRJ201702958), FIUS, Universidad de Sevilla “Da tu primer paso con fe, no es necesario que veas toda la escalera completa, solo da tu primer paso”. Martin Luther King El Gran Viaje ¿Quién será, en un futuro no lejano, el Cristóbal Colón de algún planeta? ¿Quién logrará, con máquina potente sondear el océano del éter, y llevarnos de la mano allí donde llegaran solamente los osados ensueños del poeta? Espíritus a quienes las edades en su fluir robusto mostraron ya la clave portentosa de lo Bello y lo Justo, ¿Cuál será la cosecha de verdades que deis al hombre, tras el viaje augusto? ¿Con qué nueva luz escrutará el arcano? ¡Oh la esencial revelación completa que fije un nuevo molde al barro humano! Amado Nervo AGRADECIMIENTOS Le agradezco a Dios por haberme acompañado y guiado, por ser mi fortaleza en los momentos de debilidad y por brindarme una vida llena de enseñanzas, experiencia y sobre todo felicidad. A mi esposa Anabell por ser parte importante de mi vida, por haberme apoyado en las buenas y en las malas, por su paciencia, comprensión y sobre todo por su amor. Le doy gracias a mis padres Walter y Myriam, que han sido mis amigos, mis aliados, mi ejemplo, que siempre me han apoyado en todo momento, por los valores que me han inculcado, y por haberme dado la oportunidad de tener una excelente educación en el transcurso de mi vida. El logro también es de ellos. A mi hermana Valeria por ser parte de mi vida y que junto a Renata han llenado mi vida de alegría y amor logrando una mayor unión familiar. Gracias a toda mi familia por todo su cariño, amor e inmensa bondad que a la distancia ha permitido que lo complicado de lograr este proyecto se note menos. Quiero expresar mi sincero agradecimiento al Dr. Juan Dionisio Bautista Palomas por su paciencia, dedicación, motivación, criterio y aliento. Por haber compartido conmigo sus conocimientos y sobre todo su amistad. Sin su apoyo incondicional y sus consejos este trabajo no habría podido hacerse realidad. A mis compañeros y amigos del Departamento de Bioquímica y Biología Molecular Bruno,