UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ FABILE SCHLICKMANN ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO DO POTENCIAL GASTROPROTETOR, ANTINOCICEPTIVO E ANTIPROLIFERATIVO DE Mimusops balata (ABRICÓ-DA-PRAIA) Itajaí 2015 UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS ÁREA DE CONCENTRAÇÃO EM PRODUTOS NATURAIS E SUBSTÂNCIAS SINTÉTICAS BIOATIVAS FABILE SCHLICKMANN ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO DO POTENCIAL GASTROPROTETOR, ANTINOCICEPTIVO E ANTIPROLIFERATIVO DE Mimusops balata (ABRICÓ-DA-PRAIA) Dissertação submetida à Universidade do Vale do Itajaí como parte dos requisitos para a obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas. Orientador: Prof. Dr. Valdir Cechinel Filho Co-Orientador: Prof. Dr. Sérgio Faloni de Andrade Itajaí, Março, 2015 FICHA CATALOGRÁFICA S39e Schlickmann, Fabile, 1989- Estudo químico e avaliação do potencial gastroprotetor, antinociceptivo e antiproliferativo de mimusops balata (abricó-da-praia) / Fabile Schlickmann, 2015. 111f. ; il., tab. ; fig. Cópia de computador (Printout(s)). Dissertação (Mestrado) Universidade do Vale do Itajaí, Mestrado em Ciências Farmacêuticas. “Orientador : Prof . Dr Valdir Cechinel Filho ” Bibliografia : p.95-111 1. Mimusops balata. 2. Fitoterapia. 3. Farmacologia. I. Título. CDU: 615.32 Josete de Almeida Burg – CRB 14.ª 293 Dedicatória Dedico este trabalho à minha mãe Alivir, que com sua força e doçura me ensinou a nunca deixar de seguir adiante e, ao meu pai Vicente (in memoriam), o qual se alegraria com este feito. AGRADECIMENTOS À Deus, por me proporcionar força e serenidade para seguir esta trajetória; À minha mãe e irmãos, pela compreensão e apoio nos momentos difíceis e à minha família, pelo carinho; Ao meu amor Ricardo, pela paciência e carinho; Às minhas amigas Fabiana, Adriana, Juarana, Ângela, Mariel, Beth que compartilharam importantes momentos comigo e às amigas distantes, mas que sempre estiveram presentes, Camila, Marja, Fernanda; Ao meu orientador Prof. Valdir Cechinel Filho, pela confiança, pelos ensinamentos e disposição para sempre fazermos um bom trabalho, além da amizade construída ao longo destes dois anos; Ao Prof. Theodoro Marcel Wagner, ao Funcionário Pedro Pablo Perez Netto (RMN), Marcel Petreanu, Prof. Oscar Iza e ao Herbário Barbosa Rodrigues, pela contribuição; À equipe da gastroproteção: Prof. Sérgio Faloni de Andrade, Prof. José Roberto Santin, Luísa, Thaise, Lincon e todos que contribuíram de alguma forma; Ao Prof. João Ernesto de Carvalho e ao Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas (CPQBA) na Universidade de Campinas (UNICAMP) pelo desenvolvimento dos testes in vitro (atividade antiproliferativa); À Profa. Fátima de Campos Buzzi, Karla e equipe, pelos testes antinociceptivos; À banca avaliadora, Profa. Ângela Malheiros, Profa. Márcia Maria de Souza e Profa. Simone Andrade Gualberto pela disposição em avaliar e contribuir com o presente trabalho; À Profa. Tania Mari Belle Bresolin, pelo apoio e confiança e à equipe da coordenação do PPGCF/Univali – Juliano e Helenize, sempre solícitos e atenciosos. À CAPES e CNPq pela oportunidade e apoio financeiro. À todos que estiveram presentes durante esta trajetória e que contribuíram de alguma forma. MUITO OBRIGADA!!! EPÍGRAFE “A percepção do desconhecido é a mais fascinante das experiências. O homem que não tem os olhos abertos para o mistério passará pela vida sem ver nada.” Albert Einstein ESTUDO QUÍMICO E AVALIAÇÃO DO POTENCIAL GASTROPROTETOR, ANTINOCICEPTIVO E ANTIPROLIFERATIVO DE Mimusops balata (ABRICÓ-DA-PRAIA) FABILE SCHLICKMANN Março, 2015 Orientador: Prof. Dr. Valdir Cechinel Filho. Co-Orientador: Prof. Dr. Sérgio Faloni de Andrade. Área de concentração: Produtos Naturais e Substâncias Sintéticas Bioativas Número de páginas: 111. O abricó-da-Praia (Mimusops balata), família Sapotaceae, é uma árvore perene nativa da América tropical, ocorre geralmente no litoral por se adaptar bem aos solos arenosos e salinos. A presente pesquisa teve como objetivo proceder a análise biológica (gastroprotetora, antinociceptiva e antiproliferativa) de extratos, frações e substâncias puras a partir de diferentes partes de Mimusops balata. A análise fitoquímica foi realizada por meio de maceração das partes da planta com metanol, por sete dias. Os extratos foram evaporados, com exceção do extrato da semente, o qual foi particionado gerando as frações clorofórmio e acetato de etila. Para elucidação estrutural utilizou-se técnicas convencionais espectrométricas (RMN, MS) e cromatográficas (CLAE, CG/FID). Quanto à parte farmacológica, foram utilizados modelos experimentais em ratos e camundongos. Para avaliação de dor aguda utilizou-se modelo por contorções abdominais induzidas pelo ácido acético. A atividade gastroprotetora foi avaliada pelos modelos de úlcera induzida por etanol/HCl, determinação da secreção gástrica e AINES. A avaliação da atividade antiproliferativa foi realizada, in vitro, em células neoplásicas humanas: U251 (glioma), MCF-7 (mama) e NCI-H460 (pulmão). Foram identificados e isolados os compostos taxifolina, nas sementes (fração acetato de etila) e mistura de α e β- amirina, nas folhas. Nos testes de dor aguda, todos os extratos exibiram efeito antinociceptivo, sendo o extrato da semente mais eficaz, possivelmente devido a presença da taxifolina. Nos diferentes modelos de úlcera utilizados, a dose de 300mg/kg teve resultado estatisticamente significativo. Em relação à atividade antiproliferativa, os extratos não tiveram efeitos estatisticamente significativos. A taxifolina é o mais abundante composto presente nas sementes e não foi identificado nas demais partes da planta em estudo, podendo as sementes se constituirem de fonte para a obtenção deste importante flavonóide. Os resultados obtidos permitem concluir que a planta em estudo, particularmente as sementes, possuem relevantes ações biológicas, especialmente em modelos de gastroproteção. Sugere-se a continuidade dos estudos tanto fitoquímicos como farmacológicos na busca de novos agentes medicinais considerando o potencial terapêutico evidenciado e a ausência de publicações científicas sobre a planta em estudo. Palavras-chave: Mimusops balata. Triterpenos. Taxifolina. Gastroproteção. Antinocicepção. Antiproliferativo. CHEMICAL STUDY AND EVALUATION OF GASTROPROTECTIVE, ANTINOCICEPTIVE AND ANTIPROLIFERATIVE POTENTIAL OF Mimusops balata (ABRICÓ-DA-PRAIA) FABILE SCHLICKMANN March 2015 Supervisor: Prof. Dr. Valdir Cechinel Filho. Co-Supervisor: Prof. Dr. Sérgio Faloni de Andrade. Area of concentration: Natural Products and Bioactive Synthetic Substances Number of pages: 111. Abricó-da-Praia (Mimusops balata), Sapotaceae family, is a perennial tree that is native to tropical America, where it occurs mainly on the coast, adapting well to sandy and saline soils. The aim of this study was to carry out a biological analysis of the gastroprotective, antinociceptive and antiproliferative properties of extracts, fractions, and pure substances from different parts of Mimusops balata. The phytochemical analysis was carried out by maceration of the parts of the plant with methanol, for seven days. The extracts were evaporated, except for the seed extract, which was partitioned, generating chloroform and ethyl acetate fractions. For structural elucidation, conventional spectrometric (NMR, MS) and chromatographic (HPLC, GC/FID) techniques were used. In the pharmacological phase, experimental models were used on rats and mice. For the evaluation of acute pain, the model of acetic acid-induced abdominal contractions was used. The gastroprotective activity was evaluated by the models of ethanol/HCl-induced ulcer, determination of gastric secretion, and NSAIDs. The evaluation of in vitro antiproliferative activity was performed in vitro, in human cancer cells: U251 (glioma), MCF-7 (breast), and NCI- H460 (lung). The compounds taxifolin, in the seeds (ethyl acetate fraction), and a mixture of α and β-amyrin, in the leaves, were identified and isolated. In the acute pain tests, all the extracts exhibited antinociceptive effect, the seed extract being the most effective, possibly due the presence of taxifolin. In the different ulcer models used at a dose of 300mg/kg, the result was statistically significant. In relation to the antiproliferative activity, the extracts had no statistically significant effects. Taxifolin is the most abundant compound present in the seeds, and was not identified in other parts of the studied plant, suggesting that the seeds are a source of this important flavonoid. These results suggest the need for further phytochemical and pharmacological studies in the search for new medicinal agents. Keywords: Mimusops balata. Triterpenes. Taxifolin. Gastroprotection. Antinociception. Antiproliferative. LISTA DE FIGURAS Figura 1 Foto de uma árvore de Mimusops balata (abricó-da-praia)................ 44 Figura 2 Organograma da análise fitoquímica das folhas de Mimusops balata (abricó-da-praia)....................................................................... 48 Figura 3 Organograma da análise fitoquímica do caule de Mimusops balata (abricó-da-praia).................................................................................. 49 Figura 4 Organograma da análise fitoquímica da polpa do fruto de Mimusops balata (abricó-da-praia)....................................................................... 50 Figura 5 Organograma da análise fitoquímica das cascas do fruto de 51 Mimusops balata (abricó-da-praia)..................................................... Figura 6 Organograma da análise fitoquímica das